Orientador: Marcos Aparecido Gimenes / Resumo: O gênero Arachis possui 81, espécies distribuídas em nove seções taxonômicas, sendo o amendoim (A. hypogaea L.) a principal espécie, devido ao seu alto valor nutricional. O gênero possui também outras espécies de interesse econômico, que têm sido utilizadas em programas de melhoramento do amendoim (espécies da seção Arachis) e espécies forrageiras de outras seções do gênero. Com relação às demais espécies, o germoplasma da grande maioria está disponível para a caracterização e pode, sem dúvida, contribuir para seu uso futuro. O gênero Arachis é um dos poucos que produzem o resveratrol, uma fitoalexina que, além de ser uma resposta da planta contra estresses, também tem ação antioxidante, sendo indicado para prevenção de cânceres e cardiopatias. A avaliação do potencial de produção de resveratrol foi realizada somente em algumas espécies da seção Arachis, faltando avaliação em outras espécies do gênero e nos tetraploides sintéticos que estão sendo utilizados para facilitar a transferência de alelos de espécies silvestres para a cultivada. Assim, o objetivo desse trabalho foi ampliar o conhecimento sobre resveratrol no gênero Arachis. Para tanto foram analisados 21 acessos de espécies silvestres de cinco diferentes seções do gênero Arachis, oito poliploides sintéticos e três cultivares de amendoim. A produção de resveratrol em um conjunto menor de cinco espécies foi acompanhada também de avaliação da expressão do gene que codifica a enzima resveratrol sintase, RS, para entende... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Arachis genus comprises 81 species divided into nine taxonomic sections, being peanut (A. hypogaea L.) the main species due to its high nutritional value. The genus also has other species of economic interest, which have been used in breeding programs for peanut (species of Arachis section) and to forage production. Regarding the other species of Arachis, germplasm of most of them is available and their characterization could undoubtedly contribute to their future use. Arachis genus is one of the few that produces resveratrol, a phytoalexin that is synthesized by the plant due to a stress and it is also a antioxidant that has been used to prevention of cancers and heart diseases. The resveratrol evaluation in Arachis was carried out mainly in Arachis hypogaea and in some species of the section Arachis, lacking the evaluation in other species of the genus and in the synthetic tetraploids that have been used to facilitate the transfer of alleles from wild species to the cultivated one. Therefore, the objective of this study was to increase the knowledge about resveratrol in the genus Arachis. Twenty one accessions of wild species from five different sections of the genus Arachis, eight synthetic polyploids and three peanut cultivars were analyzed. The production of resveratrol in a smaller set of five species was also accompanied of evaluation of resveratrol synthase to try to understand the variation observed in the resveratrol content among the species. Since each experim... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by PAULA ANDRÉA SAMPAIO DE VASCONCELOS CARVALHO null (paulasvasconcelos@hotmail.com) on 2017-10-06T14:46:03Z No. of bitstreams: 1 tese pos defesa Paula Andréa Sampaio de Vasconcelos Carvalho.pdf1.pdf: 1988306 bytes, checksum: 46c0925bf8ca00155c63f2c83d48acac (MD5) / Rejected by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-10-09T17:38:04Z (GMT) / Submitted by PAULA ANDRÉA SAMPAIO DE VASCONCELOS CARVALHO null (paulasvasconcelos@hotmail.com) on 2017-10-18T21:09:07Z No. of bitstreams: 1 tese Paula Andréa Sampaio de Vasconcelos Carvalho.pdf com ficha.pdf: 2023210 bytes, checksum: 0f11f1ef3d125e88872b67188fcfff93 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-10-23T13:23:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 carvalho_pasv_dr_bot.pdf: 2023210 bytes, checksum: 0f11f1ef3d125e88872b67188fcfff93 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T13:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carvalho_pasv_dr_bot.pdf: 2023210 bytes, checksum: 0f11f1ef3d125e88872b67188fcfff93 (MD5) Previous issue date: 2017-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O gênero Arachis possui 81, espécies distribuídas em nove seções taxonômicas, sendo o amendoim (A. hypogaea L.) a principal espécie, devido ao seu alto valor nutricional. O gênero possui também outras espécies de interesse econômico, que têm sido utilizadas em programas de melhoramento do amendoim (espécies da seção Arachis) e espécies forrageiras de outras seções do gênero. Com relação às demais espécies, o germoplasma da grande maioria está disponível para a caracterização e pode, sem dúvida, contribuir para seu uso futuro. O gênero Arachis é um dos poucos que produzem o resveratrol, uma fitoalexina que, além de ser uma resposta da planta contra estresses, também tem ação antioxidante, sendo indicado para prevenção de cânceres e cardiopatias. A avaliação do potencial de produção de resveratrol foi realizada somente em algumas espécies da seção Arachis, faltando avaliação em outras espécies do gênero e nos tetraploides sintéticos que estão sendo utilizados para facilitar a transferência de alelos de espécies silvestres para a cultivada. Assim, o objetivo desse trabalho foi ampliar o conhecimento sobre resveratrol no gênero Arachis. Para tanto foram analisados 21 acessos de espécies silvestres de cinco diferentes seções do gênero Arachis, oito poliploides sintéticos e três cultivares de amendoim. A produção de resveratrol em um conjunto menor de cinco espécies foi acompanhada também de avaliação da expressão do gene que codifica a enzima resveratrol sintase, RS, para entender a variação observada no teor de resveratrol entre as espécies. Tendo em vista que cada experimento foi realizado em uma época diferente do ano e de modo separado, não foi possível reunir todos os dados e fazer uma comparação entre eles. Em todos os experimentos foram avaliadas folhas submetidas a estresse abiótico por raios ultravioleta (UV), que foi o melhor indutor de síntese em dados de literatura. Os resultados mostraram que 21 acessos de 17 espécies das cinco seções são capazes de produzir resveratrol, sendo o maior teor detectado em A. lignosa, da seção Procumbentes. Em relação ao potencial de produção dos híbridos, foi verificado que a concentração de resveratrol na maioria dos anfidiploides sintéticos é significativamente maior em relação aos parentais silvestres diploides. Além disso, a concentração de resveratrol nos híbridos resultantes do cruzamento entre anfidiploides e A. hypogaea foi significativamente maior que nos anfidiploides, sugerindo que a combinação entre alelos de silvestres e do cultivado tem um efeito positivo no aumento do resveratrol. Em relação às análises moleculares, notou-se que a expressão do gene é imediata ao término da indução, seguindo de forma decrescente. Por outro lado, as concentrações de resveratrol são crescentes em relação ao passar do tempo de coleta após a indução por UV. Os resultados demonstram o potencial do gênero como fonte de resveratrol, seja via amendoim cultivado, por meio de introgressão de alelos silvestres utilizando-se anfidiploides, ou pelo uso per se dos acessos de espécies silvestres, incluindo de outras seções distantes do amendoim, como é a Procumbentes, da qual faz parte A. lignosa, que apresentou o maior teor de resveratrol no estudo. / The Arachis genus comprises 81 species divided into nine taxonomic sections, being peanut (A. hypogaea L.) the main species due to its high nutritional value. The genus also has other species of economic interest, which have been used in breeding programs for peanut (species of Arachis section) and to forage production. Regarding the other species of Arachis, germplasm of most of them is available and their characterization could undoubtedly contribute to their future use. Arachis genus is one of the few that produces resveratrol, a phytoalexin that is synthesized by the plant due to a stress and it is also a antioxidant that has been used to prevention of cancers and heart diseases. The resveratrol evaluation in Arachis was carried out mainly in Arachis hypogaea and in some species of the section Arachis, lacking the evaluation in other species of the genus and in the synthetic tetraploids that have been used to facilitate the transfer of alleles from wild species to the cultivated one. Therefore, the objective of this study was to increase the knowledge about resveratrol in the genus Arachis. Twenty one accessions of wild species from five different sections of the genus Arachis, eight synthetic polyploids and three peanut cultivars were analyzed. The production of resveratrol in a smaller set of five species was also accompanied of evaluation of resveratrol synthase to try to understand the variation observed in the resveratrol content among the species. Since each experiment was performed at a different time of year and separately, it was not possible to gather all the data and make a comparison between them. In all experiments, leaves treated with ultraviolet radiation (UV) were evaluated, which was the best inducer of synthesis in literature data. The results showed that 21 accessions of 17 species of the 5 sections are able to produce resveratrol, being the highest content detected in A. lignosa from Procumbentes section. It was verified that the concentration of resveratrol in the majority of the synthetic amphidiploids is significantly higher in relation to the diploid wild parents. In addition, the concentration of resveratrol in the hybrids resulting from the crossing between amphidiploids and A. hypogaea was significantly higher than in amphidiploids, suggesting that the combination of wild and cultivated alleles has a positive effect on the increase of resveratrol. It was noticed that the expression of the gene is immediate at the end of the induction, following in a decreasing way. On the other hand, the concentrations of resveratrol are increasing in relation to the time of collection after the induction of the material. The results demonstrate the potential of wild species of genus Arachis as a 10 source of resveratrol, either via cultivated peanuts, through introgression of wild alleles using amphidiploids, or through the use of wild species accesses, including from other sections distant from peanut, such as A. lignosa.

Orientador: Marcos Aparecido Gimenes / Coorientador: Tânia da Silveira Agostini Costa / Coorientador: Ana Cristina Miranda Brasileiro / Banca: Marcia Ortiz Mayo Marques / Banca: Edvaldo Aparecido Amaral da Silva / Resumo: O resveratrol é uma fitoalexina produzida em função de estresses bióticos e abióticos e foi encontrado em um número limitado de espécies de plantas, incluindo o amendoim (Arachis hypogaea) e seus parentes silvestres. Este tem também propriedades antioxidantes e em função disso é um promissor antitumoral, cardioprotetor e neuroprotetor. O amendoim é um alotetraploide de constituição genômica AB sendo A. ipaënsis e A. duranensis os doadores de seus genomas B e A, respectivamente. Estudos prévios demonstraram que algumas espécies silvestres do gênero Arachis produzem resveratrol e que ampla variabilidade genética para diferentes características existe entre acessos das espécies silvestres, incluindo ampla variação nos níveis de resistência a doenças fúngicas e nematoides. Portanto, a avaliação de um maior número do gênero e a investigação da variação da produção de resveratrol também entre acessos é fundamental para uma exploração mais adequada das espécies silvestres do gênero Arachis. O melhor entendimento das causas da variação na produção de resveratrol sem dúvida contribuirá para o uso das mesmas e o primeiro passo para esse entendimento sem duvida passa pela identificação do padrão de expressão da resveratrol sintase (RS). Este trabalho tem como objetivos avaliar a variação na produção de resveratrol entre espécies (A. hypogaea, A. stenosperma, A. valida, A. wiliamsii, A. duranensis, A. ipaënsis e um anfidiploide sintético proveniente do cruzamento artificial entre A. duranensis e A. ipaënsis) e entre acessos de duas espécies(A. hypogaea e A. stenosperma) por meio de HPLC e avaliar a expressão relativa da resveratrol sintase por meio de RT-qPCR em A. hypogaea, A. duranensis, A. ipaënsis e um anfidiploide sintético. Folhas foram coletadas de plantas cultivadas em casa de vegetação para os grupos teste e controle e três repetições biológicas ... / Abstract: Resveratrol is a phytoalexin produced under biotic and abiotic stresses. It has been found in a restricted number of plant species including peanut (Arachis hypogaea) and its wild relatives. This phytochemical has antioxidant properties, being considered a promising antitumour, cardioprotective and neuroprotective agent. Peanut is an allotetraploid specie with an AABB genomic constitution. Arachis ipaënsis and A. duranensis are the donors of the B genome and the A genome, respectively. Previous studies have shown that wild species of the genus Arachis can produce resveratrol. Therefore, the evaluation of other species of thus genus and the analysis of the variation in the production of resveratrol between accessions is essential for better exploitation of wild species in the genus Arachis. It also important the understanding of the variation in resveratrol concentration between species and accessions and that could be reached through the better understating of the role resveratrol synthase.. . The aims of this work were to evaluate the variation in resveratrol production between species (A. hypogaea, A. stenosperma, A. valida, A. wiliamsii, A. duranensis, A. ipaënsis and in a synthetic amphidiploid derived from these two wild species A. duranensis and A. ipaënsis) and between accessions of the same specie (A. hypogaea and A. stenosperma) through HPLC, and to quantify the expression of resveratrol synthase by RT-qPCR in A. hypogaea, A. duranensis, A. ipaënsis and in a synthetic amphidiploid. Leaves for the test and control groups were collected from plants cultivated in a greenhouse and three biological replicates were evaluated for each specie. The synthesis of resveratrol in leaves was induced by treatment with UV for 2 hours and thirty minutes and then the difference in the concentration of resveratrol between species and between the accessions and cultivars of the same species was analyzed. We found new ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-26Bitstream added on 2014-08-13T18:00:49Z : No. of bitstreams: 1 000753267.pdf: 1148159 bytes, checksum: e46fd3be4a1e5a94f82f31452ef03554 (MD5) / O resveratrol é uma fitoalexina produzida em função de estresses bióticos e abióticos e foi encontrado em um número limitado de espécies de plantas, incluindo o amendoim (Arachis hypogaea) e seus parentes silvestres. Este tem também propriedades antioxidantes e em função disso é um promissor antitumoral, cardioprotetor e neuroprotetor. O amendoim é um alotetraploide de constituição genômica AB sendo A. ipaënsis e A. duranensis os doadores de seus genomas B e A, respectivamente. Estudos prévios demonstraram que algumas espécies silvestres do gênero Arachis produzem resveratrol e que ampla variabilidade genética para diferentes características existe entre acessos das espécies silvestres, incluindo ampla variação nos níveis de resistência a doenças fúngicas e nematoides. Portanto, a avaliação de um maior número do gênero e a investigação da variação da produção de resveratrol também entre acessos é fundamental para uma exploração mais adequada das espécies silvestres do gênero Arachis. O melhor entendimento das causas da variação na produção de resveratrol sem dúvida contribuirá para o uso das mesmas e o primeiro passo para esse entendimento sem duvida passa pela identificação do padrão de expressão da resveratrol sintase (RS). Este trabalho tem como objetivos avaliar a variação na produção de resveratrol entre espécies (A. hypogaea, A. stenosperma, A. valida, A. wiliamsii, A. duranensis, A. ipaënsis e um anfidiploide sintético proveniente do cruzamento artificial entre A. duranensis e A. ipaënsis) e entre acessos de duas espécies(A. hypogaea e A. stenosperma) por meio de HPLC e avaliar a expressão relativa da resveratrol sintase por meio de RT-qPCR em A. hypogaea, A. duranensis, A. ipaënsis e um anfidiploide sintético. Folhas foram coletadas de plantas cultivadas em casa de vegetação para os grupos teste e controle e três repetições biológicas ... / Resveratrol is a phytoalexin produced under biotic and abiotic stresses. It has been found in a restricted number of plant species including peanut (Arachis hypogaea) and its wild relatives. This phytochemical has antioxidant properties, being considered a promising antitumour, cardioprotective and neuroprotective agent. Peanut is an allotetraploid specie with an AABB genomic constitution. Arachis ipaënsis and A. duranensis are the donors of the B genome and the A genome, respectively. Previous studies have shown that wild species of the genus Arachis can produce resveratrol. Therefore, the evaluation of other species of thus genus and the analysis of the variation in the production of resveratrol between accessions is essential for better exploitation of wild species in the genus Arachis. It also important the understanding of the variation in resveratrol concentration between species and accessions and that could be reached through the better understating of the role resveratrol synthase.. . The aims of this work were to evaluate the variation in resveratrol production between species (A. hypogaea, A. stenosperma, A. valida, A. wiliamsii, A. duranensis, A. ipaënsis and in a synthetic amphidiploid derived from these two wild species A. duranensis and A. ipaënsis) and between accessions of the same specie (A. hypogaea and A. stenosperma) through HPLC, and to quantify the expression of resveratrol synthase by RT-qPCR in A. hypogaea, A. duranensis, A. ipaënsis and in a synthetic amphidiploid. Leaves for the test and control groups were collected from plants cultivated in a greenhouse and three biological replicates were evaluated for each specie. The synthesis of resveratrol in leaves was induced by treatment with UV for 2 hours and thirty minutes and then the difference in the concentration of resveratrol between species and between the accessions and cultivars of the same species was analyzed. We found new ...

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3753.pdf: 9161600 bytes, checksum: 26887a20430e04deb54cb6b8e7360500 (MD5) Previous issue date: 2011-06-22 / Universidade Federal de Sao Carlos / The present work describes the study of variation in the chemical profile of citrus after inoculation of Xylella fastidiosa, in charge of the Citrus Variegated Chlorosis is one of the most serious diseases that cause damage in Brazilian citrus. The bacterium X. fastidiosa was inoculated in Citrus sinensis grafted on C. limonia and was evaluated using chemometric tools and development of analytical methods such as HPLC-DAD, LC-MS/MS, LC-UV-SPE-NMR and HRMAS quantitative variation of some secondary metabolites such as coumarins and flavonoids identified both in grafts and in the matrix C. sinensis and C. limonia. The chemometric methods PCA and HCA applied to the data obtained in studies by HPLC-DAD and HR-MAS allowed to discriminate plants contaminated with the bacteria of the species healthy, as well as the respective individuals. By analyzing the change in the chemical profile of citrus studied by HPLC-UV-SPE-NMR it was possible to detect the presence of a new class of secondary metabolites derived from p-hidroxy-cinnamic acid containing oxidized dihydropyran and dihydrofuran rings. Similarly, when analyzing the compounds of medium polarity by LC-MS/MS technique was identified, until now, in the roots and leaves several coumarins not cited in the literature for any of the species that constitute the graft, as dihydrosuberenol, 2 ', 3'-dihydrosuberosin, citrubutin the limonoid diosfenol limonin and flavonoid 3-hydroxy-3', 4 ',5,7,8- pentamethoxyflavone. Finally, was observed that coumarin bergapten is present in reasonable quantities only in the leaves of Rangpur lime, which is tolerant to X. fastidiosa, and when the graft presents with symptoms of citrus variegated chlorosis is a small production of this in their leaves, indicating that this is a phytoanticipin. / O presente trabalho descreve o estudo da variação do perfil químico de citros após a inoculação da bactéria Xylella fastidiosa, responsável pela Clorose Variegada do Citros (CVC) que é uma das mais sérias doenças causadoras de prejuízos na citricultura brasileira. Para isso, inoculou-se a X. fastidiosa em enxertos de C. sinensis sobre C. limonia e avaliou-se através de ferramentas quimiométricas e de desenvolvimento de métodos analíticos como HPLC-DAD, LC-MS/MS, LC-UV-SPE-NMR e HRMAS a variação quantitativa de alguns metabólitos secundários, como cumarinas e flavonóides identificados tanto nos enxertos quanto nas matrizes C. sinensis e C. limonia. As ferramentas quimiométricas PCA e HCA aplicadas aos dados obtidos nos estudos de HPLC-DAD e HR-MAS permitiram discriminar as plantas contaminadas com a bactéria das espécies sadias, assim como os respectivos indivíduos. Ao analisar a variação do perfil químico dos citros estudados através da HPLC-SPE-UVNMR foi possível detectar a presença de uma nova classe de metabólitos secundários derivados do ácido p-metoxicinâmico contendo anéis diidropirano e diidrofurano oxidados. Do mesmo modo, ao analisar os compostos de média polaridade, através da técnica de LC-MS/MS foi possível identificar, até o presente momento, nas raízes e folhas algumas cumarinas não citadas na literatura para nenhuma das duas espécies que constituem o enxerto, como diidrosuberenol, 2 ,3 -diidrosuberosina, citrubutina, o limonóide limonina diosfenol e o flavonóide 3-hidroxi- 3 ,4 ,5,7,8-pentametoxiflavona. Finalmente, observou-se que a cumarina bergapteno está presente em quantidade razoável apenas nas folhas do limão cravo, o qual é tolerante à X. fastidiosa, e quando o enxerto apresenta os sintomas da CVC há uma pequena produção desta em suas folhas, indicando ser esta uma fitoantecipina

A levedura Saccharomyces cerevisiae tem potencial para o controle de doenças em algumas plantas, devido à capacidade de induzir resistência e de elicitar mecanismos de defesa. Entretanto, no processo de purificação de compostos elicitores presentes na parede celular de S. cerevisiae foi observado um baixo rendimento, dificultando a realização de experimentos, principalmente em campo. Assim, com o objetivo de otimizar o processo de extração do (s) elicitor (es) presentes na parede celular da levedura, células em suspensão foram autoclavadas por minutos ou horas, uma vez ou seqüencialmente. Em seguida, foi avaliado o conteúdo de carboidratos e de proteínas destas preparações que foram testadas na produção de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo, previamente tratados ou não com abrasivo carborundum, e na germinação de conídios e formação de apressórios por Colletotrichum lagenarium e Colletotrichum sublineolum. Em função da maior concentração de carboidratos e da atividade elicitora em mesocótilos de sorgo, a preparação de levedura autoclavada por 4 horas seqüencialmente foi submetida ao processo de purificação. Cromatografias de troca iônica (CTI), com tampão Tris-HCl ou bicarbonato de amônio na eluição da coluna DEAE-Celulose, foram realizadas para separar as frações com maior poder elicitor das de baixo poder elicitor. Frações de ambas as cromatografias, induziram o acúmulo de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo, previamente tratados ou não com abrasivo carborundum. Entretanto, frações provenientes da cromatografia com tampão bicarbonato de amônio foram capazes de inibir em 100% a germinação de conídios e a formação de apressórios dos fitopatógenos. Na proteção de pepino em câmara de crescimento, houve redução da área lesionada somente quando as plântulas de pepino receberam as frações provenientes da CTI com tampão Tris-HCl, dois dias antes da inoculação com o patógeno. Em casa-de-vegetação, fração proveniente da CTI com tampão bicarbonato de amônio conferiu proteção às plântulas de pepino contra C. lagenarium, mas sem aumento na atividade de peroxidases. Plantas de sorgo tratadas com as frações de ambas as cromatografias, apresentaram tendência a uma redução da área lesionada nas folhas tratadas e folhas superiores, com produção de fitoalexinas. A maior produção de fitoalexinas em plantas de sorgo foi observada em folhas tratadas com a preparação bruta da levedura autoclavada por 4 horas seqüencialmente. Os resultados do presente trabalho indicam a existência de compostos termoestáveis na parede celular da levedura, liberados em maior concentração em função da autoclavagem seqüencial, capazes de induzir o acúmulo de fitoalexinas em mesocótilos e folhas de sorgo, com atividade antifúngica sobre C sublineolum e C. lagenarium e potencial para induzir resistência local em pepino contra C. lagenarium e resistência local e sistêmica em sorgo contra C. sublineolum. / The yeast Saccharomyces cerevisiae has potential in the control of diseases in some plants by the ability to induce resistance and elicits defence mechanisms. However, in the process of purification of elicitor (s) present in the cell wall of S. cerevisiae a low efficiency was observed during the process, making difficult to carry out experiments, mainly in field. Thus, to optimize the process of extraction of the elicitor (s) present in the cell wall of the yeast, cells in suspension were autoclaved by minutes or hours, once or in sequence. After autoclaving the carbohydrate and proteins content of these preparations were determinate and they were tested in phytoalexin accumulation in sorghum mesocotyls, previously treated or not with the abrasive carborundum, and conidia germination and appressorium formation by Colletotrichum lagenarium and Colletotrichum sublineolum. Because of the higher carbohydrate content and the highest elicitor activity in sorghum mesocotyls, the preparation autoclaved by 4 hours in sequence was selected for the purification process. Ion exchange chromatography (IEC) using Tris-HCl or ammonium bicarbonate buffer for column elution, were used to separate fractions with higher elicitation activity from those exhibiting lower elicitation activity. Fractions from the chromatography obtained using either buffer induced the accumulation of phytoalexin in sorghum mesocotyls, previously treated or not with the abrasive carborundum. However, the fractions from the chromatography with ammonium bicarbonate buffer were able to inhibit in 100% the conidia germination and appressorium formation by the phytopathogens. In the protection of cucumber in growth chamber, there was a reduction in symptoms only when the cucumber seedlings were treated with the fractions from the IEC with Tris-HCl buffer, two days before the inoculation with the fungus. In greenhouse, fraction from the IEC with ammonium bicarbonate buffer was able to protect cucumber seedlings against C. lagenarium, but without increase peroxidases activity. Sorghum plants treated with the fractions, obtained using either buffer, exhibited reduced infection in the treated leaves and leaves just above, with phytoalexin production. The highest phytoalexin production in sorghum plants was observed in leaves treated with the crude preparation of the yeast autoclaved by 4 hours sequentially. The results of the present study indicate the presence of termoestable compounds in the cell wall of the yeast, released in higher concentrations in function of the sequential autoclavage, that are able to induce phytoalexin accumulation in sorghum mesocotyls and leaves, with antifungal activity on C. sublineolum and C. lagenarium and potential to induce local resistance in cucumber against C. lagenarium and local and systemic resistance in sorghum against C. sublineolum.

A levedura Saccharomyces cerevisiae tem potencial para o controle de doenças em algumas plantas, devido à capacidade de induzir resistência e de elicitar mecanismos de defesa. Entretanto, no processo de purificação de compostos elicitores presentes na parede celular de S. cerevisiae foi observado um baixo rendimento, dificultando a realização de experimentos, principalmente em campo. Assim, com o objetivo de otimizar o processo de extração do (s) elicitor (es) presentes na parede celular da levedura, células em suspensão foram autoclavadas por minutos ou horas, uma vez ou seqüencialmente. Em seguida, foi avaliado o conteúdo de carboidratos e de proteínas destas preparações que foram testadas na produção de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo, previamente tratados ou não com abrasivo carborundum, e na germinação de conídios e formação de apressórios por Colletotrichum lagenarium e Colletotrichum sublineolum. Em função da maior concentração de carboidratos e da atividade elicitora em mesocótilos de sorgo, a preparação de levedura autoclavada por 4 horas seqüencialmente foi submetida ao processo de purificação. Cromatografias de troca iônica (CTI), com tampão Tris-HCl ou bicarbonato de amônio na eluição da coluna DEAE-Celulose, foram realizadas para separar as frações com maior poder elicitor das de baixo poder elicitor. Frações de ambas as cromatografias, induziram o acúmulo de fitoalexinas em mesocótilos de sorgo, previamente tratados ou não com abrasivo carborundum. Entretanto, frações provenientes da cromatografia com tampão bicarbonato de amônio foram capazes de inibir em 100% a germinação de conídios e a formação de apressórios dos fitopatógenos. Na proteção de pepino em câmara de crescimento, houve redução da área lesionada somente quando as plântulas de pepino receberam as frações provenientes da CTI com tampão Tris-HCl, dois dias antes da inoculação com o patógeno. Em casa-de-vegetação, fração proveniente da CTI com tampão bicarbonato de amônio conferiu proteção às plântulas de pepino contra C. lagenarium, mas sem aumento na atividade de peroxidases. Plantas de sorgo tratadas com as frações de ambas as cromatografias, apresentaram tendência a uma redução da área lesionada nas folhas tratadas e folhas superiores, com produção de fitoalexinas. A maior produção de fitoalexinas em plantas de sorgo foi observada em folhas tratadas com a preparação bruta da levedura autoclavada por 4 horas seqüencialmente. Os resultados do presente trabalho indicam a existência de compostos termoestáveis na parede celular da levedura, liberados em maior concentração em função da autoclavagem seqüencial, capazes de induzir o acúmulo de fitoalexinas em mesocótilos e folhas de sorgo, com atividade antifúngica sobre C sublineolum e C. lagenarium e potencial para induzir resistência local em pepino contra C. lagenarium e resistência local e sistêmica em sorgo contra C. sublineolum. / The yeast Saccharomyces cerevisiae has potential in the control of diseases in some plants by the ability to induce resistance and elicits defence mechanisms. However, in the process of purification of elicitor (s) present in the cell wall of S. cerevisiae a low efficiency was observed during the process, making difficult to carry out experiments, mainly in field. Thus, to optimize the process of extraction of the elicitor (s) present in the cell wall of the yeast, cells in suspension were autoclaved by minutes or hours, once or in sequence. After autoclaving the carbohydrate and proteins content of these preparations were determinate and they were tested in phytoalexin accumulation in sorghum mesocotyls, previously treated or not with the abrasive carborundum, and conidia germination and appressorium formation by Colletotrichum lagenarium and Colletotrichum sublineolum. Because of the higher carbohydrate content and the highest elicitor activity in sorghum mesocotyls, the preparation autoclaved by 4 hours in sequence was selected for the purification process. Ion exchange chromatography (IEC) using Tris-HCl or ammonium bicarbonate buffer for column elution, were used to separate fractions with higher elicitation activity from those exhibiting lower elicitation activity. Fractions from the chromatography obtained using either buffer induced the accumulation of phytoalexin in sorghum mesocotyls, previously treated or not with the abrasive carborundum. However, the fractions from the chromatography with ammonium bicarbonate buffer were able to inhibit in 100% the conidia germination and appressorium formation by the phytopathogens. In the protection of cucumber in growth chamber, there was a reduction in symptoms only when the cucumber seedlings were treated with the fractions from the IEC with Tris-HCl buffer, two days before the inoculation with the fungus. In greenhouse, fraction from the IEC with ammonium bicarbonate buffer was able to protect cucumber seedlings against C. lagenarium, but without increase peroxidases activity. Sorghum plants treated with the fractions, obtained using either buffer, exhibited reduced infection in the treated leaves and leaves just above, with phytoalexin production. The highest phytoalexin production in sorghum plants was observed in leaves treated with the crude preparation of the yeast autoclaved by 4 hours sequentially. The results of the present study indicate the presence of termoestable compounds in the cell wall of the yeast, released in higher concentrations in function of the sequential autoclavage, that are able to induce phytoalexin accumulation in sorghum mesocotyls and leaves, with antifungal activity on C. sublineolum and C. lagenarium and potential to induce local resistance in cucumber against C. lagenarium and local and systemic resistance in sorghum against C. sublineolum.

O trabalho avaliou micobiota, contaminação por aflatoxinas (AFB), ácido ciclopiazônico (ACP) e fitoalexina (trans-resveratrol) nas variedades de amendoim Runner IAC 886 e IAC-Caiapó, no campo e armazenamento. Nas amostras de campo, na IAC 886 predominou Fusarium spp. nos grãos e cascas, contaminação por AFB em 30% dos grãos, ACP em 70% e trans-resveratrol em 5%. Na IAC-Caiapó prevaleceu Fusarium spp., em todas as amostras, AFB em 25% dos grãos, ACP em 55% e trans-resveratrol em 15%. Nas folhas, trans-reveratrol estava presente em 70%, nas variedades. No armazenamento, observou-se maior freqüência de A. flavus, A. parasiticus. Na IAC 886 AFB foi detectada em 20% nos grãos e 23% nas cascas e ACP em 80% dos grãos. Na IAC-Caiapó, AFB foi encontrada em 13% tanto nas amostras de grãos, como nas cascas e ACP em 70% dos grãos. Os resultados do potencial toxigênico de A. flavus revelaram 81% produtores de aflatoxinas, 95% de ACP e 75% de ambas. Todos A. flavus produtores de esclerócios pertenciam ao grupo L. / This study had assessed mycobiota, contamination by aflatoxins (AFB), cyclopiazonic acid (CPA) and phytoalexin (trans-resveratrol) in the peanuts varieties Runner IAC 886 and IAC-Caiapó, in the field and storage. In the Field samples, in IAC 886 it was predominated Fusarium spp. in grains and shells, contamination by AFB in 30% of the grains, CPA in 70% and trans-resveratrol in 5%. In IAC-Caiapó, it was prevailed Fusarium spp. in all samples, AFB in 25% of the grains, CPA in 55% and trans-resveratrol in 15%. In the leaves, trans-resveratrol was present in 70% in the varieties. In the storage, it was observed a higher frequency of A. flavus, A. parasiticus. In IAC 886, it was detected AFB in 20% of the grains and 23% in the shells, and CPA in 80% of the grains. In IAC-Caiapó, it was found AFB in 13% both in grains as in the shells samples, and CPA in 70% of the grains. The toxigenic potential results of A. flavus revealed 81% aflatoxins producers, 95% CPA producers and 75% both producers. All strains of A. flavus sclerotia producers belonged to the L group.

O trabalho avaliou micobiota, contaminação por aflatoxinas (AFB), ácido ciclopiazônico (ACP) e fitoalexina (trans-resveratrol) nas variedades de amendoim Runner IAC 886 e IAC-Caiapó, no campo e armazenamento. Nas amostras de campo, na IAC 886 predominou Fusarium spp. nos grãos e cascas, contaminação por AFB em 30% dos grãos, ACP em 70% e trans-resveratrol em 5%. Na IAC-Caiapó prevaleceu Fusarium spp., em todas as amostras, AFB em 25% dos grãos, ACP em 55% e trans-resveratrol em 15%. Nas folhas, trans-reveratrol estava presente em 70%, nas variedades. No armazenamento, observou-se maior freqüência de A. flavus, A. parasiticus. Na IAC 886 AFB foi detectada em 20% nos grãos e 23% nas cascas e ACP em 80% dos grãos. Na IAC-Caiapó, AFB foi encontrada em 13% tanto nas amostras de grãos, como nas cascas e ACP em 70% dos grãos. Os resultados do potencial toxigênico de A. flavus revelaram 81% produtores de aflatoxinas, 95% de ACP e 75% de ambas. Todos A. flavus produtores de esclerócios pertenciam ao grupo L. / This study had assessed mycobiota, contamination by aflatoxins (AFB), cyclopiazonic acid (CPA) and phytoalexin (trans-resveratrol) in the peanuts varieties Runner IAC 886 and IAC-Caiapó, in the field and storage. In the Field samples, in IAC 886 it was predominated Fusarium spp. in grains and shells, contamination by AFB in 30% of the grains, CPA in 70% and trans-resveratrol in 5%. In IAC-Caiapó, it was prevailed Fusarium spp. in all samples, AFB in 25% of the grains, CPA in 55% and trans-resveratrol in 15%. In the leaves, trans-resveratrol was present in 70% in the varieties. In the storage, it was observed a higher frequency of A. flavus, A. parasiticus. In IAC 886, it was detected AFB in 20% of the grains and 23% in the shells, and CPA in 80% of the grains. In IAC-Caiapó, it was found AFB in 13% both in grains as in the shells samples, and CPA in 70% of the grains. The toxigenic potential results of A. flavus revealed 81% aflatoxins producers, 95% CPA producers and 75% both producers. All strains of A. flavus sclerotia producers belonged to the L group.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:40:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Edilaine_D_V_GoncalvesTrevisoli.pdf: 2707364 bytes, checksum: 7b7a664f9727d5909c470f377ee155e8 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The induction of resistance in plants to pathogens is an alternative method of disease control, wich involves activation of plant resistance mechanisms such as induction of phytoalexins. The elicitors molecules are able to induce and activate those responses, and therefore, techniques have sought to isolate and characterize fractions with elicitor character. The study aimed to purify, through ion exchange chromatography and gel filtration chromatography, eliciting molecules from pathogenic nematodes, and test them in phaseolin induction in beans hypocotyls beans and gliceolin in soybean cotyledons. The buffer solution Tris HCl 0.05 M (pH 6.8) was used as control and the acibenzolar-S-methyl (50 mg a.i. L-1) and Saccharomyces cerevisiae (20 mg mL-1) were used as induction standard treatments. Ion exchange chromatography (IEC) and gel filtration chromatography (GC) were performed to separate fractions with eliciting power from 500 female nematodes of Meloidogyne incognita and Meloidogyne javanica. For purification of elicitors from Meloidogyne javanica, through IEC, six glycidic fractions and six glycoproteins were obtained. These were purified on GC, obtaining sixty-three fractions. They have been classified according to their nature, as twenty-six glycidic and thirty-seven glycoprotein with molecular weights ranging from 29.19 to 2989.25 kDa. Regarding the elicitors purification of Meloidogyne incognita through IEC, nine glycidic and five glycoprotein fractions were obtained. From these fractions, a total of fifty-eight fractions was obtained through GC, twenty-five glycidic and thirty-three glycoprotein with molecular weights ranging from 37.42 to 200.32 kDa. From the fractions purified from Meloidogyne javanica eight had inducing potential of phaseolin. For gliceolin fifteen fractions showed inducing effect. Regarding the fractions purified from Meloidogyne incognita, no fraction has inductive potential of phaseolin superior to the standard treatment. However, twenty-two fractions suppressed phytoalexin inducing activity. For gliceolin ten fractions induced the same, whereas, twenty-three fractions suppressed the induction of gliceolin. Chromatography was efficient in the purification of elicitors compounds. Compounds with suppressing characteristics of gliceolin and phaseolin were checked in bioassays. For those fractions obtained through IEC, and then submitted to GC that did not induce phytoalexin, it is suggested that molecules need to act together to have elicitor effect and thus induce defense response in the plant / A indução de resistência em plantas contra patógenos é um método de controle alternativo de doenças, e que envolve a ativação dos mecanismos de resistência da planta, como a indução de fitoalexinas. As moléculas eliciadoras possuem a capacidade de induzir e ativar tais repostas, e assim sendo, técnicas têm buscado isolar e caracterizar frações com caráter eliciador. O trabalho teve por objetivo purificar, por cromatografia de troca iônica cromatografia de filtração em gel, moléculas eliciadoras a partir de nematoides fitopatogênicos, e testá-las na indução de faseolina em hipocótilos de feijoeiro e gliceolina em cotilédones de soja. O tampão Tris HCl 0,05 M (pH 6,8) foi utilizado como tratamento controle e o acibenzolar-S-metil (50 mg i.a. L-1) e o Saccharomyces cerevisiae (20 mg mL-1) foram utilizados como tratamento padrão de indução. Cromatografia de troca iônica (CTI) e cromatografia de filtração em gel (CFG) foram realizadas para separar frações com poder eliciador a partir de quinhentas fêmeas de nematoides de Meloidogyne incognita e Meloidogyne javanica. Para a purificação de eliciadores a patir de Meloidogyne javanica, por CTI, foram obtidos seis frações glicídicas e seis glicoproteicas. Estas, por sua vez, foram purificadas em CFG, sendo obtidos no total sessenta e três frações. As mesmas foram classificadas de acordo com sua natureza, sendo vinte e seis glicídicas e trinta e sete glicoproteicas, com massas moleculares variando de 29,19 a 2.989,25 kDa. Em relação a purificação de eliciadores de Meloidogyne incognita por CTI, foram obtidos nove frações glicídicas e cinco glicoproteicas. A partir destas, foram obtidos por CFG um total de cinquenta e oito frações, sendo vinte e cinco glicídicas e trinta e três glicoproteicas, com massas moleculares variando de 37,42 a 200,32 kDa. Das frações purificadas a partir de Meloidogyne javanica oito apresentaram potencial indutor de faseolina. Para gliceolina quinze frações mostraram efeito indutor. Em relação as frações purificadas a partir de Meloidogyne incognita, nenhuma fração apresentou potencial indutor de faseolina superior ao tratamento padrão. Entretanto, vinte e duas frações suprimiram a atividade de indução de fitoalexina. Para gliceolina dez frações induziram a mesma, enquanto que, vinte e três frações suprimiram a indução da gliceolina. A cromatografia foi eficiente na purificação de compostos eliciadores. Compostos com características supressoras de gliceolina e faseolina foram verificadas nos bioensaios. Para aquelas frações obtidas por CTI e posteriormente submetidas a CFG que não induziram fitoalexina, sugere-se que as moléculas necessitam atuar juntas para haver efeito eliciador e assim induzir a resposta de defesa no vegetal