Orientador: Marcos José Salvador / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:32:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pascoal_AislanCristinaRhederFagundes_D.pdf: 6242654 bytes, checksum: fc7ee507e7dbf47583760816d9b7f6ac (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O Brasil, dispondo de uma flora rica e diversificada, é uma potencial fonte de novas substâncias com atividade farmacológica e com menos efeitos colaterais. Neste trabalho realizou-se o estudo fitoquímico e a avaliação do potencial antiproliferativo in vitro e atividade antitumoral in vivo, atividade antinociceptiva e anti-inflamatória de Campomanesia adamatium, típica do bioma Cerrado e de Campomanesia guaviroba, encontrada em áreas de Mata Atlântica. Preparou-se o extrato bruto etanólico a partir das folhas das espécies vegetais, realizou-se o fracionamento por extração líquido-líquido e o isolamento de alguns constituintes químicos por métodos cromatográficos. Determinou-se o conteúdo de fenólicos totais solúveis e de flavonoides totais por ensaios colorimétricos, a análise do perfil químico por ESI-MS/MS e a quantificação de compostos fenólicos por UHPLC-MS nos extratos e frações. Foi possível identificar: ácido gálico, 2¿,4¿-dihidroxi-5¿-metil-6¿-metoxichalcona, 2¿,4¿-dihidroxi-3¿,5¿-dimetil-6¿-metoxi-chalcona, miricitrina e quercetina em C. guaviroba e ácido gálico, 2¿,4¿-dihidroxi-6¿-metoxichalcona (cardamonin), 2¿,4¿-dihidroxi-5¿-metil-6¿-metoxichalcona, quercetina, quercitrina e miricitrina em C. adamantium e isolar dois compostos de C. adamantium, cardamonin e miricitrina. Extratos e frações apresentaram atividade antiproliferativa in vitro frente a algumas linhagens celulares tumorais e a fração diclorometânica de C. guaviroba apresentou baixa toxicidade aguda in vivo e atividade antitumoral in vivo. As frações diclorometânicas de C. adamantium e C. guaviroba apresentaram atividades antinociceptiva e antiedematogênica, semelhantes ao controle positivo Indometacina. Assim, este trabalho demonstrou o potencial farmacológico dessas espécies como a confirmação da presença de compostos fenólicos nesses extratos / Abstract: Brazil, featuring a rich and diverse flora, is a potential source of new substances with pharmacological activity and fewer side effects. This work was carried out to evaluate the in vitro anti-proliferative potential, in vivo antitumoural activity in a solid-tumor Erlich model and in vivo antinociceptive and anti-inflammatory activity of Campomanesia adamatium, typical of the Cerrado biome, and Campomanesia guaviroba, found in the Atlantic Forest. A crude ethanol crude extract of the leaves was prepared and a liquid-liquid partition was performed. Quantification of total phenolic compounds and flavonoids was determined by colorimetric assays. The chemical profile was determined by ESI-MS/MS and compounds quantified by UHPLC-MS. The extracts and fractions of these species have phenolic substances, including flavonoids and the analysis by ESI-MS/MS and UHPLC-MS allowed the identification of gallic acid, 2',4'-dihydroxy-5'-methyl-6'-methoxichalcone, 2',4'-dihydroxy-3',5'-dimethyl-6'-methoxichalcone, quercetin and miricitrin in C. guaviroba and gallic acid, 2 ', 4'-dihydroxy-6'-methoxichalcone, 2', 4'-diidroxi-5'-methyl-6'-methoxichalcone, quercetin, quercitrin and miricitrin in C. adamantium. It was possible to isolate two compounds from C. adamantium, cardamonin and miricitrin. The extracts and fractions exhibited antiproliferative activity in vitro against some tumor cell lines and the dichlorometanic fraction of C. guaviroba showed low acute toxicity and antitumor activity in vivo. The evaluation of the anti-inflammatory and antinociceptive activities of the dichlorometanic fractions of C. adamantium and C. guaviroba showed similar activities to the positive control indomethacin. Thus, this work demonstrated the pharmacological potential these species as confirmation of the presence of phenolic compounds in these extracts / Doutorado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Doutora em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientador: Gláucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-27T07:08:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_GustavoAraujo_M.pdf: 1768265 bytes, checksum: 651e1ab8aaa3bc75e27daed3b11df00e (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi estudar a influência dos parâmetros de extração sólido-liquido e de enzimas fenoloxidases (peroxidase) na recuperação de compostos fenólicos a partir do pó da casca de banana liofilizada (CBL), bem como quantificar o conteúdo de compostos fenólicos totais (FT), flavonoides totais (CF) e a atividade antioxidante da CBL e do pó da polpa de banana liofilizada (PBL). A banana utilizada foi da variedade Prata no estágio 6 de maturação (casca totalmente amarela). Primeiramente, o estudo foi iniciado com a seleção dos parâmetros de extração (temperatura, agitação, solvente e relação sólido-líquido) por meio de um Delineamento Fracionado 24-1 e, em seguida, o método de Superfície de Resposta foi empregado para otimizar os principais fatores do processo de extração (relação sólido-líquido e solvente). A casca da banana apresentou elevada atividade da enzima peroxidase (POD), o que provocou a oxidação dos compostos fenólicos e a redução da capacidade antioxidante do extrato. As melhores condições para a extração de compostos fenólicos a partir da casca de banana foram: relação sólido-solvente de 2,5 g/100 mL (1:40), solvente etanol 54% (v/v etanol:água) e homogeneização com auxílio de Ultra Turrax por 30s a 11.000 rpm. O conteúdo de FT obtido com esse sistema de extração foi de 2,44 g EAG/100 g CBL. A casca de banana apresentou conteúdo de FT (2,44 g EAG/100 g CBL), CF (2,32 g EC/100 g CBL) e atividade antioxidante mensurada pelos métodos de DPPH (380,84 ?mol EQT/g CBL; IC50 = 71,74 ?g/mL), TEAC (325,84 ?mol EQT/g CBL) e ORACFL (ORAC Total = 994,33 ?mol EQT/g CBL) maiores do que a polpa de banana (FT = 0,25 g EAG/100 g PBL; CF = 0,21 g EC/100g PBL; DPPHIC50 = 690,97 ?g/mL; TEAC = 11,05 ?mol EQT/g PBL; ORAC Total = 80,16 ?mol EQT/g PBL). A banana é uma das frutas mais produzidas no mundo, e devido ao seu elevado consumo e abundância pode ser considerada uma importante fonte de compostos antioxidantes. Finalmente, por meio deste estudo foi possível verificar que a polpa e a casca de banana apresentam compostos fenólicos antioxidantes. Mais estudos devem ser realizados para verificar a influência do consumo desse / Abstract: The objective of the present work was to study the influence of solid-liquid extraction parameters and phenoloxidases enzymes in the recovery of phenolic compounds from freeze-dried banana peel powder (BPP), as well as to quantify the total phenolic content (TPC), flavonoid content (FC) and antioxidant activity of BPP and freeze-dried banana pulp powder (BPU). The banana Prata variety was utilized in 6th stage of ripening (fully yellow peel). First of all, the study started with the selection of the extraction parameters (temperature, agitation, solvent and solid-liquid ration) through factionary design (24-1). Subsequently, the Response Surface Methodology (RSM) was employed to optimize the main parameters of the extraction process (solid-liquid ration and solvent). The banana peel showed high peroxidase activity (POD), which led the oxidation of phenolic compounds and the decrease of antioxidant activity of the extract. The best conditions for the extraction of phenolic compound from BPP were solid-liquid ration of 2.5 g/100 mL (1:40), solvent ethanol 54% (v/v ethanol:water) and homogenization using Politron at 11.000 rpm for 30 s. The total phenolic content obtained whit this extraction system was 2.44 g GAE/100 g BPP. The banana peel showed TPC (2.44 g GAE/100 g BPP), FC (2.32 g CE/100 g BPP), and antioxidant activity measured by DPPH (380.84 ?mol TE/g BPP; IC50 = 71.74 ?g/mL), TEAC (325.84 ?mol TE/g BPP) and ORACFL (ORAC Total = 994.33 ?mol TE/g BPP) methods higher than banana pulp (TPC = 0.25 g GAE/100 g BPU; FC = 0.21 g CE/100 g BPU; DPPHIC50 = 690.97 ?g/mL; TEAC = 11.05 ?mol TE/g BPU; ORAC Total = 80.16 ?mol TE/g BPU). The banana is one of the most produced and consumed fruit in the entire world and can be considered as an important source of natural antioxidants. In this sense, this study was to possible found that banana pulp and peel have phenolic compounds with antioxidants properties. More studies should be performed to verify the relationship between banana consumption and human health. Furthermore, research addressing the use of the banana peel by food and pharmaceutical and medical industries. fruto tropical na saúde do corpo humano e também pesquisas abordando o uso da casca na indústria de alimentos e no desenvolvimento de novos produtos / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientadores: Glaucia Maria Pastore, Luciana Gomes Malta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-27T06:04:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pavan_Veronica_M.pdf: 1806354 bytes, checksum: 1b5d278303881581f3b4c456b216d4a5 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Compostos com atividade antioxidante provenientes de frutas que estão envolvidos na prevenção de várias doenças degenerativas foram investigados em diversos estudos. Para melhorar o conhecimento do processo de absorção desses compostos com atividade antioxidante (AA), este estudo avaliou a AA de extratos de Artocarpus heterophillus (jaca) e Annona marcgravii (araticum) brutos, digerido gástrico, digerido intestinal e fermentação colônica, in vitro. Os compostos fenólicos foram avaliados a partir da quantificação de fenóis totais (FT), flavonoides totais (FLT), seguida da AA, medida por métodos como Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) e Oxygen radical absorbance capacity (ORAC). Um importante fator que tem chamado atenção desta classe de compostos são os fenólicos que estão ligados a diferentes moléculas, como carboidratos, aminoácidos, dentre outros, que pelo seu peso molecular, tipo de ligação podem ser absorvidos ou mesmo metabolizados em diferentes regiões no sistema gastrintestinal. No extrato de araticum foi observada uma redução em FT após a digestão gástrica e subsequente aumento após a digestão intestinal, seguida de redução após a fermentação. Redução e aumento em FLT foram observados no extrato de jaca. A AA apresentou diferentes resultados para os métodos utilizados. Observou-se um aumento em TEAC para o extrato de jaca após o processo de digestão intestinal, diferente do extrato de araticum que apresentou aumento após a digestão gástrica e redução após a fermentação. Na avaliação pelo método ORAC observou-se um aumento do potencial no extrato de jaca após sofrer o processo de fermentação colônica. O extrato de araticum apresentou diferente comportamento quando comparado ao extrato de jaca, mostrando queda sucessiva na AA quando digerido e também após ser fermentado. Os carboidratos apresentaram um perfil interessante, no qual desvia do padrão estabelecido pela literatura mostrando uma redução após a digestão gástrica / Abstract: Compounds with antioxidant activity from fruits that are involved in the prevention of several degenerative diseases were investigated in several studies. To improve the knowledge of the process of absorption of these compounds with antioxidant activity (AA), this study evaluated the crude extracts of the Artocarpus heterophillus (jackfruit) and Annona marcgravii (araticum), gastric and intestinal digested and colonic fermentation in vitro. Phenolic compounds were evaluated from the quantification of total phenols (FT), total flavonoids (FLT), followed by AA, measured by method such as Trolox equivalent antioxidant capacity (TEAC) and Oxygen radical absorbance capacity (ORAC). An important factor which has been highlighted to this class of phenolic compounds are the phenolics which are attached to various molecules such as carbohydrates, amino acids, among others, that at molecular weight, type of linkage can be absorbed or metabolized in different regions of the gastrointestinal system. In the araticum extract was observed a decrease in FT after gastric digestion and afterwards an increase after intestinal digestion, followed by reduction after the fermentation. Reduction and increase in FLT were observed in jackfruit extract. The AA showed different results for the method used. There was an increase in TEAC for jackfruit extract after the process of intestinal digestion, unlike araticum extract which increased after gastric digestion and reduction after the fermentation. In assessing the ORAC method there was an increased in the potential of the jackfruit extract after suffering the colonic fermentation process. The araticum extract showed different behavior compared to jackfruit extract, showing successive reduction in AA when it was digested and also after being fermented. Carbohydrates showed an interesting profile, which deviates from the standard established in the literature showing a reduction after gastric digestion / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-27T06:59:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arruda_HenriqueSilvano_M.pdf: 2437126 bytes, checksum: 9776995b146a9a85c66a8622faee620c (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Por apresentar basicamente fórmulas, o Resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The complete Abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Camarea St.-Hil. (Malpighiaceae) é um gênero endêmico da América do Sul, constituído por nove espécies. O objetivo do trabalho foi a reconstrução da filogenia do gênero, por meio de evidências químicas e moleculares. Foram avaliados nove terminais, sete dos quais são espécies correntemente reconhecidas, um é uma espécie que entrou em sinonímia (C. triphylla = C. axillaris) e outro é um suposto híbrido. Como grupos externos, foram utilizadas as espécies Peixotoa reticulata e Janusia guaranitica. Foram analisados os n-alcanos das ceras epicuticulares e os flavonóides de todas as espécies. Os n-alcanos principais foram C29, C31 e C33, todos da série normal. Como flavonóides característicos de Camarea, foram identificados glicosídeos de apigenina, luteolina, crisoeriol, campferol e quercetina. A análise de agrupamentos baseada na distribuição de alcanos, usando UPGMA e distâncias euclideanas, resultou em dois grupos principais, um com C29 como homólogo principal, constituído por C. hirsuta, C. affinis x C. hirsuta, C. affinis e C. ericoides. O outro grupo caracteriza-se por homólogos principais C31 ou C33, e é formado por C. elongata, C. humifusa, C. sericea, C. axillaris e C. triphylla (= C. axillaris). Esses dois principais agrupamentos contêm grupos internos menores. Uma análise de UPGMA usando coeficiente de DICE e baseada na distribuição de agliconas de flavonóides forneceu um dendrograma com alguns agrupamentos coerentes com as afinidades reveladas pela distribuição de alcanos, como as associações: 1) C. hirsuta, C. affinis e C. affinis x hirsuta; 2) C. elongata e C. axillaris; 3) C. sericea e C. humifusa. Uma inferência filogenética molecular foi obtida com seqüências de duas regiões do cloroplasto (trnL-F e rps16) e uma nuclear (ITS). Dentre as análises com um só marcador, resultados mais consistentes foram conseguidos com ITS, que forneceu 49 caracteres filogeneticamente informativos, enquanto trnL-F e rps16 forneceram 10 e 18 caracteres informativos, respectivamente. A análise de consenso estrito de quatro árvores mais parcimoniosas de uma análise combinando-se as três seqüências resultou em um cladograma em que Camarea é um grupo monofilético, com \"bootstrap\" (BS) 100, várias politomias e clados com baixa consistência. Foi realizada análise por AFLP utilizando quatro combinações de iniciadores seletivos, obtendo-se 217 fragmentos polimórficos. Uma análise combinando as evidências moleculares resultantes de seqüências de DNA e marcadores AFLP forneceu uma única árvore mais parcimoniosa com uma politomia agrupando C. affinis, C. ericoides, C. hirsuta e C. affinis x C. hirsuta, mas boa resolução e elevada sustentação em outros clados. A combinação de todas as evidências moleculares e químicas (estas compreendendo três caracteres derivados da análise de alcanos e cinco de flavonóides) resultou numa única árvore mais parcimoniosa completamente resolvida. Os resultados apóiam a fusão de C. triphylla em sinonímia com C. axillaris e indicam forte associação entre: 1) C. humifusa e C. sericea (BS 94); 2) C. affinis, C. affinis x hirsuta, C. hirsuta e C. ericoides (BS 83); 3) C. axillaris e C. elongata (BS 100). C. affinis, C. hirsuta e C. affinis x C. hirsuta compartilham a presença crisoeriol. C. affinis e C. affinis x C. hirsuta, compartilham também luteolina e formam um clado com BS 70. O presente trabalho demonstra a utilidade de caracteres químicos para melhorar a resolução de filogenias e elevar a sustentação de clados. / Camarea St.-Hil. (Malpighiaceae) is a genus with eight species endemic in South America. The purpose of the present work was the attainment of a phylogenetic inference of the genus by means of chemical and molecular evidences. Nine accessions were analyzed: seven correspond to currently recognized species; one is a species sunk into synonymy (C. triphylla = C. axillaris); and a last one is a hypothesized hybrid. Peixotoa reticulata and Janusia guaranitica were used as out-groups. n-Alkanes from epicuticular waxes and flavonoids were analyzed from all species. The main alkanes of all distributions were either C29 or C31 or C33, all from the normal series. The characteristic flavonoids of Camarea were shown to be apigenin, luteolin, chrysoeriol, kaempferol and quercetin. A cluster analysis based on the alkane distribution using UPGMA and Euclidean distances provided two main clusters. One cluster is characterized by C29 as main homologue and is formed by C. hirsuta, C. affinis, C. affinis x hirsuta and C. ericoides. The other cluster has species with either C31 or C33 as main homologue and is formed by C. elongata, C. humifusa, C. sericea, C. axillaris and C. triphylla (= C. axillaris). These two main clusters contain smaller inner clusters. An analysis using UPGMA and DICE coefficients and based on the distribution of flavonoid aglycones provided a dendrogram with clusters congruent with affinities revealed by the alkane evidence, such as the groupings: 1) C. hirsuta, C. affinis and C. affinis x hirsuta; 2) C. elongata and C. axillaris; 3) C. sericea and C. humifusa. A phylogenetic molecular inference was obtained with sequences from two chloroplast (trnL-F and rps16) and one nuclear (ITS) DNA regions. Among the analyses based on a single marker, more consistent results were obtained with ITS, which provided 49 informative phylogenetic characters, while trnL-F and rps16 provided 10 and 18 informative characters, respectively. A strict consensus analysis based on four more parsimonious trees from an analysis combining sequences of the three DNA regions gave a cladogram showing Camarea as a monophyletic group with bootstrap support (BS) 100. The cladogram contains several polytomies and clades with low support. An AFLP analysis, using four combinations of selective primers, provided 217 polymorphic fragments. Data from sequencing and AFLP were combined in a phylogenetic analysis. A sole more parsimonious tree was obtained, with most clades completely resolved with and high support. A polytomy remained, grouping C. affinis, C. ericoides, C. hirsuta and C. affinis x hirsuta. The combination of all molecular and chemical evidences (the latter comprising three alkane and five flavonoid characters) was used for a phylogenetic analysis. A sole more parsimonious tree was obtained, completely resolved and with clades highly supported. The results support sinking C. triphylla into synonymy of C. axillaris and indicate strong kinship: 1) between C. humifusa and C. sericea (BS 94); 2) among C. affinis, C. affinis x C. hirsuta, C. hirsuta and C. ericoides (BS 83); 3) between C. axillaris and C. elongata (BS 100). C. affinis, C. hirsuta and C. affinis x C. hirsuta share the possession of chrysoeriol. C. affinis and C. affinis x C. hirsuta share the possession also of luteolin and form a clade with BS 70. The present work reveals the utility of chemical characters to improve resolution of phylogenies and increment clade support.

A ansiedade é uma enfermidade psiquiátrica que acomete milhões de pessoas no mundo todo. Dentre as substâncias que podem ser ligadas ao efeito ansiolítico de ervas medicinais, os flavonóides se destacam porque freqüentemente são detectados nestas ervas. Neste estudo procurou-se avaliar se compostos bioativos da classe dos flavonóides, presentes no quiabo (Abelmoschus esculentum), poderiam exercer atividade ansiolítica, empregando-se modelos comportamentais para análise de ansiedade em camundongos. Avaliou-se a quantidade e a qualidade dos flavonóides do quiabo, evidenciando-se que o quiabo liofilizado possui 16mg do flavonóide rutina/ 100g. Ratos mostraram-se capazes de absorver rutina, quando esta foi perfundida in situ no duodeno destes animais. Os comportamentos relacionados à ansiedade foram a avaliados no Campo Aberto, no Labirinto em Cruz Elevado e na Placa Perfurada após a ingestão de rações com diferentes concentrações de quiabo (4,5; 7 e 10%) por 7, 14 e 21 dias. Camundongos foram tratados com pentilenotetrazol, droga ansiogênica, e diazepam, droga ansiolítica, para comparar os resultados com aqueles de animais que receberam ração com quiabo. Os resultados obtidos no Campo Aberto mostraram que a suplementação dietética com quiabo aumentou o tempo de permanência na zona interna e também o número de quadros percorridos nesta região, de maneira semelhante ao diazepam, o que evidencia um efeito com perfil ansiolítico. No Labirinto, tanto o tempo de permanência, como o número de entradas nos braços abertos aumentaram em camundongos que consumiram rações suplementadas com quiabo e naqueles tratados com diazepam, corroborando os resultados obtidos no Campo Aberto. Na Placa Perfurada, o tempo de latência para o primeiro mergulho em um dos orifícios diminuiu em camundongos que se alimentaram com ração suplementada com quiabo, de modo similar ou superior ao efeito obtido pelo tratamento com diazepam e significativamente menor que o efeito produzido pelo tratamento com pentilenotetrazol. Não foram detectados flavonóides em tecidos biológicos de ratos e camundongos tratados com quiabo ou com rutina. Assim, concluiu-se que a suplementação dietética com o flavonóide rutina, proveniente do quiabo, resultou em efeito ansiolítico em camundongos, mostrando que o enriquecimento da dieta com alimentos ricos em rutina pode contribuir para a prevenção e tratamento do comportamento relacionado à ansiedade em camundongos. / Anxiety is a psychiatric disorder that affects millions of people around the world. Among the substances that may be linked to the anxiolytic effect of medicinal herbs, the flavonoids stand out because they are often found in these herbs. In the present study we sought to evaluate whether the c1ass of bioactive compounds flavonoids, present in okra (Abelmoschus esculentum), could exert anxiolytic activity, using models for behavioral analysis of anxiolytic activity in mice. We evaluate the quantity and quality of flavonoids of okra, showing that the okra lyophilisate has 16mg of flavonoid rutin/100g. Rats were shown able of absorb rutin, when it was perfused in situ in the duodenum of these animals. Behaviors related to anxiety were evaluated in the Open Field, Elevated Plus Maze and Hole Board after the intake of diets with different concentrations of okra (4.5, 7 and 10%) for 7, 14 and 21 days. Mice were treated with pentilenotetrazol, an ansiogenic drug, and diazepam, an anxiolytic drug, to compare the results with those of animals that received diet with okra. The results obtained in the Open Field showed that dietary supplementation with okra increased the permanence in the inner zone and also the number of tables covered in this region, so similar to diazepam, shows a anxiolytic profile. In the Elevated Plus Maze, the time, as the number of entries in open arms increased in mice that consumed diets supplemented with okra and those treated with diazepam, corroborating the results obtained in the Open Field. In the Hole Board, the latency time to first diving in one of the holes decreased in mice that are treated with diet supplemented with okra, so similar to or greater than the effect obtained by treatment with diazepam and significantly smaller than the effect produced by treatment with pentilenotetrazol. Flavonoids were not detected in biological tissues of rats and mice treated with okra or with rutin. Thus, it was concluded that dietary treatment with the flavonoid rutin, from okra, resulted in anxiolytic effect in mice, showing that the enrichment of the diet with foods rich in rutin can contribute to the prevention and treatment of anxiety-related behavior in mice.

A própolis é conhecida por suas atividades biológicas, tais como antioxidante, antimicrobiana, antinflamatória, antiviral, entre outras. Sua composição varia entre regiões e existe grande diversidade química entre os diferentes tipos de própolis. Os principais constituintes da própolis são os compostos fenólicos, os quais são responsáveis por várias atividades biológicas, como a atividade antioxidante. Um novo tipo de própolis, nunca antes relatado na literatura, denominado própolis vermelha em decorrência de sua coloração intensa característica, foi coletado na região de mangue do Estado de Alagoas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a composição química e fracionar e isolar compostos com atividade antioxidante da própolis vermelha brasileira. O extrato etanólico da própolis vermelha (EEP) foi primeiramente fracionado pela técnica de extração líquido-líquido, originando as frações hexânica (fr-Hex) e clorofórmica (fr- Clo). A fr-Clo apresentou alto rendimento e composição química complexa, sendo, então, recromatografada em coluna aberta de sílica-gel, gerando 15 subfrações. O EEP, frações e subfrações foram avaliados quanto à sua composição química e atividade antioxidante para seleção das frações destinadas ao isolamento bioguiado. O EEP também foi analisado pela técnica de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), tendo sido identificados sete compostos nunca antes relatados em própolis brasileira, entre os quais, quatro isoflavonóides. Os teores de compostos fenólicos totais e de flavonóides, testados para o EEP, frações e subfrações, variaram de 37,4 a 324,2 mg/g e de 0,0 a 158 mg/g, respectivamente. Com relação ao potencial antioxidante, a maior atividade de seqüestro do radical DPPH foi encontrada para a fr- Hex, enquanto a subfração 5 apresentou alto rendimento e boa atividade pelo método do sistema β-caroteno/ácido linoléico, tendo sido estas frações selecionadas para o isolamento dos compostos bioativos por Cromatografía Líquida de Alta Eficiência (CLAE) preparativa. Três compostos, um da fr-Hex e dois da subfração 5, foram isolados e analisados por CG-EM. Os compostos da subfração 5 foram identificados como 2',7-diidroxi-4'metoxiisoflavana (vestitol) e 2',4'-dihidroxi-7 metoxiisoflavana, ambos isoflavonóides. Não foi possível identificar o composto da fr-Hex utilizando somente a técnica de CG-EM, embora tenha sido possível verificar que este é uma mistura de dois isômeros com peso molecular de 466 g/mol. Os resultados obtidos demonstram que a própolis vermelha é uma boa fonte de compostos bioativos, dentre os quais encontramse isoflavonas, que possuem atividade antioxidante. / Propolis is known for its wide range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, anti-inflammatory, antiviral, among others. Its composition varies according to the region where it is collected and there is a great chemical diversity among the different types of propolis. The main constituents of propolis are the phenolic compounds, which are responsible for several biological activities, such as the antioxidant activity. A novel type of propolis, which has never been reported in the literature before, named red propolis due to its intense characteristic color, was collected in a mangrove area in the state of Alagoas. This study aimed to evaluate the chemical composition, and fractionate and isolate the compounds with antioxidant activity of Brazilian red propolis. The Ethanolic Extract of Propolis (EEP) was first fractionated using the liquid-liquid extraction technique, yielding the hexanic (Hex-fr) and the chloroformic fractions (Chlo-fr). Chlo-fr showed great yield and a complex chemical composition and therefore was refractioned in silica gel open column, yielding 15 subfractions. The EEP, fractions and subfractions were evaluated for their chemical composition and antioxidant activity aiming to select the fractions destined for bioguided isolation. The EEP was also analyzed by the gas-chromatography-mass spectrometry (GC-MS) technique, and seven compounds, never reported for Brazilian propolis before, were identified, among which are four isoflavonoids. The amounts of total polyphenol and flavonoid compounds, tested for EEP, fractions and subfractions, ranged from 37,4 to 324,2 mg/g and 0,0 to 158 mg/g, respectively. The major free radical (DPPH) scavenging activity was found for Hex-fr, while subfraction 5 showed high yield and good antioxidant activity by β-carotene/linoleic acid system oxidation, and these fractions were selected for isolation of bioactive compounds by preparative High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Three compounds, one from Hex-fr and two from subfraction 5, were isolated and analyzed by GC-MS. The compounds from subfraction 5 were identified as 2',7-diidroxi- 4'metoxiisoflavan (vestitol) and 2',4'-dihidroxi-7 metoxiisoflavan, both isoflavonoids. It was not possible to identify the compound from Hex-fr using GC-MS, although it was possible to verify that this compound is a mixture of two isomers presenting molecular weight of 466 g/mol. The results obtained in this study demonstrate that red propolis is a good source of bioactive compounds, among which are isoflavonoids, compounds that possess antioxidant activity.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ane Rosalina.pdf: 643729 bytes, checksum: d56b1036dd88e160ac45e72dcf99a2d6 (MD5) Previous issue date: 2008-10-29 / Phytomedicines must to have as active ingredients only products derived from plants. The quality control of these medicines has not yet properly established criteria even with the growing consumption of these drugs worldwide. Among the assays to evaluate the quality there is the test of dissolution, used to examine the release of the active principle from a capsule or tablet in medium that simulates the place of their absorption. Among the nature drugs best known there is Passiflora incarnata L., whose possess sedative action. The C-flavonoid glycosides vitexin and isovitexin are the main components found in aereal parts of Passiflora sp and are used as markers of the genus in the tests of quality control. This study was conducted to apply the test of dissolution to phytotherapy containing passion flower. The method for quantifying of capsules and tablets used was the spectrophotometric assay described in British Pharmacopoeia (2007) to the powder of P. incarnata. The method has been validated for capsules and then used in the tests of dissolution, with apparatus shovel, 37 C ± 0.5 ° C, speed of 50 rpm in 500 mL of the medium of dissolution 0.1 M HCl pH 1.2, collecting 50 ml at the end of 30 minutes. We have investigated an alternative method for quantification of total flavonoids in ultraviolet spectrophotometer , in a wavelength of 269 nm or 350 nm, looking for a more simple and quick method to be used in routine testing, and because be less polluting and unhealthy. In the tests carried out to quantify the levels of total flavonoids found for the manipulated capsules were 2% for powder and 0.975 % for dry extract; for industrialized tablets the levels were 5.5% and 1.52%. The dissolution assay of the pharmaceutical forms at this study showed that the capsules containing dry extract or powder and one of the industrialized tablets showed 87%, 75% e 76%, respectively, of dissolution within 30 minutes of tests. In relation to the proposed alternative method, was selected the wavelength 350 nm for direct quantification of flavonoids presents in the phytomedicines and at the medium of dissolution. It can be noted that the results were consistent and similar to the datas of the validated method: 85% to dry extract, 80% to powder e 75% to one of the industrialized tablets. Whereas the phytomedicines represent a niche market and an opportunity for diversification of the national pharmaceutical industry, it is necessary to defined parameters of quality to ensure its therapeutic action. So, the studies of dissolution are an essential tool which helps to ensuring the quality of these medicines. / Fitoterápicos são medicamentos cujos princípios ativos são exclusivamente derivados de drogas vegetais. O controle de qualidade de fitoterápicos ainda não tem critérios devidamente estabelecidos mesmo com o crescente consumo destes medicamentos em todo o mundo. Dentre os ensaios para avaliar a qualidade destaca-se o teste de dissolução, usado para analisar a liberação do princípio ativo a partir de uma cápsula ou comprimido em meio que simula o local de sua absorção. Entre os medicamentos naturais mais utilizados encontra-se Passiflora incarnata L., cujas indicações referem-se à ação sedativa desta espécie. Os flavonóides C-glicosídeos vitexina e isovitexina são os principais componentes encontrados nas partes aéreas de Passiflora sp, sendo usados como marcadores do gênero nas análises de controle de qualidade. Este estudo foi realizado visando aplicar o teste de dissolução para fitoterápicos à base de maracujá. O método de quantificação utilizado para cápsulas e comprimidos foi o ensaio espectrofotométrico descrito na Farmacopéia Britânica (2007), para o pó de P. incarnata. O método foi validado para cápsulas de maracujá e então empregado nos ensaios de dissolução com aparato pá, 37 °C ± 0,5 °C, velocidade de 50 rpm em 500 mL do meio de dissolução HCl 0,1 M pH 1,2, coletando-se 50 ml para análise ao final de 30 minutos. Investigou-se neste trabalho um método alternativo para quantificação dos flavonóides totais, em espectrofotometria na região do ultravioleta, nos comprimentos de onda de 269 nm ou 350 nm, visando uma metodologia mais simples e rápida a ser usada em análises de rotina, além de ser menos poluente e insalubre. Nos ensaios de quantificação realizados, os teores de flavonóides totais encontrados para as cápsulas manipuladas foram 2% para pó e 0,975% para o extrato seco; para os comprimidos industrializados os teores foram de 5,5% e 1,52%. Os ensaios de dissolução das formas farmacêuticas nesse estudo demonstraram que as cápsulas à base de extrato seco, à base de pó e um dos comprimidos industrializados apresentaram 87%, 75% e 76%, respectivamente, de dissolução em 30 minutos de ensaios. Em relação ao método alternativo proposto, foi selecionado o comprimento de onda 350 nm para quantificação direta dos flavonóides presentes nos fitoterápicos e nos meios de dissolução. Pode-se observar que os resultados encontrados foram coerentes e semelhantes aos do método validado: 85% para extrato seco, 80% para pó e 75% para um dos comprimidos industrializados. Considerando que os fitoterápicos representam um nicho de mercado e uma possibilidade para a diversificação da indústria farmacêutica nacional, torna-se necessário definir parâmetros de qualidade que assegurem sua ação terapêutica. Neste sentido, os estudos de dissolução constituem uma ferramenta essencial que contribui na garantia da qualidade destes medicamentos.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Gilvana_Barros.pdf: 958039 bytes, checksum: 58f51272a6554708bb8913fd5b9e2a96 (MD5) Previous issue date: 2009-03-23 / The use of medicinal plants in controlling the diseases has shown its potential for the discovery of new medicines. Among the plant species used in the Hospital de Medicina Alternativa (HMA / SES-GO) highlights the vetiver (Vetiveria zizanioides L. Nash), an aromatic plant of the family Poaceae, used as a mild anti-hypertensive and diuretic. In this work it was investigated the chemical composition of the hydroalcoholic extract of vetiver, the freeze-dried aqueous extract and the essential oil from the roots of V. zizanioides. In the hydroalcoholic extract were found terpenoids compounds and / or saponins, flavonoids and phenolic acid. In the freeze-dried aqueous extract was observed the presence of flavonoids and phenols. In the essential oil 38 compounds were identified, and khusimol, palustrol, khusimona, zizanona and epi-α-vetivona were the major constituents. In the assessment of the acute toxicity of the hydroalcoholic extract and the freeze-dried aqueous extract of root of V. zizanioides, it was concluded that these extracts showed no toxicity at a dose of 2000 mg / kg. The freeze-dried aqueous extract of the roots of V. zizainoides showed no statistically significant diuretic action in the doses tested. In the investigation of antimicrobial activity, the essential oil of the root of V. zizanioides showed potent activity to inhibiting the growth of Staphylococcus aureus with MIC of 0.15 mg / mL. The crude ethanolic extract showed an antimicrobial activity with MIC of 0.19 mg / mL for Bacillus cereus and Micrococcus roseus and 0.39 mg / mL for Micrococcus luteus, S. aureus and Bacillus subtilis. The hexane fraction showed stronger antimicrobial activity against strains of M. luteus, M. roseus, S. aureus and B. cereus. This study could prove that the essential oil, the crude ethanol extract and hexane fraction from roots of V. zizanioides showed antimicrobial potential. / O uso de plantas medicinais no controle de doenças tem revelado o seu potencial para a descoberta de novos medicamentos. Dentre as espécies vegetais utilizadas no Hospital de Medicina Alternativa (HMA/SES-GO) destaca-se o vetiver (Vetiveria zizanioides L. Nash), uma planta aromática da família Poaceae, utilizada como anti-hipertensivo leve e diurético. Neste trabalho investigou-se a composição química do extrato hidroalcoólico de vetiver, do extrato aquoso liofilizado e do óleo essencial das raízes de V. zizanioides. No extrato hidroalcoólico foram encontrados compostos terpenóides e/ou saponinas, flavonóides e ácido fenólico. No extrato aquoso liofilizado verificou-se presença de flavonóides e fenóis. No óleo essencial foram identificados 38 compostos, sendo khusimol, palustrol, khusimona, epizizanona e α-vetivona os constituintes majoritários. Na avaliação da toxicidade aguda dos extratos hidroalcoólico e no extrato aquoso liofilizado da raiz de V. zizanioides, concluiu-se que esses extratos não apresentaram toxicidade na dose de 2000 mg/kg. O extrato aquoso liofilizado das raízes de V. zizanioides não demonstrou ação diurética estatisticamente significativa nas doses testadas. Na investigação da atividade antimicrobiana, o óleo essencial da raiz de V. zizanioides apresentou potente atividade inibidora do crescimento de Staphylococcus aureus com CIM de 0,15 mg/mL. Para o extrato etanólico bruto verificou-se uma ação antimicrobiana com CIM de 0,19 mg/mL para Micrococcus roseus e Bacillus cereus e 0,39 mg/mL para Micrococcus luteus, S. aureus e Bacillus subtilis. A fração hexano apresentou ação antimicrobiana mais intensa contra as cepas de M. luteus, M. roseus, S. aureus e B. cereus. Com este estudo foi possível comprovar que o óleo essencial, o extrato etanólico bruto e a fração hexano provenientes da raiz de V. zizanioides apresentaram potencial antimicrobiano.

Realizou-se um estudo estrutura-atividade sobre os efeitos citoprotetor/citotóxico de 5 flavonóides envolvendo processos mitocondriais, com ênfase na apoptose. Nossos resultados mostram que a dupla ligação na posição 2-3 / grupos 3-OH em conjugação com a função 4-oxo no anel C da estrutura dos flavonóides parece favorecer a interação destes compostos com a membrana mitocondrial, diminuindo a sua fluidez, e tanto inibindo a cadeia respiratória das mitocôndrias, quanto causando desacoplamento. Por outro lado, a estrutura o-di-OH no anel B parece favorecer a inibição da cadeia respiratória, sendo que a ausência desta estrutura parece favorecer a atividade desacopladora. Os flavonóides que não afetaram a respiração mitocondrial, induziram a transição de permeabilidade mitocondrial. A capacidade dos flavonóides em liberar o Ca2+ acumulado pelas mitocôndrias correlaciona-se com a sua capacidade de afetar a respiração mitocondrial e sua inabilidade em induzir a transição de permeabilidade mitocondrial. Já os dados referentes aos estudos da atividade protetora contra a formação de radicais livres demonstraram que a quercetina, luteolina e a galangina foram substancialmente mais potentes que a taxifolina e a catequina em conferir proteção contra a lipoperoxidação, embora somente a quercetina tenha sido um efetivo seqüestrador tanto de DPPH?, quanto de O2?-. Esses resultados sugerem que a dupla ligação na posição 2-3 em conjugação com a função 4-oxo na estrutura dos flavonóides são os fatores mais importantes na atividade antioxidante dos flavonóides sobre as mitocôndrias. Ainda, a presença da estrutura o-di-OH no anel B, conforme observado na quercetina, favorece essa atividade via seqüestro de O2?-, enquanto que a ausência dessa característica estrutural na galangina, a favorece via diminuição da fluidez de membrana e/ou desacoplamento mitocondrial. Os ensaios realizados para avaliar o efeito dos flavonóides sobre as células HepG2 mostraram que galangina, luteolina e quercetina são capazes de induzir morte celular. Esse efeito parece estar associado à dissipação do potencial de membrana mitocondrial e à diminuição na capacidade energética celular, mais pronunciada no caso dos dois primeiros; porém, como essa diminuição na concentração de ATP não é drástica, a morte celular pode ocorrer por apoptose. Os experimentos realizados para avaliar essa possibilidade sugerem uma ativação das caspases via mitocôndria, observada pelo aumento das atividades de caspase -9 e -3 e também pela exposição de fosfatidil serina. A taxifolina que não apresentou capacidade de produzir dano celular, apresentou, por outro lado, capacidade de prevenir parcialmente a diminuição de viabilidade das células HepG2 induzida pelo pró-oxidante t-butilhidroperóxido, aparentemente por meio de sua atividade antioxidante que inibiu, também de forma parcial, o acúmulo de espécies reativas de oxigênio. / We carried out a structure-activity study addressing the protective/toxic effects of 5 flavonoids (quercetin, taxifolin, luteolin, catechin and galangin) upon mitochondrial aspects with emphasis on the mechanisms potentially involved in cell apoptosis. The major findings were: The 2,3 double bond/3-OH group in conjugation with the 4-oxo function on the C-ring in the flavonoid structure seems favour the interaction of these compounds with the mitochondrial membrane, decreasing its fluidity either inhibiting the respiratory chain of mitochondria or causing uncoupling; while the o-di-OH on the B-ring seems favour the respiratory chain inhibition, the absence of this structure seems favour the uncoupling activity. The flavonoids not affecting the respiration of mitochondria induced MPT. The ability of flavonoids to induce the release of mitochondria-accumulated Ca2+ correlated well with their ability to affect mitochondrial respiration on the one hand, and their inability to induce MPT, on the other. The data concerning the protective activity against the free radical formation showed that quercetin, luteolin and galangin were far more potent than taxifolin and catechin in affording protection against lipid peroxidation, although only quercetin was an effective scavenger of both DPPH? and O2?-. These results suggest that the 2,3-double bound in conjugation with the 4-oxo function in the flavonoid structure are major determinants of the antioxidant activity of flavonoids on mitochondria, the presence of an o-di-OH structure on the B-ring, as occurring in quercetin, favouring this activity via O2?- scavenging, while the absence of this structural feature in galangin, favouring it via decrease in membrane fluidity and/or mitochondrial uncoupling. The assays addressing the flavonoids effects on HepG2 cells showed that galangin, luteolin and quercetin are able to induce cell death. This effect appears to be linked to the mitochondrial membrane potential dissipation and consequent decrease in the cellular energy charge, more pronounced for the galangin or luteolin treatment. However, since this decrease in ATP content is not drastic, the apoptosis process can occur. The set of experiments performed in order to evaluate this possibility demonstrated caspases-9 and -3 activation and also phosphatidylserine exposure on the cell membrane. On the other hand, taxifolin, that did not present ability to induce injury to the cell, was able to partially inhibit a viability decrease of HepG2 cell exposed to the pro-oxidant t-butylhydroperoxide, probably on account of its capacity to partially decrease ROS formation.