Orientador: Ione Salgado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T20:56:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Modolo_LuziaValentina_M.pdf: 10120070 bytes, checksum: b0747249577dcdd216c84605af571a6a (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O presente trabalho analisou a participação da enzima óxido nítrico sintase (NOS) na produção de fitoalexinas, como parte do mecanismo de defesa de soja ao ataque do fungo Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Dpm), causador da doença do cancro da haste. A produção de fitoalexinas e a atividade NOS em cotilédones de soja eliciados com extrato do fungo Dpm foram comparadas com aquela induzida por nitroprussiato de sódio (SNP), uma molécula capaz de liberar óxido nítrico (NO). Os flavonóides produzidos foram identificados e quantificados utilizando Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e padrões autênticos. A atividade NOS foi determinada pela síntese de L-[U_14C] citrulina a partir de L-[U-14C] arginina. A eliciação dos cotilédones de soja com o extrato de Dpm ou com SN P induziu intensa produção de fitoalexinas. Não foi observada produção de fitoalexinas quando o SNP foi substituído por ferricianeto que difere estruturalmente do primeiro apenas por não conter o NO. A produção de fitoalexinas induzida pelo extrato de Dpm, mas não aquela induzida por SNP, foi inibida quando os cotilédones de soja foram pré-tratados com inibidores característicos da enzima NOS de origem animal. A eliciação com Dpm induziu também atividade NOS nos tecidos em contato com o eliciador, atividade não observada nos tecidos eliciados por SNP. A atividade NOS induzida mostrou ser dependente de Ca2+ e NADPH e foi inibida por L-NAME [NG-nitro-L-arginina metil éster], AMG [Aminoguanidina] e L-NIL [L-N6-(1-iminoetil) lisina], inibidores característicos da NOS de origem animal. A indução de atividade NOS precedeu a ativação da produção de flavonóides nos cotilédones eliciados por Dpm. O acúmulo destes metabólitos foi mais precoce quando os cotilédones foram eliciados com SNP. O conjunto de resultados sugeriu que na eliciação por Dpm ocorreu a ativação de uma enzima do tipo NOS produzindo NO que foi capaz então de induzir a produção de flavonóides que apresentam atividade antimicrobiana. Não foram observadas diferenças significativas na produção de fitoalexinas pelos cotilédones entre os cultivares IAC-18 e IAC-14, resistente e suscetível ao Dpm, respectivamente. Estes resultados indicaram que ambos os cultivares seriam capazes de se defender ao ataque do patógeno nos estádios iniciais de desenvolvimento da planta / Abstract: The formation of phytoalexin is part of the defense mechanism of soybeans against the fungus Diaporthe phaseolorum f. sp. meridionalis (Dpm), the causal agent of stem canker disease. In this work, the involvement of nitric oxide synthase (NOS) in phytoalexin production was examined. Phytoalexin formation and NOS activity in soybean cotyledons stimulated with a Dpm extract were compared with the levels in cotyledons exposed to sodium nitroprusside (SNP), a nitric oxide (NO) donor. The flavonoids were identified and quantified by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) using authentic standards. NOS activity was determined by the biosynthesis of L-[U_14C] citrulline from L-[U_14C] arginine. Exposure of soybean cotyledons to the Dpm extract or SNP resulted in a high accumulation of phytoalexin, but this was not observed when SNP was replaced by ferricyanide, a structural analog of SNP devoid of the NO moiety. Phytoalexin production induced by the Dpm extract, but not by SNP, was prevented when the cotyledons were pretreated with NOS inhibitors. The Dpm extract also induced NOS activity in soybean cotyledon tissue proximal to the site of extract application. No such activity was observed with SNP. The induced NOS activity was Ca2+- and NADPH-dependent and was sensitive to the NOS inhibitors L-NAME [NGnitro-L-arginine methyl ester], AMG [aminoguanidine] and L-NIL [L-N6-(iminoethyl) Iysine]. The induction of NOS activity preceded the maximal accumulation of flavonoids in cotyledons exposed to the Dpm extract. The accumulation of these metabolites was faster in SNP than in Dpm treated cotyledons. These results suggest that Dpm extract induce NOS activity, with the formation of NO subsequently stimulating biosynthesis of flavonoids. There was no significant difference in the phytoalexin accumulation between cotyledons from cultivars IAC-18 and IAC-14 which are resistant and susceptible to Dpm, respectively. Thus, both cultivars should be able to defend themselves against attacks by pathogens in the earlier stages of plant development / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Croton é um dos maiores gêneros de Euphorbiaceae, amplamente distribuído nas regiões tropicais do mundo. No Brasil existem cerca de 300 espécies, muitas utilizadas como medicinais no tratamento de diversos males, tais como úlceras, inflamações, malária, diabetes, sífilis e câncer. A variedade de usos medicinais reflete a diversidade química inerente ao gênero, cuja taxonomia também é bastante complexa. O objetivo deste trabalho é a caracterização química de sete espécies nativas de Croton, a fim de contribuir para a ampliação do conhecimento de potenciais farmacológicos e quiçá fornecer ferramentas quimiotaxonômicas que auxiliem na compreensão das relações entre grupos infragenéricos. Foram analisados óleos voláteis, flavonóides e componentes de extratos etanólicos brutos das espécies. Óleos voláteis de folhas de C. betulaster e C. glutinosus, e folhas e caules de C. hemiargyreus, C. antisyphiliticus, C. grandivelum, C. cf pycnocephalus e C. cf montevidensis foram extraídos por hidrodestilação em Clevenger e analisados por CG/EM. Todas as amostras apresentaram componentes voláteis, exceto uma amostra (folhas e caule) de C. antisyphiliticus, a espécie com folhas e caules menos aromáticos, e caules de C. grandivelum, de uma amostra de C. cf pycnocephalus e uma de C. hemiargyreus. Monoterpenos e sesquiterpenos são os componentes mais abundantes e não foram detectados fenilpropanóides. Caules apresentam em geral menos componentes voláteis que folhas. Os sesquiterpenos β-cariofileno, germacreno D e espatulenol são os mais comuns, enquanto 8-isoproprenil-1,5-dimetil-ciclodeca-1,5-dieno (C. betulaster e C. hemiargyreus), elixeno (em todas as espécies exceto C. betulaster e C. glutinosus) e o sesquiterpeno ledol (abundante em C. cf pycnocephalus) nunca foram antes relatados para Cróton. Extratos hidroalcoólicos das amostras foram analisados por CLAE e quando possível CLAE/EM e CLAE/EM/EM para detecção de flavonóides. Apenas em C. betulaster e C. hemiargyreus houve predominância de flavonas, tais como isoorientina, orientina, vitexina e diglicosídeos de apigenina. Nas demais espécies são abundantes glicosídeos de quercetina, como rutina e quercitrina, assim como tilirosídeo (glicosídeo acilado de campferol), que só não foi detectado em folhas de C. betulaster, C. glutinosus e C. cf montevidensis. A análise de outras espécies das mesmas seções (Barhamia e Codonocalyx, respectivamente) pode confirmar a coerência da ausência do tilirosídeo nas folhas como característica. Flavonóides metoxilados, como a casticina (em amostras de C. cf pycnocephalus, C. betulaster e C. glutinosus), também foram encontrados. Os extratos etanólicos brutos de todas as espécies exceto C. glutinosus foram analisados por CG/EM. Triterpenos, esteróides, alcalóides e ésteres de ácidos graxos são os componentes mais abundantes. Diterpenos não foram detectados. Benzoato de benzila é o componente majoritário dos extratos etanólicos brutos de C. betulaster, no qual também foram detectados cinamato de benzila, lupeol e lupenona Esteróides como sitosterol, campesterol e estigmasterol ocorrem em diversas espécies. A casticina é o componente majoritário dos extratos obtidos de folhas de C. cf pycnocephalus. Muitos alcalóides foram detectados em C. grandivelum, principalmente N-metil-crotonosina. Somente glaucina foi detectada em C. hemiargyreus. Os diferentes componentes dos extratos etanólicos das espécies estudadas possuem diversas atividades biológicas. As variações encontradas entre amostras de diferentes populações das mesmas espécies podem ser influenciadas por fatores ambientais ou genéticos. Com base nos dados obtidos, o isolamento e caracterização de flavonóides por EM e RNM, ensaios farmacológicos de acordo com as propriedades de cada grupo de substâncias e a caracterização de demais espécies das mesmas seções podem ser um interessante enfoque para estudos futuros e contribuir ainda mais para a compreensão da química e da taxonomia de Croton. / Croton is one of the largest genera of Euphorbiaceae, widely distributed in tropical regions of the world. There are around 300 species in Brazil, many used in traditional medicine to treat gastric ulcers, inflammations, malaria, diabetes, syphilis and cancer. The variety of medicinal applications reflects the diversity of biologically active compounds and the complexity of taxonomic relationships within the genus. The present work focuses on the chemical screening of seven Brazilian species of Croton, contributing to increase the knowledge about pharmacological potentials and hopefully provide chemotaxonomic tools to help understanding ralationships at the infrageneric level. Essential oils, flavonoids and compounds of crude ethanolic extracts were analysed. Esssential oils of leaves of C. betulaster and C. glutinosus, leaves and stems of C. hemiargyreus C. antisyphiliticus, C. grandivelum, C. cf pycnocephalus and C. cf montevidensis were extracted by hydrodistillation in Clevenger and analysed by GC/MS. Volatile compounds were found in all samples, except one sample (leaves and stems) of C. antisyphiliticus (the less aromatic among the species), and in stems of C. grandivelum, C. cf pycnocephalus and C. hemiargyreus. Monoterpenes e sesquiterpenes are major compounds and no phenylpropanoids were found. In general, leaves are richer in volatile compounds than stems. Sesquiterpenes such as β- caryophyllene, germacrene D and spathulenol are common, while 8-isoproprenyl-1,5- dimethyl-cyclodeca-1,5-diene (C. betulaster and C. hemiargyreus), elixene (in all species except C. betulaster and C. glutinosus) and the oxigenated sesquiterpene ledol (in C. cf pycnocephalus) are reported for Cróton for the first time. Hydroalcoholic extracts were analysed by HPLC and whenever possible also by HPLC/MS and HPLC/MS/MS to detect flavonoids. Flavones, such as isoorientin, orientin, vitexin and apigenin diglycosides were predominant only C. betulaster and C. hemiargyreus. Other species showed a profile richer in flavonols, such as quercetin glycosides (rutin, quercitrin and others) and tiliroside (kaempferol acylglycoside), which was not detected only in leaves of C. betulaster, C. glutinosus and C. cf montevidensis. Analyses of other species from the same sections (Barhamia e Codonocalyx, respectively) might confirm the coherence of the absence of tiliroside in leaves as a taxonomic character. Methoxylated flavonoids, such as casticin (found in samples of C. cf pycnocephalus, C. betulaster and C. glutinosus), were found. Crude ethanolic extracts of all species except C. glutinosus were analysed by GC/MS. Triterpenes, steroids, alkaloids and fatty acid esters were the predominant compounds of those extracts. Diterpenes were not detected. Benzyl benzoate predominates in crude ethanolic extracts from leaves of C. betulaster, along with benzyl cinnamate, lupeol e lupenone. Steroids such as sitosterol, campesterol and stigmasterol were found in several species. The flavonoid casticin is the major compound in extracts obtainded from leaves of C. cf pycnocephalus. Several alkaloids were detected in C. grandivelum extracts, mainly N-methyl-crotonosine. Glaucine was the only alkaloid identified in C. hemiargyreus. Several biological activities are known for the different compounds found in the crude ethanolic extracts. The differences between populations of the same species may be accounted for environmental or genetic influences. The data obtained suggest isolation and total structural determination of flavonoids by MS and NMR, pharmacological assays according to the properties of each group of compounds and chemical screening of remaining species of the same sections as interesting focuses for future studies, with the expectation to enhance the contribution to the chemistry and pharmacology of Croton and provide chemical synapomorphies for infrageneric groups within the genus.

No presente trabalho estudou-se por métodos analíticos (CCD e CLAE/UV) a atividade antioxidante dos flavonóides presentes na cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.), visando sua possível utilização como alimento funcional. As técnicas CLAE/UV e microfracionamento por CLAE permitiram o fracionamento e o isolamento dos flavonóides, os quais foram analisados por CCD utilizando reagentes específicos para detecção de substâncias antioxidantes. Os resultados obtidos permitiram identificar os flavonóides da cana-de-açúcar (folhas e garapa) com atividade antioxidante, através da comparação dos espectros de UV/DAD e tempo de retenção: orientina-O-ramnosídeo nas folhas e schaftosídeo, isoschaftosídeo, diosmina-8-C-glicosídeo, orientina e 4\',5\'-di-O-metil-luteolina-8-C-glicosídeo na garapa. Estes resultados justificam estudos nutricionais e/ou farmacológicos mais aprofundados a fim de classificar (ou não) a cana-de-açúcar como alimento funcional. / In the present study, analytical methods (TLC and HPLC/UV) were used to evaluate the antioxidant activity of the flavonoids of sugar cane (Saccharum officinarum L.) regarding to its possible use as a functional food. HPLC/UV and HPLC microfractionation techniques allowed fractionation and isolation of the flavonoids, which were evaluated by TLC using specific reagents to detect the antioxidant compounds. The results allowed to identify the flavonoids of sugar cane with antioxidant activity, based on comparison of UV-DAD spectra and retention time: orientin-O-rhamnoside in the leaves and schaftoside, isoschaftoside, diosmetin-8-C-glycoside, orientin and 4\'-5\'-dimethyl-luteolin-8-C-glycoside in the juice. Theses results justify more detailed nutricional and pharmacologic studies to classify (or not) sugar cane as a functional food.

\"Maracujá\" é o nome popular de várias espécies, dentre as quais Passiflora edulis e Passiflora alata (Passifloraceae). Esta última é uma planta medicinal amplamente utilizada no Brasil devido às suas propriedades ansiolíticas e sedativas, sendo também a espécie oficial da Farmacopéia Brasileira. Porém, freqüentemente ocorre a sua substituição indevida por Passiflora edulis, espécie usada para o preparo de sucos. Há também a confusão com a Passiflora incarnata, espécie usada na Europa, mas que não se adapta bem ao clima brasileiro. Neste trabalho foi desenvolvido um método espectrofotométrico por UV-visível para a quantificação dos flavonóides totais contidos nas folhas de Passiflora alata e de Passiflora edulis, a partir da adaptação das metodologias descritas nas Farmacopéias Francesa, Helvética e Européia para a espécie Passiflora incarnata. O procedimento proposto envolveu a complexação dos flavonóides com cloreto de alumínio e foi utilizada a rutina como padrão. Confrontou-se os dados obtidos pelo método espectrofotométrico desenvolvido neste trabalho com os obtidos por HPLC. Os melhores resultados foram obtidos com a metodologia adaptada da Farmacopéia Francesa. / \"Maracujá\" is the popular name of some species, among which are Passiflora edulis and Passiflora alata (Passifloraceae). The latter is a widely used medicinal plant in Brazil due to its ansiolytic and sedative properties, and also the official species of the Brazilian Pharmacopoeia. However, it is quite often improperly substituted for Passiflora edulis, which is used for the preparing juices. Another inadequate substitution occurs with Passiflora incarnata, wich is used in Europe, but does not adjust to the Brazilian climate. From adapting the methodologies described in the French, Helvetian and European Pharmacopoeia for the Passiflora incarnate species, a spectrophotometric method by UV-Visible has been developed to enable quantification of all flavonoids comprised in the leaves of both Passiflora edulis and Passiflora alata. The suggested procedure involved the complexation of the flavonoids with aluminum chloride, being rutin used as standard. Data obtained by the spectrophotometric method developed in the present work were compared with those obtained by HPLC. The French Pharmacopoeia methodology provided the most significant data in the study.

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T10:55:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lepikson-Neto_Jorge_D.pdf: 134833000 bytes, checksum: 09f83f4cd8ca673cb66cad9748effe06 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: The abstract is available with the full electronic document. / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Eva Gonçalves Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-24T06:11:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ruiz_AnaLuciaTascaGois_M.pdf: 3596278 bytes, checksum: 7ed9784fcb93623487d38260733b3022 (MD5) Previous issue date: 1998 / Mestrado

Os receptores nucleares são uma família de fatores de transcrição que regulam a transcrição gênica em resposta a ligantes e estão envolvidos em vários processos fisiológicos e metabólicos do organismo. O receptor ativado por proliferadores peroxissomais γ (PPARγ) está envolvido em vários processos fisiológicos incluindo adipogênese, homeostase da glicose, metabolismo de lipídios e inflamação e foi identificado como alvo molecular para o tratamento do diabetes tipo II. A importância desse receptor ficou ainda mais evidente pela descoberta de mutações que prejudicam sua função, causando a Síndrome de Resistência ao Ligante, na qual os pacientes apresentam um fenótipo de lipodistrofia parcial, profundas desordens metabólicas como severa resistência à insulina e início precoce de diabetes mellitus tipo II. O PPARγ possui um amplo bolsão de ligação que permite que uma variedade de ligantes possa se ligar ao receptor. Essa variedade de ligantes pode induzir interações diferenciadas com correguladores, o que induzirá uma resposta biológica específica. Os agonistas totais, como as tiazolinedionas (TZDs) são eficientes sensibilizadores da insulina utilizados no tratamento do diabetes tipo II, porém seu uso tem sido limitado devido a efeitos adversos e novas abordagens terapêuticas são necessárias. Neste trabalho, o PPARγ foi caracterizado na presença de ligantes naturais (luteolina, ácidos graxos) e sintéticos (aintiinflamatórios não esteroidais AINEs) e também os mutantes envolvidos na Síndrome de Resistência aos Ligantes do PPARγ através de ensaios funcionais e cristalografia de proteínas. A luteolina apresentou um comportamento de agonista parcial, com atividades antiinflamatórias e com modo de ligação ao receptor diferente da rosiglitazona, resultando em uma diferenciação na expressão gênica em adipócitos. Os AINEs por sua vez, apresentaram diferentes perfis de ativação e modos de ligação ao receptor, além da capacidade de induzirem a diferenciação de adipócitos. Por fim, foi resolvida a estrutura cristalográfica do mutante V290M envolvido na Síndrome de Resistência ao Ligante, que mostrou que a mutação causa significativas alterações na estrutura do receptor, prejudicando sua função, o que representa um importante passo no entendimento das bases moleculares dessa síndrome. / Nuclear receptors are a family of ligand activated trancription factors that regulate gene transcription in response to ligands and are involved in several aspects of human physiology and metabolism. Peroxisome proliferator activated receptor γ (PPARγ) is involved in a range of distinct physiological processes including the regulation of adipogenesis, glucose homeostasis, lipid metabolism and inflammatory responses and it has been identified as a molecular target in the treatment of several diseases as diabetes type II. The importance of this receptor became even more evident by the discovery of mutations that impair its function causing Ligand Resistance Syndrome, in which patients have a phenotype of partial lipodystrophy, profound metabolic disorders such as severe insulin resistance and early onset of diabetes mellitus type II. PPARγ has a large binding pocket that permits that a wide range of ligands can bind to this receptor. This variety of ligands can induce differential interactions with coregulatory factors that will be translated into a specific biological response. PPAR full agonists, like thiazolidinediones (TZDs), are effective insulin sensitizers and antiinflammatories but their use is limited by adverse side effects and new therapeutic approaches are needed. In this study, the PPARγ, as well as their respective mutants involved in Ligand Resistance Syndrome, were characterized in the presence of natural (luteolin) and synthetic ligands (nonsteroidal anti-inflamatory drugs - NSAIDs) by functional assays and protein crystallography. Luteolin showed a partial agonist behaviour, with anti-inflammatory activity and a different binding mode in comparion with rosiglitazone, resulting in a different pattern of gene expression in adipocytes. NSAIDs showed different profiles of activation and binding modes, and they can promote adipocyte differentiation. Finally, we solved the crystal structure of the mutant V290M involved in the Ligand Resistance Syndrome, which showed that the mutation causes significant changes in the structure of the receptor, impairing its function. This structure represents an important step in understanding the molecular basis of this syndrome.

INTRODUÇÃO: A doença de Chagas e a leishmaniose são doenças tropicais supernegligenciadas, que afetam regiões de extrema pobreza. Os fármacos disponíveis para estas duas doenças são escassos, de eficácia limitada, de alta toxicidade e suscitam casos de resistência. OBJETIVO: Considerando-se a necessidade de desenvolvimento de novos agentes antichagásicos e leishmanicidas, a importância da latenciação no aprimoramento de fármacos/compostos bioativos e a versatilidade de transportadores dendriméricos, o objetivo deste trabalho foi a síntese de pró-fármacos dendriméricos de primeira geração de 3-hidroxiflavona, composto que apresenta potencial atividade tripanomicida e leishmanicida. Desta forma, pretendeu-se obter liberação controlada, melhora da permeabilidade, toxicidade reduzida e aumento da eficácia deste agente bioativo. MATERIAL E MÉTODOS: Para a obtenção desses dendrímeros empregaram-se as abordagens divergente e convergente, compostas por várias etapas de síntese com reações de proteção, desproteção e acoplamentos. RESULTADOS E DISCUSSÃO: A abordagem convergente apresentou problemas sintéticos, devido à instabilidade dos derivados contendo 3-hidroxiflavona nas diferentes condições reacionais e de purificação testadas. No entanto, há indícios da síntese dos pró-fármacos dendriméricos de 3-hidroxiflavona, mas esses compostos apresentam-se impuros. Devido a essa instabilidade e a dificuldade de purificação na abordagem convergente, optou-se pela síntese divergente, no qual o composto bioativo é acoplado na etapa final. Os estudos sintéticos mostraram a obtenção dos intermediários puros formados pelos focos centrais propano- e hexano-diamina acoplados ao ácido málico protegido. CONCLUSÃO: Há indicativos da obtenção de pró-fármacos dendriméricos de 3-hidroxiflavona, ainda que impuros. As maiores dificuldades encontradas foram a purificação e a estabilidade dos compostos obtidos. / INTRODUCTION: Chagas\' disease and leishmaniasis are super neglected tropical diseases that affect primarily areas of extreme poverty. The drugs available for these diseases are scarce and of limited effectiveness, toxic and rouse resistance. OBJECTIVE: Considering that the development of new antichagasic and leishmanicide agents are urgently needed, the importance of prodrug design to the improvement of drugs and bioactive compounds and the versatility of dendrimers as drug carriers, the objective of this work was the synthesis of dendrimer prodrug of 3-hydroxyflavone, which shows potential antichagasic and leishmanicide activities. Thus, we intended to obtain controlled release, improvement of the permeability, reduction of the toxicity and increase of efficacy of this bioactive agent. MATERIAL AND METHODS: Convergent and divergent approaches have been used to synthesize those compounds. Synthetic steps consist of protection, deprotection and coupling reactions. RESULTS AND DISCUSSION: The convergent approach presented problems due to the instability of the 3-hydroxyflavone derivatives, in different reaction and purification conditions. However, there is evidence of the synthesis of dendrimer prodrugs, though still impure. Due to instability and purification difficulty of intermediate, we performed the divergent synthesis. We obtained the pure intermediates composed by cores propanediamine and hexanediamine coupled to the protected malic acid as spacer group. CONCLUSION: Synthetic studies suggested the synthesis of dendrimer prodrugs, although impure. The greatest difficulties were the purification and the instability of compounds.

O chá é uma das bebidas mais consumidas em todo o mundo. Algumas funções biológicas dos chás têm sido relatadas, tais como antiinflamatória, antioxidante, antialérgica, e anti-obesidade. Estas atividades biológicas estão associadas, em parte, com a atividade antioxidante dos compostos químicos presentes nos chás, especialmente flavonoides e ácidos fenólicos. No entanto, os compostos fenólicos são primariamente responsáveis pelas propriedades benéficas do chá. Assim, a avaliação total e de quantificação individual de compostos fenólicos é essencial para correlacionar sua a atividade biológica. As amostras avaliadas foram chá verde, camomila, carqueja, boldo, branco, cidreira, preto e mate. Neste estudo os compostos fenólicos totais e flavonoides foram quantificados por espectrofotometria. A capacidade antioxidante dos extratos fenólicos foi avaliada pelos métodos DPPH e ABTS+. Compostos fenólicos foram identificados por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A atividade antimicrobiana foi determinada pela avaliação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). A análise de componentes principais (ACP) e a análise hierárquica de agrupamentos (AHA) mostraram que não foi observada uma distinção clara entre os métodos de extração. Neste estudo, a extração à frio mostrou-se mais eficiente na extração de compostos bioativos. / Tea is one of the most consumed beverages in the world. Some biological functions of tea have been reported, such as anti-inflammatory, antioxidant, anti-allergic, and anti-obesity. These biological activities are associated, in part, to the antioxidant activity of chemical compounds present in tea, especially flavonoids and phenolic acids, however, the phenolic compounds are primarily responsible for the beneficial properties of tea. Thus, the total evaluation and quantification of individual phenolic compounds is essential to correlate its biological activity. The samples were evaluated green tea, chamomile, broom, Boldo, white, lemon, black and matte. In this study, flavonoids and phenolic compounds were quantified by spectrophotometry. The antioxidant capacity of phenolic extracts was evaluated by DPPH and ABTS•+ methods. Phenolic compounds were identified by high performance liquid chromatography (HPLC). Antimicrobial activity was determined by assessing the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC). The principal component analysis (PCA) and hierarchical cluster analysis (HCA) showed that it was not observed a clear distinction between the extraction methods. In this study, the cold extraction was more efficient in the extraction of bioactive compounds.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:42:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000393359-Texto+Completo-0.pdf: 3706184 bytes, checksum: 69c5551b27d8ba08aadf9a5c582b8491 (MD5) Previous issue date: 2007 / The natural resistance of plants to disease is based not only on preformed mechanisms, but also on induced mechanisms. The defense mechanisms present in resistant plants may also be found in susceptible ones. This study attempts to analyze phenolic compounds levels, including the flavonoid group and polyphenol oxidase (PPO) and peroxidase (POX) activities in Solanum tuberosum cv. Agata, in response to inoculation of the incompatible plant pathogenic bacteria Xanthomonas axonopodis and Ralstonia solanacearum, and the compatible bacteria Erwinia carotovora. Bacteria compatibility was evaluated using tubers infiltration. Tubers infiltrated with E. carotovora suspensions exhibited disease symptoms. On the other hand, bacteria R. solanacearum and X. axonopodis did not induce disease. Leaf inoculation was performed depending on the number and location of the leaves on the stem. Multiple-leaf inoculation was performed on basal, intermediate and apical leaves and single inoculations on intermediate leaves. Leaves inoculated with bacterial suspensions of X. axonopodis and R. solanacearum showed hypersensitive response (HR) within 24 hpi, while leaves inoculated with E. carotovora showed disease symptoms. Therefore, the R. solanacearum isolate used in the experiments did not exhibit virulence to this potato cultivar. Regardless of the bacterial treatments, multiple-inoculated basal leaves presented higher PPO and POX activities and lower levels of total phenolic compounds and flavonoids, when compared to apical leaves. Basal and intermediate leaves inoculated with R. solanacearum and X. axonopodis showed an increase in total phenolic compounds and flavonoid levels. These increases were similar or higher than the levels observed in non-inoculated apical leaves. In general, multiple-leaf inoculations showed the highest levels of phenolic compounds and flavonoids, while the single inoculations presented the highest increase in PPO activity. However, with POX activities there were no significant differences between single and multipleleaf inoculations. In the present study, the plant defense metabolism in this potato cultivar was stimulated by incompatible bacteria, indicating their potential use as inducers for further plant defense against any subsequent attack by compatible pathogens. / A resistência natural das plantas a doenças é baseada tanto em mecanismos pré-formados quanto em mecanismos induzidos. Esse estudo pretendeu analisar os níveis de compostos fenólicos, incluindo o grupo dos flavonóides e as atividades das enzimas polifenoloxidases (PPOs) e peroxidases (POX) em Solanum tuberosum cv. Ágata, em resposta às inoculações com as bactérias fitopatogênicas incompatíveis Xanthomonas axonopodis, Ralstonia solanacearum, e compatíveis Erwinia carotovora. A compatibilidade das bactérias foi avaliada através da inoculação de tubérculos. Tubérculos infiltrados com E. carotovora exibiram sinais de doença e com R. solanacearum e X. axonopodis não desenvolveram doença. As inoculações nas folhas foram realizadas dependendo do número e das localizações das folhas nos ramos. As inoculações múltiplas foram realizadas nas folhas basais, intermediárias e apicais e as inoculações simples ocorreram nas folhas intermediárias. As folhas inoculadas com as suspensões de X. axonopodis e R. solanacearum exibiram a resposta de hipersensibilidade (HR) dentro de 24 hpi, enquanto que as folhas inoculadas com E. carotovora evidenciaram sintomas de doença. Portanto, o isolado de R. solanacearum utilizado nos experimentos não mostrou virulência a esta cultivar de batata. Independentemente do tratamento bacteriano, as folhas basais apresentaram nas inoculações múltiplas, as mais altas atividades das PPOs e das POX e os níveis mais baixos de compostos fenólicos totais e de flavonóides, quando comparadas com as folhas apicais. As folhas basais e as intermediárias inoculadas com R. solanacearum e com X. axonopodis mostraram um aumento nos níveis de compostos fenólicos totais e de flavonóides. Esses aumentos foram similares ou maiores que os níveis observados nas folhas apicais não inoculadas. De um modo geral, as inoculações múltiplas exibiram os maiores níveis de compostos fenólicos totais e de flavonóides, enquanto que as inoculações simples apresentaram os maiores aumentos nas atividades das PPOs. Contudo, as atividades das POX não apresentaram diferenças significativas entre as inoculações múltiplas e simples. No presente estudo, o metabolismo de defesa nesta cultivar de batata foi estimulado pelas bactérias incompatíveis, indicando a sua posterior utilização como indutoras da defesa da planta contra o ataque subseqüente de patógenos compatíveis.