Submitted by JUHAN AUGUSTO SCARDELATO PEREIRA null (juhan_01@yahoo.com.br) on 2017-05-02T14:37:47Z No. of bitstreams: 1 TESE - Juhan.pdf: 6743117 bytes, checksum: 50e774d88c707774b6f0ab9bbb9969f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-03T20:25:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_jas_dr_arafcf.pdf: 6743117 bytes, checksum: 50e774d88c707774b6f0ab9bbb9969f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T20:25:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_jas_dr_arafcf.pdf: 6743117 bytes, checksum: 50e774d88c707774b6f0ab9bbb9969f8 (MD5) Previous issue date: 2017-03-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Cordia verbenacea DC. pertence à família Boraginaceae, a qual contém aproximadamente 100 gêneros com mais de 2.000 espécies. Ocorre ao longo de todo litoral brasileiro, sendo comum na Floresta Tropical Atlântica e possuindo vários nomes populares, sendo o mais comum erva-baleeira. É utilizada tradicionalmente para tratar vários processos inflamatórios. O laboratório Aché® desenvolveu um medicamento fitoterápico anti-inflamatório tópico à base do óleo essencial de C. verbenacea (Acheflan®) e a espécie está presente no Formulário Nacional de Fitoterápicos da Farmacopeia Brasileira. Considerando a relevância de estudos de variabilidade química para espécies medicinais e a ausência destes dados na literatura para C. verbenacea propomos realizar um estudo da dinâmica do metabolismo da espécie focado nas variações sazonal, circadiana e populacional. As folhas de C. verbenacea foram coletadas, secas, trituradas e submetidas à maceração com etanol (1:15 m/v). Posteriormente, foi realizada uma extração em fase sólida com o extrato etanólico seco obtendo-se 10 frações, as quais foram analisadas por CCD e CLAE-UV. A fração 4.1 foi escolhida para cromatografia em coluna originando 120 subfrações, das quais três estavam semipurificadas. Utilizando a técnica de CLAE preparativa foram purificadas quatro substâncias, sendo três obtidas com mais de 95 % de pureza (CLAE-UV). As substâncias foram analisadas por técnicas espectrométricas (UV, IV e RMN), sendo identificados os triterpenos cordialina A e cis-cordialina A e dois flavonoides, 4’,5-diidroxi-2’,3,5’,6,7-pentametoxiflavona ou 2’,5-diidroxi-4’,3,5’,6,7-pentametoxiflavona e a artemetina. Um método por CLAE-DAD foi desenvolvido e aplicado na análise dos extratos etanólicos dos estudos populacional, circadiano e sazonal, incluindo a obtenção de seus perfis cromatográficos e a quantificação das substâncias purificadas. Os estudos populacional, circadiano e sazonal evidenciaram diferenças quantitativas em relação as substâncias majoritárias após a análise cromatográfica, sendo a substância diidroxipentametoxiflavona encontrada em maior quantidade no espécimen 13II4 do estudo populacional, já no estudo circadiano o horário das 04:30 h apresentou maior rendimento e no estudo sazonal maior tendência de produção deste flavonoide no período de janeiro a março de 2015/2016, enquanto que para os triterpenos o espécimen 3IV1 apresentou maior rendimento no estudo populacional e os espécimens 2II5 e 3II5 maior rendimento no estudos circadiano e sazonal, sendo os períodos de março a maio de 2015 e janeiro a março de 2016 os de maior tendência de produção desses triterpenos. A análise quimiométrica evidenciou uma diferença quantitativa dos metabólitos não voláteis entre os espécimens. A análise estatística utilizando ANOVA evidenciou que o rendimento do extrato e o teor dos triterpenos e flavonoide são afetados pelos períodos do ano. Foram obtidos os óleos essenciais dos 27 espécimens do estudo populacional e dos sete espécimens dos estudos circadiano e sazonal. O teor de óleo essencial na droga vegetal e sua coloração (amarelo claro, amarelo, esverdeado e azul) variaram entre os espécimens analisados. A análise por CCD também evidenciou diferenças significativas entre eles. Os dados obtidos por CCD dos 27 espécimens do estudo populacional foram utilizados em análises por PCA e HCA, observando-se agrupamento dos espécimes de óleo de cor azul/esverdeados em relação aos demais óleos de cor amarela. Esses agrupamentos também foram verificados nas PCA e HCA obtidas com dados por CG-EM, evidenciando que a amostra do óleo essencial do espécimen 13I5 possui maior tendência de produção do trans-cariofileno e do α-humuleno. Os óleos de cor azul/esverdeados evidenciaram a presença de três substâncias específicas: elemeno, camazuleno e espatulenol. A análise estatística utilizando ANOVA evidenciou que o rendimento do óleo essencial e o teor de seus componentes são afetados pelos períodos do ano, mas não pelo ritmo circadiano. / Cordia verbenacea DC. belongs to the Boraginaceae family which contains about 100 genera with more than 2,000 species. C. verbenacea is popularly named erva-baleeira and occurs throughout the Brazilian coast including the Atlantic Rainforest. It is traditionally used to treat various inflammatory processes and was employed by Aché® laboratory for the development of Acheflan®, an anti-inflammatory topical medicine containing the essential oil of C. verbenacea. Considering the relevance of chemical variability studies for medicinal plants we propose to develop a study of the metabolism dynamics focused on seasonal, circadian and population variations. The leaves of C. verbenacea were collected, dried, crushed and macerated with ethanol (1:15 m/v). The solid phase extraction with ethanolic extract yielded 10 fractions which were analyzed by TLC and HPLC. Fraction 4.1 was selected for column chromatography yielding 120 subfractions. Four compounds were isolated using preparative HPLC-UV and three compounds presented high purity (≤95 %; HPLC-UV) and were analyzed by spectrophotometric techniques (UV, IR, NMR). Compounds were identified as the triterpenes cordialin A and cis-cordialin A and the flavonoides 4',5-dihydroxy-2',3,5',6,7-pentametoxiflavone or 2',5-dihydroxy-4',3,5',6,7-pentametoxiflavone and artemetin. An HPLC-DAD method was developed for the analysis of the ethanolic extract. The ethanolic extracts of seasonal, circadian and population studies were analyzed by HPLC-DAD. All these studies showed quantitative differences in relation to the majority compounds, being the substance dihydroxypentamethoxyflavone found in a larger quantity in specimen 13II4 of the population study, already in the circadian study the time of 04:30 h had a higher yield and in the seasonal study a greater trend of production of this flavonoid in the period from january to march of 2015/2016, while for the triterpenes the specimen 3IV1 presented higher yield in the population study and the specimens 2II5 and 3II5 greater yield in the circadian and seasonal studies, being the periods of march to may of 2015 and january to march of 2016 the ones of greater tendency of production of these triterpenes. The statistical analysis using ANOVA showed that the yield of the extract and the content of triterpenes and flavonoid were affected by the periods of the year. Essential oils were obtained from the 27 specimens from the population study and the seven specimens from the circadian and seasonal studies. The essential oil content in the plant drug and its color (light yellow, yellow, green and blue) differed among the specimens. The TLC analysis also showed significant differences among the oils. Data obtained by TLC analyzes of the 27 specimens of the population study were used in PCA and HCA analyzes that showed two groups of oils - blue / green oil specimens and yellow color oil specimens. These clusters were also verified in PCA and HCA obtained with GC-MS data, evidencing that the sample of the 13I5 of the specimen has a greater trend of production of trans-caryophyllene and α-humulene. The blue/green oils showed the presence of 3 specific compounds: elemene, camazulene and spatulenol. The statistical analysis using ANOVA showed that the yield of the essential oil and the content of its components were affected by the periods of the year, but not by circadian rythm. / FAPESP: 2013/24298-9

Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-09T02:47:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Rejected by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-07-13T19:22:36Z (GMT) / Submitted by MATHEUS HENRIQUE REIS DA SILVA null (matheush.reis@hotmail.com) on 2017-07-21T15:25:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_publicação.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-21T17:19:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 silva_mhr_me_rcla.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T17:19:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 silva_mhr_me_rcla.pdf: 3294602 bytes, checksum: 0458f3a3b432485c88a1b6dd0524aed5 (MD5) Previous issue date: 2017-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Passiflora incarnata encontra-se entre as plantas medicinais mais estudadas no âmbito farmacológico, cujas propriedades medicinais são atribuídas principalmente aos seus fitoconstituintes, tais como compostos fenólicos, alcalóides e flavonoides. Já foi constatado que os fungos endofíticos, aqueles vivem no interior de plantas, compartilhando com as mesmas uma interação simbiótica. Estes endófitos estão presentes em todas as plantas e muitas vezes partilham dos mesmos metabólitos que sua hospedeira. Devido ao seu enorme potencial de exploração, os fungos endofíticos são considerados um dos mais importantes recursos para a obtenção de novos agentes terapêuticos, pois um grande número de metabólitos estruturalmente novos e biologicamente ativos tem sido relatado para esses organismos. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar fungos endofíticos presentes em folhas de P. incarnata e avaliar seu potencial biotecnológico, quanto à presença de compostos fenólicos, flavonoides e atividade antioxidante. Das 120 folhas analisadas, um total de 315 fungos endofíticos foi obtido; foi possível identificar 16 táxons distintos, dentre eles Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp e representantes dos Mucoromycotina. A maioria dos isolados não apresentou esporulação. Os 60 endófitos utilizados nos ensaios produziram ao menos um composto fitoquímico, 60% (n=36) foram positivos para saponinas, 76% (n=46) para flavonoides, 93% (n=56) para compostos fenólicos, apenas 3% (n=2) para taninos, e nenhum fungo apresentou alcalóides no filtrado. O teor de flavonoides e fenóis totais do extrato de n-Butanol, determinado espectrofotometricamente revelou que a maioria dos fungos analisados foram bons produtores destes compostos, com destaque para os isolados Trichoderma sp./LMA 1684 e Aspergillus sp. 1/LMA 1720, com 213,69 mg.g-1 e 187,3 mg.g-1 , respectivamente, para flavonoides totais expressos em rutina, enquanto para fenóis totais os isolados LMA 1713 e LMA 1824, ambos fungos não esporulantes, apresentaram os teores 184,94 mg.g-1 e 187,05 mg.g-1 , respectivamente. Todos os endófitos apresentaram atividade antioxidante frente ao radical livre DPPH. O extrato butanólico do fungo Aspergillus versicolor/LMA 1705 (94%) foi maior que o padrão BHT (90,27%) e rutina (91,98%). A fração AcOEt e BuOH de cincos fungos selecionados apresentou metabólitos com atividade antioxidante, entre as amostras, a fração BuOH do fungo Trichoderma sp./LMA 1684 mostrou a atividade de eliminação do radical livre DPPH mais baixa (valor de IC50 de 304,18 mg/mL ), enquanto a fração AcOEt do fungo Chaetomium sp./LMA 1793 com um valor de IC50 de 0,21 mg/mL exibiu uma atividade antioxidante maior que os controles positivo BHT (0,42 mg/mL ), Rutina (0,25 mg/mL ), e Ácido Ascórbico (0,23 mg/mL). Foi realizada CG-EM da fração acetato de etila em cinco fungos previamente selecionados e foi constatada a presença do metabólito orcinol (3,19%) em Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-metoximetilfenol (4,79%), Sorbicillina (33,59%) e ergosterol (23,08%), presentes em Trichoderma sp./LMA 1684 e isopropenil-1,4-dimetil-1,2,3,3a,4,5,6,7-octahidroazuleno no endófito Fusarium sp. 4. O estudo mostrou um grande potencial de aplicação em biotecnologia dos endofíticos de P. incarnata. / Passiflora incarnata is among the most studied medicinal plants in the pharmacological field, whose medicinal properties are attributed mainly to its phytochemicals, such as phenolic compounds, alkaloids and flavonoids. It has been found that endophytic fungi, which are those living inside plants, share a symbiotic interaction with their hosts. These endophytes are present in all plants and often share the same metabolites as the plants they live. Due to their enormous potential for exploitation, endophytic fungi are considered one of the most important resources for obtaining new therapeutic agents, since a large number of structurally new and biologically active metabolites have been reported from these microorganisms. In this context, the objective of this work was to isolate endophytic fungi present in leaves of P. incarnata and to evaluate their biotechnological potential, regarding the presence of phytochemicals, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity. From a total of 120 leaves analyzed 315 endophytic fungi were obtained. It was possible to identify 16 distinct taxa, among them Aspergillus spp., Fusarium spp., Penicillium spp., Curvularia spp., Phoma spp., Neurospora spp., Trichoderma spp. and Mucoromycotina representatives. Many showed no sporulation at all. All 60 endophytes used in the trials produced at least one phytochemical compound, 60% (n = 36) were positive for saponin, 76% (n = 46) for flavonoids, 93% (n = 56) for phenolic compounds, only 3% (n = 2) for tannins, and no one presented alkali in the filtrate. The total flavonoid and phenol contents of the n-Butanol extract, spectrophotometrically determined, showed that most of the analyzed fungi were good producers of these compounds, especially the isolate Trichoderma sp./LMA 1684 and Aspergillus sp. 1/LMA 1720 213.69 mg.g-1 and 187.3 mg.g-1 respectively, for total flavonoids expressed in rutin, and for total phenols the isolate LMA sp. 6 and LMA sp. 26 with 184.94 mg.g-1 and 187.05 mg.g-1 respectively. All endophytes presented antioxidant activity against free radical DPPH. Butanolic extract of the fungus Aspergillus versicolor/LMA 1720 (94%) was higher than the BHT (90.27%) and routine (91.98%) standard. The AcOEt and BuOH fraction of five fungi presented metabolites with antioxidant activity, among the samples, the BuOH fraction of the Trichoderma sp./LMA 1684. showed the lowest free radical DPPH elimination activity (IC50 value of 304.18 mg/mL), while the AcOEt fraction of Chaetomium sp./LMA 1793 with an IC50 value of 0.21 mg/mL showed better antioxidant activity than the BHT (0.42 mg/mL), rutin (0.25 mg/mL), and ascorbic acid (0.23 mg/mL). CG-MS of the ethyl acetate fraction was performed in five previously selected fungi and the presence of the orcinol (3.19%) in Aspergillus versicolor/LMA 1705, 4-methoxymethylphenol (4.79%), Sorbicillin (33.59%) and ergosterol (23.08%), present in Trichoderma sp./LMA 1684 and isopropenyl-1,4-dimethyl-1,2,3,3a, 4,5,6,7-octahydroazulene in the endophyte Fusarium sp. 4/LMA 1719. This study highlighted a great biotechnological application of the P. incarnata endophytes.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FranciscoNTVB.pdf: 4697852 bytes, checksum: ce51988c79b68ec25268a90a156fbd93 (MD5) Previous issue date: 2008-04-28 / The decoction of Brazilian pepper tree barks (Schinus terebinthifolius, Raddi), is used in medicine as wound healing and antiinflamatory. Once extracts from this plant are used for acceleration of scar s process, it is important to study their mutagenic and genotoxic potential. In previous works in our laboratory, it was observed mutagenicity caused by the decoction when in high concentrations. Among the chemical compounds of this plant that could be able to induce mutation, the flavonoids were the only group that was referred to have either an oxidant or antioxidant potential. The flavonoids were isolated, purified and quantified by adsorptive column chromatography under silica gel, bacterial and in vitro genotoxic tests were realized to determine if the flavonoids were the responsible agents for this mutagenicity found. The tests realized with plasmidial DNA were indicative that the flavonoids are probably genotoxic, due to the presence of correlation between increase of the flavonoid concentration and in plasmidial DNA double strand breakage visualized in agarose gel, as well as they were capable to generated abasic sites shown by the in vitro treatment with exonuclease III. The same tests with plasmidial DNA in the presence of copper [10 ?M] and of a Tris-HCl pH 7.5 [10 ?M] buffer were realized with the isolated flavonoids to determine if there would be or not participation of reactive oxygen species (ROS). The transformation of plasmidial DNA in different bacterial strains proficient and deficient in DNA repair enzymes in the presence or not of a Tris-HCl buffer, suggests that the enzymes that repair oxidative lesions are necessary to repair the lesions generated by the flavonoids and that ROS are generated and are necessary to promote the lesions. Bacterial tests with Escherichia coli strains of the CC collection (deficient or not for DNA repair enzymes), showed that the flavonoids are able to increase the frequency of mutations, mainly in strains mutated in repair enzymes (MutM, MutY-glicosylases and double mutant), suggesting that these agents are responsible for the enhancement in the mutation rate. In order to determine the mutation spectrum caused by the flavonoids of the Brazilian pepper tree stem bark, plasmidial DNA previously treated with the flavonoids were transformed in bacterial strains deficient and proficient in the DNA repair enzymes, followed by a blue-white selection with X-gal, DNA amplification by PCR and sequencing the positive mutant clones. Analysis of the mutants obtained from strains CC104, CC104mutM, CC104mutY, CC104mutMmutY, BW9101, BW9109 indicated a predominance of some mutations like G:C to C:G that can be correlated with the origin of 8-oxoG, due to oxidative lesions caused by the flavonoids. So it can concluded that the flavonoid isolated or in fractions enriched on them are genotoxic and mutagenic, and their mutations are predominantly oxidative, mediated by ROS, and the lesions are recognized by the BER system. In this way it is proposed that the flavonoids can act in two different ways to generate the DNA lesion: 1. in a Fenton-like reaction, when the flavonoid are in the presence of metal ions and that together with the water generate ROS that promotes the DNA lesions; 2. in another way the lesions can be generated by the formation of ROS due to the internal chemical structure of the flavonoid molecule due to the quantity and location of hydroxyl groups, and so producing the DNA lesions, those lesions can be directly (suggested by the in vitro experiments) or indirectly done (supported by the experiments using the CC bacterial strains) / O decocto feito de cascas da Aroeira (Schinus terebinthifolius, Raddi) ? usado na medicina popular como cicatrizante e anti-inflamat?rio, mas, apesar de seu efeito medicinal, tamb?m foi demonstrado um efeito mutag?nico. O objetivo deste trabalho foi determinar se os flavon?ides da aroeira s?o os respons?veis pela mutagenicidade bem como propor um mecanismo de a??o. Para tanto, diferentes fra??es enriquecidas em flavon?ides foram preparadas e os flavon?ides foram isolados, purificados e quantificados via cromatografia de adsor??o em gel de s?lica. Testes de genotoxicidade, in vitro e em sistemas bacterianos foram realizados a fim de determinar o mecanismo de a??o. Testes realizados com DNA plasmidial In vitro foram indicativos de que as fra??es enriquecidas de flavon?ides s?o capazes de gerar dupla quebra na fita do DNA, bem como s?o capazes de gerar s?tios ab?sicos, evidenciados na presen?a da exonuclease III. O mesmo teste com DNA plasmidial, mas na presen?a de cobre [10 ?M] e de tamp?o Tris-HCl pH 7.5 [10 ?M], foi realizado, para determinar se haveria ou n?o participa??o de esp?cies reativas de oxig?nio na indu??o de danos. A transforma??o do DNA plasmidial em diferentes cepas bacterianas, proficientes e deficientes em diferentes vias de reparo de DNA, na aus?ncia e presen?a de tamp?o Tris-HCl pH 7.5 [10 ?M], sugerem que enzimas de reparo de les?es oxidativas s?o necess?rias para reparar as les?es geradas pelos flavon?ides e que esp?cies reativas de oxig?nio s?o geradas e necess?rias para promover as les?es. Teste de mutagenicidade direta com diferentes cepas de Escherichia coli derivadas da linhagem CC104 sugeriram que os flavon?ides aumentam a freq??ncia de muta??o em cepas deficientes nas enzimas MutM e MutY glicosilases, principalmente na duplo mutante, sugerindo que as les?es predominantemente oxidativas, s?o substratos destas enzimas no DNA. A fim de determinar o espectro de muta??o causado pelos flavon?ides da aroeira, DNA plasmidial foi transformado previamente tratado com as fra??es enriquecidas em flavon?ides em cepas deficientes em enzimas de reparo de DNA, seguido de sele??o por colora??o com x-gal (sele??o azul-branco), amplifica??o de DNA por PCR e sequenciamento dos clones mutantes. An?lise dos mutantes obtidos nas cepas CC104, CC104mutM, CC104mutY e CC104mutMmutY indicaram a predomin?ncia de muta??es do tipo G:C para C:G, que pode estar correlacionada a origem de 8-oxoG, devido a les?es oxidativas causadas pelos flavon?ides. Assim, pode-se concluir que os flavon?ides isolados ou em fra??es enriquecidas nos mesmos s?o respons?veis pelo potencial mutag?nico dos extratos da aroeira, que as les?es geradas s?o oxidativas, predominando a forma??o de 8-oxoG, devido ? forma??o de EROs, e que s?o reconhecidas por enzimas do sistema de reparo por excis?o de base. Desta forma, prop?e-se que os flavon?ides possam gerar esp?cies reativas de oxig?nio de duas maneiras diferentes: i) em uma rea??o Fenton-like, quando os flavon?ides est?o na presen?a de metais e ?gua ou ii) devido ? estrutura interna da mol?cula de flavon?ide pela disposi??o e quantidade de grupamento hidroxilas na pr?pria mol?cula. As les?es podem ser geradas diretamente (sugerido pelos experimentos de tratamento in vitro) ou indiretamente (pelos experimentos obtidos com as linhagens CC)

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Wilson Roberto da Cunha / Banca: Niege Araçari Jacometti Cardoso Furtado / Banca: Ana Luisa Lacava Lordello / Resumo: A família Fabaceae é subdividida em 3 subfamílias: Faboideae, Caesalpinoideae e Mimosoideae, que englobam mais de 700 gêneros e 18000 espécies, bem distribuídas nas regiões tropicais e subtropicais. Inclui espécies de alta relevância econômica, como a soja, feijão, cerejeira, angelim e sucupira, além do pau-brasil, de importância histórica para o Brasil. Neste trabalho, os extratos etanólicos das folhas de Sclerolobium aureum, S. denudatum e S. paniculatum mostraram forte potencial antioxidante, sendo selecionados para investigação fitoquímica detalhada. O fracionamento cromatográfico destes extratos evidenciou sua composição química, destacando-se a presença de esqualeno, tocoferóis e lupenona, identificados por CG-EM, predominantes nas frações de baixa polaridade. O extrato hidroalcoólico de S. aureum foi submetido a etapas de purificação, incluindo o uso de CLAE-UV-DAD, evidenciando a presença majoritária de ácido gálico, flavonoides monoglicosilados e catequina, identificados por RMN, EM e UV. Os extratos hidroalcoólicos de S. denudatum e S. paniculatum foram submetidos a partição líquido-líquido e as frações resultantes foram analisadas por CLAE-UV-DAD e CLAE-EM-EM para identificação dos seus constituintes por desreplicação, ou seja, evitando-se procedimentos de purificação de substâncias conhecidas. Esta estratégia permitiu conhecer os metabólitos secundários das três espécies, que apresentaram perfis químicos semelhantes com a predominância de flavonoides monoglicosilados. As frações semipurificadas e substâncias isoladas mostraram elevado potencial de sequestro de radicais livres frente ao DPPH, destacando-se a presença de antioxidantes lipofílicos e hidrofílicos, atrativa para aplicações em cosméticos. Adicionalmente, foi observado potencial imunomodulador... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fabaceae family comprises 3 subfamilies: Faboideae, Caesalpinoideae and Mimosoideae, with more than 700 genera and 18000 species, widespread in tropical and subtropical regions. It includes economically important species as soybean, beans, angelim, sucupira, in addition to pau-brasil (Caesalpinea echinata), which has historical importance in Brazil for its wood pigments. In this work, ethanol extracts of Sclerolobium aureum, S. denudatum and S. paniculatum leaves were investigated and showed strong antioxidant potential, and were selected for further investigation. Their chromatographic fractionation evidenced the presence of squalene, tocopherols and lupenone as major compounds in low polarity fractions, by GC-MS analysis. The hydroalcoholic extract of S. aureum was submitted to purification procedures, including the use of HPLC-UV-DAD, which evidenced gallic acid, flavonoid monoglucosides and catechin as major compounds, identified mainly by NMR, MS and UV techniques. HPLC-UV-DAD and LC-MS-MS analysis were further carried out on the hydroalcoholic extract of S. denudatum and S. paniculatum, leading to the identification of their major constituents by dereplication, avoiding the purification of known compounds. Such strategy evidenced a similar chemical profile for the three Sclerolobium species, with flavonoid monoglucosides as major compounds. Strong free radical scavenging potential was observed for the fractions and isolated compounds towards DPPH, evidencing the presence of lipophilic and hydrophilic antioxidants, which might be important for cosmetics development. In addition, the immunomodulatory potential of the hexane and ethyl acetate fractions from S. denudatum were evidenced through the dose-dependent inhibition of nitrite release by pre-treated macrophages, which might... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: As plantas têm sido uma valiosa fonte de produtos naturais para a manutenção da saúde e da beleza humana. Diante do conhecimento da potencial atividade antioxidante dos flavonóides presentes nos frutos de Dimorphandra mollis Benth. (Leguminosae), popularmente conhecida como faveiro, pretendeu-se desenvolver um fitocosmético antienvelhecimento. Os frutos de D. mollis foram coletados na Faculdade de Ciências Farmacêuticas da UNESP- Araraquara- SP e sua identificação foi realizada pelo Herbário do Instituto de Biociências da UNESP- Rio Claro- SP, onde está depositada a exsicata. Após coleta, os frutos foram secos e pulverizados em moinho de facas, sendo este material utilizado para realização dos ensaios de controle de qualidade físico-químicos. Os resultados indicaram que o material vegetal encontra-se dentro dos padrões de qualidade estabelecidos para materiais vegetais. Foi, também, otimizada a condição de extração dos flavonóides presentes nos frutos de D. mollis, preparando-se extratos por turboextração e utilizando-se etanol em diferentes graduações como líquido extrator. Estes extratos foram submetidos ao doseamento por espectrofotometria e avaliados quanto a sua composição química utilizando-se a técnica de Cromatografia em Camada Delgada Comparativa (CCDC). O extrato preparado com etanol absoluto apresentou o maior teor de flavonóides e foi analisado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), confirmando a presença de rutina e quercetina. A partir deste extrato, foram realizadas avaliações da propriedade antioxidante, que mostrou atividade ligeiramente menor que o padrão cisteína, e da citotoxicidade. A emulsão contendo 0,15% do extrato etanólico absoluto, analisada quanto à contaminação microbiológica e quanto à estabilidade, não apresentou sinais de toxicidade dérmica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The plants have been a valuable source of natural products for the maintenance of human health and beauty. Throw the antioxidant potential of the flavonoids present in Dimorphandra mollis Benth. (Leguminosae), it was developed an antiaging phytocosmetic. The fruits of D. mollis, popularly known as 'faveiro', were collected in the Faculdade de Ciências Farmacêuticas da UNESP- Araraquara- SP and its identification was done by Herbário do Instituto de Biociências da UNESP- Rio Claro- SP, where voucher specimen was deposited. After the collect, the fruits were dried and powdered in a knives mill and this material was used for the physico-chemical quality control techniques. The results indicate that the vegetal material was according to established standards of quality established for plant drugs in general. It was also optimized the conditions of extraction of flavonoids from the fruits of D. mollis, preparing the extracts by turbolysis, using ethanol in different degrees as extractor liquid. The flavonoid content was determinated by spectrophotometer method and this chemical composition was evaluated by Comparative Thin Layer Chromatography. The extract prepared with absolute ethanol presented a high level of total flavonoids and it was analyzed by High Performance Liquid Chromatography, confirming the presence of rutin and quercetin. From this extract, it was carried out the evaluation of antioxidant and citotoxicity activities. The extract was incorporated in a cosmetic formulation (oil/water cream) that was analyzed as the microbiological contamination, stability and dermal toxicity. / Orientador: Raquel Regina Duarte Moreira / Coorientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Mara Lane Carvalho Cardoso / Banca: Marcos Antonio Corrêa / Mestre

Orientador: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Wagner Vilegas / Banca: Ângela Regina Araujo / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Resumo: As plantas medicinais utilizadas no tratamento de diversas doenças são fontes de uma infinidade de novas moléculas de interesse para a humanidade. Este trabalho investigou a composição química das partes aéreas do chá e do extrato metanólico de Indigofera hirsuta (Fabaceae), popularmente conhecida como "anileira" e encontrada no Cerrado brasileiro. O chá foi fracionado por cromatografia de permeação em gel e cromatografia líquida de média pressão, tendo-se isolado: kaempferol, ácido protocatecuico, kaempferol-3-O-β-D-glucopiranosideo, triptofano e uracila. O extrato metanólico foi fracionado por cromatografia líquida de alta pressão, que possibilitou o isolamento de: ácido gálico, galato de metila, rutina e kaempferol-3-O-β-D-glucopiranosideo. As substâncias foram identificadas por técnicas espectroscópicas (UV, IV e RMN) e as estruturas confirmadas pelo uso da técnica acoplada de HPLC-DAD-ESI-MS. O chá, extrato metanólico e as substâncias isoladas foram avaliados quanto à atividade antioxidante, utilizando-se DPPH. O extrato metanólico apresentou significativa atividade antioxidante, enquanto que o chá não apresentou atividade antioxidante considerável, quando comparados com o padrão ácido gálico. Das substâncias isoladas, o galato de metila apresentou a maior atividade antioxidante. O chá de I. hirsuta foi também avaliado quanto à atividade gastroprotetora em lesões induzida por etanol absoluto em 3 diferentes doses: 125 mg.Kg-1, 250 mg.Kg-1 e 500 mg.Kg-1, sendo a menor dose a que apresentou melhor efeito. Contudo, o chá de Indigofera hirsuta não apresentou atividade gastroprotetora / Abstract: Medicinal plants used in the treatment of various diseases and are source of many new molecules. This work investigates the chemical composition of the aerial parts of the infusion and methanol extract of Indigofera hirsuta (Fabaceae), popularly known as "anileira" and found in the Brazilian Cerrado. The infusion was fractionated by gel permeation chromatography and medium pressure liquid chromatography, it was possible to isolate kaempferol, protocatecuic acid, kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside, tryptophan and uracil. The methanol extract was fractionated by high pressure liquid chromatography, which allowed the isolation of gallic acid, methyl gallate, rutin and kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside. The substances were identified by spectroscopic techniques (UV, IR and NMR) and confirmed by the use of HPLC-DAD-ESI-MS coupling. The infusion, methanol extract and isolated compounds were evaluated for their antioxidant activity using DPPH. The methanol extract showed significant antioxidant activity, while the tea did not show significant antioxidant activity, when compared to gallic acid. Among the isolated substances methyl gallate presented the highest antioxidant activity. The I. hirsuta was also evaluated for its gastroprotective activity in lesions induced by absolute ethanol in 3 different doses (125 mg.Kg-1, 250 mg.Kg-1 and 500 mg.Kg-1).The lowest dose showed the best effect. However, the infusion not active gastroprotective / Mestre

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Ana Helena Januário / Banca: Luce Maria Brandão Torres / Resumo: O estudo de produtos naturais como fonte de novos agentes anticâncer torna-se de grande importância, pois mesmo devido à grande quantidade de drogas já existente para o tratamento de neoplasias, ainda não se chegou a um composto ideal que tenha maior seletividade, menos efeitos colaterais, maior potência terapêutica e menor índice de resistência. Das famílias vegetais com reconhecido potencial terapêutico destaca-se a família Fabaceae, cuja quimiossistemática atesta para uma riqueza de compostos flavonoídicos com amplo espectro de atividade biológica, inclusive antitumoral. Desta forma, o objetivo principal deste estudo foi isolar e caracterizar substâncias fenólicas a partir de frações oriundas de espécies do gênero Inga (I. laurina, I. edulis e I. marginata) selecionadas através do bioensaio com linhagens de celulas antitumorais e identificar metabólitos em mistura através de CLAE-DAD, HPLC-MS, LC-SPE-TT e Espectroscopia de RMN. A composição química destas espécies indicou uma grande variedade de ácidos aromáticos, flavonóides, taninos e triterpenos. Este trabalho permitiu a caracterização das substâncias: lupeol, éster graxo da -amirina, éster do olean-18-eno, fridelina, ácido vanílico, ácido 3,4,5-trimetoxi-benzóico, ácido gálico, galato de metila, ácido pcumárico, ácido benzóico, p-hidroxi-benzóico, ácido protocateuico, ácido tânico, ácido cafeico, ácido p-metoxicinâmico, ácido p-hidroxibenzóico, derivado metilado do ácido 4-hidroxibenzóico, ácido ferúlico, miricetina,miricetina-3-O-ramnosídeo, miricetina-3-O-(2"-Ogaloil)- -ramnopiranosídeo, apigenina, quercetrina, proantocianidina A-2, procianidina B, galato de 2-ramnopiranosil-4,6-diidroxifenila, galato de 2-ramnopiranosil-3,5-diidroxifenila e do glicosídeo do 4-vinil-fenol. Através das analises por CLAE-DAD detectamos a presença de uma antocianina altamente polar na fração aquosa... / Abstract: The study of natural products as a source of new anticancer agents is very important, because even due to the large amount of existing drugs for the treatment of cancer, has not yet reached an optimal compound that has greater selectivity, fewer side effects, higher potency therapeutic and index of least resistance.One of thefamilies with recognized therapeutic potential is the Fabaceae family, whose chemosystematics show an abundance of flavonoid with broad spectrum of biological activities, including antitumor. Thus, the aim of this study was to isolate and characterize phenolic compounds from fractions obtained of the genus Inga (I. laurina, I. edulis and I. marginata) selected by bioassay cytotoxic and identify metabolites in mixture by HPLC-PDA, HPLC-MS, LC-SPE-TT and NMR Spectroscopy. The chemical composition of these species indicated a wide variety of aromatic acids, flavonoids, tannins and triterpenes. This work describe the characterization of the compounds: lupeol, fatty ester of -amyrin, the olean-18-ene ester and friedelin, vanillic acid, 3,4,5-trimethoxy benzoic acid, gallic acid, gallate methyl, p-coumaric acid, benzoic acid, p-hydroxybenzoic, protocateuico acid, tannic acid, caffeic acid, p-methoxycinnamic acid, p-hydroxybenzoic acid derivative methylated of 4-hydroxybenzoic acid, ferulic acid, myricetin, myricetin-3-Orhamnoside, myricetin-3-O- (2 "-O-galoil) - -rhamnopyranoside, apigenin, quercetrin, proanthocyanidin A-2 and procyanidin B, 2-rhamnopyranosyl-3,5-dihydroxyphenyl gallate, 2-rhamnopyranosyl-4,6-dihydroxyphenyl gallateand 4-vinyl-phenol. Through the analysis by HPLC-PDA detected the presence of one anthocyanin from aqueous fraction in five other anthocyanins in the methanolic fraction from seeds of I. edulis. Through the bioassay-guided fractionation was possible to obtain a fraction with high antitumor potential (ED50 = 4.0 mg/mL) that was characterized such a mixture... / Doutor

Orientador: Wagner Vilegas / Banca: Isabele Rodrigues Nascimento / Banca: Norberto Peporine Lopes / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Banca: Daisy Maria Fávero Salvadori / Resumo: Neste trabalho foram estudadas folhas de Mouriri pusa Gardner e Mouriri elliptica Martius, pertencentes à família Melastomataceae. Espécies de Mouriri são utilizadas popularmente para problemas gastrointestinais, tais como úlceras. O estudo químico do extrato metanólico das folhas de M. pusa permitiu a identificação de uma flavona, dezessete flavonóis e dois flavan-3-óis, além de constatar a presença de taninos e saponinas. O estudo químico do extrato metanólico das folhas de M. elliptica permitiu a identificação de uma flavanona, dez flavonóis, dois falvan-3-óis e oito triterpenos pentacíclicos, além de constatar a presença de taninos e derivados de ácido ellágico. (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work was studied the leaves of Mouriri pusa Gardner and Mouriri elliptica Martius, belonging to the Melastomataceae family. Species of Mouriri are popularly used against gastrointestinal problems, such as ulcers. THe chemical study of the methanol extract from the leaves of M. pusa allowed the identification of one flavone, seventeen flavonols and two falvan-e-ols (besides the detection of tannins and saponins), where as the chemical study fo the methanol extract from the leaves of M. elliptica led to the identification of one flavanone, ten flavonols, two flavan-3-ols and eight pentacyclic triterpenes (besides tannins and acid ellagic derivates)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Magali Monteiro da Silva / Banca: José Eduardo Corrente / Banca: Anderson Marliere Navarro / Resumo: As doenças crônicas não transmissíveis (DCNT) de maior importância são a obesidade, doenças cardiovasculares, diabetes melittus, neoplasias e doenças respiratórias crônicas. Os hábitos de vida, com destaque para a alimentação saudável, estão estreitamente associados as DCNT. O consumo de flavonoides faz parte de uma alimentação saudável, que é um dos fatores de prevenção contra as DCNT. O objetivo desde trabalho foi reunir informações sobre os hábitos de vida para prevenção das DCNT, identificar as principais fontes dietéticas de flavonoides consumidos por indivíduos adultos entrevistados e estimar o consumo de flavonoides totais e cítricos, comparando grupos de indivíduos com e sem doenças auto-referidas. Adultos de ambos os sexos (n=122), atendidos em um laboratório de análises clínicas de São Carlos, SP, responderam perguntas sobre dados sócio-demográficos, estado de saúde e peso e altura durante entrevista. Os participantes foram divididos em dois grupos, um com doenças auto-referidas e outro sem doenças autoreferidas. Os alimentos consumidos, de acordo com três recordatórios de 24 horas, e presentes no banco de dados de flavonóides em alimentos, foram utilizados para estabelecer as fontes de flavonóides da dieta consumida pelos indivíduos entrevistados e estimar o consumo de flavonóides totais e cítricos. Dados sócio-demográficos foram associados com as doenças usando qui-quadrado ou teste exato de Fisher. O modelo de medida repetida foi utilizado para comparar o consumo dos grupos. O excesso de peso, baixo consumo de frutas e hortaliças, elevado consumo de açúcar, gordura e sal, consumo excessivo de álcool, tabagismo, hipertensão arterial sistêmica, hipercolesterolemia e o sedentarismo são determinantes para o desenvolvimento de DCNT. As dietas saudáveis baseadas no consumo diário de frutas e hortaliças, cereais... / Abstract: The most important chronic non-communicable diseases (NCD) are obesity, cardiovascular disease, diabetes mellitus, cancer and chronic respiratory diseases. Life habits, with emphasis on healthy eating, are closely involved in the NCD. The consumption of flavonoids is part of a healthy diet, which is one of prevention factors against NCD. The aim of this work was gathering information about the lifestyle for prevention of NCD, identify the main dietary sources of flavonoids consumed by adults interviewed and estimate the intake of total and citrus flavonoids, comparing groups of individuals with and without self-reported diseases .Adults of both gender (n = 122) of a clinical laboratory in São Carlos, SP, asked about socio-demographic, health, weight and height during an interview. Participants were divided into two groups, one group of individuals with self-reported diseases and other without self-reported diseases. The food intake, according to three 24-hour recall and present in the database of flavonoids in foods were used to establish dietary sources of flavonoids consumed by the individuals and estimate the intake of total and citrus flavonoids. Sociodemographic data were associated with disease using Chi-square or Fisher's exact test. The repeated measures model was used to compare the consumption of the groups. Excess weight, low consumption of fruits and vegetables, high intake of sugar, fat and salt, excessive alcohol consumption, smoking, hypertension, hypercholesterolemia and a sedentary lifestyle are crucial to the development of NCD. Healthy diets based on daily consumption of fruits and vegetables, whole grains, legumes, protein sources with low fat, low salt intake and sugars and intake of fiber and liquids, spread throughout the day, prevent the NCD. Foods considered dietary sources of flavonoids consumed by the individuals interviewed were citrus, ... / Mestre

Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Denise Crispim Tavares / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Daisy Maria Fávero Salvadori / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Resumo: Os flavonoides exibem uma multiplicidade de atividades biológicas tanto in vivo como in vitro. No entanto, não existem dados suficientes para fornecer provas conclusivas sobre os efeitos benéficos da maioria das subclasses de flavonoides. Dessa maneira, neste estudo tornou-se relevante avaliar a mutagenicidade, antimutagenicidade, estrogenicidade e atividade antibacteriana dos flavonoides, com o objetivo de traçar o perfil relação estrutura-atividade, uma vez que a atividade biológica dos flavonoides depende da sua estrutura química. A mutagenicidade e antimutagenicidade foram avaliadas pelo teste de Ames, em cepas de Salmonella typhimurium TA98, TA100 e TA102, com e sem ativação metabólica. Para comparação do efeito protetor dos flavonoides foram utilizados 4-nitro-o-fenilenodiamina (NPD), azida sódica (AZS) e mitomicina C (MMC) como mutágenos de ação direta e benzo[a]pireno (B[a]P), aflatoxina B1 (AFB1) e 2-aminoantraceno (2-AA) como mutágenos de ação indireta. A atividade estrogênica foi avaliada por meio do ensaio com leveduras recombinantes (RYA - Recombinant Yeast Assay) e pelo ensaio de proliferação de células de câncer de mama humano (MCF-7⁄BUS) responsivas à estrógeno (E-screen). A determinação da atividade antibacteriana in vitro foi realizada neste estudo utilizando a técnica de diluição em microplacas, com as bactérias Staphylococcus aureus ATTC 25923 e Escherichia coli ATCC 25922. Os compostos avaliados foram: quercetina, kaempferol, luteolina, fisetina, crisina, galanina, flavona, 3-hidroxiflavona, 5- hidroxiflavona e 7-hidroxiflavona. No teste de Ames, a quercetina mostrou-se diretamente mutagênica na linhagem TA98 e antimutagênica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The flavonoids exhibit a wide range of biological activities both in vivo and in vitro. However, there are insufficient data to provide conclusive evidence on the health effects of most flavonoid subclasses. Thus, is relevant to assess the mutagenicity, antimutagenicity, estrogenicity and antibacterial activity of flavonoids with the aim of tracing the structure-mutagenicity relationship profile, since the biological activity of flavonoids is governed by their chemical structure. The mutagenicity and antimutagenicity was assayed by the Ames test, with Salmonella typhimurium strains TA98, TA100 and TA102, carried out with and without metabolic activation. To compare the protective effect of flavonoids were used 4-nitro-o-phenylenediamine (NPD), sodium azide (AZS) and mitomycin C (MMC) as direct acting mutagens and benzo[a]pyrene (B[a]P), aflatoxin B1 (AFB1) e 2-aminoanthracene (2-AA) as indirect acting mutagens. The estrogenic activity was assayed by recombinant yeast assay (RYA) and by proliferation assay of cells of human breast cancer (MCF-7⁄ BUS) responsive to estrogen (E-screen). The determination of antibacterial activity in vitro was performed in this study by technique of dilution in microplates, with the bacteria Staphylococcus aureus ATTC 25923 and Escherichia coli ATCC 25922. The evaluated compounds were: quercetin, kaempferol, luteolin, fisetin, chrysin, galangin, flavones, 3-hydroxyflavone, 5- hydroxyflavone and 7- hydroxyflavone. In the Ames test, quercetin was directly mutagenic... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor