Les flavonoïdes sont des pigments d’origine naturelle conférant leurs couleurs aux fleurs et aux fruits, identifiés dans plus de quatre milles espèces. Les flavonoïdes sont classés selon leur structure chimique de base formée par deux cycles aromatiques reliés par trois carbones : C6-C3-C6, chaîne souvent fermée en un hétérocycle oxygéné hexa- ou pentagonal. Les flavonoïdes présentent des activités physiologiques qui leurs permettent d’être utilisés comme médicaments notamment pour leur pouvoir à piéger les radicaux libres. Les activités de flavonoïdes ont fait l’objet de nombreux articles de revue. Parmi les flavonoïdes, la quercétine est la molécule la plus distribuée dans la nature qui présente la meilleure activité anti radicalaire et aussi antiinflammatoire comparativement aux autres molécules de la même famille. En général, les flavonoïdes et la quercétine en particulier présentent une solubilité très limitée dans l’eau, cette limitation réduit leur absorption/pénétration et donc leur efficacité. En partant de l’idée que la peau est le l’organe le plus grand du corps humain et aussi l’organe le plus exposé au stress oxydant lié aux radiations UV et aux produits corrosifs et irritants, la quercétine est donc une molécule antioxydante de choix pour être appliquée sur la peau. Le premier objectif de thèse a été de développer plusieurs formulations nanométriques de quercétine afin d'augmenter sa solubilité dans l’eau et améliorer ses propriétés physico chimiques. Le deuxième objectif sera de comparer ces formulations en termes de capacité de chargement de quercétine, de toxicité vis à vis des cellules HaCaT (kératinocytes) THP-1 (monocytes) et Vero (épithéliale), et enfin le maintien de l’activité de la quercétine sur les cellules in vitro, pour mettre in fine en évidence une augmentation de la pénétration cutanée la quercétine in vivo.Dans ce projet, trois approches de formulations nanométriques (smartCrystals®, nanocapsules lipidiques et liposomes) ont été testées pour améliorer la solubilité de la quercétine. Les formulations sont optimisées en termes de procédé de préparation (transposition industrielle) et de composition des excipients pour augmenter la quantité de quercétine formulée. Les formulations ont été caractérisées sur plusieurs paramètres : taille, PDI, taux de chargement en quercétine, état cristallin et cinétique de libération de quercétine in vitro. Ensuite, les formulations ont été comparées entre elles sur les cellules HaCaT et THP-1 avec détermination de leur toxicité et activité protectrice. Enfin, deux formulations (quercétine smartCrystals® avec le TPGS et quercétine LNC 20) ont été sélectionnées et comparées in vivo pour évaluer l’amélioration de la pénétration cutanée de quercétine. Ce projet propose une solution pour formuler la quercétine d’une façon pertinente et efficace qui pourra être extrapolée au niveau industriel pour des applications cutanées de molécules peu solubles dont l'efficacité est limitée par leur faible pénétration cutanée. / Flavonoids are plants pigments. Flavonoids can be observed by the naked eye as they form the amazing colors of flower petals. Flavonoids are classified on the basis of their chemical structure composed of two aromatic cycles connected by three carbons: C6-C3-C6, chains are closed in hexa- or pentagonal oxygenated heterocyclic ring. Flavonoids present interesting physiological activates that permit their usefulness as medicaments, especially for their free radical scavenging ability. Indeed, flavonoids activates were the object of numerous review articles.Among flavonoids, quercetin is the molecule the most distributed in nature that presents the strongest antioxidant and antiinflammatory activities in comparison to other molecules of this family. In general flavonoids and specially quercetin present poor water solubility, thus limiting their absorption/penetration and as a result their efficiency.Starting for the idea that the skin is the largest organ of the human body and the organ, which the most exposed to oxidative stress due to UV irradiation or other corrosive and irritating chemicals. Quercetin is a candidate for skin supplementation with exogenous antioxidant. The first objective of the thesis is to develop several formulations at the nanometric range for quercetin, in order to increase its water solubility and to enhance its physicochemical properties. The second objective is to compare these formulations in terms of quercetin loading capacity, cellular toxicity of quercetin and its formulations on HaCaT cells (keratinocytes), THP-1 cells (monocytes) and Vero cells (epithelial). Then, the protective activity of quercetin in vitro on cells to finally put in evidence the increase of quercetin in vivo skin penetration in formulations.In this project, three nanoformulations approaches (smartCrystals®, lipid nanocapsules and liposomes) were tested for the increase of quercetin water solubility. The formulations were optimized for scale up to industrial scale at the level of preparation method, also in the excipients compositions for higher affinity to quercetin. The formulations were characterized in terms of particle size, PDI, quercetin loading, crystallinity evaluation and quercetin in vitro release profile. Then, formulations were compared in interaction with HaCaT and THP-1 cells for their cellular toxicity and protective activity. Finally, two formulations (quercetin smartCrystals® with TPGS and quercetin lipid nanocapsules 20) were selected and compared for the enhancement of the in vivo skin penetration of quercetin.This project propose a solution for the successful formulation of quercetin enabling its efficient skin delivery. This project can be extrapolated to industrial level for quercetin and other poorly water soluble molecules that present limited efficiency due to their low skin penetration capacity.

Os produtos obtidos a partir da cana-de-açúcar possuem, além de altas concentrações de sacarose, flavonóides que podem atuar como quimiopreventivos e antioxidantes. Neste estudo foram elucidadas as estruturas dos flavonóides e dos ácidos cinâmicos mais abundantes no caldo de cana, sendo apresentadas duas novas substâncias, uma flavona, tricina-7-Ο-β-(6\"-p-metoxicinamato)-glucosideo e uma lignana, 3-hidroxi-1-[4,5-dihidroxi-3-metoxifenil]-2-[4-(3-hidroxi-1-(E)-propenil)-2,6-dimetoxifenoxi]-propil-β-D-glucopiranosídeo. Entre as flavonas analisadas, o derivado de tricina apresentou maior abundância. Foi também confirmada neste estudo a perda de compostos fenólicos durante o processamento industrial do açúcar. Nos colmos de cana-de-açúcar evidenciamos altas concentrações de ácidos clorogênico e cumárico, e baixos teores de flavonóides. No decorrer do processamento verificaram-se perdas significativas de ácidos cinâmicos e aumento nos teores de flavonóides. Os maiores teores foram verificados no xarope e os menores no açúcar VHP. Entretanto, a proporção dos compostos fenólicos teve pouca alteração durante o processamento. As flavonas encontradas na cana in natura se mantiveram durante todo o processamento, enquanto que não se detectou ácido ferúlico nas variedades e ácido caféico nos produtos. A atividade antioxidante dos produtos obtidos durante as etapas do processamento do açúcar foram avaliadas. As maiores atividades foram encontradas no xarope e melaço, enquanto que as menores, no caldo misto e açúcar VHP. Uma avaliação sobre o perfil dos compostos fenólicos de amostras de rapadura e caldo de cana obtidos no comércio local mostrou que a rapadura apresenta altos teores de luteolina, enquanto no caldo, prevalece tricina. Nas amostras de rapadura destacam-se altos teores de ácido clorogênico, composto que se mostrou ausente nas amostras obtidas durante as etapas do processamento industrial do açúcar. As atividades antioxidantes dos extratos de rapadura mostraram que mesmo em baixas concentrações a atividade é moderada. O caldo apresentou atividade semelhante, mas em concentrações mais elevadas. Quanto à atividade antiproliferativa, o extrato de rapadura apresentou atividades citostáticas para todas as linhagens e citocida para as linhagens de células cólon (HT-29), de mama (MCF-7), de mama resistente (NCI-ADR), de pulmão (NCI-460), de ovário (OVCAR), de rim (786-0) e de melanoma (UACC-62). O derivado de tricina, isolado a partir do caldo de cana, apresentou atividade antioxidante moderada. Suas atividades antiproliferativas foram mais pronunciadas para as linhagens de células de mama resistente (NCI-ADR) e de cólon (HT-29), com atividade citostática e citocida para as linhagens de pulmão (NCI-460), de mama (MCF-7), de ovário (OVCAR), de rim (786-0) e de melanoma (UACC-62). / Sugar cane products have high sucrose concentration and flavonoids that can function with chemopreventive and antioxidant. In this study have been elucidated flavonoids and cinnamic acids structures most abundant in sugar cane juice and were presented two new substances, one flavone, tricin-7-Ο-β-(6-methoxycinnamic)-glucoside and one lignan, 3-hydroxy-1-[4,5-dihydroxy-3-methoxyphenyl]-2-[4-(3-hydroxy-1-(E)-propenyl)-2,6-dimethoxyphenoxy]-propyl-β-D-glucopyranoside. Among the flavones analyzed, tricin presents high concentration. In this study was corroborated the loss of phenolic compounds during the processing industrial of sugar. In culm of sugar have been evidenced high concentrations of the chlorogenic and coumaric acids, and low flavonoid contents. During the processing has been proved significant loss of cinnamic acids and increase of flavonoids. The highest contents have been proved in the syrup and the smallest in the sugar VHP. However, the profile of the phenolic compounds had little alteration during the processing. The flavones finded in sugar cane in natura were remaining during all the processing and, are not find ferulic acid in the varieties and caffeic acid in the products. The antioxidant activities in products obtained during processing stage of sugar cane were evaluated. The highest activities were finded in the syrup and molasses and the smallest in sugar cane juice and sugar VHP. Assessment about the profile of the phenolic compounds in rapadura and sugar cane juice acquired in local commerce showed that the rapadura presents high contents of the luteolina, while in sugar cane juice, predominate tricin. In the sample of rapadura stand out high chlorogenic acid contents, compound that showed absent in sample from during the processing industrial stages of sugar. The antioxidants activities of rapadura extracts showed the in spite of in low concentration the activity is moderate. The sugar cane juice presented similar activity but, in high concentration. As for the antiproliferative activity, the rapadura extract presented cytostatic effect for ali lines and cytocidal for the colon cell lines (HT-29), of breast (MCF-7), of multi-drug resistant breast cells (NCI-ADR), of lung (NCI-460), of ovary (OVCAR), of kidney (786-0), and of melanoma (UACC-62). Tricin, isolated from sugar cane juice, presented moderate antioxidant activity. The antiproliferative effects of tricin were more pronunciated for multi-drug resistant breast cells (NCIADR) and of colon (HT-29), with cytostatic effect and cytocidal for lung lines (NCI460), of breast (MCF-7), ovary (OVCAR), of kidney (786-0), and of melanoma (UACC-62).

Espécies de Croton são fonte abundante de metabólitos secundários, com ampla diversidade de atividades farmacológicas, muitas delas conhecidas e utilizadas popularmente. O presente projeto teve como objetivos ampliar o conhecimento sobre a química do gênero pela da prospecção de flavonoides e componentes de óleos voláteis das especies C. dichrous, C. erythroxyloides, C. myrianthus e C. splendidus, além de realizar um estudo antiproliferativo, gerando conhecimento potencial para a ampliação do emprego do gênero para a medicina de compostos naturais. Como principais compostos identificados destacam-se 1,8 cineol, α-bisabolol, ledol e linanol, nos óleos voláteis; os flavonoides tilirosídeo, rutina e vitexina e o triperpeno lupeol. Atividades antiproliferativas contra as linhagens U251 glioma, MCF-7 mama, H460 pulmão, K562 leucemia, PC-3 próstata e OVCAR-3 ovário foram observadas, com destaque para o extrato foliar de C. erythroxyloides, que teve atividade potente contra as duas últimas linhagens. O presente trabalho colaborou para a melhor elucidação da química e atividades biológicas de espécies ainda não estudadas de Croton, gênero com enorme potencial de utilização medicinal e de grande ocorrência no país. / Croton species are a great source of secondary metabolites, with a wide variety of pharmacological activities, many of these known and popularly used. This project aimed to increase knowledge about the chemistry of the genre through the exploration of flavonoids and essential oil components of the species C. dichrous, C. erythroxyloides, C. myrianthus and C. splendidus, and by antiproliferative tests, generating potential knowledge for extending the use of gender in medicine of natural compounds. The main identified compounds were 1,8 cineol, α-bisabolol, ledol and linanool present at the essential oil, the flavonoids tiliroside, rutin and vitexin and the triterpenoid lupeol. Antiproliferative activity against U251 glioma, MCF-7 mammary, H460 lung, K562 leukemia, PC-3 prostate e OVCAR-3 ovary cell lines were found, and the leaf extract of C. erythroxyloides achieved potent activity against the last two cell lines. This work contributed for the elucidation of chemistry and biological activities of unstudied species of Croton, a genre with great potential for medicinal use and large occurrence in Brazil.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O extrato metanÃlico (MET) e as fraÃÃes hexÃnica (HEX) e clorofÃrmica (CLR) da alga parda Spatoglossum schroederi foram avaliados quanto Ãs atividades antioxidante, antibacteriana e anti-inflamatÃria. A atividade antioxidante foi realizada pelos mÃtodos capacidade antioxidante total, atividade redutora, sequestro de radical DPPH e quelaÃÃo do Ãon ferroso, e seus resultados foram correlacionados com teor de fenÃis e flavonoides. As amostras apresentaram baixo conteÃdo fenÃlico total (6,84 a 14,10 mg EAG/g) e elevado teor de flavonoides totais (215,39 a 279,63 mg EQ/g). TambÃm apresentaram boa atividade antioxidante para capacidade antioxidante total (120 mg EAAsc/g) e atividade redutora (0,414 para HEX, valor mais elevado), resultados que foram fortemente relacionados ao teor de flavonoides totais, R2>0,9. No DPPH as fraÃÃes apresentaram aÃÃo prÃ-oxidante para concentraÃÃo acima de 1,5 mg/mL. NÃo foi detectada atividade para quelaÃÃo do Ãon ferroso. A atividade antibacteriana foi testada pelo mÃtodo de difusÃo em Ãgar contra duas Gram-positivas e trÃs Gram-negativas. Nenhuma das amostras nas concentraÃÃes testadas (50 e 100 mg/mL) apresentou efeito bactericida. A atividade anti-inflamatÃria foi avaliada pelos ensaios de edema de pata induzido por carragenina e dextrana, migraÃÃo de leucÃcitos, atividade de mieloperoxidase e dosagem de citocinas. Todas as amostras apresentaram boa atividade anti-inflamatÃria nos ensaios realizados. No edema de pata, inibiram a atividade anti-inflamatÃria no pico do edema, com melhores resultados de HEX (prÃximo a 100%) para carragenina, e CLR (79%) e HEX (77%) para dextrana. HEX tambÃm apresentou o melhor resultado inibitÃrio na migraÃÃo de leucÃcitos, tanto total (71%) quanto diferencial (74%). CLR apresentou melhor valor na atividade da mieloperoxidase (87%). As amostras apresentaram reduÃÃo de IL-1β muito prÃxima, da ordem de 43%. MET nÃo alterou a produÃÃo de IL-10, porÃm HEX e CLR induziram produÃÃo de IL-10, tendo HEX o melhor valor (80%). Tais resultados podem ser justificados pelo elevado teor de flavonoides. S. schroederi, especialmente a fraÃÃo hexÃnica, apresenta potencial uso farmacolÃgico e como antioxidante. No entanto, novos estudos sÃo necessÃrios para esclarecer com maior profundidade os mecanismos envolvidos e isolar as molÃculas bioativas. / Methanol extract (MET) and hexane (HEX) and chloroform (CLR) fractions of brown seaweed Spatoglossum schroederi were evaluated for antioxidant, antibacterial and anti-inflammatory activities. Antioxidant activity was performed by total antioxidant capacity, reducing power, DPPH radical scavenging activity and ferrous ion chelating assay, which results were correlated with total phenol and flavonoid contents. The samples showed low total phenol content (6.84 to 14.10 mg GAE/g) and high total flavonoid content (215.39 to 279.63 mg QE/g). They also showed good antioxidant activity for total antioxidant capacity (120 mg ascorbic acid equivalent antioxidant capacity / g) and reducing activity (0.414 to HEX, the highest value), which results were strongly associated with their total flavonoid content, R2>0.9. For DPPH radical scavenging activity, fractions showed pro-oxidant action to a concentration above 1.5 mg/mL. No activity was detected for ferrous ion chelating assay. Antibacterial activity was tested by agar diffusion method against two Gram-positive and three Gram-negative bacteria. None of the samples at the concentrations tested (50 and 100 mg/mL) showed bactericidal effect. Anti-inflammatory activity was evaluated by paw edema induced by carrageenan and dextran, leukocyte migration, myeloperoxidase activity and cytokine measurements. All samples showed good anti-inflammatory activity in such tests. In paw edema, anti-inflammatory activity inhibited at the peak edema, with better results for HEX (near 100%) for carrageenan, and for CLR (79%) and HEX (77%) for dextran. HEX also showed the best results in inhibition of leukocyte migration, both total (71%) and differential (74%). CLR showed the best value in myeloperoxidase activity (87%). The samples showed a very close reduction in IL-1β, nearby 43%. MET did not affect production of IL-10, but HEX and CLR induced production of IL-10, HEX having the best value (80%). Such results can be explained by flavonoids high content. S. schroederi, especially hexane fraction, has potential for pharmacologic and antioxidant uses. However, further studies are needed to elucidate the metabolic pathways involved and to isolate the bioactive molecules.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Nos Ãltimos anos o consumo de frutas tropicais tem aumentado, principalmente, devido aos seus benefÃcios para a saÃde, entre eles à baixa incidÃncia de doenÃas degenerativas. Esses benefÃcios sÃo atribuÃdos, em sua maioria, aos constituintes antioxidantes, como os compostos fenÃlicos e vitaminas. A rutina à um composto fenÃlico que possui vÃrias atividades biolÃgicas, tais como agentes antitumorais e propriedades antibacterianas. Com isso, o presente estudo objetivou avaliar a atividade antimicrobiana e antioxidante de extrato de rutina obtido de polpas e subprodutos de frutos tropicais encapsulado em matriz de goma do cajueiro. As frutas utilizadas foram: acerola, goiaba, manga e cajÃ-umbu. Elas foram despolpadas e caracterizadas fÃsico- e quimicamente. A polpa e o subproduto de acerola apresentaram maior atividade antioxidante total com 91,33 e 51,62 ÂM de Trolox. g-1, respectivamente. Sendo que os subprodutos de manga, goiaba e cajÃ-umbu obtiveram atividade antioxidante superior as suas respectivas polpas. A presenÃa de rutina foi observada em todas as polpas e subprodutos, sendo o subproduto de cajÃ-umbu o que obteve maior teor com 1852,40 Âg.g-1, seguido da polpa de acerola com 184,66 Âg.g-1. Esses extratos com maiores teores de rutina e rutina padrÃo (Sigma-Aldrich) foram encapsulados com goma do cajueiro. As nanopartÃculas formadas foram caracterizadas fisicamente e apresentaram tamanhos mÃdios variando de 174,20 nm a 907,60 nm. Ao avaliar o potencial antibacteriano, observou-se que a rutina e sua respectiva nanopartÃcula nÃo possuem essa propriedade contra as bactÃrias Eschechia coli, Salmonella Enteritidis, Staphylococcus aureus e Listeria monocytogenes na concentraÃÃo de atà 10 mg/mL. Os extratos de polpa de acerola (EPA) e subproduto de cajÃ-umbu (ESC) apresentaram atividade antibacteriana, sendo mais eficientes contra bactÃrias Gram-positivas. Os extratos nÃo encapsulados com goma do cajueiro foram mais efetivos do que os encapsulados. / In recent years the consumption of tropical fruits has increased, mainly due to its health benefits, including the low incidence of degenerative diseases. These benefits are awarded, mostly to the antioxidant constituents, such as phenolic compounds and vitamins. Rutin is a phenolic compound which possesses various biological activities such as antibacterial and antitumor agents. Thus, the present study aimed to evaluate the antimicrobial and antioxidant activities of extract rutin obtained from pulps and by-products of tropical fruits encapsulated array of cashew gum. The fruits used were: acerola, guava, mango and caja-umbu. They were pulped and characterized physico-chemically. The pulp and the by-product of acerola had higher total antioxidant activity with 91.33 and 51.62 mM Trolox. g-1, respectively. Since the by-products of mango, guava and caja-umbu had higher antioxidant activity their respective pulps. The presence of rutin was observed in all pulps and byproducts, and the byproduct of caja-umbu that obtained with higher content 1852.40 μg.g-1, followed of the pulp with 184.66 μg.g-1. These extracts with higher concentrations of rutin and standard rutin (Sigma-Aldrich) were encapsulated with cashew gum. The formed nanoparticles were characterized physically and showed average sizes ranging from 174.20 nm to 907.60 nm. In evaluating the antimicrobial activity, it was found that rutin and its respective nanoparticle do not have this property against bacteria Eschechia coli, Salmonella Enteritidis, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes at a concentration of up to 10 mg / ml. The extracts of acerola pulp (EPA) and byproduct caja-umbu (ESC) showed antibacterial activity, being more effective against Gram-positive bacteria. Extracts not encapsulated with cashew gum were more effective than encapsulated.

Passiflora alata Curtis (PASSIFLORACEAE) é utilizada como tranqüilizante, seja popularmente ou pela indústria farmacêutica na produção de fitoterápicos. O objetivo desse trabalho foi avaliar, em camundongos, a atividade geral sobre o Sistema Nervoso Central e o efeito ansiolítico de um extrato hidroetanólico (70%) (EXT) e de duas frações enriquecidas (fração de saponinas - SAP e fração de flavonóides - FLA) obtidos das folhas de P. alata e, também, investigar o envolvimento do complexo receptor GABAA nos efeitos observados. O extrato e as frações foram administrados agudamente, pela via oral, e avaliados nos seguintes modelos: labirinto em cruz elevado, tempo de sono barbitúrico, avaliação da atividade locomotora espontânea, avaliação da coordenação motora em aparelho rota-rod e proteção às convulsões induzidas por pentilenotetrazol. FLA 300 mg/kg e SAP 600 e 900 mg/kg provocaram um efeito do tipo ansiolítico no labirinto em cruz elevado. FLA (CI50= 181,2 μg/mL) e SAP (CI50= 23,4 μg/mL) deslocaram a ligação específica de [3H]-TBOB em membranas sinaptossomais de córtex de ratos adicionadas de GABA (0,3 μM), indicando uma modulação positiva do canal de cloreto ativado por GABA, porém esse efeito não é mediado pelo sítio benzodiazepínico uma vez que ambas as frações não deslocaram a ligação de [3H]-flunitrazepam em concentrações até 300 μg/mL. O extrato hidroetanólico (EXT) provocou efeitodo tipo ansiolítico (300 mg/kg) no labirinto em cruz elevado, o qual foi bloqueado pela administração de flumazenil (6 mg/kg, i.p.). Porém, esse extrato em concentrações até 1000 μg/mL não deslocou a ligação de [3H]-flunitrazepam, indicando que o efeito ansiolítico é mediado pelo sítio benzodiazepínico mas não pela interação direta das substâncias presentes no extrato com este sítio. Na dose de 600 mg/kg não foi observado efeito ansiolítico para o extrato, porém foi verificada uma redução da atividade motora dos animais, indicando um efeito sedativo. EXT 300 e 600 e FLA 300 prolongaram o tempo de sono barbitúrico e SAP (300-900 mg/kg) não apresentou efeito neste teste. Os dados obtidos demonstraram que P. alata apresentou efeito hipnótico-sedativo e ansiolítico em camundongos, os quais parecem ser mediados pela ativação do complexo receptor benzodiazepínico/GABAA e podem estar relacionados com a presença de flavonóides e saponinas. / Passiflora alata Curtis (PASSIFLORACEAE) is used in folk medicine and also by pharmaceutical industry, as raw material in phytotherapy, due its tranquilizing properties. The aims of this work were to evaluate, in mice, the central nervous system general activity and the anxiolytic effect of a hydroethanolic extract (70%) (EXT) and two enriched fractions (saponin fraction – SAP – and flavonoid fraction – FLA), obtained from leaves of P. alata and, also, to investigate the GABAA receptor complex involvement on the observed effects. The extract and the fractions were administrated acutely, by oral route, and evaluated on elevated plus maze, barbiturate sleeping time, locomotor activity, rota-rod, and pentilenotetrazole-induced seizures tests. FLA 300 mg/kg and SAP 300 and 900 mg/kg produced an anxiolyticlike effect on elevated plus maze test. FLA (IC50=181,2 μg/mL) and SAP (IC50=23,4 μg/mL) inhibited the [3H]-TBOB binding to rat cerebral sinaptosomal membranes added of GABA (0,3 μM), which is an indicative of a positive modulation of the chloride channel activated by GABA, but this effect is not mediated by the benzodiazepine binding site, once these fractions in concentrations up to 300 μg/mL did not displaced the [3H]-flunitrazepam. The hidroethanolic extract (EXT) showed anxiolytic-like effect (300 mg/kg) on elevated plus maze test which was prevented by flumazenil (6 mg/kg, i.p.). However, in concentrations up to 1000 μg/mL this extract showed no potency in displacing the [3H]-flunitrazepam binding, indicating that the anxiolytic-like effect is mediated by activation of benzodiazepine binding site, but not by a direct interaction of the compounds presented in this extract at this site. At 600 mg/kg this extract did not show anxiolytic effect but it decreased the motor activity, pointing to a sedative effect. EXT 300 and 600 mg/kg and FLA 300 mg/kg increased the barbiturate sleeping time while SAP (300-900 mg/kg) presented no effects in this test. Taken account of these results, P. alata presented anxiolytic and hypnoticsedative effects in mice. These effects may be mediated by the activation of benzodiazepine/GABAergic complex, and can be related to the presence of both flavonoids and saponins.

A criação de novilhas pode utilizar aditivos fitogênicos, como o extrato de chá-verde (Camellia sinensis L.) para melhorar aspectos ligados à sanidade e eficiência digestiva. Todavia existem poucas informações sobre os seus efeitos no comportamento animal. O experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar os efeitos da inclusão de diferentes doses do extrato herbal de chá-verde no comportamento social e ingestivo de novilhas leiteiras. Foram utilizadas 35 novilhas não prenhes e com idades entre 14 e 15 meses. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e medidas repetidas no tempo. O comportamento foi avaliado nos períodos diário (24 horas) e diurno (11 às 20:30 horas), e foi observado visualmente de forma individual em intervalos de 10 minutos. As variáveis estudadas foram: tempo em decúbito direito, tempo em decúbito esquerdo, tempo deitada total, tempo em estação, tempo em ócio, tempo ruminando, tempo pastejando, e a frequência com que os animais caminhavam, corriam, ingeriam água, ingeriam sal, interagiam e tinham comportamento de dominância/dominada entre eles. Os atributos comportamentais contínuos foram avaliados quanto ao efeito das doses de extrato de chá verde, segundo a análise de regressão e análise de variância, testando os efeitos de dia de avaliação, doses e sua interação, e os atributos comportamentais eventuais foram analisados usando regressão logística. Em relação ao comportamento diário (24h), a inclusão do extrato de chá verde na dieta aumentou linearmente o tempo deitada em decúbito direito e reduziu o tempo em pastejo. Os demais atributos não tiveram diferenças significativas. Em relação ao comportamento diurno, a inclusão do extrato de chá verde na dieta de novilhas influenciou o tempo deitada em decúbito direito, as que receberam 3g apresentaram maiores tempos em decúbito direito comparados com aquelas que receberam 2g. A chance de ocorrência de interações entre os animais diminuiu em 30% a cada grama de extrato de chá verde fornecida no alimento. Nos demais atributos não houve diferenças significativas. O extrato de chá verde altera em parte o comportamento ingestivo, diminuindo as atividades de pastejo, enquanto aumenta o tempo de permanência deitada em decúbito direito e diminui as interações sociais entre os animais. / In the production of dairy heifers, phytogenic additives, such as green tea extract (Camellia sinensis L.) might be used to improve aspects of health and digestive efficiency. There is limited information of the effects on performance and animal behavior. This trial was conducted to evaluate the effects of the inclusion of green tea herbal extract in the diet on the ingestive and social behavior of dairy heifers. Thirty-five non-pregnant heifers, aged between 14 and 15 months, were used. The experimental design was completely randomized, with four treatments and repeated measures. The behavior was visually observed individually and focal at 10 minute intervals. The variables studied were: time spent in right decubitus, in left decubitus, lying, standing, resting, ruminating, grazing, and the frequency animals walked, ran, drank water, ate salt, interacted and had dominance/submission behavior. Continuous behavioral attributes were evaluated for the effect of green tea extract doses, according to regression analysis and analysis of variance, testing the effects of valuation date, doses and their interaction, and discrete or categorical behavioral attributes were analyzed using logistic regression. Regarding the daily behavior (24 hours), the inclusion of green tea extract in the diet linearly increased the time lying on right decubitus and reduced grazing time. The other attributes did not differ significantly. Regarding the diurnal behavior, green tea extract in heifers’ diet influenced the lying time on right decubitus, those receiving 3g spent more time in right decubitus than those receiving 2g. The chance of occurrence of interactions between animals decreased by 30% every 1g of green tea extract of grass added into the diet. No differences were detected for other attributes. Green tea extract alters partially feeding behavior, reducing grazing activities, while it increases the time lying in right decubitus and reduces social interactions among animals.

O cultivo de plantas das espécies de Vitis (Vitaceae), conhecidas popularmente como videiras, representa uma das atividades econômicas mais proeminentes no Sul do Brasil. Figuram entre as espécies mais ricas em compostos polifenólicos, sendo os mesmos responsáveis por inúmeras atividades biológicas e farmacológicas importantes, dentre as quais, a antioxidante. Neste contexto, este trabalho objetivou analisar quali e quantitativamente os principais grupos polifenólicos encontrados em extratos de videiras, os antocianos e flavonóides, bem como realizar ensaio para avaliação da atividade antioxidante in vitro. Neste sentido foram desenvolvidos e validados dois métodos por cromatografia líquida de alta eficiência, com detector UV/VIS. A análise dos compostos fenólicos incluíram a utilização de duas colunas diferentes, sendo uma constituída por sílica C18 e outra RP-18 com partículas híbridas contendo ligações etano-silicone. Em ambos os métodos foram utilizados sistema de eluição em gradiente, cuja composição das fases móveis foram água e acetonitrila acificadas com ácido trifluoracético. Os métodos desenvolvidos foram validados segundo as normas vigentes e atenderam aos parâmetros de validação como especificidade, linearidade, precisão, sensibilidade, exatidão e robustez nas faixas de concentração avaliadas. O presente estudo também investigou a atividade antioxidante in vitro dos extratos de videira através do método potencial antioxidante reativo total (TRAP), o qual foi otimizado e validado segundo normas internacionais, utilizando Trolox como referência. A partir deste método também foi possível avaliar a reatividade total antioxidante (TAR). Todas as concentrações testadas apresentaram reatividade instantânea inferior ao composto de referência, entretanto, demonstraram atividade antioxidante superior ao Trolox 200 nM. / The cultivation of plants from Vitis species (Vitaceae), popularly known as grapevine, is one of the most prominent economic activities in southern Brazil. The Vitis species is one of the plants that is most rich in polyphenolic compounds, responsible for numerous important pharmacological and biological activities, such as antioxidant activity. In this context, this study aimed to analyze qualitatively and quantitatively the principal groups encountered in grapevine extracts, the anthocyans and flavonoids, and to assay their antioxidant activities in vitro. For this purpose, two methods were developed and validated using high-performance liquid chromatography, employing a UV/VIS detector. The analysis of phenolic compounds included the utilization of two different columns: a column constituted by silica C18 and other RP18 column with bridged ethane-silicon hybrid particles. In both methods, a gradient system was used, with water and acetonitrile acidified with trifluoroacetic acid as a mobile phase. The methods developed were validated according to ICH evaluating parameters such as specificity, linearity, precision, sensibility, accuracy and robustness in the concentration range evaluated. The present study also analyzed the antioxidant activity in vitro of grapevine extracts employing the Total Reactive Antioxidant Potencial (TRAP) method, which was optimized and validated according to international patterns, using Trolox as a reference substance. This method also allowed evaluation of the total instantaneous reactivity (TAR). In all concentrations, the samples presented lower instantaneous reactivity than that of the reference compound. In contrast, the samples presented higher antioxidant activity than Trolox 200 nM.

Os extratos de espécies de Passiflora (Passifloraceae), comumente empregados no tratamento de diversas doenças em regiões tropicais e subtropicais, têm se mostrado fonte em potencial de medicamentos. O uso popular de espécies vegetais pertencentes a esse gênero decorrente de suas propriedades sedativas consta a partir do século 17 na Europa. Após cerca de 200 anos, foram documentados os estudos farmacológicos iniciais com P. incarnata. No Brasil, uma espécie morfologicamente assemelhada a essa - P. edulis Sims. - tem encontrado uso como sedativo, ansiolítico, diurético e no tratamento de distúrbios gastrintestinais, embora esta espécie seja explorada comercialmente na produção de sucos concentrados. Pesquisadores têm avaliado a atividade de extratos de folhas de P. edulis no sistema nervoso central. Considerando o uso popular e a falta de trabalhos científicos avaliando a ação no sistema digestório, o extrato liofilizado preparado com as folhas e com os caules dessa espécie foi ensaiado em ratos, empregando-se solução de etanol acidificado como indutor de úlceras. A triagem fitoquímica e a avaliação da atividade antioxidante (DPPH, ORAC) foram realizadas para verificar o potencial uso dos metabólitos encontrados no extrato. O método espectrofotométrico foi empregado na análise do teor flavonoídico. As técnicas de Cromatografia Líquida de Alta eficiência (CLAE) e espectrofotometria UV/visível foram utilizadas para analisar as frações f1avonoídicas. A caracterização morfoanatômica das folhas e dos caules da espécie foi efetuada como auxiliar no controle de qualidade da droga vegetal. No modelo ensaiado, o extrato de P. edulis não mostrou atividade antiúlcera promissora. Nessa fase não se pode descartar seu uso no tratamento de úlceras gástricas. O extrato liofilizado apresentou teor flavonoídico de 1,2% e atividade antioxidante, demonstrada com os métodos empregando DPPH (EC50 de 160 µg/mL) e ORAC (775,35 ± 36,12 µmol eq Trolox/g de extrato). Na análise preliminar das frações flavonoídica foi evidenciada a predominância de flavonas. Caracteres morfoanatômicos importantes na análise da droga vegetal foram documentados. / The extracts of Passiflora spp. (Passifloraceae), commonly used in the treatment of several diseases from tropical and subtropical regions, have been proving to be a potential source for the preparation of medicines. Because of theirs sedating properties, popular use of vegetal species belonging to this genus has been found since the 17th century in Europe. Then, after 200 years, early pharmacologic studies with P. incarnata were documented. In Brazil, one species morphologically similar to this one - P. edulis Sims. - has been used as sedative, anxiolytic, diuretic and for the treatment of gastrointestinal diseases, although this species has been commercially explored in the production of concentrated juices. Researchers have been evaluating the effects of the extract of P. edulis leaves in the central nervous system. Considering its popular use and the lack of scientific research evaluating its effect in the digestive tract, the freeze-dried extract prepared with its leaves and stems was tested in rats. Acute gastric lesions were induced by acidified solution of ethanol. The phytochemical screening and the antioxidant effects evaluation (DPPH, ORAC) have been carried out in order to evaluate the potential use of metabolites found in the extract. The spectrophotometric method was applied in the analyses of flavonoids content. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and UV/ visible methods were used to analyze the flavonoid fractions. Morphoanatomic characterization of leaves and stems of the species was done to applied in the quality control of the crude drug. In the tested model, P. edulis extract did not show its potential gastroprotective property. At this point we can not discard its use to treat gastric ulcers. The flavonoid content quantified in the extract were 1,2%. The freeze¬dried extract presented antioxidant activity, demonstrated with DPPH (EC50 de 160µg/mL) and ORAC (775,35 ± 36,12 µmol eq Trolox/g) methods. The chemical profile of flavonoid fractions showed predominant concentration of flavones. Important morphoanatomic characters of the crude drug were documented.

Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) é uma espécie muito empregada na medicina tradicional no Brasil e em outras partes do mundo, especialmente Índia, países da África e China. É indicada popularmente para diversos fins incluindo o tratamento de úlceras gástricas. A análise fitoquímica revelou a presença de vários constituintes, em especial os flavonoides. O tratamento de úlcera gástrica convencional apresenta diversos efeitos colaterais e, na maioria das vezes, não evita a recidiva da lesão. Dessa maneira, é interessante encontrar uma terapêutica mais segura e efetiva. Com o objetivo de avaliar a segurança, foi realizado ensaio de citotoxicidade do extrato bruto, in vitro, com valor de IC50 igual a 0,926 mg/mL, sendo possível predizer um valor de LD50 (1341,46 mg/kg). Já em relação ao ensaio de citotoxicidade, in vitro, da fração acetato de etila não foi encontrado um valor de IC50. Resultados de fototoxicidade, in vitro, mostraram que o extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata não possuem potencial fototóxico. A contagem microbiana na droga vegetal para bactérias aeróbias/mesófilas foi de 6,9 x 104 UFC/g e a contagem de bolores e leveduras foi de 2,4 x 103 UFC/g, ambos valores dentro do limite estabelecido pela OMS. Análise de endotoxinas também foi realizada para o extrato bruto (<4,0.105 UE/kg) e fração acetato de etila (<2,7.105 EU/kg) de K. pinnata. Referente à fitoquímica, diversos flavonoides foram identificados no extrato bruto e fração acetato de etila de K. pinnata. Paralelamente ao estudo fitoquímico foi verificado que a atividade gastroprotetora do extrato bruto envolve a ação das prostaglandinas e grupamentos sulfidrila. Já o mecanismo de gastroproteção da fração acetato de etila é dependente de prostaglandinas e óxido nítrico. A atividade cicatrizante do extrato bruto de K. pinnata também foi avaliada. De acordo com os resultados macroscópicos, as doses de 200mg/kg e 400 mg/kg reduziram a área de lesão, com uma taxa de 33% e 39%, respectivamente, após 7 dias de tratamento (p<0,05). Análise histológica dos grupos tratados com o extrato bruto (200 e 400 mg/kg) indicou melhor recuperação da lesão, verificada pela regeneração da mucosa gástrica e pelo restabelecimento da arquitetura glandular. As enzimas antioxidantes (catalase, superóxido dismutase e glutationa peroxidase) e a expressão de VEGF foram avaliadas no mecanismo de cicatrização de úlceras gástricas. Os resultados mostraram que a atividade antiulcerogênica foi mediada pela ação antioxidante da enzima SOD. Não foi evidenciado in vivo o aumento da expressão de VEGF e nem o sequestro do radical peroxil nos animais tratados com o extrato bruto. Os resultados dos ensaios in vitro (ORAC) mostraram uma maior capacidade de sequestro de radicais peroxil da fração acetato de etila (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca) quando comparado com o extrato bruto (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalente de Trolox/g de amostra seca). A atividade anti Helicobacter pylori também foi avaliada, no entanto, o extrato bruto não apresentou atividade anti H.pylori. Ademais, o extrato bruto demonstrou um potencial anti-inflamatório, pois foi observada uma redução nos níveis de TNF-&#945; e L-selectina, após o tratamento em neutrófilos estimulados com LPS. Analisando os resultados sugere-se que K. pinnata possui um potencial terapêutico no combate de úlceras gástricas e possivelmente, anti-inflamatório, sendo que os flavonoides podem estar relacionados com o efeito biológico observado. / Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Crassulaceae) is a commonly used species in traditional medicine in Brazil and in other parts of the world, especially India, Africa and China, for the treatment of various diseases, including gastric ulcers. Phytochemical analysis revealed the presence of several constituents in this plant, especially flavonoids. The available pharmaceutical products to treat peptic ulcer have several side effects and, in most cases, do not prevent recurrence of the gastric lesions. Therefore, it is important to find a safer and more effective therapy. In order to evaluate safety, the in vitro cytotoxicity assay of crude extract from K. pinnata was performed. The IC50 value was 0,926 mg/mL corresponding to LD50 value (1341, 46 mg/kg). It was not determined IC50 value in vitro cytotoxicity assay for ethyl acetate fraction from K. pinnata. Neither the crude extract nor ethyl acetate fraction from K. pinnata showed phototoxicity. Microbial counting was performed on the K. pinnata-based drug in order to investigate microbiological contamination. The microbial count for aerobic / mesophilic bacteria was 6.9 x 104 CFU/g, and yeast count was 2.4 x 103 CFU/g, both values in agreement with the limits established by WHO. Endotoxin analysis was also performed for the crude extract (<4,0.105 UE/kg) and for ethyl acetate fraction (<2,7.105 UE/kg) from K. pinnata. In the phytochemical analysis several flavonoids were identified in the crude extract and ethyl acetate fraction of K. pinnata. In parallel to the phytochemical study, it was verified that the gastroprotective activity of the crude extract of K. pinnata involved prostaglandins and sulfhydril compounds. On the other hand, the mechanism of gastroprotection of the ethyl acetate fraction of K. pinnata is dependent on prostaglandins and nitric oxide. The healing activity of the crude extract of K. pinnata was also evaluated. According to the macroscopic results the dose of 200 mg/kg and 400mg/kg reduced the injury area, with a rate of 33% and 39%, respectively, after 7 days of treatment (p <0.05). Histological analysis showed regeneration of the gastric mucosa and re-establishment of the glandular architecture in groups treated with the crude extract (200 and 400 mg/kg). Antioxidant enzymes (catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase) and VEGF expression were evaluated in the mechanism of gastric ulcer healing. The results showed that the antiulcerogenic activity was mediated by SOD. It was not demonstrated an increase in VEGF expression and nor in the in vivo sequestration of the peroxyl radical in the animals treated with crude extract. The results of in vitro assay (ORAC) showed a greater sequestering of peroxyl radical to the ethyl acetate fraction (1192,35 ± 112,61 &#181;mol equivalent of Trolox/g of ethyl acetate fraction) when compared to the crude extract (431,32 ± 7,17 &#181;mol equivalent of Trolox/g of crude extract) of K. pinnata. The anti Helicobacter pylori activity was also evaluated; however, the crude extract did not show anti H. pylori activity. However, the crude extract of K. pinnata demonstrated an anti-inflammatory potential, because TNF-&#945; and L-selectin levels were reduced after treatment in LPS-stimulated neutrophils. The analysis of the results suggests that K. pinnata has a therapeutic potential against gastric ulcers and possible anti-inflammatory properties, and the flavonoids may be linked to the biological effect.