Resumo não disponível.

O Brasil destaca-se no cenário mundial em relação ao consumo de estimulantes anfetamínicos (ATS), e estudos nacionais têm evidenciado grande prevalência na utilização destas substâncias por motoristas profissionais. O fluido oral apresenta uma série de vantagens sobre as matrizes tradicionais para a monitorização do consumo de ATS no trânsito, e vem sendo empregada em diversos países. Este trabalho objetivou avaliar a especificidade de imunoensaios comerciais na detecção preliminar dos ATS comercializados no Brasil em amostras de fluído oral e desenvolver e validar um método para a confirmação e quantificação de anfetamina (AMP), metanfetamina (MET), anfepramona (DIE), fenproporex (FEN) e metilfenidato (MPH) no fluído oral por microextração em fase sólida (SPME) e cromatografia a gás com detector de massas (CG/EM). A especificidade analítica dos imunoensaios foi avaliada por meio do estudo das informações técnicas de diversos produtos e da realização de ensaios experimentais com três testes. O método confirmatório por SPME-CG/EM foi desenvolvido a partir da técnica de imersão (DI-SPME), sob agitação magnética, à temperatura ambiente, utilizando fibras revestida por polidimetilsiloxano (30 μm), propilcloroformato como agente derivatizante e adição de Na2CO3 e de Na2SO4 para aumentar o pH e a força iônica do meio, respectivamente. Os testes imunológicos atualmente disponíveis para a triagem de ATS em fluido oral são importados e não detectam, mesmo em altas concentrações, os principais ATS consumidos no Brasil: FEN, DIE e MPH. O método por SPME-CG/EM foi linear para os ATS estudados no intervalo de 2-256 ng.mL-1, exceto para o FEN cujo intervalo foi de 4-256 ng.mL-1. Os limites de detecção foram 0,5 ng.mL-1 (MET), 1 ng.mL-1 (MPH) e 2 ng.mL-1 (DIE, AMP, FEN). A exatidão do método situou-se entre 98,2 – 111,9% e a precisão não excedeu 15% de desvio padrão relativo. O método foi aplicado com sucesso na estimação do perfil farmacocinético do FEN e da AMP no fluído oral de seis indivíduos do sexo masculino, após a administração de dose única de especialidade farmacêutica nacional contendo 25 mg de cloridrato de FEN. / The Brazil stands out on the world as a major consumer of amphetamine-type stimulants (ATS), and several national studies have shown high prevalence in the consumption of these substances by professional drivers. Oral fluid has many advantages over the conventional biological fluids for monitoring ATS use on roads, and has been employed with this purpose in several countries. The aim of this study is to assess the specificity/cross-reactivity of commercial oral fluid immunoassays in detecting the prescription ATS marketed in Brazil and to develop and validate a method for confirmation and quantification of amphetamine (AMP), methamphetamine (MET), amfepramone (DIE), fenproporex (FEN) and methylphenidate (MPH) in oral fluid by solid phase microextraction (SPME) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). Analytical specificity of immunoassays was evaluated through the study of the technical information of commercial products and through experimental testing of three kits. The confirmatory SPME-GC-MS method employed SPME immersion technique (DI-SPME), under magnetic stirring, at room temperature, using polydimethylsiloxane (30 μm) fibers, in-matrix propylchloroformate derivatization, Na2CO3 and Na2SO4 to increase both pH and ionic strength. Immunological tests currently available for ATS screening in oral fluid are imported and do not detect, even at high concentrations, the main ATS consumed in Brazil: FEN, MPH and DIE. The SPME-GC-MS method was linear for the studied ATS over the range of 2-256 ng.mL-1, except for FEN where the linear range was 4-256 ng.mL-1. The detection limits were 0.5 ng.mL-1 (MET), 1 ng.mL-1 (MPH) and 2 ng.mL-1 (DIE, AMP, FEN). Accuracy was within 98.2 – 111.9% of the target concentrations and precision did not exceed 15% of relative standard deviation. The method was successfully applied to estimate the pharmacokinetic profile of FEN and AMP in oral fluid of six male subjects after administration of a single dose of 25 mg FEN hydrochloride.

SOUSA, Solange Damasceno. Proteômica do fluido da Rete Testis de carneiros Morada Nova. 2015. 133 f. : Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências, Departamento de Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia. Fortaleza-CE, 2015. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-08-10T12:26:45Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-08-10T15:18:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T15:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_sdsousa.pdf: 3355993 bytes, checksum: 3f9c9ea989725756a91c3d6679b0614a (MD5) Previous issue date: 2015 / The aim of the study was to identify and characterize the proteins of the rete testis fluid from Morada Nova rams. The testicles, obtained from six slaughtered Morada Nova rams, were immediately dissected. The head of the epididymis was separated to gain access to the efferent ducts. The fluid from the efferent ducts was obtained by testis massage. Thereafter, the fluid was centrifuged to remove cell debris and sperm. Proteins were precipitated with acetone at -20°C and quantified by the Bradford assay. Each sample (400 µg) was focused in strips of 13 cm (pH 4-7) and the second dimension was conducted on SDS-PAGE 15%. The gels were scanned with an ImageScanner II (GE Lifesciences, USA) and analyzed using the PDQuest® version 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, USA). Spots detected after PDQuest analysis of 2-D maps were cut from gels and submitted to trypsin digestion. Proteins were identified using tandem mass spectrometry. Protein information obtained by MASCOT was analyzed using the software tool for searching annotations of proteins (STRAP). Protein-protein interaction networks were obtained from STRING version 9.0 database. In the gels were detected 227 ± 32.1 spots (mean ± SD), where 51% of the proteins were found above 40 kDa, corresponding to 65% of the intensity of all spots detected. Based on gene ontology analysis, the most common biological processes associated with proteins from rete testis fluid were regulation (24.28%) and cellular process (23.27%). Binding (27.42%) and catalytic activity (19.30%) corresponded to the most frequent molecular functions for those proteins. The most intensely expressed proteins were: albumin, clusterin, serotransferrin, immunoglobulin gamma-1 chain and alpha-2-HS-glycoprotein. The rete testis fluid has a large quantity of proteins related to the spermatogenesis. This feature is important in view of the fact that these molecules contribute to the development of the germ cells, as a result of the transport and conversion of substances required to the production of male gametes. / O objetivo do estudo foi identificar e caracterizar as proteínas do fluido da rete testis de carneiros Morada Nova. Os testículos, obtidos de seis carneiros Morada Nova abatidos, foram imediatamente dissecados. A cabeça do epidídimo foi separada para ter acesso aos ductos eferentes. O fluido oriundo dos ductos eferentes foi obtido por massagem do testículo. Posteriormente, o fluido foi centrifugado para remoção dos debris celulares e espermatozoides. As proteínas foram precipitadas com acetona a -20°C e quantificadas pelo método de Bradford. Cada amostra (400 μg) foi focalizada em tiras de 13 cm (pH 4-7) e a segunda dimensão foi realizada em SDS-PAGE a 15%. Os géis obtidos foram escaneados com um ImageScanner II (GE Lifesciences, EUA) e analisados utilizando o aplicativo PDQuest® versão 8.0.1 (Bio-Rad Laboratories, EUA). Os spots detectados após a análise dos mapas 2-D no PDQuest foram cortados dos géis e submetidos a digestão com tripsina. As proteínas foram identificadas por espectrometria de massa em tandem. A informação sobre a proteína adquirida pela busca no MASCOT foi analisada através da utilização do programa para anotações de proteínas (STRAP). Redes de interação proteína-proteína foram obtidas a partir do banco de dados STRING versão 9.0. Nos géis foram detectados em média 227 ± 32,1 spots, onde 51% das proteínas se encontraram acima de 40 kDa representando 65% da intensidade de todos os spots detectados nos géis. Com base na análise da ontologia gênica, os processos biológicos mais comuns associados às proteínas do fluido rete testis foram regulação (24,28%) e processos celulares (23,27%). Ligação (27,42%) e a atividade catalítica (19,30%) corresponderam às funções moleculares mais frequentes. As proteínas mais intensamente expressas foram: albumina, clusterina, serotransferrina, imunoglobulina gama-1 e alfa-2-HS-glicoproteína. A maioria das proteínas identificadas desempenha importantes papéis nos processos de espermatogênese, proteção espermática, motilidade, capacitação e reação acrossômica. O fluido da rete testis possui várias proteínas envolvidas na espermatogênese, o que representa um importante fator, uma vez que estas moléculas contribuem para o desenvolvimento das células germinativas, participando no transporte e conversão de substâncias requeridas para a produção dos gametas masculinos.

Espécies do gênero Valeriana são tradicionalmente utilizadas para tratar ansiedade, irritabilidade e desordens de sono. A Organização Mundial da Saúde indica o uso de preparações farmacêuticas como alternativa aos benzodiazepínicos para tratamento da ansiedade e insônia. Entre as substâncias ativas presentes no gênero Valeriana destacam-se os óleos voláteis, valepotriatos, flavonóides e lignanas. Entretanto, estudos farmacológicos com produtos isolados são escassos. Espécies nativas de Valeriana, que ocorrem no Rio Grande do Sul, têm sido estudadas em relação a sua composição química, sendo a espécie Valeriana glechomifolia a que possui maior teor de valepotriatos. Neste estudo, diferentes métodos de extração de valepotriatos foram comparados e extratos enriquecidos em valepotriatos foram testados em modelos animais de sedação, ansiedade e depressão. Valepotriatos isolados foram submetidos a ensaios de ligação a receptores benzodiazepínico e serotonérgico (5HT1A) e ensaios de atividade da enzima Na+K+ATPase. A extração por fluido supercrítico com dióxido de carbono (SCCO2) foi realizada em temperatura constante de 40 oC e pressões variáveis (90, 120, 150 e 200 bar) e demonstrou maior teor de valepotriatos que os métodos de extração por maceração em ultrassom e maceração Entre as diferentes pressões de extração utilizadas no método de SCCO2, o maior teor de valepotriatos foi apresentado pela fração obtida na pressão de 90 bar. Todos os extratos mostraram o mesmo perfil qualitativo de valepotriatos. Flavonóides também foram obtidos através de maceração por ultrassom em metanol. A dose letal mediana dos valepotriatos obtidos por maceração por ultrassom foi de 42±3 mg/kg, i.p. Esta mesma solução extrativa, na dose de 10 mg/kg, v.o. (gavage), foi inefetiva no labirinto em cruz elevado e tempo de sono barbitúrico, sugerindo a ausência de propriedades ansiolíticas e hipnótico-sedativas. Resultados similares foram obtidos com a solução extrativa enriquecida em flavonóides. Valtrato, acevaltrato, 1-b-acevaltrato, diavaltrato e o flavonóide codificado como B6 não apresentaram ligação ao sítio benzodiazepínico do complexo receptor GABAA, nem ao receptor serotonérgico (5HT1A) viii na faixa de concentração de 1-100 μM. Os valepotriatos inibiram a atividade da enzima Na+K+-ATPase na faixa de concentração micromolar. A fração de valepotriatos obtida por SCCO2 (10 mg/kg, gavage) foi efetiva no teste da natação forçada, sem interferir na atividade locomotora espontânea, sugerindo uma atividade do tipo antidepressiva. Em conclusão, a extração por fluido supercrítico com dióxido de carbono mostrou-se eficiente para a obtenção de frações enriquecidas em valepotriatos e estas substâncias representam uma nova classe química com atividade inibitória não seletiva da enzima Na+K+ATPase, e com atividade do tipo antidepressiva. / Species of the genus Valeriana are traditionally used to treat anxiety, irritability and sleep disorders. The World Health Organization indicates pharmaceutical preparations of V. officinalis as an alternative to benzodiazepine drugs for treating anxiety and insomnia. Volatile oil, valepotriates, flavonoids and lignan have been suggested as active substances of the Valeriana genus. However pharmacological studies on isolated compounds are scarce. Species of Valeriana native to Rio Grande do Sul have been studied regarding their chemical composition being Valeriana glechomifolia the species with highest valepotriate’ contents. In this study different methods of extraction of valepotriates from aerial parts of V. glechomifolia were compared, and valepotriate’ enriched extracts were tested in mice models of sedation, anxiety and depression. Isolated valepotriates were submitted to binding to benzodiazepine and 5HT1A receptors, and assayed for the Na+K+ATPase inhibitory activity. The extraction by supercritical carbon dioxide (SCCO2) was carried out at 40 oC under 90, 120, 150 or 200 bar affording higher valepotriates contents than maceration with dichloromethane and ultrasound. The highest valepotriates yielding was obtained with SCCO2 (40 oC , 90 bar). All extracts presented the same qualitative valepotriate’ profile. Flavonoids were also obtained from methanol extracts. The median lethal dose of valepotriates obtained by maceration was determined as 42±3 mg/kg, i.p. This valepotriate’ enriched extract (10 mg/kg, p.o., gavage) was ineffective in the elevated plus maze and barbiturate sleeping time tests suggesting that it does not present anxiolitic or hypnotic-sedative properties. Similar results were obtained with flavonoids’ enriched extract. Valtrate, acevaltrate, 1-b-acevaltrate, diavaltrate and the flavonoid named B6 did not bind to benzodiazepine site of receptor GABAA complex neither to serotonergic receptor (5HT1A) at 1-100 μM. The valepotriates inhibited the Na+K+ATPase activity at micromolar concentration range. The valepotriates fraction obtained by SCCO2 (10 mg/kg, gavage) was effective in the forced swimming test without interfering with the spontaneous locomotor activity suggesting that it presents an antidepressant-like activity. In conclusion the extraction by supercritical carbon dioxide is valuable to obtain valepotriates enriched fractions; and valepotriates seem to represent new chemical entities with no selective inhibitory activity of Na+K+ATPase, as well as with antidepressant-like activity.

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A elevada incidência de acidentes de trânsito está fortemente relacionada ao consumo de bebidas alcoólicas. No Brasil a verificação do uso de álcool entre os condutores é realizada através dos etilômetros e da confirmação do etanol presente no sangue pela técnica de headspace (HS) associada à cromatografia em fase gasosa com detector de ionização de chama (CG/DIC). Não foram encontrados na literatura métodos para determinação de etanol em fluido oral (FO), utilizando a cromatografia em fase gasosa com detector de massas (CG/EM). Objetivos: Realizar a otimização da extração do etanol do fluido oral pela técnica de HS através de desenho experimental e posterior validação de metodologia analítica para a determinação de etanol em FO através de CG/EM e CG/DIC, utilizando o Quantisal® como dispositivo de coleta. Métodos: O desenho experimental foi desenvolvido através do Box–Behnken Design (BBD), onde foram avaliados a temperatura, o tempo de agitação e o volume injetado. O método foi validado de acordo com as recomendações do FDA e ANVISA considerando os parâmetros de seletividade, efeito residual, efeito matriz, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção e quantificação, estabilidade e recuperação. Resultados: As melhores condições do HS obtidas pelo desenho foram: temperatura de 90ºC, volume de injeção de 1000 μL e tempo de extração de 7 min. O método mostrou-se linear na faixa de 0,05-2 g/L (0,5-20 dg/L). Os valores de exatidão situaram-se na faixa de 101,56 e 111,29% e os valores obtidos para a precisão intra e interdia foram inferiores a 12%. Os limites de quantificação e de detecção encontrados foram iguais a 0,0125 g/L e 0,005 g/L para a CG/EM e 0,05 g/L e 0,0129 g/L para a CG/DIC, respectivamente. Conclusões: O método desenvolvido mostrou-se eficaz na determinação inequívoca de etanol em fluido oral através da técnica de HS-CG/EM e utilizando o dispositivo de coleta Quantisal®, atingindo limites de detecção inferiores ao encontrados pelas análises em CG/DIC, sem a necessidade de confirmação por outros sistemas cromatográficos e podendo ser facilmente aplicado na rotina laboratorial. / The high incidence of traffic accidents is strongly related to alcohol consumption. In Brazil the verification of alcohol use among drivers is performed through the breath alcohol analyzers and confirmation of ethanol in blood by the headspace technique (HS) associated to gas chromatography with flame ionization detector (GC/FID). To the best of our knowledge there are no methods for the determination of ethanol in oral fluid (OF), using gas chromatography with mass detection (GC/MS) in the literature. Propose: Perform the optimization of the extraction of ethanol from OF by headspace technique (HS) through experimental design and subsequent validation of analytical method for the determination of ethanol in OF by GC/MS and GC/DIC, using Quantisal® as a collection device. Methods: The experimental design was performed using the Box-Behnken Design (BBD) and the evaluated parameters were temperature, stirring time and sample volume injected. The methods were validated according to FDA and ANVISA recommendations considering the parameters of selectivity, residual effect, matrix effect, linearity, precision, accuracy, limit of detection and quantification, stability and recovery. Results: The best conditions of HS obtained by design were: temperature 90°C, injection volume 1000 μL and extraction time of 7 min. The method was linear in the range of 0.05-2 g/L (or 0.5-20 dg/L). The values of accuracy stay in the range of 101.56 and 111.29% and values for intra and inter-day precision were less than 12%. The limits of detection and quantification were found equal to 0.0125 g/L and 0.005 g/L for GC/MS and 0.05 g/L and 0.0129 g/L for GC/FID, respectively. Conclusions: The method was effective in unequivocal determination of ethanol in oral fluid by HS-GC/MS and using the collection device Quantisal®, reaching detection limits lower than that found by analysis on HS-GC/FID, without the need confirmation by other chromatographic systems and can be easily applied for routine monitoring.

The aim of this study was to analyze the expression of interferon-gamma (INF-γ) in gingival biopsies from shallow and deep sites in patients with severe chronic periodontitis. The secondary objective was to correlate the expression of INF-γ in the gingival crevicular fluid (GCF) with sites where the gingival biopsies were collected. Biopsies from 22 patients with chronic generalized or localized severe periodontitis (mean age 45.5 SD 8.9 years), 22 deep and 18 shallow sites were collected. The control group consisted of 14 patients clinically healthy (mean age 39.35 SD 16.5 years). In total, 54 biopsies were collected from 36 patients. The GCF samples were collected from some of the same sites where biopsies were performed, totaling 12 deep sites, 8 shallow sites and 4 control sites. Clinical evaluation parameters including probing pocket depth (PPD), clinical attachment level (CAL), visible plaque index (VPI) and gingival bleeding index (GBI) were used. The tissue was removed with a 2 mm of diameter punch, in the surgery area (control group) or in the subgingival scaling with or without surgical access (test group) and stored in an Eppendorff with 1 ml of 10% formaldehyde for subsequent morphological and immunohistochemical analysis. The intensity of staining was evaluated semi - quantitatively in the epithelial cells, plasma cells, macrophages, fibroblasts and endothelial cells, considering strong staining (score 2), weak staining (score 1) or absence of staining (score 0). The Kruskal-Wallis test was used to compare the expression of INF-γ in epithelial and connective tissues between the three groups (shallow and deep sites of periodontitis and control sites). We observed a trend for a similar pattern of staining in the shallow and deep sites, with a predominance of weak staining in deep sites. In control sites the staining of the epithelium was predominant. However, we could not demonstrate statistically significant differences between the expression of INF-γ in epithelial and connective tissues in the groups that were analyzed. The Spearman correlation analysis showed a strong correlation between the immunohistochemical expression of INF-γ in the epithelium with macrophages, fibroblasts and endothelial cells (r ≥ 0.6 and p ≤ 0.01). There was no correlation with the expression of INF-γ in the epithelial and connective tissues with the clinical data and with the GCF. We conclude that there were no differences in the expression of INF-γ in gingival biopsies in shallow and deep sites of pacients with periodontitis compared to healthy subjects, which may be attributed to the biphasic character of INF-γ. The low detection of INF-γ in the GCF, within the limitations of the study, may suggest that the GCF may not be the election method for detection of INF-γ. / O objetivo desse estudo foi analisar a expressão do interferon-gamma (INF-) em biópsias gengivais de sítios rasos e profundos de pacientes com periodontite crônica severa. O objetivo secundário foi correlacionar a expressão do INF- no fluido gengival com os sítios onde foram coletadas as biópsias gengivais. Foram coletadas biópsias de 22 pacientes portadores de periodontite crônica generalizada ou localizada severas (idade média 45,5  DP 8,9 anos), sendo 22 sítios profundos e 18 sítios rasos. O grupo controle foi composto por 14 pacientes clinicamente saudáveis (idade média 39,35  DP 16,5 anos). No total, foram 54 biópsias coletadas de 36 pacientes. As amostras do fluido gengival foram coletadas de alguns dos mesmos sítios de onde foram realizadas as biópsias, totalizando 12 sítios profundos, 8 sítios rasos e 4 sítios controle. Foram utilizados os parâmetros clínicos de avaliação de profundidade de bolsa à sondagem (PB); nível de inserção clínica (NIC); índice de placa visível (IPV) e índice de sangramento gengival (ISG). O tecido foi removido com punch de 2 mm de diâmetro, na área cirúrgica (grupo controle) ou na consulta para raspagem subgengival com ou sem acesso cirúrgico (grupo teste) e armazenados em Eppendorffs com 1 ml de solução de formaldeído a 10% para posterior análise morfológica e imuno-histoquímica. A intensidade da marcação do INF- foi avaliada semiquantitativamente nas células epiteliais, plasmócitos, macrófagos, fibroblastos e células endoteliais, considerando-se marcação forte (escore 2), marcação fraca (escore 1) ou ausência de marcação (escore 0). O teste de Kruskal-Wallis foi utilizado para comparar a expressão do INF- nos tecidos epitelial e conjuntivo, entre os três grupos (sítios profundos e rasos da periodontite e sítios controle). Observamos uma tendência a um padrão de marcação similar nos sítios rasos e profundos, com predomínio de marcação fraca nos sítios profundos. Nos sítios controle a marcação do epitélio demonstrou ser predominante. Porém, não foi possível demonstrar diferenças estatisticamente significativas entre a expressão do INF- nos tecidos epitelial e conjuntivo nos grupos analisados. A análise da correlação de Spearman revelou uma forte correlação entre a expressão imuno-histoquímica do INF- no epitélio com macrófagos, fibroblastos e células endoteliais (r ≥ 0,6 e p ≤ 0,01). A expressão do INF- nos tecidos demostrou não ter correlação significante com os dados clínicos apresentados e com o fluido gengival. Concluímos que não foi possível observar diferenças na expressão do INF- em biópsias gengivais nos sítios rasos e profundos de pacientes com periodontite quando comparados à indivíduos saudáveis, o que pode ser atribuído ao caráter bifásico do INF-. A baixa detecção do INF- no fluido gengival, dentro das limitações do estudo, pode sugerir que este talvez não seja o método de eleição para a detecção do INF-Y.

Orientadora: Prof. Dra. Marcella Pecora Milazzotto. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2016. / A maturação de oócitos in vitro é amplamente utilizada para produção de embriões e tenta mimetizar as condições fisiológicas foliculares, permitindo a capacitação oocitária. No entanto, as condições foliculares a que os oócitos estão submetidos previamente a aspiração podem ser responsáveis por diferenças que serão refletidas no fenótipo embrionário. O objetivo deste trabalho foi quantificar marcadores metabólicos no fluido folicular (FF) e transcritos das células da granulosa (CG) de bovinos envolvidos na capacitação do oócito e sua relação com a competência embrionária (avaliada pela cinética e desenvolvimento a blastocisto). Para isso, foram aspirados individualmente complexo cumulus-oocito (COCs) e respectivos FFs e CG de folículos de 7-8mm de ovários de abatedouro comercial. As moléculas de glicose, colesterol, estradiol e piruvato foram quantificadas nos FFs por fluorimetria e os transcritos de receptor de FSH (FSH-R), receptor de angiotensina II (AngIIAT2), receptor de EGF (EGF-R) e aromatase (CYP19A) foram quantificados nas CG por RT-PCR. Os COCs foram fecundados e cultivados individualmente in vitro e os índices de clivagem e cinética embrionária foram avaliados as 40hpi e índices de blastocistos as 186hpi. Posteriormente os dados de desenvolvimento embrionário foram analisados em função dos dados dos respectivos FF e CG. Foram realizadas as seguintes comparações: não clivados x clivados (NCL x CL), clivados rápidos (> 4 células as 40hpi) x clivados lentos (< 4 células as 40hpi) (CLR x CLL), desenvolvimento a blastocisto x bloqueado (BL x NBL), clivados que se desenvolveram a blastocisto x clivados bloqueados (CLBL x CLNBL) e blastocistos derivados do grupo rápido x derivados do grupo lento (BLR x BLL). Os dados foram analisados pelo programa SAS System for Windows pelo teste t de Student, e o nível de significância de 5%. Não houve diferença entre os índices de CLR e CLL (19,2±3,8% e 25,1±3,8%, respectivamente). Da mesma forma, nenhum dos metabólitos e transcritos analisados foram distintos entre CLR x CLL, tampouco NCL x CL, a exceção do FSHR, que foi menos expresso CL, BL e CLBL quando comparados a NCL, NBL e CLNBL. O índice de BL foi (27,3±3,9%) e maior índice de blastocisto foi para BLR do que BLL (18,5±2,7% e 8,8±2,5%, respectivamente). BL e CLBL apresentaram maior quantidade de piruvato e colesterol, aumento de CYP19 e, no caso de CLBL, ainda maiores níveis de ANGII e EGF-R 2 quando comparados a NBL e CLNBL. Em relação a cinética de desenvolvimento, CLR e BLR apresentaram aumento de ANGII e estradiol. Além disso, BLR ainda apresentaram diminuição de CYP19 e EGF-R, sugerindo uma alta atividade esteroidogênica mais relacionada à secreção do que com a síntese de esteroides, provavelmente por um efeito negativo do estradiol no controle da expressão destes genes. Os dados deste estudo permitem concluir que o status folicular tem relação direta com a habilidade do oócito a se desenvolver a blastocisto. Além disso, o aumento da disponibilidade de substrato energético e da capacidade esteroidogênica parece influenciar positivamente a capacitação oocitária. Da mesma forma, embriões de cinética distinta parecem ser derivados de folículos com atividade esteroidogênica distinta. / Follicular conditions established prior to aspiration for in vitro maturation may be responsible for differences that will reflect in the embryonic phenotype. In this work, cumulus-oocyte complex (COCs) and their respective follicular fluid (FF) were individually aspirated from slaughterhouse ovaries. Metabolic biomarkers as glucose, pyruvate, cholesterol and estradiol were quantified in FF by fluorimetry. Specific granulosa cells (GC) transcripts related to oocyte capacitation and steroidogenic capacity such as aromatase (CYP19A), FSH (FSH-r), angiotensin II (ANGII AT2) and EGF (EGF-r) receptors were quantified by RT-PCR. Bovine embryos were produced in vitro following conventional protocols. Embryos were cultured individually and divided into: Fast (> 4 cells at 40 hpi) and Slow (< 4 cells at 40hpi). Blastocyst rates and embryonic competence (evaluated through developmental kinetics and blastocysts rates) were assessed at 186hpi. Embryonic development data was analyzed in function of FF and GC results by comparing: non-cleaved vs. cleaved (NCL x CL), fast vs. slow (CLF x CLS), development to blastocyst x blocked (BL x NBL), cleaved that reached blastocyst stage vs. cleaved that blocked (CLBL x CLNBL) and blastocysts originated from fast vs. slow (BLF x BLS). Embryonic development, quantification of metabolites and transcripts were compared by Student t test using SAS for Windows considering á=5%. Cleavage rates were not different between fast and slow embryos (19.2±3.8% and 25.1±3.8%, respectively). Except for FSH-r, that was less expressed in CL, BL and CLBL than their respective counterparts NCL, NBL and CLNBL, all the other metabolites and transcripts did not present any differences. Total blastocyst rate was 27.3±3.9%, being 18.5±2.7% from BLF and 8.8±2.5% from BLL groups. BL and CLBL presented higher amounts of pyruvate and cholesterol, and an increased expression of CYP19 when compared to NBL and CLNBL, respectively. Also, CLBL presented higher levels of ANGII AT2 and EGF-r than CLNBL, suggesting that BL and CLBL derived follicles have a greater steroidogenic capacity. Regarding developmental kinetics, CLR and BLR presented an increase in ANGII AT2 and estradiol and diminished levels of CYP19 and EGF-R, suggesting an elevated secretion of steroids. Therefore, BLL, with increased expression of CYP19 and EGF-r under lower levels of estradiol and ANGII AT2 are preferably directed to the synthesis than secretion of this hormone. In summary, our results show that follicular status is direct ly related to the oocytes 4 ability to develop to blastocyst. In addition, the increased availability of energy substrates and steroidogenic capacity appears to positively influence the oocyte capacitation. Likewise, embryos with distinct developmental kinetics seem to originate from follicles with distinct steroidogenic activity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-08-13Bitstream added on 2014-06-13T20:32:52Z : No. of bitstreams: 1 carrera_fh_me_ilha.pdf: 1664760 bytes, checksum: 5e03e489b4282bd00667bb00a9844991 (MD5) / PROPG / O presente trabalho tem por objetivo obter numericamente os valores das distribuições de pressões devidas a ação do vento e seus respectivos coeficientes de pressões de formas externos em torres de seção circular. As distribuições de pressões nas torres são determinadas através da simulação numérica, utilizando-se o programa ANSYS 9.0, considerando-se a interação fluido-estrutura. Para a simulação numérica, a geometria da torre foi modelada tridimensionalmente, considerando como fluido o ar no qual a edificação está inserida. As distribuições de pressão foram determinadas para relações geométricas em planta da torre, entre a altura e o diâmetro (h/d), para valores menores ou iguais a 10. Posteriormente, comparam-se os resultados numéricos obtidos na simulação através do ANSYS com os valores apresentados pela norma NBR-6123:1988, a fim de verificar a viabilidade da utilização da simulação numérica na obtenção das distribuições de pressão em outras estruturas. / The present work has for objective to obtain the distributions pressures values the wind actions in tower with circular section. The values of the distributions pressures are obtained to the numeric simulation, using the ANSYS 9.0 software and considering the flow structure interaction. In the numeric simulation, the tower geometry was considered in 3D dimension, and the flowed it is the air. The distributions pressures were certain for geometry relationships between the height and the diameter (h/d), for values smaller or equal than 10. Later, the ANSYS numeric results are compared with the presents values by the NBR 6123:1998, in order to verify the viability numeric simulation used for obtaining the pressures distributions in other structures.

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