Orientador: Paulo Mazzafera / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T10:40:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Geromel_Clara_D.pdf: 2807679 bytes, checksum: 87559525feb767ee465302f9b3380513 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Sabendo-se que a produtividade da cultura de café está diretamente ligada a três fatores básicos de produção, climáticos, genéticos e fisiológicos, nesse estudo foram abordados alguns aspectos do metabolismo de carboidratos envolvidos no processo de enchimento dos frutos de café ao longo do seu desenvolvimento. A composição de carboidratos, principalmente de polissacarídeos do grão (endosperma) de café é conhecida, assim como a importância dos açúcares sobre a qualidade da bebida, porém a importação de sacarose a partir de folhas e seu desdobramento nos frutos ainda não são completamente esclarecidos. Os açúcares utilizados no metabolismo das sementes são de extrema importância, tendo como exemplo a regulação da relação fonte-dreno, além de controlar a expressão de genes que codificam algumas enzimas envolvidas no metabolismo de açúcares. O trabalho teve como principal objetivo estudar o metabolismo de sacarose nos frutos de café, ao longo do desenvolvimento. Análises histológicas e fornecimento de compostos marcados mostraram que não existem conexões vasculares entre os tecidos, pericarpo,perisperma e endosperma, mas vasos condutores que percorrem o funículo chegam até o perisperma, permitindo um descarregamento direto de fotoassimilados produzidos nas folhas e dele a transferência para o endosperma, além de receber fotoassimilados do pericarpo, pelo transporte de célula a célula. A fotossíntese no pericarpo diminui ao longo do desenvolvimento do fruto. Grãos de amido foram observados nos estados jovens do perisperma e à medida que surge o endosperma, esses grãos vão desaparecendo em regiões próximas ao tecido que está sendo formado. As enzimas e os teores de açúcares endógenos avaliados em tecidos separados ao longo da maturação do fruto apresentaram diferenças entre diferentes tratamentos da lavoura (¿pleno sol¿: condições normais de cultivo, sombreamento e carga reduzida). A sacarose sintase (SUS) apresentou valores de atividades bem maiores que das invertases ácidas (IAV). A sacarose fosfato sintase (SPS) acompanhou o acúmulo de sacarose no estádio inicial no pericarpo de frutos de café. Foi mostrada a existência de duas isoformas de SUS, codificadas por dos genes chamados CaSUS1 e CaSUS2 em C. arabica, que possivelmente desempenham diferentes funções metabólicas nos diferentes tecidos do fruto de café. Esses genes apresentam uma expressão diferencial, com CaSUS1 expressando-se nas fases jovens do desenvolvimento do perisperma e do endosperma; porém a expressão de CaSUS2 sobrepõe os picos de atividade SUS detectados e o acúmulo de sacarose nos estados finais de desenvolvimento do pericarpo e do endosperma. Isso sugere que a isoforma CaSUS1 está relacionada à degradação de sacarose, quando parece claro que a isoforma CaSUS2 está relacionada com a síntese desse açúcar. Foi mostrado que esses dois genes se expressam também in C. racemosa, pois as sondas CaSUS1 e CaSUS2 de C. arabica reconheceram transcritos (mRNA) no endosperma dessa espécie. Portanto, os genes CrSUS1 e CrSUS2 parecem codificar para isoformas de SUS que desempenham funções diferentes daquelas observadas em C. arábica; SUS1 parece estar relacionado com a síntese da sacarose. O sombreamento influenciou na duração do ciclo de desenvolvimento dos frutos, tornando-o mais longo que no pleno sol (respectivamente 260 e 231 dias após o florescimento) e alterando o acúmulo de sacarose nos frutos. Com base nesses resultados fica clara a complexidade do metabolismo de sacarose em frutos de café, visto que nem sempre as atividades enzimáticas seguem o mesmo padrão de acúmulo de açúcares e enzimas de degradação e ressíntese de sacarose atuam simultaneamente, assim como a transferência de açúcares entre os tecidos / Abstract: Since coffee culture productivity is straightly connected to three basic production factors: climate, genetics and physiology, herein some aspects of the carbohydrates metabolism involved in the process of coffee grains filling through its development were analyzed. It is known the carbohydrates composition, mainly the polysaccharides composition of the coffee grain (endosperm) as well as the importance of sugars in the beverage quality, nevertheless the sucrose import from the leaves and its sharing in the fruits are still to be completely clarified. The sugars utilized in the seeds metabolism are extremely important, such as in the regulation of the drain-source relation and in the expression control of genes that codify some enzymes involved in sugars metabolism. The main goal of this work was to study the sucrose metabolism in coffee fruits through their development. Histological analyses and marked compounds supply showed that there are no vascular connections among the tissues of the pericarp, perisperm and endosperm, but conduction vases that run through the funiculus get to the perisperm, enabling an unloading of photoassimilates produced in the leaves. From the perisperm, these assimilates are transferred to the endosperm; The pericarp photosynthesis diminishes through the fruit development. Starch grains were observed in juvenile stages of the perisperm and during the endosperm formation these grains start to disappear in regions close to the forming tissue. The enzymes and the endogenous sugar level evaluated in separated tissues through fruit maturation show some differences among distinct lavoura treatments (¿full sun¿: ordinary culture conditions, shadowing and reduced loading). The sucrose synthase (SUS) showed activity values much higher than the ones presented by the acid invertases (IAV). The sucrose phosphate synthase (SPS) followed the sucrose accumulation in the pericarp initial stage in coffee fruits. It was shown the existence of two isoforms of SUS codificated by genes called CaSUS1 e CaSUS2 in C. Arabica, that possibly play different metabolic roles in different tissues in coffee fruit. These genes show a differential expression, in which CaSUS1 is expressed in the juvenile stage of perisperm and endosperm development; however, CaSUS2 expression overlaps the detected activity peaks of SUS and the sucrose accumulation in the final stages of pericarp and endosperm development. This fact suggests that the CaSUS1 isoform is related to sucrose degradation while it seems clear that the CaSUS2 isoform is related to sucrose synthesis. Both genes were shown to be also expressed in C.racemosa since CaSUS1 and CaSUS2 C. arabica probes recognized transcripts (mRNA) in this species endosperm. Therefore, CrSUS1 and CrSUS2 genes seem to codify SUS isoforms that play different functions from the ones observed in C. arabica; SUS1 seems to be related to sucrose synthesis. The shadowing has influenced the fruits development cycle duration, turning it longer than in pleno sol (respectively, 260 and 231 days after flowering) and altering the sucrose accumulation in fruits. According to these results, it is clear how complex is the sucrose metabolism in coffee fruits, since it is not always that the same pattern of sugar accumulation is followed by the enzymatic activities and enzyme degradation and sucrose (re)synthesis act simultaneously as well as sugar transference among tissues / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Biologia Vegetal

Orientador: Cecilia Amelia de Carvalho Zavaglia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-08-07T21:15:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leal_ClaudeneteVieira_M.pdf: 5685507 bytes, checksum: 57585e6d19469dc1898123b62c967679 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Os cimentos ósseos a base de fosfato de cálcio são materiais cerâmicos que apresentam biocompatibilidade devido a sua composição química semelhante à dos ossos, e bioatividade, promovendo a osteocondução. Com essas características, é possível a utilização desses materiais como implantes ósseos ou como preenchimento. Os cimentos de fosfato de cálcio são materiais constituídos por um pó e um líquido, que, ao serem misturados formam uma pasta que endurece espontaneamente à temperatura ambiente ou corpórea como resultado da precipitação de um ou vários fosfatos de cálcio. O pó pode ser composto por um ou vários fosfatos de cálcio, outros sais de cálcio e aditivos orgânicos. O líquido pode ser água ou soluções aquosas de compostos de cálcio ou fosfato. A proposta desse trabalho foi estudar a síntese de monólitos de fosfatos de cálcio baseado no sistema ß-Fosfato Tricálcio/Ácido Fosfórico (ß-TCP/H3PO4), que produz hidrogeno fosfato de cálcio dihidratado (DCPD), um cimento de fosfato de cálcio que possui como principal vantagem baixo custo e a desvantagem de possuir pH ácido, podendo causar necrose em tecidos. Para contornar esse problema, o DCPD foi convertido em apatita pela hidrólise em solução alcalina. O estudo envolveu a síntese do ß-TCP, a preparação do cimento, caracterizações físicas e químicas e o estudo do cimento em Fluido Corpóreo Simulado (FCS), solução que simula o plasma sanguíneo humano, para avaliar seu comportamento in vitro / Abstract: Calcium phosphate bone cements are ceramics materials that present biocompatibility because of their chemical composition similar to the human bone, and bioactivity, promoting osteocunduction. Due to these characteristics, it is possible the use of these materials as bone implants. Calcium phosphate cements are composed of a powder and liquid phases, which, when mixed form a paste that hardens spontaneously as result of the precipitation of one or more calcium phosphates. The powder may be composed of one or some calcium phosphates, others salts and organics additives. The liquid may be water or calcium phosphates aqueous solutions. The purpose of this work is the synthesis of calcium phosphate monoliths based on ß-tricalcium phosphate/ortho-phosphoric acid (ß-TCP, Ca3(PO4)2/H3PO4), that produce dicalcium phosphate dehydrate (DCPD, CaHPO4.2H2O) as phase precipitated as a result of the setting reaction. DCPD is inexpensive, but is quite soluble and has an acidic hydrolysis, which may cause necrosis in vivo. To resolve this problem, DCPD was converted in apatite phase by hydrolysis in NaOH aqueous solution. This study included ß-TCP synthesis, cement preparation, chemical and physical characterizations and the study of the cement in Simulated Body Fluid (SBF), with ion concentrations nearly equal to those of human blood plasma, to evaluate the in vitro behavior / Mestrado / Materiais e Processos de Fabricação / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Mário Alexandre Coelho Sinhoreti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T06:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vitti_RafaelPino_D.pdf: 971338 bytes, checksum: 04747212bf9b8bde6e4a37081ac788e6 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os objetivos neste trabalho foram (1) avaliar e comparar propriedades físico-químicas de cimentos endodônticos, sendo um recentemente desenvolvido à base de mineral trióxido agregado (MTA Fillapex, Angelus, Londrina, Brasil) e outro à base de resina epóxica (AH Plus, Dentsply, Konstanz, Alemanha); e (2) desenvolver e avaliar propriedades físico-químicas de três cimentos endodônticos experimentais à base de MTA e uma resina de salicilato com diferentes fosfatos de cálcio (CaP). Os materiais foram manipulados de acordo com as instruções dos fabricantes. Os cimentos experimentais foram compostos de pastas bases e catalisadoras misturadas em 1:1. A pasta base foi composta de 60% de óxido de bismuto e 40% de butilenoglicol dissalicilato. Três diferentes pastas catalisadoras foram formuladas contendo: (1) 60% de MTA, 39% de Resimpol 8 e 1% de dióxido de titânio; (2) 40% de MTA, 39% de Resimpol 8, 20% de hidroxiapatita e 1% de dióxido de titânio e; (3) 40% de MTA, 39% de Resimpol 8, 20% de fosfato dibásico de cálcio diidratado e 1% de dióxido de titânio. MTA Fillapex foi usado como controle. O tempo de trabalho e escoamento foi testado de acordo com a ISO 6876:2001 e o tempo de presa de acordo com a ASTM C266 (n=3 para cada material e teste). Os materiais foram colocados em moldes de PVC (8 mm x 1,6 mm) e armazenados em recipientes contendo 20 ml (testes de solubilidade e absorção de água) ou 10 ml (ensaios de pH e liberação de cálcio) de água deionizada a 37ºC (n=10 para cada material e teste). Em 1, 7, 14 e 28 dias as amostras foram removidas dos recipientes e secas para aferiação da solubilidade e absorção de água. Após 3 e 24 horas e 4, 7, 14 e 28 dias, a água dos recipientes foi coletada para análises do pH e liberação de cálcio. Os dados foram analizados usando ANOVA um fator e teste de Tukey (5%). MTA Fillapex mostrou menores valores de escoamento e tempos de trabalho e presa em relação ao AH Plus (p<0,05). MTA Fillapex obteve os maiores valores de escoamento e tempos de trabalho e presa em comparação aos materiais experimentais (p<0,05). MTA Fillapex apresentou os menores valores de solubilidade e absorção de água (p<0,05). Todos os cimentos experimentais e o MTA Fillapex apresentaram pH básico e liberação de íons cálcio. MTA Fillapex e AH Plus mostraram valores de acordo com a ISO 6876:2001. Os materiais experimentais apresentaram propriedades físico-químicas satisfatórias / Abstract: The aims of this study were (1) to evaluate and to compare physicochemical properties of endodontic sealers, a recent calcium-silicate based sealer (MTA Fillapex, Angelus, Londrina, Brazil) and other an epoxy resin based sealer (AH Plus, Dentsply, Konstanz, Germany); and (2) to develop and to evaluate physicochemical properties of three experimental root canal sealers made by mineral trioxide aggregate (MTA) and a salicylate resin with different calcium phosphates (CaP). The materials were handled following the manufacturer's instructions. The experimental materials were composed of a base and a catalyst pastes mixed in a 1:1. The base paste was made by 60% bismuth oxide and 40% butyl ethylene glycol disalicylate. Three different catalyst pastes were formulated with: (1) 60% MTA, 39% Resimpol 8 and 1% titanium dioxide; (2) 40% MTA, 39% Resimpol 8, 20% hydroxyapatite and 1% titanium dioxide and; (3) 40% MTA, 39% Resimpol 8, 20% dibasic calcium phosphate dihydrate and 1% titanium dioxide. MTA Fillapex was used as control. The working time and flow were tested according to ISO 6876:2001 and the setting time according to ASTM C266 (n=3 for each material and test). The materials were placed into PVC molds (8 mm x 1.6 mm) and stored in containers with 20 mL (solubility and water absorption tests) or 10 mL (calcium release and hydroxyl ions tests) of deionized water at 37°C (n=10 for each material and test). At 1, 7, 14 and 28 days the samples were removed from the solutions and dry for solubility and water absorption tests. After 3 and 24 h and 4, 7, 14, 28 days the soaking water was collected for Ca and pH analysis. The data were analyzed using one-way ANOVA with Tukey's test (5%). MTA Fillapex showed lower values of flow and working and setting times when compared to AH Plus (p<.05). MTA Fillapex had the higher values of flow and working and setting times when compared to experimental materials (p<.05). MTA Fillapex presented the lowest values of solubility and water absorption (p<.05). All experimental cements and MTA Fillapex showed basifying activity and released calcium ions. MTA Fillapex and AH Plus showed values in according to the ISO 6876:2001. The experimental materials showed satisfactory physicochemical properties / Doutorado / Materiais Dentarios / Doutor em Materiais Dentários

Orientador: Artur Torres Cordeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T07:11:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ranzani_AmericoTavares_M.pdf: 3887425 bytes, checksum: 3ae590890f0f321ec227cb9c0967c6de (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Tripanossomíases são enfermidades associadas à infecção por protozoários do gênero Trypanosoma. Estas doenças são normalmente tratadas com medicamentos de alta toxicidade e baixa eficiência. A pesquisa de novos compostos que atuem de maneira específica contra alvos metabólicos pré-estabelecidos pode levar ao desenvolvimento de fármacos mais eficientes no tratamento destas enfermidades. A enzima glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) é um alvo metabólico validado experimentalmente em Trypanosoma brucei. A G6PD catalisa o primeiro passo da via de síntese de pentoses que supre a célula com ribose-5-fosfato para síntese de bases nitrogenadas e NADPH para biosíntese de lípideos, colesterol e neutralização de espécies reativas de oxigênio. O esteróide desidroepiandrosterona (DHEA) e seus análogos são conhecidos inibidores incompetitivos da enzima humana e recentemente foram caracterizados também como potentes inibidores da G6PD de T. brucei e T. cruzi. Estes esteróides também apresentam efeito citotóxico à forma sanguínea de T. brucei e à forma epimastigota de T. cruzi. Em conjunto, estes resultados sugerem que esteróides análogos do DHEA devam ser explorados como uma nova classe de fármacos antiparasitários. Apesar de já haver estruturas da enzima, o sítio de ligação destes esteróides não é conhecido, informação que ajudaria no desenho racional de novos inibidores. Assim, este projeto teve como objetivo principal a identificação do sítio de inibição por cristalografia. Conseguiu-se estabelecer um protocolo de expressão, purificação e cristalização para a G6PD humana. Testou-se a co-cristalização, seeding e soaking com os esteróides DHEA, epiandrosterona (EA) e 16-bromo-epiandrosterona (16BrEA) com os substratos da enzima, além de outros complexos com frutose-6-fosfato, glucosamina-6-fosfato e NADPH. Na tentativa de diminuir a atividade da enzima para facilitar a cristalização com os substratos e os esteróides, fez-se o mutante D200N, que além de ser menos ativo, também apresentou uma menor inibição pelos esteróides. A enzima humana se apresenta como um equilíbrio de dímero e tetrâmero, não se sabendo a influência destes estados na atividade da enzima. Assim, para favorecer somente um estado oligomérico, foram avaliadas mutações na interface do tetrâmero. A mutação A277C permite a formação de uma ponte dissulfeto com a C294, estabilizando o tetrâmero. A mutação E347A é capaz de desestabilizar o tetrâmero, favorecendo a forma dimérica. Embora não tenha sido possível obter a estrutura da enzima com os esteróides, conseguiu-se pela primeira vez apontar para um resíduo importante para a inibição, o que abre oportunidade para investigações futuras que podem levar à descrição do sítio de inibição / Abstract: Trypanosomiases are infectious diseases caused by protozoan parasites from genus Trypanosoma. Such diseases are currently treated with low effective and highly toxic drugs. The research of novel compounds which inhibits validated metabolic targets might lead to the development of more efficient drugs to such neglected diseases. The enzyme glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) was experimentally validated as a metabolic target in T. brucei bloodstream form. G6PD catalyzes the first step of the pentose phosphate pathway (PPP), which supplies the cell with ribose-5-phosphate for synthesis of nucleotides and NADPH for biosynthesis of lipids, cholesterol and detoxification of reactive oxygen species. The steroid Dehydroepiandrosterone (DHEA) and analogues are known uncompetitive inhibitors of the human G6PD and recently they were also characterized as potent inhibitors of T. brucei and T. cruzi G6PD. It was also demonstrated that these steroids are toxic to cultured T. brucei bloodstream form and T. cruzi epimastigote form. Together these results suggest that DHEA derivatives must be explored as a novel anti-parasite drug class. Although the structure of the enzyme is solved, the binding site of these steroids is unknown, information that would help in the rational design of new inhibitors. So, the main goal of this project was the identification of the inhibition site by crystallography. It was established an expression, purification and crystallization protocol for the human G6PD. It was tried the co-crystallization, seeding and soaking of the steroids DHEA, epiandrosterone (EA) and 16-bromo-epiandrosterone (16BrEA) with the substrates of the enzyme, beyond other complexes with fructose-6-phosphate, glucosamine-6-phosphate and NADPH. Attempting to diminish the enzyme activity to facilitate the crystallization with the substrates and the steroids, it was made the mutant D200N, which not only is less active, but it's also less inhibited by the steroids. The human enzyme is in equilibrium between dimer and tetramer, being unknown the effect of these states to the enzyme activity. This way, to favor one oligomer state, it was assessed mutations at the tetramer interface. The mutation A277C allows the formation of a disulfide bond with the C294, stabilizing the tetramer. The mutation E347A is able to destabilize the tetramer, favoring the dimer. Although it was not possible to determine the structure of the enzyme with the steroids, for the first time it was shown the involvement of a residue in the steroid inhibition, which makes possible future investigations that can lead to the inhibition site description / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestre em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientadores: Mario Alexandre Coelho Sinhoreti, Americo Bortolazzo Corrrer / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T12:38:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felizardo_KlissiaRomero_D.pdf: 5538718 bytes, checksum: 380cb510516fc2b1b84875f344139970 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O objetivo do estudo foi gerar uma nova metodologia restauradora, através de um compósito fluído fotopolimerizável com fosfatos de cálcio e incorporação de tri-metafosfato de sódio em primer autocondicionante para auto-produção de fosfoproteína biomineralizadora da matriz de colágeno na interface de união. A hipótese desse trabalho foi de que a inovadora metodologia irá recuperar as propriedades mecânicas, remineralizará e aumentará a longevidade da interface de união. No Capítulo 1 foi realizado análise qualitativa em relação à presença de fosfato e apatita carbonata nas amostras de dentina desmineralizada e após contato com os compósitos experimentais (VSG1- 0% fosfato, VSG2- 10% fosfato, VSG3- 20% fosfato e VSG4- 30% fosfato) armazenados em água destilada e solução de PBS no período de 24h, 7 dias, 1 e 3 meses. As amostras foram analisadas por espectroscopia (ATR / FTIR) e análise microscópica (ESEM / EDX). Os dados foram submetidos à análise de variância de três fatores e teste de Tukey ('alfa'=0.05). Em 24h os maiores picos referentes às bandas de apatita carbonatada (CO32- - v2) fosfato (PO43- - v1,v3) e bruxita (DCPD- vO-H) foram para os grupos VSG2 (água destilada) e VSG3 (PBS). Em 7 dias esses picos diminuiram e ocorreu aumento dos picos para os grupos VSG1 (água destilada), VSG2 (PBS) e VSG4 (PBS). Após 1 mês, o material VSG2 (PBS) apresentou aumento do pico, por outro lado o grupo VSG4 (PBS) manteve-se similar ao do período de 7 dias. Aos 3 meses, nota-se aumento para o material VSG3 (água destilada) e grupo controle (VSG1) em PBS. A análise em EDX não mostrou diferença estatística entre os grupos no decorrer do tempo. No Capítulo 2, o objetivo foi avaliar a influência de fosfato de cálcio como partículas de carga em relação ao grau de conversão, dureza, resistência flexural e módulo elástico. O material experimental VSG4 mostrou maiores valores de dureza após 6 meses e maior grau de conversão nos períodos de 3 meses e 6 meses. Maiores valores de resistência à flexão foram encontrados para o material experimental VSG2 bem como para o material comercial Wave HV (SDI). Maior módulo de elasticidade foi obtido para o material VSG4, valores estes similares aos obtidos para o material comercial Filtek Z350XT (3M/ESPE). Assim, pode-se concluir que a utilização de fosfatos de cálcio não afetou as propriedades mecânicas após envelhecimento em solução de PBS. No Capítulo 3, o objetivo foi avaliar por microscopia de confocal e microscopia óptica a micropermeabilidade por penetração de corante fluoresceína e nanoinfiltração por nitrato de prata amoniacal na camada híbrida assim como a resistência adesiva nos períodos de 24 h e 6 meses em solução de PBS. Os dados referentes ao teste de união foram submetidos à análise de variância de dois fatores e teste de Tukey ('alfa'=0.05). Os resultados mostraram que em relação à resistência adesiva não houve diferença estatística entre os grupos e período de armazenamento. A inclusão de fosfato de cálcio e o uso de tri-metafosfato de sódio auxiliaram no processo de remineralização para o material experimental VSG3 e VSG4 os quais mostraram melhores resultados, reduzindo a permeabilidade dentinária após 6 meses / Abstract: The aim of this study was to generate a new therapeutic restorative methodology through a flowable composite with bioactive calcium phosphates and incorporation of sodium tri-metaphosphate in self-etching primer will serve as a biomimetic analogs to self-phosphoprotein biomineralization production of collagen within the matrix the bonded interface. The hypothesis is that the revolutionary biomineralisation will recover the biomechanical properties, remineralise and increase the longevity of the bonded interfaces. In the chapter 1 was designed to qualitatively compare the presence of phosphate and carbonated apatite between demineralized dentin samples and experimental composite (VSG1- 0% phosphate, VSG2- 10% phosphate, VSG3- 20% phosphate e VSG4- 30% phosphate) storage in distilled water and PBS solution in 24h, 7 days, 1 e 3 months. The samples were analyzed by (ATR/FTIR) and (ESEM/EDX). Data were subjected to variance analysis with three factors and Tukey ('alfa' = 0.05). The results showed that in 24 hours the higher peak related the bands of carbonated apatite (CO32- - v2), phosphate (PO43- - v1,v3) and brushite (DCPD- vO-H) was found to the experimental material VSG2 (distilled water) and VSG3 (PBS). After 7 days, these same peaks suffered a drop therefore having an increased peak to control group VSG1 (distilled water), VSG2 (PBS) and VSG4 (PBS) groups. At 1 month , the material VSG2 (PBS) showed an increase in their peak, on the other hand VSG4 group (PBS solution) was maintained as compared to results 7 days and after 3 months, was an increase in the peaks to VSG3 materials (distilled water) and control group (VSG1) in PBS solution. The EDX analysis showed no statistical difference between the groups over time. In the chapter 2, the objective was to evaluate the in?uence of calcium phosphate as a filler in experimental composite and their correlation with the degree of conversion, microhardness, flexural resistance and elastic modulus. The experimental material VSG4 showed higher hardness values after 6 months and higher degree of conversion at 3 months and 6 months. Further flexural strength values were found for the experimental material VSG2 well as the commercial material Wave HV (SDI). Higher elasticity modulus was obtained for the experimental material VSG4, similar values to the commercial Filtek Supreme (Z350XT- 3M/ESPE). Thus, it can be concluded that the use of calcium phosphate did not affect the mechanical properties after storage in PBS solution. In the chapter 3, the aim was evaluated by confocal microscopy and optcial microscopy the micropermeability by fluorescein dye penetration and the nanoleakage by ammoniacal silver nitrate as well as the adhesive strength over 24h and 6 months in buffer solution (PBS) by microtensile test. Data on microtensile test were subjected to variance analysis with two factors and Tukey ('alfa'= 0.05). The results showed that the bond strength was not statistically different between the experimental groups. The calcium phosphate inclusion as filler particles and the use of tri-sodium metaphosphate aided in the remineralization process mainly to the experimental material VSG3 and VSG4 which showed better micropermeability and nanoleakage reducing dentin permeability after 6 months. / Doutorado / Materiais Dentarios / Doutora em Materiais Dentários

Orientador: Jaime Aparecido Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T12:48:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandez_ConstanzaEstefany_D.pdf: 2276340 bytes, checksum: 1735521ece2fdcfcf30384ce9aabe6df (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Dentifrício fluoretado (DF) de concentração convencional (1000-1500-ppm) é eficiente no controle da cárie de esmalte, entretanto seu efeito na cárie radicular pode não ser o mesmo devido à maior susceptibilidade da dentina à cárie. Essa diferença poderia ser compensada pelo uso diário de DF de maior concentração (DF-5000-ppm) ou da combinação da aplicação profissional de fluoreto (APF) com uso diário de DF-1100-ppm. Entretanto, além dessa comparação nunca ter sido pesquisada, a diferença do efeito entre esmalte e dentina tem sido pouco estudada num único experimento. Em acréscimo, o efeito de DF-5000-ppm na dentina radicular se limita a estudos do efeito da remineralização. O Capítulo 1 dessa tese descreve a validação do modelo de biofilme de Streptococcus mutans (SM) para estudar o efeito dose resposta de DF na redução da desmineralização (des-) do esmalte e dentina radicular. No Capítulo 2, foi avaliado in situ o efeito dose-resposta de DF e o efeito de DF-5000-ppm ou a combinação de APF com DF-1100-ppm na redução da des- e ativação da remineralização do esmalte e dentina radicular. No capítulo 1, biofilmes de SM foram crescidos sobre blocos de esmalte e dentina radicular, os quais foram expostos à sacarose 8x/dia e 2x/dia às soluções fluoretadas contendo 0, 150, 450 e 1350-ppm. Ao final do experimento, a concentração de F foi determinada nos biofilmes e nos blocos a dureza de superfície (DS) e F-solúvel em ácido (FAp). No capítulo 2, num desenho cruzado, duplo-cego de 4 fases de 14 dias cada, 18 sujeitos utilizaram dispositivo palatino contendo blocos hígidos e cariados de esmalte e de dentina radicular. Biofilme foi permitido ser acumulado sobre os blocos, os quais foram expostos à sacarose 8x/dia ou 3x/dia, nos blocos hígidos ou cariados, respectivamente. Os tratamentos foram: 1) Dentifrício-placebo (DP); 2) DF-1100; 3) DF-5000; 4) único pré-tratamento dos blocos com APF (gel acidulado, 12300-ppm) combinado com DF-1100 (APF+DF-1100). Dentifrícios foram usados 2x/dia. No fluido e porção sólida do biofilme foram determinadas as concentrações de F. Nos blocos a porcentagem de perda (%PDS) ou recuperação da DS (%RDS), nos substratos hígidos e cariados respectivamente, como também as áreas de lesão de cárie (?S). F-solúvel em álcali e ácido também foram determinadas nos blocos. Os resultados in vitro mostraram que o modelo apresentou efeito dose-resposta, havendo em função da concentração de F um aumento de F no biofilme e um aumento da concentração de FAp e decréscimo da %PDS nos blocos de esmalte-dentina. O efeito do F na redução da desmineralização no estudo in vitro foi menor na dentina do que o observado no esmalte. Os dados in situ mostraram efeito dose-resposta para a concentração de F nos dentifrícios (0;1100;5000) para a maioria das variáveis analisadas, à exceção do ?S para dentina-cariada. Na comparação dos tratamentos, APF+DF-1100 foi estatisticamente mais eficaz que DF-5000 reduzindo desmineralização e ativando a remineralização da dentina radicular. Os resultados dessa tese sugerem que o efeito de DF no controle de cárie de esmalte ou dentina é concentração dependente, sendo a combinação com APF mais relevante para dentina-radicular que para esmalte / Abstract: Fluoride dentifrice (FD) of conventional concentration (1,000-5,000 ppm) is efficient for enamel caries control; however, it is possible that their effect might not be the same for root-caries because dentine is more caries susceptible. This difference could be compensated by the daily use of high concentration FD (5,000 ppm-FD) or by the combination of professional fluoride application with daily use of 1,100 ppm-FD. Besides, this comparison has never been researched; the difference of effect between enamel and dentine has been scarcely evaluated in the same experiment. In addition, the effect of 5,000-FD has been focused essentially on root-caries remineralization. Chapter 1 of this thesis describes the validation of a Streptococcus mutans (SM) biofilm model to study the dose-response effect of FD in the reduction of demineralization (de-) on enamel and root-dentine. In Chapter 2, it was evaluated in situ the FD dose-response effect and the effect of FD-5000 ppm or the combination of acidulated phosphate fluoride (APF) application with DF-1100 ppm in the reduction of de- and activation of remineralization on enamel and root-dentine. In chapter 1, SM biofilms were grown on enamel and root-dentine slabs, and exposed 8x/day to sucrose and 2x/day to fluoridated solutions containing 0, 150, 450 and 13,50-ppm. At the end of the experiment, F-concentration in the biofilms was determined and surface hardness (SH) and acid-soluble-F (FAp) were assessed in the slabs. In chapter 2, in a cross-over and blind design of 4 phases of 14 days each, 18 subjects wore a palatine appliance containing sound and carious slabs of enamel and root-dentine. Biofilm was allowed to accumulate on the slabs and while the sound slabs were exposed to sucrose 8x/day the carious were exposed 3x/day. The treatment groups were: 1) F-placebo dentifrice (PD); 2)1,100-FD; 3) 5,000-FD; 4) slabs pre-treated with APF (F-gel, 12,300 ppm-F) combined with daily use of 1100-FD (APF+1,100-FD). Dentifrices were used 2x/day. The F concentration was determined in fluid and solid portions of the biofilm. In slabs, the percentage of SH loss (%SHL) or recovery (%RSH) was estimated in sound and carious slabs, respectively, as well as the caries lesion area (?S). Acid-soluble-F and alkali-soluble-F concentrations were also determined in the slabs. The in vitro results showed that the model presented a dose-response effect, with an increment of F concentration in the biofilm and an increment of FAp in function of F concentration of the treatments. Also, %SHL showed a reduction in enamel and dentine slabs according to the treatments. F effect on the reduction of demineralization was lower on dentine than that observed on enamel. The in situ data showed a dose-response effect to F concentration in the dentifrices (0;1,100;5,000) for most response variables, with the exception of ?S for carious-dentine. In the treatments comparison, APF+1100-FD was statistically more effective than 5000-FD at reducing demineralization and activating remineralization in root-dentine. The results from this thesis suggest that the FD effect in enamel and dentine caries control is concentration-dependent, and the combination with APF was more relevant to root-dentine that to enamel / Doutorado / Cariologia / Doutora em Odontologia

Orientador: Marise Aparecida Rodrigues Pollonio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-27T16:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vidal_VitorAndreSilva_M.pdf: 1623174 bytes, checksum: fd05ba4c61253e55cc357bf9bd34bf91 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Com o aumento das informações científicas sobre a relação entre a quantidade e composição de alimentos consumidos na dieta e a saúde, a busca por alimentos mais saudáveis tornou-se relevante nas escolhas dos consumidores. A carne e os produtos cárneos são excelente fonte de oligoelementos, proteínas de alto valor biológico, minerais, vitaminas do grupo B e outros compostos bioativos. Porém, os elevados níveis de ácidos graxos saturados, colesterol, gordura, aditivos e, especialmente sódio tem imposto limites ao seu consumo. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a redução do teor de cloreto de sódio (NaCl), principal fonte de sódio e tripolifosfato de sódio (TPFS) em emulsões cárneas de baixo custo (alto teor de carne de frango mecanicamente separada) e em formulações nobres (alto teor de matéria-prima cárnea). O estudo foi dividido em duas etapas. Na primeira, foram elaboradas emulsões cárneas populares (60% de carne de frango mecanicamente separada) contendo sais substitutos (NaCl, KCl e CaCl2) combinados ou isolados com base na força iônica correspondente a 2,5% de NaCl, e formulações com apenas redução de 50% destes sais e TPFS com objetivo de avaliar o efeito sobre as propriedades físico-químicas. Na segunda etapa, foram elaborados 5 tratamentos que apresentaram melhor desempenho na primeira etapa, contendo formulações com blend de sais (NaCl, KCl e CaCl2), e redução de 50% de NaCl e TPFS em emulsões cárneas com alto teor de matéria-prima cárnea. O objetivo da segunda etapa foi igualmente utilizar blends de sais como estratégia para reduzir parcialmente o teor de NaCl e TPFS em emulsões cárneas elaboradas com alto teor de matéria-prima cárnea e verificar o efeito destes nas características físico-químicas a fim de que as matrizes cárneas pudessem ser comparadas. Na primeira e segunda etapa foram determinados: teores de Na, K e Ca, estabilidade de emulsão, pH, avaliação da cor instrumental, Aw, microestrutura e perfil de textura. O KCl foi reportado como o melhor sal substituto ao NaCl, não tendo diferença ou resultando somente em pequenas diferenças em relação aos tratamentos contendo apenas NaCl. O sal substituto CaCl2 causou efeito negativo nas características da matriz cárnea, principalmente na porcentagem de extração das proteínas miofibrilares, ainda que com a mesma força iônica que NaCl. O uso de blend de sais (50% NaCl, 25% KCl e 25% CaCl2) mostrou-se ser uma boa alternativa para redução de sódio. Desta forma, a combinação de sais substitutos (50% NaCl, 25% KCl e 25% CaCl2) e utilização do KCl como sal substituto ao NaCl apresentou-se como uma alternativa para redução de sódio tanto em emulsões cárneas com alto teor de matéria-prima cárnea quanto em emulsão cárnea com alto teor de CMS. No entanto, a redução de fosfato em formulações populares com redução de sódio e adicionada de sais substitutos deve ser melhor investigada para ser implementada / Abstract: The scientific and technological development on food composition and its relationship with food intake and health has led consumer to make healthier food choices. Meat and meat products are excellent source of trace elements, protein with high biological value, minerals, B vitamins and other bioactive compounds. However, their high levels of saturated fatty acids, cholesterol, fat, additives and especially sodium have imposed limits on consumption. In this context, the aim of this study was to evaluate the reduction of sodium chloride (NaCl), the main source of sodium, and sodium tripolyphosphate (STPP) in low-cost meat emulsions (high content of mechanically separated poultry meat) and noble formulations (high content of meat raw material). The study was divided into two stages. First, popular meat emulsions were prepared (60% of mechanically deboned poultry meat) containing salts substitutes (NaCl, KCl and CaCl2) alone or in combination, corresponding to ionic strength of 2.5% NaCl. Then, formulations containing 50% of these salts and STPP were also prepared to evaluate the effect of salt reduction on the physicochemical properties of the processed products. In the second stage, the five treatments with the best performance were prepared, containing blend of salts (NaCl, KCl and CaCl2), and 50% reduction of NaCl and STPP in meat emulsions with high content of meat raw material. The second stage aimed to utilize blends of salts as a strategy to partially reduce NaCl and STPP in meat emulsions containing high content of meat raw material, and to verify its effect on the physicochemical characteristics and compare the meat matrices. In both stages, Na, K and Ca, emulsion stability, pH, instrumental color, aw, microstructure and texture profile were determined. The KCl was reported as the best substitute to NaCl, once little differences were observed in the treatments containing only NaCl. The salt substitute CaCl2 caused a negative effect on the characteristics of the meat matrix especially in the percentage of myofibrillar proteins extracted, despite the similar NaCl ionic strength of all formulations. The use of salt blend (50% NaCl, 25% KCl, and CaCl2 25%) proved to be a good alternative to sodium reduction. Thus, the combination of salt substitutes (50% NaCl, 25% KCl, and 25% CaCl2) and the use of KCl as NaCl substitute may be an alternative to sodium reduction in both emulsions with a high content of meat raw material as with high content of mechanically deboned poultry meat. However, further studies are required on the phosphate reduction in the popular formulations containing low sodium and salt substitutes / Mestrado / Tecnologia de Alimentos / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Nos processos de fabricação de parafusos, a fosfatização é necessária para servir de ancoradouro aos lubrificantes, e outros redutores de atrito, por facilitarem o processo de deformação a frio. No entanto, antes do início do tratamento térmico de têmpera e revenimento, é importante que o banho de desfosfatização seja eficiente para impedir que, durante a austenitização, o fósforo residual presente na superfície do parafuso se difunda para o aço e forme uma fase frágil, rica em fósforo, denominada ferrita delta (&#948). Acredita-se que esta fase, uma vez presente, promove não apenas a diminuição da vida em fadiga mas, também, a fragilização do parafuso. Neste sentido, o presente trabalho objetivou comprovar a influência negativa dessa fase, devidamente caracterizada por MEV, EDS e análise fractográfica, quanto ao desempenho à fadiga, através da comparação das curvas S-N em corpos de prova com e sem ferrita &#948. Os resultados obtidos claramente evidenciaram que a presença da fase &#948 promoveu uma redução de até 40% na vida em fadiga. / In the process of manufacturing bolts, a coat phosphating is required to serve as anchorage for lubricants and other friction-reducer, facilitating the cold forming process. However, before the beginning heat treatment of quenching and tempering, it is important that the alkaline bath for cleaning be efficient in order to prevent that during austenitizing, the residual phosphorus spread on the steel surface and forms a brittle phase, rich in phosphorus, called delta ferrite (&#948). In the presence of this phase, is credited with a decrease in fatigue life of the bolt and embrittlement. The intention in this work was to show the negative influence of this phase on fatigue performance, comparing the S-N curves for specimens with and without ferrite &#948. Trials have shown a reduction of up to 40% in life fatigue. The ferrite &#948 was characterized by SEM, EDS and also performed fractographic analysis.

O fósforo (P) é limitante tanto na produtividade da cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) quanto na atividade da microbiota do solo. Em solos de regiões tropicais, devido à elevada saturação por óxidos de ferro e alumínio, o P se encontra normalmente indisponível às plantas. Portanto, o manejo da adubação de P, baseado no uso de microrganismos capazes de promover uma melhor ciclagem do P, se faz necessário. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar as mudanças na microbiota do solo e na produtividade da cana-de-açúcar, em condições de campo, em resposta ao manejo orgânico associado à inoculação de bactérias solubilizadoras de fosfato (BSF). Para tanto, foi utilizado um composto, obtido previamente por meio da compostagem de subprodutos da indústria sucroenergética (torta de filtro e cinzas), enriquecido com fosfatos de rocha (fosfato de Araxá-FA ou fosfato de Bayóvar-FB). No campo foram estabelecidos sete tratamentos, sendo um destes o tratamento controle, adubado com superfosfato triplo. Seis tratamentos compreendiam áreas adubadas com composto, sendo duas com composto que continha FA, duas com FB e duas somente com composto sem enriquecimento com P (C). A metade dessas áreas recebeu também inoculação com BSF, contendo os tratamentos FA+I, FB+I e C+I. A inoculação foi feita com Bacillus simplex BACBR04, Bacillus sp. BACBR06 e Rhizobium sp. RIZBR0. As avaliações foram realizadas durante o primeiro ano de cultivo (cana planta) em dois períodos (aos seis e 12 meses). As mudanças na microbiota foram acessadas por meio da atividade das enzimas fosfatases (ácida e alcalina), fitases e &beta;-glucosidase. Mudanças na estrutura da comunidade bacteriana e fúngica foram acessadas por meio do T-RFLP. A abundância dos genes 16S RNAr, phoD (relacionado à solubilização de P) e ITS foram avaliadas por meio de PCR quantitativo. A atividade das fosfatases e &beta;-glucosidase aumentaram com a inoculação na cana adubada com composto enriquecido com fosfato de Araxá (FA+I) e também no solo adubado com composto sem enriquecimento (C+I). Nos tratamentos FA+I e C+I houve incremento do fósforo disponível e aumento de 10% na produtividade, em relação ao tratamento controle (M). As comunidades bacteriana e fúngica do tratamento C+I se estruturaram de forma distinta em relação ao tratamento controle (M). Nos solos inoculados houve menor abundância do gene ITS aos seis meses, enquanto que, para o gene 16S RNAr, os solos inoculados apresentaram menor abundância no período de 12 meses. Verificou-se que o consórcio bacteriano inoculado, associado com a aplicação de composto, superou, no primeiro ano de cultivo, o manejo rotineiramente utilizado em cana-de-açúcar (adubação com superfosfato triplo). É possível que haja efeito residual no decorrer dos ciclos da cana-de-açúcar, o que ainda reforçaria a importância do manejo orgânico associado à inoculação com BSF. / Phosphorus (P) is limiting both the yield of sugarcane (Saccharum officinarum L.) and the activity of the soil microbiota. In tropical soils, due to the high saturation of iron and aluminum oxides, P is normally unavailable to plants. Therefore, the management of P fertilization, based on the use of microorganisms that promote better P cycling is necessary. Thus, the objective of this study was to evaluate changes in the soil microbiota and in sugarcane yield under field conditions, in response to the organic management associated with the inoculation of phosphate solubilizing bacteria (PSB). In our field experiment, our fertilizer was an organic compost, previously obtained by the composting process of by-products of the sugarcane industry (filter cake and ashes), enriched with rock phosphates (Araxá phosphate-AP or Bayóvar phosphate-BP). Seven treatments were established in the field, one of which was the control treatment, fertilized with triple superphosphate. Six treatments comprised compost fertilized areas, two with compost containing AP, two with BP, and two only with compost, and without any enrichment with P (C). Half of these areas were also inoculated with PSB, containing the treatments AP+I, BP+I and C+I. Field inoculation was done with Bacillus simplex BACBR04, Bacillus sp. BACBR06 and Rhizobium sp. RIZBR0. We performed evaluations during the first year of cultivation at two periods (at six and twelve months after planting). We accessed the changes in the microbiota through the activity of acid and alkaline phosphatases, phytases and &beta;-glucosidase. Changes in bacterial and fungal community structure were accessed through T-RFLP. We evaluated the abundance of the 16S RNAr, phoD (related to P solubilization) and ITS genes by quantitative PCR. The phosphatases and &beta;-glucosidase activity increased with the inoculation in sugarcane fertilized with compost and enriched with Araxá phosphate (AP+I) and in the soil fertilized with compost, but without any enrichment (C+I). In these treatments (AP+I and C+I), we found an increase in available phosphorus and a 10% increase in productivity, in relation to the control treatment (M). The bacterial and fungal communities of the treatments C+I presented a different structure in relation to the control treatment (M). In the soils that received bacterial inoculations, there was a lower abundance of the ITS gene at six months, whereas for the 16S RNAr gene the inoculated soils presented lower abundance at 12 months. We verified that the inoculated bacterial consortium, associated with the application of compost, overcame the conventional management in sugarcane (triple superphosphate fertilizer) in the first year of cultivation. In addition, it is possible residual effect during the sugarcane cycles, which would further reinforce the importance of organic management associated with BSF inoculation.

Las enfermedades neurodegenerativas de la retina son la principal causa de disfunción visual en el mundo desarrollado. En ellas se produce la degeneración y muerte de las neuronas fotorreceptoras, originando una disminución o pérdida total de la visión, en los casos más severos. Las células gliales de Müller (CGM), el principal tipo de células gliales en la retina, y las células del epitelio pigmentario de la retina (EPR) desempeñan un papel clave tanto en la prevención como en el progreso de estas enfermedades. En condiciones fisiológicas las CGM y las células del EPR son las encargadas del mantenimiento estructural, fisiológico y funcional de la retina. Ante alteraciones fisiológicas o frente a daños de diferentes tipos, las CGM y las células del EPR modifican levemente sus funciones a fin de restablecer las condiciones normales o reparar los daños existentes. La proliferación y la migración se activan como parte de una respuesta inespecífica, pero cuando el daño persiste por mecanismos aún desconocidos estos procesos se descontrolan y exacerban, tornándose contraproducentes. A su vez, la localización de estas células en lugares inadecuados distorsiona severamente la estructura y función de la retina, contribuyendo al desarrollo de la disfunción visual, particularmente en las patologías retinoproliferativas. Dilucidar los mecanismos de regulación de la proliferación y la migración, como así también las moléculas que intervienen, es clave para lograr un tratamiento integral de estas enfermedades. Los esfingolípidos bioactivos son moléculas señal que regulan una gran cantidad de procesos biológicos como la supervivencia, proliferación, migración e inflamación. Entre éstos, la ceramida-1-fosfato (C1P) es un esfingolípido que regula numerosas funciones biológicas en diferentes tipos de células. La C1P es generada por la acción de la ceramida quinasa (CerK), enzima encargada de sintetizar C1P a través de la fosforilación de la ceramida (Cer). La actividad de CerK es clave para la señalización celular mediada por C1P y está regulada por niveles bajos de Ca+2, fosforilación y diversos estímulos. La C1P promueve la proliferación través de la activación de diferentes vías de señalización intracelular y la inflamación mediante la unión y activación de la fosfolipasa A2 citosólica (cPLA2), que interviene en la síntesis de prostaglandinas. Para promover la migración, se ha propuesto que la C1P activa un receptor extracelular específico (parcialmente identificado). Trabajos previos de nuestro laboratorio demuestran que la esfingosina-1-fosfato (S1P), un esfingolípido bioactivo muy relacionado a la C1P, promueve la migración de las CGM (Simón et al. 2015). Dada la estrecha interacción metabólica y funcional entre los esfingolípidos, es de gran interés establecer si la C1P, cuyas funciones son semejantes a las de S1P, interviene en la regulación de los procesos que contribuyen a las patologías retinoproliferativas. El objetivo de esta Tesis es investigar si la C1P y la CerK participan en la migración y en la proliferación de las CGM y las células del EPR. Mediante el ensayo de la herida y utilizando cultivos gliales puros de retina de rata y la línea celular humana de EPR, ARPE-19 investigamos los posibles efectos de C1P/CerK en la migración de estos dos tipos celulares. En estos ensayos de motilidad celular, consideramos la reducción del ancho de la herida como un indicador de la migración. Al evaluar el efecto de C1P sobre la migración de las CGM, determinamos que la C1P aumentó la migración a través de la reorganización del citoesqueleto de actina y la formación de filopodios y lamelipodios. Mediante ensayos de incorporación del nucleótido Bromo-deoxiuridina (BrdU) establecimos que la migración no contribuyó al cierre de la herida. Luego investigamos las vías de señalización involucradas en el efecto de C1P. La inhibición de las vías PI3K/Akt y JNK con LY294002 y SP600125, respectivamente, disminuyó la migración glial, tanto en los controles como en los cultivos tratados con C1P. Mediante ensayos de Western blot comprobamos que el agregado de C1P aumentó los niveles de p-Akt, forma activa de la Akt, respecto a los controles, confirmando la activación de la vía de la PI3K. Al inhibir la vía de ERK / MAPK con el inhibidor U0126 disminuyó la migración promovida por la C1P, pero no se alteró la migración en los controles. A continuación, evaluamos el papel de la cPLA2, mediador de C1P en la inflamación, que es activada por su unión a C1P. El tratamiento con ATK, un inhibidor de cPLA2, redujo notablemente la migración glial en cultivos tratados con C1P, mientras que en los cultivos controles la migración no fue alterada. Demostramos así que la C1P promueve la migración de las CGM mediante la activación de cPLA2 y JNK, PI3K y ERK / MAPK. Además, el agregado conjunto de C1P y S1P, evidenció que estos esfingolípidos tuvieron juntos el mismo efecto promotor de la migración glial que cuando fueron suplementados por separado, evidenciando una interrelación entre ellos en la regulación de los mecanismos que activan río abajo. Como la realización de la herida activó la migración celular, decidimos evaluar si la síntesis endógena de C1P estaba involucrada en dicha migración. Para ello, establecimos en primer término, mediante RT-PCR que las CGM expresaban CerK. Incubando los cultivos gliales con NVP231, un inhibidor de la CerK, demostramos que la síntesis endógena de C1P fue necesaria para la migración glial en los controles y para la estimulación de la migración por C1P. Para descartar que la inhibición de la motilidad reflejara una pérdida de viabilidad celular, evaluamos dicha viabilidad por ensayo de MTT. Determinamos que el tratamiento de los cultivos gliales con NVP231 no alteró la viabilidad celular. En las células del EPR el tratamiento con C1P aumentó la migración, mediante la reorganización del citoesqueleto de actina y el desarrollo de extensos lamelipodios. Al evaluar el rol de la síntesis endógena en la migración del EPR, comprobamos que el tratamiento de los cultivos con NVP231 inhibió la formación de lamelipodios y bloqueó la migración de las células epiteliales. Determinamos, mediante el ensayo de MTT, que el tratamiento con NVP231 no alteró la viabilidad de las células del EPR. La C1P y la S1P promovieron la migración de las células del EPR, pero cuando los cultivos fueron tratados con NVP231 antes del agregado de estos esfingolípidos, el aumento de la migración que promovían fue bloqueado. Estos resultados demuestran que la síntesis endógena de C1P fue necesaria para la migración promovida por C1P y S1P, evidenciando que la síntesis de C1P es clave en la estimulación de la migración por estos dos esfingolípidos. A continuación evaluamos el rol de C1P en la proliferación. Ensayos de incorporación del nucleótido BrdU en cultivos no confluentes demostraron que el agregado de C1P no alteró la proliferación ni en los cultivos gliales ni en los epiteliales. La inhibición de la síntesis de C1P redujo la proliferación en las CGM, mientras que no alteró la tasa de proliferación de los cultivos epiteliales, lo que sugiere que la C1P sería un mediador necesario para la proliferación glial en el período activo de mitogénesis de estas células. En conclusión, en este trabajo evidenciamos por primera vez que la C1P agregada exógenamente como así también aquella sintetizada por CerK en el interior celular, potenciaron la migración de las CGM y de las células del EPR. Demostramos también que la síntesis de C1P fue necesaria para la proliferación glial. Considerando la importancia del proceso de migración y proliferación en los dos tipos celulares de la retina decisivos en la mayoría de las enfermedades retinianas, proponemos a C1P/CerK como clave en el desarrollo y avance de las retinopatías proliferativas. / Retinal neurodegenerative diseases are the main cause of visual dysfunction in the developed world. Their common feature is the degeneration and eventual death of photoreceptors, which leads to visual impairment and eventual blindness in the most severe cases. Müller Glial Cells (MGC) are the main type of retinal glia and along with the Retinal Pigmented Epithelium (RPE) these cell types are two key factors in both the prevention and progression of these diseases. Under physiological conditions, MGCs and the RPE are in charge of the structural, physiological and functional maintenance of the retina. When faced with physiological changes or different damages, they alter their regular functions in order to either reestablish a proper environment or repair the existing damages; however, if the damage persists, the long-term changes of their aforementioned functions can be counterproductive and contribute to the development of retinal neurodegenerative pathologies. Proliferation and migration are activated as an unspecific response upon different damages in order to repair them but, due to unknown mechanisms, these processes finally provoke retina structural and functional loss, thus contributing to the progression of the visual dysfunction. The elucidation of the regulatory mechanisms involved in controlling migration and proliferation, including the molecules involved, is crucial for developing an integral treatment of these diseases. Bioactive sphingolipids are signaling molecules that regulate a wide array of biological processes, such as survival, proliferation, migration and inflammation. Among them, ceramide-1-phospate (C1P) is a sphingolipid generated by ceramide kinase (CerK), the enzyme responsible of phosphorylating ceramide (Cer) molecules. CerK activity has a central role in C1P-mediated cellular signaling, and is regulated by low levels of Ca2+, phosphorylation and many other stimuli. C1P promotes proliferation by activating several intracellular signaling pathways, as well as promoting inflammation by coupling with and activating the cytosolic phospholipase A2 (cPLA2), which participates in prostaglandin synthesis. Both for proliferation and migration, it has been proposed that C1P activates a (partially identified) specific extracellular receptor. Previous work from our group has shown that sphingosine-1-phospate (S1P), which is metabolically closely related to C1P, promotes MGC migration (Simón et al. 2015). Due to the close interconversions and functions of sphingolipids, uncovering the role of C1P in the processes involved in proliferative retinopathies is highly relevant. The purpose of this thesis is to investigate whether C1P and CerK participate in the regulation of migration and proliferation of MGC and RPE. By using the scratch wound assay in pure rat glial cultures and the RPE cell line ARPE-19, we assessed the effects of C1P/CerK in the migration of these two cell types. In these cellular motility assays we considered the reduction on the wound width as a positive indicator of cell migration. When evaluating the effect of C1P on migration, we determined that C1P enhanced migration by reorganizing the actin cytoskeleton and the formation of filopodia and lamellipodia. By quantifying the uptake of Bromide-deoxyuridine (BrdU) by MGC we determined that proliferation did not contribute to the reduction in the scratch width. We also investigated the signaling pathways involved in this process. Inhibition of PI3K/Akt and JNK pathways with the selective inhibitors LY294002 and SP600125, respectively, showed a decrease in glial migration in both control and C1Ptreated cultures. Western Blot assays showed that the addition of C1P increased the levels of p-Akt (the active form of Akt) when compared to controls, therefore confirming the activation of this pathway. Selective inhibition of the ERK/MAPK pathway with U0126 showed a decrease in C1P-induced migration, but did not alter it in control conditions. We also evaluated the role of cPLA2, a mediator of C1P in inflammation, which is activated by C1P binding. Treatment with ATK, a selective inhibitor of cPLA2, showed a substantial decrease in migration on C1P-treated cultures, while there was no alteration of the migrating capabilities in control conditions. We therefore showed that C1P is a promotor of MGC migration by activating cPLA2 as well as the JNK, PI3K and ERK/MAPK pathways. In addition, the combined addition of C1P and S1P showed that these sphingolipids had the same effect together than when they were added separately, suggesting either a direct relation between them or with the downstream mechanisms they trigger. Since we determined a basal reduction in the scratch width in control conditions, we evaluated whether the endogenous synthesis of C1P was involved in this migration. Initially, we established by RT-PCR assays that CGM expressed CerK. By incubating glial cultures with NVP231, a selective inhibitor of CerK, we showed that endogenous C1P synthesis was necessary for glial migration under control conditions, and that when this synthesis was inhibited addition of C1P did not restore cell migration. In order to verify that NVP231 did not affect cell viability, we evaluated viability by the MTT assay. We determined that treatment of glial cultures with NVP231 did not alter cell viability. On RPE cells, treatment with C1P increased cell migration by inducing actin cytoskeleton reorganization and extensive development of lamellipodia. When evaluating the role of the endogenous synthesis on RPE migration, we concluded that treating cultures with NVP231 inhibited lamellipodia formation and blocked RPE migration. We also determined that the viability of NVP231-treated RPE cells was not altered. Both C1P and S1P promoted RPE cell migration, but treating the cultures with NVP231 beforehand, abolished the migratory stimulus. These results show that endogenous C1P synthesis is essential for C1P and S1P-promoted migration, establishing that C1P synthesis is crucial to promote the migration of these two sphingolipids. Furthermore, we evaluated the possible role of C1P on cell proliferation. BrdU uptake assays on non-confluent cultures showed that the addition of C1P did not alter the proliferating capabilities on either MGC or RPE cultures. The inhibition of C1P synthesis impaired proliferation of MGCs, but did not affect that of RPE cells, suggesting that C1P might be a necessary mediator for glial proliferation in the active mitogenic stage of these cells. In this work we showed for the first time that both addition of C1P as well as the endogenous C1P produced by CerK promote migration of MGC and RPE cells. We also demonstrated that C1P synthesis is required for glial proliferation. Taking into consideration the relevance of migration and proliferation of both cell types in the development of most retinal diseases, we propose that C1P/CerK is instrumental in the development and progression of proliferative retinopathies.