O papel do milho na alimentação humana e animal é importante por causa da composição química e do valor nutritivo; por isso, é um dos cereais mais cultivados e consumidos no mundo. Uma das principais causas de danos à qualidade dos grãos é a infecção fúngica e a conseqüente contaminação por micotoxinas. Neste trabalho, foi identificado os efeitos do retardamento da colheita, do grau de umidade e do período de armazenamento dos grãos na ocorrência de fungos patogênicos e de grãos ardidos e a possível contaminação por micotoxinas na lavoura e durante o armazenamento, com o objetivo de caracterizar a influência dos fungos de pré e pós colheita na qualidade dos grãos de milho nas safras 98/99 e 99/00. A incidência de fungos patogênicos foi quantificada em 400 grãos e de grãos ardidos (GA), a percentagem de grãos com injúria mecânica visível (IMV) e de grãos normais (GN) em quatro repetições de 250 g de grãos. A contaminação por micotoxinas foi analisada por cromatografia de camada delgada e as características nutricionais foram analisadas por espectrometria de reflectância no infravermelho proximal. O retardamento da colheita gerou condições favoráveis para a elevação da incidência dos fungos das espécies Aspergillus spp., Cephalosporium spp., Fusarium graminearum e Penicillium spp. A incidência de GA se elevou enquanto os grãos apresentavam umidade acima de 20%. A incidência de Fusarium moniliforme foi reduzindo à medida que os grãos perdiam água. O percentual de grãos com IMV somados a incidência GA foi de 15,90% no silo de Lodi e de 15,78% na Cotrel. O retardamento de colheita influenciou na ocorrência de fungos, de GA e de micotoxinas na lavoura. As práticas de manejo das lavouras e a operação de colheita afetaram qualidade comercial dos grãos de milho e o armazenamento conservou as características nutricionais.

Bipolaris sorokiniana é um fungo fitopatogênico de gramíneas, sendo mais importante nas culturas de trigo e de cevada, ocasionando moléstias como a podridão comum da raiz, carvão do nó, ponta preta dos grãos e mancha marrom. No Brasil esse fitopatógeno encontra-se disseminado em todas as regiões tritícolas. O uso de sementes sadias ou tratadas adequadamente com fungicidas é de grande importância para o controle do fungo. O diagnóstico é dificultado pela grande variabilidade fisiológica e morfológica que o patógeno apresenta. O presente estudo teve por objetivos examinar a presença de polimorfismos intra-específicos das regiões do espaço transcrito interno (Spacer Transcribed Internal-ITS) do DNA ribossomal de isolados de B. sorokiniana e relacionar os padrões de polimorfismos com a região geográfica de origem dos isolados e com os diferentes tipos de hospedeiros. As regiões ITS1 e ITS2 do rDNA de 50 isolados de B. sorokiniana do Brasil e de outros países, um isolado de B. oryzae e seis de Drechslera teres foram amplificadas com oligonucleotídeos iniciadores universais ITS5-ITS2 e ITS3-ITS4. Os produtos da amplificação foram clivados com 18 endonucleases de restrição selecionadas e os polimorfismos foram analisados em gel não desnaturante de poliacrilamida 8%. A análise dos produtos de amplificação revelou a presença de dois fragmentos para ambas as regiões ITS em todos os isolados. Dois isolados de B. sorokiniana apresentaram variabilidade intra-específica de ITS com um terceiro fragmento nesta região. A partir da análise dos dendrogramas da clivagem das regiões ITS, verificou-se que os isolados do Brasil e de outros países formaram grupos intra-específicos e grupos interespecíficos. B.oryzae agrupou-se com até 75% de similaridade na análise da região ITS1 e 72,7% na região ITS2 com isolados de B. sorokiniana. Um isolados de D. Teres apresentou índice de similaridade de ITS1 de 75% com amostras de B. sorokiniana isoladas de trigo. Em todos os dendrogramas analisados não foi possível agrupar os isolados por região geográfica ou por tipo de hospedeiro. / Bipolaris sorokiniana is a worldwide pathogen of many cereal grasses. It is the most important causal agent of common root rot, leaf spot disease, seedling blight and black point of wheat and barley. In Brazil this fungus is disseminated in all wheat producing regions. Since this fungus is a seed borne pathogen, it is a very important to use in plantation seeds free of the fungus or seeds properly treated with fungicide. Diagnose of the phytopathogen is a difficult task because its high morphological and physiological variability. The purpose of this study was to examine the intra-specific polymorphism of internally transcribed spacer (ITS) region in the ribosomal DNA (DNAr) of Bipolaris sorokiniana isolates and to determine if there is some relationship among the isolates and their geographic origin or host. DNAr from 50 B. sorokiniana isolates, from Brazil and other countries, one B. oryzae and six Drechslera teres were used for the amplification of the ITS region using the universal primers ITS5-ITS2 and ITS3-ITS4. The amplification products were digested with 18 selected restriction endonucleases and the polymorphism was analyzed in 8% no denaturing polyacrylamide gel. The results of the amplification products showed two fragments for each ITS regions in all isolates. Two B. sorokiniana isolates presented an intra-specific variability with a third fragment for the ITS1 region. The dendrogram analyses of the polymorphism's, generated with the digestions of ITS region, from isolates of Brazil and from the other countries showed an intra and inter-specific groups. B. oryzae showed 75% of similarity with some B. sorokiniana isolates in the polymorphism analysis of ITS1 region and 72, 7% of in the ITS2 region. In the same way in the ITS1 region, one D. teres isolate presented 75% of similarity for B. sorokiniana isolated from wheat. In all the dendrograms analysis there was not possibility to group the isolates accordingly to their geographic origin or host type.

As superóxido dismutases são metaloenzimas amplamente distribuídas entre os organismos e desempenham um importante papel na defesa celular contra os danos provocados por espécies reativas de oxigênio mediados pelo radical superóxido, um subproduto do metabolismo oxidativo. As SODs são classificadas em quatro grupos, dependendo de seu cofator metálico, em CuZnSOD; MnSOD, FeSOD e NiSOD. Além de sua função intrínseca, as SODs estão implicadas em outros processos com a adesão e a sinalização celular e na patogenicidade. Em particular, a participação das SODs em processos patogênicos tem se mostrado muito ampla, abrangendo os mais variados sistemas patógeno-hospedeiro. Visando estudar o processo de penetração do fungo filamentoso Metarhizium anisopliae em carrapatos, as enzimas com atividade SOD foram descritas e parcialmente caracterizadas, apresentando três tipo de atividade: CuZn, Mn e Fe.Para melhor caracterizar as SODs de M. anisopliae, neste trabalho purificamos e caracterizamos a CuZnSOD. A enzima apresenta uma massa presumida em géis desnaturantes de ~20 KDa. A etapa de cromatografia de gel filtração foi substituída, com sucesso, por uma cromatografia de afinidade, apresentando ganho no rendimento total de 92%, em relação ao rendimento final encontrado na purificação utilizando-se resina Sephacel Sephadex G-150. Em relação à amostra inicial (P95%), o fator de purificação foi de 140% maior. Padronizamos um ensaio enzimático de quantificação e discriminação da atividades SODs, que se mostrou adequado e eficaz para a detecção de SODs em extratos celulares brutos e/ou fracionados. Nos ensaios espectrofotométricos, a CuZnSOD purifica de M. anisopliae foi inibida por 2 mM de KCN. Inibição da atividade em presença de 2 mM de peróxido de hidrogênio também foi observada. PMSF (2 mM) e cloreto de mercúrio (5 mM) inibiram a atividade da enzima, indicando que pode estar ocorrendo uma inibição inespecífica através de resíduos de serina e cisteínas não reativos, presente na enzima. A purificação de cada uma das SODs descritas para M. anisopliae, é um passo importante para a elucidação da função destas enzimas durante processo metabólicos e no processo de infecção de M. anisopliae em seus hospedeiros. A produção de anticorpos mono- e policlonais contra estas proteínas,e sua posterior aplicação na determinação da localização celular de cada uma, é um destes passos. Além disso, pode facilitar o isolamento de genes que codificam para as SODs, possibilitando a obtenção de mutantes e/ou linhagens transgênicas e estudos da expressão destas proteínas.

Diversas espécies de fungos e de bactérias constituem a microbiota endofítica nas plantas cítricas. Interações simbióticas, sinérgicas ou antagônicas, fazem parte do cotidiano das relações entre esses microorganismos endofíticos e seus hospedeiros. Nos últimos anos, os microorganismos endofíticos vêm despertando grande interesse devido ao seu potencial de utilização como fármacos e principalmente no controle biológico. Este trabalho teve por objetivo a identificação de microorganismos endofíticos com potencial antagônico a Guignardia citricarpa na cultura do citros, em pomares orgânicos. Inicialmente foram feitos isolamentos através da assepsia de ramos, folhas e frutos de diferentes variedades de citros em manejo orgânico através do plaqueamento de segmentos dos tecidos em meio de cultura BDA. Diversos microorganismos endofíticos foram obtidos. O pareamento em placas de Petry dos diferentes microorganismos possibilitou a identificação de bactérias com potencial antagônico a G. citricarpa. isolados de Trichoderma ssp. também estavam presentes na comunidade endofítica, Trichoderma ssp. é utilizado no controle biológico por parasitar diferentes fitopatógenos. Inoculações dos endófitos foram feitas em casa de vegetação e em campo, possibilitando a seleção de microorganismos promissores para a utilização em grande escala no controle de G. citricarpa. A compreensão dos mecanismos biológicos e moleculares dessas diferentes interações nos possibilitará um melhor e mais adequado manejo desses diferentes microorganismos em sistemas de cultivo mais sustentáveis. / Several species of fungi and bacteria are endophytic microorganism in citrus plants. symbiotic, synergistic or antagonistic Interactions, are part of the daily lives of relations among these endophytic microorganisms and their hosts. In the last years, the endophytic microorganisms have been arousing great interest because of their potential use as drugs, and mainly on biological control. The aim of this study was the identify endophytic microorganisms with antagonistic potential to Guignardia citricarpa on citrus cultures in organic orchards. Initially isolates were made through aseptic of branches, leaves and fruits of different varieties of citrus through the plating of segments tissue in PDA (Potato Dextrose Agar). Several endophytic microorganisms were obtained. The pairied cultivation, in Petry dishes, of different microorganisms, allowed the identification of bacteria with potential antagonism to G. citricarpa. Trichoderma sp. isolates also were present in the endophytic community. Trichoderma sp. is widely used in biological control as a parasite on different phytopathogens. Endophytic inoculations were made in a greenhouse and in the field. These inoculations allowed the selection of promising microorganisms for the use in large scale for control of G. Citricarpa. The understanding of biological and molecular mechanisms of these different interactions will enable a better and more appropriate management of these microorganisms in different and more sustainable cropping systems.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-14T14:33:21Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 21140 bytes, checksum: f257be804d9a30cfb29d742fcc325158 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-14T14:33:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 21140 bytes, checksum: f257be804d9a30cfb29d742fcc325158 (MD5) Previous issue date: 2005-01-14 / O objetivo deste trabalho foi caracterizar a formação de basidiósporos de Pisolithus sp., bem como os eventos de meiose, mitose pós-meiótica e o acúmulo de reservas lipídicas durante o desenvolvimento dos basidiocarpos fúngicos. Os estudos foram conduzidos em corpos de frutificação frescos, coletados sob florestas de Eucalyptus spp., na Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG. Os eventos envolvidos na formação dos basidiósporos foram analisados utilizando-se técnicas de microscopia ótica, microscopia de fluorescência, microscopia eletrônica de varredura e cromatografia gasosa. Pisolithus sp. produz oito esporos por basídio, envolvidos em matriz gelatinosa, no interior dos peridíolos constituintes do basidioma. Os esporos apresentam de 6 a 8 μm de diâmetro, são globosos, equinatos, com espículas embotadas. Previamente à formação dos basidiósporos, as células das hifas constituintes do peridíolo diferenciam-se em basídios clavados com 12 a 18 μm de comprimento e 6 a 8 μm de diâmetro. Os basidiocarpos apresentam abundante quantidade de lipídeos totais distribuídos nos basídios e nos esporos. A análise da composição de ácidos graxos revelou a presença de 17 compostos com cadeias de 14 a 20 carbonos, na maioria insaturados, contendo uma ou duas insaturações. A composição e o conteúdo em ácidos graxos variou de acordo com o estádio de desenvolvimento dos peridíolos. Nos basidiósporos livres, os ácidos graxos predominantes foram 16:0, 16:1w5c, 18:1w9c e a mistura 18:2w6,9c/18:0ante, sugerindo que o ácido oléico seja o principal ácido graxo constituinte das reservas lipídicas dos basidiósporos. Na formação do diplóide, a cariogamia pode ocorrer tanto no basídio quanto nas células das hifas sub- basidiais ou sub-apicais, seguindo-se os eventos característicos da divisão meiótica. Após a formação da tétrade meiótica nos basídios, há a ocorrência de uma rodada de divisão nuclear mitótica, resultando na produção de oito núcleos na célula basidial. Os núcleos formados migram para dentro dos basidiósporos de forma assincrônica. Durante os eventos de migração, os núcleos haplóides adquirem a forma de fuso, sugerindo a participação de microtúbulos no transporte dessas organelas. Este estudo constitui o primeiro relato dos processos de divisão e migração nuclear em Pisolithus durante a formação dos basidiósporos e da presença e distribuição de ácidos graxos no basidiocarpo desse fungo. O conhecimento das etapas de formação dos basidiósporos e das características das reservas de carbono presentes nesses propágulos permitirá o desenvolvimento de estratégias que visem elucidar os fatores que influenciam o processo de germinação dos basidiósporos de Pisolithus sp., viabilizando a utilização desses esporos como inoculantes, em viveiros florestais, e na pesquisa genética focalizada na associação ectomicorrízica. / The objective of this work was to characterize the formation of Pisolithus sp. basidiospores as well as the events of meiosis, post-meiotic mitosis, and the accumulation of lipid reserves during the development of the fungal basidiocarps. This study was conducted in fresh fruit bodies collected under Eucalyptus spp. forests at Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, MG. The events involved in the development of the basidiospores were analyzed using light microscopy, fluorescent microscopy, scanning electron microscopy, and gas chromatography. Pisolithus sp. produces eight spores per basidium imbibed in a gelatinous matrix inside the peridioles constituting the basidiome. The spores are, approximately, 6 to 8 μm in diameter, globose, echinate, with blunt spines. Previously to the formation of the basidiospores, hyphal cells forming the peridioles differentiate into clavate basidia with 12 to 18 μm in length, and 6 to 8 μm in width. The basidiocarps present abundant quantities of total lipids distributed in hyphae, basidia, and basidiospores. Composition analyses of fatty acids revealed the presence of 17 compounds with 14 to 20 carbon atoms, mostly insaturated, containing one or two insaturations. The composition and content of fatty acids varied according to the developmental stage of the peridioles. Inside free basidiospores, the predominant fatty acids were 16:0, 16:1w5c,18:1w9c, and the mixture 18:2w6,9c/18:0ante, suggesting that oleic acid is the main fatty acid making up the lipid reserves of the spores. ixDuring diploid formation, karyogamy can take place either in the basidia as well as in subbasidial or subapical hyphal cells, followed by the typical events of meiotic division. After the formation of the meiotic tetrad in the basidia, one round of mitotic nuclear division occurs, resulting in the production of eight nuclei per basidial cell. The newly-formed nuclei migrate into basidiospores asynchronously. During the migration events, the haploid nuclei acquire a fusiforme shape, suggesting the participation of microtubules in the nuclear transport into spores. This work is the first report on the nuclear division and migration in Pisolithus during the formation of basidiospores and on the presence and distribution of fatty acids in the basidiomata of this fungus. A thorough understanding of the main stages of basidiospore formation and of the main characteristics of the carbon reserves present within these spores will allow the development of strategies aiming at the elucidation of the factors that influence the germination of Pisolithus sp. basidiospores. This will ultimately make possible the use of these spores as inoculants in forest nurseries and in the genetic research focused on the ectomycorrhizal association.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-04T11:41:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 385800 bytes, checksum: 81d2a74c4033172fe01a5971718d2e77 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-04T11:41:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 385800 bytes, checksum: 81d2a74c4033172fe01a5971718d2e77 (MD5) Previous issue date: 2001-06-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Apesar de a antracnose foliar, causada por Colletotrichum gloeosporioides, ser uma das doenças mais importantes da cebola, não há informações sobre a dispersão do patógeno nas condições do Brasil. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar a dispersão de conídios do patógeno por respingos de água e verificar a importância de restos de cultura infestados como fontes de inóculo do patógeno. Estudou-se o gradiente de dispersão de C. gloeosporioides, a partir de três fontes de inóculo (colônias de fungo esporulando em aveia-ágar, restos de cultura de plantas doentes ou plantas doentes com acérvulos). Para tanto, realizaram-se três experimentos: i – 3, 5 ou 7 gotas de água de 2, 3, 4, 5 ou 6 mm de diâmetro foram produzidas a 2,5 m de altura e deixadas cair sobre cada fonte. Respingos carreando esporos foram coletados em lâminas de microscópio posicionadas em linha reta, na horizontal, nas distâncias de 2,5 a 17,5 cm e em mudas de cebola nas distâncias de 7 a 21 cm a partir de cada fonte; ii – com um simulador de chuvas, operando a 32,75 kPa de pressão por 5 min, produziram-se intensidades de chuva de 32, 50, 72, 90 ou -1 105 mmh , sobre cada fonte. Os respingos de água carreando esporos foram coletados em fundos de placas de Petri posicionados em linha reta, na horizontal, nas distâncias de 10 a 60 cm a partir da fonte; iii – sob condições de campo, parcelas de cebola foram irrigadas por aspersão e a água carreando esporos foi coletada como em “ii”, mas em distâncias de 10 a 50 cm a partir da fonte. Para cada experimento, o número de esporos na suspensão resultante foi determinado com um hemacitômetro. Nos três experimentos, obteve-se melhor ajuste dos dados de dispersão de C. gloeosporioides com o modelo exponencial linearizado. No experimento “i”, a inclinação do gradiente (“b”) foi similar para os diferentes números de gotas, mas decresceu com o aumento do diâmetro. No experimento “ii”, os valores de “b” foram menores a partir de colônias em aveia-ágar que de plantas doentes ou de restos de cultura infestados. A inclinação do gradiente aumentou com o aumento da intensidade da chuva. Os valores da área abaixo da curva de gradiente de dispersão (AACGD) não aumentaram com o aumento na intensidade da chuva. No experimento “iii”, os valores do intercepto foram maiores e o gradiente foi mais inclinado a partir de colônias em aveia-ágar que para restos de cultura e plantas doentes. Nos três experimentos, os valores de AACGD foram estatisticamente maiores (P = 0,05), quando colônias em aveia- ágar eram a fonte de inóculo, e, em geral, não se constatou diferença entre as outras duas fontes. Em vista do obtido, concluiu-se que, considerando-se a dispersão de C. gloeosporioides, restos de cultura infestados são fontes de inóculo tão importantes quanto plantas de cebola doentes. / Twister, caused by Colletotrichum gloeosporioides, is one of the most important onion diseases. Despite its importance, there is no information on pathogen dispersal in Brazilian conditions. Therefore in this study we analysed of splash dispersal of C. gloeosporioides conidia and verified the importance of infested debris as inoculum source. Dispersal gradients from three inoculum sources (sporulating fungal colonies on oat agar, crop debris of diseased plants, or diseased plants with acervuli) were compared in three experiments: i- 3, 5, or 7 water drops of 3, 4, 5, or 6 mm diameter were set to fall from 2.5m high to each source. Spore-carrying droplets were collected on microscopyc slides positioned horizontally in straight-line at distances of 2.5-17.5 cm and on onion plants at distances of 7 – 21 cm away from each source; ii- with a rain simulator, 32.75 kPa pressure during 5min, rain intensities of 32, 50, 72, 90, or 105 mmh -1 , were set to fall to each source. The splash water carrying spores was collected in uncovered Petri plates positioned horizontally in straight-line at distances of 10-60 cm away from each source; iii-under field conditions, onion plots weresprinkler irrigated and the spore-carrying water was collected as in “ii”, but at distances of 10-50 cm away from each source. For each experiment the concentrations of the resulting spore suspensions were determined with a hemacytometer slide. The data of dispersal of C. gloeosporioides conidia, of the three experiments, were best fitted with the linearized exponential model. At experiment “i”, slope values were similar for the different number of drops, but decreased as drop diameter increased. At experiment “ii”, slope values were steeper from diseased plants and infested debris than from oat agar colonies, from which the gradient slope increased with rain intensity. There was no increase in the area under the curve of dispersal gradient (AUCDG) with rain intensity. At experiment “iii”, intercept values were higher and slope values were steeper from the oat agar colonies than from plants and debris. AUDGC was higher for oat agar colonies than for debris and plants, which originated similar values of AUDGC. It was concluded that infested crop debris is an inoculum source as important as infected plants for C. gloeosporioides dispersal. / Dissertação importada do Alexandria

SOUSA, Debora Bezerra de. Estudo do potencial químico de Fusarium udum. 2017. 139 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Celia Sena (celiasena@dqoi.ufc.br) on 2017-11-07T20:09:55Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-11-07T22:59:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T22:59:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) Previous issue date: 2017 / The present study aims to investigate the chemical potential of Fusarium udum, an endophytic fungus isolated from Chrotalaria paulinea, which is responsible for causing damage to bean planting and species of Chrotalaria. The fungus was cultivated in four distinct culture media: PD (potato-dextrose), PDY (potato-dextrose-yeast), MPD (malt-peptone-dextrose), and Czapek. The culture time was determined by the glucose rate of the culture medium. The ethyl acetate extract from the microorganism cultivated in MPD (25 days) was selected for the pre-liminary chromatographic treatment, and led to the isolation of tyrosol, fusaric acid, and monaspilosin. In another experiment that used the culture media mentioned above, F. udum produced secondary metabolites through different days of incubation (7, 14, 21, 28 days). The chromatographic fractionation of the ethyl acetate extract from the microorganism cultured in PDY (28 days) provided cycle (L-Pro-L-Leu) and triptophol. The micellar extract obtained in this culture was also studied and it supplied the substance adenosine. Usual chromatographic techniques, including liquid-liquid partition, C-18 cartridge chromatography, and high perfor-mance liquid chromatography (HPLC), were used to isolate the secondary metabolites. The structural characterization was conducted by using the spectrometric techniques mass spec-trometry (MS) and nuclear magnetic resonance (NMR) with one and two-dimensional experi-ments and comparison with literature data. / O presente trabalho objetiva a investigação do potencial químico de Fusarium udum, um fungo endofítico isolado de Chrotalaria paulinea, e responsável por causar danos a plantações de feijão e em espécies de Chrotalaria. O fungo foi cultivado em quatro meios de cultura distintos: BD (batata-dextrose), BDL (batata-dextrose-levedura), MPD (malte-peptona-dextrose) e Czapek, sendo o tempo de cultivo determinado pela taxa de glicose do meio. O extrato AcOEt do micro-organismo cultivado em meio MPD (25 dias) foi selecionado para o tratamento cromatográfico preliminar, levando ao isolamento do tirosol, ácido fusárico e monaspilosina. Em um outro experimento, e utilizando os meios de cultivo mencionados, F. udum teve a produção dos metabólitos secundários acompanhada através de diferentes dias de incubação (7, 14, 21, 28 dias). O fracionamento cromatográfico do extrato AcOEt do micro-organismo cultivado em meio BDL (28 dias) forneceu a dicetopiperazina ciclo (L-Pro-L-Leu) e o triptofol. O extrato micelar obtido neste cultivo também foi estudado e forneceu a adenosina. Técnicas cromatográficas usuais, incluindo partição líquido-líquido, cromatografia em cartucho C-18 e cromatografia de alta eficiência (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabólitos secundários, enquanto que a caracterização estrutural foi possível através do uso de técnicas espectrométricas utilizando espectrometria de massa (EM) e ressonância magnética nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, além de comparação com dados da literatura.

O cultivo de feijão no Brasil tem sido limitado por diversos patógenos. Entre os problemas da cultura estão os nematóides do gênero Meloidogyne, os quais constituem uma das principais razões da baixa produtividade das lavouras. Além dos danos diretos causados pelos nematóides às plantas, estes causam danos indiretos devido aos ferimentos que servem como porta de entrada a patógenos, como o Fusarium sp. Atualmente, um dos métodos mais usados no controle de nematóides é o controle químico, o qual é caro e extremamente prejudical ao meio ambiente. Portanto, tem por objetivo este trabalho estudar o potencial dos fungos Trichoderma spp. e Paecilomyces lilacinus no controle de M. incognita, assim como os mecanismos utilizados por estes em biotestes realizados in vivo associados a plantas de feijão. Testes realizados in vitro evidenciaram a produção de enzimas líticas como quitinases, glucanases e proteases, metabólitos voláteis dos fungos e hifas modificadas pelos isolados dos referidos fungos. Os filtrados fúngicos ocasionaram mortalidade de 100% dos J2 (juvenis de 2° estágio) de M. incognita. A análise microscópica demonstrou a adesão de conídios de Trichoderma spp. em ovos de M. incognita. Em testes in vivo com plantas de feijão cv. Engopa Ouro, obteve-se menor número de galhas e do fator de reprodução nos tramentos onde foram aplicados isolados T. harzianum (6T), T. pseudokonigii (2T) e o fungo nematófago P. lilacinus. Os resultados evidenciam que os isolados de Trichoderma spp. apresentam potencial no controle de M. incognita; os mecanismos utilizados consistem na produção de metabólitos voláteis, difusíveis e inibitórios aos nematóides, na produção de enzimas líticas que degradam a quitina dos ovos e capturam formas ativas do nematóide, além da formação de hifas modificadas denominadas “armadilhas”. / The bean cultive in Brazil has been limited by several pathogens. One of the most important problems in the culture are Melodogyne nematodes, which constitute one of the main reasons behind the low productivity in the agriculture. Besides the direct damages caused by nematodes to plants, they also bring indirect damages due to the wounds acting as entrance points to pathogens, like Fusarium sp. Chemical control is currently one of the most used methods to control nematodes, which is expensive and extremely harmful to the environment. Thus, this work objective is studying the possible action of Trichoderma spp. and Paecilomyces lilacinus to control M. incognita, as well as the mechanisms used by them through in vivo tests associated to bean plants. In vitro performed tests evidenced the production of lytic enzymes as chitinases, glucanases, and proteases, volatile metabolic and hyphae modified by those fungus’ isolates. The fungal filtrate caused 100% mortality to M. incognita J2 (second-stage juveniles). The microscopical analysis demonstrated the attachment of Trichoderma spp. conidia in M. incognita eggs. In vivo tests with Engopa Ouro bean plants achieved lower numbers of root-knot and reproduction factor when applying isolates of T. harzianum (6T), T. pseudokonigii (2T), and P. lilacinus nematophagous fungus. The results point out that Trichoderma spp. isolates are promising controllers of M. incognita, and the used mechanisms consist on producing volatile metabolics, which are diffusive and therefore inhibitory to nematodes, producing lytic enzymes that damage the egg chitina and capture active nematodes, and developing modified hyphae named “traps”.

Para infectar seus hospedeiros artrópodes, Metarhizium anisopliae produz uma série de enzimas hidrolíticas e diversas alterações morfológicas como a formação de estruturas denominadas de apressórios e blastosporos. Estas estruturas de infecção representam estágios cruciais de penetração e disseminação no inseto hospedeiro, respectivamente. Além disso, o apressório é uma estrutura conservada entre fungos entomopatogênicos e fitopatogênicos. O gene emp1 (codifica uma proteína de matriz extracelular de Magnaporthe grisea) parece ter um papel importante na diferenciação do apressório, bem como na patogenicidade e virulência. Um dos nossos objetivos foi avaliar a possível função de um ortólogo do gene emp1 em M. anisopliae pela análise do perfil transcricional e construção de mutantes funcionais por mutagênese insercional utilizando agrotransformação. Foram geradas linhagens transformantes contendo o cassete de inativação do gene emp1 (pPZP::bar::emp1), sendo este construído pela subclonagem das regiões flanqueadoras 5’ (1.515pb) e 3’ (1.513pb), fusionadas a um cassete de expressão do gene bar (3.500pb) que confere resistência a glifosinato de amônia. A freqüência de transformação observada nesta etapa de transformação foi superior a 60%, porém em apenas 1,5% dos transformantes há indícios de recombinação homóloga. Também foi analisado o perfil transcricional de emp1, sob três condições anteriormente padronizadas: células diferenciadas em apressório, hifas (crescimento vegetativo), e blastosporos, sendo observada a presença de transcritos deste gene em todas as condições testadas. Em uma segunda etapa deste trabalho, foi avaliado o perfil transcricional de quitinases putativas de M. anisopliae nos estágios de diferenciação celular de apressório, hifas e blastosporos. Esta classe de proteínas está diretamente envolvida no remodelamento da parede celular fúngica durante a diferenciação celular, como também na degradação da quitina da cutícula do hospedeiro durante a etapa de penetração. Originalmente foram caracterizados três genes para quitinases (chit1, chi2 e chi3), e a análise in silico do genoma revelou outras 20 quitinases putativas de Metarhizium. Essa diversidade pode ser responsável pelas diferentes funções que o conjunto de enzimas quitinolíticas tem na degradação de quitina durante o ciclo de vida e de infecção do fungo. É, portanto importante: (i) validar transcricionalmente as quitinases putativas e (ii) tentar atribuir função a cada uma delas. Para isso, procedemos a análise dos transcritos de cada uma das 23 quitinases putativas sendo sintetizados cDNAs a partir das três condições de diferenciação celular (apressório, hifas e blastosporos). Na condição de diferenciação a apressório dez espécies de transcritos foram detectadas sendo seis do subgrupo A, três do subgrupo B, uma do subgrupo D. Nenhum transcrito de quitinases do subgrupo C foi detectado nas condições testadas. Tanto em crescimento vegetativo quanto em blastosporos foram detectadas sete espécies de transcritos de quitinases do subgrupo A, e uma do subgrupo D. As quitinases do subgrupo B diferiram quanto a sua distribuição nas condições testadas: três espécies de transcritos foram detectadas durante o crescimento vegetativo e seis em blastosporos. O estudo envolvendo os diferentes genes putativos (emp1 e de quitinases) de M. anisopliae, sob as diversas abordagens, representa um importante precursor para nos fornecer indicativos sobre as funções destes genes no ciclo de vida e de infecção de Metarhizium. / To infect their arthropod hosts, Metarhizium anisopliae produces a series of hydrolytic enzymes and several morphological changes, including the formation of structures called appressoria and blastospores. These infective structures represent crucial stages of penetration and dissemination in the insect host, repectively. In addition, the appressorium is a structure conserved among phytopathogenic and entomopathogenic fungi. The emp1 gene (encodes an extracellular matrix protein) from Magnaporthe grisea showed an important role in appressorium differentiation, as well as pathogenicity and virulence. Our goal was evaluate the possible role of an ortholog gene emp1 in M. anisopliae by transcriptional analysis and construction of functional mutants by insertional mutagenesis mediated by agrotransformation. We generated transformants strains containing the gene inactivation cassette of emp1 (pPZP::bar::emp1), which was constructed by subcloning of flanking portions 5’ (1.515bp) and 3’ (1.513bp) fused in a expression cassette of bar gene (resistance to glufosinate ammonium). The frequency of transformation observed in this round was higher than 60%, but only 1,5% of the transformants there is evidence of homologous recombination. We also analysed the transcriptional profile of emp1 under three conditions previously standardized, such as differentiated cells in appressorium, hyphae (vegetative growth) and blastospores. Accordingly, we observed the presence of transcripts of this gene in all growth condition tested. In a second step of this work, we evaluated the transcriptional profile of putative chitinases of the M. anisopliae in those different stages of cellular diferentiation. This class of proteins is directly involved in fungal cell wall remodeling during cellular diferentiation, as well as degradation of chitin in the host cuticle during the penetration stage. Originally we characterized three genes of chitinases (chit1, chi2 and chi3), but apart from these, the in silico analysis of the genome revealed 20 putative chitinases. This diversity may be reponsible for differents functions that the set of chitinases enzymes have in the chitin degradation during the life and infection cycle of the fungus. It is therefore important: (i) validate transcriptionally the putative chitinases and (ii) attemping to assign function to each one of them. Chitinases transcript survey was performed using cDNAs from three cell types: appressorium, vegetative growth and blastospores. In the appressorium condition ten species of transcripts were detected being six from the subgroup A chitinases, three from group B and one from group D. No transcripts of subgroup C chitinases were detected. Both in vegetative growth and blastospores seven species of transcripts of the subgroup A, and one from group D were detected. Chitinases from subgroup B differed - three species of transcripts were detected during vegetative growth and six were detected in blastospores. This study of several putative genes (as emp1 and chitinases) of M. anisopliae, under different approaches, may represent an important preliminary outcome to shed a light in the functions of these genes during life cycle and infection of Metarhizium.

Leandria momordic 3 é um importante patógeno de cucurbitáceas. No entanto, além da baixa eficiência dos agroquímicos usados no seu controle, pouco se sabe sobre a sobrevivência, hospedeiros, variabilidade genética, fontes de resistência, virulência e comportamento in vitro deste fungo, além das desencontradas informações sobre a epidemiologia e o desenvolvimento da infecção em plantas no campo e em estufa. Pesquisou-se, então, em áreas de produção de pepinos no litoral de Santa Catarina e nos laboratórios da Epagri, em Itajaí, SC e da Faculdade de Agronomia da UFRGS, Porto Alegre, RS, controle químico; sobrevivência em hospedeiros, no solo e in vitro; preservação de restos culturais no campo; esporulação e infecção; gama de hospedeiros e de resistência; epidemiologia em campo e em estufa; variabilidade, através de polimorfismo de DNA, via AFLP e plasticidade morfológica. O fungo pode sobreviver no solo, em seus hospedeiros e in vitro, congelado ou em água destilada; apresenta anastomose e variabilidade genética entre isolados de hospedeiros distintos. A doença, cuja sintomatologia varia com a temperatura e umidade, é mais severa sob chuva e temperatura entre 18 a 25 °C. O micélio pode infectar, mesmo sob condições impróprias ao conídio. Cayaponia tayuya, Melothria pendula e Cucurbita maxima foram imunes ao fungo, e Cucurbita pepo, Bryonia cretica, Sicana odorifera, Cucumis metuliferus e Cucurbita pepo var. melopepo também são seus hospedeiros. A esporulação depende de luz, temperatura e meio de cultura e a luminosidade não interfere no crescimento. Colônias, após imersão em água, produzem mais esporos. A doença pode ser controlada pelo efeito guarda-chuva das estufas e por certos agroquímicos e o efeito biocida de Citrobio in vitro não se reproduz, necessariamente, no campo. / Leandria momordicE is an important pathogen of cucurbitaceee plants. However, the efficiency of pesticides used for its control — is poor and the existing knowledge on its survival, hosts, genetic variability, resistance sources, infection potential and in vitro behavior — is very reduced. Besides, the information available on the conditions that favor the development of infection and disease under field and greenhouse situations — is quite contradictory. Therefore, the following research studies were carried out in the main Santa Catarina cucumberproducing areas, Brazil, over latitude 28° S and longitude 48° W, at EPAGRI laboratories, and at Faculdade de Agronomia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul: chemical control, survival in hosts, soil an in vitro, maintenance of crop residues en field, sporulation and infection, scope of hosts and resistance, epidemiology in field and greenhouse, anastomosis, variability through DNA polymorphism and morphological plasticity. The fungus may survive in the soil, in hosts and in vitro (frozen or distilled water) and presents anastomosis and genetic variability between different host isolates. The disease, whose symptomatology varies according to temperature and moisture, gets more severe under temperature from18-25 °C and rainy conditions. The mycelium can infect even under unfavorable conditions to conidium. Cayaponia tayuya, Melothria pendula and Cucurbita maxima proved immune to the fungus, and Cucurbita pepo, Bryonia cretica, Sícana odorífera, Cucumis metuliferus and Cucurbita pepo var. melopepo also represent hosts. Sporulation depends on sunlight, temperature and culture mean; the sunlight does not interfere with the fungai growth. lmmersion the colonies in water may increased sporulation. The disease can be controlled by using greenhouse and certain pesticides; the effect of Citrobio, in vitro and under field conditions, is not necessarily alike.