Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-24T19:55:31Z No. of bitstreams: 1 EDNÉA OLIVEIRA DE ABREU.pdf: 1590342 bytes, checksum: 44ea9449e253c4217f2f2125f7a56bb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-24T19:55:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EDNÉA OLIVEIRA DE ABREU.pdf: 1590342 bytes, checksum: 44ea9449e253c4217f2f2125f7a56bb5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A galectina-3 (Gal-3), lec ctina solúvel ligante de ß-galactosídeos, é encontrada em diferentes compartimentos celulares, modulando diversos processos b biológicos, como proliferação e apoptose. No timo, órgão linfoide central onde aas células T se diferenciam, está presente e no córtex e na medula. Interage com gglicoproteínas de superfície celular e compponentes da matriz extracelular (ECM), influenciando a migração de timócitos, fu undamental para sua diferenciação, com ppropriedades de- adesivas. Em estudos pr révios, notamos uma acentuada diminuiçãão da massa e celularidade do timo de e animais deficientes para o gene da GGal-3 (Gal-3-/-). Considerando a capacidade e da Gal-3 em modular processos biológicos que podem estar envolvidos neste fenômen no, tivemos por objetivo avaliar fatores en nvolvidos com o processo de atrofia tímica oobservado na ausência de Gal-3. Primeirame ente, verificamos a possibilidade da Gal-3 modular a expressão dos genes StAR e CYP11A1, que codificam proteínas envollvidas na síntese de glicorticoides, hormôn nios capazes de causar atrofia tímica. Obsservamos aumento da expressão de StAR nna adrenal e de ambos os genes no timo do os animais Gal-3-/-, correlacionando com os m maiores níveis de corticosterona no soro e n no timo desses animais. Por citometria de fl luxo, analisamos possíveis alterações nas ssubpopulações de timócitos e não observa amos diferenças significativas nas porcentag gens de subpopulações de células definidas p pelos marcadores CD4 e CD8. Porém, ao analisarmos o subgrupo de células duplo--negativas (DN), demonstramos um aumen nto de timócitos DN1 e diminuição de DNN3, isolados de animais Gal-3-/-. Em núme eros absolutos observamos uma diminuição ssignificativa dos timócitos em todas as subp populações analisadas. Na análise das taxas d de morte celular, através da marcação por a anexina V, apesar de não haver diferença s significativa nos timócitos totais, houve aum mento de morte nos timócitos duplo-positivos (DP) de animais Gal-3-/-. Por outro lado, nna análise de proliferação espontânea por iincorporação de bromodeoxiuridina, observ vamos diminuição de proliferação nos timóci itos totais, sendo significativa nas células D DN, DP e simples-positivas (SP)CD4. A aná álise morfológica do timo de animais Gal-33-/-mostrou manutenção das regiões cortica ais e medulares, porém, observamos a preseença de estruturas semelhantes a corpúsculo os de Hassall na medula. Além disso, análiise por imunofluorescência revelou desorga anização da rede epitelial tímica desses anim mais, com detecção de extensas áreas sem c células epiteliais. Ao analisarmos a celularid dade de outros órgãos linfoides, observamoss diminuição no número de células totais da a medula óssea, baço e linfonodos mesentéric cos, mas não nos linfonodos subcutâneos. Em m conjunto, nossos dados sugerem que a Gal--3 contribui para a manutenção da homeosta ase do timo, modulando a diferenciação, prol liferação e morte de timócitos. / Galectin-3 (Gal-3), a sol b-galactoside-binding lectin, is fou nd at different luble usubcellular compartments s, modulating various biological proce esses, such as proliferation and apoptosis . In the thymus, the central lymphoid organ in which T cells differentiate, this lectin is ffound in the cortex and in the medulla. Gal--3 interacts with glycoproteins on the cell surface and in extracellular matrix compponents (ECM), influencing thymocyte mig gration, which is fundamental for their diffeerentiation, with de-adhesive properties. In p previous studies, we noted a serious decrease i in thymus weight and cellularity in Gal-3 defficient mice (Gal-3-/-). Considering Gal-3 abiility to modulate biological processes that ma ay be involved in this phenomenon, the aim off this project was to evaluate factors involved d in the process of thymic atrophy observed i in the absence of Gal-3. We first verified a p possible modulation in the expression of StAR R and CYP11A1 genes, which encode proteinns involved in the synthesis of glucocorticoid ds, hormones that can cause thymic atrophy, bby Gal-3. We observed an increase in the exp pression of StAR in the adrenal and of both h genes in the thymus of Gal-3-/-mice, corr relating with the increased levels of corticost terone in the serum and thymus of these animaals. We analyzed by flow cytometry possiblle alterations in thymocyte subpopulations and we did not observe significant differen nces in the percentages of cell subsets defin ned by CD4 and CD8. However, the analysiis of double-negative (DN) cells showed an iincrease of DN1 and a decrease in DN3 thym mocytes isolated from Gal-3-/-animals. In abso olute numbers we observed a significant decre ease in all thymocyte subpopulations analyzedd. In the analysis of cell death ratio by annexiin V labeling, although no significant differen nces were seen in total thymocytes, there wa as an increase in double-positive (DP) thym mocyte death in Gal-3-/-animals. On the other hand, the spontaneous proliferatioon analysis by bromodeoxyuridin incorpor ration showed a decrease in proliferation of t total thymocytes, being statistically signific cant in DN, DP and simple-positive (SP) )CD4 cells. The morphological analysis of tthe thymus of Gal-3-/-mice showed well defiined cortical and medullary regions, but we o observed the presence of structures similar to Hassall’s bodies in the medulla. Moreoverr, immunofluorescence analysis showed evvident epithelial network disorganization wi ith extensive TEC-free areas. We also analyzeed the cellularity of other lymphoid organs a and observed a decrease in the number of tot tal bone marrow, spleen and mesenteric lym mph node cells but not in subcutaneous lymp ph nodes. Taken together, our data sugges st that Gal-3 contributes to the maintena ance of thymus homeostasis, modulating thymocyte differentiation, proliferation aand cell death.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T14:34:06Z No. of bitstreams: 2 TESEDOUTORADO.pdf: 2157111 bytes, checksum: a4a1e2426ee84e507bd22352fbd2cdfd (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T14:34:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESEDOUTORADO.pdf: 2157111 bytes, checksum: a4a1e2426ee84e507bd22352fbd2cdfd (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / Embora o estudo imunoistoquímico seja um método bastante utilizado na rotina do diagnóstico anatomopatológico, este teste ainda apresenta importantes limitações principalmente quanto a incapacidade de distinção entre alguns tipos de lesões tumorais. Dessa maneira, outras ferramentas vêm sendo desenvolvidas a fim de aumentar a sensibilidade e especificidade da identificação antígeno-anticorpo. Dentre estas, os ensaios quimiluminescentes vem sendo cada vez mais utilizados em estudos para o mapeamento de amostras biológicas para fins diagnósticos. Dentre os inúmeros benefícios da utilização dos métodos quimiluminescentes, podemos citar o limite de detecção ultrasensível, testes rápidos e um amplo campo de aplicações. O presente estudo buscou elaborar um protocolo para detecção da proteína galectina-3 em tecidos tumorais da mama a partir de anticorpo conjugado ao éster de acridina realizando ensaios imunoquimiluminescentes e compará-los aos resultados da imunohistoquímica convencional. O anticorpo monoclonal anti-galectina-3 foi conjugado ao éster de acridina e esse conjugado foi submetido à ensaios imunoquimiluminescentes em tecidos de mama além da imunohistoquímica convencional. Nossos resultados demonstram a eficiência na conjugação da anti-galectina-3 ao éster de acridina, um shelf-life do conjugado anticorpo/éster de acridina (AC-EA) com aproveitamento de 96,51% após 12 meses e a aplicação desse conjugado em ensaios imunoquimiluminescentes nos tecidos mamários com carcinoma ductal infiltrante (39.8 x 104 ± 29344) e com fibroadenoma (88.88 x 104 ± 17880) demonstraram padrões diferenciais entre a sua contraparte normal (58.87 x 104 ± 17880). Concluiu-se então, que o ensaio imunoquimiluminescente proposto pode ser utilizado como método diagnóstico alternativo na identificação de antígenos principalmente em amostras teciduais pequenas.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9508_1.pdf: 2156372 bytes, checksum: 76c1e803c28acda81ef028ac3882938e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Embora o estudo imunoistoquímico seja um método bastante utilizado na rotina do diagnóstico anatomopatológico, este teste ainda apresenta importantes limitações principalmente quanto a incapacidade de distinção entre alguns tipos de lesões tumorais. Dessa maneira, outras ferramentas vêm sendo desenvolvidas a fim de aumentar a sensibilidade e especificidade da identificação antígeno-anticorpo. Dentre estas, os ensaios quimiluminescentes vem sendo cada vez mais utilizados em estudos para o mapeamento de amostras biológicas para fins diagnósticos. Dentre os inúmeros benefícios da utilização dos métodos quimiluminescentes, podemos citar o limite de detecção ultrasensível, testes rápidos e um amplo campo de aplicações. O presente estudo buscou elaborar um protocolo para detecção da proteína galectina-3 em tecidos tumorais da mama a partir de anticorpo conjugado ao éster de acridina realizando ensaios imunoquimiluminescentes e compará-los aos resultados da imunohistoquímica convencional. O anticorpo monoclonal anti-galectina-3 foi conjugado ao éster de acridina e esse conjugado foi submetido à ensaios imunoquimiluminescentes em tecidos de mama além da imunohistoquímica convencional. Nossos resultados demonstram a eficiência na conjugação da anti-galectina-3 ao éster de acridina, um shelf-life do conjugado anticorpo/éster de acridina (AC-EA) com aproveitamento de 96,51% após 12 meses e a aplicação desse conjugado em ensaios imunoquimiluminescentes nos tecidos mamários com carcinoma ductal infiltrante (39.8 x 104 ± 29344) e com fibroadenoma (88.88 x 104 ± 17880) demonstraram padrões diferenciais entre a sua contraparte normal (58.87 x 104 ± 17880). Concluiu-se então, que o ensaio imunoquimiluminescente proposto pode ser utilizado como método diagnóstico alternativo na identificação de antígenos principalmente em amostras teciduais pequenas

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4260_1.pdf: 1556243 bytes, checksum: 9062eb76fd488be821a97ff41b95233f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nos últimos anos tem se aumentado o interesse pelo estudo cada vez mais detalhado dos processos patológicos envolvidos nas doenças inflamatórias intestinais, em especial a retocolite ulcerativa idiopática. Visando oferecer um método que auxilie o diagnóstico diferencial ou mesmo que seja indicador da transformação neoplásica, a galectina-3 surge como um potencial marcador da fisiopatologia de diversos tipos de câncer, entre eles o câncer colorretal. Para este estudo, o perfil imunohistoquímico foi avaliado em tecido intestinal de pacientes com retocolite ulcerativa (n=20) e sua respectiva contraparte normal, de ambos os sexos e idade média de 55 anos. Os tecidos foram fixados em formalina a 10% e submetidos à histoquímica da reação de Schiff (PAS) para visualizações das inclusões citoplasmáticas de glicosaminoglicanos, e tricrômico de Masson para visualização das fibras colágenas. Fragmentos de tecido (4 &#956;m) foram submetidos à técnica de imunohistoquímica para a proteína galectina-3. Os perfis de marcação tecidual foram analisados através de uma estação de trabalho contendo um microscópio óptico equipado com uma câmera digital ambos acoplados a um computador contendo o software OPTIMAS®. Os resultados obtidos demonstram uma diminuição da expressão da galectina-3 no sitio inflamatório da retocolite ulcerativa. Houve um aumento significativo (p<0.022) no número de células caliciformes dos pacientes tratados clinicamente, porém com redução do conteúdo glandular. Os dados sugerem que a atividade glandular juntamente com a redução da expressão da galectina-3 possam auxiliar o diagnóstico e o monitoramento desses pacientes

O melanoma canino é uma neoplasia frequente em cães, tem um caráter maligno, invasivo, com potencial metastático e, neste contexto, estudos acerca do envolvimento das galectinas se justifica para ampliar o conhecimento do microambiente tumoral desta neoplasia. As galectinas são proteínas da família das lectinas animais que apresentam domínios de reconhecimento de carboidratos e podem estar localizadas no núcleo, no citoplasma, na superfície de células e secretadas em diversos tecidos. Acredita-se que principalmente a galectina-1 (gal-1) e a galectina-3 (gal-3) estejam associadas à transformação neoplásica, sobrevivência da célula neoplásica, angiogênese, evasão do sistema imune e formação de metástases. A gal-1 está principalmente relacionada com a transformação tumoral e evasão do sistema imune. A gal-3 está principalmente associada com a angiogênese, desenvolvimento de metástases pelo aumento da motilidade e adesão entre as células neoplásicas e adesão entre as células neoplásicas e o endotélio, além de contribuir para a evasão do sistema imune. O objetivo do estudo foi verificar o padrão de expressão de gal-1 e gal-3 nos diferentes graus de agressividade do melanoma canino, além de avaliar a concentração sérica de gal-3 e comparar com cães clinicamente saudáveis. Foram analisadas a expressão de gal-1 e gal-3 em 30 fragmentos de melanoma canino, seis fragmentos de melanocitoma e nove fragmentos de linfonodos metastáticos. Foi realizada a dosagem sérica de gal-3 em 30 cães com melanoma e comparada a 10 cães clinicamente saudáveis. O melanoma canino expressou gal-1 principalmente no citoplasma e expressou um padrão variável de gal-3 no citoplasma e no núcleo. Em relação à expressão de gal-3 observou-se que conforme a agressividade do melanoma houve diminuição da frequência de células com marcação citoplasmática e um aumento da intensidade de marcação nuclear com concomitante diminuição da frequência de células com marcação nuclear. Os cães com melanoma apresentaram aumento dos níveis séricos de gal-3 antes da exérese da neoplasia quando comparados aos animais clinicamente saudáveis, mostrando o seu potencial uso como biomarcador do melanoma. / Canine melanoma is a frequent neoplasm in dogs. It has a malignant, invasive and metastatic potential. In this context, studies about the involvement of galectins are justified to increase the knowledge of melanoma tumor microenvironment. Galectins are proteins of the animal lectins family, that display carbohydrate recognition domains and may be located in the nucleus, cytoplasm, cell surface, as well as secreted in various tissues. Galectin-1 (Gal-1) and galectin-3 (Gal-3) are associated with neoplastic transformation, neoplastic cell survival, angiogenesis, immune system evasion, and metastasis formation. Gal-1 is mainly related to tumor transformation and immune system evasion. Gal-3 is mainly associated with angiogenesis, development of metastasis by increased motility and adhesion between neoplastic cells and adhesion between neoplastic cells and endothelium, while contributing to the evasion of the immune system. The aim of the study was to ascertain the expression pattern of Gal-1 and Gal-3 in different severity degrees of canine melanoma, as well as to evaluate the serum concentration of Gal-3 and to compare with clinically healthy dogs. Gal-1 and Gal-3 expression was analyzed in 30 canine melanoma fragments, six melanocytoma fragments and nine fragments of metastatic lymph nodes. Serum Gal-3 was measured in 30 dogs with melanoma and compared to 10 clinically healthy dogs. Canine melanoma expressed Gal-1 primarily in the cytoplasm and presented a variable pattern of Gal-3 in the cytoplasm and nucleus. Regarding the expression of Gal-3, it was observed that according to melanoma severity, there was a decrease in the percent frequence of cells with cytoplasmic labeling and an increase in the nuclear marking intensity with concomitant decrease in the percent frequency of nuclear-labeled cells. Dogs with melanoma had increased serum levels of Gal-3 before the excision of the neoplasia when compared to the clinically healthy animals, showing its potential use as a melanoma biomarker.

Submitted by carla santos (biblioteca.cp2.carla@bahiana.edu.br) on 2018-08-23T20:46:07Z No. of bitstreams: 1 Tese MARCIA M NOYA RABELO.pdf: 18290205 bytes, checksum: 51c309d0716ddaa09940490e86210e9d (MD5) / Approved for entry into archive by JOELMA MAIA (ebmsp-bibliotecacp2@bahiana.edu.br) on 2018-08-24T14:28:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese MARCIA M NOYA RABELO.pdf: 18290205 bytes, checksum: 51c309d0716ddaa09940490e86210e9d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-24T14:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese MARCIA M NOYA RABELO.pdf: 18290205 bytes, checksum: 51c309d0716ddaa09940490e86210e9d (MD5) Previous issue date: 2017-12-20 / Fundamento: estudos sugerem o papel da fibrose mioc??rdica como substrato para o desenvolvimento e progress??o da disfun????o ventricular, arritmia e morte em portadores da doen??a de Chagas. No entanto, poucos dados s??o dispon??veis quanto ao padr??es e patog??nese desta vari??vel a fim de oferecer possibilidades de preven????o e desenvolvimento de terapias corretivas. Objetivos: (1) avaliar a acur??cia da medida plasm??tica da Galectina-3 na determina????o da fibrose mioc??rdica; (2) descrever a frequ??ncia dos polimorfismos dos genes CLDN-1, LGALS3, SOCS3, IL-28B, CCL5 nas diferentes formas cl??nicas da doen??a; (3) descrever a frequ??ncia e extens??o da fibrose mioc??rdica avaliada por resson??ncia magn??tica card??aca em pacientes da foram indeterminada e (4) testar a hip??tese de que a analise da fun????o ventricular com o uso da t??cnica de Speckle Tracking Strain ?? capaz de predizer fibrose em indiv??duos com doen??a de Chagas. Metodologia: estudo observacional, de corte transversal, incluindo pacientes consecutivamente admitidos no ambulat??rio de Chagas e Insufici??ncia Card??aca do Hospital S??o Rafael, no per??odo de janeiro de 2012 a dezembro de 2013, com doen??a de Chagas confirmada por 02 testes sorol??gicos positivos. Todos os indiv??duos realizaram exames bioqu??micos, eletrocardiograma de 12 deriva????es, raio X t??rax, Holter 24h, teste ergom??trico, ecocardiograma com doppler, resson??ncia magn??tica card??aca (RMC) al??m de mensura????o plasm??tica de galtecina-3, NT-ProBNP e citocinas. Resultados: foram avaliados 61 indiv??duos portadores da doen??a de Chagas, 56% sexo feminino, 58??? 9 anos, sendo 17 indiv??duos na forma indeterminada, 16 na forma card??aca sem disfun????o do ventr??culo esquerdo e 28 na forma card??aca com disfun????o do ventr??culo esquerdo. Realce tardio foi identificado em 37 pacientes (64%) ?? resson??ncia magn??tica card??aca, com percentual de ??rea acometida por fibrose de 9,4% (IIQ:2,4-18,4). Em rela????o ao Objetivo 1 (n=61): n??o foi observado associa????o entre a concentra????o s??rica de Galectina-3 e a extens??o de fibrose mioc??rdica evidenciada ?? RMC nas diferentes formas cl??nicas da doen??a. Assim como, foi documentado no Objetivo 2 (n=55) que o polimorfismo do LGALS3 tamb??m n??o ?? capaz de predizer fibrose nas diferentes apresenta????es fenot??picas na doen??a. Seguindo adiante, quanto ao Objetivo 3 (n=61) foi demonstrado que a presen??a de fibrose na forma indeterminada tem frequ??ncia e extens??o semelhante ?? forma card??aca sem disfun????o do ventr??culo esquerdo; e no Objetivo 4 (n=58) que o uso da t??cnica de Speckle Tracking Strain n??o tem valor incremental ?? fra????o de eje????o convencional para a predi????o de fibrose mioc??rdica em portadores da doen??a de Chagas. Conclus??es: em pacientes com doen??a de Chagas n??o h?? rela????o direta entre o grau de fibrose e o n??vel s??rico da Galectina-3, negando um papel preditor dessa mol??cula em rela????o a fibrose mioc??rdica, assim como, a altera????o polim??rfica do gene da Gal-3 n??o prediz fibrose nas diferentes apresenta????es fenot??picas da doen??a. Al??m disso, as formas indeterminada e card??aca sem disfun????o assemelham-se entre si quanto ao percentual de acometimento por fibrose avaliado pela RMC, n??o havendo valor incremental do uso da t??cnica de Speckle Tracking Strain ?? fra????o de eje????o convencional para avalia????o de fibrose subcl??nica.

Orientadores: Fábio Rogério, Roger Chammas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-18T17:12:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Furuzawa_KarinaMie_M.pdf: 6831585 bytes, checksum: 1169d18e1d04229e3df523b6e1bea8d3 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Gliomas são as mais frequentes neoplasias primárias do sistema nervoso central e compõem um grupo heterogêneo, apresentando diferentes graus de malignidade. Glioblastomas (OMS grau IV) representam aproximadamente 50% dos tumores de origem glial e estão associados ao pior prognóstico, com sobrevida média de menos de um ano após o diagnóstico. O gliossarcoma, uma variante do glioblastoma, apresenta componente mesenquimal, além do componente glial. A linhagem celular de glioma utilizada no presente trabalho, NG97ht, é híbrida humano-murina e foi estabelecida a partir de células neoplásicas implantadas no dorso de camundongos nudes. Os tumores que se desenvolveram, por sua vez, são derivados de astrocitoma anaplásico (OMS grau III) ressecado de um paciente masculino de 66 anos. Realizou-se a caracterização morfológica e imunofenotípica de um modelo ortotópico de astrocitoma de alto grau e a análise do padrão de expressão de galectina-3 em tumores derivados da inoculação de células NG97ht. Através de cirurgia estereotáxica, foram inoculadas 5 x 105 células NG97ht no córtex cerebral de camundongos nude (imunodeprimidos) e BALB/c (imunocompetentes) com oito semanas de idade. Foi realizada ressecção dos tumores que se desenvolveram duas ou quatro semanas pós-implante. Análise morfológica e cálculo do índice mitótico foram realizados em cortes dos tumores incluídos em parafina, assim como coloração para detecção de fibras reticulínicas e reações imunoistoquímicas para GFAP, S-100, vimentina, PCNA, galectina-3, CD34, CD56/NCAM, 1A4, desmina, AE1AE3 e sinaptofisina. Além disso, foi realizada semiquantificação da expressão de galectina-3 através de Western Blotting. As características morfológicas e imunofenotípicas da neoplasia indicam um glioma de alto grau, particularmente o gliossarcoma. Os tumores apresentaram alta celularidade, presença de focos necróticos e exibem predominantemente células fusiformes com alto índice mitótico. A expressão de GFAP apresentou alta variabilidade, muitas vezes presente em agrupamentos de células neoplásicas. Foi observada imunopositividade citoplasmática para CD56 e 1A4, indicando diferenciação divergente neuroectodérmica e mesenquimal. Além disso, foi detectada rica e fina rede de fibras reticulínicas intercelulares. A localização da galectina-3 foi nuclear e/ou citoplasmática e sua expressão foi intensa, principalmente nos limites da lesão com o tecido normal adjacente. Não foi detectada diferença significativa na expressão de galectina-3 entre tumores obtidos duas e quatro semanas pós-implante. Em camundongos BALB/c não foi observado crescimento tumoral. Em conclusão, o implante ortotópico de células NG97ht representa uma interessante alternativa para investigações in vivo de gliossarcoma. Considerando-se a falta de estudos sobre o papel da galectina-3 em gliossarcomas e seu possível envolvimento com migração celular, angiogênese e quimiorresistência, a galectina-3 pode ser um potencial alvo para novas estratégias terapêuticas / Abstract: Gliomas are the most frequent primary brain tumors and correspond to various histopathological types and malignancy grades. Glioblastomas (WHO grade IV) account for approximately 50% of glial tumors and are associated with the worst prognoses, with median survival rate of less than 1 year. Gliosarcoma is a rare variant of glioblastoma which displays distinct glial and mesenchymal components. NG97ht is a malignant murine and human hybrid cell line established from a human anaplastic astrocytomaderived tumor engrafted into nude mice. The aims of the present work were morphological and immunophenotypical characterization of an in vivo orthotopic glioma model and analysis of galectin-3 expression pattern in NG97ht cell line-derived tumors. 5 x 105 NG97ht cells were stereotactically inoculated into cerebral cortex of 8-week-old nude or BALB/c mice and tumors were resected after two or four weeks. Morphological analysis and calculation of mitotic index were made in paraffinembedded sections, as well as immunohistochemical reactions for GFAP, CD56, 1A4, AE1AE3 and galectin-3. Semi-quantification of galectin-3 expression was obtained through Western Blotting. The neoplastic features favour a high-grade glioma, particularly gliosarcoma. Tumors were predominantly constituted by spindle cells with high mitotic index and showed elevated cellular density and some necrotic areas. GFAP was expressed by groups of tumoral cells. Positivity for CD56 and 1A4 was cytoplasmic and indicates neuroectodermic and mesenchymal divergent differentiation. Localization of galectin-3 was nuclear and/or cytoplasmic and its expression was intense, mainly at tumor borders with adjacent tissue. There was no significant difference in galectin-3 expression between tumors resected after two or four weeks. Tumor growth was not detected in BALB/c mice. In conclusion, the orthotopic implant of NG97ht cells represents an interesting alternative for gliosarcoma in vivo studies. Considering the lack of investigation about the role of galectin-3 in gliosarcomas and the possible involvement of galectin-3 in cellular migration, angiogenesis and chemoresistance, it should be a potentially good target for new therapeutic strategies / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Tumores são definidos como microambientes compostos não só pelas células malignas, mas também por células endoteliais, fibroblastos e leucócitos, que promovem o crescimento tumoral e a angiogênese. Galectina-3, uma proteína que se liga a b- galactosídeos, é abundantemente expressa por monócitos/macrófagos, dentre outros leucócitos. Inúmeras evidências sugerem que galectina-3 atua como uma molécula reguladora da resposta inflamatória. Tendo em vista que o infiltrado inflamatório pode promover a progressão de tumores, o objetivo do presente trabalho foi avaliar se galectina-3, expressa tanto pela célula tumoral como pelas células estromais, modula o crescimento de melanoma. Para tal, células de melanoma murino Tm1 foram transfectadas com o gene de galectina-3. Ambos clones celulares (galectina-3 positivos e negativos) foram injetados na intrafáscia ou no subcutâneo de camundongos (fêmeas) C57BL/6 selvagens e/ou nocautes para o gene de galectina-3 para análise da implantabilidade e crescimento tumoral. Com relação à implantabilidade, não foi observado diferenças no estabelecimento de uma massa tumoral proliferativa em animais selvagens inoculados com células Tm1 transfectadas ou não com o gene de galectina-3 em animais selvagens. Em relação a taxa de crescimento dos tumores, nenhum animal nocaute inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentou tumores de dimensões mensuráveis até o 11º dia pós-inóculo. Independente do nível de expressão de galectina- 3 pela célula tumoral, os tumores originados nos animais nocautes apresentavam menor massa em gramas comparados ao grupo selvagem, sugerindo que galectina-3 expressa pelas células estromais promove o crescimento tumoral. Ainda, os tumores originados nos animais nocautes e no grupo selvagem inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentavam menor extensão de área necrótica do que os animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. Interessantemente, os animais selvagens e nocautes inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas apresentaram tumores com menor área vascular e menor número de estruturas vasculares funcionais quando comparados aos animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. A análise de expressão gênica nos tumores mostrou que os níveis relativos de RNAm de VEFG (fator de crescimento de endotélio vascular) foram menores nos animais inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas em relação aos inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas, indicando que galectina-3 expressa pelas células tumorais atua como uma molécula anti-angiogênica. Finalizando, o presente trabalho sugere que galectina-3 pode atuar como uma molécula pró- ou anti-tumoral, dependendo do tipo celular que a expressa no microambiente tumoral. / Tumors have been described as microenvironments composed not only by malignant cells, but also by endothelial cells, fibroblasts and leukocytes, which can promote tumor growth and angiogenesis. Galectin-3, a b-galactoside binding protein, is expressed by monocytes/macrophages and others leukocytes. In fact, several lines of evidence suggest that galectin-3 act as master regulators of the inflammatory response. Based on the fact that the inflammatory infiltrate can promote tumor progression, the proposal of this study was to evaluate if galectin-3, either from tumor or stromal cells could modulate melanoma growth. Tm1 murine melanoma cell line was transfected with the galectin-3 gene. Both clones (galectin-3 negative and positive) were injected in the foot pad or subcutaneous in female C57BL/6 wild-type (WT) and galectin-3 knock-out (KO) mice to tumor engraftment and growth analysis. There was no difference in the tumor engraftment between animas injected with Tm1 galectin-3 positive or negative cells. In addition, any knock-out mice injected with galectin-3 positive cells had measurable tumors up to day 11 post inoculation. Regardless the galectin-3 expression level in the melanoma cell, tumors from galectin-3 KO mice were smaller than those from WT animals, suggesting that galectin-3 expressed by stromal cells promotes tumor growth. Moreover, tumor necrotic area was smaller in KO mice and in wild-type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to wild type animals injected with Tm1 galectin-3 negative cells. Interestingly, both vascular area and the number of functional vessels in animals injected with galectin-3 positive Tm1 cells were smaller in WT as well as in KO mice compared to the same animals injected with galectin-3 negative Tm1 cells. Gene expression analysis showed that VEGF (vascular endothelial growth factor) mRNA levels were smaller in wild type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to those injected with Tm1 galectin-3 negative cells, indicating that galectin-3 expressed by tumor cells can act as an anti-angiogenic molecule. The present study suggests that galectin-3 can act either as a pro or antitumoral molecule, depending on which type of cell (tumoral or stromal) this lectin is expressed within tumor microenvironment.

Introdução: A Galectina-1 (Gal-1) é uma proteína multifuncional capaz de reconhecer, de modo específico, glicanas compostas por resíduos de -galactosídeos, por meio de domínios de reconhecimento de carboidrato (CRD). A Gal-1 é um homodímero de 14.900 daltons, pI = 5.6, apresenta uma topologia molecular do tipo jelly-roll composto por duas folhas- anti-paralelas. Além disso, esta proteína não apresenta peptídeo sinal e possui 6 cisteínas, 7 ácidos glutâmicos, 9 ácidos aspárticos e 4 histinas por monômero. A Gal-1 liga-se a diferentes moléculas biológicas contidas nas superfícies celulares, núcleo e componentes da matriz extracelular. O zinco é um importante metal em sistemas biológicos. Aproximadamente 10% do proteoma humano é potencialmente capaz de complexar zinco. Este íon exibe propriedades adequadas tanto para funções catalíticas, quanto estruturais em proteínas. Os sítios de ligação a zinco, nas proteínas, podem ser divididos em catalíticos, estruturais, co-catalíticos e sítios na interface protéica. Geralmente, os resíduos de cisteína, histidina, ácido glutâmico e ácido aspártico são alvos preferênciais de interação com Zn. Há na literatura dados que mostram a interação da Gal-1 humana com íons orgânicos, porém não há relatos sobre a interação Gal-1/Zn . Objetivos: O presente trabalho teve como objetivo avaliar a existência e as implicações da interação entre o íon Zn2+ e a proteína Gal-1. Materiais e Métodos: Foi efetuada a produção, purificação e padronização do uso das formas dimérica e monomérica da Gal-1 recombinante humana. A interação Gal-1/Zn foi avaliada através de ensaios biofísicos e biológicos. A análise in vitro e in silico dos paramêtros biofísicos, foi feita através de espectrofluorimetria, de dicroísmo circular, de ensaio de precipitação, do método GRID e por dinâmica molecular. A análise in vitro dos parâmetros biológicos, foi realizada por meio de ensaio de hemaglutinação e interação com laminina por ELISA. Resultados e Discussão: A adição de ZnCl2 numa solução de Gal-1 causa aumento da emissão por fluorescência do triptofano e uma alteração para o vermelho, altera o espectro de dicroísmo circular e causa precipitação protéica da Gal-1. Estes eventos ocorreram de forma seletiva e dependente da concentração desse íon. As análises in silico indicam que o provável sítio de complexação Zn/Gal-1 é distinto do CRD e é formado pelos aminoácidos Glu-15, Asp-92 e Asp-134, assumindo a conformação trigonal bipiramidal e tendo número de coordenação igual a 5. Conclusão: As análises biofísicas in vitro e in silico, nos indicam que a Galectina-1 tem a capacidade de se complexar com o íon Zn2+. / Introduction: Galectin-1 (Gal-1) is a multifunctional protein that specifically recognizes glycans with -galactosides through carbohydrate recognition domains (CRD). Gal-1 is a homodimeric protein of 14.900daltons, pI=5.6, shows a jelly-roll molecular topology composed of two anti-parallels - sheet, has no signal peptide and contains 6 cysteines, 7 glutamic acids, 9 aspartic acids and 4 histidines per monomer. This lectin binds to different biological molecules contained in the cell surface, nucleus and extracellular matrix components. Zinc is an important metal in biological systems because can participate in the maintenance of protein structure and biological activity. Usually, cysteine , histidine, glutamic acid and aspartic acid residues are preferential targets for interaction with Zn. Approximately 10% of the human proteome is potentially capable to forming complexes with Zn. The Zn2+ ion exhibits properties suitable for both catalytic and structural protein functions. Proteins zinc binding sites can be divided into catalytic, structural, co-catalytic and protein interface sites.There are reports in the literature that shows the interaction between galectin-1 and organic ions. However, were not found reports about Zn-Gal-1 complexes. Objective: The aim of this study was to evaluate the existence and implications of the interaction between galectin-1 and Zn2+ ion. Materials and Methods: Human recombinant Gal-1 (monomer and dimmer) was obtained and purified. Also, the conditions for the use of Gal-1 were standardized. The interaction Zn/Gal-1 was assessed by biophysical an biological procedures. The analysis in vitro and in silico was made by spectrofluorimetry, circular dichroism, precipitation test, method of GRID, and molecular dynamics. The in vitro analysis of biological parameters were performed by hemmaglutination and laminin binding (ELISA) tests. Results and Discussion: The addition of ZnCl2 in Gal-1 solution causes increased fluorescence emission of tryptophan-70 and a red shift, alters the circular dichroism spectrum and causes precipitation of Gal-1 protein. These events occurred in a selective manner dependent of Zinc concentration. The in silico analysis indicates that the probable site of Zn/Gal-1 complexation is distinct from the CRD and is formed by the amino acids Glu-15, Asp-92 and Asp-134, assuming trigonal bipyramidal conformation and with coordination number equal to 5 . Conclusion: The biophysical in vitro and in silico findings suggests that Galectin-1 has the ability to complex with the Zn2+ ion.

Galectina-3, uma proteína que se liga a -galactosídeos, é expressa por neutrófilos e inúmeras evidências indicam que esta molécula atua como uma possível reguladora da resposta imune. Sabe-se que galectina-3 ao ligar com LPS pode levar a formação de oligômeros, que podem alterar o limiar de ativação de células da resposta imune inata. Apesar de existirem diversos estudos que mostram a influência de galectina-3 na resposta de neutrófilos frente a componentes bacterianos, os resultados são em sua maioria contraditórios e inconclusivos. Para elucidar a influência da galectina-3 na reposta imune inata a patógenos periodontais, o presente trabalho avaliou a atividade antimicrobiana in vitro de neutrófilos, isolados de camundongos selvagens (WT) ou geneticamente deficientes de galectina-3 (Gal-3KO), previamente estimulados com LPS de Aa e Pg. Os resultados não evidenciaram diferenças significativas no número de unidades formadoras de colônia (UFC) recuperadas das culturas de neutrófilos provenientes de animais deficientes de galectina-3 e do grupo controle (WT). Contudo, a estimulação de neutrófilos com LPS por 18 horas levou a redução no número de UFC recuperadas das culturas, quando comparado com as culturas estimuladas com LPS por apenas 3 horas. / Galectin-3, a protein that binds -galactosides, is expressed by neutrophils and numerous evidences indicate that this molecule acts as a possible regulator of the immune response. It is known that galectin-3 binding to LPS can lead to the formation of oligomers and thus changing the activation threshold of cells of the innate immune response. Although there are several studies that show the influence of galectin-3 in neutrophil response against bacterial components, the results are conflicting and inconclusive in their majority. To elucidate the influence of galectin-3 in the innate immune response to periodontal pathogens, the present study evaluated the in vitro antimicrobial activity of neutrophils, isolated from wild-type or galectin-3 deficient mice, previously stimulated with LPS of Aa and Pg. The results showed no significant differences in the number of colony forming units (CFU) recovered from cultured galectin-3 deficient neutrophils or control group. However, in a 18 hours time course of LPS stimulation, we observed reduction in the number of CFU, when compared to 3 hours of LPS stimulation.