Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-06-13T18:07:34Z : No. of bitstreams: 1 000749249.pdf: 1046785 bytes, checksum: 980862971c09d4a3a9559d7967701c51 (MD5) / Salmonella constitui-se em um gênero de bactérias amplamente distribuídas na natureza que podem infectar seres humanos, aves, peixes, répteis e mamíferos, e causam doenças em animais e seres humanos. Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG) é o agente etiológico do tifo aviário (TA). Este biovar é hospedeiro-específico de aves e se diferencia de outros sorovares por ser imóvel, causando uma doença septicêmica aguda, com alta taxa de morbidade e mortalidade, que afeta animais adultos, mas é muito patogênico para aves de qualquer idade e também um motivo de preocupação para a avicultura industrial, causando mortalidade que pode chegar a 80%. Programas de monitoramento baseado em testes sorológicos e bacteriológicos para controlar a disseminação desta bactéria e medidas de biossegurança são importantes, para o controle do tifo aviário. A vacinação é uma importante medida que pode ser aplicada como parte de um programa de biossegurança. Neste trabalho, as aves para postura comercial dos grupos A, B e C foram vacinadas com duas doses da estirpe atenuada de Salmonella Gallinarum cobS-cbiA- (SGcobS-cbiA-) e desafiadas na 16ª semana de vida com uma estirpe patogênica de SG (SG287/91). As aves dos grupos E e F foram vacinadas com três doses da estirpe SGcobS-cbiA- e desafiadas na 20ª semana de vida com a estirpe patogênica SG287/91. A mortalidade das aves vacinadas e de aves não-vacinadas foi observada após o desafio. Notou-se redução significativa nas taxas de mortalidade em todos os grupos de aves vacinadas com duas ou três doses da vacina viva, em relação às aves não vacinadas. Foi demonstrado uma forte proteção vacinal contra o tifo aviário em um modelo experimental que pode ser aplicado em aves comerciais à campo, complementando estudos prévios com a estirpe vacinal SGcobS-cbiA- / Salmonella is a genus of bacteria widely distributed in nature that can infect poultry, humans, fishes, reptiles and mammals in general and often causes diseases in animals and humans. Fowl typhoid (FT) is the etiologic agent of Salmonella enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). This non-motile biovar is host-specific and highly adapted to infect birds, causing an acute septicemic disease with high morbidity and mortality, which is very pathogenic to birds of any age, including adult birds and also a cause of concern for the poultry industry, causing mortality that can reach 80%. Monitoring program based on serological and bacteriological tests to prevent infection or to control the spread of the agent and biosecurity measures are important for the control of fowl typhoid. Vaccination is an important measure, which can be used as part of a global biosecurity. In the present work, commercial brown layer-hens in groups A, B, C and D were vaccinated twice with strain Salmonella Gallinarum ΔcobSΔcbiA (SGcobS-cbiA-) and challenged at 16th week of life with a pathogenic strain of SG (SG297/91). Layers in groups E, F and G were vaccinated with three doses of SGcobS-cbiA- and challenged at 20th week of life with a pathogenic strain SG287/91. The mortality rate was observed after challenge in all groups. It was observed the significant reduction of the mortality rate in all groups of vaccinated layer-hens with two and three doses of SGcobS-cbiA-, complementing previous studies

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-15Bitstream added on 2014-06-13T20:48:11Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_sam_dr_jabo.pdf: 714385 bytes, checksum: 8dea9f3890502c7e3fa86484716ab25e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Salmonella Pullorum (SP) é muito semelhante à Salmonella Gallinarum (SG), agentes da Pulorose e Tifo aviário, respectivamente, sendo responsáveis por perdas econômicas no setor avícola. São salmonelas de composição antigênica similar e a distinção de ambas tem sido baseada em provas bioquímicas. Entretanto, este procedimento é laborioso e o surgimento de estirpes com comportamento bioquímico atípico tem estimulado a procura por outros métodos de diagnóstico, como os testes moleculares. No presente estudo, analisou-se o método descrito na literatura envolvendo o gene rfbS em conjunto com testes desenvolvidos com base nos genes speC e speF. O gene rfbS codifica a enzima que atua na parede celular de bactérias e tem sido utilizado para diferenciar SP e SG. Com o propósito de padronizar a PCR para ser utilizada na rotina laboratorial, empregou-se dois métodos de extração de DNA e diferentes concentrações de reagentes. Entretanto, tendo em vista a dificuldade de padronização encontrada desde o início, foi concomitantemente desenvolvida a PCR para os genes speC e speF. Estes dois últimos estão relacionados com a produção da enzima ornitina-descarboxilase, a qual é ativa em SP e inativa em SG. Após testes inicias, foi possível padronizar a PCR do gene speC com posterior utilização da técnica de tratamento enzimático com a enzima de restrição Eco RI. Tanto para o gene rfbS quanto para os genes speC e speF, os resultados encontrados permitiram a diferenciação de 13 amostras de SP e 20 de SG isoladas no Brasil e duas cepas ATCC. Sendo assim, as ações sanitárias e a tomada de decisão no campo podem ser conduzidas de maneira rápida e segura. / Salmonella Pullorum (SP) is very similar to Salmonella Gallinarum (SG). They are respectively agents of Pulorosis and Avian Typhoid, both diseases responsible for economic losses to poultry production. Due to the fact that both salmonellas have similar antigenic composition, their differentiation has been based in biochemical tests. However, this fact that this kind of procedure is very troublesome and the occurence of strains showing atypical behavior have stimulated the search for others diagnostic methods, such as molecular tests. In the present study, a method described in the literature using gene rfbS was analyzed together with tests developed based on genes speC and speF. Gene rfbS encodes an enzyme that acts on the cell wall of bacteria and has been used in the differentiation between SP and SG. In order to standardize the PCR procedure to be used in laboratory routine, two methods for DNA extraction were used, as well as different concentrations of the reagents. However, due to the difficulty in the standardization observed from the beginning of the study, a PCR procedure was developed for genes speC and speF. These genes are related to the production of the enzyme ornithine-descarboxilase, active in SP and inactive in SG. After the initial tests, PCR of gene speC was standardized, and later on it was coupled with the enzymatic treatment with restriction enzyme Eco RI. Results obtained for gene rfbS as well as for genes speC and speF enabled differentiation of 13 SP and 20 SG strains isolated in Brazil and two strains ATCC. So, the sanitary actions and the decisions in the livestock can to be conduced with safety and rapidity.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-06-13T20:44:56Z : No. of bitstreams: 1 penhafilho_rac_dr_jabo.pdf: 670109 bytes, checksum: 048e4ba89a0df3d41f36db27a93c0f9b (MD5) / Salmonella Enteritidis (SE) causa doença transmitida por alimentos (DTA) em humanos. Carne de frango e ovos frequentemente estão associados a esses casos. O controle da infecção em aves, baseia-se em medidas de biossegurança, incluindo-se a vacinação. Tem sido comum a utilização de vacinas vivas (VV) e inativadas (Bacterinas - BA), porém pouco se sabe sobre os mecanismos imunes desencadeados pelas vacinas contra SE. Neste estudo, utilizaram-se quatroprogramas vacinais (VV; VV+VV; BA; VV+BA) em galinhas leves de variedade branca para postura de ovos de mesa, vacinadas com 5 e/ou 25 dias de vida, e desafiadas aos 45 dias de vida com SE. No dia anterior à infecção (1 DAI) e 1, 6 e 9 dias pós-infecção (DPI), cinco aves/grupo foram sacrificadas para amostragem. A população de linfócitos CD4+ e CD8+ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço; níveis de IgG e IgM foram mensurados por ELISA no soro e IgA em lavado intestinal. Os níveis de imunoglobulina (IgG, IgM e IgA) estavam significativamente mais altos em aves vacinadas com BA, do 1 DAI ao 9 DPI, em comparação aos grupos vacinados somente com VV. Os níveis de IFN-γ, na tonsila cecal, eram similares em todos os grupos após o desafio. Antes do desafio (1 DAI), IL-10 foi altamente expressa em baço de aves que receberam somente BA (25 dias de vida), sugerindo o desenvolvimento de resposta por linfócitos T CD4+ auxiliar 2 (Ta2), reforçado pelos altos níveis de IgG encontrados neste grupo (p<0.05). Os níveis de TGF-β4 e das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNFSF15 eram bastante elevados no grupo que recebeu VV+VV. A vacinação por via oral com VV aumentou significativamente o fluxo de linfócitos T CD8+ para as tonsilas cecais após o desafio. Isso poderia... / Salmonella Enteritidis (SE) causes foodborne infection in humans. Poultry meat and eggs are frequently associated with these cases. The control of this bacterium is based on sanitary measures and mainly, vaccination of chicken flocks. Vaccine programs are used worldwide to control SE in poultry flocks. Live (LV) and killed vaccines (KV) are often combined, although few studies regarding immune mechanisms developed by SE vaccines are available. In this work, four vaccine programs were studied (LV; LV+LV; KV; LV+KV) in white layer-hens vaccinated at 5 and/or 25 days-old and challenged at 45 days-old with SE. At 1 day before (dbi) and 1, 6 and 9 days post-infection (DPI), five birds/group were sacrificed for sampling. The population of CD4+ and CD8+ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver, cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen; IgG, IgM and IgA levels were measured by ELISA in serum and the latter in intestinal washes. The immunoglobulin levels (IgG, IgM and IgA) were significantly higher in birds vaccinated with KV, from 1 dbi to 9 DPI, than in groups that received only LV. In caecal tonsils, IFN-γ levels were similar in all groups after challenge. Before challenge (1 dbi), IL-10 was highly expressed in spleen of birds that received only KV (25 days-old), suggesting the development of the T CD4+ helper 2 (Th2) type of immune response, reinforced by high IgG levels against SE seen in this group (p<0.05). TGF-β4 and the proinflammatory cytokines IL-6 and TNFSF15 were higher in caecal tonsils in the group that received LV+LV. Vaccination by oral route with LV clearly increased the influx of CD8+ T cells in caecal tonsils after challenge. This could be correlated with the better control of SE noticed in groups that received at least one dose of LV, including... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-05-21Bitstream added on 2015-04-09T12:47:39Z : No. of bitstreams: 1 000814747.pdf: 821876 bytes, checksum: d4d584e2c4157af6634d7bbf44844fa4 (MD5) / O tifo aviário é uma doença sistêmica causada por Salmonella enterica subesp. enterica sorovar Gallinarum biovar Gallinarum (SG). Esta bactéria é altamente patogênica para aves em qualquer idade, causando mortalidade inclusive em aves adultas. No entanto, a progressão dos sinais clínicos em galinhas pode diferir entre as diferentes variedades de aves. Aves de variedade branca são consideradas mais resistentes e dificilmente se observa mortalidade. Aves de variedade vermelha são suscetíveis e desenvolvem quadros clínicos mais severos com altas taxas de mortalidade. O objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento da doença e infiltrado de linfócitos T γδ durante a infecção por SG em diferentes variedades de aves. Neste trabalho, utilizaram-se 50 aves comerciais para postura de variedade branca e 60 aves comerciais para postura de variedade vermelha que foram distribuídas em quatro grupos: grupo A (controle de aves brancas), grupo B (aves brancas infectadas), grupo C (controle de aves vermelhas) e grupo D (aves vermelhas infectadas). As aves dos grupos B e D foram desafiadas aos 30 dias de vida com SG. Às 6 horas pós-infecção (6 hpi) e 1, 3 e 5 dias pós-infecção (dpi), três aves/grupo foram eutanasiadas para amostragem. A população de linfócitos T γδ foi avaliada por imuno-histoquímica em tonsilas cecais e fígado; citocinas foram quantificadas por RT-qPCR em tempo real em tonsilas cecais e baço e amostras de sangue para análises bioquímicas séricas. As lesões macroscópicas foram mais intensas nas aves do grupo D, a partir do 3º dpi, em comparação com as aves do grupo B. As contagens bacterianas no baço e fígado tiveram maiores quantidades nas aves do grupo D no 3° e 5° dpi. Após o 6° dpi, as aves do grupo D começaram a sucumbir ao tifo aviário, diferente das aves do grupo B, que não apresentaram nenhuma mortalidade. Aves do grupo B tiveram maiores quantidades das proteínas ... / The fowl typhoid is a systemic disease of chickens caused by Salmonella enteric subsp. enteric serovar Gallinarum biovar Gallinarum. This bacterium is highly pathogenic for chickens at any age, causing mortality even in adult birds. The progress of clinical signs differs among different lines of chickens. White lines of chickens are considered resistant and hardly mortality is observed. Chickens of brown lines are more susceptible and develop severe clinical signs with high mortality rates. The aim of this study was to evaluate the development of the disease and γδ T cells influx during the infection with SG in different varieties of layer-hens. In this study, 50 commercial layer-hens of white lines were used and 60 commercial layer-hens of brown lines were divided into 4 groups: group A (control for white layers), group B (infected white layers), group C (control for brown layers) and group D (infected brown layers). Chickens in groups B and D were challenged at 30 days-old with SG. At 6 hours post-infection (6 hpi) and 1, 3 and 5 days post-infection (dpi), three hens per group were sacrificed for sampling. The population of γδ T cells was evaluated by immunohistochemistry in caecal tonsils and liver; cytokines were quantified by real time RT-qPCR in caecal tonsils and spleen and samples of serum were used for biochemistry analysis. The macroscopic lesions were more intense in the hens of group D, at 3 dpi, in comparation with the group B. The bacterial numbers in spleen and liver from chickens in the group D were higher at 3 and 5 dpi. After 6 dpi, the mortality caused by fowl typhoid, began in group D. Differently, group B had no mortality. The group B had higher amounts of the proteins ceruloplasmin, albumin and α1- acid glycoprotein, in comparation to group D, but did not show statistical difference (p>0.05). The protein levels PM=99.000 Da, PM=90.000 Da and transferrin were significantly higher in group B (p<0.05) at ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:57:05Z : No. of bitstreams: 1 penhafilho_rac_me_jabo.pdf: 391172 bytes, checksum: 766b9bf2041c86185eae35cbd749e2ac (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella Gallinarum (SG) causa o Tifo Aviário, uma doença caracterizada por alta mortalidade e morbidade em aves. Salmonella Enteritidis (SE) é uma salmonela paratífica, capaz de acometer aves e mamíferos. Carne de aves e ovos são as principais fontes de transmissão de SE, causando doença transmitida por alimentos em humanos. O controle destas bactérias nas criações avícolas é feito através da combinação de medidas sanitárias e a vacinação das aves. As vacinas vivas mostram-se melhores do que as inativadas para combater esses sorotipos, no entanto, a proteção contra SE, é parcial. A cepa SG cobS cbiA é incapaz de sintetizar vitamina B12. A ausência dessa substância prejudicou a sobrevivência da bactéria no organismo parasitado, causando atenuação na virulência. Neste trabalho, foram avaliadas a mortalidade e a infecção sistêmica causadas por SG cobS cbiA em comparação com uma cepa selvagem de SG. Também foi avaliado seu potencial vacinal contra SG e SE em aves de postura e sua utilização para impedir a colonização cecal por SE em pintinhos de corte de um dia. As aves de postura foram vacinadas com uma dose aos cinco dias, ou com duas doses aos cinco e vinte e cinco dias de vida e foram desafiadas com as respectivas cepas de SG e SE aos 45 dias de vida. As aves que receberam tanto uma quanto duas doses da cepa vacinal foram parcialmente protegidas contra SG. A proteção contra SE foi significativa no grupo de aves que recebeu duas doses de SG cobS cbiA. Porém, a inoculação de SG cobS cbiA em pintinhos com um dia de vida não impediu a colonização do ceco por SE. A cepa SG cobS cbiA demonstrou ter potencial vacinal contra SG e SE. / Salmonella Gallinarum (SG) causes Fowl Typhoid, a disease caracterized by high mortality and morbidity rates in poultry. Salmonella Enteritidis (SE) is a paratyphoid salmonelae that infects birds and mammals. Poultry meat and eggs are the main sources of transmission of SE, causing foodborne disease in humans. The control of these bacterias inside the avian breeding sites is done by the combination of sanitary measures and poultry vaccination. Live vaccines have demonstrated greater efficacy on the protection of poultry against these serovars than the killed vaccines, though, protection against SE is still partial. The strain SG cobS cbiA is uncapable to synthesize vitamin B12. The absence of this substance harmed the bacterial survival in the infected organism, causing attenuation of the virulence. On this work, the mortality and the sistemic infection by SG cobS cbiA were measured and compared with a wild strain of SG. It was also evaluated the potential use of the attenuated strain as a vaccine against SG and SE in laying hens and its utilization to prevent the colonization of the ceca by SE on 1-day-old chickens. The laying hens were vaccinated with one dose at 5- day-old, or with two doses at 5 and 25-day-old and were challenged at 45-day-old with the respective strain of SG or SE. The vaccination either with one or two doses was able to protect the birds against challenge with SG. The administration of two doses of SG cobS cbiA protected the laying hens against SE. Although, the inoculation of SG cobS cbiA by oral gavage on newly hatched chicks was unable to prevent the colonization of the ceca by SE. The protection confered by the strain SG cobS cbiA demonstrated its potential to be used as a vaccine.

Submitted by ANNY LUCIA DEL PILAR CELIS ESTUPIÑAN (annycelismvz@gmail.com) on 2016-09-21T02:37:36Z No. of bitstreams: 1 dissertação_anny final.pdf: 1389696 bytes, checksum: d3ced47a06c0e72bc76157c5c15980a8 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-09-22T20:57:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 celisestupinan_alp_me_jabo.pdf: 1389696 bytes, checksum: d3ced47a06c0e72bc76157c5c15980a8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-22T20:57:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 celisestupinan_alp_me_jabo.pdf: 1389696 bytes, checksum: d3ced47a06c0e72bc76157c5c15980a8 (MD5) Previous issue date: 2016-04-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Salmonella Gallinarum (SG) é o agente etiológico do tifo aviário (TA), uma doença sistêmica grave responsável por perdas econômicas para a indústria avícola em todo o mundo. TA foi considerado sob controle no Brasil e em países desenvolvidos. No entanto, nos últimos anos, inúmeros surtos dessa enfermidade têm sido identificados em lotes de aves de vários estados do Brasil. Com intuito de investigar fatores que pudessem ajudar a compreender a epidemiologia destes surtos, o presente estudo foi realizado. Foram avaliadas: (i) as possíveis alterações na patogenicidade de uma estirpe de SG isolada de um dos surtos recentes de TA, para as aves de linhagens comerciais utilizadas atualmente no Brasil; (ii) as possibilidades de transmissão de SG por via vertical e durante a incubação de ovos; (iii) a influência do uso antimicrobianos na persistência de SG na ave e consequente transmissão vertical; (iv) os perfis genéticos das estirpes isoladas anteriormente e, recentemente, por PFGE. No presente estudo, aves de linhagens mais suscetíveis infectadas por SG apresentaram alterações patológicas de maior intensidade e altas taxas de mortalidade, enquanto que as aves de linhagens mais resistentes apresentaram a mortalidade e sinais clínicos de forma mais branda. No entanto, foram capazes de manter SG por períodos mais longos que as aves de linhagens susceptíveis. SG não foi recuperada dos ovos produzidos por aves suscetíveis ou resistentes. A transmissão vertical não foi observada, embora aves recém-eclodidas foram infectadas por contato durante a incubação. Antibióticoterapia foi eficaz na redução da mortalidade, mas não foi capaz de eliminar a infecção e nem favoreceu a transmissão de SG via ovo. Estirpes de SG exibiram perfis genéticos muito semelhantes, sugerindo que eles vêm circulando nos lotes brasileiros há mais de 20 anos. Falhas em componentes do programa de biossegurança, provavelmente, podem ser responsáveis pela propagação FT no Brasil. / Salmonella Gallinarum (SG) causes fowl typhoid (FT) a severe systemic disease responsible for economic losses to the poultry industry worldwide. FT was considered under control in Brazil and in developed countries. Nonetheless, in recent years has been identified on farms in several states of Brazil. In order to investigate the epidemiological reasons behind this large FT outbreak, the present study was carried out to assess: (i) possible changes in the patogenicity of a strain of SG isolated from a recent outbreak to chickens of white and brown lines of layers; (ii) transmission through eggs and hatching; (iii) the interference of antibiotic to the persistence of SG in the bird and to vertical transmission; (iv) the genetic profiles of strains isolated previously and recently by PFGE. Susceptible lines showed extensive pathological changes and high mortality rates, whereas in resistant lines mortality and clinical signs were almost absent. Although, they could maintain SG for longer periods than the susceptible lines did. SG was not recovered from any egg laid by birds from susceptible or resistant either. Vertical transmission was not observed although newborn chicks were infected due the contact during incubation. Antibiotic therapy was effective at reducing mortality but was not able to clear the infection and neither to favour vertical transmission. Strains did exhibit very similar genetic profiles, suggesting they have been circulating in Brazilian flocks for more than 20 years. Failures in components of biosecurity programs, probably, would be the responsible for the FT spread in Brazil. / CNPq: 190778/2013-0

Orientador: Oliveiro Caetano Freitas Neto / Coorientador: Angelo Berchieri Junior / Banca: Nilce Maria Soares / Banca: Rafael Antonio Casarin Penha Filho / Resumo: Salmonella Gallinarum (SG) é o agente etiológico do tifo aviário (TA), uma doença sistêmica grave responsável por perdas econômicas para a indústria avícola em todo o mundo. TA foi considerado sob controle no Brasil e em países desenvolvidos. No entanto, nos últimos anos, inúmeros surtos dessa enfermidade têm sido identificados em lotes de aves de vários estados do Brasil. Com intuito de investigar fatores que pudessem ajudar a compreender a epidemiologia destes surtos, o presente estudo foi realizado. Foram avaliadas: (i) as possíveis alterações na patogenicidade de uma estirpe de SG isolada de um dos surtos recentes de TA, para as aves de linhagens comerciais utilizadas atualmente no Brasil; (ii) as possibilidades de transmissão de SG por via vertical e durante a incubação de ovos; (iii) a influência do uso antimicrobianos na persistência de SG na ave e consequente transmissão vertical; (iv) os perfis genéticos das estirpes isoladas anteriormente e, recentemente, por PFGE. No presente estudo, aves de linhagens mais suscetíveis infectadas por SG apresentaram alterações patológicas de maior intensidade e altas taxas de mortalidade, enquanto que as aves de linhagens mais resistentes apresentaram a mortalidade e sinais clínicos de forma mais branda. No entanto, foram capazes de manter SG por períodos mais longos que as aves de linhagens susceptíveis. SG não foi recuperada dos ovos produzidos por aves suscetíveis ou resistentes. A transmissão vertical não foi observada, embora a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Salmonella Gallinarum (SG) causes fowl typhoid (FT) a severe systemic disease responsible for economic losses to the poultry industry worldwide. FT was considered under control in Brazil and in developed countries. Nonetheless, in recent years has been identified on farms in several states of Brazil. In order to investigate the epidemiological reasons behind this large FT outbreak, the present study was carried out to assess: (i) possible changes in the patogenicity of a strain of SG isolated from a recent outbreak to chickens of white and brown lines of layers; (ii) transmission through eggs and hatching; (iii) the interference of antibiotic to the persistence of SG in the bird and to vertical transmission; (iv) the genetic profiles of strains isolated previously and recently by PFGE. Susceptible lines showed extensive pathological changes and high mortality rates, whereas in resistant lines mortality and clinical signs were almost absent. Although, they could maintain SG for longer periods than the susceptible lines did. SG was not recovered from any egg laid by birds from susceptible or resistant either. Vertical transmission was not observed although newborn chicks were infected due the contact during incubation. Antibiotic therapy was effective at reducing mortality but was not able to clear the infection and neither to favour vertical transmission. Strains did exhibit very similar genetic profiles, suggesting they have been circulating in Brazilian flocks for more than 20 years. Failures in components of biosecurity programs, probably, would be the responsible for the FT spread in Brazil / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Junior / Banca: Fabiana Silva Lima / Banca: Ana Maria Iba Kanashiro / Banca: Oswaldo Durval Rossi Junior / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: A Salmonella Pullorum (SP) é muito semelhante à Salmonella Gallinarum (SG), agentes da Pulorose e Tifo aviário, respectivamente, sendo responsáveis por perdas econômicas no setor avícola. São salmonelas de composição antigênica similar e a distinção de ambas tem sido baseada em provas bioquímicas. Entretanto, este procedimento é laborioso e o surgimento de estirpes com comportamento bioquímico atípico tem estimulado a procura por outros métodos de diagnóstico, como os testes moleculares. No presente estudo, analisou-se o método descrito na literatura envolvendo o gene rfbS em conjunto com testes desenvolvidos com base nos genes speC e speF. O gene rfbS codifica a enzima que atua na parede celular de bactérias e tem sido utilizado para diferenciar SP e SG. Com o propósito de padronizar a PCR para ser utilizada na rotina laboratorial, empregou-se dois métodos de extração de DNA e diferentes concentrações de reagentes. Entretanto, tendo em vista a dificuldade de padronização encontrada desde o início, foi concomitantemente desenvolvida a PCR para os genes speC e speF. Estes dois últimos estão relacionados com a produção da enzima ornitina-descarboxilase, a qual é ativa em SP e inativa em SG. Após testes inicias, foi possível padronizar a PCR do gene speC com posterior utilização da técnica de tratamento enzimático com a enzima de restrição Eco RI. Tanto para o gene rfbS quanto para os genes speC e speF, os resultados encontrados permitiram a diferenciação de 13 amostras de SP e 20 de SG isoladas no Brasil e duas cepas ATCC. Sendo assim, as ações sanitárias e a tomada de decisão no campo podem ser conduzidas de maneira rápida e segura. / Abstract: Salmonella Pullorum (SP) is very similar to Salmonella Gallinarum (SG). They are respectively agents of Pulorosis and Avian Typhoid, both diseases responsible for economic losses to poultry production. Due to the fact that both salmonellas have similar antigenic composition, their differentiation has been based in biochemical tests. However, this fact that this kind of procedure is very troublesome and the occurence of strains showing atypical behavior have stimulated the search for others diagnostic methods, such as molecular tests. In the present study, a method described in the literature using gene rfbS was analyzed together with tests developed based on genes speC and speF. Gene rfbS encodes an enzyme that acts on the cell wall of bacteria and has been used in the differentiation between SP and SG. In order to standardize the PCR procedure to be used in laboratory routine, two methods for DNA extraction were used, as well as different concentrations of the reagents. However, due to the difficulty in the standardization observed from the beginning of the study, a PCR procedure was developed for genes speC and speF. These genes are related to the production of the enzyme ornithine-descarboxilase, active in SP and inactive in SG. After the initial tests, PCR of gene speC was standardized, and later on it was coupled with the enzymatic treatment with restriction enzyme Eco RI. Results obtained for gene rfbS as well as for genes speC and speF enabled differentiation of 13 SP and 20 SG strains isolated in Brazil and two strains ATCC. So, the sanitary actions and the decisions in the livestock can to be conduced with safety and rapidity. / Doutor

This project was undertaken to establish whether the Onderstepoort Biological Products Fowl Typhoid (OBPft) vaccine registered as an injectable vaccine was effective and safe when administered orally to commercial layers. Its efficacy and duration of protection were compared to the intramuscular injectable route. Commercial brown layer hens were used as they were found to be highly susceptible to Salmonella gallinarum infections. In the safety trial birds were euthanased at timed intervals spanning 4-weeks post vaccination. Necropsies were performed and samples were taken and tested. No clinical signs or mortalities could be attributed to the OBPft vaccine. No active shedding of the vaccine strain could be detected. Slight pathological changes were noted with both routes of vaccination; however these changes were transient, returning to normal within the observation period. The injected group showed a better serological response with the serum agglutination test than the orally vaccinated groups. In the duration of protection trial the two routes of vaccination were compared, the birds were challenged at three 8-week intervals post vaccination. All the unvaccinated birds died. The protection offered to the vaccinated groups was good when birds were challenged 8 and 16-weeks after vaccination. However, this dipped steeply by the challenge 24-weeks post vaccination. Statistically (ANOVA, p<0.05) it was found that there was no significant difference between the protection offered by either the oral or injected route of vaccination with the OBPft vaccine. / Dissertation (MSc (Veterinary Science))--University of Pretoria, 2006. / Production Animal Studies / unrestricted

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008- Maria Zenaide de Lima Moreno Fernandes.pdf: 4713412 bytes, checksum: 57a28d8e279fb4420bec3cd0b2754889 (MD5) Previous issue date: 2008-02-21 / The pharmacological tests were conducted from March 2004 to January 2007 in the Annex to the Biot?rio Experimental Center of Agricultural Sciences (CCA) at the Universidade Federal of Piau? (UFPI). The plant material was collected in the states of Piau? and Maranh?o, and identified by a boatanist from the Graziela Barroso Herbarium (CCN/UFPI). It was determined the antihelmintic activity in vitro of aqueous (AE) and ethanolic (EE) extracts of the plants Annona squamosa, Hymenea courbaril, Operculina macrocarpa, Simarouba versicolor and Scoparia dulcis on Ascaridia galli and in vivo on the nematodes Ascaridia galli and Heterakis gallinarum. The in vitro tests were performed in adults helminth, male/female, collected the small intestine of chiken necropsied. Parasites were placed in Petri plates, divided into groups of ten/plates with three replicates for each concentration. These contain the extracts in volumes of 2, 4, 8, 16 and 32mL plus of 58, 56, 52, 44 and 28 mL of the Tyrode solution completing a volume of 60 mL/plate. The plates were incubated in B.O.D. at 37 ? C (? 1) and observed each 24 h, totaling 96 h. In this period there was the percentage of mortality and were considered dead those parasites with loss of motility after mild pressure. In vivo assays anthelmintic activity used up 108 adult chicken, with average weight of 1.5 kg, divided in 14 test groups of six animals. We used one positive control group (piperazine tetrahidrate), three negative controls groups: distilled water for aqueous extract and DMSO and Tween 80 to ethanolic extract, a total of 18 groups. The results were evaluated by analysis of variance of the average percentage of mortality over time (SAEG and SAS). The higher percentage of in vitro mortality test on the A. galli were registered as AE's sumidade florida of S. dulcis and A. squamosa being 30.7% and 66.7% respectively, while the EE was more effective for the H. courbaril, stem from the S. dulci; O. macrocarpa and S. versicolor with percentage of 70.7%, 46.0%, 38.7% and 26.7%, respectively. In vivo tests in the AE of A. squamosa presented the greatest percentage of elimination of A. galli (38.95%). The AE also was the most effective for sumidade florida, stem and root of S. dulcis and for the S. versicolor removing 28.68%, 21.38% 36.23% and 19.32%, respectively. The plants O. macrocarpa and H. courbaril showed no significant difference (P> 0.05) between the percentage of extracts with the elimination for AE of 23.64% and 24.5% and the EE of 22.4% and 27.03% respectively. In tests with H. gallinarum the percentage of elimination were insignificant for most plants, where only the S. versicolor had percentuals elimination of more expressive with 20.22% for EA and 29.15% for EE and for A. squamosa, confirming in vitro results, AE had his best action with 20.60% of elimination. These results suggest that although the percentage of elimination of the test in vivo have been lower than in vitro test, they confirmed that the A. galli was more sensitive to treatment that H. gallinarum probably because this parasite stay at cecum and the substances responsible for action on the A. galli were present mostly in aqueous fraction and the H. gallinarum in alcoholic fraction. / Os ensaios farmacol?gicos foram conduzidos de mar?o de 2004 a janeiro de 2007 no Anexo do Biot?rio Experimental do Centro de Ci?ncias Agr?rias (CCA) da Universidade Federal do Piau? (UFPI). A mat?ria vegetal foi coletada nos Estados do Piau? e Maranh?o e identificadas no Herb?rio Graziela Barroso (UFPI). Determinou-se a atividade anti-helm?ntica in vitro dos extratos aquosos (EA) e etan?licos (EE) das plantas Annona squamosa, Hymenea courbaril, Operculina macrocarpa, Simarouba versicolor e Scoparia dulcis sobre Ascaridia galli e in vivo sobre os nemat?ides Ascaridia galli e Heterakis gallinarum. Os testes in vitro foram realizados em helmintos adultos, machos/f?meas, coletadas do intestino delgado de aves necropsiadas. Os parasitos foram colocados em placas de Petri, divididos em grupos de dez/placa com tr?s repeti??es para cada concentra??o. Estas continham os extratos nos volumes de 2, 4, 8, 16 e 32 mL acrescidos de 58, 56, 52, 44 e 28 mL da solu??o de Tyrode , completando um volume final de 60 mL/placa. As placas foram incubadas em B.O.D. a 37?C (?1) e observadas a cada 24 h. totalizando 96 h. Neste per?odo verificou-se o percentual de mortalidade, sendo considerados mortos aqueles com perda de motilidade ap?s leve press?o. Na avalia??o da atividade anti-helm?ntica in vivo utilizou-se 108 aves adultas, com peso m?dio de 1,5 kg, divididas em grupos de seis animais, sendo constitu?dos 14 grupos testes, um controle positivo (piperazina tetrahidratada), tr?s grupos controles negativos: ?gua destilada para o extrato aquoso e DMSO e Tween 80 para o extrato etan?lico, num total de 18 grupos. Os resultados foram avaliados por meio da an?lise de vari?ncia do percentual m?dio de mortalidade ao longo do tempo (SAEG e SAS). Os maiores percentuais de mortalidade obtidos no teste in vitro sobre A. galli foram registrados no EA da sumidade florida de S. dulci e de A. squamosa sendo 30,7% e 66,7%, respectivamente. Quanto ao EE este foi mais eficaz para H. courbaril, caule da S. dulci; O. macrocarpa e S. versicolor com percentuais de 70,7%; 46,0%; 38,7% e 26,7%, respectivamente. Nos testes in vivo o EA de A. squamosa foi o que apresentou maior percentual de elimina??o de A. galli (38,95%). O EA tamb?m foi o mais eficaz para a sumidade florida, caule e raiz de S. dulci e para S. versicolor eliminando 28,68%, 21,38%, 36,23% e 19,32%, respectivamente. As plantas O. macrocarpa e H. courbaril n?o apresentaram diferen?a significativa (P>0,05) entre os extratos com percentuais de elimina??o para o EA de 23,64% e 24,5% e para o EE de 22,4% e 27,03%, respectivamente. Nos testes com H. gallinarum os percentuais de elimina??o foram insignificantes para maioria das plantas, onde apenas S. versicolor teve percenturais de elimina??o mais expressivos com 20,22% para o EA e 29,15% para o EE e ainda, a A. squamosa, que confirmando os testes in vitro teve no EA sua melhor a??o com 20,60% de elimina??o. Estes resultados sugerem que embora os percentuais de elimina??o do teste in vivo tenham sido inferiores ?queles obtidos no teste in vitro , eles confirmaram que A. galli foi mais sens?vel aos tratamentos que H. gallinarum provalmente pela localiza??o do segundo (ceco) e que as subst?ncias respons?veis pela a??o sobre A. galli estavam presentes na sua maioria na fra??o aquosa e sobre H. gallinarum na fra??o alco?lica.