published_or_final_version / Medical Sciences / Master / Master of Medical Sciences

Thesis (M. Med. Sc.)--University of Hong Kong, 2008. / Includes bibliographical references (p. 53-64)

"December 2009" The entire dissertation/thesis text is included in the research.pdf file; the official abstract appears in the short.pdf file (which also appears in the research.pdf); a non-technical general description, or public abstract, appears in the public.pdf file. Title from PDF of title page (University of Missouri--Columbia, viewed on January 5, 2010). Thesis advisor: David A. Wilson. Includes bibliographical references.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Univ., 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-04-18T18:23:28Z No. of bitstreams: 1 Jamile Gomes Conceição Caracterizaçao clinico...pdf: 1293623 bytes, checksum: 81e290f73ff54554a4e039099727ca5b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-18T18:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jamile Gomes Conceição Caracterizaçao clinico...pdf: 1293623 bytes, checksum: 81e290f73ff54554a4e039099727ca5b (MD5) Previous issue date: 2012 / Universidade Federal da Bahia. Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz / Mucoceles são lesões comuns da cavidade oral, causadas por alterações nos ductos excretórios de glândulas salivares menores. A fim de contribuir para um melhor conhecimento do perfil biológico destas lesões, este trabalho teve como objetivo estudar os aspectos clínico-patológicos em uma amostra de mucoceles da boca, bem como componentes celulares como vasos sanguíneos (anti-CD34), mastócitos (triptase de célula mastocitária), macrófagos (anti-CD68) e da matriz extracelular (metaloproteinase de matriz -1 e -9), por meio da técnica imuno-histoquímica. Foram estudados 100 casos de mucocele de extravasamento, o seu conteúdo de fibrose (picrossirius) e 32 casos investigados para as proteínas propostas, adotando-se critérios morfométricos e semiquantitativos. As lesões de mucocele atingiram mais o lábio inferior e a segunda e terceira décadas de vida, com média de 23.2 anos de idade (DP±12,24), sendo os homens mais acometidos pela lesão (56%). O tamanho médio foi de 1,1 cm (DP±0,57). Os vasos sanguíneos CD34 positivos estavam presentes em todos os espécimes (média de 55 microvasos por mm2; DP±0,36), mas a medida que se aproximavam do lúmen cístico pareciam desaparecer. Os mastócitos estavam presentes em todos os casos (média= 7.4; DP±0,12), mais concentrados na região cápsula em torno do tecido de granulação, reduzindo-se neste último. Os macrófagos estavam presentes no tecido de granulação (média= 88; DP±0,52), também em todos os casos, mas especialmente concentrados na superfície luminal e dentro da cavidade cística, sugerindo um importante papel na fagocitose de muco. MMPs apresentaram marcação variável presentes em fibroblastos, células inflamatórias e matriz extracelular, sendo MMP-1 ausente em um caso e a MMP-9 em dois. A fibrose também mostrou-se variável entre os casos. Apesar de existir associação estatística ente macrófagos e MMP1 (p<0.05, Kruskal Wallis), diferença significativa entre os diferentes marcadores não foi encontrada (p> 0.05, Kruskal Wallis). Este estudo contribuiu para o conhecimento dos mucoceles da boca em uma amostra representativa da população da Bahia, destacando que a dinâmica de desenvolvimento de formação dessas lesões envolve migração e interação chaves entre componentes celulares e da matriz extracelular importantes para o remodelamento tecidual dos mucoceles. / Mucoceles are common lesions of the oral cavity, caused by damage to the excretory ducts of salivary glands. The present study investigated a sample of oral mucoceles in our population, to describe their clinical and histopathological features, and to assess cell components such as blood vessels, mast cells, macrophages, and matrix metalloproteinases (MMPs – 1 and -9), using immunohistochemistry, for a better understanding of biological profile of this lesion. Histochemistry using Picrossirius red staining was also included. The sample consisted of 100 oral mucoceles, 32 of which were included for investigating both cell components and MMPs, adopting morphometrical and semi-quantitative criteria. The lesions were located most often on the lower lip and second and third decades of life, with a mean of 23.2 years (SD±12,24). Males had a higher frequency (56%) and mean size of the lesions was 1.1cm ((DP±0,57). CD34-positive blood vessels were present in all specimens (mean, 55 microvessels per mm2), but as they approached the cystic lumen seemed to disappear. Mast cells were present in all cases (mean= 7.4; SD±0,12) and concentrated in the capsule surrounding the granulation tissue, although they were reduced in the latter. The macrophages were present in the granulation tissue (mean=88; SD±0.52), also in all cases, but they were especially concentrated on the luminal surface and within the cystic cavity, indicating a pivotal role in phagocytosis of mucus. MMPs showed variable immunostaining and were found in fibroblast and inflammatory cells, however, they were absent in one case of MMP1 and two cases of MMP9. Fibrosis was also variable in all of specimens. Although there was a statistical association between macrophages and MMP1 (P<0.05, Kruskal Wallis), significant difference between the different markers was not found (P<0.05, Kruskal Wallis). This study provides an important insight to the knowledge of oral mucoceles from a sample from Salvador, Bahia, Brazil. Furthermore, it highlights that the development dynamic of these lesions involves migration and interaction of key cellular and extracellular matrix components which are essential to the tissue remodeling of oral mucoceles.

Orientador: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: As feridas de pele apresentam alta prevalência no atendimento clínico de pequenos animais. Para o tratamento dessas lesões, por segunda intenção, inúmeros produtos já foram descritos buscando-se características como: melhor qualidade e redução no tempo do processo de cicatrização. O objetivo desse trabalho foi avaliar a solução de Tartarato de ketanserina (0,345%) e Asiaticosídeo (0,20%) como opção terapêutica, aplicada via tópica, no processo de cicatrização de lesões cutâneas em cães atendidos no Hospital Veterinário “Governador Laudo Natel” (Unesp-FCAV) de Jaboticabal-SP. Para isso, foi acompanhado o processo de cicatrização de dezenove feridas em cães, divididos em dois grupos de tratamento, o grupo controle (GC) com dez feridas e o grupo tratado (GT) com nove feridas. Os pacientes do GT receberam o produto teste, via tópica, e os pacientes do GC a solução salina 0,9% em momentos pré-determinados. As feridas foram avaliadas quanto às suas características macroscópicas e redução da área em diferentes momentos (T0: início do tratamento; T3: terceiro dia de tratamento; T7: sétimo dia de tratamento; T14: décimo quarto dia de tratamento). A mensuração da área foi realizada por planimetria digital do decalque das feridas, pelo programa computacional “ImageJ”. As variáveis da avaliação macroscópica foram analisadas por correspondência múltipla, com aplicação do teste qui-quadrado, com nível de significância P<0,05. Os dados obtidos da área nos diferentes momentos, foram submetid... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Skin wounds present high prevalence in the clinical care of small animals. For the treatment of these lesions, by means of second intention, numerous products have already been described looking for characteristics such as: better quality and reduction in the time of the healing process. The objective of this study was to evaluate the solution of ketanserin tartrate (0.345%) and Asiaticosídeo (0.20%) as a therapeutic option, applied topically, in the healing process of cutaneous lesions in dogs attended at the Veterinary Hospital "Governador Laudo Natel" (Unesp-FCAV) of Jaboticabal-SP. For this, the cicatrization process of nineteen wounds in dogs was divided into two treatment groups, the control group (GC) with ten wounds and the treated group (WG) with nine wounds. The GT patients received the test product, topical, and the patients of the GC received saline solution 0.9% at predetermined times. The wounds were evaluated for their macroscopic characteristics and reduction of the area at different times (T0: beginning of treatment, T3: third day of treatment, T7: seventh day of treatment, T14: fourteenth day of treatment). The measurement of the area was performed by digital planimetry of the wound decal, by the computer program "ImageJ". The variables of the macroscopic evaluation were analyzed by multiple correspondence, with application of the chi-square test, with significance level P <0.05. The data obtained from the area at the different moments were submitted to anal... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A obesidade associada às alterações metabólicas, tais como a resitência à insulina, provoca significativas modificações no decorrer do processo de cicatrização. O objetivo desse estudo foi inicialmente avaliar os efeitos da resistência à insulina induzida por uma dieta com elevado teor de gordura durante o reparo tecidual. E, em seguida, investigar o papel dos macrófagos neste processo. Observamos que os animais submetidos à dieta hiperlipídica (RHL) tornaram-se intolerantes à glicose e resistentes à insulina, além de aumentarem as taxas plasmáticas de colesterol e triglicerídeos em relação aos animais alimentados com ração padrão (RP). O grupo RHL apresentou uma menor taxa de contração da lesão e reepitelização em relação ao grupo RP. Observamos ainda maior quantidade de células inflamatórias (células NOS 2-positivas, macrófagos, e neutrófilos), menor densidade de fibras do sistema colágeno e maior densidade de miofibroblastos e vasos sanguíneos no grupo RHL. O dano oxidativo estava maior no grupo RHL bem como a expressão proteica do fator de crescimento transformante-&#946;1 (TGF-&#946;1) e &#945;-actina de músculo liso (&#945;-SMA). O grupo RHL apresentou altos níveis plasmáticos de TNF-&#945; quando comparado com o grupo RP. Além disso, a proporção das células M1 (macrófagos ativados classicamente) e M2 (macrófagos ativados alternativamente) foi a mesma em ambos os grupos. Em relação a síntese e liberação de citocinas e fatores de crescimento avaliados através dos ensaios in vitro, observamos ainda que os níveis do fator de necrose tumoral-&#945; (TNF-&#945;) e interleucina-1&#946; (IL-1&#946;) estavam maiores no meio condicionado de macrófagos isolados dos animais do grupo RHL (MCRHL) em relacão ao meio condicionado de macrófagos isolados dos animais do grupo RP (MCRP). Além disso, os nossos resultados demonstraram claramente que os fatores solúveis produzidos por macrófagos isolados a partir de animais resistentes à insulina inibem a proliferação e a migração de fibroblastos. Através desses resultados podemos mostrar que a resistência à insulina retarda o processo de cicatrização e sugerir os macrófagos participam deste retardo. / Obesity associated with with metabolic alterations such as insulin resistance causes significant modifications during the healing process. Our aim was initially to analyse the effects of insulin resistance induced by a high- significant changes in skin combined fat diet during cutaneous wound healing. And then investigate the role of macrophages in this process. We observed that animals subjected to a high-fat diet (HFC) became glucose intolerant and insulin resistant and increased plasma cholesterol and triglycerides levels when compared to animals fed with a standard chow (SC). The HFC group had a lower rate of wound contraction and re-epithelialization than the SC group. Besides, HFC group presented a greater number of inflammatory cells (NOS 2- and F4/80-positive cells, and neutrophils), lower density of collagen fibers and higher density of myofibroblasts and blood vessels. Oxidative damage was greater in the HFC group as well as the protein expression of TGF-&#946;1 and &#945;-smooth muscle actin (&#945;- SMA). The HFC group presented higher levels of plasma TNF-&#945; when compared to RP group. Furthermore, the proportion of M1 cells (classically activated macrophages) and M2 (alternatively activated macrophages) was the same in both groups. Regarding to the synthesis and release of cytokines and growth factors evaluated by in vitro assays, we also observed that the levels of TNF-&#945; and IL-1&#946; were higher in conditioned medium of macrophages isolated from animals of HFC (MCHFC) group when compared to the conditioned medium of macrophages isolated from animals in of RP (MCSC) group. Furthermore, our results clearly demonstrate that soluble factors produced by macrophages isolated from insulin resistant animals inhibit the proliferation and migration of fibroblasts. Thus, we can show that insulin resistance delays wound healing process and suggest that the macrophages are involved in this delay.

Tissue neovascularization in postnatal life occurs during post-traumatic tissue healing, neoplastic growth and in the endometrium during the reproductive cycle of females. Although embryonic angiogenesis has been intensively studied, far less is known about tissue revascularization and vessel remodeling in adults due to methodological difficulties. In the current studies, we developed a novel in vivo model of neovascularization that is performed on the chicken chorioallantoic membrane (CAM). A provisional matrix placed on the CAM was vascularized in response to FGF-2. In order to distinguish new from pre-existing vessels, the matrix was separated from the CAM by a nylon grid. Techniques to visualize the three dimensional structure of vascular networks and a method for rapid and semi-automated quantification were developed. This novel model allowed us to study the effects of potential inhibitors of tissue vascularization and their effects on the pre-existing vasculature. We found that while fumagillin or inhibition of MEK and Src inhibited only neovascularization, addition of cortisol or wortmannin was toxic to pre-existing vessels. The CAM model allowed intravital observations during extended periods of time, which together with immunohistochemical analysis revealed a novel mechanism of tissue vascularization. Tensional forces generated by myofibroblast-mediated contraction of the provisional matrix, induced and directed ingrowth of vascular tissue. During the initial stages of vascularization, the vascular network was recruited from the surrounding tissue through a non-angiogenic mechanism by elongation and enlargement of pre-existing vessels, which were moved as vascular loops with constant functional circulation. Ingrown vessels were remodeled, presumably through intussusception, fusion and pruning. The CAM model was validated by observations of neovascularization associated with healing of the injured mouse cornea.

Orientador: Luis Carlos Spolidorio / Resumo: O propósito do trabalho foi avaliar o impacto da depleção de testosterona e sua administração exógena, bem como de drogas bloqueadoras dos receptores de andrógenos (flutamida) e estrógeno (fulvestranto), e inibidoras da conversão de testosterona em estradiol (anastrosol), sobre a reparação tecidual cutânea e reabsorção óssea inflamatória. Foram utilizados 80 ratos, divididos em 8 grupos (n=10/grupo): G1-Sem tratamento, G2-Durateston, G3-Orquiectomia (OQX), G4-OQX+Durateston; G5-Anastrosol, G6-Fulvestranto, G7-Flutamida, G8-Durateston+Anastrosol. Os animais foram submetidos aos diferentes tratamentos por um período de 15 dias e, em seguida, foi realizada a indução de ferida cirúrgica cutânea e reabsorção óssea em calvária durante mais 7 dias. Através dos cortes histológicos foi avaliada a contração das feridas, análise estereométrica e qualitativa do tecido de granulação e mensuração da formação de colágeno; e, ainda, foi realizada reação de imunohistoquímica para os anticorpos PCNA e KGF, e análise da resposta imunoinflamatória por ensaio multiplex. As calvárias foram submetidas a avaliação da porcentagem de tecido ósseo (% BV/TV) através da análise de micromotografia computadorizada (μCT), quantificação do número de osteoclastos e pontos de reabsorção (lacunas de Howship) (H&E), marcação de osteoclastos TRAP+ (imunohistoquímica), e avaliação da resposta imunoinflamatória por ensaio multiplex. Foram utilizados ainda, 60 ratos divididos em 6 grupos (n=10/grupo): 1-Sham, 2-Sham... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of the study was to evaluate the impact of testosterone depletion and its exogenous administration, as well as androgen receptor blockers (flutamide) and estrogen (fulvestrant), and inhibitors of the conversion of testosterone to estradiol (anastrosol) on the cutaneous tissue repair and inflammatory bone resorption. Eighty rats were divided into eight groups (n=10/group): G1-No treatment, G2-Durateston, G3-Orchiectomy (OQX), G4-OQX+Durateston; G5-Anastrozol, G6-Fulvestrant, G7-Flutamide, G8-Durateston+Anastrozol. The animals were submitted to the different treatments for a period of 15 days and then the induction of cutaneous surgical wound and bone resorption in calvaria was performed for another 7 days. Through the histological sections the wound contraction, stereometric and qualitative analysis of the granulation tissue and measurement of collagen formation were evaluated; and also immunohistochemical reaction was performed for PCNA and KGF antibodies and analysis of the immunoinflammatory response by multiplex assay. The calvaria were submitted to evaluation of the percentage of bone tissue (% BV / TV) through computerized micromotography (μCT) analysis, quantification of the number of osteoclasts and reabsorption points (Howship lacunes) (H&E), labeling of TRAP+ osteoclasts (immunohistochemistry), and evaluation of the immunoinflammatory response by multiplex assay. In addition, 60 rats were divided into 6 groups (n = 10 / group): 1-Sham, 2-Sham+Ligature, 3-Orch... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / A obesidade associada às alterações metabólicas, tais como a resitência à insulina, provoca significativas modificações no decorrer do processo de cicatrização. O objetivo desse estudo foi inicialmente avaliar os efeitos da resistência à insulina induzida por uma dieta com elevado teor de gordura durante o reparo tecidual. E, em seguida, investigar o papel dos macrófagos neste processo. Observamos que os animais submetidos à dieta hiperlipídica (RHL) tornaram-se intolerantes à glicose e resistentes à insulina, além de aumentarem as taxas plasmáticas de colesterol e triglicerídeos em relação aos animais alimentados com ração padrão (RP). O grupo RHL apresentou uma menor taxa de contração da lesão e reepitelização em relação ao grupo RP. Observamos ainda maior quantidade de células inflamatórias (células NOS 2-positivas, macrófagos, e neutrófilos), menor densidade de fibras do sistema colágeno e maior densidade de miofibroblastos e vasos sanguíneos no grupo RHL. O dano oxidativo estava maior no grupo RHL bem como a expressão proteica do fator de crescimento transformante-&#946;1 (TGF-&#946;1) e &#945;-actina de músculo liso (&#945;-SMA). O grupo RHL apresentou altos níveis plasmáticos de TNF-&#945; quando comparado com o grupo RP. Além disso, a proporção das células M1 (macrófagos ativados classicamente) e M2 (macrófagos ativados alternativamente) foi a mesma em ambos os grupos. Em relação a síntese e liberação de citocinas e fatores de crescimento avaliados através dos ensaios in vitro, observamos ainda que os níveis do fator de necrose tumoral-&#945; (TNF-&#945;) e interleucina-1&#946; (IL-1&#946;) estavam maiores no meio condicionado de macrófagos isolados dos animais do grupo RHL (MCRHL) em relacão ao meio condicionado de macrófagos isolados dos animais do grupo RP (MCRP). Além disso, os nossos resultados demonstraram claramente que os fatores solúveis produzidos por macrófagos isolados a partir de animais resistentes à insulina inibem a proliferação e a migração de fibroblastos. Através desses resultados podemos mostrar que a resistência à insulina retarda o processo de cicatrização e sugerir os macrófagos participam deste retardo. / Obesity associated with with metabolic alterations such as insulin resistance causes significant modifications during the healing process. Our aim was initially to analyse the effects of insulin resistance induced by a high- significant changes in skin combined fat diet during cutaneous wound healing. And then investigate the role of macrophages in this process. We observed that animals subjected to a high-fat diet (HFC) became glucose intolerant and insulin resistant and increased plasma cholesterol and triglycerides levels when compared to animals fed with a standard chow (SC). The HFC group had a lower rate of wound contraction and re-epithelialization than the SC group. Besides, HFC group presented a greater number of inflammatory cells (NOS 2- and F4/80-positive cells, and neutrophils), lower density of collagen fibers and higher density of myofibroblasts and blood vessels. Oxidative damage was greater in the HFC group as well as the protein expression of TGF-&#946;1 and &#945;-smooth muscle actin (&#945;- SMA). The HFC group presented higher levels of plasma TNF-&#945; when compared to RP group. Furthermore, the proportion of M1 cells (classically activated macrophages) and M2 (alternatively activated macrophages) was the same in both groups. Regarding to the synthesis and release of cytokines and growth factors evaluated by in vitro assays, we also observed that the levels of TNF-&#945; and IL-1&#946; were higher in conditioned medium of macrophages isolated from animals of HFC (MCHFC) group when compared to the conditioned medium of macrophages isolated from animals in of RP (MCSC) group. Furthermore, our results clearly demonstrate that soluble factors produced by macrophages isolated from insulin resistant animals inhibit the proliferation and migration of fibroblasts. Thus, we can show that insulin resistance delays wound healing process and suggest that the macrophages are involved in this delay.