Este estudo possui duas partes distintas: 1. in vivo (randomizado e longitudinal) que teve como objetivo avaliar protocolos de tratamento para hipersensibilidade dentinária com laser de baixa potência (com diferentes dosagens), laser de alta potência e agente dessensibilizante, por um período de 12 e 18 meses; e 2. in vitro que teve como objetivo analisar a perda de estrutura de dois dentifrícios distintos (Colgate Total 12 e Colgate Pró Alívio) e analisar a permeabilidade dentinária dos tratamentos da etapa 01, associados aos dentifrícios, após diferentes ciclos de abrasão. Na parte in vivo, as lesões cervicais não cariosas de 32 voluntários, previamente submetidos aos critérios de elegibilidade ou exclusão, foram divididas em nove grupos (n=10): G1: Gluma Desensitizer (Heraeus Kulzer), G2: Laser de baixa potência com baixa dosagem (Photon Lase, DMC) (três pontos de irradiação vestibulares e um ponto apical: 30 mW, 10 J/cm2, 9 seg por ponto com o comprimento de onda de 810nm). Foram realizadas três sessões com um intervalo de 72 horas), G3: Laser de baixa potência com alta dosagem (um ponto cervical e um ponto apical: 100 mW, 90 J/cm2, 11 seg por ponto com o comprimento de onda de 810nm. Foram realizadas três sessões com um intervalo de 72 horas), G4: Laser de baixa potência com baixa dosagem + Gluma Desensitizer, G5: Laser de baixa potência com alta dosagem + Gluma Desensitizer, G6: Laser de Nd:YAG (Power LaserTM ST6, Lares Research®), em contato com a superfície dental: 1,0W, 10 Hz e 100 mJ, ? 85 J/cm2, com o comprimento de onda de 1064nm, G7: Laser de Nd:YAG + Gluma Desensitizer, G8: Laser de Nd:YAG + Laser de baixa potência com baixa dosagem, G9: Laser de Nd:YAG + Laser de baixa potência com alta dosagem. O nível de sensibilidade de cada voluntário foi avaliado através da escala visual analógica de dor (VAS) com auxílio do ar da seringa tríplice e exploração com sonda após 12 e 18 meses do tratamento. Na parte 02, in vitro, foram utilizados terceiros molares humanos não irrompidos e recém-extraídos. Todos foram limpos e tiveram suas raízes separadas das coroas. As raízes foram seccionadas em quadrados de dentina com dimensões de 4x4x2 mm, os quais foram embutidos em resina Epoxi e devidamente polidos até uma curvatura de 0,3 ?m, analisados em perfilometria ótica. Estes foram imersos em solução de EDTA 17% por 2min para abertura dos túbulos e armazenados em uma solução de Soro Fetal Bovino diluído em salina tamponada com fosfato. Os espécimes foram divididos aleatoriamente em 12 grupos (n=10) G1: Sem tratamento de superfície, sem dentifrício; G2: Nd:YAG/sem dentifrício; G3: Gluma/sem dentifrício; G4: Nd:YAG + Gluma/sem dentifrício; G5: Sem tratamento de superfície/Colgate Total 12; G6: Nd:YAG/Colgate Total 12; G7: Gluma/Colgate Total 12; G8: Nd:YAG + Gluma/Colgate Total 12; G9: Sem tratamento de superfície/Colgate Pró Alívio; G10: Nd:YAG/Colgate Pró Alívio; G11: Gluma/Colgate Pró Alívio; G12: Nd:YAG + Gluma/Colgate Pró Alívio. Em seguida, as superfícies receberam a aplicação de fitas adesivas nas duas margens, mantendo uma área central de teste exposta de 4 x 1 mm, onde foram realizados os tratamentos de superfície e os ciclos de abrasão correspondentes a 1, 7, 30 e 90 dias de escovação (52 ciclos, 210 segundos de contato com o slurry; 361 ciclos, 1470 segundos de contato com o slurry; 1545 ciclos, 6300 segundos de contato com o slurry; 4635 ciclos, 18900 segundos de contato com o slurry, respectivamente). A cada etapa de abrasão, foi realizada análise em Perfilometria Ótica. Para as analises de permeabilidade e Microscopia Eletrônica de Varredura, foram utilizadas amostras circulares de 6 mm de diâmetro e 1 mm de espessura de dentina obtidas das coroas dentais. Estas foram divididas aleatoriamente nos mesmos grupos já descritos anteriormente, sendo que 120 espécimes foram utilizados para permeabilidade (n=10) e 36 para MEV (n=3). Ambas as análises foram realizadas após imersão no EDTA; após tratamentos para a sensibilidade; pós 1 dia, 7 dias, 30 dias e 90 dias de escovação. Após análise estatística pode-se concluir que, in vivo, todos os tratamentos foram eficazes para a redução da hipersensibilidade dentinária. Ainda que o nível da sensibilidade dos pacientes aumentou numericamente, estes não são considerados estatisticamente diferentes a partir de 12 meses. Portanto, até a avaliação de 18 meses, podemos concluir que não houve um aumento na sensibilidade dentinária desde a sua diminuição pós-tratamento. In vitro, pode-se concluir que todos os tratamentos foram capazes de diminuir a permeabilidade dentinária. O dentifrício Total 12 apresentou-se como o mais abrasivo em comparação com o dentifrício Pro Alivio, pois este último promoveu uma perda de estrutura menor, porém ambos não apresentaram aumento na permeabilidade nos tempos de escovação. As microscopias eletrônicas de varredura mostram a formação da smear layer, obliterando os túbulos para ambos os dentifricios. Como conclusão, pode-se afirmar que todos os agentes dessensibilizantes foram efetivos, mesmo apresentando estratégias de ação diferentes. Os dentifrícios são igualmente interessantes para o uso caseiro por ocasionarem oclusão tubular e a associação de tratamentos (caseiro e de consultório) parece ser uma alternativa eficaz no tratamento da hipersensibilidade dentinária. / This study has two distinct parts: in vivo (randomized and longitudinal) that aimed to assess different protocols for the treatment of dentin hypersensitivity with low power laser (with different doses), high power laser and a desensitizing agent, for a period of 12 and 18 months; and an in vitro part that aimed to analyze the loss of structure of two toothpastes (Colgate Total 12 and Colgate Pro Relief) and analyze dentin permeability and micrographs after different abrasion cycles. In the in vivo part, the lesions from 32 patients, that were submitted to the inclusion and exclusion criterias, were divided into nine groups (n = 10): G1: Gluma Desensitizer (Heraeus Kulzer), G2: Low power laser with low dose (Photon Lase, DMC, three points of irradiation in vestibular portion and an apical point: 30 mW, 10 J/cm2, 9 sec per point with the wavelength of 810nm, with three sessions with an interval of 72 hours) G3: low power laser with high dose (one pointin the cervical area, and one apical point: 100 mW, 90 J/cm2, 11 sec per point with the wavelength of 810nm in three sessions with an interval of 72 hours), G4: Low power laser with low dose + Gluma Desensitizer, G5: Low power laser with high dose + Gluma Desensitizer, G6: Nd:YAG laser (Power LaserTM ST6, Research® in contact: 1.0W, 10 Hz and 100 mJ, ? 85 J/cm2, with the wavelength of 1064nm,), G7: Nd:YAG laser + Gluma Desensitizer, G8: Nd:YAG laser + low power laser with low dose G9: Nd:YAG laser + low power laser with high dose. The level of sensitivity of each volunteer was assessed by visual analogue scale of pain (VAS) with the aid of air from the triple syringe and exploration probe, 12 and 18 months after treatment. In the in vitro part, unerupted and recently extracted human third molars were used. All of them were clean and had their roots separated. The roots were cut into squares of dentin with dimensions 4x4x2 mm, which were included in epoxy resin and polished to a curvature of 0,3 ?m, analyzed by profilometry. Samples were immersed in 17% EDTA solution for 2 minutes and stored in a Fetal Bovine Serum diluted in phosphate buffered saline. The specimens were randomly divided into 12 groups (n=10) G1: No surface treatment without toothpaste; G2: Nd:YAG laser without toothpaste; G3: Gluma without toothpaste; G4: Nd:YAG laser + Gluma/without toothpaste; G5: No surface treatment/Total 12; G6: Nd:YAG laser/Total 12; G7: Gluma/Total 12; G8: Nd:YAG laser + Gluma/Total 12; G9: No surface treatment/Pro Relief; G10: Nd:YAG laser/Pro Relief; G11: Gluma/ Pro Relief; G12: Nd:YAG laser + Gluma/Pro Relief. Then, the surfaces received the application of adhesive tape on both sides, keeping a central area of exposed test of 4 x 1 mm, where the surface treatments were performed under the corresponding abrasion cycles 1, 7, 30 and 90 days of brushing (52 cycles, 210 sec in contact with the slurry; 361 cycles, 1470 sec in contact with the slurry; 1545 cycles, 6300 sec in contact with the slurry; 4635 cycles, 18900 sec in contact with the slurry, respectively). After each abrasion cycle, analysis was performed on Optical Profilometry, aiming to analyze the loss of tooth structure under the influence of toothpastes used. For the analysis of permeability and scanning electron microscopy, circular samples of 6 mm in diameter and 1 mm thick dentin obtained from dental crowns were used. These were randomly divided into the same groups previously described. 120 specimens were used for permeability (n=10) and 36 to SEM (n=3). Both analyzes were carried out after immersion in EDTA; after treatment; 1 day after brushing; 7 days after brushing; 30 days after brushing; 90 days after the brushing. After statistical analysis it can be concluded that in the in vivo part all treatments were effective in reducing dentinal hypersensitivity, and even the level of sensitivity of the patients had numerically increased, they were considered as not statistically different from 12 months. Therefore, until the 18 months evaluation, statistically, it can be said that there was not an increased in sensitivity levels. In the in vitro part, it can be concluded that all treatments were able to reduce dentin permeability. The toothpaste Total 12 presented as the more abrasive, because it promoted a higher structure loss when compared to Pro Alivio, but showed no increase in permeability during brushing. The scanning electron microscopy analysis showed the formation of smear layer that promoted the obliteration of the tubules. As a conclusion, it can be affirmed that all desensitizing agentes were effective, even with different strategies. Both dentifrices are igually interesting for \"at home use\" due to the oclusion of dentinal tubules. The association of treatments (at home and in office) seems to be an effective alternative for the treatment of dentin hypersensitivity.

O tratamento das lesões cervicais não cariosas hipersensíveis com agentes dessensibilizantes pode ser uma opção prática e eficaz devido, principalmente, à capacidade desses produtos de obliterarem os túbulos dentinários expostos. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar, in vitro, o efeito quantitativo e qualitativo de cinco agentes dessensibilizantes em relação ao seu potencial de obstrução dos túbulos dentinários. Para a análise quantitativa, foram utilizados testes de condutividade hidráulica da dentina em diferentes condições experimentais. Os ensaios foram realizados na seguinte sequência experimental: na presença de smear layer (PMin); após condicionamento com ácido fosfórico a 37%, por 15 segundos (PMax); após a aplicação dos agentes dessensibilizantes e após o desafio com ácido cítrico a 6%, por um minuto. Para isso, foram selecionados 50 terceiros molares humanos hígidos não irrompidos, a partir dos quais foram confeccionados discos de dentina com espessura de 0,80 ± 1,00 mm e divididos em 5 grupos (n=10) de acordo com os diferentes agentes dessensibilizantes: Grupo 1 (Sensiactive); Grupo 2 (Sensitive Pro-Alívio); Grupo 3 (Flúor gel);Grupo 4 (Desensibilize Nano-P); e Grupo 5 (Enamel Pro@ Varnish). As medidas de condutividade hidráulica dentinária (Lp) foram analisadas através do teste ANOVA a dois critérios (p<0,05) para se determinar as diferenças intra e intergrupos. As diferenças individuais foram determinadas pelo teste Tukey, também a um nível de significância de 5%. Já a análise qualitativa foi realizada através da observação de imagens feitas através do microscópio confocal a laser (MCL). Nesse caso, foram selecionados 18 terceiros molares humanos hígidos não irrompidos, sendo que a preparação e armazenamento dos discos para as condições experimentais seguiram os mesmos passos descritos para os experimentos de condutividade hidráulica. Os espécimes foram divididos em 6 grupos, n=3, conforme os materiais experimentais estudados, e os discos divididos ao meio de modo a permitir a realização de duas fases do experimento no mesmo disco. Um grupo de discos, metade com smear layer e a outra metade condicionada com ácido fosfórico, foi utilizado como controle. Entendendo que a smear layer e o condicionamento ácido conferem padrões de superfície dentinária conhecidos, os demais grupos foram observados, apenas, com relação aos efeitos dos 5 materiais experimentais e do desafio ácido, realizados sobre a dentina condicionada. Os resultados mostraram que os agentes dessensibilizantes produziram alguma redução na Lp, exceto os Grupos 3 e 5, os quais não mostraram valores de condutividade estatisticamente diferentes da PMax. Com relação ao efeito obstrutivo pós-desafio ácido, o resultado variou entre os diferentes grupos experimentais. Apenas o Grupo 1 foi capaz de manter a mesma Lp da fase pós-tratamento. Os demais produtos apresentaram baixa resistência ao desafio ácido e resultados semelhantes entre si. A confrontação dos resultados de Lp com as imagens em MCL mostra diferentes padrões de precipitação de partículas e sugere que a deposição de cristais na superfície da dentina e no interior dos túbulos não garante o bloqueio do movimento de fluido através dos túbulos dentinários. / The treatment of hypersensitive non carious cervical lesions with desensitizing agents may be a practical and effective alternative, mainly due to the ability of these products to obliterate the exposed dentinal tubules. Therefore, the aim of this study was to investigate, in vitro, the quantitative and qualitative effect of five desensitizing agents in relation to their ability to obstruct dentinal tubules. The quantitative analysis was based on dentin hydraulic conductance tests achieved under different experimental conditions. The tests were performed in the following experimental sequence: in the presence of smear layer (PMin); after a 15-second acid etching (37% phosphoric acid- PMax); after the application of the desensitizing agents; and after a 1-minute acid challenge (6% citric acid). Fifty sound not erupted extracted human third molars were randomly selected and, from them, 0.08±1.00 mm-thickness dentine discs were obtained for distribution into 5 groups (n=10), according to the different desensitizing agents: Group 1 (Sensiactive); Group 2 (Sensitive Pro-Relief); Group 3 (Fluoride gel); Group 4 (Desensibilize Nano-P) and Group 5 (Enamel Pro@ Varnish). Dentin hydraulic conductance measures (Lp) were analyzed by two-way ANOVA (p<0.05) to determine intra and intergroup differences. Individual differences were determined by Tukey test, also at a significance level of 5%. The qualitative analysis was performed by observing images obtained from specimens via laser scanning confocal microscopy (LSCM). Here, 18 sound not erupted extracted human third molars were randomly selected and specimens preparation and storage for each experimental condition followed the same steps described for the experiments regarding dentin hydraulic conductance tests. Specimens were divided into 6 groups (n=3), according to studied materials, and each dentin disc was dimidiate to allow performing of the two phases of the experiment on the same disk. A group of discs, in which one half of each specimen showed smear layer and the other half had been acid-etched (37% phosphoric acid), acted as the control. Understanding that the presence of smear layer and that acidetching provide known dentinal patterns, other groups were observed only with respect to the effects of the 5 experimental materials and of the acid challenge, performed on conditioned dentin. Results showed that the desensitizing agents produced some reduction in Lp, except for Groups 3 and 5, which showed no statistically different conductance values of PMax. Regarding the post-acid challenge obstructive effect, results varied among different experimental groups. Only Group 1 was able to keep the same Lp of the post-treatment phase. Other products offered low resistance to acid challenge and showed similar results among them. Comparison of quantitative (Lp) and qualitative (LSCM) analyses shows different particles precipitation patterns and suggests that the deposition of crystals on the surface and into the dentinal tubules does not block fluid movement through the tubules.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / As reaÃÃes alÃrgicas a fÃrmacos representam um terÃo das reaÃÃes adversas a medicamentos, e embora sejam pouco freqÃentes, apresentam altas taxas de morbidade e mortalidade, revelando um importante problema de saÃde pÃblica. Os principais desafios relacionados com a hipersensibilidade a fÃrmacos decorrem do fato de sua imprevisibilidade, de que nÃo existe um modelo animal para pesquisa e devido à variabilidade individual no que diz respeito ao metabolismo do fÃrmaco. As reaÃÃes alÃrgicas a medicamentos sÃo difÃceis de serem diagnosticadas, uma vez que hà carÃncia de mÃtodos laboratoriais para sua investigaÃÃo. O presente estudo teve como objetivo estabelecer alguns mÃtodos imunolÃgicos in vitro para o diagnÃstico de alergia a medicamentos. Vinte pacientes atendidos no AmbulatÃrio de Dermatologia do Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio, Universidade Federal do CearÃ, com manifestaÃÃes muco-cutÃneas e sistÃmicas decorrentes de hipersensibilidade a fÃrmacos foram investigados atravÃs de histÃria clÃnica, exames laboratoriais in vivo e in vitro. Foram avaliados os marcadores de ativaÃÃo de linfÃcitos CD25 e CD69 atravÃs de citometria de fluxo, em cÃlulas mononucleares do sangue perifÃrico previamente incubadas com diferentes concentraÃÃes do fÃrmaco suspeito, e anÃlise das citocinas interferon &#947; e interleucina 5 no sobrenadante da cultura atravÃs de teste imunoenzimÃtico. Dezoito pacientes foram submetidos aos testes cutÃneos, sendo que nove mostraram resultados positivos a um ou mais fÃrmacos. Quinze pacientes apresentaram positividade para pelo menos um dos marcadores de ativaÃÃo em resposta ao fÃrmaco suspeito. Os marcadores CD69 e/ou CD25 foram expressos pelas cÃlulas T CD4+ e CD8+, tanto em reaÃÃes imediatas como nas nÃo imediatas. A comparaÃÃo dos Ãndices de estimulaÃÃo desses marcadores entre pacientes e indivÃduos saudÃveis nÃo alÃrgicos, resultou em diferenÃa significativa para CD4+CD69+ nas trÃs concentraÃÃes do fÃrmaco suspeito e para CD4+CD25+ apenas na menor concentraÃÃo do fÃrmaco suspeito. Nenhuma diferenÃa significativa para as citocinas IFN-&#947; e IL-5 foi observada entre os pacientes e os indivÃduos controles. A detecÃÃo de ambos os marcadores de ativaÃÃo CD69 e CD25 aumentou a sensibilidade diagnÃstica do teste. O uso combinado dos marcadores representa uma ferramenta promissora no diagnÃstico laboratorial das reaÃÃes alÃrgicas a medicamentos. NÃo obstante, essa hipÃtese deve ser confirmada com um nÃmero maior de pacientes e controles. / Drug allergy reactions represent one third of adverse drug reactions, and although they are infrequent, they present high rates of morbidity and mortality, revealing a major public health problem. The main challenges related to drug hypersensitivity result from its unpredictability, no animal model for research and individual variability with regard to drug metabolism. Drug allergy reactions are difficult to be diagnosed once there is a lack of laboratorial tests for their investigation. The present study aimed to establish some immunological in vitro methods for diagnosing drug allergy. Patients (n=20) attending a dermatology outpatient clinic, Hospital Universitario Walter CantÃdio, Universidade Federal Ceara, with mucocutaneous and systemic manifestations due to drug hypersensitivity were investigated by clinical history, laboratory findings, and in vivo and in vitro tests. The lymphocyte activation markers, CD25 and CD69, were evaluated by flow cytometry on the peripheral blood mononuclear cells previously incubated with different concentrations of the suspected drug, and analysis of interferon &#947; and interleukin 5 was done in the culture supernatant by enzyme immunoassay. Eighteen patients were tested by skin tests; nine patients showed positive results to one or more drugs. Fifteen patients showed positivity for at least one of activation markers in response to the suspected drug. The markers CD69 and/or CD25 were expressed by T cells CD4+ and CD8+, both in immediate and delayed reactions. Comparing stimulation index of the markers between patients and healthy no allergic individuals, it was observed a significant difference for CD4+CD69+ in the three suspected drug concentrations and CD4+CD25+ only in the lower drug concentration. No significant differences were found for the cytokines IFN-&#947; and IL-5 between patients and healthy individuals. The detection of both activation markers CD69 and CD25 increased the diagnostic sensitivity of the test. The use of both markers represents a promising tool in drug allergy diagnosis. Nonetheless, this hypothesis needs to be confirmed with a greater number of patients and controls.

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For germplasm selection, 172 accessions were analyzed by means of mechanical inoculation and visualization of symptoms at 5, 21 and 30 days after inoculation. The range of hosts was analyzed by inoculation of 15 typical indicator species. Soya plants (Cv. Savana, Cv. Cristalina, Cv. Doko and Cv. Conquista) and pea (Cv. Mikado and Cv. Triofin) were also analyzed for reactions to BRMV-GO. Leaves of the infected plants were used for detection of BRMV-GO through RT-PCR. Of the 172 analyzed accessions, 168 behaved as susceptible, 3 accessions: BGF0011750 (cv. Mulatinho), BGF0000880 (cv. Rico 23) and BGF0001083 (cv Rico 23) reacted to BRMV-GO with vein and petioles necrosis followed by death; 1 access, BGF0003174 cv. IPA5047, showed a hypersensitivity reaction. The two species of the indicator Chenopodium amaranticolor and C. quinoa reacted with local necrotic lesions and no systemic infection confirmed by RT-PCR. Soybean plants reacted as susceptible and all pea plants showed tip burning. For molecular characterization, complete genome sequencing was performed by Sanger method using the primer walking strategy, the 5 'and 3' ends were obtained by RACE method. Genome sizes were 5906 nucleotides with a 1856 amino acid polyprotein for RNA 1 and 3688 nucleotides with a polypeptide of 1096 amino acids for RNA 2. The nucleotide identity between BRMV-GO and BRMV-Paraná isolates was 92.7% for RNA 1 and 90.5% for RNA 2. The highest percentage of identity obtained by amino acids sequence alignment of the polymerase (RdRp) and the capsid protein (CP) was 63% (RdRp) and 66% (CPs) with Bean pod mottle virus (BPMV), however, the ICTV delimits 80% (RdRp) and 75% (CP) identity to be part of the Comovirus genus, however, these results agree with the results obtained in another work with a Paraná isolate, corroborating that BRMV is a distinct species among this genus. Phylogenetic analysis of regions RdRp and CPs showed that BRMV-GO and BRMV-Paraná do not have significant differences and revealed higher indexes of identity with BPMV, both for RNA 1 and RNA 2. The complete sequences of RNA 1 and RNA 2 were deposited on Genbank under accession numbers KY622124, KY622125, respectively. / Resumo: Em 2013, plantas de feijão-comum da cultivar Pérola foram observadas em um campo experimental da Embrapa Arroz e Feijão Lat. 16° 28’ 00”(S); Long. 49° 17’ 00”(W); (GO) apresentando deformação foliar, mosaico em desenho e bolhosidade. A análise das amostras por microscopia eletrônica detectou a presença de partículas virais típicas do gênero Comovirus, sendo assim necessária a identificação da espécie do vírus através de sequenciamento e a busca por alternativas para o controle, devido ao potencial de dano da espécie Bean rugose mosaic virus (BRMV) para a cultura do feijão. Por isso, o presente trabalho teve como objetivos: (1) a caracterização molecular do isolado BRMV-GO, proveniente de feijoeiro e (2) a busca por acessos de feijoeiro resistentes à essa espécie viral. Para a seleção de germoplasma, 172 acessos foram analisados por meio de inoculação mecânica e visualização dos sintomas aos 5, 21 e 30 dias após a inoculação. A gama de hospedeiras foi analisada mediante inoculação de 15 espécies indicadoras típicas. Plantas de soja (cv. Savana, cv. Cristalina, cv. Doko e cv. Conquista) e ervilha (cv. Mikado e cv. Triofin) também foram analisadas quanto à reação ao BRMV-GO. Folhas das plantas infectadas foram usadas para detecção de BRMV-GO via RT-PCR. Dos 172 acessos analisados, 168 se comportaram como suscetíveis, 3 acessos: BGF0011750 (cv. Mulatinho), BGF0000880 (cv. Rico 23) e BGF0001083 (cv. Rico 23) reagiram ao BRMV-GO com necroses nas nervuras e pecíolos seguida de morte; 1 acesso, BGF0003174 cv. IPA5047, apresentou reação de hipersensibilidade. As duas espécies de indicadoras Chenopodium amaranticolor e C. quinoa reagiram com lesões locais necróticas não ocorrendo infecção sistêmica confirmada por meio de RT-PCR. As plantas de soja foram suscetíveis e todas as plantas de ervilha apresentaram queima do topo. Para a caracterização molecular, o sequenciamento completo do genoma foi realizado pelo método de Sanger usando a estratégia primer walking, as extremidades 5’ e 3’ foram obtidas pelo método RACE. Os tamanhos dos genomas foram de 5906 nucleotídeos com uma poliproteína de 1856 aminoácidos para RNA 1 e para RNA 2 foi de 3688 nucleotídeos com uma poliproteína de 1096 aminoácidos. A identidade de nucleotídeos entre os isolados BRMV-GO e BRMV-Paraná foi de 92,7 % para RNA 1 e 90,5% para RNA 2. A maior porcentagem de identidade obtida através do alinhamento de sequências de aminoácidos da polimerase (RdRp) e da proteína do capsídeo (CP) foi de 63% (RdRp) e 66% (CPs) com Bean pod mottle virus (BPMV), entretanto, o ICTV delimita para membros do gênero Comovirus uma identidade de 75% para aminoácidos (CPs) e 80% para a RdRp, no entanto, esses resultados estão de acordo com os resultados obtidos em outro trabalho com um isolado do Paraná, corroborando que BRMV é uma espécie distinta dentro do gênero. As análises filogenéticas das regiões RdRp e CPs mostraram que BRMV-GO e BRMV-Paraná não possuem diferenças significativas e revelou maiores índices de identidade com BPMV, tanto para o RNA 1 como para o RNA 2. As sequências completas do RNA 1 e RNA 2 foram depositadas no Genbank com os números de acesso KY622124, KY622125, respectivamente.

O estudo in vitro avaliou os agentes dessensibilizantes sobre a evolução do processo erosivo em dentina radicular e o estudo in vivo avaliou o tratamento dessensibilizante na progressão das lesões erosivas e na hipersensibilidade dentinária (HD). 90 espécimes foram imersos em ácido cítrico 6% (erosão inicial) e observados através da Microscopia Confocal a Laser (MCL) (avaliação inicial). Os espécimes tiveram metade de sua superfície isolada (área controle) e então divididos aleatoriamente em 6 grupos (n=15): G1(sem tratamento); G2(Oxagel); G3(Desensibilize Nano P); G4(MI Paste); G5(pasta experimental); G6(laser de diodo, 970nm-0,7W/10Hz, 70mJ). Logo após foram submetidos à ciclagem erosiva (ácido cítrico 0,3%, 9 dias) e aplicação dos tratamentos (a cada 3 dias). As avaliações do perfil, rugosidade, degrau, perda de volume e morfologia da área tratada foram realizadas pelo MCL em diferentes tempos da ciclagem. Após exposição da área controle, a análise final foi realizada no 9º dia. O teste de permeabilidade foi realizado ao final do experimento (microscopia óptica). Para análise superficial, os tratamentos foram comparados por ANOVA e o fator tempo foi analisado internamente pelo teste de Friedman (&alpha;=5%). Para a análise morfológica e da permeabilidade dentinária realizou-se ANOVA e o teste de Tukey (&alpha;=5%). Para o estudo clínico, 20 pacientes foram selecionados com lesões cervicais erodidas em dois diferentes quadrantes sendo estas divididas aleatoriamente em dois grupos experimentais: grupo controle (agente placebo) e grupo tratado (Desensibilize Nano P). Foram realizadas 4 sessões de tratamento (intervalo de 7 dias) e 3 sessões de acompanhamento pós-tratamento (1, 3 e 6 meses). Para avaliar a progressão das lesões, em cada sessão, foi realizada a moldagem e réplicas, feitas para obtenção de imagens e análise no MCL. A avaliação da HD foi realizada por meio da aplicação de jato de ar na lesão e pela escala de estimativa numérica. Realizou-se ANOVA, os testes de Friedman e Kruskall-Wallis e Tukey (&alpha;=5%). Para análise da HD, os dados foram submetidos ao teste não-paramétrico Wilcoxon (&alpha;=5%). Avaliação in vitro do desgaste: observou-se diferença significante para todas as variáveis de resposta; G3 apresentou os menores valores para degrau de desgaste e volume perdido. Análise morfológica: G5 apresentou o menor número e área de 14 15 túbulos expostos durante toda ciclagem. Permeabilidade dentinária: G3 apresentou os maiores valores e G5 os menores; os demais grupos foram semelhantes entre si e ao G3 e G5. Avaliação clínica do desgaste: não houve diferença significante entre os grupos. Com relação ao tamanho das lesões também não houve diferença, porém, comparando os valores iniciais e finais, houve um aumento similar em ambos os grupos. HD: não houve diferença significante entre os grupos somente entre inicial e final. In vitro, o Desensililize Nano P foi capaz de controlar o processo erosivo na dentina radicular e a pasta experimental demonstrou resultados positivos na oclusão dos túbulos dentinários e na permeabilidade dentinária. Clinicamente o Desensililize Nano P não foi capaz de controlar a progressão das lesões erosivas e demonstrou resultados positivos para o tratamento da HD. / The in vitro study evaluated the desensitizing agents in the evolution of the erosive process on root dentin and the in vivo study evaluated the desensitizing treatment in the progression of the erosive lesions and in the dentin hypersensitivity (DH). 90 specimens of root dentin were immersed in 6% citric acid (initial erosion) and they were observed through the Confocal Laser Scanning Microscopy (CLM) (initial evaluation). The half their buccal surface was covered (control area). The specimens were randomly divided into 6 groups (n=15): G1(no treatment); G2(Oxagel); G3(Desensibilize Nano P); G4(MI Paste); G5(experimental paste); G6(970-nm diode laser-0.7W/10Hz, 70mJ). After that, they were cycled through erosive challenge (0.3% citric acid, 9-days). The treatments were applied every 3 days. The evaluations of the wear profile, roughness, step and the volume loss of treated area were carried out by the CLM at different times of the erosive challenge. After control area exposure, the final analysis was performed on the 9th day. The permeability test was performed at the end of the experiment (optical microscopy). For superficial analysis, the treatments were compared by ANOVA and the time factor was analyzed by the Friedman and Tukeys Tests (&alpha;=5%). For the morphological and dentin permeability analysis, ANOVA and Tukey\'s Test (&alpha;= 5%) were performed. For the clinical study, 20 patients were selected with erosive cervical lesions in two different quadrants and they were randomly divided into two groups: control group (placebo agent) and treated group (Desensibilize Nano P). Four treatment sessions (7 days interval) and 3 post-treatment follow-up sessions (1, 3 and 6 months) were performed. For the progression analysis of the lesions, replicas were obtained by molding them at each session and evaluated by the MCL. The DH evaluation was performed through the application of air jet in the lesion and by the numerical rating scale. The analysis of variance, the Friedman, Kruskall-Wallis and Tukeys Tests was performed (&alpha;=5%). For DH analysis, data were submitted to the non-parametric Wilcoxons Test (&alpha;=5%). In vitro evaluation of the wear: significant difference was observed in all response variables; G3 showed the lowest values for step and volume loss. Morphological analysis: G5 showed the lowest number and area of exposed tubules during the cycling. Dentin permeability: G3 showed the highest values and G5 exhibited the lowest values; the other groups were similar to each other and to G3 and G5. Clinical evaluation of the wear: there was 18 19 no significant difference between the groups. Regarding lesion dimension, there was no difference, but comparing the initial and final values, there was a similar increase in both groups. DH: there was no significant difference between the groups, only between the initial and final. In vitro, Desensililize Nano P was able to control the erosive process and the experimental paste showed positive results on dentin tubule occlusion and dentin permeability. Clinically, Desensililize Nano P was not able to control the progression of erosive lesions and demonstrated positive results for the treatment of DH.

A prevalência de doenças respiratórias alérgicas tem aumentado, embora de origem multifatorial, a atividade física parece representar um importante contribuinte. Objetivo: Nós hipotetizamos que o condicionamento aeróbio (AC) prévio à sensibilização com OVA, poderia reduzir a inflamação das vias aéreas, através de um desbalanço via Th1/Th2 ou da citocina regulatória (IL-10). Métodos: camundongos BALB/c foram divididos em 4 grupos (n=8): não treinados e não-sensibilizados (controle), treinados e não-sensibilizados (AC), não treinados e sensibilizados-OVA (OVA) e o grupo treinado e sensibilizado (OV+AC). O condicionamento aeróbio foi realizado em esteira ergométrica adaptada para camundongos por 8 semanas, seguidos de sensibilização por OVA ou soro fisiológico. Foram avaliadas a inflamação celular das vias aéreas e peribrônquica, títulos IgE e IgG1, expressão de Th1 (IL-2 e IFN-), Th2 (IL-4, IL-5, IL-13), citocina regulatória (IL -10), PGE2 e remodelamento das vias aéreas. No peribrônquico a expressão de eotaxina, RANTES, ICAM-1, VCAM-1, TGF- e VEGF. Resultados: Os grupos controle e AC tiveram resultados semelhantes nas avaliacões (p> 0,05). O grupo OVA apresentou células inflamatórias nas vias aéreas e região peribrônquica, remodelamento e um aumento da IgG1 e títulos IgE (p <0,05). Apresentou um aumento na expressão de citocinas Th2, mas não Th1, assim como, aumento na expressão de IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- e VEGF também foram observadas. O grupo OVA+AC apresentou uma menor migração de eosinófilos e linfócitos para as vias aéreas inferiores e titulação de IgG1 e IgE (p<0,05) e menor expressão de citocinas Th2, porém, os níveis Th1 não foram alterados. A inibição da expressão de IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- e VEGF, assim como, o remodelamento das vias aéreas, também foi observado no grupo OVA+AC (p<0,05). Conclusão: Nossos resultados sugerem que a melhora do condicionamento aeróbio inibi a sensibilização e a inflamação alérgica / Prevalence of allergic respiratory diseases has increased and although its origin likely multifactorial, reduced physical activity seems to represent an important contributor. Objective: We hypothesize that an improvement in aerobic conditioning (AC) previous to OVA sensitization would reduce airway inflammation via either an imbalance Th1/Th2 pathway or regulatory cytokine (IL-10). Methods: BALB/c mice were divided in 4 groups (n=8): non-trained and non-sensitized (Control), AC and non-sensitized (AC), non-trained and OVA-sensitized (OVA), and AC and OVA (OVA+AC). AC was performed in a treadmill (8 weeks) followed by either OVA or saline sensitization. It was evaluated airway and peribronchial cell inflammation, specific OVA-IgE and -IgG1 titers, expression of Th1 (IL-2 and IFN-), Th2 (IL-4, IL-5, IL-13) or regulatory (IL-10) cytokines, PGE2 and airway remodeling. Peribronchial expression of eotaxin, RANTES, ICAM-1, VCAM-1, TGF- and VEGF was also evaluated. Results: AC and control groups had similar results in all evaluated outcome (p>0,05) OVA sensitization induced airway and peribronchial cell inflammation and remodeling and an increase in the IgG1 and IgE titers (p<0,05). An increase in the expression of Th2 but not Th1 cytokines was well as an increase in the expression of IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- and VEGF was also observed. OVA+AC group presented a lower migration of eosinophils and lymphocytes to the airways and lower titer of IgG1 and IgE (p<0,05). OVA+AC group also presented lower expression of Th2 cytokines however Th1 levels were unchanged. A lower expression of IL-10, ICAM-1, VCAM-1, RANTES, TGF- and VEGF as well as airway remodeling was also observed in OVA+AC group (p<0,05). Conclusion: Our results suggest that improvement in aerobic conditioning inhibit allergic sensitization and inflammation

As alergias podem ser desencadeadas por substancias químicas, medicamentos, proteínas de origem vegetal e animal como, por exemplo, ácaros, alimentos, fungos e venenos. Reações alérgicas desenvolvidas em resposta a venenos de animais marinhos vêm sendo pouco estudadas. Este é o primeiro estudo que descreve a indução de reação anafilática em camundongos pelo veneno de um peixe brasileiro, acompanhado da caracterização detalhada dos mediadores solúveis e celulares envolvidos no processo. Nossos resultados mostram que o veneno do peixe T. nattereri possui proteínas alergênicas capazes de desencadear um processo alérgico, caracterizado por anafilaxia mediada por IgE e IgG1 e inflamação eosinofílica de fase tardia dependente de citocinas Th2. Ainda demonstramos a regulação da resposta pela positiva pela citocina IL-4 e participação da IL-12 e IFN-<font face=\"Symbol\">g na resposta. / Allergies are a significant and widespread public health problem. Anaphylaxis reactions are inducing by foods, medications and venoms and are IgE mediated. In mice, allergy can be caused also by IgG1. The results presented here describe for the first time anaphylaxis induced by Brazilian fish venom, accompanied by detailed characterization of soluble and cellular mediators involved in the process. Together our results demonstrated that the venom of T. natereri has allergenic proteins that can trigger allergic process, a phenomenon IgE-IgG1 dependent, IL-4 mediated and regulated by IFN-<font face=\"Symbol\">g. Furthermore, we observed a positive participation of the cytokines IL-12 and IFN-<font face=\"Symbol\">g in the exacerbation of the late phase reaction.

Asma é uma doença inflamatória pulmonar crônica usualmente associada com imunidade do tipo 2, eosinofilia pulmonar, hiperreatividade brônquica (AHR), hiper-produção de muco e altos níveis de IgE. Indíviduos asmáticos podem responder aos alérgenos por duas distintas fases: uma fase imediata (EPR) e uma fase tardia (LPR), ambas não reproduzidas na maioria dos modelos murinos de asma. No presente trabalho utilizamos camundongos AIRmax e AIRmin. Verificamos que camundongos AIRmin respondem com uma AHR intrínseca a metacolina. Esta resposta intensa correlacionou-se com uma menor expressão de receptores muscarínicos do tipo 2. Camundongos AIRmax sensibilizados e desafiados com OVA, ao contrário dos AIRmin, desenvolveram LPR e AHR a MCh. Os AIRmax apresentam um denso infiltrado inflamatório com predominância de eosinófilos, uma elevada produção de muco, citocinas (IL-5 e IL-13) e anticorpos anafiláticos IgE e IgG1. De forma surpreendente animais AIRmax desenvolvem quadro alérgico pulmonar crônico que cursa com AHR a MCh e uma inflamação pulmonar com infiltrado de eosinófilos com deposição de colágeno no tecido pulmonar além de uma produção elevada de anticorpos anafiláticos. Em conclusão desenvolvemos um novo modelo murino de asma. / Asthma is a chronic inflammatory lung disease usually associated to Type 2 T helper cells, lung eosinophilia, airway hyper-reactivity (AHR), mucus hyper-secretion and increased titers of IgE. Asthmatic individuals may react to allergens by two distinct phases: an immediate phase (EPR) and a late phase (LPR) both phases were not reproduced in classical murine models of asthma. In the present study we use AIRmax AIRmin mice. We found that AIRmin mice exposed to methacholine presented intense intrinsic AHR. This intense reaction was related to a lower expression of muscarinic type 2 receptors. AIRmax mice sensitized and challenged with OVA, unlike AIRmin developed LPR and AHR to MCh. The AIRmax also developed a dense inflammatory infiltrate containing predominantly eosinophils, hyper-secretion of mucus, cytokines (IL-5 and IL-13) and anaphylactic antibodies (IgE and IgG1). Surprisingly AIRmax mice develop chronic pulmonary allergic framework that leads to AHR to MCh and lung inflammation with eosinophilic infiltration with collagen deposition in lung tissue and a high production of anaphylactic antibodies. In conclusion, we developed a new murine model of asthma.

O desenvolvimento da alergia pode ter início precoce, durante os primeiros meses de vida ou ainda durante a gestação. Em camundongos, é descrita uma predisposição ao desenvolvimento de resposta Th2 no período neonatal, contribuindo para o desenvolvimento da resposta alérgica. A maturação das funções relacionadas à resposta Th1 pelo uso de adjuvantes imunológicos no período pós-natal pode contribuir na profilaxia da asma e outras doenças alérgicas. Neste trabalho, investigamos o efeito dos oligodeoxinucleotídeos CpG na imunização com ovalbumina (OVA) e extrato do ácaro Blomia tropicalis (Bt) em camundongos nos períodos neonatal e adulto. Os resultados obtidos mostram que o ODN-CpG é capaz de diminuir a produção de anticorpos IgE, um isótipo dependente de citocinas Th2, e aumentar os níveis de anticorpos IgG2a nas imunização com OVA e Bt, inclusive na imunização com os dois alérgenos associados. Além disso, a associação do ODN-CpG na imunização neonatal com OVA promove um aumento da produção in vitro de IFN-<font face=\"symbol\">g e diminuiu a produção de IL-10. Ao compararmos a eficiência modulatória do CpG nas imunizações com OVA em camundongos adultos e neonatos, observamos um maior efeito modulatório na produção de anticorpos em adultos. Os resultados mostraram que linfócitos B de camundongos jovens não aumentam a expressão do TLR-9 mesmo após 72 horas de estímulo com CpG, enquanto nos linfócitos de adultos já é possível observar um aumento em 48 horas. Além da menor ativação dos linfócitos B, evidenciamos uma produção de IL-10 e MCP-1 significantemente aumentada na cultura de células de neonatos após estímulo in vitro com CpG. Ao avaliarmos a influência do CpG na ativação antígeno específica dos linfócitos T CD4+, mostramos que linfócitos T CD4+ de neonatos expressam mais intensamente moléculas B7 do que células de adultos após estímulo antigênico in vitro, o que sugere uma característica supressora nestas células. Esse aumento foi inibido pela adição de CpG na cultura. A indução de células Treg (CD4+CD25+Foxp3+) in vitro também foi suprimida pela adição de CpG. Nossos resultados mostram um potencial modulatório do CpG no período neonatal e adulto nas respostas a OVA e Bt. Evidenciamos, também, diferenças qualitativas e quantitativas no efeito do CpG em relação às imunizações neonatal e adulta. Considerando a suscetibilidade dos neonatos às infecções e ao desenvolvimento de alergia, torna-se importante estabelecer estratégias imunomodulatórias que potencializem as respostas inata e adaptativa e possam ser profiláticas no desenvolvimento de doenças alérgicas. / The allergy development may occur in the early life, during the pregnancy or postnatally at the first months of life. In mice, it is described a predisposition to Th2 biased response in the neonatal period, favoring the development of allergic response. The maturation of functions related to Th1 response by the use of immune adjuvants may be beneficial to the allergy prophylaxis. In this work, we evaluated the effect of CpGcontaining oligodeoxynucleotides (CpG-ODN) in the neonatal and adult immunization with ovalbumin (OVA) or the extract of house dust mite Blomia tropicalis (Bt). The results show CpG-ODN is able to decrease IgE antibody production, an isotype related to Th2 response, and increase IgG2a antibody levels in OVA or Bt immunization of A/Sn mice, even when mice were co-immunized with both allergens. Moreover, CpG-ODN association in neonate immunization with OVA increases in vitro IFN-<font face=\"symbol\">g production and decreases IL-10. Comparing the modulatory efficiency of CpG in OVA immunization of neonate and adult mice, we observed a stronger effect on antibody production in adults. Results show that B cells from young mice do not increase the TLR-9 expression upon CpG stimulation for 72 hours whereas the increase of TLR-9 in adult B cells occurs within 48 hours. Besides the lower B cell activation, we found a significant increase of IL-10 and MCP-1 secretion levels by the neonatal cells stimulated by CpG. When we evaluated the influence of CpG on CD4+ T cell activation upon antigenic stimulation, we verified an upregulation of B7 molecules expression on neonate cells than adult cells. This high expression was inhibited by the addition of CpG in the culture. The induction of regulatory T cells (CD4+CD25+Foxp3+) in vitro was also suppressed by CpG. Our results show a modulatory potential of CpG in the immune response to OVA and Bt in both neonatal and adult periods. We also evidenced qualitative and quantitative differences in the CpG effect between neonates and adults. Considering the susceptibility to infections and allergy development in newborns, it becomes important to establish immunomodulatory strategies that enhance innate and adaptive responses and are prophylactic to the development of allergic disorders.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1463_1.pdf: 1455591 bytes, checksum: bf2a747cb7a90cbe76baa0eee15dd9df (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Introdução O diagnóstico da alergia à proteína do leite de vaca através de sintomas é bastante falível, representa mais ou menos a metade dos casos suspeitos. A produção e as concentrações do Interferon-&#947; e Interleucina-4 têm sido estudadas como sinalizadores das reações inflamatórias na alergia à proteína do leite de vaca em atividade e na tolerância oral com ações contrarreguladoras. Objetivos. 1- Determinar a frequência de alergia em crianças com sintomas de intolerância ao leite de vaca. 2 - Determinar as concentrações séricas do interferon-gama e da interleucina-4 em crianças com sintomas suspeitos de alergia à proteína do leite de vaca. Método. Foram estudada 65 crianças (2-84 meses), com intolerância ao leite de vaca, foram estudadas. Informações da história clínica, níveis e IgE total e específicas, Interferon-&#947;, Interleucina-4 e teste do desencadeamento alimentar oral, realizado para determinação das crianças com e sem alergia à proteína do leite de vaca foram registrados em formulário estruturado.Os sintomas entre os dois grupos foram analisados. As idades e citocinas foram sumarizadas como medianas e comparadas pelo teste de Mann-Whitney. As diferenças entre as variáveis categóricas foram determinadas pelo teste qui-quadrado. Os testes estatísticos foram considerados significantes com p< 0,05. Resultados. A mediana de idade foi 5 meses (P25=2- P75=9 meses) no grupo caso e 7 meses (P25=4-P75=11 meses) no grupo comparação (p=0,05). O teste de desencadeamento alimentar oral não confirmou alergia à proteína do leite de vaca em 46,8% dos pacientes com sintomas atribuídos à ingestão de leite de vaca. Reação tardia ocorreu em 77,1% (27/35) dos casos com teste positivo, sendo 18/27 na primeira, 3/27 na segunda e 6/27 na terceira semana de observação. Encontrou-se associação estatística significante entre manifestações cutâneas e teste positivo (p=0,04), mas não com sintomas digestivos e respiratórios. Nas crianças acima de seis meses de idade, o nível de Interleucina-4 foi 3,49 (0,32-36,40pg/mL) e, nas abaixo de seis meses, 2,14pg/mL(0,33-8,12pg./mL), p = 0, 006. As concentrações de Interferon-&#947; foram de 115,96 pg/mL (69,27-150,60 pg./mL) nos pacientes com alergia e 97,88 pg/mL (75,30-174,69 pg/mL) nos sem alergia (p=0,86). A idade maior de 6 meses foi fator contribuinte para o aumento de Interleucina-4 e explicou 7% da sua variação (r2 ajustado = 0,07; p < 0,05), mas não contribuiu para o aumento de Interferon-&#947;. Conclusões: o diagnóstico da alergia à proteína do leite de vaca, baseado apenas em sintomas, é bastante falível. O estudo corrobora a necessidade do teste de desencadeamento alimentar oral para o diagnóstico da alergia à proteína do leite de vaca em crianças As concentrações de Iinterleucina-4 e Interferon-&#947; no sangue periférico, não diferiram entre os pacientes com e sem alergia. Descritores Hipersensibilidade a leite, lactente, pré-escolar, sinais, sintomas, Interferon-&#947;, Interleucina-4