RECHERCHE ET ETUDE DE MOLECULES À ACTIVITE ANTITYROSINASE ET LEUR UTILISATION COMME AGENTS DEPIGMENTANTS EN DERMOCOSMETIQUE Mots clé : Tyrosinase, mélanogenèse, hyperpigmentation. La pigmentation cutanée relève en grande partie d'un phénomène biochimique bien décrit, ayant lieu dans la couche basale de l'épiderme: la mélanogenèse. Elle consiste à produire des pigments, les mélanines qui constituent pour la peau une protection naturelle contre les effets néfastes des UV. Divers dysfonctionnements de la mélanogenèse dus à des agressions extérieures (UV), aux perturbations hormonales ou au vieillissement se traduisent par l'apparition de taches d'hyperpigmentation qui peuvent être particulièrement inesthétiques. Dans ces cas, l'utilisation d'actifs capables de réduire la production des mélanines pourrait permettre de remédier à ces troubles de la pigmentation. La tyrosinase glycoprotéine membranaire et enzyme clé impliquée dans les deux premières étapes de la mélanogenèse, constitue une cible de choix pour atteindre cet objectif. Depuis plusieurs années, la population concernée a eu recours à des inhibiteurs de la tyrosinase mais leur utilisation s'avère peu efficace ou délicate du fait de l'existence de certains effets secondaires. Nous avons pour notre part mis au point et synthétisé des polyphénols de type aurone, chromone ou dérivés des acides caféique et férulique en vue d'une utilisation en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase. Leur évaluation in vitro sur trois modèles et plus particulièrement sur la tyrosinase de mélanocytes humains en culture, a permis d'identifier quelques aurones et dérivés des acides caféique et férulique ayant un fort potentiel en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase humaine. Après une étude de relation structure-activité, il s'avère que l'activité de ces molécules est globalement liée à la présence de groupements phénol, qui leur permettent vraisemblablement de mimer la structure des substrats naturels de l'enzyme (L-tyrosine ou L-DOPA) ou de chélater le cuivre indispensable à son activité. De plus, les molécules sélectionnées sont pour la plupart naturelles et ont montré une faible toxicité in vitro aux doses efficaces. Ceci laisse donc présager un possible développement pour une utilisation en dermocosmétique.

Submitted by CAMILA FERNANDES POLLO MARANZATTO null (camilapollo@hotmail.com) on 2016-03-23T13:57:56Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao final Camila Pollo 22_03_2016 22h.pdf: 2483845 bytes, checksum: d3b8edaea6049b2b1eb302e3512a39e5 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-23T14:08:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maranzatto_cfp_me_bot.pdf: 2483845 bytes, checksum: d3b8edaea6049b2b1eb302e3512a39e5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-23T14:08:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maranzatto_cfp_me_bot.pdf: 2483845 bytes, checksum: d3b8edaea6049b2b1eb302e3512a39e5 (MD5) Previous issue date: 2016-01-25 / Não recebi financiamento / Tratou-se de um estudo metodológico que utilizou análises quantitativa e qualitativa com o objetivo de construir e validar um questionário multidimensional para avaliar a qualidade de vida relacionada ao melasma (HRQ-Melasma). Considerando que existe apenas um instrumento específico disponível na literatura para avaliar a QV em melasma e que o mesmo não foi desenvolvido seguindo os passos clássicos da psicometria, esse trabalho tornou-se indispensável ao ser desenvolvido com base na percepção simbólica dos pacientes e especialistas da área. A amostra foi constituída por cinco especialistas titulados pela Sociedade Brasileira de Dermatologia e 154 portadores de melasma facial. O instrumento de coleta de dados foi composto por duas fases. A primeira, uma fase qualitativa, onde se realizou um grupo focal com os especialistas da área para a definição das dimensões e posteriormente um grupo focal com portadores de melasma facial, para a definição dos itens preliminares através da percepção simbólica dos mesmos frente às manchas. Na segunda fase, quantitativa, foi apresentado aos participantes o questionário teste (49 itens), MELASQoL-PB, DLQI-BRA, Escala Visual de Incômodo, escore MASI e dados sociodemográficos. Para a redução dos itens foi utilizado o modelo de Rasch pertencente a TRI, excluindo 30 itens que continham pouca informação. A análise da dimensionalidade foi realizada através do ajuste do modelo multidimensional, confirmando a multidimensionalidade do questionário. Para a análise da confiabilidade e a estabilidade temporal, utilizou-se o alfa de Cronbach e a Correlação Intra-Classe para Perfeita Concordância (ICC) respectivamente, ambos com resultados satisfatórios. Para analisar a correlação com os outros questionários utilizou-se o Rho de Spearman, que apresentou modesta correlação com o MASI e alta correlação com o DLQI-BRA e escala visual de incômodo. A análise de subgrupos foi feita através do modelo linear generalizado e mostrou que mulheres apresentam escores do HRQ-Melasma maiores que os homens, o escore HRQ-Melasma é maior para os participantes de menor escolaridade, o escore aumenta quando a renda familiar se reduz. A normatização da versão final do HRQ-Melasma foi feita pela regressão cúbica comparada ao DLQI-BRA. Segundo os resultados obtidos pelas análises psicométricas de validade de construto, concluiu-se que o HRQ-Melasma é um questionário consistente e válido para a avaliação da qualidade de vida em pacientes portadores de melasma facial. / This is a methodological study using qualitative and quantitative analyzes aimed to develop and validate a multidimensional questionnaire to evaluate the quality of life related to melasma (HRQ-Melasma). Considering that there is only one specific instrument available in the literature to assess the quality of life in patients with melasma and whose elaboration has not followed classic steps in psychometry, this study has become indispensable to be developed based on the symbolic perception of the patients and experts of the area. The sample consisted of five dermatologists titrated by the Brazilian Society of Dermatology and 154 patients with facial melasma. Data collection consisted of two phases: The first, qualitative phase, where they held a focus group with experts in the field to define the dimensions and then a focus group with people with facial melasma, to define the preliminary items through the symbolic perception of the same face of the spots. In the second phase, quantitative, was presented to the participants the questionnaire test (49 items), MELASQoL-PB, DLQI-BRA, visual scale of nuisance, MASI score and sociodemographic data. The reduction of the items we used the Rasch model belonging to TRI, excluding 30 items that contained little information. The analysis of dimensionality was performed by adjustment the multidimensional model, confirming the multi-dimensionality of the questionnaire. To analyze the reliability and stability over time, we used Cronbach's alpha and the Intra-class correlation for Perfect Compliance (ICC) respectively, both with satisfactory results. To analyze the correlation with other questionnaires we used the Spearman's Rho, which showed modest correlation with the MASI and high correlation with the DLQIBRA and visual scale of nuisance. A subgroup analysis was performed using the generalized linear model and showed that women had higher HRQ-Melasma scores than men, the HRQ-Melasma score is higher for participants with less schooling, the score increases as family income decreases. The regulation of the final version of HRQ-Melasma was made by cubic regression compared to the DLQI-BRA. According to the results obtained by psychometric analyzes of construct validity, it was concluded that the HRQ-Melasma is a consistent and valid questionnaire for evaluating the quality of life in patients with facial melasma.

No / Skin pigmentation is a multistep process of melanin synthesis by melanocytes, its transfer to recipient keratinocytes and its degradation. As dyspigmentation is a prominent marker of skin ageing, novel effective agents that modulate pigmentation safely are being sought for both clinical and cosmetic use. Here, a number of plant extracts were examined for their effect on melanogenesis (by melanin assay and Western blotting) and melanin transfer (by confocal immunomicroscopy of gp100-positive melanin granules in cocultures and by SEM analysis of filopodia), in human melanocytes and in cocultures with phototype-matched normal adult epidermal keratinocytes. Mulberry, Kiwi and Sophora extracts were assessed against isobutylmethylxanthine, hydroquinone, vitamin C and niacinamide. Compared with unstimulated control, all extracts significantly reduced melanogenesis in human melanoma cells and normal adult epidermal melanocytes. These extracts also reduced melanin transfer and reduced filopodia expression on melanocytes, similar to hydroquinone and niacinamide, indicating their effectiveness as multimode pigmentation actives.

La mélanogenèse engage 3 enzymes. La tyrosinase catalyse l’oxydation des 2 premiers substrats pour former la DOPAquinone. Celle-ci, en présence de cystéine peut s’y conjuguer pour produire des pheomélanines (pigments clairs). En son absence, la DOPAquinone est convertie en DOPAchrome, précurseur de la voie de synthèse des eumélanines (pigments foncés). Leur formation implique deux autres enzymes : TRP-1 et TRP-2. Un dérèglement de ce processus entraîne des dermatoses de type hyperpigmentations chez les phototypes IV à VI. Traiter ces problématiques efficacement sans effets secondaires nécessite d'identifier de nouvelles molécules actives capables de réguler la synthèse des eumélanines.Pour atteindre l'objectif, nous avons évalué l’effet inhibiteur de 100 venins d’animaux sur l’activité DOPA oxydase de la tyrosinase de champignon. Des analyses HPLC et spectrophotométriques alternées, ont permis de localiser la sous-fraction active conte-nant la molécule d'intérêt. La détermination du poids moléculaire par spectrométrie de masse conjuguée à l’analyse d'AA après hydrolyse acide a permis d'identifier l’Argiotoxine-636 (ARGTX-636). Elle est un inhibiteur mixte de la diphénolase. Des études préliminaires de SAR ont également été réalisées. En parallèle, une méthode analytique par HPLC/MS a été mise au point pour confirmer l'activité inhibitrice de la DHICA oxydase de l'enzyme par l'ARGTX-636.Pour la première fois est reportée l’isolation et la caractérisation d’un nouveau composé extrait d’un venin d’araignée capable de réguler la mélanogenèse. Cette approche peut avoir un impact majeur dans la recherche de nouvelles molécules actives dans le domaine de la dermo-cosmétique. / Melanogenesis involves three enzymes. Tyrosinase catalyses the oxidation of the two first substrates and leads to the formation of DOPAquinone, which may be conjugated with cysteine to produce pheomelanins (red-yellow pigments). In absence of cys-teine, DOPAquinone is spontaneously converted in DOPAchrome, the precursor of eumelanin products (brown-black pig-ments). The formation of eumelanin molecules partially relies on the activity of two other enzymes called Tyrosinase related protein 2 and Tyrosinase related protein 1. A dysregulation of this process engenders hyperpigmentation tasks into skin IV to VI phototypes. To treat these issues effectively without side effects requires the identification of new active molecules able to regulate the eumelanin synthesis.To achieve the objective, we evaluated the inhibitory effect of 100 animals venoms, on the DOPA oxidase activity of mushroom tyrosinase. HPLC and spectrophotometric analysis alternating, we allowed us to localize the active sub-fraction containing the interest molecule. The molecular weight determination by mass spectrometry combined with the AA analysis after acid hy-drolysis identified argiotoxin-636 (ARGTX-636). It is a mixed-type inhibitor on diphenolase activity. SAR preliminary stu-dies have also been conducted. In parallel, an analytical method by HPLC / MS was developed to confirm the DHICA oxy-dase activity inhibitory effect by ARGTX-636.For the first time is reported the isolation and characterization of a novel compound extracted from a spider venom able to regulate melanogenesis process. This approach can have a major impact in the search for new active compounds in the dermo-cosmetics field.

Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T23:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Doria_RaquelFerreiraFerrazdoLago_D.pdf: 2578074 bytes, checksum: 341c6ac9f1772c408e5a1ea2a499da58 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Avaliar a prevalência de sinais e sintomas no local de inserção no braço e a opinião das mulheres com relação à satisfação com o método e com o novo padrão de sangramento em usuárias de implantes subdérmicos liberadores de levonorgestrel (LNG; Jadelle®) e etonogestrel (ENG; Implanon®). Métodos: Os totais de 233 e 226 mulheres foram aceitas nos grupos de implantes liberadores de ENG e LNG, respectivamente. Os sinais locais foram avaliados pela inspeção e as mulheres foram questionadas sobre queixas relacionadas ao local do implante aos 14 dias e 3, 6, 12, 24 e 36 meses após a inserção no Brasil e na República Dominicana. O mesmo grupo, somente de mulheres brasileiras, sendo 120 no grupo das usuárias de implantes liberadores de ENG e 127 no grupo liberador de LNG, deu sua opinião com relação à satisfação com o método contraceptivo e com o novo padrão menstrual, através de um questionário desenvolvido para o estudo. Os questionários foram aplicados pessoalmente aos 3 e 6 meses, e em seguida a cada 6 meses, até 36 meses após a inserção. Resultados: Dor e outros sintomas (principalmente prurido) foram as queixas mais frequentemente relatadas (~20%) e foram observadas em uma proporção semelhante entre as usuárias de Implanon® e Jadelle®, e parestesia foi relatada com menos frequência Hiperpigmentação foi três vezes maior entre as usuárias de Jadelle® do que em usuárias de Implanon® (p< 0,0001) e foi mais prevalente entre as usuárias nãobrancas. Todos os sintomas e sinais foram relatados muito mais frequentemente por mulheres dominicanas. Embora todos os sinais locais apresentassem uma tendência a diminuir com o tempo de uso, não houve diferenças significativas quando comparadas as ocorrências aos 12, 24 e 36 meses de uso de ambos os tipos de implantes. No entanto, as usuárias do Jadelle® não apresentaram declínio na ocorrência de hiperpigmentação. O modelo de regressão logística ajustada pela cor e índice de massa corporal (IMC; kg/m2) mostrou que as mulheres brancas usuárias de Implanon® apresentaram risco (OR) menor de hiperpigmentação quando comparadas às usuárias de Jadelle® (OR 0,26; IC 95% 0,14-0,48; OR 0,34; IC 95% 0,14-0,81), respectivamente. Não houve correlação entre dor, parestesia e hiperpigmentação e a utilização dos dois tipos de implantes. Hiperpigmentação foi mais prevalente entre usuárias de Jadelle® de pele escura. Em relação à satisfação foram analisados 1200 questionários. A maioria das usuárias dos dois tipos de implantes estava satisfeita com o método, e a insatisfação foi de aproximadamente 15% ao longo dos 3 anos de observação. Além disso, cerca de 70% das mulheres declararam que a utilização dos implantes trouxe benefícios e só aproximadamente 5% referiram que o uso provocou danos. Com relação ao novo padrão menstrual, as usuárias estavam muito satisfeitas ou satisfeitas em aproximadamente 70%, independente do tipo de implante. A vida sexual das usuárias não apresentou alteração em mais de 70% das usuárias, independentemente do tipo de implante. As usuárias indicariam o método para outra mulher e em sua grande maioria o método foi aprovado pelo marido. Conclusões: Informar as usuárias de implantes sobre sinais e sintomas no local de inserção do implante indica uma boa qualidade de atendimento; no entanto não é necessário avaliar o local de inserção a cada visita em usuárias assintomáticas. Os resultados sobre a opinião das usuárias quanto à satisfação com o método foram similares aos de trabalhos anteriores. No entanto, os resultados devem ser interpretados com cautela porque as mulheres que participaram deste estudo não eram usuárias comuns de uma clínica de planejamento familiar, o que levou a maior orientação durante todo o estudo. Não se pode ignorar a possibilidade de que a alta satisfação seja uma consequência da insatisfação com outros métodos contraceptivos / Abstract: Objectives: The study was conducted to assess the prevalence of local signs and symptoms at the insertion site in the arm, and the evaluation of the women's satisfaction with the method and with the new bleeding patterns among users of subdermal releasing-implants, levonorgestrel (LNG, Jadelle®) and etonogestrel (ENG, Implanon®) systems. Methods: A total of 226 and 233 women were enrolled in the ENG and the LNG group, respectively. Local signs were evaluated and women were questioned regarding complaints related to the insertion site at 14 days and 3, 6, 12, 24, and 36 months after insertion in Brazil and Dominican Republic. The same Brazilian women were randomly enrolled in the satisfaction study of ENG group (120) and the LNG group (127), respectively. The opinion of satisfaction with the bleeding pattern and with the method was evaluated through a questionnaire developed for the study. The questionnaires were applied face- toface at the 3, 6, and every 6 months thereafter up to 36 months after insertion. Results: Pain and other symptoms (mostly pruritus) were the most frequently reported complaints (~20%), and were observed in a similar proportion among both Implanon® and Jadelle® users; paresthesia was less frequently reported. Hyperpigmentation was three fold higher among users of Jadelle® than Implanon® users (p< 0.0001) and was more prevalent among non-white users. All symptoms and signs were reported much more frequently by Dominican women. The logistic regression model adjusted by race and body mass index (BMI; kg/m2) showed that users of Implanon® and white women presented lower risk of hyperpigmentation when compared to Jadelle's users (OR 0.26, 95% CI 0.14-0.48; OR 0.34, 95% CI 0.14-0.81, respectively). There was no relation between pain, paresthesia and hiperpigmentation and the use of the implants. Hiperpigmentation was more prevalent between users of Jadelle® in non-white women. The total number of questionnaires for the satisfaction study was 1,200. The results showed that most of these users of contraceptive implants were satisfied with both implants at the different visits and the regret with the method did not reach ~15% at any time through the 3 years of observation. In addition, almost 70% of the women declared that the use of the implants offered benefits for her and only ~5% referred that the use provoke harm for her. Regarding the women's response to changes in their bleeding patterns following insertion of the implant, the percentage who stated that they were very satisfied or satisfied was 70% in both methods. There was no change in the reported frequency of sexual interc urse during use of the implants and no change in their libido. Moreover, all the women in both groups stated that they would recommend the method to a friend or relative and most of them declared that their partner approved of this contraceptive method. Conclusions: Although information relating to local symptoms and signs at the implant site should be provided to current and potential users as a component of good quality of care, we do not recommend evaluation of the insertion site at every visit in women with no complaints. The results about satisfaction with the method are in agreement with previous findings. However, the results must be interpreted with caution because the women are participating in a research study and were not common clients of a family planning clinic. We cannot ignore the possibility that the high satisfaction was a consequence of dissatisfaction with alternative methods / Doutorado / Tocoginecologia / Doutor em Tocoginecologia

L'objectif principal de ce travail de thèse est de développer un score mesurant la pigmentation de la peau à partir d'images spectrales. L'objectif final est de construire un outil plus objectif et au moins aussi performant que les outils cliniques, dans l'évaluation de l'effet des traitements agissant sur l'hyper-pigmentation de la peau. Cet outil a pour vocation à être utilisé dans des essais cliniques. Le travail se focalise sur le mélasma qui est une pathologie pigmentaire symétrique due principalement à des troubles hormonaux et à l'exposition au soleil. Pour évaluer la sévérité de cette pathologie et son évolution sous traitements, deux types de classification sont proposés. Le premier concerne une classification binaire entre tissu sain et tissu pathologique. Le second consiste à définir différents niveaux de sévérité pour les tissus pathologiques. La première classification s'inscrit dans le cadre de la classification dans des espaces de grande dimension. Un outil de réduction de dimension associé à un algorithme de classification par séparateurs à vaste marge a été développé. Cet outil est issu d'une comparaison des techniques de poursuite de projection et de séparation de sources, ainsi que des méthodes d'automatisation pour estimer la dimension de l'espace d'arrivée, et l'estimation des différents groupes de bandes spectrales dans le cas de la poursuite de projection. La seconde classification vise à mesurer un critère clinique de sévérité de l'hyperpigmentation. Ce critère clinique comprend trois composantes : surface, contraste et homogénéïté. La composante de surface découle de la classification entre tissus sains et tissus pathologiques. Une méthodologie d'estimation de combinaison de bandes spectrales tenant conjointement compte de la signature spectrale et de la cinétique de l'effet d'un traitement sur toute une étude clinique est proposée afin d'obtenir un critère de contraste. Pour obtenir un critère d'homogénéïté spatiale, une approche fondée sur l'analyse multi-échelles de champs gaussiens et issue de la méthodologie du "statistical parametric mapping" est employée entre deux dates d'acquisition.

Introdução: A hipercromia cutânea idiopática (HCIRO) não tem sua etiopatogenia bem esclarecida. Parecem estar envolvidos fatores genéticos (herança familiar autossômica dominante), aumento de melanina na derme, vasculatura proeminente e frouxidão da pele palpebral. Encontraram-se, na revisão da literatura, alguns artigos que contribuíram para o esclarecimento da etiopatogenia. Objetivos: Avaliar clínica e histologicamente indivíduos portadores de HCIRO, antes e após o tratamento com luz pulsada de alta energia (LPAE), considerando-se a quantidade de melanina na epiderme e na derme antes e após o tratamento e, assim, avaliar a eficácia da LPAE no clareamento da HCIRO. Avaliar possível diferença na quantidade de melanina da pálpebra inferior (afetada) em relação à pele pré-auricular (controle). Avaliar a qualidade das células dérmicas na pálpebra inferior, contendo melanina antes do tratamento (observação através de imuno-histoquímica para determinação do tipo de célula dérmica, se macrófagos ou melanócitos). Avaliar a presença ou não de hemossiderina na derme. Avaliar e seguir os indivíduos, clinicamente, após um ano do término do tratamento, para verificar a manutenção da melhora ou a recidiva da HCIRO. Casuística e Método: Selecionaram-se 12 indivíduos portadores de HCIRO, os quais foram submetidos à avaliação clínica através de fotografias e à avaliação histológica antes e após a aplicação de LPAE para o tratamento de HCIRO. Realizaram-se biopsias na pálpebra inferior, antes e após o tratamento com LPAE, e biopsia na pele pré-auricular esquerda para comparar a quantidade de melanina existente nela e na pálpebra inferior, antes do tratamento. Os indivíduos foram submetidos a uma série de uma a quatro sessões de aplicação de LPAE nas pálpebras inferiores, com intervalos de aproximadamente trinta dias entre as sessões. Sete observadores independentes, dermatologistas, analisaram fotografias da região palpebral inferior dos participantes antes e após o tratamento e classificaram os resultados como melhor, pior, ou inalterado. A reprodutibilidade dessa avaliação foi testada através do coeficiente Kappa. A quantificação de melanina, por área, antes e após o tratamento, foi realizada através de morfometria com análise de imagens por computador (método digital). A verificação de presença ou não de hemossiderina dérmica foi realizada pela coloração de Perls e a identificação da célula dérmica que contém melanina foi feita pela imunohistoquímica, com anticorpos monoclonais antimacrófagos humanos tipo CD68 e anticorpos monoclonais antimelanócitos humanos tipo Melan A. Resultados: Segundo os sete observadores, houve melhora clínica (clareamento da pele palpebral inferior) estastisticamente significativa (p=0,024) e o coeficiente Kappa mostrou boa concordância entre os observadores. Todos os indivíduos (100%) apresentaram hipercromia pós-inflamatória transitória, com tempo médio de desaparecimento de seis meses, enquanto 58,33% apresentaram hipocromia transitória, no local das biopsias palpebrais, com duração média de sete meses. A análise histológica mostrou ausência de hemossiderina dérmica na pele palpebral, antes e após o tratamento. A quantificação de melanina, por morfometria, mostrou diminuição da mesma após o tratamento tanto na epiderme como na derme, com significância estatística. A morfometria também mostrou, maior quantidade de melanina na epiderme e na derme da pele palpebral inferior, antes do tratamento, em relação à pele pré-auricular, com diferença estatisticamente significativa. A imunohistoquímica com anticorpos monoclonais antimacrófagos humanos tipo CD68 e anticorpos monoclonais antimelanócitos humanos tipo Melan A caracterizaram o macrófago como sendo a célula dérmica que contém melanina na HCIRO, não havendo melanócitos dérmicos. Conclusões: A quantidade de melanina, tanto da epiderme quanto da derme, diminuiu após o tratamento com LPAE na pálpebra inferior. Há maior quantidade de melanina, tanto na epiderme quanto na derme da pálpebra inferior em comparação com a pele pré-auricular, com diferença estatisticamente significativa. As células que contêm melanina na derme palpebral inferior dos indivíduos portadores de HCIRO são macrófagos (e não melanócitos). Nos espécimes examinados neste estudo, não houve presença de hemossiderina na derme da pálpebra inferior. Houve clareamento da pele palpebral inferior após o tratamento com LPAE, e o seguimento clínico após um ano do tratamento mostrou que esse clareamento se manteve, não havendo recidiva da HCIRO. No entanto, um seguimento mais longo é necessário para a avaliação de possível recidiva tardia da pigmentação palpebral. / Introduction: The cutaneous idiopathic hyperchromia (HCIRO) does not have a clear etiopathogeny. Genetic factors seem to be involved (familiar autossomic dominant heredity), increase of melanin in the dermis, proeminent vascularity and eyelid skin slackness. In the literature revision, a few articles were encountered, which contributed in clarifying the etiopathogeny. Objectives: Evaluate clinically and histologically individuals bearer of HCIRO, before and after the treatment with intense pulsed light (LPAE), considering the melanin quantity in the epidermis and dermis, before and after the treatment, in order to evaluate the efficacy of LPAE in the clearing up of HCIRO. Evaluate possible difference in the melanin quantity of the lower eyelid in relation to the pre-auricular skin. Evaluate the quality of the dermic cells in the lower eyelid, containing melanin before the treatment (observation through immunohistochemistry to determine the dermic cell type, whether macrophages or melanocytes). Evaluate the presence or not of hemossiderine in dermis. Evaluate and follow up clinically of the individuals after a year treatment to check the improvement maintenance or HCIRO recurrence. Casuistry and Method: There were selected 12 individuals, bearer of HCIRO, and these were submitted to a clinical evaluation through photographies and to histological evaluation before and after LPAE application for HCIRO treatment. Biopsies were made in the lower eyelid, before and after treatment with LPAE, and in the left pre-auricular skin to compare the melanin quantity with the lower eyelid, before the treatment. The individuals were submitted to one to four sessions of LPAE application in the lower eyelid with approximately thirty day intervals between sessions. Seven independent observers (dermatologists) analysed photos of the participants lower eyelids, before and after the treatment and classified the results as better, inaltered or worse. The reproducibility of this affraisal was tested through the Kappa coefficient. The quantification of melanin, per area, before and after the treatment, was made through morphometry, with image analysis by computer (digital method). The verification of the presence or not of dermic hemossiderin was made through the Perls colouring and the cell identification, which contains melanin, was made through immunohistochemistry with monoclonal antibodies anti human macrophages type CD68 and monoclonal antibodies anti human melanocytes type Melan-A. Results: According to seven observers, there was a clinical improvement (clearing up of the eyelid skin) statistically significant (p= 0.24) and the Kappa coefficient showed a good concordance between the observers. All of the of the individuals (100%) showed a temporary post-inflammatory hyperchromia with an average duration of six months, while 58.33% presents a transitory hypochromia, in the place of palpebral biopsies, of an average duration of seven months. The histological analysis showed absence of dermic hemossiderin in the palpebral skin, before and after the treatment. The melanin quantification, per morphometry, showed decrease of same after the treatment both in the epidermis and dermis, of statistical significance. Melanin quantity was higher in the lower eyelid (before treatment), comparing with pre-auricular skin, with significant difference statistically. Immunohistochemistry with monoclonal antibodies anti human macrophages type CD68 and monoclonal antibodies anti human melanocytes type Melan-A, characterized the macrophages as being the dermic cell which contains melanin in HCIRO, showing no dermic melanocytes. Conclusions: The melanin quantity, both in the epidermis and dermis, decreased after the treatment with LPAE in the lower eyelid. There was more melanin in the epidermis and dermis of the eyelid skin, comparing with the pre-auricular skin, with a statistically significant difference. The cells that contain melanin in the lower eyelid dermis of the individuals bearer of HCIRO, are macrophages (and not melanocytes). In the specimens examined in this study, there was absence of hemossiderin in the dermis of the lower eyelid. There was a clearing up of the lower eyelid skin after the treatment with LPAE, and the clinical follow-up after one year of treatment showed that this clearing up was maintained and no HCIRO reincidence occurred. In the meantime, a longer follow-up is necessary to evaluate a later possible reincidence of the palpebral pigmentation.

Introdução: A hipercromia cutânea idiopática (HCIRO) não tem sua etiopatogenia bem esclarecida. Parecem estar envolvidos fatores genéticos (herança familiar autossômica dominante), aumento de melanina na derme, vasculatura proeminente e frouxidão da pele palpebral. Encontraram-se, na revisão da literatura, alguns artigos que contribuíram para o esclarecimento da etiopatogenia. Objetivos: Avaliar clínica e histologicamente indivíduos portadores de HCIRO, antes e após o tratamento com luz pulsada de alta energia (LPAE), considerando-se a quantidade de melanina na epiderme e na derme antes e após o tratamento e, assim, avaliar a eficácia da LPAE no clareamento da HCIRO. Avaliar possível diferença na quantidade de melanina da pálpebra inferior (afetada) em relação à pele pré-auricular (controle). Avaliar a qualidade das células dérmicas na pálpebra inferior, contendo melanina antes do tratamento (observação através de imuno-histoquímica para determinação do tipo de célula dérmica, se macrófagos ou melanócitos). Avaliar a presença ou não de hemossiderina na derme. Avaliar e seguir os indivíduos, clinicamente, após um ano do término do tratamento, para verificar a manutenção da melhora ou a recidiva da HCIRO. Casuística e Método: Selecionaram-se 12 indivíduos portadores de HCIRO, os quais foram submetidos à avaliação clínica através de fotografias e à avaliação histológica antes e após a aplicação de LPAE para o tratamento de HCIRO. Realizaram-se biopsias na pálpebra inferior, antes e após o tratamento com LPAE, e biopsia na pele pré-auricular esquerda para comparar a quantidade de melanina existente nela e na pálpebra inferior, antes do tratamento. Os indivíduos foram submetidos a uma série de uma a quatro sessões de aplicação de LPAE nas pálpebras inferiores, com intervalos de aproximadamente trinta dias entre as sessões. Sete observadores independentes, dermatologistas, analisaram fotografias da região palpebral inferior dos participantes antes e após o tratamento e classificaram os resultados como melhor, pior, ou inalterado. A reprodutibilidade dessa avaliação foi testada através do coeficiente Kappa. A quantificação de melanina, por área, antes e após o tratamento, foi realizada através de morfometria com análise de imagens por computador (método digital). A verificação de presença ou não de hemossiderina dérmica foi realizada pela coloração de Perls e a identificação da célula dérmica que contém melanina foi feita pela imunohistoquímica, com anticorpos monoclonais antimacrófagos humanos tipo CD68 e anticorpos monoclonais antimelanócitos humanos tipo Melan A. Resultados: Segundo os sete observadores, houve melhora clínica (clareamento da pele palpebral inferior) estastisticamente significativa (p=0,024) e o coeficiente Kappa mostrou boa concordância entre os observadores. Todos os indivíduos (100%) apresentaram hipercromia pós-inflamatória transitória, com tempo médio de desaparecimento de seis meses, enquanto 58,33% apresentaram hipocromia transitória, no local das biopsias palpebrais, com duração média de sete meses. A análise histológica mostrou ausência de hemossiderina dérmica na pele palpebral, antes e após o tratamento. A quantificação de melanina, por morfometria, mostrou diminuição da mesma após o tratamento tanto na epiderme como na derme, com significância estatística. A morfometria também mostrou, maior quantidade de melanina na epiderme e na derme da pele palpebral inferior, antes do tratamento, em relação à pele pré-auricular, com diferença estatisticamente significativa. A imunohistoquímica com anticorpos monoclonais antimacrófagos humanos tipo CD68 e anticorpos monoclonais antimelanócitos humanos tipo Melan A caracterizaram o macrófago como sendo a célula dérmica que contém melanina na HCIRO, não havendo melanócitos dérmicos. Conclusões: A quantidade de melanina, tanto da epiderme quanto da derme, diminuiu após o tratamento com LPAE na pálpebra inferior. Há maior quantidade de melanina, tanto na epiderme quanto na derme da pálpebra inferior em comparação com a pele pré-auricular, com diferença estatisticamente significativa. As células que contêm melanina na derme palpebral inferior dos indivíduos portadores de HCIRO são macrófagos (e não melanócitos). Nos espécimes examinados neste estudo, não houve presença de hemossiderina na derme da pálpebra inferior. Houve clareamento da pele palpebral inferior após o tratamento com LPAE, e o seguimento clínico após um ano do tratamento mostrou que esse clareamento se manteve, não havendo recidiva da HCIRO. No entanto, um seguimento mais longo é necessário para a avaliação de possível recidiva tardia da pigmentação palpebral. / Introduction: The cutaneous idiopathic hyperchromia (HCIRO) does not have a clear etiopathogeny. Genetic factors seem to be involved (familiar autossomic dominant heredity), increase of melanin in the dermis, proeminent vascularity and eyelid skin slackness. In the literature revision, a few articles were encountered, which contributed in clarifying the etiopathogeny. Objectives: Evaluate clinically and histologically individuals bearer of HCIRO, before and after the treatment with intense pulsed light (LPAE), considering the melanin quantity in the epidermis and dermis, before and after the treatment, in order to evaluate the efficacy of LPAE in the clearing up of HCIRO. Evaluate possible difference in the melanin quantity of the lower eyelid in relation to the pre-auricular skin. Evaluate the quality of the dermic cells in the lower eyelid, containing melanin before the treatment (observation through immunohistochemistry to determine the dermic cell type, whether macrophages or melanocytes). Evaluate the presence or not of hemossiderine in dermis. Evaluate and follow up clinically of the individuals after a year treatment to check the improvement maintenance or HCIRO recurrence. Casuistry and Method: There were selected 12 individuals, bearer of HCIRO, and these were submitted to a clinical evaluation through photographies and to histological evaluation before and after LPAE application for HCIRO treatment. Biopsies were made in the lower eyelid, before and after treatment with LPAE, and in the left pre-auricular skin to compare the melanin quantity with the lower eyelid, before the treatment. The individuals were submitted to one to four sessions of LPAE application in the lower eyelid with approximately thirty day intervals between sessions. Seven independent observers (dermatologists) analysed photos of the participants lower eyelids, before and after the treatment and classified the results as better, inaltered or worse. The reproducibility of this affraisal was tested through the Kappa coefficient. The quantification of melanin, per area, before and after the treatment, was made through morphometry, with image analysis by computer (digital method). The verification of the presence or not of dermic hemossiderin was made through the Perls colouring and the cell identification, which contains melanin, was made through immunohistochemistry with monoclonal antibodies anti human macrophages type CD68 and monoclonal antibodies anti human melanocytes type Melan-A. Results: According to seven observers, there was a clinical improvement (clearing up of the eyelid skin) statistically significant (p= 0.24) and the Kappa coefficient showed a good concordance between the observers. All of the of the individuals (100%) showed a temporary post-inflammatory hyperchromia with an average duration of six months, while 58.33% presents a transitory hypochromia, in the place of palpebral biopsies, of an average duration of seven months. The histological analysis showed absence of dermic hemossiderin in the palpebral skin, before and after the treatment. The melanin quantification, per morphometry, showed decrease of same after the treatment both in the epidermis and dermis, of statistical significance. Melanin quantity was higher in the lower eyelid (before treatment), comparing with pre-auricular skin, with significant difference statistically. Immunohistochemistry with monoclonal antibodies anti human macrophages type CD68 and monoclonal antibodies anti human melanocytes type Melan-A, characterized the macrophages as being the dermic cell which contains melanin in HCIRO, showing no dermic melanocytes. Conclusions: The melanin quantity, both in the epidermis and dermis, decreased after the treatment with LPAE in the lower eyelid. There was more melanin in the epidermis and dermis of the eyelid skin, comparing with the pre-auricular skin, with a statistically significant difference. The cells that contain melanin in the lower eyelid dermis of the individuals bearer of HCIRO, are macrophages (and not melanocytes). In the specimens examined in this study, there was absence of hemossiderin in the dermis of the lower eyelid. There was a clearing up of the lower eyelid skin after the treatment with LPAE, and the clinical follow-up after one year of treatment showed that this clearing up was maintained and no HCIRO reincidence occurred. In the meantime, a longer follow-up is necessary to evaluate a later possible reincidence of the palpebral pigmentation.

A poiquilodermia de Civatte é uma condição caracterizada por hiperpigmentação, telangiectasia e atrofia que acomete predominantemente o pescoço e a face de forma simétrica, poupando a área encoberta pelo mento. A sua ocorrência é associada à predisposição genética, à exposição cumulativa ao sol, ao processo de envelhecimento, à hipersensibilidade de contato e a fatores hormonais. Os tratamentos atualmente preconizados baseiam-se na utilização de sistemas de luzes que atuam através do princípio da fototermólise seletiva, isto é, dano térmico confinado a alvos específicos no tecido. Estudos clínicos mostram bons resultados no tratamento da poiquilodermia de Civatte com a luz intensa pulsada, porém não descrevem se estes resultados são acompanhados por alterações histopatológicas correspondentes. O objetivo deste estudo foi avaliar os achados clínicos e histopatológicos nas lesões de poiquilodermia de Civatte, antes e após o tratamento com a luz intensa pulsada. O estudo avaliou 16 pacientes portadores de poiquilodermia de Civatte na região cervical, submetidos a 5 sessões mensais de aplicação de luz intensa pulsada, utilizando-se o filtro de 560 nm. Os pacientes foram fotografados e biopsiados antes do tratamento e 30 dias após o término da quinta sessão. A avaliação clínica foi feita através da comparação das fotografias por 5 avaliadores independentes. Os resultados mostraram que o componente vascular responde melhor do que o componente pigmentar ao tratamento. A avaliação histopatológica foi feita de forma cega em relação aos cortes pré e pós-tratamento, sendo ao final das leituras revelados e comparados. Após cinco sessões não houve diferença na densidade das fibras elásticas na derme superficial e profunda. Não houve redução no número de vasos e na média da área do lúmem dos vasos marcados pelo anticorpo anti-CD34 na derme superficial e profunda. A quantificação do pigmento melânico mostrou redução significante na epiderme, porém não na derme. / Poikiloderma of Civatte is a dermatosis in which there is hyperpigmentation associated with telangiectasia and atrophy. It occurs predominantly on the neck and face in a symmetric fashion, sparing shade-protected areas under the chin. Many factors are included in its etiology, including genetics, chronic excessive sun exposure, aging, hormonal modifications, and contact hypersensitivity. Currently advocated treatment methods are based on the use of selective photothermolysis via optic radiation, in other words, thermal damage confined to specific targets in the tissue. Clinical studies report promising results with treatment of poikiloderma of Civatte with intense pulsed light, however, they don\'t describe whether or not the results are accompanied by histopathological alterations. The objective of this study was to assess clinical and histopathological findings in the lesions of poikiloderma of Civatte before and after treatment with intense pulsed light. Sixteen patients with poikiloderma of Civatte in the neck area were treated with five monthly sessions of intense pulsed light, using the 560 nm cutoff filter. The patients were photographed and biopsies were obtained before the first session and 30 days after the fifth session. Clinical evaluation was performed through comparison of the photographs by five independent observers. Results demonstrated that the vascular component responded better to treatment than the pigmentary component. Histopathological analysis was carried out blindly as to pre- and post-treatment samples, which were unveiled and compared at the end of the readings. After five sessions, in the superficial and deep dermis, there was no difference in the density of elastic fibers nor was there a reduction in vessel number or in medium luminal area of vessels tagged with anti-CD34 antibodies. Quantification of melanin pigment showed a significant reduction within the epidermis, however, this did not occur in the dermis.

A poiquilodermia de Civatte é uma condição caracterizada por hiperpigmentação, telangiectasia e atrofia que acomete predominantemente o pescoço e a face de forma simétrica, poupando a área encoberta pelo mento. A sua ocorrência é associada à predisposição genética, à exposição cumulativa ao sol, ao processo de envelhecimento, à hipersensibilidade de contato e a fatores hormonais. Os tratamentos atualmente preconizados baseiam-se na utilização de sistemas de luzes que atuam através do princípio da fototermólise seletiva, isto é, dano térmico confinado a alvos específicos no tecido. Estudos clínicos mostram bons resultados no tratamento da poiquilodermia de Civatte com a luz intensa pulsada, porém não descrevem se estes resultados são acompanhados por alterações histopatológicas correspondentes. O objetivo deste estudo foi avaliar os achados clínicos e histopatológicos nas lesões de poiquilodermia de Civatte, antes e após o tratamento com a luz intensa pulsada. O estudo avaliou 16 pacientes portadores de poiquilodermia de Civatte na região cervical, submetidos a 5 sessões mensais de aplicação de luz intensa pulsada, utilizando-se o filtro de 560 nm. Os pacientes foram fotografados e biopsiados antes do tratamento e 30 dias após o término da quinta sessão. A avaliação clínica foi feita através da comparação das fotografias por 5 avaliadores independentes. Os resultados mostraram que o componente vascular responde melhor do que o componente pigmentar ao tratamento. A avaliação histopatológica foi feita de forma cega em relação aos cortes pré e pós-tratamento, sendo ao final das leituras revelados e comparados. Após cinco sessões não houve diferença na densidade das fibras elásticas na derme superficial e profunda. Não houve redução no número de vasos e na média da área do lúmem dos vasos marcados pelo anticorpo anti-CD34 na derme superficial e profunda. A quantificação do pigmento melânico mostrou redução significante na epiderme, porém não na derme. / Poikiloderma of Civatte is a dermatosis in which there is hyperpigmentation associated with telangiectasia and atrophy. It occurs predominantly on the neck and face in a symmetric fashion, sparing shade-protected areas under the chin. Many factors are included in its etiology, including genetics, chronic excessive sun exposure, aging, hormonal modifications, and contact hypersensitivity. Currently advocated treatment methods are based on the use of selective photothermolysis via optic radiation, in other words, thermal damage confined to specific targets in the tissue. Clinical studies report promising results with treatment of poikiloderma of Civatte with intense pulsed light, however, they don\'t describe whether or not the results are accompanied by histopathological alterations. The objective of this study was to assess clinical and histopathological findings in the lesions of poikiloderma of Civatte before and after treatment with intense pulsed light. Sixteen patients with poikiloderma of Civatte in the neck area were treated with five monthly sessions of intense pulsed light, using the 560 nm cutoff filter. The patients were photographed and biopsies were obtained before the first session and 30 days after the fifth session. Clinical evaluation was performed through comparison of the photographs by five independent observers. Results demonstrated that the vascular component responded better to treatment than the pigmentary component. Histopathological analysis was carried out blindly as to pre- and post-treatment samples, which were unveiled and compared at the end of the readings. After five sessions, in the superficial and deep dermis, there was no difference in the density of elastic fibers nor was there a reduction in vessel number or in medium luminal area of vessels tagged with anti-CD34 antibodies. Quantification of melanin pigment showed a significant reduction within the epidermis, however, this did not occur in the dermis.