Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-10-27T16:47:58Z No. of bitstreams: 1 2006_Adriana Aragão Craveiro Leite.pdf: 1213196 bytes, checksum: 1129811e21a8106b496150a7ccdd3356 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-29T14:04:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Adriana Aragão Craveiro Leite.pdf: 1213196 bytes, checksum: 1129811e21a8106b496150a7ccdd3356 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-29T14:04:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Adriana Aragão Craveiro Leite.pdf: 1213196 bytes, checksum: 1129811e21a8106b496150a7ccdd3356 (MD5) Previous issue date: 2006 / A dermatite atópica é uma doença complexa, em que fatores genéticos e ambientais interagem. Estudos relacionando a gravidade da dermatite atópica com o fumo passivo são inéditos, enquanto estudos associando sensibilização a aeroalérgenos e/ou alérgenos alimentares e fumo passivo em pacientes com dermatite atópica são raros. O objetivo do presente estudo é avaliar se o fumo passivo é fator de risco para o agravamento da doença em portadores de DA e se o fumo passivo associa-se com os níveis de IgE total e é fator gerador de sensibilização a aeroalérgenos e/ou alérgenos alimentares nesses pacientes. O estudo avaliou 78 crianças com dermatite atópica, atendidas no Serviço de Dermatologia do Hospital Universitário de Brasília, no período de novembro de 2005 a março de 2006, divididas em dois grupos: um primeiro grupo, composto por 36 pacientes com história de exposição passiva ao fumo, e um segundo grupo, com 42 pacientes sem história de exposição passiva ao fumo. Os pacientes expostos ao fumo ambiental foram avaliados por questionário e por medição da concentração de cotinina/creatinina urinária. Na população estudada, não se observou relação entre a presença de fumo passivo e a gravidade da dermatite atópica, seja pelo questionário (p=0,64), seja pela dosagem da cotinina/creatinina urinária (p=0,94). Não houve associação entre exposição passiva ao fumo e níveis de IgE sérica total (p=0,67). Não se constatou relação entre a presença de sensibilidade a aeroalérgenos ou alimentos e fumo passivo, definido por questionário (p=0,49) e (p=0,30), ou por cotinina/creatinina urinária (p=0,39) e (p=0,079), respectivamente. Contudo, utilizando-se os valores da cotinina/creatinina urinária como referência, detectou-se uma tendência maior à sensibilização alimentar em crianças expostas ao fumo passivo em comparação ao grupo não-exposto (p=0,079). Quando esses dados foram avaliados pela razão de chance (odds ratio), obteve-se um risco de sensibilização alimentar de 1,31 (IC 95%: 0,77-2,26) para os pacientes expostos a fumo ambiental. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Atopic dermatitis is a complex disease where genetic and environmental factors interact. There are no studies associating atopic dermatitis severity and passive smoking. Studies relating allergic sensitization and passive smoking in patients with atopic dermatitis are rare. The purpose of this study was to evaluate whether passive smoking could increase atopic dermatitis severity, relate to IgE levels or induce environmental or food allergens sensitization in patients with atopic dermatitis. Seventy-eight children with atopic dermatitis attending the dermatological pediatric clinics of the Hospital Universitário de Brasília between November 2005 and March 2006 were recruited and classified into two groups. A first group with 36 passive smoking exposed patients, and a second group with 42 patients not exposed to passive smoke. The patients were evaluated for passive smoke exposure by questionnaire or by cotinine/creatinine concentration measurement. There was no relation regarding passive smoking and atopic dermatitis severity, whether by questionnaire (p=0.64) or by urinary cotinine/creatinine measurement (p=0.94). Likewise, there was no relation between total IgE levels and passive smoking (p=0.67). No relation was found between environmental or food sensitization and passive exposure to smoke, assessed by questionnaire (p=0.49) and (p=0.30) or by cotinine/creatinine levels (p=0.39) and (p=0.079), respectively. There was a tendency to increased food sensitization among passive smoke exposed children as compared to nonexposed children (p=0.079). When the relation was evaluated by odds ratio, there was 1.31 (IC 95%: 0.77-2.26) risk for food sensitization among passive smokers.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Jadiana Paiva Dantas (jadi@bce.unb.br) on 2011-06-29T23:42:04Z No. of bitstreams: 1 2009_KellyCristinaRodriguesSimi.pdf: 4029652 bytes, checksum: b826daae737141b32d0d9e55a96db197 (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-04T18:29:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_KellyCristinaRodriguesSimi.pdf: 4029652 bytes, checksum: b826daae737141b32d0d9e55a96db197 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-04T18:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_KellyCristinaRodriguesSimi.pdf: 4029652 bytes, checksum: b826daae737141b32d0d9e55a96db197 (MD5) / A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS) é uma doença pandêmica que atinge diversos países no mundo todo. Atualmente, não existe uma vacina eficiente contra o vírus da imunodeficiência (HIV) devido a habilidade do vírus de escapar do sistema imune. Contudo, estudos recentes têm utilizado glicoproteínas do envelope do HIV como potencial alvo para o desenvolvimento de uma vacina capaz de inibir a entrada do vírus na célula hospedeira. Recentemente, nosso grupo selecionou fragmentos de anticorpos (Fabs) de uma biblioteca combinatória de anticorpos de pacientes com osteosarcoma direcionados para um peptídeo sintético de um epítopo neutralizante da gp41. No presente trabalho, foram clonados os Fabs anti-gp41-HIV em vetor de expressão de Pichia pastoris. Após a obtenção das clonagens dos Fabs nesse vetor as respectivas sequências foram confirmadas. A levedura Pichia pastoris tem sido largamente utilizada para a produção de proteínas recombinantes com sucesso. O nível de expressão obtido para os Fabs na levedura Pichia pastoris foi muito baixo. Esses Fabs demonstraram possuir um bom índice de adaptação de códon para a expressão em Pichia pastoris. Dessa forma, ajustes no protocolo de expressão deverão ser realizados. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is a pandemic deficiency through out the continent. At the moment there is not an efficient vaccine against immunodeficiency virus (HIV) due the virus efficient escape of from the immune system. However, recent studies have used glycoprotein of HIV as a potential target to development a vaccine to inhibit the virus entry into host cells. Recently, our group selected antibody fragments (Fabs) from an antibody combinatorial library of osteosarcoma patients directed to a synthetic biotinilated peptide gp41 neutralizing epitope (576 to 619 amino acids residues). In this work, the Fabs anti-gp41-HIV into a Pichia pastoris were cloned into expression vector. Three Fabs were cloned into this vector with correct sequence. Pichia pastoris has been used extensively and successfully to express recombinant proteins. Unfortunately, the recombinant proteins were expressed in low levels. However, this Fabs showed to have a good codon adaptation index to be expressed in Pichia pastoris, thus adjustment in the protocol must be performed.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-10-31T11:53:56Z No. of bitstreams: 1 2013_ThaisAlvesCostaLamounier.pdf: 11004578 bytes, checksum: 32671399d4110aa92de56af574a0a267 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-04T10:30:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ThaisAlvesCostaLamounier.pdf: 11004578 bytes, checksum: 32671399d4110aa92de56af574a0a267 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-04T10:30:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ThaisAlvesCostaLamounier.pdf: 11004578 bytes, checksum: 32671399d4110aa92de56af574a0a267 (MD5) / Os Norovírus (NV) são responsáveis pela maioria das gastroenterites humanas não bacterianas em todo o mundo. Devido ao fato das estirpes de NV humanos não possuírem a capacidade de replicação em culturas celulares, a utilização de Virus like particles (VLPs) na compreensão dos fatores imunológicos e físico-químicos torna-se uma boa alternativa para o estudo do genogrupo II genótipo 4 que é considerado o mais prevalente e está associado à epidemia global. O objetivo deste estudo foi produzir VLP de NV variante 2006b e selecionar anticorpos monoclonais humanos a partir de biblioteca apresentada em fagos após a purificação das proteínas. A maior vantagem em utilizar a técnica de Phage Display é a possibilidade da seleção de fragmentos de anticorpos monoclonais totalmente humanos que podem ser utilizados em ensaios clínicos. Foram comparados os métodos de purificação de cloreto de césio (CsCl) e cromatografia de troca iônica, sendo que esta última apresentou um melhor rendimento no que diz respeito à quantidade e pureza das proteínas de capsídeo obtidas. Dos 58 clones analisados após 4 ciclos de seleção utilizando VLP de NV como antígeno, dez foram analisados com Sfi I e BstO I com relação ao perfil e diversidade. Porém, as possíveis recombinações existentes determinaram a esperada diminuição da diversidade da biblioteca ao longo dos ciclos de seleção apesar dos Fabs reconhecerem especificamente o antígeno diferentemente da diversidade inicial, ou seja, na construção da biblioteca. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The Norovirus (NV) are responsible for most human nonbacterial gastroenterites worldwide. Because human strains of NV do not have the ability to replicate in cell cultures, the use of virus-like particles (VLPs) in understanding the immunological and physicochemical aspects becomes a good alternative for the study of genogroup II genotype 4, which is considered the most prevalent and is associated with the global epidemic. The aim of this study was to produce VLPs NV 2006b variant and select human monoclonal antibodies from phage-displayed library after purification of proteins. The major advantage in using the technique of phage display is the possibility of selecting fragments of fully human monoclonal antibodies that can be used in clinical trials. The methods of purification of cesium chloride (CsCl) and ion exchange chromatography were compared and the latter had a better performance as regards the amount and purity of the capsid proteins obtained. Of the 58 clones analyzed after 4 cycles of selection using the NV VLP as antigen, ten were analyzed with Sfi I and BstO I with respect to the profile and diversity. However, the possible existing recombinations led to an expected decrease of the library’s diversity during the selection cycles, though Fabs specifically recognized the antigen differently from the initial variety, that is on the construction of the library.

nÃo hà / Lectins are a group of proteins present in various living organisms, particularly in plants and especially in Leguminosae seeds. Among this family, a species that stands out for having large amount of lectin in the seed is the Canavalia brasiliensis. One approach for the investigation of lectins on biological systems is the detection there of by techniques involving antibody. Such techniques may include from classical immunochemical assays (immunodiffusion, immunoelectrophoresis and rocketimunoeletroforese) to ELISA experiments and advanced microscopy techniques. In this sense, antibodies become biotechnological tools invaluable since they are capable of specifically recognizing epitopes of the target molecules. Immunoglobulins (Igs) are proteins present in high concentration in the blood plasma of mammals. They are vectors of humoral immunity, with the primary function to join the foreign antigens to the individual so as to neutralize them. In the case of poultry the main immunoglobulin class (IgYs) can be found not only in blood, but also in egg yolk. This fact enables fast and efficient purification of these molecules facilitating its use as biotechnological inputs. Thus, this study aimed to produce antibodies against the lectin extracted from Canavalia brasiliensis seed (ConBr) (Fabaceae) in laying hens, implementing production methodology of new biotechnological inputs for the study of lectins. For this laying hens were immunized with 200 or 400μg of lectin Canavalia brasiliensis (ConBr) for 15 weeks at 10-day intervals. Collected eggs from vaccinated birds had their isolated and precipitated yolk in 0-30% fraction with ammonium sulfate for partial purificaÃÃoo of IgYs. Confirmation of the presence of antibodies was made by immunodiffusion assays agarose gel. The fraction showed 0-30%, from the first week after the immunization, capable of recognizing ConBr IgYs. This profile appeared in all groups over the 15-week experiment. The production of specific IgYs against the lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) proved feasible and remained throughout the experiment, possibly in reasonable quantities. In this sense, IgYs produced in this work provide a powerful biotechnological tool to be made available for future studies. / As lectinas constituem um grupo de proteÃnas presentes em diversos organismos vivos, sobretudo em vegetais e especialmente em sementes de Leguminosae. Dentre essa famÃlia, uma espÃcie que se destaca por possuir grande quantidade de lectina na semente à a Canavalia brasiliensis. Uma das possÃveis abordagens para a investigaÃÃo de lectinas em sistemas biolÃgicos à a detecÃÃo das mesmas atravÃs de tÃcnicas que envolvam anticorpos. Tais tÃcnicas podem incluir desde ensaios clÃssicos de imunoquÃmica (imunodifusÃo, imunoeletroforese e rocketimunoeletroforese), atà experimentos de ELISA e tÃcnicas avanÃadas de microscopia. Neste sentido, os anticopos tornam-se ferramentas biotecnolÃgicas de grande valia uma vez que sÃo capazes de reconhecer especificamente epÃtopos das molÃculas alvo. As imunoglobulinas (Igs) são proteínas presentes em grande concentração no plasma sanguÃneo de mamÃferos. São os vetores da imunidade humoral, tendo como função principal unir-se aos antígenos estranhos ao indivÃduo, de modo a neutralizá-los. No caso das aves a principal classe de imunoglobulinas (IgYs) pode ser encontrada nÃo somente no sangue mas tambÃm nas gemas dos ovos. Esse fato permite purificaÃÃo rÃpida e eficiente dessas molÃculas facilitando seu uso como insumos biotecnolÃgicos. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo produzir anticorpos contra a lectina extraÃda da semente de Canavalia brasiliensis (ConBr) (Leguminosae) em galinhas poedeiras, implementando metodologia de produÃÃo de novos insumos biotecnolÃgicos para o estudo de lectinas. Para tanto galinhas poedeiras foram imunizadas com 200 ou 400μg da lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) por 15 semanas em intervalos de 10 dias. Ovos coletados das aves imunizadas tiveram suas gemas isoladas e precipitadas na fraÃÃo 0-30% com sulfato de amÃnio para a purificaÃÃo parcial das IgYs. A confirmaÃÃo da presenÃa dos anticorpos foi feita por ensaios de imunodifusÃo em gel de agarose. A fraÃÃo 0-30% apresentou, a partir da primeira semana apÃs a imunizaÃÃo, as IgYs capazes de reconhecer ConBr. Esse perfil se apresentou em todos os grupos ao longo das 15 semanas de experimento. A produÃÃo das IgYs especÃficas contra a lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) se mostrou viÃvel e permaneceu durante todo experimento, possivelmente em quantidades razoÃveis. Neste sentido, as IgYs produzidas nesse trabalho constituem uma potente ferramenta biotecnolÃgica a ser disponibilizada para estudos futuros.

Orientador : Lilian Maria de Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T19:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BaleottiJunior_Wilson_D.pdf: 8406610 bytes, checksum: 54b8f3febe199a21fce361b234c634e8 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O sistema de grupo sangüíneo Dombrock é constituído por um par de antígenos antitéticos, Doa e Dob, e três antígenos de alta freqüência populacional, Gregory (Gya), Holley (Hy) e Joseph (Joa). O gene DO, que codifica os antígenos do sistema Dombrock, foi recentemente clonado e suas bases moleculares foram elucidadas. Os antígenos Doa e Dob. são controlados pelos alelos DOA e DOB que estão associados à troca de três nucíeotídeos no exon 2 do gene DO: 378C/T, 624T/C e 793A/G, respectivamente. O fenótipo Jo(a-) está associado com a substituição 350C/T que caracteriza o alelo JO. O fenótipo Hy-negativo está associado à presença de um dos alelos: HY1 ou HY2. O alelo HY2 é caracterizado pela substituição 323G/T. Uma substituição adicional 898C/G, no exon 3, caracteriza o gene HY/1. Recentemente dois novos alelos foram descritos: DOB- SH (378C, 624C, 793G) e DOA-HA (378T, 624T, 793A). Considerando que: as bases moleculares dos antígenos Dombrock foram elucidadas; que novos alelos têm sido descritos; a miscigenação da população brasileira e que até o momento nenhum estudo foi realizado sobre a freqüência dos genes Dombrock na nossa população, estudamos 450 amostras de DNA, através das técnicas de PCR-RFLP e Microarrays® - HEA Beadchip para determinar a freqüência dos aletos DO {DOA, DOB, HY1, HY2, JO). Dois novos alelos foram identificados baseados em novas combinações de SNPs: alelo DOB- WL (793G, 898G, 323C) e alelo DOA-SH (378C, 624C, 793A). Nossos dados demonstram uma grande complexidade e heterogeneidade dos alelos Dombrock na população brasileira e confirmam a necessidade do estudo molecular em diferentes populações / Abstract: Background: The molecular basis of the Doa and Dob polymorphism, are associated with three single-nucleotide polymorphisms (SNPs) on exon 2 of DO gene: 378C>T, 624T>C and 793A>G, DOA and DOB alleles, respectively. The SNPs 350OT (JO allele) and 323G>T (HY allele) are associated with: Jo(a-) and Hy-negative phenotype. Recently, two new DO alleles were identified using the microarray technology, DOB-SH (378C, 624C, 793G) and DOA-HA (378T, 624T, 793A). Although the molecular background of Dombrock system is well defined, no studies were carried out in the Brazilian population. Methods: We employed PCR-RFLP based assays and a microarray assay to determine the frequency of the DO alleles {DOA, DOB, HY1, HY2 and JO) in Brazilians. We tested DNA of 288 Brazilians people by PCR-RFLP to determine the 793A>G (DOA/DOB), 323G>T {HY), 350OT (JO) and 8980G {HY1IHY2) SNPs. We also tested DNA from 162 blood donors by the HEA Beadchip¿ (BioArray Solutions, USA) to determine the 3780T, 624T>C, 793A>G (DOAIDOB), 350OT (JO allele) and 323G>T (HY) SNPs. Results: Two novel alleles combinations were found in our samples: the 793G SNP (DOB allele) associated with 898G and 323G (DOB-WL) and the SNPs 378C, 624C, 793A and 323G (DOA-SH). We also found the DOB-SH and DOA-HA alleles recently reported. Conclusion: Our data demonstrate high heterogeneity of DO alleles in the Brazilian population and highlight the importance of testing a cohort of different populations to determine the DO allele combinations and establish reliable genotyping to predict the Doa/Dob antigen status / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Ladaslav Sodek / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Isntituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T01:08:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chagas_ElianaPereira_D.pdf: 9581798 bytes, checksum: 49359674666b604ff2cfcba8f66addc7 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A asparaginase (ASNase-EC 3.5.1.1.) de semente imatura de ervilha (Pisum sativum L.) varo Bolero foi purificada e caracterizada. A ASNase foi dependente de K+ para sua ativação e a presença de íons Ca2+ nos tampões de extração e purificaçcão permitiu uma maior recuperação da atividade da enzima. O Ca2+ pode auxiliar na manutenção da estrutura ativa da enzima. A ASNase apresentou duas isoformas, eluídas separadamente em cromatografia de exclusão. A primeira de 200.000 g/mol com atividade mais baixa e a segunda, com 69.000 g/mol, com a maior atividade, sendo portanto, a principal forma da enzima. A ASNase apresentou pI de 4,5 a 5 e [(m de 2,4 mM para Asn. A enzima foi inibida competitivamente por Gly e Asp, e os resultados indicaram que o Asp seria liberado na reação após o NH4 +. Através das reações imunológicas, foi observado que anticorpo produzido contra a ASNase de semente de ervilha reconheceu bandas na mesma posição que a ASNase de ervilha em extratos de sementes de outras espécies: Crotalaria juncea, C. paulina (ambas dependentes de K+) e C. zanzibarica (independente). A ASNase de ervilha também apresentou reação cruzada com anticorpos produzidos contra ASNase de C. juncea e Lupinus polyphyllus (independente de K+), sugerindo alguma homologia entre as moléculas, e também que a parte da molécula que determina dependência ao K+ não coincide com aquela reconhecida pelo anticorpo / Abstract: Asparaginase (ASNase-EC 3.5.1.1) from immature seed of Pisum sativum L. cv. Bolero was characterized and purified. ASNase from pea seed was dependent upon the presence of K+ for activity and the presence of Ca2+ in the extraction buffers pertmitted a higher recovery of activity. The Ca2+ ions could assist the active ASNase structure. The enzyme showed two active isoforms, eluted separately from exclusion chromatography. The first isoform (200.000 g/mol) presented lower activity and the second (69.000 gjmol) with the highest activity, was the main formo This enzyme showed a pI near to 4,5-5 and a J(m of 2,4 mM for Asn. Gly and Asp were competitive inhibitors of the enzyme. Asp would appear to be released from the enzyme after NH4 +. Western blot analysis demonstrated the presence of bands coinciding with the ASNase from pea seed in seed extract from other species: Crotalaria juncea J Crotalaria paulina (K+dependent) and Crotalaria zanzibarica (K+ -independent). ASN ase from pea seed showed a cross-reaction with antibodies against ASNase from Crotalaria juncea and Lupinus polyphyllus (K+ -independent), suggesting a similarity between the enzymes, and that the part of the molecule involved in the K+ dependency is not coincident with that recognized by the antibody / Doutorado / Doutor em Ciências

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T15:09:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_AngelaMariade_M.pdf: 2780125 bytes, checksum: ed0382f3c176db7f9c21e4d7373bbba3 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Para investigar a doença de Chagas experimental, camundongos BALB/c normais e C.B-17 scid/scid deficientes em linfócitos T e B funcionais foram inoculados com diferentes doses dos estoques tripomastigota de cultura (Tc) e tripomastigota sangüícola (Ts) da cêpa Y de Trypanosoma cruzi. Os resultados obtidos com camundongos BALB/c mostraram que somente a dose 105 do estoque Ts foi capaz de matar 60% dos animais e com os camundongos SCIO a infecção foi letal com todas as doses e ambos os estoques do parasita. Esse perfil foi significantemente alterado, após a repopulação dos animais com 2x107 células esplênicas do camundongo BALB/c, e desafiados, em tempos diferentes, com o estoque Tc, mostrando um desvio no nível de parasitemia e controle da mortalidade. Os animais repopulados com células tímicas, apresentaram uma modificação no nível de parasitemia quando desafiado com baixa dose de parasita do estoque de virulência atenuada (Tc). Os estudos de imunoproteção realizados em camundongos SCIO através da imunização passiva com várias doses do soro anti- T. cruzi obtidos de animais cronicamente infectados, foi no sentido de verificar o efeito dos anticorpos na ausência de imunidade celular. Observou-se um deslocamento no período de pré-patência nos animais que receberam uma única dose do anticorpo e as doses adicionais de anticorpos não alteraram a infecção. O conjunto de resultados mostrou que as células esplênicas foram efetivas no controle da parasitemia e mortalidade, enquanto que as células tímicas foram eficientes em controlar o nível de parasitemia, ressaltando a importância da imunidade celular e humoral no desenvolvimento de uma resposta protetora durante o período de infecção / Abstract: In order to investigate the experimental Chagas disease, normal BALB/c mice and deficient C.B-17 scid/scid in functional T and B Iymphocytes were inoculated with different doses of Tc and Ts storages of the Y strain of Trypanosoma cruzi. The results obtained showed a lethal infection only in SCIO mice. This profile was changed significantly after the repopulation of SCIO mice with 2x107 splenic cells of BALB/c mice and challenges with the Tc storage at different intervals, showing a deviation of the parasitemia levels and the mortality control. In the animais repopulated with thymic cells a change was observed in the parasitemia leveI. To verify the role of the antibody in the absence of cellular immunity, SCIO mice were immunized passively with various doses of anti- T.cruzi serum obtained from infected animais. A dislocation was then observed, in the pre-patent period only in the animais that received a unique dose of antibodies. The group of results indicated that the splenic cells were effective in the control of the parasitemia and mortality levei, while the thymic cells were effective in the control of parasitemia levei, stressing the importance of cellular and humoral immunity in the development of a protecting response during the period of infection / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Eliana Amaral / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:33:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stella_JulianaHorschutz_M.pdf: 709891 bytes, checksum: b26fde7a4ef737b253bc11db4d5992b5 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A toxoplasmose adquirida durante a gestação, de curso benigno em pacientes imunocompetentes e assintomática em 85% dos casos, pode ser transmitida para o feto e resultar em infecção congênita. Embora a grande maioria dos recém-nascidos não apresente sintomas e/ou sinais clínicos, pode evoluir para seqüelas na infância e vida adulta, sendo que a coriorretinite é a lesão mais freqüente. A terapia antenatal reduz a gravidade da doença congênita. Como a primoinfecção materna é predominantemente assintomática, o diagnóstico exige triagem sorológica. As clássicas reações sorológicas foram substituídas por técnicas imunoenzimáticas automatizadas extremamente sensíveis que detectam a IgM residual, tornando a identificação desta imunoglobulina um pobre indicador de infecção recente. Por outro lado, o conhecimento da soroprevalência populacional é essencial para a discussão de programas preventivos da infecção aguda materna e da toxoplasmose congênita. Assim, foram revistos os resultados sorológicos de amostras sangüíneas de rotina pré-natal colhidas nos Centros de Saúde do Município de Campinas entre 01 de março a 31 de maio de 2001. A técnica utilizada pelo Laboratório Municipal para triagem foi a imunoenzimática automatizada MEIA-AxSYM® (Abbott). O tamanho amostral calculado foi de 1.866 amostras, utilizando prevalência de IgM positiva de 1,8%, fixando em 0,6% a diferença em pontos percentuais entre as proporções amostral e populacional e a=0,05. Em 2.199 amostras sangüíneas, o perfil sorológico de imunidade foi observado em 56,1% (IC95% = 54-58,2%), sendo outras 39,2% (IC95%=37,2-41,2) compatíveis com suscetibilidade, 2,5% (IC95% =1,9-3,2) de ¨possível¨ infecção aguda, restando 2,2% (IC95% = 1,3-2,4) de sorologias ¨duvidosas¨. Os diferentes perfis sorológicos foram similarmente distribuídos entre os cinco distritos de saúde de Campinas. Concluiu-se que a alta prevalência de soropositividade para toxoplasmose entre as gestantes em acompanhamento pré-natal na rede municipal de saúde de Campinas sugere um elevado risco de soroconversão (toxoplasmose aguda) na gestação. A comparação de custos diretos estimados mostrou que uma nova proposta de conduta diagnóstica permitiria uma economia de 51% para os gestores municipais de saúde e de 79,5% para o serviço de referência. O acompanhamento sorológico trimestral das gestantes suscetíveis e o emprego do teste de avidez de anticorpos na primeira amostra sangüínea coletada nos Centros de Saúde para as gestantes com ¨possível¨ infecção aguda, melhorariam a performance para detecção dos fetos acometidos congenitamente / Abstract: Toxoplasmosis acquired during pregnancy, a benign and asymptomatic disease in 85% of patients, it can cause congenital infection. If in the majority of these cases there are no signs or symptoms, sequeleae can be appear later durinf infancy and adulthood, having corioretinits as the most frequent finding. The antenatal therapy is able to reduce severity and congenital disease. As acute infection is mainly asymptomatic, the diagnosis is based on serological screening. Recently, classic serological tests were replaced by automated immunoenzime tests which are highly sensitive, detecting residual IgM, now a poor indicator for acute infection. Knowing seroprevalence in pregnant women is essential to discuss prevention programmes on acute and congenital infection. We reviewed serum samples from pregnant women, taking for antenatal routine screening at the Primary Healty Centers in Campinas from March 1st to May 31st. All tests were performed at the Municipla Laboratory, using MEIA-AxSYM® (Abbott). Taking the results found, estimates costs for the routine performed in 2001, with no attempt to date maternal infection and provide follow up to susceptible women, mere compared to a new proposal based on updated literature, including IgG avidity tests. The sample size (N= 1886) was calculated based in 1.8% IgM prevalence, with a 0.6 percent difference between sample and population prevalence, and a=0.05. Serological profile according to immunity (IgG reagent) was observed in 56,1% (CI95%=54.0-58.2%), with 39,2% (CI95%=37.2-41.2%) susceptible samples (non-reagent IgG and IgM), 2.5% (CI95%=1.9-3.2%) with possible infection, and an extra 2.2% (CI95%=1.3-2.1%) undefined. The serological profile was similar comparing the five health districts, despite expected socio-economic differences in their population. Comparing estimated direct costs, the laboratory and treatment routine being proposed alow for a 51% reduction for the municipal healty system, mainly due to exclusion of IgM test screening in the first sample, spriramicin use, and PCR im amniotic fluid to evaluate fetal infection. For the reference unit, the cost expected reduction was 79.5%. The high toxoplasmosis prevalence among pregnant women in piblc antenatal care in Campinas indicates a high risk for seroconversion (acute infection) / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Orientadores: Sergio Marangoni, Stephen Hyslo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T06:10:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beghini_DanielaGois_D.pdf: 1308184 bytes, checksum: 582d335118571519295c9a3f39074588 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Crotoxina, a principal neurotoxina do veneno das cascavéis Crotalus durissus terrificus e Crotalus durissus cascavella, é um complexo protéico que contém uma fosfolipase A2 (PLA2) básica e uma proteína ácida, crotapotina. O veneno e a crotoxina purificada do veneno de C. d. cascavella foram estudados quanto aos efeitos neurotóxico e miotóxico na preparação biventer cervicis de pintainho. O veneno e a crotoxina mostraram bloqueio neuromuscular nessa preparação em concentrações tão baixas quanto 0,2 mg/ml e 1 mg/ml. Quanto ao efeito miotóxico, a mionecrose foi mais marcante com altas concentrações de veneno e crotoxina (1, 5 e 25 mg/ml). Assim, o veneno de C. d. cascavella e sua crotoxina possuem um efeito neurotóxico preponderante e bastante potente nessa preparação, e uma ação miotóxica que foi observada somente em altas concentrações. Para melhor entender o mecanismo de neutralização da crotoxina por anticorpos foram produzidos antissoros específicos contra a crotoxina e PLA2 do veneno de C. d. cascavella. O título de anticorpos e a especificidade dos antisoros produzidos foram avaliados por ELISA e immunoblotting, respectivamente. A neutralização da atividade neurotóxica foi avaliada por intermédio de técnica miográfica nas preparações biventer cervicis de pintainho e nervo frênico diafragma de camundongo. A capacidade neutralizante dos antissoros na preparação de camundongo foi comparável à do soro comercial anticrotálico produzido contra o veneno de C. d. terrificus. O antissoro anti-crotoxina foi um pouco menos potente do que o antissoro anti-PLA2 no processo de neutralização e isso confirma o papel central da PLA2 no mecanismo de neurotoxicidade da crotoxina. Neste trabalho, nós também avaliamos a habilidade do antissoro produzido em coelho contra a crotapotina do veneno C. d. cascavella em neutralizar a neurotoxicidade e miotoxicidade deste veneno e crotoxina, e inibir a atividade enzimática do complexo crotoxina e da PLA2. Este antissoro neutralizou parcialmente o bloqueio neuromuscular causado pelo veneno e crotoxina na preparação frênico nervo-diafragma de camundongo, sem prevenir o dano morfológico resultante ou inibir a atividade fosfolipásica. Em contraste, antissoros contra a PLA2 e crotoxina neutralizaram o bloqueio neuromuscular e a atividade enzimática efetivamente. A neutralização parcial do bloqueio neuromuscular pelo anti-crotapotina sugere que este antissoro pode prevenir a interação da crotoxina com seu receptor causando dissociação do complexo crotoxina por se ligar a crotapotina. Neste estudo, nós também examinamos a habilidade dos antissoros contra a crotoxina e PLA2 em neutralizar a neurotoxicidade dos venenos de Crotalus durissus terrificus e Bothrops jararacussu e suas principais toxinas na preparação frênico nervo-diafragma de camundongo. Immunoblotting mostrou que o anti-crotoxina de C. d. cascavella reconheceu a crotoxina de C. d. terrificus e BthTX-I de B. jararacussu, enquanto que o antissoro contra a PLA2 reconheceu a PLA2 de C. d. terrificus e a BthTX-I de B. jararacussu. ELISA confirmou esta reatividade cruzada. Estes antissoros neutralizaram eficazmente o bloqueio neuromuscular causado pelo veneno e crotoxina de C. d. terrificus na preparação de camundongo em proporções semelhantes às usadas para neutralizar o veneno e a crotoxina de C. d. cascavella. Anti-crotoxina e anti-PLA2 também neutralizaram eficientemente o bloqueio produzido pelo veneno e principal toxina de Bothrops jararacussu, porém doses mais altas dos antissoros foram necessárias para essa neutralização. Então, os resultados mostram reatividade cruzada entre esses venenos e suas toxinas principais e também mostra que o antissoro produzido contra PLA2 eficazmente neutraliza a neurotoxicidade dos venenos de C. d. terrificus e B. jararacussu e suas toxinas PLA2. Esses resultados, portanto, confirmam o importante papel da PLA2 no mecanismo de neurotoxicidade dos venenos / Abstract: Crotoxin, the main neurotoxin from venom of the rattlesnakes Crotalus durissus terrificus and Crotalus durissus cascavella, is a protein complex that contains a phospholipase A2 (PLA2) basic and an acid protein, crotapotin. The venom and the purified crotoxin from C. d. cascavella venom were studied with relationship to the neurotoxic and myotoxic effects in the chick biventer cervicis preparation. The venom and crotoxin showed neuromuscular blockade in this preparation at doses as low as 0,2 mg/ml and 1 mg/ml. With relationship to the myotoxic effect, the myonecrosis was stronger with higher doses of venom and crotoxin (1, 5 and 25 mg/ml). These results showed that the C. d. cascavella venom and its crotoxin possess a preponderant and quite potent neurotoxic effect in this preparation, and a myotoxic action that was observed only at higher doses. To clarify the crotoxin neutralization mechanism by antibodies, specific anti-sera was produced against the crotoxin and PLA2 from C. d. cascavella venom. The title of antibodies and specificity of the anti-sera raised in rabbits were tested by ELISA and immunoblotting, respectively. The neutralization of the neurotoxic activity was evaluated through myoghraphic technique in the chick biventer cervicis and mouse phrenic nerve diaphragm preparations. The neutralizing capacity of the anti-sera against crotoxin and PLA2 in the mouse preparation was comparable to the commercial crotalic antiserum produced against the C. d. terrificus venom. The anti-crotoxin anti-sera was a little less potent than the anti-PLA2 and this confirms the central role of PLA2 in the mechanism of neurotoxicity of the crotoxin. In this work, we also examined the ability of rabbit anti-serum raised against crotapotin purified from Crotalus durissus cascavella venom to neutralize the neurotoxicity and myotoxicity of this venom and crotoxin, and to inhibit the enzymatic activity of the crotoxin complex and PLA2 alone. This anti-serum to crotapotin partially neutralized the neuromuscular blockade caused by venom and crotoxin in electrically stimulated mouse phrenic nerve-diaphragm preparations, without preventing the resulting morphological damage or inhibiting the PLA2 activity. In contrast, rabbit anti-sera to PLA2 and crotoxin effectively neutralized the neuromuscular and PLA2 activities. The partial neutralization of the neurotoxicity of crotoxin by the anti-serum to crotapotin suggested that this anti-serum may prevent the interaction of intact crotoxin with its recceptor by causing dissociation of the crotoxin complex through binding to crotapotin. In this study, we also examined the ability of anti-sera raised against crotoxin and PLA2 to neutralize the neurotoxicity of Crotalus durissus terrificus and Bothrops jararacussu venoms and their major toxins, crotoxin and bothropstoxin-I (BthTX-I), respectively, in mouse isolated phrenic nerve-diaphragm preparations. Immunoblotting showed that anti-serum to crotoxin from C. d. cascavella recognized crotoxin from C. d. terrificus and BthTX-I from B. jararacussu, while anti-serum to PLA2 from C. d. cascavella recognized PLA2 from C. d. terrificus and BthTX-I from B. jararacussu. ELISA corroborated this cross-reactivity. These anti-sera efficiently neutralized the neuromuscular blockade caused by venom and crotoxin from C. d. terrificus in mouse preparation in similar proportions used to neutralize the venom and crotoxin from C. d. cascavella. Anti-crotoxin and anti-PLA2 anti-sera also efficiently neutralized this blockade produced by venom and main toxin of Bothrops jararacussu, bothropstoxin-I (BthTX-I), however higher doses of anti-sera was necessary for this neutralization. Therefore, the results show cross-reactivity between these venoms and its main toxins and also shown that anti-serum produced against PLA2 efficiently neutralized the neurotoxicity of C. d. terrificus and B. jararacussu venoms and their PLA2 toxins. These results confirms the important role of PLA2 in the neurotoxicity mechanism of the venoms / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Luiz Augusto Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T13:27:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zanotti-Magalhaes_ElianaMaria_M.pdf: 5042453 bytes, checksum: 9e65f39cb6a731201a66b542e8ccd228 (MD5) Previous issue date: 1980 / Resumo: O presente trabalho teve por objetivo estudar a influência do deslocamento dos esquistossomos no plexo porta sobre a distribuição de ovos. Estudamos ainda o nível de IgA sérico em comundongos com infecções uni- e bissexuais. Quatro grupos de camundongos albinos foram contituidos: 1) Animais infectados por fêmeas de S. mansoni; 2) Animais infectados por machos de S. mansoni; 3) Animais bissexualmente por S. mansoni. 4) Animais não expostos à infecção por S. mansoni. Os camundongos foram infectados com 100 cercárias oriundas de B. glabrata expostos a um único miracídio para obtenção de infecções unissexuais e a 10 miracídios da linhagem mineira (BH) de S. mansoni, para obtenção de infecções bissexuais. Subgrupos de camundongos foram sacrificados a intervalos semanais, no período de 8 semanas, verificando-se a localização dos esquistossomos no plexo porta (fígado, veia porta e vasos mesentéricos) e a distribuição de ovos do trematódeo no fígado, intestino, baço, pulmão e fazes. O nível de IgA foi verificado pela técnica de imunoeletroforese cruzada. Em nosso trabalho verificamos: - Foi maior o número de moluscos que apresentou infecção por larvas que deram origem a esquistossomos machos. A mortalidade de camundongos com infecção bissexual foi maior do que a observada nos grupos de camundongos com infecções unissexuais... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas