Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_mirian_farias_ribeiro.pdf: 619687 bytes, checksum: cf80f947861c533664196359ce7fe274 (MD5) Previous issue date: 2010-03-04 / The objective of this work was to evaluate the effect of aluminum (Al) on in vitro multiplication and rooting of pear and quince. The explants were nodal segments of pear and quince in vitro cultivated. The culture medium to pear was QL modificated by Leblay and to quince was MS, both added of Al to 0 (pH 5,7, control), 0, 15, 30, 45 e 60 mg L-1 (pH 4,0) put in jars with 1 g of cotton for multiplication and 3 g of vermiculite for rooting and 30 mL of medium. The trial had four replicates and five explants each. At 60 days the percentage of shoots, length and number of shoots, fresh and dry mass and catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX) activity in pear were assessed. At 45 days the percentage of rooting, length and number of root, fresh and dry mass of shoots and roots, CAT, APX and superoxide dismutase (SOD) activity in pear and nutrients content were assessed. In the multiplication, the quince had 100% of shoot, but decreased the number of shoots. The length of shoots, fresh and dry mass decreased in MC but increased in BA 29 . The pear had high percentage of shoots. The number of shoot was higher for Conference . The length of shoots, fresh and dry mass was increased at Al. CAT activity in Conference was increased at 30 mg L-1 of Al and in Abate Fetel was increased at 30 and 45 mg L-1 of Al. APX activity in Conference was increased at 30 and 60 mg L-1 of Al and in Abate Fetel was increased at 30 mg L-1 of Al. In the rooting, the percentage of rooting, lenght and number of roots was higher for quince. The fresh mass of shoot was higher for Conference and for 30 mg L-1 of Al. The fresh mass of root was higher for BA 29 at 15 mg L-1 of Al. The dry mass of shoot was higher for Conference and for 15 and 30 mg L-1 of Al. The dry mass of root was higher for BA 29 and for 15 mg L-1 of Al. The nutrient content increased at aluminum. In the Abate Fetel the CAT and APX activity was increased and the SOD activity was decreased at aluminum. On the other hand, in the Conference the CAT activity was decreased at aluminum, the APX was decreased only at 45 mg L-1 of Al and the SOD activity was increased. As conclusion, the cultivars answered of different form at Al and, in some parameters, the presence of this metal was beneficial. / O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do alumínio (Al) na multiplicação e enraizamento in vitro de pereira e marmeleiro. Os explantes constituíram-se de segmentos nodais de pereira e marmeleiro cultivados in vitro. O meio de cultura para pereira foi o QL modificado por Leblay e para marmeleiro foi o MS, ambos adicionados de Al a 0 (pH 5,7 controle), 0, 15, 30, 45 e 60 mg L-1 (pH 4,0), colocado em frascos contendo 1 g de algodão hidrófilo para multiplicação e 3 g de vermiculita para enraizamento e 30 mL de meio. O experimento constou de quatro repetições com cinco explantes cada. A multiplicação foi avaliada aos 60 dias quanto a percentagem de explantes brotados, número e comprimento das brotações, massa fresca e massa seca total e a atividade das enzimas catalase (CAT) e ascorbato peroxidase (APX) em pereira. O enraizamento foi avaliado aos 45 dias quanto a percentagem de explantes enraizados, número e comprimento das raízes, massa fresca e seca da parte aérea e radicular, a atividade das enzimas CAT, APX e superóxido dismutase (SOD) em pereira e teor de nutrientes. Na multiplicação, o marmeleiro teve 100% de explantes brotados, mas houve diminuição no número de brotos. O MC apresentou diminuição no comprimento dos brotos, na massa fresca e seca, já o BA 29 apresentou aumento desses parâmetros. A pereira teve alta percentagem de explantes brotados. A Conference apresentou maior número de brotos. Com relação ao comprimento dos brotos, massa fresca e seca houve aumento na presença de Al. A atividade da CAT na Conference foi aumentada em 30 mg L-1 de Al e na Abate Fetel foi aumentada em 30 e 45 mg L-1 de Al. A atividade da APX na Conference foi aumentada em 30 e 60 mg L-1 de Al e na Abate Fetel foi aumentada em 30 mg L-1 de Al. No enraizamento, o marmeleiro apresentou maior percentagem de enraizamento, maior número e comprimento das raízes. A maior massa fresca da parte aérea foi obtida pela Conference e por 30 mg L-1 de Al. A massa fresca da raiz foi maior no BA 29 em 15 mg L-1 de Al. A maior massa seca da parte aérea foi obtida pela Conference e por 15 e 30 mg L-1 de Al. A maior massa seca da raiz foi obtida pelo BA 29 e por 15 mg L-1 de Al. O teor de nutrientes aumentou na presença de Al. A atividade da CAT e APX aumentou e da SOD diminuiu em Abate Fetel na presença de Al, enquanto que na Conference a atividade da CAT diminui, da APX diminuiu somente em 45 mg L-1 de Al e da SOD aumentou. De modo geral, os cultivares responderam de vii forma diferente a presença de Al e, em alguns parâmetros, a presença desse metal foi benéfica.

O trabalho realizado constitui uma estratégia em Biotecnologia de Plantas para a investigação dos esquemas bioquímicos controladores da diferenciação celular no processo de enraizamento. Através da técnica da cultura de tecidos \"in vitro\" foram micropropagados clones de Eucalyptus grandis HILL ex MAIDEN (GO 250, GO 682 e GO 669) selecionadas no CEBTEC/USP. Em uma pesquisa preliminar foram estabelecidas e multiplicadas gemas, seguida de testes da composição de meios de cultura para elongação e enraizamento. Foram estudadas diversas possibilidades de balanceamento das substâncias reguladoras de crescimento - ácido indolilbutírico (AIB)/ benzilaminopurina (BAP). Os clones apresentaram comportamentos anatômico-fisiológicos (massa fresca e seca; teor protéico; taxas de multiplicação das brotações epicórmicas, elongação e enraizamento) diferenciados entre si. As frequências de enraizamento mostraram-se superiores às já observadas por outros autores. Foram estabelecidas, ainda, algumas alterações na composição dos meios de cultura empregados. Através de experimentos cinéticos foram determinados os padrões de indução e/ou inibição das enzimas fenilalanina amônia-liase (PAL) e glucose 6-fosfato-desidrogenase (G-6P-DH) importantes para a biossíntese de compostos flavonóides, considerados como os principais cofatores das auxinas endógenas no complexo iniciador do enraizamento. Verificou-se que embora o suprimento exógeno crescente de AIB tenha resultado em maiores taxas de enraizamento, as atividades da PAL e G-6P-DH não se mostraram significativamente alteradas. Contudo, foi observado também que as gemas que enraizaram apresentaram atividade da PAL significativamente superior, evidenciando maior fluxo do Metabolismo do Fenilpropano durante o enraizamento. / This study constitutes a strategy in Plant Biotechnology with the purpose to investigate the regulating biochemical development of the cellular differentiation in the rooting process. Through plant tissue culture \"in vitro\" technique, clones of Eucalyptus grandis Hill ex Maiden (GO 250, GO 682 e GO 669) selected at CEBTEC/USP, were micropropagated. In a preliminary study shoots were multiplied, followed by tests of media culture composition for shoot elongation and root initiation. Several possibilities and rates of plant growth regulators, indolilbutyric acid (IBA)/benzylaminopurine (BAP) were studied. The clones showed different anatomic-physiological behaviours (fresh and oven-dry weight; proteic content; epicormic shoots multiplication rates, elongation and rooting). The frequences of rooting were higher than those described by other authors. Some modifications in the composition of used cuIture media were also defined. Through kinetic experiments, induction and inhibition patterns of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and glucose 6- phosphate-dehydrogenase (G-6P-DH) important to the biossyntesis of flavonoid compounds were determined. They were considered as the main cofactors of endogenous auxins in the root stimulating complex. Although, the increasing exogenous supply of AIB resulted in higher rooting rates, the activities of PAl and G-6P-DH enzyme did not present alterations. However, it was also observed that shoots wich rooted, in the treatments, showed higher PAL activity. resulting in higher flux of phenylpropanoid metabolism during the rooting.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-15Bitstream added on 2014-06-13T19:03:07Z : No. of bitstreams: 1 souza_av_dr_botfca.pdf: 1549773 bytes, checksum: 84b4a67f035a5e2a2ded161bbf59589c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Outra / O bioma Cerrado e uma das regioes mais ricas do Brasil no tocante a diversidade de plantas medicinais, sendo atualmente, considerado uma area ghotspots h devido o alto grau de endemismo das especies e a velocidade de degradacao que vem sofrendo. Anemopaegma arvense, Mandevilla illustris e Mandevilla velutina, sao plantas medicinais endemicas do cerrado, muito utilizadas na medicina popular devido suas propriedades terapeuticas. A coleta indiscriminada realizada pela populacao, como tambem por laboratorios farmaceuticos para a fabricacao de medicamentos, tem colocado essas especies em risco de extincao. Ferramentas biotecnologicas como a tecnica da micropropagacao e biologia molecular para analise do DNA, tem sido amplamente usadas para a producao, conservacao e analise da diversidade genetica de especies nativas. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos estudar a variabilidade genetica em diferentes populacoes de M. velutina por meio do marcador molecular RAPD e estabelecer a conservacao em bancos de germoplasma in vitro; desenvolver protocolos eficientes de enraizamento in vitro para A. arvense, M. illustris e M. velutina; verificar a ocorrencia e identificar especies de micorrizas, avaliando a colonizacao em raizes de plantas de diferentes populacoes e variedades de A. arvense. Para os estudos de enraizamento in vitro, as brotacoes foram submetidas a acao de diferentes substancias que apresentam efeito sobre a formacao de raizes adventicias, sob variadas condicoes. Para a analise da diversidade genetica, utilizou-se a tecnica de Polimosfirmo de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) e para os estudos micorrizicos, realizou-se a avaliacao da infeccao micorrizica nas raizes e a identificacao de especies de fungos micorrizicos extraidos do solo. As especies comportaram-se de maneira diferente quanto a inducao de raizes adventicias in vitro, mostrando a influencia direta do genotipo no processo de enraizamento. Para as especies M. illustris / The Bioma Cerrado is one of the richest regions in Brazil due to the variety of native medicinal plants, and nowadays it is considered a hotspot area because of the high degree of endemism of the species and the speed of degradation that it has been submitted. Anemopaegma arvense, Mandevilla illustris and Mandevilla velutina, are medicinal plants endemic of Cerrado very used in the popular medicine due to their therapeutic properties. The indiscriminate collection accomplished by the population, as well by pharmaceutical laboratories for the formulation of medicines, has put those species in risk of extinction. Biotechnological tools as the technique of micropropagation and molecular biology for the analysis of the DNA, have been widely used for the production, conservation and analysis of the genetic diversity of native species. In this context, the current work was investigate the genetic variability in different populations of M. velutina by means of molecular marker RAPD and to establish a protocol for in vitro conservation in germplasm bank; to develop efficient protocol of in vitro rooting for A. arvense, M. illustris and M. velutina; to verify the occurrence and to identify species of mycorrhiza, colonizing plant roots of different populations and varieties of A. arvense. For the studies of in vitro rooting, the plantlets were exposed to the action of different exogenous substances that a effect the formation of adventious roots, under several conditions. For the analysis of genetic diversity, it was used the technique of Random Amplified Polymorphic DNA at (RAPD) and for the studies on influence of mycorrhizal infection on root development and identification of species of fungi present in the soil. The species behaved in a different ways of induction of adventious roots in vitro. For the species M. illustris and A. arvense, 73,3% e 50% of plantlets rooted after fifteen days in treatment with 1 and 2 mg.L-1 of NAA, respectively. For M.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Erva-mate (Ilex paraguariensis) has an economical and environmental importance to the southern area of Brazil. However, there is no enough technologies of vegetative propagation, which are important to improve yield and quality. This study had as objectives to evaluate the propagation of erva-mate trees trough cuttings and to establish an ex vitro acclimatization and micro-cutting rooting protocols from embryo cultures. Vegetative propagation potential was evaluated considering shading intensity of the stock plant and origin and size of the cuttings. Cuttings were grabbed from stock plants growing under light or shade conditions and prepared in two types (one-bud and regular types). The evaluations were the percentage of lived and died cuttings, cuttings unchanged, shoot and callus growth, shoot length, rooting, leaf survival, number and length of roots and number and length of leaves in new shoots. For acclimatization and ex vitro rooting were evaluated five concentrations of indol butyric acid (IBA) (0; 250; 500; 1,000 and 2,000 ppm) and five substrates (vermiculite, sand, carbonized rice hull, commercial substrate of pinus bark, and coconut bark). The evaluations were the percentage of cuttings unchanged, callus formation, rooting and mortality, number and length of roots, micro-cutting length, fresh weight of roots, and number of leaves in new shoots. The highest cutting unchanged was gotten with cuttings from plants growing in light. Callus formation, presence of leaves and new shoot growth affected rooting. Cuttings collected from vegetative propagated plants showed higher percentage of rooting and root length. The highest rooting percentage and micro-cutting growth were found with 1,000 ppm of IBA during acclimatization period. Acclimatization and ex vitro rooting of erva-mate micro-cuttings can be done in the substrate of carbonized rice hull and commercial substrate of pinus bark. / A erva-mate (Ilex paraguariensis) assume uma importância ambiental e socioeconômica para a região sul do Brasil, porém carece de tecnologias de propagação vegetativa necessárias para o aumento da produção e da qualidade. O presente estudo teve por objetivos analisar a propagação via estaquia de material adulto e estabelecer a aclimatização ex vitro e o enraizamento de microestacas originadas de cultivo de embriões de erva-mate. Para a estaquia, analisaram-se o efeito do nível de sombreamento da planta matriz, a origem e o tamanho da estaca, avaliando o potencial de propagação vegetativa. As estacas foram coletadas de plantas matrizes de dois níveis de sombreamento (crescimento a pleno sol e sombreado), de duas origens (seminal e propagada vegetativamente) e de dois tipos (estaca convencional e de gema única). Os parâmetros utilizados para avaliar as estacas foram a porcentagem de estacas vivas e mortas, de estacas inalteradas, emissão e comprimento de brotos, formação de calos, enraizamento, permanência das folhas primárias, número e comprimento de raízes e número e comprimento de folhas dos brotos. Na aclimatização e enraizamento ex vitro de erva-mate foram testadas cinco concentrações de ácido indol butírico (AIB) (0, 250, 500, 1.000 e 2.000 ppm), e cinco tipos de substratos (vermiculita, areia, casca de arroz carbonizada, substrato comercial a base de casca de pinus e casca de coco), visando o enraizamento de microestacas. As microestacas foram avaliadas quanto a porcentagem de estacas inalteradas, de formação de calos, de enraizamento e de mortalidade, número de raízes, comprimento de raízes, tamanho total da microestaca, biomassa radicular e número de folhas dos brotos. Estaca coletada de planta matriz em pleno sol apresentou maiores porcentagens de estacas inalteradas. A presença de calo, das folhas primárias e a emissão de brotos afetaram o enraizamento. Estacas coletadas de matrizes propagadas vegetativamente apresentam maior taxa de enraizamento e comprimento de raízes. Na microestaquia, a concentração de 1.000 ppm de AIB foi eficiente para o enraizamento e crescimento de microestacas na aclimatização. Microestacas de erva-mate podem ser aclimatizadas e enraizadas ex vitro em substrato de casca de arroz carbonizada e em substrato comercial a base de casca de pinus.

Orientador: Ana Maria Soares Pereira / Banca: João Domingos Rodrigues / Banca: Fernando Broetto / Banca: José Eduardo Brasil Pereira Pinto / Banca: Suzelei de Castro França / Resumo: O bioma Cerrado e uma das regioes mais ricas do Brasil no tocante a diversidade de plantas medicinais, sendo atualmente, considerado uma area ghotspotsh devido o alto grau de endemismo das especies e a velocidade de degradacao que vem sofrendo. Anemopaegma arvense, Mandevilla illustris e Mandevilla velutina, sao plantas medicinais endemicas do cerrado, muito utilizadas na medicina popular devido suas propriedades terapeuticas. A coleta indiscriminada realizada pela populacao, como tambem por laboratorios farmaceuticos para a fabricacao de medicamentos, tem colocado essas especies em risco de extincao. Ferramentas biotecnologicas como a tecnica da micropropagacao e biologia molecular para analise do DNA, tem sido amplamente usadas para a producao, conservacao e analise da diversidade genetica de especies nativas. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivos estudar a variabilidade genetica em diferentes populacoes de M. velutina por meio do marcador molecular RAPD e estabelecer a conservacao em bancos de germoplasma in vitro; desenvolver protocolos eficientes de enraizamento in vitro para A. arvense, M. illustris e M. velutina; verificar a ocorrencia e identificar especies de micorrizas, avaliando a colonizacao em raizes de plantas de diferentes populacoes e variedades de A. arvense. Para os estudos de enraizamento in vitro, as brotacoes foram submetidas a acao de diferentes substancias que apresentam efeito sobre a formacao de raizes adventicias, sob variadas condicoes. Para a analise da diversidade genetica, utilizou-se a tecnica de Polimosfirmo de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) e para os estudos micorrizicos, realizou-se a avaliacao da infeccao micorrizica nas raizes e a identificacao de especies de fungos micorrizicos extraidos do solo. As especies comportaram-se de maneira diferente quanto a inducao de raizes adventicias in vitro, mostrando a influencia direta do genotipo no processo de enraizamento. Para as especies M. illustris / Abstract: The Bioma Cerrado is one of the richest regions in Brazil due to the variety of native medicinal plants, and nowadays it is considered a hotspot area because of the high degree of endemism of the species and the speed of degradation that it has been submitted. Anemopaegma arvense, Mandevilla illustris and Mandevilla velutina, are medicinal plants endemic of Cerrado very used in the popular medicine due to their therapeutic properties. The indiscriminate collection accomplished by the population, as well by pharmaceutical laboratories for the formulation of medicines, has put those species in risk of extinction. Biotechnological tools as the technique of micropropagation and molecular biology for the analysis of the DNA, have been widely used for the production, conservation and analysis of the genetic diversity of native species. In this context, the current work was investigate the genetic variability in different populations of M. velutina by means of molecular marker RAPD and to establish a protocol for in vitro conservation in germplasm bank; to develop efficient protocol of in vitro rooting for A. arvense, M. illustris and M. velutina; to verify the occurrence and to identify species of mycorrhiza, colonizing plant roots of different populations and varieties of A. arvense. For the studies of in vitro rooting, the plantlets were exposed to the action of different exogenous substances that a effect the formation of adventious roots, under several conditions. For the analysis of genetic diversity, it was used the technique of Random Amplified Polymorphic DNA at (RAPD) and for the studies on influence of mycorrhizal infection on root development and identification of species of fungi present in the soil. The species behaved in a different ways of induction of adventious roots in vitro. For the species M. illustris and A. arvense, 73,3% e 50% of plantlets rooted after fifteen days in treatment with 1 and 2 mg.L-1 of NAA, respectively. For M. / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the in vitro productivity of micro-stumps, in vitro and ex vitro rooting and acclimatization of micropropagated plantlets, and to assess the genetic diversity of Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbride (apuleia) with RAPD markers. Micro-stumps originated from drastic pruning of aseptic seedlings were grown in WPM culture medium supplemented with 0; 2.2; 4.4; 6.6 and 8.8 μM of 6-benzylaminopurine (BAP) and sub-cultured in WPM medium without cytokinin. Apuleia micro-stumps were also grown in WPM, MS or ½ MS, with or without 1.5 g L-1 of activated charcoal. Three shoot collections were done at 30, 60 and 90 days of cultivation. Nodal segments and micro-cuttings were maintained in WPM culture medium with 0; 4.9; 9.8; 14.7 and 19.6 μM of indole butyric acid (IBA). For acclimatization, rotted nodal segments and micro-cuttings were planted in equal proportions of commercial substrate + vermiculite + coarse sand, and commercial substrate + vermiculite. For ex vitro rooting, nodal segments and micro-cuttings were treated or not with 4920 μM of IBA for 10 seconds and cultivated in equal proportions of commercial substrate + vermiculite + coarse sand, commercial substrate + vermiculite, and commercial substrate + coarse sand. For genetic analysis, DNA was extracted from leaf samples of 88 plants of apuleia. Eighteen RAPD primers were tested. The amplified fragments were separated in agarose gel of 1.2% (v/v), containing 3 μL of ethidium bromide. The fragments were marked as absence or presence, generating a binary matrix. Total polymorphism and the relative contribution of each primer for the polymorphism were calculated. The polymorphism information content (PIC) was calculated for each fragment and primer. Cluster analysis was based upon Jaccard similarity and UPGMA method. The conservation of the apuleia micro-stumps in WPM or ½ MS media supplemented with 8.8 μM of BAP and sub-cultured in culture medium without citokynin increases number and length of shoots. Maintaining micro-stumps in culture medium supplemented with activated charcoal increases micro-cuttings production, but in its absence results in callus formation and indirect organogenesis of shoots. Nodal segments were more competent than micro-cuttings for rooting in culture medium without IBA. Substrate composition does not affect survival and growth during acclimatization of in vitro produced plantlets. Nodal segments treated with 4920 μM of IBA and cultivated in commercial substrate + vermiculite + coarse sand show the best responses for ex vitro rooting. Both in vitro conservation of apuleia micro-stumps and ex vitro rooting are promising strategies for plantlet production. The RAPD is a feasible technique for genetic analysis, and it identifies high genetic variability in apuleia. / Os objetivos deste trabalho foram avaliar a produtividade de microcepas mantidas in vitro, o enraizamento e a aclimatização de plantas micropropagadas, assim como avaliar a diversidade genética em Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbride (grápia) com uso de marcadores RAPD. Microcepas oriundas da poda drástica de plantas assépticas foram cultivadas em meio de cultura WPM acrescido de 0, 2,2, 4,4, 6,6 e 8,8 μM de 6-benzilaminopurina (BAP) e subcultivadas em meio de cultura WPM sem citocinina. Microcepas também foram cultivadas em meio de cultura WPM, MS ou ½ MS, acrescido ou não de 1,5 g L-1 de carvão ativado e submetidas a três coletas de brotos aos 30, 60 e 90 dias de cultivo. No enraizamento in vitro, segmentos nodais e microestacas foram mantidos em meio de cultura WPM com 0, 4,9, 9,8, 14,7 e 19,6 μM de ácido indolbutírico (AIB). Na aclimatização das plantas foram testadas as composições de substrato comercial + vermiculita + areia grossa e substrato comercial + vermiculita, em iguais proporções. Para o enraizamento ex vitro, segmentos nodais e microestacas foram tratados ou não com 4920 μM de AIB por 10 segundos e cultivados em iguais proporções de substrato comercial + vermiculita + areia grossa, substrato comercial + vermiculita e substrato comercial + areia grossa. Para as análises RAPD, o DNA foi extraído de amostras foliares de 88 plantas. Foram avaliados 18 iniciadores, sendo a visualização dos fragmentos realizada em gel de agarose preparado a 1,2% (p/v), contendo 3 μL de brometo de etídio e submetido a eletroforese. Os fragmentos foram pontuados com ausência ou presença gerando uma matriz binária. Foi calculada a contribuição relativa de cada iniciador para o polimorfismo bem como o polimorfismo total. Também foi calculado o conteúdo de informação para o polimorfismo (PIC) para cada fragmento e por iniciador. A análise de agrupamento foi realizada com base na similaridade de Jaccard e no método UPGMA. A manutenção das microcepas de grápia em meio de cultura WPM ou ½ MS suplementado com 8,8 μM de BAP, seguido do subcultivo em meio de cultura sem citocinina aumenta o número e comprimento das brotações. O cultivo de microcepas em meio de cultura com carvão ativado aumenta a produção de microestacas por microcepas, enquanto a ausência de carvão ativado favorece a formação de calos e brotos por organogênese indireta. Quanto ao enraizamento in vitro, os segmentos nodais apresentaram maior resposta do que microestacas, sendo necessária a suplementação do meio de cultura com AIB. A composição do substrato não afetou a sobrevivência e o crescimento das plantas produzidas in vitro durante a aclimatização. As melhores respostas de enraizamento ex vitro foram obtidas com segmentos nodais, assim como com explantes tratados com 4920 μM de AIB e cultivados em substrato comercial + vermiculita + areia grossa. Tanto a manutenção in vitro de microcepas quanto o enraizamento ex vitro são técnicas promissoras para a produção de plantas de grápia. O marcador RAPD é eficiente para a análise genética e detectou alta variabilidade genética na grápia.

O trabalho realizado constitui uma estratégia em Biotecnologia de Plantas para a investigação dos esquemas bioquímicos controladores da diferenciação celular no processo de enraizamento. Através da técnica da cultura de tecidos \"in vitro\" foram micropropagados clones de Eucalyptus grandis HILL ex MAIDEN (GO 250, GO 682 e GO 669) selecionadas no CEBTEC/USP. Em uma pesquisa preliminar foram estabelecidas e multiplicadas gemas, seguida de testes da composição de meios de cultura para elongação e enraizamento. Foram estudadas diversas possibilidades de balanceamento das substâncias reguladoras de crescimento - ácido indolilbutírico (AIB)/ benzilaminopurina (BAP). Os clones apresentaram comportamentos anatômico-fisiológicos (massa fresca e seca; teor protéico; taxas de multiplicação das brotações epicórmicas, elongação e enraizamento) diferenciados entre si. As frequências de enraizamento mostraram-se superiores às já observadas por outros autores. Foram estabelecidas, ainda, algumas alterações na composição dos meios de cultura empregados. Através de experimentos cinéticos foram determinados os padrões de indução e/ou inibição das enzimas fenilalanina amônia-liase (PAL) e glucose 6-fosfato-desidrogenase (G-6P-DH) importantes para a biossíntese de compostos flavonóides, considerados como os principais cofatores das auxinas endógenas no complexo iniciador do enraizamento. Verificou-se que embora o suprimento exógeno crescente de AIB tenha resultado em maiores taxas de enraizamento, as atividades da PAL e G-6P-DH não se mostraram significativamente alteradas. Contudo, foi observado também que as gemas que enraizaram apresentaram atividade da PAL significativamente superior, evidenciando maior fluxo do Metabolismo do Fenilpropano durante o enraizamento. / This study constitutes a strategy in Plant Biotechnology with the purpose to investigate the regulating biochemical development of the cellular differentiation in the rooting process. Through plant tissue culture \"in vitro\" technique, clones of Eucalyptus grandis Hill ex Maiden (GO 250, GO 682 e GO 669) selected at CEBTEC/USP, were micropropagated. In a preliminary study shoots were multiplied, followed by tests of media culture composition for shoot elongation and root initiation. Several possibilities and rates of plant growth regulators, indolilbutyric acid (IBA)/benzylaminopurine (BAP) were studied. The clones showed different anatomic-physiological behaviours (fresh and oven-dry weight; proteic content; epicormic shoots multiplication rates, elongation and rooting). The frequences of rooting were higher than those described by other authors. Some modifications in the composition of used cuIture media were also defined. Through kinetic experiments, induction and inhibition patterns of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and glucose 6- phosphate-dehydrogenase (G-6P-DH) important to the biossyntesis of flavonoid compounds were determined. They were considered as the main cofactors of endogenous auxins in the root stimulating complex. Although, the increasing exogenous supply of AIB resulted in higher rooting rates, the activities of PAl and G-6P-DH enzyme did not present alterations. However, it was also observed that shoots wich rooted, in the treatments, showed higher PAL activity. resulting in higher flux of phenylpropanoid metabolism during the rooting.