Determina la relación existente entre el cuadro clínico y perfil epidemiológico de los niños con tuberculosis infantil drogo resistente con los resultados del tratamiento durante los años 2011 a 2015. El estudio es transversal, correlacional-causal, no experimental y retrospectivo. Se reportaron 96 casos, 82 ingresaron al estudio. Entre estos, 59% eran niños, con una edad media de 8 años y el 31% tuvo <5 años, 3 eran menores de 1 año. El caso índice (CI) se encontró en el 84% de la muestra. El 90% de casos no recibió tratamiento previo, 98% tuvo localización pulmonar y 49% se realizó la prueba de tuberculina (PPD), con ≥ 10 mm en el 73%. El 40% tuvieron frotis positivos, todos ellos tuvieron entre 5 a 14 años, y el 49% presentaron cultivos positivos. 28% tuvo Tuberculosis multidrogo resistente (TB-MDR) confirmada, 91% de ellos del grupo de edad de 10 a 14 años. Las drogas de segunda línea (DSL) para MDR / XDR-TB confirmada o probable se administró a 70 de 82 casos (85%) con una tasa de éxito del 88% y el 12% tuvo problemas durante el seguimiento. Existe una alta tasa de éxito del tratamiento y el tratamiento irregular es un factor importante para el fracaso terapéutico. Las áreas de El Agustino y Ate Vitarte, albergan el mayor número de pacientes con TB (DR) resistente a los medicamentos, sin embargo, vivir en el distrito de Santa Anita tiene una mayor correlación con el fracaso terapéutico. / Tesis

O presente trabalho estuda a eficácia e a toxicidade de algumas associações medicamentosas no tratamento da tuberculose pulmonar em 119 doentes,hospitalizados. O critério de seleção dos doentes foi o da normalidade das provas de função hepática, renal, taxa de glicemia e da contagem de plaquetas, antes do início do tratamento, em doentes com tuberculose pulmonar comprovada pelo exame bacteriológico. Foram estudados quatro esquemas terapêuticos: isoniazida-estreptomicina-etambutol, isoniazida-etambutol-rifampcina, etionamida-pirazinamida-rifampcina e etionamida-pirazinamida-etambutol. Os dois primeiros esquemas destinados ao tratamento inicial e os outros dois ao retratamento. A aplicação de testes estatísticos para os dois primeiros esquemas evidenciou que as associações isoniazida- estreptomicina-etambutol e isoniazida-etambutol-rifampcina apresentam o mesmo grau de eficácia. Não houve diferença significativa entre as mesmas quanto as alteraçÕes produzidas nas provas de laboratório, porém o regime isoniazida-estreptomicinaetambutol apresentou maior número de reações adversas que o esquema isoniazída-etambutol-rifampcina. Para os esquemas etionamida-pirazinamida-rifampcina e etionamida-pirazinamida etambutol, estudados em reduzido número de doentes, não foi feita análise estatística, tendo sido descritos os resultados encontrados. / The present paper is a study of the eficcacy and toxicity of some association of drugs used for treatment of pulmonary tuberculosis on 119 hospitalized patients. Criteria for selection of patients were: normal liver function tests, glycemia, plated count and in come. Four therapeutic associations were studied: Isoniazid-Streptomycin-Ethambutol; Isoniazid- Ethambutol-Rifampcin; Ethionamide-Pyrazinamide-Ethambutol The two first associations were used for inicial treatment and the other two for retreatment. Significance tests showed no differences between the first two associations regarding eficcacy whereas Isoniazid-Streptomicin-Ethambutol showed a larger number of adverse reactions than did Isoniazid-Ethambu tol-Rifampcin. The other two associations on account of the small number of patients studied, were not analysed statistically, results being only described.

Os Staphylococcus spp., são bactérias Gram positivas com importância clinica, as quais são capazes de causar uma ampla variedade de doenças em seres humanos e animais. O uso excessivo de antimicrobianos pode selecionar bactérias resistentes aos antimicrobianos de uso comum em Veterinária, o que representa uma grande ameaça para a saúde animal, e a saúde publica no mundo inteiro. Apesar de sua importância clinica, existe um conhecimento limitado sobre a patogênese das infecções estafilococicas em animais de estimação, e os fatores de virulência bacterianos específicos envolvidos em estas doenças. A Infecção estafilocócica iniciasse a partir da adesão do micro-organismo ao tecido do hospedeiro. A adesão é favorecida pela presença de fatores de virulência conhecidos como adesinas, que estão agrupadas em uma família conhecidas como as microbial surface components recognising adhesive matrix molecules (MSCRAMM). Após o isolamento e identificação dos micro-organismos, 118 estirpes de Staphylococcus spp., foram identificadas, 111 (94.07%), estirpes em cães, e 7 (5.93%) em gatos. Entre os Staphylococcus, sete espécies diferentes foram isoladas: 82 (69.49%) Staphylococcus pseudointermedius, 19 (16.10%) Staphylococcus epidermidis, 7 (5.93%) Staphylococcus xylosus, 4 (3.39%) Staphylococcus chromogenes, 3 (2.54%) Staphylococcus spp., 2 (1.69%) Staphylococcus aureus, 1 (0.85%) Staphylococcus schleiferi. A susceptibilidade a 26 agentes antimicrobianos foi determinada em todos os isolados. A pesquisa pelas MSCRAMM e o gene formador de biofilme nas estirpes de Staphylococcus spp., foi realizada usando a reação em cadeia da polimerasa (PCR), foram usados diferentes pares de primers para detectar os genes que codificam para a proteína ligadora de colágeno (cna), proteína ligadora de laminina (eno), proteína ligadora de elastina (ebpS), proteína ligadora de fibrinogênio (fib), proteína A ligadora de fibronectina (FnbA), proteína B ligadora de fibronectina (FnbB), e proteína associada a formação de biofilme (Bap). A resistência apresentada pelas estirpes isoladas aos diversos antimicrobianos foi observada com frequência, a percentagem de resistência geral das cepas de Staphylococcus spp isoladas foi: 54,32% para eritromicina, 40,79% para clindamicina, e 29,91% para norfloxacina. A susceptibilidade a oxacilina tambem foi testada, o 85,96% das estirpes isoladas foram susceptíveis. Todos os genes foram identificados com exceção do Bap e EbpS, o gene mais frequentemente isolado foi o Eno (89,9%), a associação entre os genes Eno/Fib/FnbA e Eno/FnbB foram também detectadas. Nossos resultados evidenciaram que os membros do gênero Staphylococcus apresentam frequentemente resistência in vitro aos antimicrobianos usados comumente. É necessário fazer um uso criterioso de antibióticos em animais de estimação em Medicina Veterinária. A informação sobre o assunto pode permitir o desenvolvimento de estratégias mais eficazes para o tratamento e controle das infeções causadas por Staphylococcus spp., em pequenos animais / Staphylococcus spp., are clinically important Gram-positive bacteria that are capable of causing a wide variety of diseases in humans and animals. The overuse of antimicrobials can select resistant bacteria strains, that represents a major threat to animal and public health worldwide. Despite its clinical importance, there is only very limited knowledge about the pathogenesis of staphylococcal infections in small animals, and the specific bacterial virulence factors involved in causing these diseases. Staphylococcal infection initiates from the adhesion of the microorganism to the tissue of the host. Adhesion is favoured by the presence of virulence factors known as adhesins, which are grouped in a family known as the microbial surface components recognising adhesive matrix molecules (MSCRAMM). After isolation and identification of microorganisms, 118 Staphylococcus strains were identified, 111 (94.07%) strains from canine and 7 (5.93%) from feline origin. Among Staphylococcus, seven different species were isolated: 82 (69.49%) Staphylococcus pseudointermedius, 19 (16.10%) Staphylococcus epidermidis, 7 (5.93%) Staphylococcus xylosus, 4 (3.39%) Staphylococcus chromogenes, 3 (2.54%) Staphylococcus spp., 2 (1.69%) Staphylococcus aureus, 1 (0.85%) Staphylococcus schleiferi. The susceptibility to 26 antimicrobials was determined in all the isolates. The search for MSCRAMM and biofilm-encoding genes in the strains of Staphylococcus spp. was performed using a polymerase chain reaction (PCR). Primers were used to detect the genes encoding for collagen-binding protein (cna), laminin-binding protein (eno), elastin-binding protein (ebpS), fibrinogen-binding protein (fib), fibronectin-binding protein A (fnbA) and fibronectin-binding protein B (fnbB) and biofilm formation-encoding genes (bap). Resistance of isolates to antibiotics was frequently observed, the percentage of resistance in the general Staphylococcus strains was: 54,32% to erythromycin, 40,79% to clindamycin, and 29,91% to norfloxacin. Susceptibility to oxacilin was also tested, 85,96%) % of the isolates were susceptible. All genes were detected except for ebpS and bap. The most frequently detected gene in both species was eno (89, 9%). Association of genes Eno/Fib/FnbA and Eno/FnbB were also detected. Our results highligthed that members of the Staphylococcus genus often exhibit in vitro resistance to commonly used antimicrobials. Its necessary a judicious use of antibiotics in small animals Veterinary Medicine. Such information on the subject allows the development of more efficient strategies for treatment and control of Staphylococcus infection in small animals

Introdução: Os vírus parainfluenza são importante causa de infecções respiratórias. Na população pediátrica a doença característica associada com HPIV-1 e 2 é a laringotraqueobronquite, enquanto que o HPIV-3 está associado com a pneumonia e bronquiolite. Objetivos: Realizar a análise molecular do fragmento do gene da HN. Métodos: Foram analisados aspirados nasofaríngeos coletados entre 1995 a 2005, de crianças com doença respiratória aguda. A detecção dos HPIV 1, 2 e 3 foi realizada por multiplex RT-PCR. Posteriormente, o fragmento de gene HN foi amplificado, sequenciado e, a análise molecular foi realizada. Resultados e discussão: Um total de 6% amostras foram positivas para HPIV, sendo o HPIV-3 o vírus mais prevalente durante todos os anos estudados, o que corresponde a 80% dos casos positivos, seguido por HPIV-1 (15%) e, HPIV-2 (7%). A maioria das mutações observadas foram silênciosas, no entanto, algumas alterações de aminoácidos foram verificadas em áreas conservadas dos HPIV-3 e HPIV-2, e alterações em sítios potencias de N-glicosilação também foram observados. / Introduction: In paediatric population the characteristic illness associated with HPIV-1 and -2 is laryngotracheobronchitis, whereas HPIV-3 is associated with pneumonia and bronchiolitis. There are 5 virus distributed in two distinct genus: Respirovirus (HPIVI-1 and HPIV-3) and Rubulavirus (HPIV-2, HPIVI-4A and HIVI-4B). Objectives: To carry out the molecular analysis of the fragment of the HN gene. Methods: Nasopharyngeal aspirates from infants with acute respiratory illness collected from 1995 to 2005, were analyzed. The detection of HPIV 1, 2 and 3 were performed by multiplex RT-PCR and the fragment of HN gene was amplified, sequenced and, the molecular analysis was carried out. Results and discussion: A total of 6% samples were positive for HPIV. The HPIV-3 was the most prevalent virus during, corresponding to 80% of positive cases, followed by HPIV-1 with 15% and HPIV-2 7%. Most mutations observed were silent in all PIVs, however, some amino acids alterations in conserved areas, verified in PIV-3 and PIV-2, and alterations in N-glicosilation sites were observed.

O gênero Brachyteles, endêmico do Brasil, é constituído por duas espécies, B. arachnoides e B. hypoxantus, e estudos recentes demonstraram que suas populações selvagens podem estar seriamente reduzidas. Na tentativa de reverter a situação atual, esforços têm sito realizados visando a conservação dos muriquis, no entanto, dados relativos à condição sanitária de Brachyteles são extremamente escassos. Sabe-se, que o estabelecimento de protocolos adequados de manejo é condição necessária para a manutenção das espécies em cativeiro, sobretudo as ameaçadas e/ou criticamente ameaçadas, como é o caso dos atelídeos em questão. Desse modo, o presente trabalho de pesquisa almejou investigar as principais alterações anátomo-patológicas e correspondentes causas de morte de 18 (10M:8F) espécimens de B. arachnoides, B .hypoxantus e híbridos mantidos em cativeiro junto ao Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ). Os animais foram necropsiados entre os anos de 1988 e 2010 sendo utilizados fragmentos de órgãos e tecidos colhidos e fixados em solução de formalina a 10%, sendo 9 exemplares de B. arachnoides, 3 B hypoxantus e 4 híbridos, totalizando 16 indivíduos pertencentes ao acervo do CPRJ/FEEMA, e 2 B. arachnoides pertencentes ao Parque Municipal Quinzinho de Barros (FZQB). Destes, 2 (11,1 %) eram neonatos, 2 (11,1%) jovens, 13 (72,2%) adultos e 1 (5,6%) idosos. O peso dos B. arachnoides, B. hypoxantus e B. híbridos adultos, jovens e neonatos variou de 0,5 Kg até 14 Kg. O peso médio dos adultos foi 5,6 Kg. O peso médio dos adultos foi de 2,8 Kg para os caquéticos, 5,9 Kg para os magros, 8,25 Kg para os bem nutridos. Dados de histórico clínico, reprodutivo, comportamentais e análises clínicas foram avaliados visando auxílio na obtenção da causa de morte (CM). A diarréia foi a alteração clínica mais consistente observada no grupo pesquisado sendo que cinco mortes (27,8%) foram causadas por quadros de sepses, quatro por infecção viral (22,2%), três (17%) por pneumonias, dois (11%) por parasitismo. Distúrbio metabólico, peritonite e eutanásia decorrente de retrovirose foram responsáveis por 1 óbito cada (5,5%). Não foi possível determinar a CM de um (5,5%) neonato em avançado estado de putrefação. Destes 18 casos de óbito, três (17%) foram decorrentes das conseqüências da infecção por um agente viral da família Retroviridae. A análise histomorfométrica mostrou que a taxa de hemossiderose hepática (THH) variou entre 0.2% e 41.7%, não havendo diferenças significantes entre as THHs quando comparados os parâmetros sexo, idade, tempo de cativeiro, espécies e peso. A análise estatística revelou correlação entre as áreas de hemossideorse e reticulina pelo teste de Sperman com (P=0,0326, r= -0,5048) No entanto, não observou-se correlação ao avaliar a morfometria da reticulina e as graduações histopatológicas de necrose (P=0,1009, Sperman, r= 0,3991). O mesmo padrão foi observado ao avaliar a correlação entre as áreas de reticulina e os casos sépticos e não sépticos com (P= 0,6126, Mann-Whitney test). Os agentes etiológicos diagnosticados através de imuno-histoquímica, análise ultra-estrutural e/ou molecular foram: Herpes simplex, Vírus respiratório sincicial (RSV), vírus compatíveis com a família Retroviridae, Toxoplasma gondii, Entamoeba spp., Strongyloides spp., Candida spp. e Helicobacter pylori. O potencial zoonótico dos agentes infecciosos identificados reflete a importância da implantação de medidas preventivas rigorosas com o objetivo de preservar a saúde da comunidade humana e dos muriquis. Uma monitoração sanitária através de exame clínico e colheita de material biológico também foram realizadas em 10 espécimes cativos de muriquis. Pretende-se, de forma pioneira representar a sistematização de processos patológicos envolvendo espécimes do gênero Brachyteles cativos, contribuindo para a manutenção destes espécimens em cativeiro, assim como indiretamente na conservação destes em vida livre, sugerindo protocolos sanitários preventivos e favorecendo a reprodução e manutenção das populações. / The Brachyteles genus is endemic in Brazil, comprises two species, B. arachnoides and B. hypoxantus, and recent studies have shown that their wild populations can be seriously reduced. In an attempt to reverse the current scenario, efforts have been made to promote the conservation of muriquis, however, data on the sanitary condition of Brachyteles are extremely scarce. It is known that the establishment of appropriate management protocols is a prerequisite for the maintenance of the captive species, especially threatened and / or critically endangered, as is the case in question, atelids. Thus, the present research aimed to investigate the main anatomic-pathological and related causes of death in 18 (10M:8F) specimens of B. arachnoides, B. hypoxantus and hybrids in captivity at the Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ). The animals were autopsied between 1988 and 2010, being used fragments of organs and tissues removed and stained in formalin solution 10%, and 9 individuals of B. arachnoides, 3 B. hypoxantus and 4 hybrids, a total of 16 individuals belonging to the collection of CPRJ / FEEMA, and 2 B. arachnoides belonging to the Parque Municipal Quinzinho de Barros (FZQB). Of these, 2 (11.1%) were neonates, 2 (11.1%) youth, 13 (72.2%) adults and 1 (5.6%) elderly. The weight of adults, newborns and young B. arachnoides, B. hypoxantus and B. hybrid ranged from 0.5 kg to 14 kg average weight of adults was 5.6 kg average weight of adults was 2.8 kg for cachectic 5.9 kg for lean, 8.25 kg for well-nourished. Data from clinical history, reproductive, behavioral and medical tests were assessed for assistance in obtaining the cause of death (CD). Diarrhoea was the most consistent disease observed in this group and five deaths (27.8%) were caused by sepsis boards, four viral infection (22.2%), three (17%) for pneumonia, two ( 11%) of parasitism. Metabolic disorder, euthanasia and peritonitis resulting from a retrovirus were responsible for one each death (5.5%). We were unable to determine the CD of one (5.5%) neonate in an advanced state of putrefaction. Of these 18 deaths, three (17%) resulted from the consequences of infection by a viral agent of the family Retroviridae. Histomorphometric analysis showed that the hepatic hemosiderosis rate (HHR) ranged between 0.2% and 41.7%, with no significant differences between the HHR compared the parameters sex, age, time in captivity, species and weight. Statistical analysis revealed a correlation between areas of reticulin hemossideorse and with the Spearman test (P = 0.0326, r = -0.5048). However, no correlation was seen when evaluating the morphometry of reticulin and histopathological grades of necrosis (P = 0.1009, Spearman r = 0.3991). The same pattern was observed to evaluate the correlation between areas of reticulin and cases with septic and non septic (P = 0.6126, Mann-Whitney test). The etiologic agents diagnosed by immunohistochemistry, ultrastructural analysis and molecular were: Herpes simplex, Respiratory Syncytial Virus (RSV), consistent with the virus family Retroviridae, Toxoplasma gondii, Entamoeba spp., Strongyloides spp., Candida spp. and Helicobacter pylori. The zoonotic potential of the infectious agents identified reflects the importance of strict implementation of preventive measures in order to preserve the health of human communities in contact with the muriquis. A health monitoring by clinical examination and collection of biological material were also performed in 10 specimens of captive muriquis. We aim, in a pioneering way, represent the systemization of processes involving pathological specimens of the genus Brachyteles captives, contributing to the maintenance of these specimens in captivity, as well as indirectly on the conservation of these in the wild, suggesting preventive health protocols and encouraging the breeding and maintenance of populations

Este estudo avaliou a exposição de 12 espécies de felídeos selvagens de vida livre (n=22) e mantidas em cativeiro (n=210) no Brasil a 16 agentes potencialmente patogênicos para membros da família Felidae, como herpesvírus felino 1 (FHV 1), calicivírus felino (FCV), parvovírus felino (FPV), coronavírus felino (FCoV), vírus da leucemia felina (FeLV), vírus da imunodeficiência felina (FIV), lentivírus de puma (PLV), vírus da cinomose canina (CDV), Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Anaplasma phagocytophilum, Mycoplasma haemofelis, &prime;Candidatus Mycoplasma haemominutum&prime;, Candidatus Mycoplasma turicensis&prime;, Theileria sp e Cytauxzoon sp, através do emprego de IFA, Western blot, ELISA e TaqMan® PCR e RT-PCR em amostras de soro, sangue, fezes e suabes orais, conforme as amostras disponíveis para cada animal. A detecção direta de patógenos ou de anticorpos demonstrou que populações de felídeos selvagens no Brasil estão expostas pelo menos ao FHV 1, FCV, FPV, FCoV, FeLV e lentivírus felinos, Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Mycoplasma haemofelis, &prime;Candidatus Mycoplasma haemominutum&prime; e Cytauxzoon sp, ou agentes relacionados, quais provavelmente contribuem em quadros não diagnosticados de morbidade e/ou mortalidade das populações de felídeos selvagens no País. A presença de patógenos comuns de carnívoros domésticos em felídeos selvagens aponta para a necessidade de cuidadoso monitoramento destas infecções através de uma abordagem integrada e multidisciplinar / This study evaluated exposure of 12 nondomestic felid species, both free-ranging (n=22) and captive (n=210) in Brazil to 16 potential pathogenic agents for members of Felid family, as feline herpesvirus 1 (FHV 1), feline calicivirus (FCV), feline parvovirus (FPV), feline coronavirus (FCoV), feline leukemia virus (FeLV), feline immunodeficiency virus (FIV), puma lentivirus (PLV), canine distemper virus (CDV), Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Anaplasma phagocytophilum, Mycoplasma haemofelis, &prime;Candidatus Mycoplasma haemominutum&prime;, Candidatus Mycoplasma turicensis&prime;, Theileria sp, and Cytauxzoon sp, using IFA, Western blot, ELISA, and TaqMan® PCR and RT-PCR in serum, blood, feces and oral swabs, according to available samples for each animal. The antibody or agents detection demonstrated that Brazilian wild felid populations are exposed to at least FHV 1, FCV, FPV, FCoV, FeLV, puma lentivirus (PLV), Bartonella henselae, Ehrlichia canis, Mycoplasma haemofelis, &prime;Candidatus Mycoplasma haemominutum&prime;, and Cytauxzoon sp, related agents, which probably contribute to undiagnosed morbidity and/or mortality scenarios for the Brazilian populations of wild felids. The presence of common domestic carnivore pathogens in wild felids address the need of close monitoring of such infections throughout an integrative and multidisciplinary approach

Foram coletados cinqüenta e oito (58) amostras de cachorro-do-mato (Cerdocyon thous) de vida livre, provenientes do Estado do Espírito Santo, Brasil. Os animais eram mortos por atropelamento ao longo da rodovia estadual ES-060 que liga os municípios de Vila Velha à Guarapari, passando por duas reservas florestais de Mata Atlântica. Todos os animais eram encaminhados para a Universidade de Vila Velha UVV pela concessionária RodoSol, onde passavam por detalhado exame necroscópico com coleta de tecidos e ectoparasitas para pesquisa de patógenos pela técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Todas as amostras obtidas foram testadas quanto à presença de agentes pertencentes à família Anaplasmataceae e membros dos gêneros Rickettsia, Borrelia, Babesia, Coxiella, Leishmania, Hepatozoon e Ehrlichia. No total foram colhidos 25 espécimes de carrapatos, todos em estágio ninfal e pertencentes à espécie Amblyomma cajennense. Na pesquisa de patógenos pela PCR, não foi encontrada nenhuma amostra de animal ou carrapato positiva para Leishmania spp, Rickettsia spp, Borrelia spp, Babesia spp e Coxiella spp. Das 58 amostras de tecidos, 29 (50%) foram positivas para Hepatozoon spp no gene 18S rRNA, tendo sido identificado dois genótipos, um denominado Hepatozoon sp. ex Cerdocyon thous, presente em 96,55% dos animais testados, com máxima similaridade de 98,67% com a espécie Hepatozoon sp. curupira 2 (AY461377). O outro genótipo foi encontrado em somente um animal (3,44%), denominado Hepatozoon sp. P20 Cerdocyon thous, que apresentou máxima similaridade de 97,5% com Hepatozoon sp. 744C (EU430234). Na pesquisa para Ehrlichia spp, seis amostras foram positivas (10,34%). As seis amostras foram caracterizadas como uma possível nova espécie de Ehrlichia, denominada Ehrlichia sp. ex Cerdocyon thous, com máxima similaridade de 97,57% com a espécie Ehrlichia ruminantium (DQ482915) para o gene 16S e 82,51% similar com E. ruminantium str. Gardel (CR925677) para o gene dsb. Todas as espécies de carrapatos foram negativas. Hepatozoon spp e Ehrlichia spp são agentes infecciosos transmitidos por carrapatos, com potencial zoonótico, de potencial impacto para saúde animal e humana. / We collected samples from fifty-eight (58) free-living crab-eating fox (Cerdocyon thous) from the State of Espírito Santo, Brazil. All animals were hit by vehicles passing through the highway ES-060, which crosses an Atlantic rainforest reserve, located between the cities of Guarapari and Vila Velha. The animals were collected by the Rodosol Company, and taken to the University of Vila Velha - UVV, where they underwent post-mortem examination, and collection of tissue samples and ectoparasites for research through the polymerase chain reaction (PCR) technique. All samples were tested for the presence of agents belonging to the family Anaplasmataceae and members of the genera Rickettsia, Borrelia, Babesia, Coxiella, Leishmania, Hepatozoon, and Ehrlichia. We collected 25 specimens of nymphal ticks, which were all identified as Amblyomma cajennense. Search of pathogens by PCR did not find any positive animal or tick sample for Leishmania spp, Rickettsia spp, Borrelia spp, Babesia spp and Coxiella spp. From the 58 tissue samples, 29 (50%) were positive for Hepatozoon sp by the PCR targeting the 18S rRNA gene. Amplicons generated two different genotypes, one named Hepatozoon sp. ex Cerdocyon thous, present in 96.55% of the animals, with a maximum of 98.67% similarity with the sequence of Hepatozoon sp. curupira 2 (AY461377); the second genotype was found in only one animal (3.44%), named Hepatozoon sp. P20 Cerdocyon thous, which showed maximum similarity (97.5%) with Hepatozoon sp. 744C (EU430234). The survey for Ehrlichia spp resulted in six positive samples (10.34%). The six samples were characterized as a possible new species of Ehrlichia, named Ehrlichia sp. ex Cerdocyon thous, with maximum similarity (97.57%) with the species Ehrlichia ruminantium (DQ482915) for the 16S and 82.51% similar to E. ruminantium str. Gardel (CR925677) for the dsb gene. All species of ticks were negative for all pathogens searched. Hepatozoon spp and Ehrlichia spp are tick-borne infectious agents with zoonotic potential; the present findings are of potential impact for both animal and human health.

Algumas doenças associadas à piscicultura de tilápias trazem enormes prejuízos aos criadores, resultando em expressivos coeficientes de morbidade e mortalidade entre animais de todas as idades. Nesse sentido, exigências para o aprimoramento do diagnóstico laboratorial de doenças de natureza infecto-contagiosa tornaram-se constantes, face às perdas vinculadas. Os Ranavirus são vírus que infectam vertebrados ectotérmicos causando necrose generalizada, hemorragias focais e apoptose celular nos animais infectados. O presente estudo objetivou a realização de infecções experimentais em larvas e alevinos de tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus), através de 3 diferentes modelos de infecção, utilizando estirpe de Ranavirus Frog vírus 3-like; recentemente detectada e isolada no Brasil, para avaliação das patologias associadas, incluindo o sequenciamento e análise do genoma da cepa viral. Vários sinais clínicos macroscópicos e microscópicos foram observados, hemólise, hemácias com anisocitose e policromasia, alterações relacionadas a média dos volumes das hemácias e hemoglobina, índices hepato-somáticos e espleno-somáticos com interações estatisticamente significantes, linfócitos reativos, alterações nos níveis das enzimas alanina aminotransferase e corpúsculos de inclusão basofílicos em diferentes tecidos dos animais experimentados com Ranavirus FV3-like foram observados dentro do período de 60 dias pós-infecção. Além disso, animais experimentalmente infectados foram positivos ao Ranavirus através de qPCR. O genoma de cepa brasileira de Ranavirus FV3-like apresentou 105 kilobases, contendo 54,98% de guanina + citosina, sendo 94 potenciais ORFs anotadas. A reconstrução filogenética, baseada em sequencias nucleotídicas, agrupou a amostra brasileira de Ranavirus no clado dos Frog vírus 3-like e as maiores identidades do genoma se deram com cepas norte-americanas de FV3-like. Doze potenciais eventos de recombinação, estatisticamente significantes (p &lt; 0,05), foram identificados entre a cepa brasileira e amostras de referência de Ranavirus FV3-like. Nesse sentido, o presente trabalho contribui para o melhor entendimento da infecção causada por estirpe brasileira de Ranavirus FV3-like em tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus). Além disso, adiciona e reforça a potencial recombinação entre diferentes estirpes de Ranavirus, colaborando para uma melhor compreensão das características de agentes virais associados a graves surtos em vertebrados ectotérmicos no país. / Some diseases associated with tilapia fish farming cause enormous losses to breeders, resulting in significant morbidity and mortality rates among animals of all ages. In this sense, requirements for the improvement of the laboratory diagnosis of diseases of infectious-contagious nature, became constant, in view of the related losses. Ranaviruses are viruses that infect ectothermal vertebrates causing widespread necrosis, focal haemorrhages and cell apoptosis in infected animals. The present study aimed to perform experimental infections in Nile tilapia (Oreochromis niloticus) fry and larvae through 3 different infection models, using Ranavirus Frog virus 3-like strain recently detected and isolated in Brazil, to evaluate the associated pathologies, including sequencing and genome analysis of the viral strain. Several macroscopic and microscopic clinical signs were observed, hemolysis, red blood cells presenting anisocytosis and polychromasia, alterations related to the mean red blood cell volumes and hemoglobin present in the red blood cells, hepato-somatic and spleno-somatic indexes showing statistically significant interactions, reactive lymphocytes, alterations in the levels of the enzymes alanine aminotransferase and basophilic inclusion corpuscles in different tissues of animals tested with Ranavirus FV3-like were observed within the 60-day post-infection period. In addition, experimentally infected animals were positive to Ranavirus through qPCR. The genome of the Ranavirus FV3-like Brazilian strain presented 105 kilobases, containing 54.98% of guanine + cytosine, with 94 potential ORFs annotated. The phylogenetic reconstruction, based on nucleotide sequences, grouped the Brazilian sample of Ranavirus in the clade of Frog virus 3-like, the greater identities of the genome were with North American strains of FV3-like. Twelve potential recombination events, statistically significant (p &lt;0.05), were identified between the Brazilian strain and reference samples of Ranavirus FV3-like. The present work contributes to a better understanding of the infection caused by the Brazilian strain of Ranavirus FV3-like in Nile tilapia (Oreochromis niloticus). In addition, it adds and reinforces the potential recombination between different strains of Ranavirus, contributing to a better understanding of the characteristics of viral agents associated with severe outbreaks in ectothermic vertebrates.

Streptococcus pneumoniae é a maior causa de doenças infecciosas invasivas. As vacinas conjugadas, ao contrário das vacinas polissacarídicas, se mostram eficazes na indução de uma resposta protetora em crianças menores de 2 anos de idade. Entretanto, apesar do sucesso na redução dos casos de doenças pneumocócicas, publicações recentes têm mostrado um aumento nos casos de doença por sorotipos de S. pneumoniae não inclusos nas vacinas conjugadas atualmente licenciadas. Com o objetivo de evitar a substituição dos sorotipos prevalentes e aumentar a cobertura vacinal, nosso projeto prevê a introdução de uma proteína de superfície do pneumococo como carreador em uma vacina conjugada. A Proteína de Superfície Pneumocócica A (PspA), por ser conservada entre diversos sorotipos e por sua alta imunogenicidade, foi escolhida para constituir o conjugado, juntamente com o Polissacarídeo Capsular de S. pneumoniae sorotipo 6B (PS6B), um sorotipo de elevada prevalência no Brasil. Também foi avaliada a influência de diferentes espaçadores entre a proteína carreadora e o PS sobre a resposta imune induzida. Estudos envolvendo diferentes condições reacionais tiveram como objetivo o estabelecimento de um protocolo de conjugação com elevado rendimento. A substituição do ativador EDAC (hidrocloreto de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida), comumente empregado na ativação do grupo carboxila da proteína, pelo DMT-MM (cloreto de 4-(4,6-dimetoxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolino) foi capaz de aumentar significativamente o rendimento reacional, o qual passou de menos de 10% para aproximadamente 50%. A proteção com formaldeído dos grupos lisinas da PspA aumentou a especificidade da reação de conjugação, com consequente aumento no rendimento reacional. A PspA modificada manteve a mesma estrutura secundária apresentada pela PspA nativa (análise por dicroísmo circular - CD) bem como sua imunogenicidade (título de anticorpos, capacidade de deposição de complemento e atividade opsonofagocítica). Apesar das análises por CD mostrarem que a conjugação alterou a estrutura secundária da PspA, ensaios imunológicos mostraram que essa desestruturação não afetou a sua capacidade de induzir uma resposta imune protetora. A resposta anti-PspA e anti-PS6B induzida pelo conjugado mostrou-se dose dependente, muito embora o PS6B tenha se comportado como um antígeno pouco imunogênico. / Streptococcus pneumoniae is the main cause of invasive infectious diseases. Unlike polysaccharide (PS) based vaccines, conjugate vaccines have shown to protect children less than 2 years old. However, regardless of the success in reducing pneumococcal disease, recent reports have shown an increase in the rate of disease caused by serotypes not included in licensed conjugate vaccines. In order to avoid serotype replacement, our project proposes to test a surface exposed pneumococcal protein as carrier. Pneumococcal Surface Protein A (PspA), a conserved protein among various serotypes, and highly immunogenic was chosen to take part in the conjugate together with the Polysaccharide Serotype B of Streptococcus pneumoniae (PS6B), a serotype of high incidence in Brazil. In this sense, studies involving different reactional conditions were aimed at stablishing a high yield conjugation protocol. Also, the influence of different spacer between carrier protein and polysaccharide were evaluated on immune response. The replacement of EDAC (1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl] carbodiimide hydrochloride), usually used in the activation of protein carboxyl groups, to DMT-MM (4-[4,6-Dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl]-4-methylmorpholinium chloride), was able to significantly increase the reactional yield from less than 10% to approximately 50%. The protection of lysines groups of PspA with formaldehyde increased conjugation specificity, with subsequent increase in reactional yield. Modified PspA maintained the same secondary structure of native PspA (circular dichroism analyses - CD) as well as its immunogenicity (antibody titers, deposition of complement and opsonophaghocytic activity). Despite circular dichroism analyses have shown changes in PspA secondary structure, immunological tests proved that this alteration did not affect its ability in inducing a protective immune response. Anti-PspA and anti-PS6B responses proved to be dose dependent, although PS6B acted as a poor immunogenic antigen in mice.

Avaliou-se o impacto da fragmentação florestal na diversidade de carrapatos de vida-livre e a presença de patógenos nestes carrapatos em remanescentes florestais do Pontal do Paranapanema, estado de São Paulo, Brasil. Estes fragmentos florestais abrigam uma rica e importante biodiversidade, com espécies endêmicas e ameaçadas como o mico-leão-preto (Leontopithecus chrysopygus), a anta (Tapirus terrestris), a onça pintada (Panthera onca), o macuco (Tinamus solitarius) e várias outras espécies de aves, mamíferos, répteis, anfíbios e peixes. Aproximadamente 90% das espécies de carrapatos parasitam exclusivamente hospedeiros selvagens. O restante pode ter animais domésticos e humanos como hospedeiros. Embora a maioria das pesquisas tenha sido dirigida a espécies de importância econômica, os carrapatos que parasitam animais selvagens possuem relevante papel na manutenção dos níveis de patógenos em populações de vida livre. Algumas destas espécies, por exemplo, demonstraram que podem parasitar hospedeiros não selvagens e promover o surgimento de zoonoses. Em habitats fragmentados, a diversidade de espécies vertebradas é menor se comparado a habitats com pouca alteração antrópica. Portanto, a fragmentação do habitat diminui a diversidade de espécies de carrapatos também. Para estudar a relação entre a fragmentação florestal e a ecologia das populações de carrapatos foram coletados carrapatos em 8 fragmentos florestais pelo método de arrasto de flanela e inspeção visual da vegetação. Os índices de comparação utilizados foram de similaridade de Jaccard, de diversidade de Shannon e complexidade do fragmento florestal de Patton. Utilizou-se o modelo de regressão linear para compara os índices de Shannon e Patton. Um total de 2149 ninfas de Amblyomma spp foi coletado e foram identificadas as espécies de 629 carrapatos. As espécies coletadas foram Amblyomma cajennense (94,28%), A. coelebs (1,59%), A. naponense (2,86%), A. ovale (0,64%), A. nodosum (0,32%), A. brasiliense (0,16%) e Haemaphysalis juxtakochi (0,16%). Nenhum indivíduo testado foi positivo pelo teste da hemolinfa. Os resultados mostraram uma tendência de correlação entre a fragmentação floresta, e a diversidade de espécies de carrapatos. / This study evaluated the impact of forest fragmentation on diversity of freeliving ticks and prevalence of tick pathogens in remaining forest fragments in the Pontal do Paranapanema, São Paulo state, Brazil. These forest fragments shelter rich and important biodiversity, with endemic and threatened species such as the black lion tamarin (Leontopithecus chrysopygus), the tapir (Tapirus terrestris), jaguar (Panthera onca), the solitary tinamou (Tinamus solitarius) and various other species of birds, mammals, reptiles, amphibians and fish. Approximately 90% of tick species parasitize exclusively wild hosts. The remainder can also have domestic animals and humans as hosts. Although most research has been directed to species of economic importance, ticks that parasitize wild animals are also relevant due to their role in maintaining enzootic pathogen levels in wild populations. Some of these species, for example, have been shown to cross-over onto non-wild hosts and promote emergent zoonoses. In fragmented habitats, the diversity of vertebrate species is normally lower than comparable habitats with minimal anthropic alteration. Thus, habitat fragmentation decreases the diversity of tick species too. To study the relationship between forest fragmentation and population ecology of ticks, ticks were collected in 8 forest fragments using dragging and visual inspection of vegetation. The index used were Jaccard´s similarity, diversity f Shannon and Patton. The linear regression model was used to compare Shannon and Patton indexes. A total of 2149 nymphs of Amblyomma spp. And 629 identified ticks was collected. The species of ticks collected was Amblyomma cajennense (94,28%), A. coelebs (1,59%), A. naponense (2,86%), A. ovale (0,64%), A. nodosum (0,32%), A. brasiliense (0,16%) e Haemaphysalis juxtakochi (0,16%). All ticks were negative by hemolimph test. The results showed a tendency of correlation between forest fragmentation and diversity of tick species.