Realizou-se a pesquisa de anticorpos aglutinantes (AcA) anti-leptospira, através da técnica de soroaglutinação microscópica (SAM) e tentativas de isolamento do agente etiológico em 29 cães com suspeita clínica de leptospirose. Foi também realizada a pesquisa de material genético de Leptospira spp., utilizando-se a técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) em 24 amostras de urina dos mesmos cães. Com o objetivo de determinar a proteção cruzada entre os sorovares icterohaemorrhagiae e copenhageni, 24 cães adultos foram avaliados antes e após a vacinação com uma dose de vacina contendo os antígenos icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa e pomona, utilizando-se o teste de inibição de crescimento in vitro (TIC) dos sorovares canicola, copenhageni e icterohaemorrhagiae. Os títulos de AcA anti-copenhageni foram os mais freqüentemente observados nos cães com suspeita clínica de leptospirose, havendo entretanto, reação cruzada entre diferentes sorovares. Foram isoladas quatro amostras de leptospira, das quais três foram caracterizadas por anticorpos policlonais e por Variable Number Tandem Repeat (VNTR) como sorovar canicola. A quarta amostra isolada reagiu em alto título com o anti-soro policlonal anti-sorovar copenhageni (51.200), não tendo sido testado com o anti-soro anti-icterohaemorrhagiae. Pela técnica de VNTR, essa amostra foi classificada como pertencente ao sorogrupo icterohaemorrhagiae e, finalmente, pelo uso dos anticorpos monoclonais F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 e F89 C12, para a diferenciação dos representantes do sorogrupo icterohaemorrhagiae, essa amostra isolada apresentou o comportamento imunológico do sorovar copenhageni (cepa padrão L1 130, FIOCRUZ - Bahia). Considerando-se como critério sorológico de confirmação do diagnóstico clínico de leptospirose, títulos maiores ou iguais a 800 em amostra única de soro, ou o aumento ou declínio de quatro vezes os títulos de AcA (duas diluições) em duas amostras pareadas de soro, houve a confirmação do diagnóstico etiológico em 9 de 24 cães (37,5%) pela SAM. Por outro lado, 11 das 24 amostras de urina (45,8%) foram positivas à PCR. A associação das duas técnicas permitiu a confirmação diagnóstica em 15 cães (62,5%). Os títulos de anticorpos neutralizantes (AcN) (TL50) pré-vacinais contra os sorovares icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni foram respectivamente de 1,444±0,278, 0,725±0,317 e 0,583±0,322, e os títulos pós-vacinais foram respectivamente de 1,455±0,287, 1,475±0,270 e 0,510±0,304. Considerando-se o título de AcN maior ou igual a 1 como título protetor contra a infecção leptospírica, no momento pré-vacinal, os cães ainda apresentavam AcN contra o sorovar icterohaemorrhagiae capazes de protegê-los contra a infecção natural, não tendo havido também uma resposta adicional ao estímulo vacinal. Com relação ao sorovar canicola, houve aumento significativo dos títulos de AcN após a imunização (p=0,001) quando comparado ao momento pré-vacinal, tendo sido desenvolvida uma resposta protetora. Embora os animais não tenham sido vacinados contra o sorovar copenhageni, a presença de AcN pré-vacinal e pós-vacinal pode ser justificada pela reatividade cruzada entre ambos, copenhageni e icterohaemorrhagiae, pertencentes ao mesmo sorogrupo; entretanto os títulos pré- e pós-vacinais não foram da mesma magnitude dos produzidos contra o sorovar icterohaemorrhagiae. Portanto, a vacina contendo bacterina do sorovar icterohaemorrhagiae não é capaz de eliciar resposta protetora contra o sorovar heterólogo copenhageni. / A research on agglutinating antibodies (AAc) anti-leptospira has been performed, through microscopic agglutination test (MAT) and attempts of isolation of the etiologic agent in 29 dogs with clinical suspicious of leptospirosis. There was also made a research of Leptospira spp.´s genetic material, using polimerase chain reaction (PCR) in 24 urine samples of the same dogs. With the aim to determine the cross protection between serovars icterohaemorrhagiae and copenhageni, 24 adult dogs were evaluated before and after vaccination with one dose of a vaccine containing icterohaemorrhagiae, canicola, grippotyphosa and pomona antigens, by the in vitro inhibition growth test (GIT) of serovars canicola, icterohaemorrhagiae and copenhageni. The AAc anti-copenhageni titers were the most frequently obseeved in the dogs with clinical suspicious of leptospirosis, existing however, cross reaction among different serovars. There were isolated four samplas of leptospira, of witch three were all characterizated by polyclonal antibodies and Variable Nunber Tandem Repeat (VNTR) as serovar canicola. The fourth isolated sample reacted in high titers to polyclonal antisera anti-copenhageno (51.200), but is was not tested with antisera anti-icterohaemorrhagiae. By VNTR technique, this sample was classified as belonging to the serogroup icterohaemorrhagiae, and finally by the use of monoclonal antibodies F70 C24, F70 C14-10, F12 C3-11 and F89 C12, for differentiation of the representatives of serogroup icterohaemorrhagiae. This isolated sample presented the immunological behavior of serovar copenhageni (standard strain LI 130, FIOCRUZ - Bahia). Considering the sorologic criteria confirmation of clinical diagnosis of leptospirosis, titers higher or equal than 800 in a unique serum sample, or the increase or decrease of four times of AAc titers (two dilutions) in two paired serum samples, there was the conformation of etiologic diagnosis in 9 of the 24 dogs (37,5%) by MAT. However, 11 out of 24 urine samples (45,8%) were positive at PCR. The association of both techniques allowed the diagnostic conformation in 15 dogs (62,5%). The prevaccinal neutralizing antibodies (NAc) titers (TL50) were respectively 1,444±0,278, 0,725±0,317 and 0,583±0,322. And the postvaccinal titers were respectively 1,455±0,287, 1,475±0,270 and 0,510±0,304. Considering the NAc titer higher than 1 as a protective titer against leptospiral infection, at prevaccinal moment the dogs still presented NAc against serovar icterohaemorrhagiae capable to protect them against natural infection, an adictional response to the vaccinal stimulus had not occurred. Concerning serovar canicola, there was a significant increase of NAc titers after immunization (p=0,001) when compared to prevaccinal moment, and a protective response was developed. Although the animals were not vacinated against serovar copenhageni, the presence of prevaccinal and postvaccinal NAc can be explained by cross reactivity between both, copenhageni and icterohaemorrhagiae, belonging to same serogroup; however, the pre- and postvaccinal titers were not of the same magnitude of those produced against serovar icterohaemorrhagiae. Therefore, the vaccine containing bacterins of serovar icterohaemorrhagiae is not capable of eliciting protective response against the heterologous serovar copenhageni.

O fitoplâncton é composto por uma gama de organismos fotossintetizantes de diversas origens evolutivas. São os principais produtores primários dos oceanos embora sua biodiversidade seja muito pouco estudada, principalmente as frações do nano e picoplâncton. A composição florística dessas duas frações do fitoplâncton marinho é praticamente desconhecida nas águas brasileiras, entretanto diversos trabalhos ecológicos e oceanográficos relatam sua importância, pois são os mais abundantes nas regiões marinhas. O presente estudo teve como objetivo isolar espécies de microalgas, com ênfase nos fitoflagelados, a partir de amostras coletadas de Cananéia, Ubatuba e Santos, a fim de aumentar o conhecimento acerca da composição taxonômica desses organismos e permitir estudos futuros, envolvendo análises moleculares, ultraestruturais e fisiológicas. Para isso, foram usadas várias técnicas tradicionais de isolamento, como cultura mista, micropipetagem e diluições sucessivas, plaqueamento em ágar e diluição seriada. Foram isolados 49 cepas das classes Cyanophyceae, Trebouxiophyceae, Cryptophyceae, Bacillariophyceae, Prasinophyceae, Nephroselmidophyceae, Chrysophyceae e outros não identificados. Análises pigmentares foram realizadas em especial para o grupo das Cryptophyceae para confirmar a identificação em nível genérico. Vários dos táxons isolados representam novos registros para o estado de São Paulo e para a costa do Brasil. Os resultados do presente estudo são uma boa partida para a inclusão filogenética dos organismos isolados na costa do Brasil no contexto mundial, auxiliando a desvendar a biodiversidade críptica de espécies até o momento desconhecidas para as regiões estudadas / Phytoplankton comprises a range of photosynthetic organisms with different evolutionary origins. They are the main primary producers in the oceans but its biodiversity is poorly studied, especially on the nano and picoplankton fractions. Although the floristic composition of these two fractions of the marine phytoplankton is virtually unknown in Brazilian waters, several studies have reported the oceanographic and ecological importance of these groups, which are the most abundant in marine environment. This study aimed to isolate microalgae species with emphasis on \"phytoflagellates\" from samples collected in Cananéia, Ubatuba and Santos in order to increase the knowledge about their taxonomic composition and allow future studies involving molecular, ultrastructural and physiological analysis. For this, several traditional single-cell isolation techniques were used such as enrichment culture, micropipette, agar plating and serial dilutions. There were isolated 49 strains of Cyanophyceae, Trebouxiophyceae, Cryptophyceae, Bacillariophyceae, Prasinophyceae, Nephroselmidophyceae, Chrysophyceae classes and others unidentified. Pigment analyzes were performed specially on Cryptophyceae group in order to confirm their identification at generic level. Several of the isolated taxa are new records for the state of São Paulo and the coast of Brazil. The findings of this study enable the phylogenetic inclusion of organisms isolated from the Brazilian coast in a world context, helping to unravel the cryptic biodiversity of organisms hitherto unknown for the studied regions

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-12T19:07:27Z No. of bitstreams: 1 viniciusjosepilate.pdf: 783213 bytes, checksum: da2d70d6a4638a79930055e8f708be6c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-27T20:07:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 viniciusjosepilate.pdf: 783213 bytes, checksum: da2d70d6a4638a79930055e8f708be6c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-27T20:07:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 viniciusjosepilate.pdf: 783213 bytes, checksum: da2d70d6a4638a79930055e8f708be6c (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O conhecimento dos aspectos biológicos, morfológicos e comportamentais dos moluscos terrestres é importante para o desenvolvimento de medidas de controle de pragas e de estratégias de conservação de espécies. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar os padrões de biologia, conquiliomorfometria e comportamento da espécie Dysopeas muibum e verificar os efeitos do isolamento e do fotoperíodo sobre seu ciclo de vida e a morfometria da concha, em condições de laboratório. Foi realizado o acompanhamento do crescimento da concha, da liberação de filhotes e da mortalidade de 160 moluscos, dos quais 40 foram mantidos isolados e 120 agrupados (10 moluscos por grupo; 40 em condições naturais de temperatura, umidade relativa do ar e fotoperíodo, e 80 tendo estas condições controladas – 40 com dias longos e 40 com dias curtos), desde o nascimento até 180 dias de vida, quando então foram aferidas as medidas da concha. Para verificar o horário de atividade e compor o etograma, 30 moluscos adultos (10 moluscos por grupo) foram observados durante 24 horas contínuas, através do método de varredura, com registro dos atos comportamentais a intervalos de 20 minutos. Já para verificar a ocorrência de agregação e a preferência por sítio de repouso, durante cinco dias, a intervalos de 24 horas, foram observados de 30 moluscos adultos (10 moluscos por grupo): número de agregações, de indivíduos agregados e isolados, e de indivíduos sob o disco com alimento, sob o disco sem alimento, sobre o substrato, enterrados e na parede do terrário. Para todas as análises, os moluscos foram criados em terrários plásticos vedados com tecido de algodão e elástico, contendo como substrato terra vegetal esterilizada e umedecida com água de torneira, e alimentados com ração para frangos de corte enriquecida com carbonato de cálcio. Foi verificado que a espécie ocorre no município de Juiz de Fora, Minas Gerais, possui parte mole amarelada e concha pequena e alongada, e é capaz de se reproduzir por autofecundação. Possui crescimento indeterminado, fecundidade aumentando com o tamanho corporal, iteroparidade e baixa mortalidade antes e após a maturidade sexual, não tendo o fotoperíodo efeito sobre esses padrões. As condições controladas de temperatura, umidade relativa do ar e fotoperíodo favoreceram o crescimento, maiores valores conquiliomorfométricos e o rápido alcance da maturidade sexual, enquanto a diminuição do comprimento do dia favoreceu a fecundidade. O isolamento aumentou o número total de filhotes, o número de filhotes por molusco parental e o intervalo entre eventos reprodutivos, reduziu o número de eventos reprodutivos e de filhotes por evento, e não influenciou o crescimento, o alcance da maturidade sexual, a relação crescimento-reprodução, a mortalidade e a conquiliomorfometria. O etograma foi composto por oito atos comportamentais: repousar, estar enterrado, deslocar, enterrar, explorar, alimentar, emergir e interagir. A espécie apresentou maior tendência ao repouso e a locomoção foi o ato comportamental de atividade prevalente, não apresentou horário de atividade predominantemente noturno e comportamento agregativo, e seu sítio preferido para o repouso foi o enterramento no substrato. / Knowledge of biological, morphological and behavioral characteristics of terrestrial molluscs is important for the development of pest control measures and strategies for the conservation of species. This study aimed to characterize the patterns of biology, conchiliomorphometric and behavior of the species Dysopeas muibum and check the effects of isolation and photoperiod on its life cycle and shell morphometry, under laboratory conditions. We conducted monitoring growth of the shell, release of puppies and mortality of 160 molluscs, of which 40 were kept isolated and 120 grouped (10 molluscs per group; 40 in natural conditions of temperature, relative humidity and photoperiod, and 80 with controlled conditions – 40 with long days and 40 with short days), from birth to 180 days of life, when the measures of the shell were taken. To check the schedule of activity and compose the ethogram, 30 adult molluscs (10 molluscs per group) were observed for 24 continuous hours, through the scanning method, with a record of behavioral acts at intervals of 20 minutes. For verifying the occurrence of aggregation and the preference for resting place, for five days, at 24 hour intervals, were observed in 30 adult molluscs (10 molluscs per group): number of aggregations, of aggregates and isolated individuals, and of individuals below the disc with food, below the disc without food, on the substrate, buried and in the wall of terrarium. For all analyzes, the molluscs were reared in plastic terrariums sealed with cotton fabric and elastic, containing plant soil sterile and moistened with tap water, and fed with food to broilers enriched with calcium carbonate. It was found that the species occurs in the Juiz de Fora City, MG, Brazil, has the soft yellowish and small and elongated shell, and is able to reproduce by self-fertilization. It has indeterminate growth, fecundity increases with body size, iteroparity and low mortality before and after sexual maturity, not having the photoperiod effect on these patterns. The controlled conditions of temperature, relative humidity and photoperiod favored growth, conchiliomorphometric values higher and fast reach sexual maturity, while the decrease in day length favored fecundity. The isolation increased the total number of pups, number of pups per parent mollusc and the interval between reproductive events, reduced the number of reproductive events and pups per event, and did not influence growth, reach sexual maturity, growth-reproduction relation, mortality and conchiliomorphometric. The ethogram was composed of eight behavioral acts: lie, lie buried, move, bury, explore, food, emerge and interact. The species had a greater tendency to rest and locomotion was the behavioral act prevalent activity, showed no activity time predominantly nocturnal and affiliative behavior, and their favorite place to rest was buried in substrate.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-10T13:06:11Z No. of bitstreams: 1 moaralemos.pdf: 8011367 bytes, checksum: a17591543a2939766922aca9a545dc20 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:05:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 moaralemos.pdf: 8011367 bytes, checksum: a17591543a2939766922aca9a545dc20 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T15:05:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 moaralemos.pdf: 8011367 bytes, checksum: a17591543a2939766922aca9a545dc20 (MD5) Previous issue date: 2007-02-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente estudo teve como objetivo verificar a infecção por tripanossomas em anuros em regiões dos estados do Mato Grosso e Rio de Janeiro. Para tal, 20 espécies das famílias Bufonidae, Microhylidae, Hylidae e Leptodactylidae foram coletadas durante as atividades de resgate de fauna da Usina hidrelétrica do Guaporé, na divisa dos municípios Vale de São Domingos, Pontes e Lacerda, MT e no Município de Seropédica, Campus da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, RJ. Verificou-se a presença de tripanossomas em esfregaços sangüíneos e impressões de órgãos em 36,36% dos hospedeiros analisados de Osteocephalus sp., 50% de Leptodactylus chaquensis, 100% de Leptodactylus fuscus, 100% de Leptodactylus lineatus e 100% de Leptodactylus ocellatus. Foi verificado polimorfismo das espécies encontradas, separando-se Trypanosoma sp.1; Trypanosoma sp.2; Trypanosoma sp.3; Trypanosoma chattoni e Trypanosoma rotatorium (lato sensu). Destes o polimorfismo mais acentuado foi observado em Trypanosoma sp.3. Amostras de sangue da circulação periférica e visceral de Leptodactylus ocellatus foram incluídas em meio de bifásico constituído de Agar e sangue e fase líquida de LIBHIT-K. Foram obtidos isolados de Trypanosoma sp.3 de três dos quatro hospedeiros coletados. Tripanossomas foram observados 4 dias após inoculação, mantidos por 8 meses em cultura e retiradas amostras para análise da ultra-estrutura. Nas formas de cultura foram observadas epimastigotas, esferomastigotas e tripomastigotas. Divisão binária foi observada em epimastigotas e esferomastigotas; tripomastigotas não foram observadas em divisão. A análise da ultra-estrutura de Trypanosoma sp.3 confirmou sua singularidade por características morfológicas como glicosomos alongados. Este estudo faz o primeiro registro da infecção por tripanossomas em anuros do gênero Ostheocephalus e nas espécies Leptodactylus chaquensis, Leptodactylus fuscus, Leptodactylus lineatus e a ocorrência de T. chattoni em espécies do gênero Leptodactyllus e no Brasil. Registra-se ainda a utilização do meio LIBHIT-K como eficaz para manutenção de Trypanosoma sp.3 e o primeiro estudo sobre registro da ultra-estrutura de tripanossomas de anuros no Brasil. / The present research had as its main goal, checking the infection through trypanosomes in Anuran around Mato Grosso and Rio de Janeiro States. For that purpose 20 species from Bufonidae, Microhylidae, Hylidae and Leptodactylidae families were collected during the fauna rescue activities at Guapore Power Station the border of Vale de São Domingos, Pontes Lacerda, MT and in Seropédia County, at the Rural Federal University Campus in Rio de Janeiro, RJ. Trypanosomes were found in blood smears and organ impressions in 36,36% of the Osteocephalus sp. studied hosts, 50% of Leptodactylus chaquensis, 100% of Leptodactylus fuscus, 100% of Leptodactylus Lineatus and 100% of Leptodactylus ocellatus. Polimorfism was verified on the founded species, splitting into Trypanosoma sp.1, Trypanosoma sp.2, Trypanosoma chattoni, Trypanosoma rotatorium (lato sensu) and Trypanosoma sp.3 that exhibit high polymorphism. Periferal blood samples were inoculated through diphasic blood Agar and LIBHIT-K, liquid fase. Isolates of Trypanosoma sp.3 were obtained from three out of four collected hosts. Trypanosomes were observed 4 days after the inoculation, kept in cultures for 8 months and samples were taken for ultrastructural analysis. Epimastigotes, sphaeromastigotes and trypomastigotes were the culture forms founded. Binary fission was noticed in epimastigotes and in sphaeromastigotes only, trypomastigotes were not observed in reproduction. The ultrastructural analysis of Trypanosoma sp.3 confirmed its singularity through morphological characteristic such as elongated glicosomes. This research accomplishes its first record of the infection through trypanosomes in the Anuran Osteocephalus genre and in the species of Leptodactylus fuscus, Leptodactylus lineatus and the presence of T. chattoni in the Leptodactyllus species in Brazil. The usage of LIBHIT-K as an effective mean for Trypanosoma sp.3 maintenance and the first records of ultrastructure anuran trypanosomes in Brazil.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_sergio_jorge.pdf: 980348 bytes, checksum: 9e56cf9be902454868ace419c988ca33 (MD5) Previous issue date: 2009-07-20 / Leptospirosis is a zoonotic disease that occurs all over the world, particularly in developing countries, caused by bacteria of the genus Leptospira. Several marsupial species are considered susceptible to infection caused by a wide variety of Leptospira serovars, acting as reservoirs. In this work were collected serum and urine samples of 33 White-eared opossum, trapped within distinct locations of Capão do Leão and Pelotas cities, in the South of Brazil, aiming to detect antibodies and to isolate leptospires. Serum samples were screened against a panel of 58 Leptospira spp and Leptonema illini serovars using the microscopic agglutination test (MAT). To attempt isolation, urine samples from all animals were inoculated in culture medium.EMJH enriched with 10% of supplement Difco® One pathogenic serovar was isolated after two months of inoculation, and is first isolate the country for this animal species and was characterized by PCR using primers for 16S and Lipl32 genes. The technique of partial sequencing of the rpoB gene was used to identify the genomic specie. The isolated strain belongs to the specie L. borgpetersenii, which along with L .interrogans are the main cause disease in humans. The isolate, was tested on MAT using dog, cattle and human sera. Cut off titer of 50 was used for domestic animal sera and 25 for human and opossum sera. Both human and animal sera presented agglutination on MAT to isolated strain corresponding to 3.3% (2/60), 28.33% (17/60) and 1.67% (1/60) in human, dog and cattle sera, respectively. The opossum sera presented 36.36% (12/33) of reaction. These findings suggest a probable white-eared opossum role in the maintenance of pathogenic Leptospira on the environment since low titer sera and urine elimination were observed. These animals could be important reservoirs of Leptospira serovars for human and domestic animals. / A Leptospirose é uma antropozoonose de ocorrência mundial, particularmente nos países em desenvolvimento, causada por bactérias do gênero Leptospira. Várias espécies de marsupiais e didelfídeos são consideradas suscetíveis a infecção causada por uma grande variedade de sorovares patogênicos de Leptospira spp. tendo sido considerados possíveis hospedeiros deste agente. Neste trabalho foram coletadas amostras de soro e urina de 33 gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris), capturados em diferentes regiões dos municípios do Capão do Leão e Pelotas, no sul do Brasil, com o objetivo de detectar anticorpos e isolar leptospiras. As amostras de soro foram testadas por aglutinação microscópica (MAT), utilizando 58 sorovares de Leptospira spp. e 1 de Leptonema. Para o isolamento, amostras de urina foram inoculadas em meio de cultura EMJH enriquecido com 10% de suplemento Difco®. Um sorovar patogênico foi obtido da urina, sendo o primeiro isolado do país para esta espécie, e foi caracterizado quanto ao gênero e patogenicidade por PCR utilizando primers para os genes 16S rDNA e Lipl32. A técnica de seqüenciamento parcial do gene rpoB foi utilizada para identificar a espécie genômica. A cepa isolada pertence à espécie L. borgpertersenii,, que juntamente com L. interrogans são as principais causadoras de doença em humanos. Anticorpos anti isolado de gambá foram avaliados em amostras sorológicas de 60 cães, 60 bovinos, 60 humanos e dos 33 gambás capturados através da MAT. Os soros humanos apresentaram reação de 3,3% (2/60), 28,33% (17/60) em soros caninos, 1,67% (1/60) em soros bovinos e 36,36% (12/33) em soros dos gambás capturados no estudo. Esses dados sugerem o envolvimento do gambá-de-orelha-branca na manutenção de leptospiras no ambiente, uma vez que estando infectados por sorovares patogênicos podem eliminar o agente pela urina e infectar direta ou indiretamente animais domésticos e conseqüentemente o homem.

Orientadora: Profa. Dra. Márcia Aparecida Sperança / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, São Bernardo do Campo, 2018. / A leishmaniose compreende um grupo de doenças zoonóticas causadas por protozoários da família Trypanosoma e do gênero Leishmania, sendo transmitida por vetores flebotomíneos. O género Leishmania compreende 30 espécies, incluindo 20 espécies capazes de causar doença em humanos, com diferentes manifestações clínicas, que vão desde lesões assintomáticas, cutânea e mucocutânea, até a forma visceral grave, que é letal se não tratada. No continente americano, a leishmaniose visceral (LV) é causada por Leishmania infantum chagasi e o Brasil concentra 90% dos casos registrados na América Latina. O diagnóstico da LV na América apresenta dificuldades devido a reações cruzadas com outras tripanossomíases endêmicas. Além disso, os sinais clínicos e as alterações hematológias da LV são encontrados em outras doenças infecciosas e em alterações malignas hematológicas. Com o intuito de buscar ferramentas e estratégias para o diagnóstico diferencial da LV, neste trabalho foram desenvolvidos métodos de isolamento e detecção molecular de L. infantum chagasi, além da busca por características demográficas específicas e avaliação do diagnóstico diferencial da LV em aspirados de medula óssea de pacientes com sintomas de doença hematológica da região de Marília-SP, no período de 2010 a 2017. O método de isolamento de L. infantum chagasi foi realizado a partir de amostras de medula óssea e sangue periférico de indivíduos sintomáticos. O diagnóstico molecular por reação em cadeia da polimerase, convencional, foi desenvolvido utilizando como alvo o gene de cópia única que codifica a enzima quitinase de L. infantum, o qual permite o diagnóstico específico e direto a partir de diferentes amostras clínicas. Os testes apresentaram elevada especificidade e mostraram sensibilidade aumentada quando comparados com métodos utilizados rotineiramente nos serviços de saúde. Os resultados da análise demográfica e do diagnóstico diferencial a partir de aspirados de medula óssea de pacientes com suspeita de doenças hematológicas indicaram que 19,4% apresentaram LV, e que a população com maior risco possui menos de 20 anos. O estudo realizado demonstra que a investigação de LV em pacientes com alterações hematológicas é fundamental não só para identificar casos de LV, mas também para tratar corretamente os casos de doenças infecciosas e hematológicas associadas. / Leishmaniasis covers a group of zoonotic diseases caused by protozoa parasites of the Trypanosoma Family and the genus Leishmania, being transmitted by phlebotomine insect vectors. The genus Leishmania comprises 30 species, including 20 species capable of causing disease in humans, with different clinical manifestations, ranging from asymptomatic, cutaneous and mucocutaneous lesions, to severe visceral form, which is lethal if untreated. In the American continent, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum chagasi and Brazil accounts for 90% of the Latin America registered cases. The diagnosis of VL in America presents difficulties due to cross-reactions with other endemic trypanosomiasis. In addition, clinical signs and VL hematological alterations are found in other infectious diseases and hematological malignancies. In order to search for tools and strategies for the differential VL diagnosis, in this work we have developed methods of isolation and molecular detection of L. infantum chagasi, as well as the search for specific demographic characteristics and evaluation of the differential diagnosis of VL in bone marrow biopsies of patients with symptoms of haematological diseases in the region of Marília-SP, from 2010 to 2017. The method of L. infantum chagasi isolation was performed from samples of bone marrow and peripheral blood of symptomatic individuals. Conventional polymerase chain reaction (PCR) was developed using the single copy gene encoding the chitinase enzyme of L. infantum, which allows specific and direct diagnosis from different clinical samples. Both diagnostic tests showed high specificity and increased sensitivity when compared with routinely used methods in health services. The results of the demographic analysis and the differential diagnosis from bone marrow biopsy of patients with supposed hematological diseases indicated that 19.4% had VL, and that the population with the highest risk is less than 20 years old. The present study demonstrates that the investigation of VL in patients with hematological alterations is fundamental not only to identify cases of VL but also to correctly treat cases of VL associated infectious and hematological diseases.

Listeria monocytogenes causa a listeriose, uma doença zoonótica grave que causa infecções do sistema nervoso central (meningite, encefalite e meningoencefalite), bacteremia primária e septicemia. A doença apresenta baixa morbidade e alta mortalidade e acomete, principalmente, grupos de risco, como mulheres grávidas, neonatos, indivíduos imunocomprometidos e idosos. L. monocytogenes tem sido encontrada com freqüência em alimentos in natura e/ou processados, como queijos e outros produtos lácteos. Esse estudo objetivou isolar bactérias lácticas a partir de leite de cabra, capazes de produzir peptídeos antimicrobianos (bacteriocinas), identificar estas cepas, caracterizar as bacteriocinas produzidas e avaliar o seu potencial de aplicação no controle da multiplicação de L. monocytogenes em queijo de cabra durante armazenamento a 8-10°C. Trabalhando-se com leite de cabra cru, foi possível isolar seis cepas produtoras de bacteriocinas (DF2Mi, DF3Mi, DF4Mi, DF5Mi, DF6Mi e DF60Mi). Através de testes fenotípicos apropriados e sequenciamento do 16S rRNA, essas cepas foram identificadas como Lactococcus lactis subsp. lactis (DF2Mi, DF3Mi, DF4Mi e DF5Mi), Leuconostoc lactis (DF6Mi) e Lactobacillus paracasei subsp. paracasei (DF60Mi). A caracterização físico-química e biológica das bacteriocinas produzidas pelas cepas DF4Mi, DF6Mi e DF60Mi indicou que eram resistentes ao calor e extremos de pH, mas apresentavam características diferentes em relação ao espectro de ação, sensibilidade a agentes químicos, adsorção à células-alvo e lise das células de L. monocytogenes. O efeito do pH, temperatura e composição do meio de cultura na produção das bacteriocinas foi também cepa-dependente. A cepa DF4Mi apresentou melhor atividade antimicrobiana e foi selecionada para o estudo de inibição de L. monocytogenes em queijos. Para isso, foram preparados lotes de queijo frescal, feito com leite de cabra pasteurizado adicionado e não adicionado da cepa DF4Mi (106 UFC/mL), experimentalmente contaminado com L. monocytogenes (103 UFC/g), além dos controles positivo (queijo adicionado de nisina 12,5 mg/Kg) e negativo (leite adicionado de uma cepa de L. lactis subsp. lactis não bacteriocinogênica). Observou-se que a cepa DF4Mi apresentou efeito bacteriostático no queijo, sendo capaz de inibir a multiplicação do patógeno durante o armazenamento a 8-10°C por 10 dias. No entanto, inibição semelhante foi obtida nos queijos com a bactéria lática não bacteriocinogênica, indicando que a inibição não pode ser creditada às bacteriocinas. Nos queijos-controle com nisina, foi observada uma redução de 2 log na contagem de L. monocytogenes após 10 dias a 8-10°C. Já nos queijos preparados sem nisina e sem nenhuma bactéria lática, as contagens de L. monocytogenes atingiram contagens elevadas (106 UFC/g) após 10 dias de armazenamento a 8-10°C. / Listeria monocytogenes causes listeriosis, a serious zoonotic disease that causes infections in the central nervous system (meningitis, encephalitis and meningoencephalitis), bacteremia and septicemia. The disease presents low morbidity and high mortality and affects mainly those in the risk group, such as pregnant women, neonates, immunocompromised individuals and the elderly. L. monocytogenes has been frequently detected in in natura and processed foods. Like cheeses and other dairy products. This study aimed to isolate lactic acid bacteria capable of producing antimicrobial compounds from goat milk, identify the isolates, characterize the bacteriocins and evaluate their potential application in controlling the growth of L. monocytogenes in goat cheese during storage at 8-10°C. Six bacteriocinogenic strains (DF2Mi, DF3Mi, DF4Mi, DF5Mi, DF6Mi e DF60Mi) were successfully isolated from raw goat milk. Using appropriate phenotypic tests and 16S rRNA sequencing, these strains were identified as Lactococcus lactis subsp. lactis (DF2Mi, DF3Mi, DF4Mi e DF5Mi), Leuconostoc lactis (DF6Mi) and Lactobacillus paracasei subsp. paracasei (DF60Mi). The physico-chemical and biological characterization of the bacteriocins produced by the strains DF4Mi, DF6Mi e DF60Mi indicated that they were resistant to heat and pH extremes, but presented different spectrum of activity, sensitivity to chemicals, adsorption to target cells and lysis of L. monocytogenes. The effect of pH, temperature and culture media composition in bacteriocin production was also strain-dependent. The strain DF4Mi presented the best antimicrobial activity and was selected for the studies on inhibition of L. monocytogenes in cheese. Frescal cheese was manufactured with pasteurized goat milk added of a culture of DF4Mi (106 CFU/mL), and experimentally contaminated with L. monocytogenes (103 CFU/g). Control cheeses were also prepared: those added of 12.5 mg/Kg nisin (positive control) and those added of a non-bacteriocinogenic L. lactis subsp. lactis strain. The strain presented a bacteriostatic effect, controlling the growth of the pathogen for 10 days at 8-10°C. However, a similar effect was observed in the cheeses prepared with the non-bacteriocinogenic strain, indicating that the inhibition cannot be credited to bacteriocins. In the cheeses containing nisin, a 2 log reduction in the counts of L. monocytogenes was achieved after 10 days at 8-10°C. In the cheeses with no added nisin or lactic acid bacteria, the counts of L. monocytogenes after 10 days at 8-10°C were high (106 CFU/g).

Submitted by Michele Mologni (mologni@unoeste.br) on 2018-07-27T17:21:00Z No. of bitstreams: 1 Joice Yuri Minamiguchi.pdf: 1305334 bytes, checksum: ce408a4b1cb0c85010e11bc39b0761d9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-27T17:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Joice Yuri Minamiguchi.pdf: 1305334 bytes, checksum: ce408a4b1cb0c85010e11bc39b0761d9 (MD5) Previous issue date: 2017-12-19 / Orchid seeds do not have practically reserve of energy and are not able to absorb what exists, necessitating a symbiosis with mycorrhizal fungi for germination to occur. During the aclorophyll stage of embryo development, these are the dependent on the mycorrhizal association, because fungi provide simple sugars to the plant from digested pelotons. The objective of this work was to isolate mycorrhizal fungi of orchid in cultivated and wild plants, that could promote the germination and development of seedlings of different species. Roots of nine species of orchids were collected for the isolation by peloton, four of natural environment, three from in vitro culture that developed and grew in greenhouse orchid and two who were born spontaneously in the greenhouse orchid. This methodology promoted the isolation of nine anamorphic rhizoctonioid from two species from a natural environment, Prescotia sp and Oeceoclades maculata and of a spontaneous species in greenhouse orchid, Arundina bambusifolia. In pots of three species of orchids, Vanda sp., Cattleya tigrina and Cattleya walkeriana, were placed baiting containing seeds of the same. This methodology obtainedthe isolation of eight anamorphic rhizoctonioid fung from Cattleya tigrina and Cattleya walkeriana. Were made the quantitative and qualitative morphological characterizations of the 17 isolates obtained by the two methodologies, and these characteristics were used for the formation of groups by the grouping method UPGMA. This method together with the morphological characteristics made it possible to classify four genera of mycorrhiza, Epulorhiza, Ceratorhiza, Moniliopsis and Rhizoctonia-like. The isolates were separated into 7 different groups, and one isolate from each group was used for the symbiotic germination of six species of orchids, Cattleya brevicaulis, Cattleya tigrina, Cattleya walkeriana, Cattleya labiata, Dendrobium signatum and Encyclia cordigera. Posteriorly confirmation of the mycorrhizal association was made, of protocorm resulting from symbiotic germination. Ninety days after seeding, seedlings of the six species that germinated were transferred to flasks, and 180 days after seeding were evaluated growth and dry mass variables. The methodology of isolation by peloton promoted the isolation of mycorrhiza from plants of natural environment and from a spontaneous in greenhouse orchid, the baiting methodology was able to promote the isolation of mycorrhiza from plants that were born and developed in a controlled environment. Of the seven inoculum, six were efficient to promote the germination of the six species tested, but only five inoculum presented growth of seedlings. One inoculum is no specific, presenting better results, improving seedling growth in five of the evaluated species. / Sementes de orquídea praticamente não possuem reserva de energia e não são capazes de absorver as que possuem, necessitando de uma simbiose com fungos micorrízicos para que ocorra a germinação. Durante a fase aclorofilada do desenvolvimento do embrião, estes são dependentes da associação micorrízica, pois os fungos fornecem açúcares simples oriundos de pelotons digeridos pela planta. O objetivo deste trabalho foi isolar fungos micorrízicos de orquídeas cultivadas e silvestres, que pudessem promover a germinação e o desenvolvimento de plântulas de diferentes espécies. Raízes de nove espécies de orquídeas foram coletadas para o isolamento por peloton, quatro de ambiente natural, três oriundas de cultivo in vitro aclimatizadas e crescidas em um orquidário e de duas que nasceram espontaneamente no orquidário. Esta metodologia obteve o isolamento de nove fungos rizoctonióides anamorfos de duas espécies oriundas de ambiente natural, Prescotia sp e Oeceoclades maculata e de uma espécie espontânea no orquidário, Arundina bambusifolia. Nos vasos de três espécies Vanda sp., Cattleya tigrina e Cattleya walkeriana, foram colocados pacotes de isca contendo sementes das mesmas. Esta metodologia obteve o isolamento de oito fungos rizoctonióides anamorfos de Cattleya tigrina e Cattleya walkeriana. Foram feitas as caracterizações morfológicas quantitativas e qualitativas dos 17 isolados obtidos pelas duas metodologias, e essas características foram usadas para a formação de grupos pelo método de agrupamento UPGMA. Esse método juntamente com as características morfológicas possibilitou a classificação de quatro gêneros de micorrizas, Epulorhiza, Ceratorhiza, Moniliopsis e Rhizoctonia-like. Os isolados foram separados em sete grupos diferentes, e um isolado de cada grupo foi utilizado para a germinação simbiótica de seis espécies de orquídeas, Cattleya brevicaulis, Cattleya tigrina, Cattleya walkeriana, Cattleya labiata, Dendrobium signatum e Encyclia cordigera. Posteriormente foi feita a confirmação da associação micorrízica, dos protocórmios resultantes da germinação simbiótica. Noventa dias após a semeadura, plântulas das seis espécies que germinaram foram transferidas para frascos, e 180 dias após a semeadura foram avaliadas variáveis de crescimento e de massa seca. A metodologia de isolamento por peloton promoveu o isolamento de micorrizas de plantas de ambiente natural e de uma espontânea em orquidário. A metodologia por isca foi capaz de promover o isolamento de micorrizas de plantas que nasceram e se desenvolveram em ambiente controlado. Dos sete inóculos, seis foram eficientes para promover a germinação de sementes das seis espécies testadas, mas somente cinco inóculos exibiram crescimento de plântulas. Um inóculo demonstrou ser não específico, apresentando melhor resultado melhorando o crescimento de plântulas em cinco das espécies avaliadas.

[pt] O controle passivo de vibrações em edifícios usando absorsores pendulares tem sido bastante estudado na literatura técnica e usado na pratica em edifícios altos como o Taipei-101 em Taiwan. Como a frequência do pêndulo depende apenas do seu comprimento e da aceleração da gravidade, para sintonizar a frequência do pêndulo com a do edifício, tem-se como única variável de projeto o comprimento do pêndulo. Entretanto, em muitos casos, o comprimento necessário e o espaço requerido não se coadunam com o projeto. Nestes casos pode-se substituir o pêndulo clássico por um sistema pendular equivalente composto por uma massa que se movimenta sobre uma superfície curva, permitindo maior flexibilidade no projeto do absorsor, já que o comprimento do pêndulo torna-se irrelevante e a forma da superfície curva pode ser otimizada. Em virtude do movimento da massa sobre a superfície curva, novas forças de inércia e amortecimento não encontradas no pêndulo clássico podem aparecer. No presente trabalho um sistema pendular composto de uma massa que se desloca através de suportes rolantes sobre uma superfície curva é proposto para controle das oscilações de estruturas sob excitação de base. Este sistema pendular tem a vantagem de poder ser usado tanto como um amortecedor pendular de massa sintonizada (APMS) quanto como isolador de base pendular (IBP). Como o sistema pendular pode, em certos casos, apresentar grandes rotações, barreiras que limitam o movimento são propostas, gerando forças de impacto cuja eficiência no controle de vibrações é aqui investigada. / [en] The passive vibration control of buildings using pendulum absorber has been extensively studied in the technical literature and used in high buildings such as the Taipei-101 in Taiwan. Since the frequency of the pendulum depends only on its length and the acceleration of gravity, to tune the frequency of the pendulum to that of the building, its length is the sole design variable. However, in many cases, the pendulum length and the space required for its installation are not consistent with the design. In these cases one can replace the classic pendulum with an equivalent pendulum system comprising a mass that moves on a curved surface, allowing greater flexibility in the absorber design as the length of pendulum becomes irrelevant and the shape of the curved surface can be optimized. Because of the mass movement on the curved surface, new inertia and stiffness forces not found in the classic pendulum may appear. In the present work a pendulum system comprising a mass that moves through rolling bearings on a curved surface is proposed for control of the oscillations of structures under base excitation. This pendulum system has the advantage of being used both as a pendulum tuned mass damper (APMS) and as a base isolation pendulum system (IBP). As the pendulum system can, in certain cases, display large rotations, barriers which limit its movement are proposed, generating impact forces whose efficiency in vibration control is here investigated.

Orientador: Ivonete Ávila / Resumo: A biomassa apresenta-se como uma promissora alternativa aos combustíveis fósseis por ser renovável, de baixo custo e amplamente disponível. Esta pode ser obtida a partir de resíduos agroindustriais mostrando-se como um importante modelo de energia sustentável. Os principais componentes da biomassa são hemicelulose, celulose e lignina e, por possuírem diferentes propriedades químicas, influenciam diretamente na eficiência de um processo de conversão termoquímica. Metodologias convencionais atualmente aceitas na determinação dos principais componentes da biomassa requerem maior tempo e possuem alto custo. A análise termogravimétrica (TG) é uma técnica rápida e de baixo custo, resultando em curvas TG/DTG que fornecem uma indicação do percentual de cada um dos componentes da biomassa. Entretanto, não há uma metodologia aceita no sentido de substituir o método convencional por via úmida na determinação dos constituintes de materiais lignocelulósicos. Portanto, o objetivo deste estudo é avaliar o efeito da interação entre os componentes do bagaço e da palha de cana-de-açúcar (hemicelulose, celulose e lignina), isolados por diferentes tratamentos químicos, por meio da análise de sinergismo em ensaios termogravimétricos. Este estudo contribuirá para a elaboração de uma metodologia para determinação dos teores desses componentes por meio da análise termogravimétrica, com precisão similar aos métodos convencionais. Os resultados da caracterização química e a caracterização físico-quími... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biomass presents itself as a promising alternative energy source to replace or reduce the use of fossil fuels because it is renewable, low cost and widely available. This can be obtained from agro-industrial waste, showing itself as an important model of sustainable energy. The main components of biomass are hemicellulose, cellulose and lignin and, due to their different chemical properties, they directly influence the efficiency of a thermochemical conversion process. Currently, the accepted methodologies for determining the main components of biomass require time and are expensive. Thermogravimetric analysis (TGA) is a fast and low-cost technique, resulting in TGA/DTG curves that provide an indication of the percentage of each biomass components. However, there is no accepted methodology in the sense to replace the conventional wet method use to determining the lignocellulosic materials components. Therefore, the objective of this study is to evaluate the effect of the interaction between the components of sugarcane bagasse and straw (hemicellulose, cellulose and lignin), isolated by different chemical treatments, through the analysis of synergism in thermogravimetric tests. This study will contribute to the development of a methodology for determining the content of these components through thermogravimetric analysis, with precision similar to conventional methods. The results of chemical characterization and physico-chemical characterization by FTIR and DRX technique of t... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre