Em bovinos, a mortalidade embrionária associada a falhas no processo de reconhecimento materno da prenhez atinge 30 a 40%. O sucesso da prenhez, depende de uma apropriada interação bioquímica entre o endométrio materno e o concepto. O objetivo dessa tese foi desenvolver uma técnica cirúrgica para monitorar o microambiente uterino de vacas cíclicas e prenhez nos dias 14 a 20 após o estro. Como objetivos específicos foram verificados se a implantação e a presença dos cateteres uterinos afetariam (1) a manutenção da prenhez, (2) a função luteal e (3) o desenvolvimento folicular. Em vacas holandesas, cíclicas e não lactantes, foram implantadas cateteres de silicone em cada corno uterino no segundo dia após o estro (fase preparatória). No dia 15 pós-estro os animais receberam uma injeção de D-clorprostenol e a ovulação foi confirmada por ultrasonografia transretal (US; dia experimental 1). No dia experimental 7, as vacas (n=6) receberam ou não (n=3) transferência de embriões via transcervical no corno uterino ipisilateral ao ovário contendo o corpo lúteo (CL). Nos dias experimentais 14, 16, 18 e 20, estruturas ovarianas foram avaliadas por US, e cada corno uterino foi lavado através dos cateteres implantados no lúmen uterino (três sessões de 6 ml cada). Amostras de sangue foram coletadas nos dias 1 a 20 da fase experimental e concentração de progesterona (P4) foi mensurada por radioimunoensaio. As vacas foram abatidas no dia experimental 20 e a prenhez diagnosticada por visualização macroscópica do concepto após a dissecação do útero. A taxa de presença do concepto no dia 20 experimental foi 0%. No dia experimental 7, um CL e um folículo grande (9 a 17 mm) estavam presentes nos ovários das vacas. A taxa de aumento da concentração de P4 entre os dias 1 a 5 foi de 0 ng/mL/dia em 7/9 vacas. Luteólise ocorreu antes do dia 15 em 3/9 vacas, entre os dias 16 e 20 foi 3/9, e após o dia 20 em 2/9 vacas. Não houve aumento de P4 na fase luteal em uma vaca. Foi verificado ovulação antes do dia 20 em 3/9 vacas. A taxa de aumento do último folículo dominante foi de 1,3mm/dia em 2/9 vacas e menor nos animais restantes. Cistos foliculares, CL sub-luteinizado e endometrite foram diagnosticados em 2/9, 2/9 e 1/9 vacas, respectivamente. Foi possível concluir que as alterações nas funções ovarianas e uterinas foram causadas pela presença e implantação dos cateteres e essas alterações foram incompatíveis com a manutenção da prenhez. A abordagem cirúrgica testada não foi adequada para estudar o microambiente uterino de vacas prenhez / In cattle, embryonic mortality associated with failure in the process of maternal recognition of pregnancy reaches 30 to 40%. Successful pregnancies depend on appropriate biochemical interactions between the maternal endometrium and conceptus. Overall objective was to develop a surgical technique to probe the uterine microenvironment of cyclic and pregnant cows days 14 to 20 post- estrus. Specific objectives were to verify whether presence and operation of uterine catheters would affect (1) maintenance of pregnancy, (2) luteal function and (3) follicular growth. Non-lactating, cyclic, Holstein cows were fitted with a silicone catheter in each uterine horn on day 2 after estrus. On day 15 they received an injection of D-cloprostenol and ovulations were confirmed by transrectal ultrasonography (US; experimental day 1). On experimental day 7, cows received (n=6) or not (n=3) embryos by trans-cervical transfer to the uterine horn ipsilateral to ovary containing the corpus luteum (CL). On experimental days 14, 16, 18 and 20, ovarian strutures were observed by US and each uterine horn was washed through the catheter (three sessions of 6 ml each). Blood samples were collected from experimental days 1 to 20 and progesterone (P4) concentrations were measured by radioimmnoassay. Cows were slaughtered on experimental day 20 and pregnancies were diagnosed by macroscopic visualization of a conceptus after dissection of uterus. Conception rate at day 20 was 0%. On experimental day 7, both a CL and a large follicle (9 to 17mm) were present in ovaries of all cows. Rate of increase of P4 concentrations from days 1 to 5 was 0ng/ml/day in 7/9 cows. Luteolysis occurred before day 15 in 3/9 cows, between days 16 and 20 in 3/9 cows and after day 20 on 2/9 cows. No luteal phase rise in P4 was noticed for one cow. Ovulation before day 20 was verified in 3/9 cows. Rate of growth of the last dominant follicle was 1.3mm/day in 2/9 cows and less in the remaining. Follicular cysts, poorly luteinized CL and endometries were diagnosed in 2/9, 2/9 and 1/9 cows respectively. In summary, alterations in ovarian and uterine functions were caused by presence and operation of uterine catheters and such alterations were incompatible with maintenance of pregnancy. In conclusion, the surgical approach tested was not adequate for studyng the uterine microenvironment of pregnant cows

O objetivo do presente estudo foi caracterizar implantes de Progesterona e suas reutilizações e avaliar sua eficiência. Três experimentos foram conduzidos: para avaliação das quantidades de P4 liberadas (Experimento in vitro), teores plasmáticos proporcionados (Experimento in vivo - vacas ovariectomizadas) e taxas de concepção na IATF (Experimento a campo vacas paridas). No experimento in vitro, as três reutilizações do implante foram testadas em dissolutor de comprimidos com seis cubas, tendo uma solução álcool/água (60:40) como meio de difusão. Dois ensaios foram realizados, totalizando 12 implantes, sendo que no terceiro uso do dispositivo foi adicionado um anel de P4 (0,1g) e no quarto uso foram adicionados 2 anéis (0,1g cada). Os implantes novos foram testados em quadruplicata em um terceiro ensaio, com a mesma metodologia. Amostras foram coletadas nos tempos 2 min, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72 e 96h. As quantidades de P4 foram dosadas por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC). Para quantidade acumulada de P4, segundo dispositivo, em função do tempo, houve interação tempo*tratamento (P=0,0002). A quantidade de P4 diferiu (P=0,0152) conforme os subseqüentes usos dos implantes Cronipres® e também em relação ao tempo (P<0.0001). As equações que descrevem as quantidades liberadas são: dispositivos novos y = 240,69 + 84,127A x (R2=0,9721); 2°uso y = 75,918 + 42,595B x (R2=0,8858); 3°uso - y=62,94 + 31,29C x (R2=0,8629) e 4° uso y = 40,595 + 32,148C x (R2=0,7205). No experimento in vivo, cada uso foi testado em triplicata, totalizando 12 animais. Os implantes foram inseridos e amostras de sangue foram colhidas nos tempos 0 (momento da colocação do implante), 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 e 192h. As dosagens de P4 foram realizadas por Rádio-Imuno-Ensaio RIE, com kit comercial da DPC (Diagnostics Products Corporation, EUA). A AUC diferiu entre o primeiro e segundo (p<0,0001), segundo e terceiro (p=0,0010), mas não entre o terceiro e o quarto usos (p=0,8764). Para análise estatística destes experimentos, foram utilizados os PROC IML, GLM (comando REPEATED) e REG (teste in vitro, o qual gerou uma equação de regressão) ou avaliação da area under the curve AUC no teste in vivo, pelo teste t. No teste a campo, quatro lotes de vacas de corte paridas (n=763) Nelore e Simental x Nelore, com idade variando entre 3 e 10 anos e condição corporal entre 4 e 7 (escala de 1-9) foram utilizados. No D0 do tratamento todos os animais receberam 2 mg i.m. de Benzoato de Estradiol (Cronibest® - Biogénesis-Bagó, Argentina) e um implante Cronipres® (implante novo, contendo 1 g de P4 n=194; implante de segundo uso, n=190; implante de terceiro uso acrescido de um anel complementar de P4 (0,1g de P4), n=191; implante de quarto uso com um anel de P4 usado e dois anéis de P4 novos, n=188). No D8 procedeu-se a retirada do implante e aplicação i.m. de 300 UI de eCG (Novormon®, ScheringPlough, EUA) e 150 µg i.m. de D-cloprostenol (Croniben®, Biogénesis-Bagó, Argentina). No D9, todos os animais receberam 1mg i.m. de Benzoato de estradiol (Cronibest®) e, após 30h, foi realizada a IATF. Em todos os lotes, os tratamentos foram igualmente distribuídos. Os dados foram submetidos à regressão com análise de variância (PROC GLIMMIX do SAS Statistical Analysis Sistem®), separando-se como causas de variação: tratamento (implante novo, 2° uso, 3° uso e 4° uso), escore de condição corporal (ECC<5, ECC5 e ECC>5), ciclicidade (ciclando e nãociclando), lote (1 a 4), período pós parto (<3 meses, 3 a 5 meses e >5meses) e grau de sangue (Nelore e Simental X Nelore) e suas interações, eliminando-se as variáveis do modelo quando estas apresentavam p >0.2. No modelo final permaneceram as variáveis: tratamento (p=0,18), grau de sangue (p=0,11) e lote (p=0,14). Não houve diferença estatística nas TC segundo tratamento (implante novo 55,1%, 2° uso 47,9%, 3° uso 48,7%, 4° uso 44,15%) (p=0.18). A taxa de concepção geral foi de 49,1%. / The aim of this study was to characterize progesterone devices and their reuse and to evaluate its efficiency. Three experiments were conducted: to assess the quantities of released P4 (in vitro trial), plasma levels provided (in vivo trial -ovariectomized cows) and conception rates at FTAI (field trial suckled beef cows). In vitro trial, the three reuses of devices were tested in a tablet dissolutor with six tanks, with a solution of alcohol / water (60:40) as way of dissemination. Two trials were conducted, totaling 12 implants. The third use of the device was added with a P4 ring (0.1 g) and in the fourth use two rings were added (0.1 g each). The new implants were tested in quadruplicate in a third trial, using the same methodology. Samples were collected at 2 min, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72 and 96h. The amounts of P4 were measured by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). For the cumulative amount of P4, there was a time * treatment interaction (P = 0.0002). The amount of P4 differed (P = 0.0152) as the subsequent use of implants Cronipres ® and also over time (P <0.0001). The equations that describe the amounts released are: new devices - y = 240.69 +84.127A x (R2 = 0.9721), second use - y = 75.918 +42.595B x (R2 = 0.8858), third use - y = 62.94 + 31.29C x (R2 = 0.8629) and fourth use - y = 40.595 + 32.148C x (R2 = 0.7205). In the in vivo trial, each use was tested in triplicate, totaling 12 animals. The implants were inserted and blood samples were collected at time 0 (time of implant insertion), 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168 and 192h. The dosages of P4 were performed by Radio-Immuno-Assay RIA, using a commercial kit from DPC (Diagnostics Products Corporation, USA). The area under the curve differed between the first and second (p <0.0001), second and third (p = 0.0010) but not between the third and fourth use (p = 0.8764). For the statistical analysis of these experiments, the PROC IML, GLM (command REPEATED) and REG (for in vitro test, which generated a regression equation) or the t test (for the area under the curve assessment in vivo test), were used (Statistical Analysis System - SAS). In the field test, four groups of suckled Nellore and Simmental x Nellore beef cows (n = 763), aged between 3 and 10 years and body condition score between 4 and 7 (range 1-9) were used. On D0 of treatment all animals received 2 mg im of estradiol benzoate (Cronibest ® - Biogénesis-Bagó, Argentina) and an implant Cronipres ® (new implant containing 1 g of P4, n = 194; second use implant, n = 190; third use implant added with of an additional ring of P4 (0.1 g of P4), n = 191; fourth use implant added with a used ring of P4 and two new rings of P4, n = 188). On D8 the implant was removed and an i.m. application of 300 IU of eCG (Novormon ®, Schering-Plough, USA) and 150 mg i.m D-cloprostenol (Croniben ®, Biogénesis-Bagó, Argentina) was performed. On D9, all animals received 1 mg i.m. of estradiol benzoate (Cronibest ®) and after 30h, FTAI was performed. In all groups, the treatments were equally distributed. Data were subjected to regression with analysis of variance (PROC GLIMMIX in SAS ® Statistical Analysis System), separating as causes of variation: treatment (new use, second, third and fourth use), body condition score (BCS <5, ECC5 and BCS> 5), cyclicity (non-cycling and cycling), groups (1-4), postpartum period (<3 months, 3-5 months and> 5mounths) and breed (Nellore and Simmental x Nellore) and their interactions, eliminating the variables of the model when they showed p> 0.2. In the final model was consisted of treatment (p = 0.18), breed (p = 0.11) and group (p = 0.14). There was no statistical difference in conception rates between treatments (new device - 55.1%, second use - 47.9%, third use - 48.7% and fourth use - 44.15%) (p = 0.18). The overall conception rate was 49.1%.

Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Rodolpho Satrapa / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: O desempenho reprodutivo bovino pode sofrer interferência de diversos fatores, dentre os quais os relacionados à fisiologia, à patologia, à genética, à nutrição e ao manejo zootécnico-sanitário dos rebanhos, os quais, direta ou indiretamente podem comprometer o embrião, o feto e o trato reprodutivo das fêmeas. O propósito desse estudo foi estabelecer em receptoras de embriões (n=235), se e em qual proporção a resposta aos protocolos de sincronização hormonal, as taxas de prenhez e de perda embrionária foram, negativamente, afetadas devido à constatação de soropositividade para enfermidades reprodutivas, das concentrações plasmáticas de cortisol e de P4, das temperaturas ambiente, retal e umidade relativa do ar. Avaliou-se, ainda, o volume do CL e sua relação com a produção de P4. As taxas de soropositividade para brucelose, leptospirose, diarreia viral bovina (BVD), rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) e neosporose foram 2,89% (n=7), 54,47% (n=128), 43,83% (n=98), 74,04% (n=174) e 63,82% (n=150), respectivamente. Com respeito às enfermidades, as diferenças entre as taxas de receptoras reagentes e não reagentes mostraram-se estatisticamente significantes (p<0,05) para as associações da leptospirose e da neosporose, com a taxa de aproveitamento e da brucelose e IBR com a taxa de perda embrionária. Nas avaliações sobre cortisol e P4, observou-se que as diferenças entre suas respectivas concentrações plasmáticas não diferiram estatisticamente (p>0,05) entre as receptoras que resultaram prenhas (17,24±7,59; 13,58±6,41) e as não prenhas (17,78±5,54; 14,15±7,16), mas apresentaram correlação positiva (p<0,05) Desse modo, essas concentrações plasmáticas de cortisol observadas, presumivelmente, não interferiram com a capacidade de resposta das receptoras aos protocolos, mas, nos grupos de animais "Resp.P." e "N.Resp.P." suas concentrações diferiram estatisticamente (p<0,05). Em relação ao VCL e à ... / Abstract: Beef catle reproductive performance is under the interference of several factors among which those related to physiology , pathology , genetics , nutrition and management of health - livestock herds , which directly or indirectly may affect the embryo , fetus and reproductive tract of females . The purpose of this study was to establish in recipient embryos (n=235), if and in some extent, the response to synchronization protocols hormone, pregnancy and embryonic loss rates were negatively affected due to the finding of reproductive diseases serumpositivity, of cortisol and P4 serum levels and of ambient and rectal temperatures and air relative humidity; it was also evaluated the CL volume and its relation to P4 production. Brucellosis, leptospirosis, bovine viral diarrhea (BVD), infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and neosporosis seropositivity rates were 2.89% (n=7), 54.47% (n=128), 43.83% (n=98), 74.04% (n=174) and 63.82% (n=150), respectively. Correlations of leptospirosis and neosporosis with responsive cows to protocols and of brucelosis and IBR with embryonic loss rate were all statistically significant (p<0.05). Pregnant and non- pregnant recipient cows cortisol and P4 respective serum levels (17.24±7.59, 13.58±6.41; 17.78±5.54, 14.15±7.16) did not differ statistically (p>0,05), but were positively correlated (p<0,05), thus this cortisol serum level, presumably, did not interfere with recipient cows responsiveness to the protocols, but in groups "Resp.P." and "N.Resp.P." their concentrations differed significantly (p<0,05). Regarding the VCL and the concentration of P4 , no difference was found statistically significant (p>0,05) between the mean values. For all cases studied, only correlation was observed between the amount of CL and P4 production (p < 0,05) in group "small". In relation to environmental temperatures, rectal and relative humidity values in averages were 30.07°C , 39.38°C and 69.23, respectively. Was ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-08Bitstream added on 2014-08-13T18:00:46Z : No. of bitstreams: 1 000754017_20141006.pdf: 124813 bytes, checksum: 8aa4ba135a60ece4a526b02ffd3a8244 (MD5) / O desempenho reprodutivo bovino pode sofrer interferência de diversos fatores, dentre os quais os relacionados à fisiologia, à patologia, à genética, à nutrição e ao manejo zootécnico-sanitário dos rebanhos, os quais, direta ou indiretamente podem comprometer o embrião, o feto e o trato reprodutivo das fêmeas. O propósito desse estudo foi estabelecer em receptoras de embriões (n=235), se e em qual proporção a resposta aos protocolos de sincronização hormonal, as taxas de prenhez e de perda embrionária foram, negativamente, afetadas devido à constatação de soropositividade para enfermidades reprodutivas, das concentrações plasmáticas de cortisol e de P4, das temperaturas ambiente, retal e umidade relativa do ar. Avaliou-se, ainda, o volume do CL e sua relação com a produção de P4. As taxas de soropositividade para brucelose, leptospirose, diarreia viral bovina (BVD), rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR) e neosporose foram 2,89% (n=7), 54,47% (n=128), 43,83% (n=98), 74,04% (n=174) e 63,82% (n=150), respectivamente. Com respeito às enfermidades, as diferenças entre as taxas de receptoras reagentes e não reagentes mostraram-se estatisticamente significantes (p<0,05) para as associações da leptospirose e da neosporose, com a taxa de aproveitamento e da brucelose e IBR com a taxa de perda embrionária. Nas avaliações sobre cortisol e P4, observou-se que as diferenças entre suas respectivas concentrações plasmáticas não diferiram estatisticamente (p>0,05) entre as receptoras que resultaram prenhas (17,24±7,59; 13,58±6,41) e as não prenhas (17,78±5,54; 14,15±7,16), mas apresentaram correlação positiva (p<0,05) Desse modo, essas concentrações plasmáticas de cortisol observadas, presumivelmente, não interferiram com a capacidade de resposta das receptoras aos protocolos, mas, nos grupos de animais Resp.P. e N.Resp.P. suas concentrações diferiram estatisticamente (p<0,05). Em relação ao VCL e à ... / Beef catle reproductive performance is under the interference of several factors among which those related to physiology , pathology , genetics , nutrition and management of health - livestock herds , which directly or indirectly may affect the embryo , fetus and reproductive tract of females . The purpose of this study was to establish in recipient embryos (n=235), if and in some extent, the response to synchronization protocols hormone, pregnancy and embryonic loss rates were negatively affected due to the finding of reproductive diseases serumpositivity, of cortisol and P4 serum levels and of ambient and rectal temperatures and air relative humidity; it was also evaluated the CL volume and its relation to P4 production. Brucellosis, leptospirosis, bovine viral diarrhea (BVD), infectious bovine rhinotracheitis (IBR) and neosporosis seropositivity rates were 2.89% (n=7), 54.47% (n=128), 43.83% (n=98), 74.04% (n=174) and 63.82% (n=150), respectively. Correlations of leptospirosis and neosporosis with responsive cows to protocols and of brucelosis and IBR with embryonic loss rate were all statistically significant (p<0.05). Pregnant and non- pregnant recipient cows cortisol and P4 respective serum levels (17.24±7.59, 13.58±6.41; 17.78±5.54, 14.15±7.16) did not differ statistically (p>0,05), but were positively correlated (p<0,05), thus this cortisol serum level, presumably, did not interfere with recipient cows responsiveness to the protocols, but in groups Resp.P. and N.Resp.P. their concentrations differed significantly (p<0,05). Regarding the VCL and the concentration of P4 , no difference was found statistically significant (p>0,05) between the mean values. For all cases studied, only correlation was observed between the amount of CL and P4 production (p < 0,05) in group small. In relation to environmental temperatures, rectal and relative humidity values in averages were 30.07°C , 39.38°C and 69.23, respectively. Was ...

Resumo não disponível.

Em pacientes portadores de fibromialgia, a administração de doses farmacológicas de DHEA ocasionou redução da sensação de dor muscular e fadiga, o que permitiu inferir seu envolvimento na modulação da percepção dolorosa. É sabido que a DHEA pode ser convertida, tanto perifericamente como no SNC, em sua forma sulfatada (DHEAS) por ação de enzimas sulfotransferases, tendo esta papel na modulação da nocicepção. Outro hormônio esteróide com ação sobre a nocicepção é a progesterona, cuja administração resultou em efeitos anestésicos e sedativos. A maioria destes resultados foram obtidos em mamíferos e humanos. Todavia, um estudo recente demonstrou que o tecido encefálico de rã foi capaz de sintetizar esteróides a partir de colesterol, sendo este processo de biossíntese similar àquele descrito em mamíferos. Deste modo, o presente estudo utilizou a rã Rana catesbeiana, adulta, macho, para determinar os efeitos da administração aguda (1,0, 2,0 e 10,0 mg/kg) e crônica (2,0 mg/kg) de DHEA, DHEAS e progesterona sobre o limiar nociceptivo das mesmas. Este limiar foi determinado pela utilização do teste químico do ácido acético, o qual foi realizado 2 horas antes da administração das soluções e após 2, 6 e 24 horas nos estudos de tratamento agudo e 48 horas após o término da última injeção nos estudos crônicos, sendo que nestes as rãs receberam 6 injeções subcutâneas, havendo entre cada administração um intervalo de 72 horas. Foram utilizados 3 grupos: controle, veículos e tratados. No tratamento agudo, as doses de 1,0 e 2,0 mg/kg de DHEA, DHEAS e progesterona não ocasionaram modificações estatisticamente significativas no limiar nociceptivo das rãs. Já a dose de 10,0 mg/kg de DHEA e DHEAS induziu um acréscimo significativo no limiar nociceptivo destes animais. Esta alteração não foi observada nas rãs tratadas com progesterona nesta dose. Entretanto, a administração crônica de DHEA, DHEAS e progesterona, provocou aumento estatisticamente significativo no limiar nociceptivo das rãs. A interrupção da administração de DHEA por 05 dias resultou no retorno do limiar nociceptivo a valores semelhantes àqueles obtidos antes das injeções subcutâneas de DHEA. A repetição deste tratamento por mais 07 dias ocasionou um novo aumento no limiar nociceptivo das rãs. Estes resultados sugerem que o efeito antinociceptivo destes esteróides apareceram precocemente na evolução dos vertebrados, estando ainda presente em humanos. Assim, as rãs, constituem modelos experimentais que poderão contribuir para o esclarecimento dos mecanismos celulares de ação da DHEA, da DHEAS e da progesterona sobre a nocicepção, tema ainda muito especulativo na neurociência.

Introdução: Estudos epidemiológicos demonstram que cerca de 99,0% dos carcinomas cervicais estão associados à infecção persistente por alguns tipos de Papilomavírus Humano (HPV). O longo período de latência a partir da infecção primária e o aparecimento de lesões sugerem que fatores adicionais, como início precoce das relações sexuais, número de parceiros, tabagismo, uso de hormônios, presença de co-infecções, estejam envolvidos no processo de carcinogênese. A co-infecção por Chlamydia trachomatis (CT) tem sido sugerida, como um fator contribuinte na patologia cervical. A detecção precoce das lesões e o grau histológico são fundamentais, mas às vezes, difícil. O emprego de marcadores prognósticos, através da técnica de imuno-histoquímica possibilita esclarecer e complementar resultados controversos de citologia e de biópsias. Objetivos: Verificar a presença de infecção pelo Papilomavírus humano, tipos de alto risco, a presença de co-infecção por CT, associação com as características epidemiológicas, bem como, identificar a expressão imuno-histoquímica de p16INK4a, Ki67, receptores de estrogênio e progesterona em lesões pré-neoplásicas e neoplásicas de cérvice uterina. Métodos: Um estudo transversal envolvendo mulheres assintomáticas foi desenvolvido entre fevereiro de 2003 e janeiro de 2006 em uma Unidade de Atenção Primária à Saúde em Porto Alegre – RS, Brasil para verificar a prevalência de infecção pelo HPV, tipos -16, -18, -31 e de CT. Um total de 89 participantes respondeu a um questionário epidemiológico padronizado sobre as características demográficas, hábitos pregressos, história reprodutiva e de comportamento sexual. A pesquisa de DNA-HPV, tipos de alto risco, bem como a presença de DNA-CT foi identificada através da técnica da Reação da Polimerase em Cadeia (PCR). Após examecolposcópico, foi coletada biópsia para avaliação imuno-histoquímica empregando os marcadores p16INK4a, Ki67, receptores hormonais de estrogênio e progesterona. RESULTADOS: A presença de DNA-HPV foi identificada em 83,0% (74/89) das biópsias, sendo que 46,0% (34/74) eram portadoras de HPV de alto risco. O DNA-CT foi presente em 16/86 pacientes testadas (19,0%). Quanto ao exame anatomopatológico (AP), 7,0% eram lesões de alto grau, 59,0% de baixo grau e em 34,0% não foram observadas alterações. A expressão de p16INK4a foi observada em 85,3% (29/34) das mulheres positivas para DNA-HPV-AR e esta associação foi estatisticamente significativa (p=0,02), sendo que, todas as biópsias, positivas para HPV-16 (16/34), expressaram a proteína (p=0,01). Houve uma associação estatisticamente significativa entre a intensidade de expressão, o padrão de expressão de p16INK4a e o grau da lesão (p= 0,001). A associação entre a expressão de p16INK4a e DNA-HPV se mostrou estatisticamente significativa entre fumantes (p=0,03; OR: 11,25 IC95%:1,11-114,4), entre mulheres com história prévia de DST (p=0,01; OR: 6,82 IC95% 1,53-30,3), com sexarca entre17-19 anos (p=0,048; OR: 8,500 IC95% 0,971-74,424) e em mulheres com três ou mais parceiros sexuais ao longo da vida (p=0,02; OR: 8,12 IC95%: 1,31-50,2). Todas as mulheres positivas para DNA-CT foram positivas para DNA-HPV. Entre as portadoras de co-infecção, 56,0% expressaram a p16INK4a (OR=0,51, IC95%: 0,17-1,57. Para Ki67, todas as lesões de alto grau, 50,0% das lesões de baixo grau e 31,0% das biópsias negativas expressaram o mesmo (p=0,004). Para as pacientes portadoras de DNA-HPV, o Ki67 foi expresso em 100,0%, 31,0% e 32,0% das lesões de alto grau, baixo grau e fragmentos normais, respectivamente, apresentando uma associação estatisticamente significativa (p<0,003). Não foi observada associação entre a expressão do receptor de estrogênio e os desfechos estudados. Já, o receptor de progesterona foi expresso em 42,0% (37/89) dos casos estudados e, 26,5% (9/37) eram positivas para os tiposvirais de alto risco (p=0,023). A expressão do receptor de progesterona foi maior em nãofumantes (p=0,02), entre as mulheres que utilizavam anticoncepcional oral (p=0,03) e que tinham um menor grau de escolaridade (p=0,04). Discussão e conclusões: A presença da infecção persistente pelo HPV em lesões cervicais nos diferentes graus histológicos é fato já demonstrado. A atividade transformadora do vírus, especialmente com a expressão de oncoproteínas virais, facilita a de replicação e a diferenciação do epitélio após a sua integração no genoma hospedeiro. Desta forma, a identificação dos tipos virais de alto risco é essencial para se estabelecer e avaliar o prognóstico das lesões e a expressão imuno-histoquímica de p16INK4a e Ki67 podem confirmar resultados citológicos suspeitos. A co-infecção por CT, descrita em diversos estudos epidemiológicos, tem sido relatada como um fator de risco para a infecção por HPV, bem como o desenvolvimento de lesões mais agressivas. Entretanto, em nosso estudo, não foi encontrada associação entre os desfechos e a infecção por CT, exceto para pacientes com menor grau de escolaridade, provavelmente, em virtude do pequeno tamanho da amostra. Observa-se, através desta análise, a contribuição da técnica de imuno-histoquímica e de marcadores de oncogenicidade, como a p16INK4a e do Ki67 no diagnóstico das lesões ativas. A associação das variáveis epidemiológicas com estes marcadores se mostrou efetiva, já que existem evidências de que alguns destes podem facilitar e contribuir para o desenvolvimento destas lesões. / Introdution: Epidemiological studies have shown that about 99.0% of cervical carcinomas are related to persistent infection caused by some human papillomavirus (HPV) types. The large latency period since primary infection and the appearance of lesion suggests that adicional factors such as age at first intercourse, number of sexual partners, smoking, oral contraceptive use and other factors are involved in the carcinogenesis process. Among this, the co-infection by Chlamydia trachomatis (CT) have been sugested by some authors as a contributor factor in the cervical patology. The precoce detection of lesions and the histological grade are important, but sometimes difficult. The use of prognostic markers through immunohistochemical technic clarify and complement controversial results in citology. Objetives: Verifing the presence of Human papillomavirus infection, high – risk subtypes, the presence of CT co-infection, and the association with the epidemiological factors as well as identifying the immunoistochemical expression of p16INK4a, Ki67, and estrogen and progesterone receptors in pre-neoplastic and neoplastic lesions of uterine cervix. . Materials and methods: A cross-sectinal study with assintomatic women was conducted between february 2003 and december 2006 in a primary care unit in Porto Alegre- RS, Brazil to verify the prevalence of Papillomavirus infection, sub-types -16,18,31 and CT infecttion. The participants answered a questionaire about sociodemographic characteristics, former habits, reproductive history and sexual behaviour.The high-risk DNA-HPV subtypes reserach (HPV - 16,-18,-31) and the presence of DNA-Chlamydia trachomatis (CT) was identified through Polimerase Chain Reation Technique (PCR). After colposcopi examination, was collected biopsy for immunohistochemical analysis of p16INK4a, Ki67, estrogen and progesterone receptors. RESULTS: The DNA-HPV was observed in 83% (74/89) biopsies and 46% (34/74) were highrisk types (16,18,31). DNA-CT was detected in 16/86 patients (19%). In relation to anatomopathological exam, 7% were high-squamous intraepithelial lesion (HSIL), 59% low squamous intraepithelial lesion (LSIL) and in 34% no was observed alterations. The expression of p16INK4a was observed in 85,3% (29/34) positive women to DNA-HPV HR and this association was statistically significant (p=0,02). All biopsies HPV-16 positive (16/34) expressed p16INK4a (p=0,01). There was a significant association between intensity, pattern of expression and grade of lesion (p=0,001). The association between p16INK4a expression and DNA-HPV was statistically significant in smokers (p=0,03; OR: 11,25 IC95%:1,11-114,4), in women with previous history of sexual transmitted disease (SDT) (p=0,01; OR: 6,82 IC95% 1,53-30,3), women withbthe first intercourse between 17-19 years (p=0,048; OR: 8,500 IC95% 0,971- 74,424) and in women with three or more lifetime sexual partners (p=0,02;OR 8,12 IC95%:1,31- 50,2). Women positive to DNA-CT were positive to DNA-HPV. Between women DNA-HPV positive, the antibody Ki67 was expressed in 100%, 31% and 32% of HSIL, LSIL and normal fragments respectively and this association was statisticaly significative (p<0,003). No association was observed between the estrogen receptor expression and the outcomes studied. The progesterone receptor was expressed in 42% of cases studied (37/89), and 26,5% (9/37) was positive for high-risk types (p=0,023). The progesterone receptor expression was greater in nosmokers (p=0,02), between women who use oral contraceptives (p=0,03) and that have lower school-grade (p=0,04). Discussion and conclusion: The presence of HPV persistent infection in cervical lesions in different histological grades is fact already demonstrated. The virus transforming activity is in accordance with its capacity of replication and the diferentiation through epiteliaafter its integration. The identification of high types of virus is essential to establish and evaluate the prognosis of lesions. The co-infection with CT described in several epidemiological studies has been related as a risk factor to acquire the HPV infection and to develop more agressive lesions. Howevwer in our study except in relation to lower school grade no association was observed between the outcomes and the co-infection by CT, probably due to the small sample. It observed trough this study, the contribution of the immunohistochemical analysis of concogenic markers suh as p16INK4a and Ki67 expression in the diagnostic and follow-up of active lesions. The associaton of epidemiological variables with these markers showed efficient, and evidence existe that some variables can contribute to lesions transformation.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-23T09:43:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 191840 bytes, checksum: 42829f2287c16813d005452b0de95e37 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-23T09:43:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 191840 bytes, checksum: 42829f2287c16813d005452b0de95e37 (MD5) Previous issue date: 1998-04-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa foi conduzida utilizando-se 21 novilhas, apresentando ciclo estral regular, de três grupos genéticos (Holandês, Gir e Mestiças Holandês-Gir); que foram mantidas nas mesmas condições de manejo e alimentação. Cada animal recebeu uma aplicação de luteolítico e, aqueles que não apresentaram estro, receberam uma segunda aplicação 11 dias após. A partir do estro, a atividade ovariana foi monitorada por exames ultra-sonográficos e foram coletadas amostras sangüíneas, a cada dois dias, para dosagem de progesterona, por radioimunoensaio (RIA), durante dois ciclos estrais consecutivos. As áreas dos ovários e o diâmetro do maior folículo presente nos ovários foram mensurados, e os folículos presentes nos ovários foram contados. As novilhas mestiças apresentaram maior área de ovário que as novilhas Gir e Holandesas, que não diferiram entre si. O número de folículos (≥4mm) foi maior nas novilhas Gir, e o diâmetro do maior folículo foi maior nas novilhas Holandesas. A concentração média de progesterona foi mais elevada nos animais mestiços que nos outros grupos genéticos. Em todas as avaliações das características reprodutivas as novilhas mestiças apresentaram valores superiores ou iguais aos da raça que se destacou no presente estudo. / Twenty one heifers with regular estrus cycle from the three genetics groups (Crossbred Holstein-Gir, Gir and Holstein) in the same management and nutrition conditions, received an application of luteolytic and those animals that did not showed estrus behavior received a second application eleven days later. From the onset of estrus on, the ovarian activity was monitored by ultrasonographyc examination and blood samples were collected for the progesterone determination by radioimunoessay (RIA), both in alternate days, during two consecutive estrous cycles. The ovary area and the diameter from the biggest follicle were mensuared, and the follicles (≥ 4mm) were counted. The ovary area from crossbred heifers was greatest than the Gir and Holstein ones, and the last ones did not differ between themselves. The number of follicles (≥ 4mm) was greater in the Gir heifers, and the diameter of the biggest follicle was greater in the Holstein heifers. The progesterone level was increased in crossbred animals as compared to the other genetics groups of heifers. The crossbred heifers showed greater or similar values as compared to the ones from the other genetics groups on the reproductive characteristics studied. / Não foram encontrados o currículo lattes e o CPF do autor.

A encefalopatia hipóxico-isquêmica neonatal, ou simplesmente hipóxia-isquemia (HI) neonatal, é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em neonatos humanos. De 20% a 50% dos recém-nascidos com HI severa morrem no período perinatal. Quando sobrevivem, 25% apresentam deficiências neuropsicológicas, como dificuldade de aprendizado, epilepsia e paralisia cerebral. Devido a isso, a eficácia de possíveis agentes neuroprotetores tem sido testada em modelos animais. Há razão para se pensar que a progesterona tem um forte potencial para o tratamento da HI neonatal, já que a sua utilização tem se mostrado benéfica em pesquisas relacionadas com lesão cerebral traumática, lesão cerebral isquêmica e outros modelos de lesão do sistema nervoso central (SNC) em adultos. Inúmeros estudos têm mostrado que o modelo animal de HI de Rice e Vannucci (1981) em animais neonatos, utilizado no presente trabalho, pode produzir lesões no sistema nervoso central relativamente previsíveis, e que estas lesões encefálicas parecem semelhantes às observadas clinicamente em humanos (SALMASO et al., 2014). Para a realização do modelo de HI foram utilizados ratos Wistar com idade de 7 dias (P7). Após a oclusão da carótida esquerda, os animais foram colocados em câmaras para exposição à atmosfera hipóxica com 8% O2/92% N2 por 90 minutos. Os animais foram divididos em cinco grupos experimentais: SHAM, HI, HI+PROG-PRÉ (PRÉ), HI+PROG-PÓS (PÓS), HI+PROG-PRÉ/PÓS (PP). Os termos PRÉ e PÓS referem-se à administração de progesterona (na dose de 5 mg/kg) antes ou após o procedimento de HI neonatal . Dependendo do grupo experimental, os animais foram tratados com progesterona imediatamente antes da isquemia e/ou 6 e 24 horas após o início da hipóxia. Foram analisados o peso corporal dos animais (imediatamente antes da isquemia e 6, 24 e 48 horas após o início da hipóxia), o volume de lesão cerebral, além da expressão das proteínas p-Akt e caspase-3 pela técnica de Western blotting. / Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy or simply neonatal hypoxia-ischemia (HI) is a main cause of morbidity and mortality in human neonates. Moreover, 25% of survivors show neuropsychological dysfunctions such as learning difficulties, epilepsy and cerebral palsy. Because of this, the effectiveness of potential neuroprotective agents has been tested in animal models. There is a reason to suppose that progesterone has a strong potential for the treatment of neonatal HI since its use has been shown to be beneficial in researches related to traumatic brain injury, ischemic brain injury and other central nervous system injury models (CNS) in adults. Several studies have shown that the newborn animal model of HI developed by Rice and Vannucci (1981), and used in the present study, can produce lesions in the central nervous system which are predictable and similar to those observed clinically in humans. In order to perform the HI model we used 7 days old (P7) Wistar rats. After occlusion of the left carotid, the animals were placed in hypoxic chambers and exposed to the hypoxic atmosphere (8% O2/92% N2 for 90 minutes). The animals were divided into five groups: SHAM, HI, HI+PROG-PRÉ (PRÉ), HI+PROG-PÓS (PÓS), HI+PROG-PRÉ/PÓS (PP).The PRÉ and PÓS terms refer to the administration of progesterone (5 mg/kg) before and/or after the HI procedure. Progesterone was administered immediately before ischemia, 6 and 24 hours after the beginning of hypoxia, depending on the experimental group. Body weight was evaluated immediately before ischemia and/or 6 and 24 hours after the start of hypoxia. The volume of brain damage, in addition to the expression of p-Akt and caspase-3 were also evaluated.

Introdução: Leiomiomas uterinos ou miomas são tumores benignos que se desenvolvem no miométrio e acometem cerca de 50% da população feminina. Têm como principais sintomas, sangramento excessivo e dor pélvica inespecífica. Convencionalmente o estrogênio é considerado o responsável pelo início da proliferação tumoral, mas recentes evidências clínicas e bioquímicas sugerem que a progesterona apresenta um papel importante no desenvolvimento desses tumores. Além disso, mecanismos epigenéticos parecem estar envolvidos na etiologia dos leiomiomas uterinos, como a metilação de DNA e acetilação de histonas. Somente nos EUA são realizadas 240 mil histerectomias/ano para tratar essa doença sendo considerado um problema de saúde pública. Frente a esses dados é imprescindível o entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento desses tumores e a busca de tratamentos menos invasivos. A mifepristona (RU 486), um modulador seletivo dos receptores de progesterona e glicocorticoides, é capaz de diminuir o tamanho dos tumores e amenizar os sintomas associados. Objetivos: verificar se (1) nos tecidos de leiomiomas uterinos e miométrio, os mecanismos epigenéticos como a metilação global do DNA e a acetilação de histonas estão alterados (2) se em cultura primária de leiomioma uterino e miométrio o tratamento com estradiol e progesterona é capaz de modular a expressão gênica dos receptores de progesterona total e B, assim como a atividade das enzimas histona acetiltransferase e desacetilase, e (3) se a mifepristona (RU 486) é capaz de modular diretamente a expressão gênica dos receptores de progesterona total e B após tratamento com os hormônios estradiol e progesterona. Métodos: para análise de metilação global do DNA e acetilação de histonas foram utilizadas 25 amostras teciduais para cada grupo de leiomioma uterino e miométrio oriundos de pacientes submetidas à histerectomia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre. A metilação global do DNA e a atividade da enzima histona acetiltransferase foram dosadas pelo método de ELISA e a enzima histona desacetilase por detecção fluorimétrica. Para verificar o efeito dos hormônios sexuais ovarianos e o efeito da mifepristona (RU 486) sobre a expressão gênica dos receptores de progesterona total e B foram realizadas 7 culturas primárias de leiomiomas uterinos e miométrio. Resultados: (1) Foram observadas hipermetilação (P = 0,022) e hipoacetilação (P = 0,04) em leiomiomas uterinos quando comparado ao miométrio. Não houve diferença estatística entre estes tecidos em relação à atividade da histona acetiltransferase. (2) Houve aumento da expressão gênica do receptor de progesterona total em cultura primária de leiomioma uterino quando tratado com estradiol (P = 0,028) e o receptor de progesterona B teve sua expressão aumentada quando tratado com estradiol, progesterona e estradiol + progesterona (P = 0,001). (3) O tratamento com mifepristona (RU 486) na dose de 10-6M não foi capaz de diminuir a expressão gênica dos receptores de progesterona total e B em células de leiomiomas uterinos e miométrio. A atividade da enzima histona desacetilase foi maior nas células de leiomioma uterino quando tratadas com estradiol (P = 0,034) e estradiol + progesterona + RU 486 (P = 0,001) quando comparado às células de miométrio, já a atividade da enzima histona acetiltransferase não foi detectada, devido a sua baixa quantidade. Conclusão: Nesse estudo foi observado uma hipermetilação e hipoacetilação nos tecidos de leiomiomas uterinos. Esses resultados sugerem que mecanismos epigenéticos podem estar contribuindo para a diminuição transcricional de genes relacionados ao funcionamento normal do miométrio e, com isso, colaborando para o crescimento desses tumores. Além disso, nossos resultados sugerem que estradiol e progesterona são capazes de modular a expressão gênica dos receptores de progesterona total e B e o medicamento RU 486 na dose de 10-6M não foi capaz de diminuir diretamente a expressão desses receptores. / Introduction: Uterine leiomyoma, also known as fibroids, is a smooth muscle cell tumor, and is clinically apparent in up to 50% of reproductive-age women. Clinical symptoms include abnormal uterine bleeding and pelvic pain. Estrogen has been considered a primary growth promoter of uterine leiomyoma, however clinical and biochemical evidence has suggested that progesterone plays a critical role in the development of these tumors. Furthermore, epigenetic modifications may be involved with etiology of theses tumors, through DNA methylation and histone acetylation. In the United States, 240.000 hysterectomies/year are performed to treat uterine leiomyomas which is being considered to be a public public health problem. The understanding of molecular mechanisms involved in the development of uterine leiomyoma may provide not only opportunities for a diagnostic, but also generation of novel therapeutic approaches. The mifepristone (RU 486), a synthetic steroid that has affinity for progesterone and glucocorticoid receptors has been reported to induce regression of uterine leiomyoma and reduce the symptoms. Objective: verify if (1) DNA global methylation and histone acetylation patterns are altered in uterine leiomioma tissue compared with myometrium; (2) the treatment with estradiol and progesterone are able to modulated de gene expression of total and B progesterone receptors and histone acetylation patterns in primary culture of uterine leiomyoma cells and myometrium as well as (3) the mifepristone (RU 486) are able to modulate the gene expression of total and B progesterone receptors after the treatment with ovarian steroids hormones. Methods: DNA global methylation and histone acetylation patterns were analyzed in 25 tissue samples from uterine leiomioma and myometrium. The DNA global methylation and the activity of histone acetyltransferase were performed using ELISA method. In order to evaluate histone deacetylase activity fluorimetric detection was used. To verify the effect of estradiol and progesterone on total and B progesterone receptors gene expression, as well as the influence of RU486 on this parameters, seven cultured cells from uterine leiomyoma and myometrium cells were performed. Results: (1) Hypermethylation (p = 0.022) and hypoacetylation (p = 0.04) in uterine leiomioma tissues compared with myometrium were observed. There was no statistic difference between these tissues in histone acetyltransferase activity. (2) We observed increased gene expression of total progesterone receptor in culture cells of uterine leiomyoma when treated with estradiol (p = 0.028). There was an increase of B progesterone receptor mRNA when treated with hormones, estradiol and progesterone (p = 0.001). The treatment with RU 486 was not able to modulate progesterone receptors. The histone desacetilase activity was elevated in uterine leiomyoma cells when treated with estradiol (p = 0.034) and estradiol + progesterone + RU 486 (p = 0.001). The histone acetyltransferase activity was barely detectable. Conclusion: In our study we found hypermethylation and hypoacetylation in uterine leiomyoma tissues suggesting that this process may lead to a decreased transcriptional activity of important genes associated with normal myometrium function contributing to the development of these tumors. Furthermore, our results suggest that ovarian steroids hormones increase progesterone receptors expression, being mifepristone (RU 486) at dose of 10-6M unable to decrease total and B progesterone receptors in uterine leiomyoma cells.