Orientador: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Cilmery Suemi Kurokawa / Banca: Lisiane de Almeida Martins / Resumo: Não disponível / Abstract: Toll-like receptors (TLRs) present in innate immune cells recognize pathogen molecules and influence on immunity to control the host-parasite interaction. Our objective was to evaluate the mRNA expression of TLR-2 and 4, expression and production of IL-12, IFN-γ, TNF-α, IL-17, IL-10 and TGF-β and NO production during infection with Leishmania chagasi and correlate TLR2 and 4 expressions with cytokines production and NO. Infection resulted in increased TLR2, TLR4, IL-17, TNF-α and TGF-β expression at the beginning of infection, with a decrease at the final phase in according the parasitic load; IFN- γ and IL-12 decreased at the peak of parasitemia and increased at the final phase; IL-10 increased during the whole period under analysis. With respect to cytokines and NO production, TGF-β, TNF-α and IL-17 showed high rates at the initial phase, and IFN-γ and IL-12 showed high rates at the final phase; IL-10 and NO showed increasing production during the infection period evaluated. There was a positive correlation of TLR2 and 4 with TNF-α, IL-17, NO, IL-10 and TGF-β at the beginning of infection, and with TNF-α, IL-17 and TGF-β at the end. Our data suggest that L. chagasi was in contact with host's cells via TLR2 and 4, which resulted in cytokine modulation. This interaction could be considered as pathogenic mechanism in visceral leishmaniasis / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Banca: Marcia Dalastra Laurentini / Resumo: O presente estudo teve por objetivos determinar a prevalência de hipertensão arterial sistêmica, bem como caracterizar, por meio de exames laboratoriais e de histopatologia, o tipo de lesão renal em cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral. Foram avaliados 68 cães divididos em dois grupos; G1 constituído por dez cães com síndrome urêmica, e G2 composto por 58 cães com valores séricos de creatinina e uréia dentro da normalidade ou apenas um pouco elevados, sem alterações significativas ao exame físico e ao exame de urina que pudessem caracterizar uma insuficiência renal. Verificou-se uma prevalência de 8,8% de hipertensão arterial sistêmica na população estudada, com 5/10 (50%) cães hipertensos no primeiro grupo e 1/58 (1,7%) no segundo. O estadiamento da doença renal nos animais hipertensos identificou 66,7% dos cães em estágio avançados a doença. Uma proteinúria, evidenciada por meio da P/C U, esteve presente em 77,94% dos cães. Foram observadas alterações glomerulares em 66/68 (97%), intersticiais em 48/68 (70,6%) e tubulares em 27/68 (39,7%) animais. A alteração glomerular mais frequente foi a glomerulonefritemembranoproliferativa, seguida de fibrose e glomerulonefrite membranosa. Dos seis cães em que se identificou hipertensão arterial sistêmica, quatro (66,7%) possuíam glomerulonefrite membranoproliferativa associada à fibrose glomerular em graus variados de lesão, um (16,7%) apresentava glomerulonefrite membranosa de grau intenso, e em outro animal verificou-se uma fibrose glomerular associada a glomerulonefrite proliferativa de grau leve / Abstract: The aim of the present study was to determe the prevalence of hypertension and to characterize, by means of laboratory tests and histopathology, kidney lesions in dogs naturally affected by visceral leishmaniasis. Sixty eight dogs were divided into two groups: G1 consisting of ten dogs with uremic syndrome, and G2 consisting of 58 dogs with normal or slightly elevated serum creatinine and urea, without significant changes on physical examination and on urinalysis that could characterize renal failure. There was a 8.8% prevalence of hypertension in the population, with 5/10 (50%) hypertensive dogs in the first group and 1/58 (1.7%) in the second. The staging of renal disease in hypertensive animals identified 66.7% of the dogs in an advanced stage of the disease. Proteinuria, evidenced by U P/C, was present in 77.94% of the dogs. Glomerular lesions were observed in 66/68 (97%), interstitial lesions in 48/68 (70.6%) and tubular lesions in 27/68 (39.7%) dogs. Membranoproliferative glomerulonephritis was the glomerular lesion most frequently observed, followed by fibrosis and membranous glomerulonephritis. Four out of six (66.7%) dogs with hypertension had membranoproliferative glomerulonephritis associated with glomerular fibrosis in varying degrees of injury, one (16.7%) had intense membranous glomerulonephritis, and in another (16.7%) dog we identified a glomerular fibrosis associated with a mild proliferative glomerulonephritis / Mestre

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:22:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Gabriela Muniz Felix Araujo.pdf: 3052812 bytes, checksum: d979f650ad09f6bbf8062f77a7aa642a (MD5) Previous issue date: 2013-05-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmaniasis is one of the most neglected diseases in the world. Its most severe clinical form, called visceral, if left untreated, can be fatal. Conventional therapy is based on the use of pentavalent antimonials and includes amphotericin B (AmB) as a second choice drug. The micellar formulation of AmB, although effective, is associated acute and chronic toxicity. Commercially available lipid formulations emerged to overcome such drawbacks, but the high cost involved limits widespread use of these preparations. Nanosized drug delivery systems, such as nanoemulsions (NE), have proven ability to solubilize hydrophobic compounds, to improve absorption and bioavailability, to increase efficacy and to reduce toxicity of the encapsulated drug. NE become even more attractive because they are inexpensive and easily produced. The aim of this work was to develop NE to incorporate AmB. NE were made by sonication method, through a mixture of surfactants, Kolliphor HS 15 and Brij ® 52, with the oil isopropyl myristate. AmB was added directly to the samples under magnetic stirring, using acidic and basic solutions to solubilize the drug and for adjustment of final pH. All NE showed neutral pH, values of conductivity were consistent with oil in water systems, and isotropic behavior. NE presented spherical structures with negative zeta potential value, monomodal size distribution and average diameter of the droplets with drug ranged from 33 to 132nm. Thermal analysis showed that AmB was not able to modify the behavior of the system, possibly to be dispersed in the internal phase. With respect to preliminary stability tests, centrifugation caused precipitation of the drug, heat stress led to turbidity of samples and at the end of the freeze-thaw cycle all samples maintained their transparency. AmB-NE showed similar statistically antileishmanial activity to AmB micellar formulation, which enables those systems to further tests, to assess their toxicity and also prove its effectiveness on amastigotes, in order to offer them as an alternative for the treatment of visceral leishmaniasis. / A leishmaniose é uma das doenças mais negligenciadas do mundo. Sua forma clínica mais grave, denominada visceral, se não tratada, pode ser fatal. A terapia convencional baseia-se na utilização de antimoniais pentavalentes e inclui a anfotericina B (AmB) como fármaco de segunda escolha. A formulação micelar de AmB, embora efetiva está associada a relatos de toxicidade aguda e crônica. Formulações lipídicas surgiram para contornar tais inconvenientes, porém o alto custo envolvido limita o amplo uso dessas preparações. Sistemas de liberação de fármacos nanoestruturados, como as nanoemulsões (NE), possuem comprovada habilidade em solubilizar compostos hidrofóbicos, melhorar absorção e biodisponibilidade, incrementar a eficácia e reduzir a toxicidade dos fármacos encapsulados. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de NE para incorporação de AmB. As NE foram formuladas pelo método de sonicação, através do emprego da mistura dos tensoativos Kolliphor ® HS 15 e Brij ® 52 com o óleo miristato de isopropila. Adicionou-se a AmB diretamente nas amostras, sob agitação magnética, com o emprego de soluções básicas e ácidas para solubilização do fármaco e ajuste do pH final. Todas as NE tiveram pH neutro e condutividade condizente com sistemas óleo em água, além de comportamento isotrópico. As NE apresentaram estruturas de formato esférico, com potencial zeta negativo e distribuição de tamanho monomodal. O diâmetro médio das gotículas com o fármaco variou de 33 a 132nm. A análise térmica revelou que a AmB não foi capaz de alterar o comportamento térmico do sistema, possivelmente por estar dispersa na fase interna. Com relação aos testes de estabilidade preliminar, a centrifugação provocou a precipitação do fármaco. O estresse térmico levou à turvação das amostras. Ao final do ciclo gelo-degelo todas as amostras mantiveram sua transparência. A AmBNE mostrou eficácia leishmanicida estatisticamente igual a da formulação de AmB micelar, o que a habilita para futuros ensaios para avaliar sua toxicidade e comprovar sua eficácia também sobre formas amastigotas, com a finalidade de torná-la uma alternativa para o tratamento da leishmaniose visceral.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:26:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LEDICE TESE.pdf: 4130760 bytes, checksum: 417837b74b4f56201f6555cdb552d8b2 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) is caused by Leishmania protozoan that infects mononuclear phagocytic cells leading to cutaneous or mucosal lesions. The mechanisms responsible for parasite control or persistence are not completely known. Human monocytes are blood cells subdivided into three subsets (classical, nonclassical and intermediate) according to the CD14 and CD16 expression that is associated with different phenotypical and functional characteristics. The aim of this study was to evaluate the profile of monocytes in ATL. First, it was analyzed the nonclassical monocytes (CD14loCD16+) and CD56+CD16+ NK cell frequencies in peripheral blood (by using flow cytometry) of a patient with diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL) before, during and after immunochemotherapy (chemotherapy treatment together with L. (L.) amazonensis and L. (V.) braziliensis monovalent vaccines plus BCG). Then, in localized cutaneous leishmaniasis (LCL) patients (n = 32) and healthy donors, the three monocyte subsets (CD14hiCD16-, CD14hiCD16+, CD14loCD16+) were evaluated by flow cytometry; in the whole blood cultures we evaluated the expression of cytokines in CD14+ monocytes activated with lipopolysaccharide (LPS, by flow cytometry), and the secretion of proinflammatory (tumor necrosis factor, TNF) and antiinflammatory (interleukin 10, IL-10) after activation with Toll-like receptor agonists (TLR2 (Pam3Cys), TLR4 (LPS)) or L. (V.) braziliensis antigen (Ag; ELISA was used). In DCL patient it was detected an increase in non classical monocytes and NK cell frequencies probably associated to BCG stimulation, contributing to the clinical cure of several lesions caused by L. (L.) amazonensis. In LCL patients, the CD16+ monocyte subsets were increased before treatment. A similar TNF and IL-10 expression in CD14+ monocytes activated with LPS was found in patients and controls. It was not possible to identify which monocyte subpopulation was the responsible for the TNF or IL-10 production due to alterations of the percentages of each subset after LPS stimulation. Activation through TLR2, TLR4 or with Ag leads to a higher production of TNF but not IL-10 in whole blood cultures of patients than of controls. Whereas in healthy controls there was a positive correlation between TNF and IL-10 production after different stimulations (LPS, Pam3Cys and Ag), this was not observed in LCL patients, except for TLR2 stimulation. A positive correlation was detected between amount of TNF in serum or in activated-whole blood cultures and the number of cutaneous lesions. These results suggested that nonclassical monocytes can contribute to the control of infection in DCL patient, a clinical form in which patients do not present acquired cellular immune response. In this case, activation of innate cells as monocytes can cause lesion regression decreasing costs with medicines and improving the life quality of the patients. On the other hand, in LCL patients monocyte subsets and cytokine imbalance, especially with increase of nonclassical and intermediate monocytes (CD14loCD16+, CD14hiCD16+) and TNF, can contribute to leishmaniasis immunopathogenesis. To understand the role of monocyte subsets in ATL can open new avenues to the identification of biological markers of disease severity as well as new therapeutic targets to ATL treatment. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é causada por protozoários do gênero Leishmania que infectam células do sistema fagocíticomononuclear, causando lesões na pele ou nas mucosas oral e nasofaríngea. Apesar dos vários estudos sobre a imunologia da LTA, o conhecimento ainda é insuficiente para a compreensão dos mecanismos que levam ao controle ou à persistência dos parasitos. Os monócitos são células do sangue que se subdividem em clássicos, não clássicos e intermediários, de acordo com a expressão de moléculas CD14 e CD16, apresentando diferenças fenotípicas e funcionais. O objetivo deste trabalho foi avaliar a participação dos monócitos na LTA. Para tanto, foram avaliadas as alterações nas frequências dos monócitos CD14loCD16+ (não clássicos) e de células NK CD56+CD16+ (por citometria de fluxo) do sangue periférico de um paciente com leishmaniose cutâneo difusa (LCD), antes e após imunoquimioterapia (tratamento quimioterápico mais vacinas monovalentes de L. (L.) amazonensis e de L. (V.) braziliensis com BCG). Em seguida, em pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL), foram avaliadas as subpopulações de monócitos (CD14hiCD16-, CD14hiCD16+, CD14loCD16+, usando citometria de fluxo); a expressão de citocinas em monócitos CD14+ em hemoculturas ativadas com lipopolissacarídeo (LPS; usando citometria de fluxo); a produção de citocinas pro- (fator de necrose tumoral, TNF) e antiinflamatória (interleucina 10, IL-10) secretadas em hemoculturas ativadas com agonistas de receptores similares a Toll [TLR2 (Pam3Cys) e TLR4 (LPS)] ou antígenos de L. (V.) braziliensis (Ag; dosados por ELISA) e associação com dados clínicos. No paciente com LCD, houve um aumento da frequência de monócitos CD14loCD16+ e de células NK, provavelmente associado ao uso do BCG, que contribuiu para a cura clínica das lesões causadas por L. (L.) amazonensis. Nos pacientes com LCL, as subpopulações de monócitos CD16+ estavam aumentadas no sangue periférico, antes do tratamento. Foi detectada uma expressão similar das citocinas TNF e IL-10 intracelularmente nos monócitos CD14+, após cultura com LPS, de pacientes com LCL e indivíduos controles. Não foi possível avaliar quais subpopulações de monócitos estavam produzindo as citocinas, porque após ativação dos monócitos com LPS houve alterações nas porcentagens das subpopulações de monócitos. Após a ativação de hemoculturas com agonistas de TLR2 e TLR4 ou Ag, hemoculturas de pacientes com LCL produziram mais TNF e similares concentrações de IL-10 em relação às hemoculturas de indivíduos sadios. Enquanto em indivíduos sadios foi detectada uma correlação positiva entre as concentrações de TNF e IL-10 produzidas após diferentes estímulos (LPS, Pam3Cys e Ag), esta correlação não foi detectada nas hemoculturas de pacientes com LCL, exceto quando usado Pam3Cys. Houve uma correlação positiva entre as concentrações de TNF, presentes no soro e produzidos antes e após diferentes estímulos nas hemoculturas, e o número de lesões dos pacientes com LCL. Os dados sugerem que ativar os monócitos pode levar ao controle da infecção em paciente com LCD, uma forma clínica em que não há uma eficiente resposta imune celular adquirida, sendo, portanto, importante ativar células da imunidade natural que possam causar regressão das lesões, diminuindo os custos com medicamentos e melhorando a qualidade de vida do paciente. Por outro lado, na LCL, alterações nas subpopulações de monócitos e um desequilíbrio na produção de citocinas pro- e antiinflamatórias podem contribuir para a imunopatogenia da doença. Nos casos estudados houve aumento de monócitos não clássicos e intermediários (CD14loCD16+, CD14hiCD16+) e associação entre o número de lesões e a produção de TNF pelos monócitos. Uma compreensão sobre o papel das subpopulações de monócitos na LTA pode abrir novas perspectivas para a identificação de marcadores de gravidade da doença, bem como de futuros alvos terapêuticos na LTA.

INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral é uma doença que acomete cerca de 500 mil pessoas por ano no mundo e se caracteriza principalmente por um quadro de febre, hepatoesplenomegalia e pancitopenia. Há uma imunossupressão específica frente a Leishmania chagasi. Classicamente esta resposta é modulada pelas células dendríticas, que são as primeiras células que entram em contato com o parasita. Estas células, a partir de vários determinantes, elaboram uma resposta do tipo Th1, com a produção de citocinas capazes de ativar os macrófagos a eliminar o parasita ou uma resposta do tipo Th2, que se caracteriza por uma produção de citocinas que são incapazes de ativar o macrófago parasitado. Com o objetivo de se estudar a resposta imune tecidual, esta investigação avaliou a resposta imune na mucosa duodenal de crianças portadoras da leishmaniose visceral plenamente manifesta. MÉTODOS: Um grupo de 13 crianças com calazar foi submetido à biópsia perioral de duodeno, com cápsula de Watson. Nove crianças assintomáticas foram utilizadas como controles e foram submetidas à biópsia duodenal endoscópica. Ambos os grupos foram submetidos a pesquisa do parasita, a análise morfométrica e a análise semiquantitativa da produção local de TNF-α, δ-interferon, IL-4 e IL-10 e fenotípica das seguintes células imunes: CD4, CD8, CD68. RESULTADOS: A análise morfomérica revelou que nos casos havia um infiltrado linfoplasmocitário com discreta atrofia vilositária. Não se verificou a presença de eosinófilos ou neutrófilos. A presença de leishmania foi verificada em todos os casos e esteve ausente nos controles. A análise da produção de citocinas revelou que tanto nos casos como nos controles havia uma média de produção de IL-10 semelhante, com p=0,8968 (teste T de Student); que não se detectou IL-4 nos casos e nos controles; que a freqüência da produção de δ-interferon nos controles foi maior que nos casos, com p=0,046 (teste de Fischer); que a freqüência da produção de TNF-α foi semelhante nos casos e controles (teste de Fischer) com p=0,41; havia um infiltrado macrofágico significativamente superior nos casos com p=0,005757 (teste T de Student); a média de contagem de CD4 nos casos foi significativamente maior que nos controles, utilizando-se o teste de Mann-Withney com p=0,040, teste da mediana p=0,019; e que a média da contagem de CD8 foi semelhante nos casos e controles com p=0,396 (teste T de Student). CONCLUSÕES: A mucosa duodenal por ser um ambiente imunotolerante, pela produção natural de IL-10, permitiria a presença e multiplicação da leishmania. Que o infiltrado linfoplasmocitário composto por células CD4, CD8 e CD68 foi incapaz de montar uma resposta imune eficaz contra o parasita, principalmente pela baixa produção local do δ-interferon. / INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a disease that strikes around 500 thousand people in the world per year and its major characteristics are fever hepatoesplenomegaly and pancytopenia. There is a specific imunnosupression in face of the Leishmania chagasi. Classically this response is modulated by the dendritic cells that are the first cells to get in contact with the parasite. These cells, from various determinants, elaborate a Th1 type response, with the production of cytokines capable of activating the macrophages and eliminate the parasite or a Th2 type response, that is characterized by cytokines production that are incapable of activating the macrophages under the parasite action. With the purpose of studying the tissue immune response this investigation evaluated the immune response on the duodenal mucosa of children carrying fully manifested visceral leishmaniasis. METHODS: A group of 13 children carrying kalazar was submitted to a duodenal perioral biopsy, with Watson\'s capsule. Nine assymptomatic children was used as control group and submitted to an endoscopic duodenal biopsy. Both groups were submitted to the parasite research, the morphometric analysis and the semi quantitative analysis of the local production of TNF-α, δ-interferon, IL-4 e IL-10 and phenotypic analysis of the following immune cells: CD4, CD8, CD68. RESULTS: The morphometric analysis revealed that there was a limphoplasmocitary infiltrate with discrete vilositary atrophy in the cases. The presence of eosinophilus and neutrophils were not verified. The presence of leishmania was verified in all cases and was absent in the controls. The cytokine production analysis showed that both in the cases and in the controls there was a similar mean IL-10 production, with p=0.8968 (T Student test); that the IL-4 was not detected in the cases nor in the controls; that the δ-interferon production frequency in the controls was higher with p=0.046 (Fischer test); that the TNF-α production frequency was similar in the cases and in the controls with p=0.41 (Fischer test); that there was a macrophagic infiltrate significantly higher in the cases with p=0.005757 (T Student test), that the mean CD4 in the cases was higher than in controls, Mann-Withney test with p=0,040, mediana test, p=0,019, and CD8 infiltrate was similar in the cases and in the controls with p= 0,396 respectively (T Student test). CONCLUSIONS: The duodena mucosa, being a immunetolerant environment due to the natural IL-10 production, would allow the presence and the multiplication of leishmania. That the limphoplasmocitary infiltrate composed of CD4, CD8 and CD68 cells was incapable of providing an effective immune response against the parasite, mostly because of the low δ-interferon local production.

O presente trabalho aborda a transformação semi-sintética de afidicolina visando a criação de uma biblioteca de compostos para fins de ensaios de atividade sobre espécies de Leishmania spp. Recentemente, estudos demonstraram a alta atividade da afidicolina, um diterpeno tetracíclico produzido pelo fungo Nigrospora sphaerica, frente ao protozoário Leishmania major. Apesar do promissor potencial leishmanicida, a afidicolina apresenta propriedades físico-químicas e perfil farmacocinético inadequado para terapêutica. Considerando que abordagens semi-síntética são comuns na busca de novos protótipos para doenças negligenciadas e na otimização de propriedades farmacocinéticas, foram desenvolvidas metodologias diversas de transformação de grupo funcional, alquilação e acilação da afidicolina a fim de avaliar os requisitos estruturais para atividade leishmanicida. Um estudo preliminar computacional foi realizado para determinação de cargas atômicas e potencial eletrostático da afidicolina, que forneceu informações valiosas sobre a reatividade química desta molécula, úteis para o planejamento de futuras modificações envolvendo este protótipo. No total, foram sintetizados dez compostos, sendo sete inéditos, que foram testados contra espécies de L. major e L.braziliensis. A avaliação leishmanicida dos compostos sintetizados demonstrou seletividade do derivado do tipo oxima contra a espécie L. brasiliensis, epidemiologicamente importante no Brasil. A partir dos dados da avaliação biológica foi possível propor, de forma preliminar, requisitos estruturais para a atividade leishmanicida da afidicolina e de seus derivados semi-sintéticos. / his work presents the use of semisynthetic approach to create a library of compounds from the lead compound aphidicolin for biological assays against Leishmania spp. Recently, studies have shown high activity of aphidicolin, a secondary metabolite from the fungus Nigrospora sphaerica, against the protozoan Leishmania major. Despite the promising leishmanicidal potential, aphidicolin presents physico-chemical and pharmacokinetic profile unsuitable for therapy. As the semi-synthetic approach is widely used in the search for new prototypes for neglected diseases, new methodologies have been developed for functional group transformation, alkylation and acylation of aphidicolin. A preliminary computational study was conducted to determine the atomic charges and electrostatic potential of aphidicolin, which provided valuable information on the chemical reactivity of this molecule, useful for planning future changes involving this prototype. Ten compounds were synthesized; seven of them are unpublished, which have been tested against different species of the protozoa Leishmania spp. The preliminary evaluation of the synthesized compounds showed leishmanicidal selectivity of the compound oxime against L. brasiliensis specie, which has a notorious occurrence in Brazil. We have proposed a preliminary perspective of the structural requirements for the leishmanicidal activity of aphidicolin and its semisynthetic derivatives based on the biological essays.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:01:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Final Dominique Fernandes.pdf: 3166096 bytes, checksum: f8031d05513bd1aa29db0b499d2f7bbe (MD5) Previous issue date: 2008-03-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / The discovery of natural substances found in plants has been a target of several scientific studies, as urgency for drugs more selective and less toxic for the treatment of incurable diseases. Leishmaniasis is a major disease with priority for research according to the World Health Organization. This study selected three botanical species in the search for new chemical therapies against this disease. Vismia cayennensis (Clusiaceae), Piper duckei (Piperaceae) e P. demeraranum (Piperaceae) are medicinal native species of Brazil, used by people to treat skin diseases and healing of wounds. The phytochemical study of the barks and fruits of V. cayennensis was carried out resulting in four extracts ethanolic, hexanic, chloroformic of fruit and dichloromethane of barks. The study of hexane extract resulted in the isolation and identification a mixture of steroids (sytosterol and stygmasterol), and Fridelin, a Triterpene, already isolated from the specie. The leishmanicidal activity of the extracts and Fridelin were evaluated against promastigotes forms of L. amazonensis and L. guyanensis, the chloroform and hexane extracts showed strong activity leishmanicidal for the two species, showing DL 50 = 32,4 μg/mL (L. amazonensis), 9,1 μg/mL (L. guyannensis) e 8,9 μg/mL (L. amazonensis), 19,7 μg/mL (L. guyannensis), respectively. However the Fridelina showed moderate activity to promastigotes forms of L. amazonensis with LD50 = 231,21 μg /mL. The extract chloroform of the fruit was fractionated resulting in the isolation of two compounds, identified like the antranoid prenylated, Vismin and Ferruginin. The leishmanicidal activity this compounds were weak in relation to the crude extract with LD50 = 178,3 μg /mL and DL50 = 214,8 μg/mL, respectively. The extracts, fractions and phytochemicals isolates were also evaluated as antioxidant activity and toxicity front of the microcrustáceo Artemia salina. Essential oils of the leaves were obtained by hydrodestillation and analyzed by GC/MS. The major constituents identified in the leaf of Piper duckei oil were trans-caryophyllene (29,62%), Germacrene D (15,92%) e 1H-Cicloprop[e]azulen (19,20%) while in the P. demeraranum oil was observed β- elemene (34.50%), dl-limonene (20.56%), Germacrene B (9.11%), Germacrene D (5.36%) e β-Selinene (5.20%). It was evaluated the leishmanicidal activity of oils. The species P. duckei showed inhibition of 50% of the parasites in the concentration 70 μg/mL, while the species P. demeraranum presented LD50 = 91.51 μg/mL. To the strain of L. guyanensis strain the oils showed a pronounced leishmanicidal activity with LD50 = 15.2 μg/mL for P. duckei and 22.7 μg/mL for P. demeraranum. It was evaluated the toxicity of oils in macrophage cells removed from the intraperitoneal cavity of mice; oils showed low cytotoxicity, encouraging future tests in amastigotes forms of Leishmania. The irritant potential of oils was also evaluated by the method HET - CAM, the data were very promising featuring oils with moderate skin irritation. / A busca de moléculas naturais bioativas presentes em plantas tem sido alvo de diversos estudos científicos, como urgência por drogas mais seletivas e menos tóxicas no tratamento de doenças incuráveis. A leishmaniose é uma das principais doenças com prioridade de pesquisa segundo a Organização Mundial de saúde. O presente trabalho selecionou as espécies botânicas, Vismia cayennensis (Clusiaceae), Piper duckei (Piperaceae) e P. demeraranum (Piperaceae), na busca de novas terapias químicas contra esta doença. As espécies mencionadas são plantas medicinais nativas do Brasil, usadas pela população no tratamento de dermatoses e como cicatrizante de ferida. O estudo fitoquímico das cascas e frutos de V. cayennensis foi realizado obtendo-se quatro extratos, etanólico, hexânico, diclorometano das cascas e clorofórmico dos frutos. O fracionamento do extrato hexânico resultou no isolamento e identificação de uma mistura de esteróides (sitosterol e estigmasterol) e de Fridelina, um triterpeno já isolado da espécie. Foi avaliada a atividade leishmanicida dos extratos e da Fridelina frente às formas promastigotas de L. amazonensis e L. guyanensis, os extratos hexânico e clorofórmico indicaram forte atividade leishmanicida frente às duas espécies, L. amazonensis e L. guyanensis, apresentando DL 50 de 32,4 μg/mL (L. amazonensis), 9,1 μg/mL (L. guyanensis) e 8,9 μg/mL (L. amazonensis), 19,7 μg/mL (L. guyanensis), respectivamente. A Fridelina isolada do extrato hexânico das cascas, não foi eficaz, apresentando moderada atividade frente às formas promastigotas de L. amazonensis (DL50 = 231,21 μg/mL). O extrato clorofórmico dos frutos foi fracionado resultando no isolamento de dois compostos, identificados através de perfis cromatográficos e espectrométricos, como sendo os antranóides prenilados, Vismina e Ferruginina. As atividades leishmanicida das substâncias foram fracas em relação ao extrato bruto, com DL50 = 178,3 μg/mL e DL50 = 214,8 μg/mL, respectivamente. Os extratos, frações e fitoconstituintes isolados também foram avaliados quanto atividade antioxidante e toxicidade frente ao micrcrustáceo Artemia salina. Foram estudados os óleos essenciais das folhas de P. duckei e P. demeraranum, extraídos através da técnica de hidrodestilação, e posteriormente analisados por CG/EM. Observou-se como componentes majoritários dos óleos essenciais de P. duckei os sesquiterpenos, trans-cariofileno (29,62%), Germacreno D (15,92%) e 1H-Cicloprop[e]azuleno (19,20%) enquanto que no óleo de P. demeraranum foram observados os monoterpenos β-elemeno (34.50%), dllimoneno (20.56%) e os sesquiterpenos, Germacreno B (9.11%), Germacreno D (5.36%) e β-Selineno (5.20%). Foi avaliada a atividade leishmanicida dos óleos. A espécie P. duckei apresentou inibição de 50% dos parasitas na concentração de 70 μg/mL, enquanto a espécie P. demeraranum apresentou DL50 = 91,51 μg/mL. Para a cepa de L. guyanensis os óleos apresentaram uma pronunciada atividade leishmanicida, com DL50 = 14,3 μg/mL para P. duckei e 22,7μg/mL para P. demeraranum. Foi avaliada a toxicidade dos óleos em células de macrófagos retiradas da cavidade intraperitonial de camundongos; os óleos apresentaram baixa citotoxicidade, incentivando futuros testes em formas amastigotas de Leishmania. O potencial irritante dos óleos também foi avaliado através do método HET CAM, os dados obtidos foram bastante promissores caracterizando os óleos com moderada irritação cutânea.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-10-17T19:47:56Z No. of bitstreams: 1 CLÁUDIA VARÃO DA CUNHA.pdf: 2356352 bytes, checksum: a297816df85722edef287690ba509017 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-17T19:47:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CLÁUDIA VARÃO DA CUNHA.pdf: 2356352 bytes, checksum: a297816df85722edef287690ba509017 (MD5) Previous issue date: 2017-11-27 / The Tegumentary Leishmaniasis Americana is one of the most important skin affections in Brazil, not only for the high frequency, but also by causing anatomical deformities. This study aimed to analyze the eco-epidemiological profile of Tegumentary Leishmaniasis Americana (TLA) in the region of Tocantina, in the period between 2007 to 2016. This region belongs to the administrative area of the State of Maranhão, in the Northeast of Brazil, and is located in the extreme west of the State. This is a descriptive epidemiological study that used a quantitative approach. Reported cases of TLA were registered in the region of Tocantina in the period of 2007 to 2016. The study population comprised 100% of the reported cases of Tegumentary Leishmaniasis Americana. The results showed that there was a decrease in the number of cases during this period, and that 2016 presented with the lowest number of reported cases. The municipalities most affected were Imperatriz and Itinga do Maranhão. The demographic profile of the TLA cases consisted of brown male subjects with low educational level and age between 30 to 59 years. Concerned to the type of input and the clinical form registered, the cases were classified as new cases, with a few cases of recurrence. As regards to epidemiological classification, it was observed that the cases were imported, since the infection occurred outside the area of residence of the affected subjects. With respect to the diagnosis, in most cases it was achieved through direct parasitological examination. However, it was possible to note that in a significant number of cases this exam was not completed, as well as the Montenegro Intradermoreação (MIDR) and the histological analysis. In relation to the evolution of the TLA cases, the cure was notified, and the death cases were related to other causes. Based on the results, it was possible to conclude that the cases of LTA are under-reported in the studied region, and that failure in diagnosis, prevention and control of the disease are observed, requiring more attention from the health managers, since the region is highly endemic. / A Leishmaniose Tegumentar Americana é uma das infecções dermatológicas mais importantes no Brasil, não somente pela frequência, mas também pelas deformidades que causam. Diante disso, o estudo teve por objetivo analisar o perfil ecoepidemiológico da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na Região Tocantina, período de 2007 a 2016. Essa região consiste numa área administrativa do estado do Maranhão, localizada no extremo oeste do Estado. Trata-se de um estudo com enfoque ecoepidemiológico descritivo com abordagem quantitativa, dos casos notificados de LTA na Região Tocantina no período de 2007 a 2016. A população estudada foi de 100% dos casos notificados de leishmaniose tegumentar americana. Os resultados revelaram que houve uma diminuição no número de casos de LTA nesse período, e que o ano de 2016 apresentou o menor número de casos notificados. Os municípios mais afetados da região foram Imperatriz e Itinga do maranhão. Quanto ao perfil sociodemográfico dos casos de LTA consistia em homens, pardos, com baixa escolaridade e faixa etária entre 30 a 59 anos. Em relação ao tipo de entrada e a forma clínica observou-se que eram casos novos, com poucos casos de recidiva e na forma cutânea. No que se refere à classificação epidemiológica dos casos observou-se que eram casos importados, pois a infecção ocorreu fora da zona de residência do indivíduo afetado. No que tange ao diagnóstico, na maioria dos casos foi feito por meio do exame parasitológico direto. Porém, foi possível observar um número significante de casos em que não ocorreu a realização deste exame, como também a Intradermorreação de Montenegro (IDRM) e o histopatológico. Em relação à evolução da LTA, os casos apresentaram cura, e os óbitos notificados tinham relação com outras causas. Diante dos resultados, conclui-se que há subnotificações dos casos de LTA, bem com falhas no diagnóstico, prevenção e controle da doença, o que exige melhorias por parte dos gestores, uma vez que a região é altamente endêmica.

A Leishmaniose consiste em uma patologia negligenciada com elevada incidência mundial, constituindo um problema de saúde pública em Minas Gerais e em todo Brasil por apresentar um alto grau de morbidade e mortalidade e um escasso arsenal terapêutico. Os parasitos da espécie Leishmania possuem enzimas essenciais ao crescimento e à viabilidade celular que podem ser investigadas como alvo de novos fármacos. Esta dissertação buscou identificar moléculas bioativas que apresentem um perfil de afinidade em alvos moleculares relacionados à Leishmaniose, utilizando as ferramentas da Modelagem Molecular e da Bioinformática, seguido de síntese destas substâncias candidatas a fármacos leishmanicidas e avaliação in vitro. Os estudos de Modelagem Molecular avaliaram os perfis de afinidade de uma série de derivados do eugenol proposta com alvos biológicos selecionados, entre elas as enzimas de Leishmania CRK3, tripanotiona sintetase, arginase e cisteíno protease rCPB2.8, por meio de ancoramento molecular. As enzimas CRK3 e cisteíno protease rCPB2.8 foram prevista pela técnica de modelagem por homologia utilizando um modelo e multiplos modelos, respectivamente, devido à ausência de uma estrutura cristalográfica desta proteína em banco de dados. As estruturas cristalográficas das proteínas arginase e tripanotiona sintetase foram obtidas no banco de dados Protein Data Bank (PDB). Para a obtenção dessas novas substâncias químicas levou-se em consideração o planejamento de uma rota sintética simples e reprodutível. Foi obtido uma série de ésteres de base de Mannich do eugenol, compostos contendo como substituintes grupamentos doadores de elétrons bem como grupamentos retiradores de elétrons e de diferente eletronegatividade e volume. As novas substâncias foram elucidadas estruturalmente utilizando ferramentas espectroscópicas. O estudo de atividade farmacológica permitiu verificar que os compostos SBM2, SBM3, SBM4, SBM5, SBM8, SBM11 e SBM13 possuem atividade leishmanicida antipromastigota, e apenas o composto SBM3 apresentou atividade inibitória satisfatória sobre a enzima rCPB2.8 na concentração de 100 μM. Foi verificado também o aumento da atividade da enzima rCPB2.8 exercida pelos compostos intermediário 2, SBM4, SBM8 e SBM9, que pode estar relacionada com a interação destes compostos em um sítio alostérico. Dentre as cavidades estudadas presentes na superfície da enzima rCPB2.8, uma possível região de interação com micromoléculas, localizada próxima ao resíduo de LYS159, apresentou um perfil de interação com os compostos similar ao observado nos estudos in vitro. / Leishmaniasis is a neglected pathology with a high incidence worldwide, constituting a governmental health problem in Minas Gerais and in the whole country as well, because of the high degree of morbidity and mortality and a scarce therapeutic arsenal. There are enzymes essential for cell growth and viability of Leishmania that are investigated as targets for new drugs. This thesis aimed to identify compounds that had leishmanicidal activity, using Molecular Modeling and Bioinformatics tools, followed by synthesis and in vitro evaluation of its pharmacological activity. The aim of the Molecular Modeling study is to evaluate the interaction of the compounds with some biological targets (CRK3, trypanothione synthetase, arginase and rCPB2.8 enzymes). The three-dimensional structures of the CRK3 and rCPB2.8 enzymes were predicted by homology modeling, since there are no crystal structures of these proteins deposited in a database. The crystallographic structures of the arginase and trypanothione synthase proteins were obtained from the Protein Data Bank (PDB). The planning of a simple and reproducible synthetic route was taken into account in the production of these substances. The Mannich base esters bearing different substituents at the para-disubstituted ring moiety were investigated, varying the substituents with electron donating groups as well as electron withdrawing groups of different electronegativity. The new substances were structurally elucidated using spectroscopic tools. The study of pharmacological activity made it possible to verify that the compounds SBM2, SBM3, SBM4, SBM5, SBM8, SBM11 and SBM13 have antipromastigote activity, and only the compound SBM3 showed inhibitory activity on the enzyme rCPB2.8 in the concentration of 100 μM. Activation of the enzyme rCPB2.8 exerted by intermediates 2, SBM4, SBM8 and SBM9 was also verified, which may be related to the interaction of these compounds in an allosteric site. Among the studied binding pockets in the surface of the rCPB2.8, one presented an interaction profile similar to that observed by in vitro studies, located in the region of the lysine residue LYS159, close to the active site. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 401399.pdf: 32443 bytes, checksum: 60362b79ab18cc90bf8d7d5686822ecf (MD5) Previous issue date: 2008-03-31 / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) ? causada por protozo?rios do g?nero Leishmania. ? transmitida pela picada de insetos do g?nero Lutzomyia. Em regi?es do Brasil, como no Rio de Janeiro, ? causada pela L. braziliensis. Duas formas cl?nicas principais s?o descritas: leishmaniose cut?nea e mucosa. A maior parte dos casos humanos ? constitu?do de les?es cut?neas. Contudo, apesar da baixa freq??ncia de les?es mucosas, a extens?o da destrui??o tecidual e a freq??ncia de resist?ncia ao tratamento tornam dif?cil acompanhamento dos pacientes. Os tipos celulares que comp?em o ambiente das les?es podem apresentar envolvimento determinante na infec??o, como j? descrito em outros modelos de compartimentaliza??o da resposta imune. Estudos indicam a necessidade de detalhamento do microambiente para estabelecer o quadro imunopatol?gico das les?es. Assim, o estudo das les?es mucosas da LTA pode contribuir para a compreens?o da din?mica da infec??o. Com o intuito de verificar a composi??o do infiltrado inflamat?rio presente nas les?es mucosas de LTA, n?s examinamos bi?psias de 20 pacientes de leishmaniose mucosa (12 com les?es nasais e 8 com les?es orais), assim como 20 doadores clinicamente sadios (10 biopsias de mucosa oral e 10 de mucosa nasal). Os fragmentos de mucosa foram analisados por imunohistoqu?mica, usando anticorpos monoclonais capazes de reconhecer: diferentes subpopula??es celulares (CD3, CD4, CD8, CD22, CD68, elastase neutrof?lica, CD1a) e marcadores de inflama??o (CLA, Ki67, Bcl-2, NOS2, CD62E, Fas, FasL). As les?es apresentavam rea??o inflamat?ria constitu?da principalmente de c?lulas T e macr?fagos. Tamb?m se observava uma associa??o entre express?o elevada de NOS2 e reduzido n?mero de parasitas, indicando a import?ncia da NOS2 na elimina??o de parasitas. Os resultados demonstram que a rea??o inflamat?ria presente na leishmaniose mucosa ? semelhante seja no s?tio de les?o oral ou nasal, apesar da tend?ncia de ser mais intensa nas les?es orais. A compara??o das les?es com tecidos considerados sadios demonstrou o aumento significante da concentra??o de c?lulas inflamat?rias nas les?es. C?lulas inflamat?rias residuais estavam presentes nos tecidos considerados sadios. Este achado poderia ser o resultado da agress?o cont?nua por agentes infecciosos e por microtraumatismos, j? que a mucosa ? considerada uma das barreiras do nosso organismo. Parasitas foram mais detectados nas les?es orais. J? que pacientes com les?o oral t?m tend?ncia ao diagn?stico precoce se comparado aos casos de les?o nasal, a maior presen?a de parasitas poderia ser conseq??ncia do tempo de evolu??o