Orientador: Simone Baldini Lucheis / Resumo: A família Trypanosomatidae é composta por protozoários flagelados da ordem Kinetoplastidae. Os protozoários do gênero Trypanosoma, causadores das tripanossomíases e gênero Leishmania, causadores das leishmanioses, são os parasitos de maior interesse médico e veterinário As tripanossomíases são causadas por diferentes espécies, dentre elas: Trypanosoma cruzi, Trypanosoma. theileri, Trypanosoma equiperdum, Trypanosoma evansi e Trypanosoma vivax, sendo os três últimos de maior importância para os animais de produção, causando prejuízos econômicos para o setor agropecuário. Com o objetivo de avaliar a ocorrência de tripanosomatídeos no municipío de Bauru-SP, região endêmica para leishmaniose, foram avaliados 200 animais, sendo 100 bovinos (Bos taurus) e 100 equídeos (Eqqus spp.), procedentes de áreas urbanas e periurbanas do município. Para entender a distribuição de fatores de riscos na análise espacial, avaliou-se fatores epidemiológicos das leishmanioses, relacionados a seu diagnóstico nos animais de produção avaliados e também em cães e em humanos em diferentes bairros do município de Bauru, visando sua compreensão e integrá-las a estratégias de controle da doença. O diagnóstico dos animais foi baseado em técnicas parasitológicas: esfregaço sanguíneo e hemocultura; sorológicas: Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e moleculares: Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e seqüenciamento. Não foram encontradas formas sugestivas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Chronic wounds are a major healthcare problem worldwide which mainly a ects geriatric population and patients with limited mobility. In tropical countries, Cutaneous Leishmaniasis (CL) is also a cause for chronic wounds, being endemic in 75% of Peru . In this context, the assessment of these type of wounds represents a big challenge due to the limited access to specialized medical resources. This work aims to develop a video-based method to compute the 3D point cloud of skin wounds which could provide accurate metrics for medical assessment despite of the location of the patient. Recently, CL specialists have used metrics as volume in clinical assessment with promising results. The acquisition protocol is prompt to be user friendly and feasible in remote locations; the video is taken using a commercial hand-held video camera without a rig or special illumination. The algorithm follows the Structure from Motion methodology: FAST feature detector, pyramidal optical flow and Jacob’s method for missing points estimation. The results show good performance in terms of accuracy and repeatability of the point cloud computation, less than 0.6 mm and 0.21 mm respectively. However, experiments suggest that the volume computation technique does not adapt well to the proposed method output and requires a deeper analysis. The method has been entirely implemented using open source libraries. / Tesis

Submitted by Flávia Regina Florencio de Athayde null (flavinhaflorencio@hotmail.com) on 2017-01-27T14:01:09Z No. of bitstreams: 1 Athayde_F_R_F_diss.mestrado.pdf: 1648129 bytes, checksum: a278e99a1cfea6cf938f7ec4bb928519 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-31T13:33:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 athayde_frf_me_araca.pdf: 1648129 bytes, checksum: a278e99a1cfea6cf938f7ec4bb928519 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T13:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 athayde_frf_me_araca.pdf: 1648129 bytes, checksum: a278e99a1cfea6cf938f7ec4bb928519 (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os protozoários do gênero Leishmania, da família Trypanosomatidae, são responsáveis por causar as leishmanioses, zoonoses de distribuição mundial que atingem países de regiões tropicais e subtropicais, representando um importante problema de saúde pública. As espécies de Leishmania patogênicas à humanos são classificadas em dois subgêneros, Leishmania e Viannia, sendo responsáveis pelas três formas clínicas mais comuns da doença. O subgênero Leishmania tem representantes no Velho e no Novo Mundo, enquanto que as espécies do subgênero Viannia estão presentes somente nas regiões tropicais das Américas, sendo responsáveis pela manifestação tegumentar na forma cutânea e mucocutânea. O avanço nas tecnologias de sequenciamento e montagem dos genomas de espécies de Leishmania têm possibilitado melhor entendimento das leishmanioses, da relação parasita-hospedeiro e até mesmo a identificação diferencial das espécies, auxiliando no entendimento das diferenças nas manifestações clínicas. Com o intuito de ampliar as informações genômicas das espécies de Leishmania e do subgênero Viannia, trabalhamos com o sequenciamento de DNA genômico e ferramentas de bioinformática para a montagem do genoma e anotação de proteínas de duas espécies, Leishmania (Viannia) guyanensis e Leishmania (Viannia) shawi. / The protozoa of the Trypanosomatidae family Leishmania genus, are responsible for causing leishmaniosis, zoonosis of global distribution that affects countries in tropical and subtropical regions, representing an important public health problem. The Leishmania species pathogenic to humans are classified into two subgenera, Leishmania and Viannia, which are responsible for three of the most common clinical manifestations of this disease. The subgenus Leishmania has representatives in the Old and New World, while the Viannia species are present only in the tropical regions of the Americas. These are responsible for the tegumentary manifestation of the cutaneous and mucocutaneous forms. The advance in the technologies of sequencing and the assembly of the genomes of Leishmania species have allowe to better understand the leishmaniosis, the parasite-host relationship and even the differential identification of the species thus, helping to understand the differences in the clinical manifestations. In order to expand the genomic information of the Leishmania species and the subgenus Viannia, we worked with genomic DNA sequencing and bioinformatics tools for assembling the genome and annotating proteins of two species, Leishmania (Viannia) guyanensis and Leishmania (Viannia) shawi.

Submitted by MIRIAN DOS SANTOS PAIXÃO null (mirianspaixao@bol.com.br) on 2017-08-03T22:22:11Z No. of bitstreams: 1 Tese Final- Mirian dos Santos Paixão.pdf: 3906453 bytes, checksum: ebf95becc548ea4de5ab6f56f8c74757 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-08-04T17:33:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 paixao_ms_dr_bot.pdf: 3906453 bytes, checksum: ebf95becc548ea4de5ab6f56f8c74757 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-04T17:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 paixao_ms_dr_bot.pdf: 3906453 bytes, checksum: ebf95becc548ea4de5ab6f56f8c74757 (MD5) Previous issue date: 2017-07-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A família Trypanosomatidae é composta por protozoários flagelados da ordem Kinetoplastidae. Os protozoários do gênero Trypanosoma, causadores das tripanossomíases e gênero Leishmania, causadores das leishmanioses, são os parasitos de maior interesse médico e veterinário As tripanossomíases são causadas por diferentes espécies, dentre elas: Trypanosoma cruzi, Trypanosoma. theileri, Trypanosoma equiperdum, Trypanosoma evansi e Trypanosoma vivax, sendo os três últimos de maior importância para os animais de produção, causando prejuízos econômicos para o setor agropecuário. Com o objetivo de avaliar a ocorrência de tripanosomatídeos no municipío de Bauru-SP, região endêmica para leishmaniose, foram avaliados 200 animais, sendo 100 bovinos (Bos taurus) e 100 equídeos (Eqqus spp.), procedentes de áreas urbanas e periurbanas do município. Para entender a distribuição de fatores de riscos na análise espacial, avaliou-se fatores epidemiológicos das leishmanioses, relacionados a seu diagnóstico nos animais de produção avaliados e também em cães e em humanos em diferentes bairros do município de Bauru, visando sua compreensão e integrá-las a estratégias de controle da doença. O diagnóstico dos animais foi baseado em técnicas parasitológicas: esfregaço sanguíneo e hemocultura; sorológicas: Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) e moleculares: Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e seqüenciamento. Não foram encontradas formas sugestivas de protozoários em esfregaço sanguíneo, mas a análise de hemocultura de sete animais permitiu a visualização desses protozoários. Às técnicas sorológicas para Leishmania spp., 25% dos bovinos e 16% dos eqüídeos foram reagentes à RIFI e 24% dos equídeos e 6% dos bovinos reagentes ao ELISA. A PCR foi realizada a partir de amostras de sangue, hemocultura, suabes conjuntivais e ectoparasitos, com primers que amplificam a região ITS e HSP70. A partir de amostras de sangue, 23% dos bovinos e 6% dos eqüídeos foram positivos e sete amostras de hemocultura de bovinos foram positivas, com pelo menos um dos primers. As amostras de ectoparasitos e suabes não apresentaram positividade à PCR. Em amostras de bovinos positivas à PCR foram identificadas espécies do gênero Leishmania infantum, Leishmania donovani e Trypanosoma theileri e em amostras de eqüídeos, foram identificadas espécie do gênero Leishmania: Leishmania donovani. Os resultados obtidos às provas parasitológicas, sorológicas e/ou moleculares sugerem a presença de tripanosomatídeos em animais de produção do município no Bauru-SP. No presente estudo, pela análise espacial, sugere-se o papel de proteção dos animais de produção para a ocorrência de leishmaniose em humanos. / The family Trypanosomatidae is composed of flagellate protozoa of the order Kinetoplastida, divided into 10 genera. The Trypanosoma protozoa, which cause trypanosomiasis and Leishmania genus, which cause leishmaniosis, are the parasites of major medical and veterinary interest. Trypanosomiasis is caused by different species, among them: Trypanosoma cruzi, T. theileri, T. equiperdum, T . evansi and T. vivax, which affect production animals, causing economic damages to the agricultural sector. In order to evaluate the occurrence of trypanosomatids in the municipality of Bauru-SP, a region endemic for leishmaniosis, the present study evaluated 200 animals, 100 cattle (Bos taurus) and 100 equidae (Eqqus spp.) from urban and peri-urban areas of the municipality. In the spatial analysis, in order to understand the distribution of risk factors, we evaluated the epidemiological factors of leishmaniasis, related to its diagnosis in the studied animals, in dogs and in humans as well, from different districts of Bauru city, aiming a better comprehension and the strategies for the control of this disease. The diagnosis was based on parasitological techniques: blood smear and blood culture; serological tests: Immunofluorescence Antibody Test (IFAT) and Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA); and molecular: Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequencing. No suggestive forms of protozoa were found in blood smears, but the blood culture analysis of seven animals allowed visualization of these protozoa. To the serological techniques for Leishmania spp., 25% of the cattle and 16% of the equines were reactive to IFAT and 24% of the equines and 6% of the cattle reactive to ELISA. PCR was performed from blood samples, blood cultures, conjunctival swabs and ectoparasites, with primers from the ITS and HSP70 region. From blood samples, 23% of cattle and 6% of equines were positive and seven samples of bovine blood culture were positive, with at least one of the primers. Samples of ectoparasites and swabs showed no PCR positivity. Specimens of the genus Leishmania infantum, Leishmania donovani and Trypanosoma theileri were identified in specimens of PCR positive bovines, and species of the genus Leishmania: Leishmania donovani were identified in equine samples. The results obtained for the parasitological, serological and / or molecular tests suggest the presence of trypanosomatids in animals of the municipality of Bauru-SP. In this study, by the spatial analysis, the role of protection of the production animals for the occurrence of leishmaniosis in humans is suggested. / FAPESP: 2014/15808-6

Causada por protozoários do gênero Leishmania, a leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta milhões de pessoas em todos os continentes. São grandes os desafios no tratamento da leishmaniose porque os fármacos atualmente disponíveis apresentam alta toxicidade, efeitos colaterais, alto custo e resistência parasitária. Sendo assim, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento da doença de maneira mais eficiente. A investigação de novas alternativas terapêuticas, novos alvos bioquímicos, em particular a arginase em de Leishmania (L) amazonensis, é considerada um alvo interessante na busca de novos compostos leishmanicidas. A via bioquímica em que está envolvida a arginase é fundamental para a manutenção do ciclo de vida do parasito, sendo responsável pela hidrólise de L-arginina em L-ornitina em mamíferos. Muitos compostos oriundos de produtos naturais tem sido relatados como inibidores da arginase de L. (L.) amazonensis e a presença de grupos hidroxila em suas estruturas mostraram ser importantes na atividade inibidora da enzima. O objetivo desse trabaho estudar a interação bioquímica entre a enzima arginase de L. (L.) amazonensis, extratos vegetais, flavonoides e derivados do ácido cafeico. O extrato acetônico de folhas de Qualea grandiflora apresentou maior capacidade inibitória da arginase (IC50 = 1,7 ± 01 µg/mL) dentre os extratos analisados. Dentre os flavonoides, o composto mais potente foi a taxifolina (IC50 = 1,7 ± 0,2 µM). O verbascosídeo foi o derivado do ácido cafeico com maior potencial de inibição da arginase (IC50 = 0,5 ± 0,2 µM). As estruturas desses compostos podem servir como referência no desenvolvimento de novas drogas para o controle da leishmaniose, que tenham como alvo a arginase. / Caused by protozoa of the genus Leishmania, leishmaniosis is an infectious disease that affects millions of people on all continents. The currently available drugs are highly toxic, expensive, have side effects and parasitic resistance and for these reasons there is a need of developing new drugs to more effective treatment of the disease. The research of new therapeutic alternatives, new biochemical targets, in particular the arginase of Leishmania (Leishmania) amazonensis is considered an interesting target in the search for new compounds leishmanicidal. The biochemistry of arginase pathway is essential for the survival of the parasite, is also responsible for hydrolysis of L- arginine to L- ornithine in mammals. Many compounds from natural products has been reported as inhibitors of arginase L. (L.) amazonensis, and the presence of hydroxyl groups in their structures shown to be important for inhibitory activity of the enzyme. This work studies the biochemical interaction between the arginase enzyme, plant extracts, flavonoids and derivatives of caffeic acid. The acetone extract of Qualea grandiflora leaves showed higher inhibitory capacity of arginase (IC50 = 1.7 ± 01 µg/mL) from the analyzed extracts. Among the flavonoids, the most potent compound was taxifolin (IC50 = 1.7 ± 0.2 µM). The verbascosideo was the derivative of caffeic acid with greater potential for arginase inhibition (IC50 = 0.5 ± 0.2 µM) The structures of these compounds can serve as a reference in developing new drugs for the control of leishmaniosis, which target arginase.

Orientador: Maria Isabel Nogueira Cano / Resumo: Os protozoários do gênero Leishmania causam leishmaniose, uma doença tropical negligenciada, que se apresenta de diferentes formas clínicas e que acomete milhões de pessoas no Brasil e no mundo. Até o momento não existe nenhuma vacina ou tratamento eficientes para leishmaniose e por isso, estudos que contribuam para o entendimento da biologia e fisiologia do parasito podem fornecer uma possibilidade de encontrar novos alvos terapêuticos. Este é o caso dos telômeros, cuja função principal é manter a estabilidade do genoma que se perturbada pode afetar diretamente a proliferação ou multiplicação dos parasitos. Os telômeros são estruturas nucleoprotéicas localizadas nas extremidades dos cromossomos, mantidos pela enzima telomerase. Eles são regulados por diversos processos entre os quais se encontram alguns longos RNAs não codificadores (lncRNA). Entre os lncRNAs com função telomérica está o TER (RNA Telomerase) o qual é um dos principais componentes do complexo telomerase, pois contém uma pequena sequência molde a qual é copiada pela telomerase durante a replicação dos telômeros, o TER foi recentemente identificado em Leishmania spp., porém se desconhece a sua função e biogênese. Outro RNA não codificante com função telomérica é o TERRA (Repetições Teloméricas contendo RNA), os quais são essenciais para a manutenção dos telômeros. Até o momento, identificamos a presença do TERRA expressos a partir das extremidades cromossômicas nas diferentes fases de desenvolvimento (amastigot... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Protozoan from Leishmania genus are the etiologic agents of leishmaniasis, a tropical disease that presents different clinical manifestations and affect million people in Brazil and in the world. There are no eficiente vacines nor treatment protocols against leishmaniasis, therefore, it is crucial to improve the knowledge about Leishmania molecular biology and physiology for the development of new therapies. Actually, telomeres have been considered potential molecular targets as they are responsible to maintain genome stability. Leishmania telomeres similarly to other eukaryotes, are nucleoprotein structures found at the end of the chromosomes maintained by telomerase. They can be regulated by different mechanisms such as the action of long non-coding telomeric RNAs (lncRNAs). Among the telomeric lncRNAs are the telomerase RNAcomponent (TER) which is crucial for telomerase activity because it contains the template sequence that is copied by telomerase during telomere elongation. TER was recently identified in Leishmania although there is no information about its function and biogenesis.TERRA, the Telomere Repeat containing RNA is other telomeric RNA that it is involved with telomere length regulation telomere damage response and alterations in the composition of telomeric chromatin and is essential for telomere maintenance. In this work, we identified TERRA transcripts in the three Leishmania developmental stages (amastigote, promastigote e metacyclic). We interrogate three i... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A leishmaniose visceral americana (LVA) ou Calazar é um exemplo de doença infecciosa reemergente, cuja urbanização a uma das principais marcas da alteração de seu padrão epidemiológico de ocorrência. No Brasil, a infecção por L. chagasi tem se comportado de forma epidêmica em diversas regiões e as estratégias de controle não tem sido efetivas na contenção da propagação da doença. Para melhor compreensão deste processo, estudaram-se associações da imunidade tardia, medida por meio do teste de intradermorreação de Montenegro (IDRM), com fatores demográficos, sociais, econômicos e ambientais em área urbana com alta forca de transmissão. A análise dos dados foi feita tendo como base o modelo de regressão de Poisson ajustado pelo qui-quadrado, onde foram calculadas as razões de prevalência (RP) e seus respectivos intervalos de 95% de confiança (IC). Foi detectada maior prevalência da positividade a IDRM para o sexo masculino (RP = 1,32 IC: 1,11 1,56), com o aumento da idade (RP = 1,18 IC: 1,10 1,26), com a posse de cao por período de três anos ou mais (RP = 1,26 IC: 1,01 1,56) e com presença de fossa rudimentar no domicilio (RP = 1,33 IC: 0,99 1,77). Indivíduos com maior escolaridade (RP = 0,81 IC; 0,66 0,99), convivendo com três ou mais pessoas no domicilio (RP = 0,66 IC; 0,47 0,93), com história de Calazar no domicílio (RP = 0,40 IC: 0,16 0,99) e com parede com tijolo sem reboco (RP= 0,79 IC: 0,64 0,98) apresentaram prevalências mais baixas mostrando possível proteção infecção anterior. Os resultados obtidos podem contribuir para o melhor entendimento do dinamismo da doença em contexto urbano, permitindo melhor direcionamento das estratégias de intervenção. / The American visceral leishmaniasis (AVL) or kalazar is an example of reemerging infectious disease, its urbanization being one of the most typical feature of its new epidemiologic pattern of occurrence. In Brazil, epidemics of infection by L. chagasi have occurred in several regions and control strategies have not been effective to contain the spread of the disease. To better understand this process, we have studied the association between cellular immunity, measured by the Montenegro Skin Test (MST), and demographic, social, economic and environmental factors in an urban area with high force of transmission. Statistical analysis was performed using Poisson regression models adjusted by the chi-square. Associations between variables were expressed by prevalence ratios (PR) and their respective 95% confidence intervals (CI). Higher prevalence of positivity to MST was detected among male participants (PR = 1.32 CI: 1.11 1.56), for each ten years increase of age (PR = 1.18 CI: 1.10 1.26), among subjects who owned dogs for three or more years (PR = 1.26 CI: 1.01 1.56) and for those who lived in households with precarious sewage system (PR = 1.33 CI: 0.99 1.77). Individuals with higher literacy (PR = 0.81 CI: 0.66 0.99), living in households where a case of AVL had occurred before (PR = 0.40 CI: 0.16 0.99), or in houses with walls made of bricks without finishing (PR = 0.79 CI: 0.64 0.98), or with three or more persons (PR = 0.66 CI: 0.47 0.93), showed lower prevalence of positivity to MST, indicating that these factors might have protected for earlier infection. These results might contribute to a better understanding of the behavior of the infection in urban context, and maybe useful for directing intervention to high-risk groups.

A leishmaniose visceral americana (LVA) ou Calazar é um exemplo de doença infecciosa reemergente, cuja urbanização a uma das principais marcas da alteração de seu padrão epidemiológico de ocorrência. No Brasil, a infecção por L. chagasi tem se comportado de forma epidêmica em diversas regiões e as estratégias de controle não tem sido efetivas na contenção da propagação da doença. Para melhor compreensão deste processo, estudaram-se associações da imunidade tardia, medida por meio do teste de intradermorreação de Montenegro (IDRM), com fatores demográficos, sociais, econômicos e ambientais em área urbana com alta forca de transmissão. A análise dos dados foi feita tendo como base o modelo de regressão de Poisson ajustado pelo qui-quadrado, onde foram calculadas as razões de prevalência (RP) e seus respectivos intervalos de 95% de confiança (IC). Foi detectada maior prevalência da positividade a IDRM para o sexo masculino (RP = 1,32 IC: 1,11 1,56), com o aumento da idade (RP = 1,18 IC: 1,10 1,26), com a posse de cao por período de três anos ou mais (RP = 1,26 IC: 1,01 1,56) e com presença de fossa rudimentar no domicilio (RP = 1,33 IC: 0,99 1,77). Indivíduos com maior escolaridade (RP = 0,81 IC; 0,66 0,99), convivendo com três ou mais pessoas no domicilio (RP = 0,66 IC; 0,47 0,93), com história de Calazar no domicílio (RP = 0,40 IC: 0,16 0,99) e com parede com tijolo sem reboco (RP= 0,79 IC: 0,64 0,98) apresentaram prevalências mais baixas mostrando possível proteção infecção anterior. Os resultados obtidos podem contribuir para o melhor entendimento do dinamismo da doença em contexto urbano, permitindo melhor direcionamento das estratégias de intervenção. / The American visceral leishmaniasis (AVL) or kalazar is an example of reemerging infectious disease, its urbanization being one of the most typical feature of its new epidemiologic pattern of occurrence. In Brazil, epidemics of infection by L. chagasi have occurred in several regions and control strategies have not been effective to contain the spread of the disease. To better understand this process, we have studied the association between cellular immunity, measured by the Montenegro Skin Test (MST), and demographic, social, economic and environmental factors in an urban area with high force of transmission. Statistical analysis was performed using Poisson regression models adjusted by the chi-square. Associations between variables were expressed by prevalence ratios (PR) and their respective 95% confidence intervals (CI). Higher prevalence of positivity to MST was detected among male participants (PR = 1.32 CI: 1.11 1.56), for each ten years increase of age (PR = 1.18 CI: 1.10 1.26), among subjects who owned dogs for three or more years (PR = 1.26 CI: 1.01 1.56) and for those who lived in households with precarious sewage system (PR = 1.33 CI: 0.99 1.77). Individuals with higher literacy (PR = 0.81 CI: 0.66 0.99), living in households where a case of AVL had occurred before (PR = 0.40 CI: 0.16 0.99), or in houses with walls made of bricks without finishing (PR = 0.79 CI: 0.64 0.98), or with three or more persons (PR = 0.66 CI: 0.47 0.93), showed lower prevalence of positivity to MST, indicating that these factors might have protected for earlier infection. These results might contribute to a better understanding of the behavior of the infection in urban context, and maybe useful for directing intervention to high-risk groups.

Causada por protozoários do gênero Leishmania, a leishmaniose é uma doença infecciosa que afeta milhões de pessoas em todos os continentes. São grandes os desafios no tratamento da leishmaniose porque os fármacos atualmente disponíveis apresentam alta toxicidade, efeitos colaterais, alto custo e resistência parasitária. Sendo assim, faz-se necessário o desenvolvimento de novas drogas para o tratamento da doença de maneira mais eficiente. A investigação de novas alternativas terapêuticas, novos alvos bioquímicos, em particular a arginase em de Leishmania (L) amazonensis, é considerada um alvo interessante na busca de novos compostos leishmanicidas. A via bioquímica em que está envolvida a arginase é fundamental para a manutenção do ciclo de vida do parasito, sendo responsável pela hidrólise de L-arginina em L-ornitina em mamíferos. Muitos compostos oriundos de produtos naturais tem sido relatados como inibidores da arginase de L. (L.) amazonensis e a presença de grupos hidroxila em suas estruturas mostraram ser importantes na atividade inibidora da enzima. O objetivo desse trabaho estudar a interação bioquímica entre a enzima arginase de L. (L.) amazonensis, extratos vegetais, flavonoides e derivados do ácido cafeico. O extrato acetônico de folhas de Qualea grandiflora apresentou maior capacidade inibitória da arginase (IC50 = 1,7 ± 01 µg/mL) dentre os extratos analisados. Dentre os flavonoides, o composto mais potente foi a taxifolina (IC50 = 1,7 ± 0,2 µM). O verbascosídeo foi o derivado do ácido cafeico com maior potencial de inibição da arginase (IC50 = 0,5 ± 0,2 µM). As estruturas desses compostos podem servir como referência no desenvolvimento de novas drogas para o controle da leishmaniose, que tenham como alvo a arginase. / Caused by protozoa of the genus Leishmania, leishmaniosis is an infectious disease that affects millions of people on all continents. The currently available drugs are highly toxic, expensive, have side effects and parasitic resistance and for these reasons there is a need of developing new drugs to more effective treatment of the disease. The research of new therapeutic alternatives, new biochemical targets, in particular the arginase of Leishmania (Leishmania) amazonensis is considered an interesting target in the search for new compounds leishmanicidal. The biochemistry of arginase pathway is essential for the survival of the parasite, is also responsible for hydrolysis of L- arginine to L- ornithine in mammals. Many compounds from natural products has been reported as inhibitors of arginase L. (L.) amazonensis, and the presence of hydroxyl groups in their structures shown to be important for inhibitory activity of the enzyme. This work studies the biochemical interaction between the arginase enzyme, plant extracts, flavonoids and derivatives of caffeic acid. The acetone extract of Qualea grandiflora leaves showed higher inhibitory capacity of arginase (IC50 = 1.7 ± 01 µg/mL) from the analyzed extracts. Among the flavonoids, the most potent compound was taxifolin (IC50 = 1.7 ± 0.2 µM). The verbascosideo was the derivative of caffeic acid with greater potential for arginase inhibition (IC50 = 0.5 ± 0.2 µM) The structures of these compounds can serve as a reference in developing new drugs for the control of leishmaniosis, which target arginase.

La Tunisie est un pays endémique pour la leishmaniose. En 1980, Rioux, Pratlong et Lanotte décrivent en Tunisie une espèce de leishmanie jugée nouvelle et qu'ils nomment alors Leishmania (L.) killicki sur la base d'une trentaine de souches présentant toutes un même nouveau profil isoenzymatique, le zymodème MON-8. Ces souches avaient été isolées à la suite d'une épidémie de leishmaniose cutanée apparue dans les environs de Tataouine. Cependant, le vecteur et le réservoir impliqués dans le cycle de ce parasite demeuraient inconnus.Plus récemment, fin 2010, nous avons pu identifier plusieurs cas de leishmaniose cutanée à L. killicki en dehors du foyer historique de Tataouine, chez des patients originaires de la délégation de Metlaoui, pourtant connue jusqu'alors uniquement comme foyer historique et endémique de leishmaniose cutanée à L. major. Ceci nous encouragea à approfondir nos prospections concernant ce nouveau foyer émergent à L. killicki .C'est dans ce contexte que l'objectif principal de notre thèse fut d'identifier les vecteurs et les réservoirs potentiels de la leishmaniose cutanée à L. killicki et de caractériser le cycle de transmission dans ces foyers par des études parasitologiques, moléculaires et isoenzymatiques.Nos travaux de thèse se sont articulés autour de trois principaux axes de recherche :1) Nous avons mené une étude élargie permettant une caractérisation moléculaire des souches de leishmanies isolées à partir de prélèvements cutanés de patients originaires non seulement de Metlaoui mais également des autres délégations composant le gouvernorat de Gafsa. Dans un premier temps, l'analyse des données nous a ainsi permis d'actualiser la répartition géographique de la leishmaniose cutanée à L. killicki en Tunisie.2) Des études entomologiques recherchant les vecteurs de la leishmaniose cutanée à L killicki nous ont permis :-de réaliser un inventaire faunistique des phlébotomes présents dans les deux foyers principaux, le foyer historique de Tataouine et le foyer émergent de Metlaoui ;-de mettre en évidence le rôle probable de vecteur des phlébotomes de l'espèce Phlebotomus sergenti pour L. killicki ;-d'étudier la variabilité intraspécifique chez les espèces Phlebotomus sergenti et Sergentomyia. minuta en comparant nos spécimens de Tunisie à ceux de nombreux autres pays ;-d'étudier les préférences trophiques des femelles de phlébotomes mettant en évidence leur large spectre d'hôtes lors de la prise de repas sanguin et le caractère non exclusivement herpétophile de Sergentomyia minuta, contrairement à ce qui est souvent rapporté.3) Enfin, nous avons étudié les réservoirs potentiels de la leishmaniose cutanée dans ces foyers en capturant les espèces de rongeurs principalement présentes en milieux urbain et selvatique (Metlaoui et alentours). Une caractérisation moléculaire et isoenzymatique des leishmanies isolées a été réalisée et nous faisons ici état, pour la première fois, de l'identification de L. killicki chez Ctenodactylus gondii et de son rôle probable dans le cycle de transmission de la leishmaniose cutanée à L. killicki en Tunisie. / Tunisia is an endemic country for leishmaniasis. In 1980, Rioux, Pratlong & Lanotte described from Tunisia a new species they called Leishmania (L.) killicki based on the typing of 30 strains isolated from an outbreak of cutaneous leishmaniasis occuring in the Tataouine area and exhibiting a zymodeme: MON-8. The vector and the reservoir if exixting were still uncknown. Human cases have been mentioned out of this area. Gafsa is a province were cutaneous leishmanaisis due to L. major is endemic.The recent identification of L. killicki as the causative agent of a cutaneous leishmaniasis occuring patients from Metlaoui incitated us to explore this focus. This is the aim of our Ph. D. thesis: identification of the Phlebotomine sand flies vector(s) and possible role of reservoirs using both parasitological, isoenzymatical and molecular approaches.Three main topics have been developed during this work:i) To characterize the Leishmania strains from cutaneous lesions obtained from patients from Gafsa area using molecular tools. We updated epidemiological, spatial and clinical data related to L. killicki leishmaniasis in Tunisia.ii) To carry out entomological studies:-to do sand flies inventories in two distinct areas,-to study the molecular intraspecific variablility in Phlebotomus sergenti and Sergentomyia. minuta by comparison of Tunisian specimens with other ones coming from several countries,-to show the probable role of P. sergenti in the transmission of L. killicki,-to study blood meal origin of engorged females: many Phlebotomus are opportunistic species and Sergentomyia minuta is not exclusively herpetophilic.iii) Lastly, we carried out a study on the Leishmania infection on wild and urban rodents in Metlaoui and around this city. The isoenzymatic and molecular typing show the role of Ctenodactylus gondii in the cycle of L. killicki in Tunisia.