Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T20:00:36Z : No. of bitstreams: 1 lima_mwp_dr_botfca.pdf: 347050 bytes, checksum: 56204ce7428a20502b79ab1119ebfc3f (MD5) / Com a crescente demanda de milho doce no mercado brasileiro para diversas finalidades, torna-se necessário o desenvolvimento de materiais cada vez mais produtivos. Neste contexto, esse trabalho objetivou avaliar as capacidades geral e específica de combinação de linhagens endogâmicas de milho doce, portadoras do gene SHRUNKEN-2, bem como, identificar híbridos simples promissores para utilização como enlatados e/ou comercialização de espigas na forma de milho verde. Para isso, foram obtidos híbridos simples por meio de cruzamentos dialélicos parciais incompletos. As avaliações deram-se no ano agrícola 2000/2001 em São Manuel-SP, Piracanjuba-GO e Bragança Paulista-SP. Foram conduzidos 4 experimentos por local, utilizando o delineamento em blocos casualizados no esquema de látice simples 10 x 10, onde as parcelas constituíram-se de 1 linha de 5 metros. A partir dos dados de produção total de espigas com palha, produção comercial com palha, produção comercial sem palha, alturas de planta e de espiga e índice de espigas dos híbridos, foram obtidas as estimativas dos parâmetros genéticos, utilizando-se o método dos quadrados mínimos. Após o desdobramento do quadrado médio dos tratamentos em capacidades geral do grupo 1, do grupo 2 e da capacidade específica de combinação, constatou-se maior variabilidade por parte da capacidade geral de combinação do grupo 2 de genitores; o efeito gênico predominante foi o de origem não aditiva; ocorrência de genitores com boa capacidade combinatória; existência de híbridos promissores para cada local de avaliação. / With the crescent demand of swet corn in the Brazilian market for distinct purposes, it becomes necessary the development of materials more and more productives. In this context, this research objected to evaluate the general and specific combining abilities of sweet corn inbred lines with SHRUNKEN – 2 gene, as well as identify single-crosses promissing to utilization like canned and/ or commercialization of ears as green corn. For that, it was obtained single-crosses by using of partial diallel incomplete crosses. The evaluations were done in 2000 / 2001 in São Manuel – SP, Piracanjuba – GO e Bragança Paulista – SP, Brazil. It was carried out four experiments per place by utilizing the 10 x 10 simple lattice design, where the plots consisted in one line of five meters. From the basis of total production of ear with husk, commercial production with husk, commercial production without husk, plant heigh and ear, and the index of ear from single cross, was obtained by estimation of minimum square. Afterwards the unrolled of the mean square of the treatments in general combining ability of group 1 and group 2, and of the specific combining ability evidencied a large variability apart of general combining ability of the group 2 parentals; the predominant gene ffect was non- additive; occurence of parentals with a good combining ability; and the existence of promissing single crosses for each evaluated place.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-10Bitstream added on 2014-06-13T19:19:16Z : No. of bitstreams: 1 palomino_ec_dr_botfca.pdf: 4053625 bytes, checksum: b416ac667984336bd9b3ad14c289d000 (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo verificar o comportamento de genótipos de feijoeiro do grupo comercial carioca, na época das águas, visando selecionar aqueles que apresentassem melhores características agronômicas e tecnológicas. Para tanto, quinze cultivares e treze linhagens foram avaliadas durante os anos agrícolas 2000 e 2001 no município de São Manuel - SP. O delineamento experimental foi de blocos casualizados, com quatro repetições. A parcela experimental foi constituída de 4 linhas de 4 m de comprimento com espaçamento entre linhas de 0,5 m, considerando como área útil as duas linhas centrais. Avaliaram-se características como altura da inserção da primeira vagem, comprimento das vagens, florescimento pleno e ciclo, os componentes da produção (número de vagens por planta, número de grãos por planta, número de grãos por vagem e massa de 100 grãos), população final de plantas e produtividade de grãos, além das características tecnológicas dos grãos, teor de proteína bruta, tempo para cozimento e capacidade de hidratação. Em termos gerais, constatou-se produtividades de grãos satisfatórias para todos os genótipos, com destaque para as linhagens CNFC 8005, CNFC 8010, CNFC 8156, CNFC 8006, CNFC 8007, CNFC 8008, CNFC 8011, CNFC 8012 e CNFC 8013 e as cultivares IAC Carioca, Rudá, IAPAR 81, FT Bonito e Aporé. As cultivares Aporé, Porto Real e as linhagens RELAV 37-19 e EL 49 apresentaram boas qualidades tecnológicas, alem de teores de proteína acima de 23%. / The research had as objective to verify the behavior of common bean genotypes of carioca commercial crop, cultivated as rainy bean, aiming to select plants showing the best agronomic and technological characters. For that, 15 cultivars and 13 lineage have been evaluated in 2000 and 2001 in São Manuel city (SP, Brazil). The experiment was set up as a randomized block design with 4 replications. The plots were constituted by 4 lines with 4 meters spaced in 0.5 meter between lines. We considered two central lines as the useful plot. The agronomic traits evaluated were, first string bean insertion height, string beans length, flowering and plant life cycle, productivity data (number of string beans per plant, number of grains per plant, number of grains per string bean, mass of 100 grains), final stand of plants and grain productivity in 2000 and 2001, technological characteristics of the grains, as gross protein level, time for cooking and ability of water absorption. In general, it was evidenced that all genotypes showed good satisfactory grain productivities. It also was verified that the favorable environment conditions in 2000 have showed highers grains yield of genotypes, with emphasis on the CNFC 8005, CNFC 8010, CNFC 8156, CNFC 8006, CNFC 8007, CNFC 8008, CNFC 8011, CNFC 8012 and CNFC 8013 lines and IAC Carioca, Rudá, IAPAR 81, FT Bonito and Aporé cultivars showed the best grain yield. The Aporé, Porto Real cultivars and RELAV 37-19 and EL 49 lines have showed better technological qualities and protein levels higher than 23%.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-09Bitstream added on 2014-06-13T19:40:07Z : No. of bitstreams: 1 aragao_ca_dr_botfca.pdf: 1161671 bytes, checksum: afd46a3743d52d4b2ec59f8c3237449e (MD5) / Visando avaliar o potencial produtivo de híbridos simples de milho super doce, bem como, a capacidade de combinação de vinte e cinco linhagens que lhes deram origem, através de um cruzamento dialélico parcial, foram avaliados cento e vinte híbridos, em São Manuel (SP) local 1, SAKATA/Sudameris (SP) local 2 e Arisco (GO) local 3, usando-se látice simples 11x11 com duas repetições por local. Foram tomados os dados de Produção total de espigas com palha corrigida para o estande; Produção comercial corrigida para o estande, Peso de cinco espigas comerciais com palha; Peso de cinco espigas comerciais sem palha; Produção espigas com. Sem palha, corrigida para estande e 76% de água, Comprimento de espigas; Diâmetro de espiga; Atura da planta e Altura de inserção espiga. As análises estatísticas e genéticas mostraram alta significância das interações de híbridos e capacidade geral e específica de combinação com os locais. De maneira geral observou-se maior produção para os caracteres avaliados no local 2 SAKATA/Sudameris. Comparando-se os híbridos testados com o híbrido comercial DO- 04, para todos os locais, observou-se que foi possível o desenvolvimento de híbridos simples (HS) superiores para a maioria dos caracteres avaliados. De maneira geral obteve-se uma boa combinação entre uma bom número de linhagens, sendo que para o caráter PC5Esp (76%), as melhores linhagens quanto à CGC, do grupo 1, foram 657; 750 e 656, do grupo 2, 636; 628 e 333. Foi possível indicar os seguintes híbridos específicos: (44)421x320 e (68)657x320, mostrando grande potencial para programas de melhoramento de milho doce. / One hundred and twenty simple hybrids of super sweet corn were evaluated at São Manuel, SP (site 1), SAKATA/Sudameris, SP (site 2) and at Arisco, GO (site 3), using simple lattice 11x11 with two replications aiming to estimate the producing potential of the hybrids, as well as the combination capacity of 25 inbreds that originated them, by a partial diallel crossing. The data assessed were total husked ear production corrected for stand; commercial production corrected for stand; weight of five commercial husked ears; weight of five commercial dehusked ears; dehusked ears production corrected for stand and 76% humidity; ear length; ear diameter; plant height and height of ear insertion. The statistical and genetic analysis showed high significance of hybrids interactions and general and specific combine ability with the sites. In general, an improved production was observed for the evaluated characters at site 2 SAKATA/Sudameris. Comparing the tested hybrids with the commercial hybrid DO-04, at all the sites superior simple hybrids were developed for every evaluated character. In general, there was a good combination between a great number of inbred. For the dehusked ears production corrected for stand and 76% humidity character, the best CGC inbreds of group1 were 657; 750 e 656, and of group 2 were, 636; 628 e 333. It was possible to indicate the specific hybrids: (44)421 x 320 and (68)657 x 320, which have great potential for sweet corn breeding programs.

Orientador: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Alba Regina de Abreu Lima / Banca: João Aristeu da Rosa / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Lilian Madi-Ravazzi / Resumo: A doença de Chagas é uma enfermidade de natureza endêmica, com pronunciada relevância na América do Sul. Um dos principais vetores do Trypanosoma cruzi, causador desta enfermidade, é o triatomíneo Triatoma infestans. Apesar de ter sua incidência reduzida, novos casos de reinfestação apontam a dificuldade do controle vetorial sobre esta espécie devido às suas características biológicas e genéticas, indicando, assim, a importância de se compreender a variabilidade genética neste inseto. No presente trabalho, foi elaborada uma revisão com o objetivo de reunir e organizar os dados disponíveis relacionados à variabilidade genética em T. infestans, permitindo eleger os principais e mais informativos genes, assim como evidenciar os índices de variabilidade intra-populacional e inter-populacional. Complementarmente, foi estudada a variação das regiões heterocromáticas, por meio da citogenética clássica e molecular. A aplicação da técnica de bandamento-C convencional e o uso de fluorocromos em nove linhagens e a técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH), com sondas específicas para regiões de DNA satélite em oito linhagens, permitiram observar a grande variação existente na quantidade e distribuição dessas regiões. Os resultados confirmaram a existência de dois grupos com notáveis diferenças genômicas, diferenciadas, principalmente, pela perda de material genético nas linhagens nãoandinas. A variabilidade intraespecífica observada pelas análises citogenéticas revelou uma extraordinária dinâmica genômica que ocorreu durante a dispersão desta espécie / Abstract: Chagas disease is an endemic illness of great relevance in South America. Within the triatomines, Triatoma infestans is one of the most important vectors of Trypanosoma cruzi, the causative protozoan of this disease. Its incidence is controlled, but new cases of reinfestation still occur, and they indicate the difficulties of vector control for this species due to its biological and genetic characteristics. Thus, it is important to understand the genetic variability of this species of insect. In this study, we present a review of the literature in order to gather and organize the data available on genetic variability of T. infestans. This review made it possible for us to elect the most appropriate genes and highlight the rates of intra-population and inter-population variability. The variation in the heterochromatic regions was also studied using classical and molecular cytogenetics. The application of the conventional C-banding technique combined with the use of fluorochromes in nine strains, as well as the application of the fluorescent in situ hybridization technique (FISH) with specific probes for regions of DNA satellite in eight strains, all together revealed the existence of noteworthy variation in the amount and distribution of these regions. The results confirmed the existence of two groups with remarkable genomic differences, which are distinguished mainly by the loss of genetic material in non-Andean lineages. The intraspecific variability observed through cytogenetic analysis revealed the extraordinary genomic dynamics that occurred during the dispersion of T. infestans / Doutor

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química. / Made available in DSpace on 2012-10-23T15:42:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 245245.pdf: 4859754 bytes, checksum: a282253f9f9e6f01dd1621b1fac45aab (MD5) / O estudo das interações entre células e substrato na engenharia de tecidos é de grande importância para a determinação das propriedades biológicas dos implantes. A adesão das células ao substrato influencia na morfologia, proliferação e viabilidade celular. Neste trabalho foram avaliadas a adesão, proliferação e viabilidade de fibroblastos de camundongo, linhagem L929, em suporte biopolimérico. Dois tipos de celulose bacteriana foram utilizados: uma produzida em laboratório e outra comercial (BIONEXT®). Os fibroblastos foram cultivados sobre as membranas em meio DMEM, suplementado com 10% de SBF a 37°C, contendo 5%CO2, e diferentes parâmetros celulares foram escolhidos com o objetivo de monitorar e avaliar o comportamento das células em diferentes tempos de cultivo nas membranas. Foram observadas diferenças morfológicas significativas nas células. Os fibroblastos permaneceram com morfologia arredondada. A celulose bacteriana permitiu a adesão, crescimento, proliferação e viabilidade das células. The study of the dynamic behavior and adhesion between cells and substrates in tissue engineering is of major importance to predict the final biological properties of tissue implants. The adhesion of cells on the substrate influences morphology, proliferation and cellular viability. In this work, adhesion, proliferation and viability of L929 mouse fibroblasts on bacterial cellulose (BC) membranes were evaluated in vitro. Two kinds of cellulose membranes were used; a produced in the laboratory and a commercially available (BIONEXT®). Fibroblasts were cultivated on the membranes in a DMEM medium supplemented with 10% of SBF at 37°C, containing 5% of CO2, and different cellular parameters were chosen to evaluate the cell behavior on the membranes in function of time. Significant morphologic differences were observed in the cells. Although the fibroblasts were well adhered to the membrane, they maintained a round-shape. Bacterial cellulose membranes allowed cell adhesion, growth, proliferation and viability.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-23T22:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 249957.pdf: 305651 bytes, checksum: 44670f55984b0c3df4c99c7e64d2cf58 (MD5) / As linhagens de ratos Floripa H e Floripa L, selecionadas bidirecionalmente para extremos de locomoção no centro do teste do campo aberto (CA), um comportamento relacionado à emocionalidade, foram propostas como um modelo animal para estudar a genética da ansiedade. As duas influência de dois locus para traços quantitativos (QTLs). Ambos QTLs foram previamente identificados em uma geração F2 resultante do acasalamento de ratos LEW e SHR afetando a ativividade locomotora no centro do CA, o mesmo fenótipo foi utilizado como parâmetro de seleção nas linhagens Foripa. Os dois QTLs, um no cromossomo 4 e outro no 7, respectivamente, foram denominados de open field inner locomotion QTL 1 (Ofil1) e open field inner locomotion QTL 2 (Ofil2). O presente estudo teve como objetivo verificar se os QTLs (Quantitative Trait Locus) Ofil1 e Ofil2, sabidamente associados a comportamentos emocionais em ratos derivados das linhagens isogênicas LEW e SHR, estariam da mesma forma contribuindo para este fenótipo comportamental nas linhagens Floripa, selecionadas a partir de uma resultante de um intercruzamento entre linhagens parentais ainda não investigadas do ponto de vista genotípico. Com este objetivo, foram utilizados quatro marcadores moleculares do tipo microssatelite, dois flanqueando o pico de Ofil1 (D4RAT59 e D4MGH27) e dois flanquando o pico de Ofil2 (D7MGH11 e D7RAT35), que se mostraram polimórficos para o modelo animal em estudo. Para verificar se o genótipo destas duas regiões estaria influenciando o fenótipo selecionado, ratos de cinco gerações foram genotipados para os quatro marcadores utilizados. Mudanças nas freqüências alélicas e genotípicas ao longo do processo de seleção foram avaliadas para verificar se a seleção imposta ao fenótipo foi acompanhada por divergências genotípicas entre as linhagens. Foram observadas alterações nas freqüências genotípicas em todos marcadores moleculares para ambos os QTLs, porém somente os genótipos para os marcadores no locus Ofil1, pareceram estar significativamente correlacionados com a variação no fenótipo selecionado. Este resultado sugere que nesta região do genoma deve existir um ou mais genes contribuindo para a variação interindividual na locomoção na área aversiva do teste do CA. As alterações nas freqüências genotípicas observadas para os marcadores do QTL Ofil2, por aparentemente não apresentarem correlação com o fenótipo, parecem ser resultado de deriva genética aleatória, talvez com pequena contribuição. Portanto, através deste trabalho, corrobora-se a influência do locus Ofil1,em diferentes linhagens de ratos, para um comportamento relacionado à emocionalidade, porém o efeito de Ofil2 não pode ainda ser descartado. The strains of rats named Floripa H and L, bidirectionaly selected to extremes of locomotion in the centre of the test of open field (OF), an emotionality-related behavior, were proposed as an animal model to study the genetics of anxiety. The two strains were developed in order to investigate the influence of two quantitative trait locus (QTLs) Both QTLs were previously identified in a generation F2, resulting from the mating of rats and LEW SHR, affecting the locomotor activity in OF test, the same phenotype was used as a parameter for selection in Floripa strains. The two QTLs, one on chromosome 4 and another at 7, respectively, were called open field inner locomotion QTL 1 (Ofil1) and open field inner locomotion QTL 2 (Ofil2). This study aimed to ascertain whether the QTLs (Quantitative Trait Locus) Ofil1 and Ofil2, known associated with emotional behavior in rats isogenic lines derived from LEW and SHR, would be the same way contributing to this behavioral phenotype among strains Floripa, selected from of a generation of animals resulting from an intercruzamento between parental strains have not yet investigated the point of view genotipic. Two loci for central locomotion in the open field test (OF) were identified in the F2 generation resulting from the intercross of LEW and SHR rats. A locus on chromosome 4 and another on chromossome 7, respectively, were named Ofil1 and Ofil2. The present study aimed to verify whether the QTLs (Quantitative Trait Locus) Ofil1 and Ofil2, known to be associated with emotional behaviors in rats derived from the strains LEW and SHR, would contribute to the same behavioral phenotype in Floripa H and L rats, selected from another population of animals. With this objective, we used four molecular microssatelite markers, two flanking the peak of Ofil1 (D4RAT59 and D4MGH27) and two flanking the peak of Ofil2 (D7MGH11 and D7RAT35), which were polymorphic for the animal population under study. To verify whether the genotype of these two regions would influence the selected phenotype, five generations of rats were genotyped for the four markers used. Changes in genotypic and allelic frequencies throughout the process of selection were evaluated to determine if the selection on the phenotype was accompanied by genotypic differences between the strains. There were changes in genotypic frequencies in all molecular markers for both QTLs, but only the markers on locus Ofil1, seemed to be significantly correlated with the changes in the phenotype. This result suggests that this region of the genome may contain one or more genes contributing to the interindividual variation in locomotion in the aversive area test of the OF. The changes in genotypic frequencies observed for the QTL Ofil2 markers, had apparently no correlation with the phenotype, as it appeared to be the result of random genetic drift, perhaps with little effect of selection. therefore, through this work, we confirm the influence of the locus Ofil1, in different strains of rats, on an emotionality-related behavior, but the effect of Ofil2 is not totally discarded.

A linhagem de glioma de rato C6 tem sido amplamente utilizada para investigar vários aspectos da biologia celular. Esta linhagem apresenta variações morfológicas, bioquímicas e fisiológicas de acordo com o número de passagens em cultivo. Segundo a literatura, culturas de passagens recentes apresentam características similares a glioblastomas, enquanto que culturas de passagens tardias assemelham-se à astroglia madura. Devido a isso, muitos estudos têm utilizado a linhagem C6 como modelo celular de glioblastoma e de astrócitos para investigar parâmetros relacionados ao sistema glutamatérgico, como por exemplo, captação de glutamato. Entretanto, até o presente momento a caracterização e comparação desses parâmetros entre as culturas da linhagem C6 de passagens recentes e tardias ainda não foram avaliadas. O objetivo desta dissertação foi investigar e comparar alguns parâmetros do sistema glutamatérgico entre as culturas de C6 com passagens recentes e tardias. As passagens recentes apresentaram um conteúdo intracelular de [3H] derivado da captação de L-[3H]-Glu 55% maior quando comparadas às passagens tardias e ambas as culturas atingiram o platô a partir dos 120min de incubação. Além disso, ambas as culturas apresentaram, após incubação com glutamato, os mesmos níveis de incorporação de iodeto de propídeo. Este resultado indica que o menor nível intracelular de [3H] observado nas culturas de passagens tardias não se deve a uma alteração na permeabilidade ou integridade de membrana dessas células. Ambas as culturas expressam somente o transportador Na+ dependente de alta afinidade EAAC1 (carreador de aminoácido excitatórios 1), sendo que sua expressão total foi similar tanto nas culturas de passagens recentes quanto nas tardias. Para verificar se a captação de L-[3H]-Glu estava ocorrendo através de outro sistema de transporte, as culturas foram incubadas na presença ou ausência de PDC (L-trans-2,4--trans-Pyrrolidine-2,4-dicarboxylic acid ) ou TBOA (DL-threo-β-Benzyloxyaspartic acid). O tratamento com os inibidores reduziu de forma similar a captação de L-[3H]-Glu tanto nas culturas de passagens recentes quanto nas tardias, indicando que este aminoácido é captado principalmente através do transportador de alta afinidade EAAC1. Com relação à liberação de glutamato, observou-se que 50% da radioatividade incorporada na forma de L-[3H]-Glu foi liberada para o meio extracelular tanto nas passagens recentes quanto nas tardias após 2h de incubação. Este resultado pode estar relacionado com o estabelecimento do platô do conteúdo intracelular de [3H] observado após 120 min de captação de L-[3H]-Glu. Para investigar se a liberação de L-[3H]-Glu ocorreu via transporte reverso dos transportadores Na+ dependentes de alta afinidade, ambas as culturas foram incubadas na presença do inibidor não transportável TBOA. Não foi observada alteração no perfil de liberação de radioatividade intracelular nas culturas após incubação com TBOA. Para verificar se a metabolização do L-[3H]-Glu estaria relacionado com a diferença nos níveis intracelulares de [3H], ambas as culturas foram incubadas com o análogo não-metabolizável D-[3H]-Asp. Tanto as passagens recentes como as tardias apresentaram um aumento tempo-dependente do conteúdo de [3H] derivado da captação de D-[3H]-Asp, não atingindo o platô. Além disso, o bloqueio dos transportadores Na+ dependentes de alta afinidade por PDC ou TBOA reduziu a captação de D-[3H]-Asp em ambas as culturas, indicando que sua captação ocorreu principalmente através deste tipo de transporte. Além disso, diferentemente do observado com L-[3H]-Glu, apenas 10% do D-[3H]-Asp captado é liberado após 2h de incubação em ambas as culturas. Este resultado, juntamente com a não inibição por TBOA da liberação da radioatividade captada na forma de L-[3H]-Glu, indica que possivelmente o que está sendo liberado para o meio extracelular é um metabólito marcado com [3H] e não o próprio L-[3H]-Glu. Além disso, nas passagens tardias, o conteúdo de [3H] derivado da captação de D-[3H]-Asp foi menor quando comparado com as passagens recentes aos 60 e 120 min de incubação, sugerindo que as passagens recentes possuem intrinsecamente uma maior capacidade de transporte tanto de L-[3H]-Glu quanto de D-[3H]-Asp quando comparadas às passagens tardias. Os resultados dessa dissertação demonstram que as passagens recentes e tardias da linhagem de glioma C6 diferem na sua capacidade de acumular o [3H] derivado da captação de L-[3H]-Glu. A maior capacidade das passagens recentes da linhagem C6 em acumular a radioatividade não está relacionada a uma maior expressão dos transportadores de glutamato e nem a uma reduzida liberação de L-[3H]-Glu para o meio extracelular. Como conclusão, os resultados obtidos nesta dissertação indicam que o número de passagens deve ser considerado em futuros estudos que pretendam avaliar parâmetros relacionados ao sistema glutamatérgico utilizando a linhagem C6 como modelo celular. / Rat C6 lineage has been widely used to investigate several aspects of cell biology. This lineage presents morphological, biochemical and physiological variations according to number of passages in culture. Early passage cells exhibit characteristics similar to glioblastomas, whereas later passage cells resemble mature astroglia. Thus, many studies have been using C6 lineage as astroglial and glioma model to investigate several parameters related to glutamatergic system, such as glutamate uptake. However, the characterization and comparison of these parameters between C6 cultures at early and late passages have not been evaluated. Therefore, the aim of this study was to investigate and compare some glutamatergic system parameters between early and late passage C6 cells in cultures. Early passages have an L-[3H]-Glu-derived intracellular content of [3H] 55% higher when compared to later passages and both cultures reached plateau at 120 min. In addition, after incubation with glutamate, both cultures showed the same levels of propidium iodide incorporation. This result indicates that lower levels of intracellular [3H] in later passages are not due to an alteration of cellular membrane permeability. Both cultures expressed only the higher affinity Na+ dependent transporter EAAC1, and its total expression was similar in early and later passage cultures. To verify if L-[3H]-Glu uptake occurred through another kind of glutamate transport system, the cultures were incubated in the presence or absence of PDC or TBOA. Treatment with this inhibitors reduced the L-[3H]-Glu uptake in both cultures at same levels, indicating that glutamate is taken up mainly by the higher affinity transporter system. Regarding the release of glutamate, it was observed that 50% of the radioactivity incorporated as L-[3H]-Glu was released to extracellular medium in both early and late passages after 2 h of incubation. This result could be related to the establishment of the plateau observed after 120 min for intracellular content of [3H] derived from L-[3H]-Glu uptake. To investigate if the release of L-[3H]-Glu occurred trough reverse transport, both cultures were incubated in the presence of non-transportable inhibitor TBOA. There was no alteration of intracellular radioactivity release in cultures after incubation with TBOA. In order to verify if the metabolism of L-[3H]-Glu could be related to the differences in intracellular levels of [3H], both cultures were incubated with the non-metabolizable analogue D-[3H]-Asp. Early and late passage C6 cells showed a time-dependent increase in intracellular content of [3H] derived from D-[3H]-Asp uptake, without reaching the plateau. Moreover, blockade of Na+ dependent transporters of high affinity by PDC or TBOA reduced D-[3H]-Asp uptake in both cultures, indicating that uptake occurred mainly through EAAC1. Moreover, differently from L-[3H]-Glu, only 10% of D-[3H]-Asp captured is released after 2 h of incubation in both cultures. This result, taken together with the fact that TBOA did not inhibit the release of radioactivity captured as L-[3H]-Glu, indicates that a [3H]-metabolite is being released to extracellular medium and not L-[3H]-Glu itself. Moreover, in later passages, D-[3H]-Asp-derived intracellular content of [3H] was lower when compared to early passages at 60 and 120 min of incubation, suggesting that early passage C6 cells intrinsically have a greater capacity to transport both L-[3H]-Glu and D-[3H]-Asp when compared to later passages. This study demonstrates that early and late passage C6 cells differ in their ability to accumulate L-[3H]-Glu-derived intracellular content of [3H]. From 60 min of incubation, early passages have an intracellular content of [3H] derived from L-[3H]-Glu uptake 55% higher in relation to later passages. This increased capacity is not related to a higher expression of glutamate transporters nether nor by reduced release of L-[3H]-Glu to extracellular medium. In conclusion, our results indicate that the number of passages should be considered in future studies that intent to evaluate parameters relating to glutamatergic system using Rat C6 lineage as cell model.

Os gliomas malignos, tumores que normalmente originam-se de células da linhagem astrocítica, são os mais comuns e devastadores tumores primários do sistema nervoso central. O Glioblastoma multiforme (GBM) é a classe mais freqüente e uma das formas mais agressivas de câncer. Como conseqüência, a sobrevivência após o diagnóstico é geralmente de menos de um ano. Desta maneira, novas estratégias terapêuticas se fazem necessárias. Durante as últimas décadas, estudos sobre compostos naturais têm tido sucesso no que diz respeito à pesquisa de agentes anti-câncer, sendo que os alcalóides aporfinóides representam uma categoria com grande potencial. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da boldina, um alcalóide aporfinóide do Peumus boldus, em linhagens de glioma, e investigar os possíveis mecanismos de ação envolvidos com este efeito. A boldina foi capaz de diminuir o percentual de células das linhagens U138-MG, U87-MG e C6. Neste estudo, observamos células necróticas após tratamento na linhagem C6. O mesmo efeito não foi observado para baixas concentrações do tratamento nas linhagens U138-MG e U87-MG. A exposição à boldina por 24 h não causou ativação das caspases 3 e 9, executoras-chave da apoptose, ou clivagem do substrato PARP. De acordo com a análise do ciclo celular, boldina induziu parada na fase G2/M. O índice mitótico também demonstrou redução no número de mitoses. O tratamento com boldina não causou dano no DNA das células U138-MG e não afetou células normais (fatias organotípicas de hipocampo de ratos) com a mesma extensão que afetou as células tumorais. De acordo com estes resultados, sugerimos que a boldina pode ser um novo composto para o desenvolvimento de estratégias anticâncer. / Malignant gliomas, tumors that usually arise from cells of astrocytic lineage, are the most common and devastating primary tumors of the central nervous system. Glioblastoma multiforme (GBM) is the most frequent class and one of the most aggressive forms of cancer. As a consequence, survival after diagnosis is normally just less than 1 year. In this manner, new therapeutic strategies are urgently needed. During the last decades, works on natural compounds have been particularly successful in the field of anticancer drug research, and the aporphines alkaloids represent an interesting, potencially useful category of this agents. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of boldine, an aporphine alkaloid of Peumus boldus, in glioma cell lines, and investigate the possible mechanisms involved in this effect. Boldine was capable to decrease the percentage of cells in U138-MG, U87-MG and C6 glioma lineages. In this study we observed necrotic cells in C6 lineage after treatment. The same effect was not seen in low concentrations of treatment in U138-MG and U87-MG lineages. The exposure to boldine for 24 h did not result in increase of the activation of caspase-3 and caspase-9, key executioners in apoptosis. No increase in cleavage of the downstream substrate PARP was observed. According to cell cycle analysis, boldine appeared to induce G2/M arrest in U138-MG cells. Mitotic index also showed a reduction in the percentage of cells in mitosis. The treatment with boldine did not caused DNA damage in U138-MG cells and did not affect normal cells (rat organotypic hippocampal slices) to the extent that it affects tumor cells. According to these results, we suggest that boldine could be a new compound to the development of anticancer therapies.

Glioblastoma multiforme é a forma mais comum e agressiva de tumor cerebral que apresenta um severo crescimento e um comportamento altamente invasivo. Linhagens de células de glioma em cultura apresentam alta atividade da enzima ecto-5’-nucleotidase que metaboliza AMP em adenosina. Em adição, ela também interage com componentes da matriz extracelular como molécula adesiva. Neste trabalho, nós avaliamos o efeito de diferentes componentes da matriz extracelular sobre a atividade da ecto-5’-nucleotidase, proliferação, adesão e migração celular na linhagem de células de glioma humano U138-MG. Os resultados obtidos mostraram uma inibição da atividade enzimática da ecto-5’- nucleotidase quando tratada com laminina sozinha e com fibronectina ou laminina em co-tratamento com dextran sulfato. O dextran sulfato mostrou reduzir a proliferação em 37%. O mesmo efeito foi observado para os co-tratamentos entre dextran/laminina (29%) e dextran/colágeno (28%). A presença de adenosina diminuiu a adesão celular em torno de 40% e o APCP aumentou a adesão em 75%. Laminina inibiu a adesão celular, já a condroitina sulfato aumentou em 70%. As células U138 apresentaram uma redução da adesão e migração celular quando tratadas apenas com dextran e também no co-tratamento deste com adenosina e APCP. Diante dos resultados podemos sugerir a modulação da atividade da ecto5’-nucleotidase e assim uma modulação da produção de adenosina por moléculas da matriz extracelular, afetando assim eventos celulares envolvidos no comportamento invasivo destas células tumorais. / Glioblastoma multiforme is the most aggressive form of brain tumor that shows a severe growth and highly invasiveness behavior. Glioma cell lines in culture present a high activity of the ecto-5’-nucleotidase (ecto-5’-NT/CD73) which metabolizes AMP to adenosine. In addition, ecto-5’-NT/CD73 also has contact with extracellular matrix components like adhesive molecule. In the present paper, we evaluate the effect of distinct extracellular matrix components on the ecto-5’- NT/CD73 activity, proliferation, adhesion and migration in U138-MG human glioma cell line. The results showed an inhibition of enzymatic activity of ecto-5’NT/CD73 in the presence of laminin, fibronectin plus dextran sulfate and laminin plus dextran sulfate. In the proliferation assay it was observed that dextran sulfate reduced the proliferation in 37% and in association with collagen type I or laminin, the proliferation was reduced too (28% and 29%, respectively). The presence of adenosina decreased of adhesion at about 40% and when treated with APCP increased in 75%. Laminin inhibited the cell adhesion and chondroitin sulfate increased in 70%. U138 cells presented reduction of adhesion and cell migration in the presence of dextran sulfate alone and in the presence of adenosine and APCP. Taken together these results suggest the modulation of ecto-5’-NT/CD73 activity and production of adenosin by extracellular matrix molecules, affecting cell events involved in the invasiveness behavior this tumor cells.

As células estreladas hepáticas (HSCs) são a principal fonte de componentes de matriz extracelular em doenças crônicas do fígado e, por esta razão, exercem um papel fundamental no desenvolvimento e na manutenção da fibrose hepática. Os nucleotídeos e nucleosídeos são moléculas sinalizadoras que regulam diversos processos no fígado e têm um importante papel na patogênese da fibrose hepática. As ecto-nucleosídeo trifosfato difosfoidrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotídeo pirofosfatase fosfodiesterases (E-NPPs), ecto-5’-nucleotidase (eNT/CD73) e a fosfatase alcalina tecido inespecífica (TNALP) são enzimas localizadas na superfície celular que regulam a concentração dos nucleotídeos no meio extracelular e, desse modo, modulam os efeitos biológicos mediados por eles via ativação dos receptores P1 e P2. Assim, neste estudo nós comparamos o metabolismo extracelular de nucleotídeos e o nível transcricional das ectoenzimas em HSCs quiescentes e ativadas usando uma linhagem de células estreladas hepáticas murina GRX. Estas células expressam o fenótipo miofibroblástico em meio basal e o tratamento com retinol ou indometacina induz a mudança das células GRX para o fenótipo quiescente das HSCs. Os dois fenótipos das células GRX expressam as NTPDase3 e 5, NPP1, 2 e 3, ecto-5’- nucleotidase e TNALP. Entretanto, apenas as HSCs ativadas expressam a NTPDase6. Nas HSCs quiescentes, a hidrólise de nucleosídeos trifosfatados foi significativamente mais alta e foi correlacionada com o aumento na expressão do mRNA da Entpd3 e ENPP3. Os nucleosídeos difosfatados foram hidrolisados de maneira similar pelos dois fenótipos das células GRX e esta atividade foi associada com o aumento da expressão do mRNA da Entpd5 nas células quiescentes e com a expressão da Entpd6 apenas nas HSCs ativadas. A atividade AMPásica foi maior nas células quiescentes do que nas células ativadas e foi relacionada com o aumento da atividade e da expressão do mRNA da ecto-5’-nucleotidase. O tratamento com retinol também envolve a ativação transcricional da TNALP. Para analisar o papel fisiológico da eNT/CD73 nas HSCs, o mRNA e a expressão desta proteína foram reduzidos nas células GRX utilizando a técnica de RNAi. O knockdown da eNT/CD73 aumentou a expressão do mRNA da TNALP e do colágeno I e alterou a adesão e a migração celular através de um mecanismo independente da hidrólise de nucleotídeos. Nós também avaliamos o efeito da adenosina na regulação de marcadores de ativação das HSCs. Este nucleosídeo diminuiu a proliferação, a migração, a transcrição de colágeno I e das metaloproteinases 2 e 9 e diminuiu a transcrição da eNT/CD73. As diferenças na atividade e expressão das ectonucleotidases entre os dois fenótipos das células GRX sugerem que estas enzimas modulam a concentração de nucleotídeos/nucleosídeos e geram efeitos distintos na sinalização purinérgica nos dois fenótipos e podem ser importantes alvos na regulação das funções das HSCs. / Hepatic stellate cells (HSC) are recognized as a primary cellular source of matrix components in chronic liver disease and, therefore, play a critical role in the development and maintenance of liver fibrosis. Nucleotides and nucleosides are signaling molecules that regulate a variety of activities within the liver and play a role in the pathogenesis of hepatic fibrosis. Ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolases (E-NTPDases), ecto-nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterases (E-NPPs), ecto- 5’-nucleotidase (eNT/CD73) and tissue non-specific alkaline phosphatase (TNALP) are enzymes that are located at the cell surface and regulate the concentration of extracellular nucleotides, thereby modulating their biological effects by the activation of P1 and P2 receptors. Thus, in the study we compared the extracellular metabolism of nucleotides and transcriptional levels of ectoenzymes in activated and quiescent HSC of the mouse hepatic stellate cell line GRX. This cell line expresses a myofibroblast phenotype in basal medium and both retinol and indomethacin treatment induced a phenotypic change of GRX cells to quiescent HSC. Two phenotypes of GRX cells expressed NTPDase3 and 5, NPP1, 2 and 3, ecto-5’-nucleotidase/CD73 and TNALP. However, only activated HSC expressed NTPDase6. In quiescent HSC, the hydrolysis of triphosphonucleosides was significantly higher and was related to an increase in Entpd3 and ENPP3 mRNA expression. The diphosphonucleosides were hydrolyzed at a similar rate by two phenotypes of GRX cells and this hydrolysis was associated with an up-regulation of Entpd5 mRNA expression in quiescent-like HSC, whilst Entpd6 mRNA expression was observed only in activated HSC. The AMPase activity in quiescent HSC was higher than myofibroblasts and was related to an increase in ecto-5’-nucleotidase activity and its mRNA expression. The treatment with retinol also involves transcriptional activation of TNALP. To analyze the biological significance of eNT/CD73 in HSC, the expression of eNT/CD73 mRNA and protein was reduced in GRX cell line using the technique of RNAi. ENTCD73 knockdown leads to an increase in mRNA expression of TNALP and collagen I, and a clear alteration of cell adhesion and migration by a mechanism not dependent of changes in nucleotide metabolism. We also tested the effect of adenosine on the regulation of activation markers of in HSCs. This nucleotide decreased proliferation, migration, transcription of collagen I and matrix metalloproteinases 2 e 9 and increased transcription of eNT/CD73. The differential ectonucleotidases activities and expressions in two phenotypes of GRX cells suggest that these enzymes modulate the concentration of nucleotides/nucleosides and affect purinergic signaling differently in the two phenotypes and may play a role in the regulation of HSC functions.