La voie de signalisation Notch est une signalisation fortement conservée chez les metazoans. Elle régule nombreux processus biologiques, y compris le développement embryonnaire, l'homéostasie tissulaire en particulier dans la décision du destin cellulaire. Largement décrit dans la tumeurigénèse, la voie Notch est aussi un régulateur clé dans l'angiogenèse. De plus en plus d'études montrent que la voie Notch joue un rôle important dans régulation d'angiogenèse tumorale. Par conséquent, divers d'efforts ont été faits pour inhiber la voie canonique de Notch. Jusqu'à aujourd'hui, appart Notch1, d'autre récepteurs Notch ont été très peu étudiés dans l'angiogenèse tumorale. Notch3 exprimé restreint dans le systèm vasculaire, n'a jamais été étudié dans le contexte de l'angiogenès tumorale. Par consequent, l'objectif de ma thèse est d'étudier le rôle de Notch3 dans l'angiogenès tumorale. Ici, nous avons montré une expression abérrant de Notch3 dans les cellules endotheliales tumorales où il présente un effect inattendu. En inhibant Noth3 dans le microenvironnement de la tumeur, nous avons montré que Notch3 limite l'angiogenèse tumorale par sa fonction pro-apoptotique dans les cellules endothéliales tumorales, ce qui entraîne une inhibition de la croissance tumorale. De plus, nous avons constaté que l'expression de JAG1 ont été argumenté dans une fraction des cancers humains. En outre, JAG1 dérivé de la tumeur favorise la survie des cellules endothéliales tumorales en inhibant l'effet pro-apoptotique de Notch3. Nous présentons ici pour la première fois que Notch3 est un récepteur de dépendance induisant une apoptose dans les cellules endothéliales tumorales qui est bloqué par JAG1. Par conséquent, nous montrons que l'effet antitumoral bien documenté médié par l'inhibition de la ?-sécrétase dépend au moins en partie de l'apoptose induite par Notch3 dans les cellules endothéliales / The Notch signalling is a highly conserved signalling which mediates numerous of biological processes, including embryonic development, tissue homeostasis especially in the cell fate decision. Widely implicating in tumorigenesis, the Notch signalling is also a key regulator of angiogenesis. Increasing number of studies showed that, the Notch signalling plays an important role in mediating tumour angiogenesis. Therefore, various efforts have been made to inhibit the canonical Notch pathway. To date, besides Notch1, other Notch receptors were few studied in tumour angiogenesis. Notch3, expressed restrictedly in vascular system, has never been studied in the tumour angiogenesis context. Therefore, the objective of my thesis is to study the role of Notch3 during tumour angiogenesis. Here, we showed that Notch3 is aberrantly expressed in tumour endothelial cells where it presents an unexpected pro-apoptotic effect. By silencing Noth3 in the tumour microenvironment, we showed that Notch3 limits tumour angiogenesis via its pro-apoptotic function in tumour endothelial cells which results in inhibition of tumour growth. In addition, we found that JAG1 is up-regulated in a fraction of human cancers. Furthermore, tumour derived JAG1 favourite the survival of tumour endothelial cells by inhibiting the pro-apoptotic effect of Notch3. We thus present here for the first time that Notch3 as a dependence receptor inducing apoptosis in tumour endothelial cells which is blocked by JAG1. Consequently, we show that the well-documented anti-tumour effect mediated by g-secretase inhibition is at least in part dependent on the apoptosis triggered by Notch3 in endothelial cells

Câncer de Pulmão de Não-pequenas células (CPNPC) é o maior problema de saúde pública atualmente no mundo.Encontramos em nossas pesquisas que os níveis de mRNA da CFL-1 (cofilina) podem ser usados como um biomarcador prognóstico em biópsias de tumores de CPNPC. Em nossos estudos, estabelecemos e optimizamos um método simples de imunohistoquímica semiquantitativa (SQ-IHC) para quantificar em biópsias de tumores sua aplicação em uma coorte retrospectiva de pacientes diagnosticados com CPNPC, para explorar seu papel prognóstico. Tivemos acesso a uma coleção de arquivos médicos bem delineada de 50 tumores de pacientes, juntamente com informações relevantes clínicopatológicas de 5 anos de acompanhamento hospitalar. A análise imunoistoquímica e semiquantitativa da cofilina foi realizada em um estudo cego para confiabilidade do resultado clínico. A associação entre imunoconteúdo de cofilina e resultado clínico foi assegurando utilizando as curvas de mortalidade de Kaplan-Meier e o test log-rank. Pacientes foram agrupados pela expressão do biomarcador ou pelo seu estadiamento. Imunoconteúdo de cofilina (em densidade óptica) em biópsias de tumor foram capazes de determiner entre bom e mau prognóstico, onde altos níveis de cofilina foram correlacionados com baixa razão de sobrevida. Um método simples de imunoistoquímica semiquantitativa foi bem desenvolvido para avaliação quantitativa de cofilina em CPNPC. Nosso método mostrou boa sensibilidade/especificidade para indicar resultado em pacientes e por isso deve ser empregado em estudo prospectivo, de larga escala, com triagens clínicas randomizadas para estabelecer o valor prognóstico do imunoconteúdo de cofilina em CPNPC. / Nonsmall cell lung cancer (NSCLC) is a major public health problem worldwide. Previously we found that CFL1 (cofilin-1) mRNA levels can be used as a prognostic biomarker in NSCLC tumor biopsies. In this study, we established and optimized a simple semi-quantitative immunohistochemistry (SQ-IHC) method for cofilin quantification in tumor biopsies and applied it in a retrospective cohort of NSCLC patients, to exploit prognostic role. We accessed a well-defined archival collection of tumor samples from 50 patients with relevant clinicopathologic information and 5 years follow-up. Immunohistochemistry and semi-quantitative analysis of cofilin were performed blinded to clinical outcome. Association between cofilin immunocontent and clinical outcome was assessed using standard Kaplan-Meier mortality curves and the log-rank test. Patients were clustered according to either biomarker expression level or NSCLC stage grouping. Cofilin immunocontent (in optical densities) in tumor biopsies was able to discriminate between good and bad prognosis, where high cofilin levels are correlated with lower overall survival rate (P < .05). A simple semi-quantitative immunohistochemical method has been developed for quantitative evaluation of cofilin in NSCLC. Our method showed good sensitivity/specificity to indicate the outcome of patients and should be further employed in a prospective, large-scale, randomized clinical trial to establish the prognostic value of cofilin immunocontent in NSCLC.

Chez les patients porteurs d'un cancer bronchique avancé non éligible à un traitement curatif, l'objectif du traitement n'est pas la guérison mais le soulagement des symptômes et l'amélioration de la survie. Le pronostic est lié aux caractéristiques du patient et de la tumeur, à la réponse tumorale après chimiothérapie et à la prise en charge globale décidée conjointement avec l'équipe médicale, le patient et son entourage. Il convient donc d'évaluer précocement ces facteurs pronostiques pour optimiser le rapport bénéfice-risque des traitements entrepris, dans le cadre des thérapeutiques anti-cancéreuses ou de façon plus globale.Dans le cadre de ce travail, des déterminants éthiques, cliniques et paracliniques de la prise en charge et du pronostic des patients porteurs d'un cancer bronchique localement avancé ou métastatique ont été recherchés. Dans une 1ère partie, les déterminants du pronostic de patients traités par chimiothérapie (étude « Pharmacogenoscan-poumon ») ont été étudiés : association entre le niveau d'expression de biomarqueurs tumoraux protéiques et la réponse à la chimiothérapie et intérêt de l'évaluation de la réponse tumorale selon les critères RECIST. Nous avons, dans une seconde partie, analysé les éléments influençant la prise en charge et le pronostic de patients porteurs d'un cancer bronchique développant une défaillance d'organe. Trois situations ont été décrites : celle de patients dès l'apparition de cette défaillance d'organe, celle de l'ensemble des patients porteurs d'un cancer bronchique admis en réanimation, et uniquement de ceux porteurs d'une mutation tumorale oncogénique. / In patients with advanced lung cancer non-eligible for curative treatment, the goal of care is not healing but improving symptoms and survival. The prognosis is related to patient and tumor characteristics, response to chemotherapy and its overall management decided jointly with the medical team, the patient and his family. It is therefore necessary to assess early these prognostic factors to optimize the risk-benefit ratio of treatment undertaken.As part of this work, ethical, clinical and laboratory determinants of management and prognosis of locally advanced or metastatic lung cancer patients were investigated. In the first part, the prognosis' determinants of patients treated with chemotherapy (« Pharmacogenoscan-poumon » study) were studied: association between the level of expression of protein biomarkers and tumor response to chemotherapy and assessment of interest of tumor response according to RECIST criteria. We have, in the second part, analyzed the factors influencing the management and prognosis of lung cancer patients developing organ failure. Three situations were described: patients at the time of the development of this organ failure, lung cancer patients admitted to intensive care units, the overall population and only those carrying an oncogenic mutation.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lung cancer has been considered a public health problem since it has become one of the most commonly diagnosed neoplastic diseases and one of the most lethal in the world. This spread of lung cancer in the world population has been clearly observed in statistics and has been closely related to tobacco consumption. Cigarette smoking is considered one of the major risk factors that has led to cancer development since the 50s. Researches have shown that there is a close relationship between smoking inflammation - prothrombotic events - lung cancer. In this context, the analysis of biomarkers of inflammation is important since inflamed sites are conducive to tumor development environments. Furthermore, it is important to study the activity of ecto-nucleotide triphosphate diphosphohydrolase (E-NTPDase), ecto-5'-nucleotidase and ecto adenosine deaminase (E-ADA) enzymes which are engaged in regulating the levels of adenine nucleotides and nucleoside widely involved in inflammation and platelet aggregation. Oxidative stress is associated with the development and progression of cancer. Thus, it is extremely important to evaluate the aspects of cellular functions in a group of patients with lung cancer. The objectives of this study were i) to verify the serum levels of cytokines such as IL-6, IL-17, IL-4, IL-2, IL-10, interferon- (IFN-) and Tumor Necrosis Factor (TNF); ii) to evaluate the activity of the E-NTPDase, E-NPP, ecto-5'-nucleotidase and E-ADA platelets, and platelet aggregation; iii) to evaluate the activity of δ-aminolevulinic acid dehydratase (δ-ALA-D) erythrocyte, the levels of thiobarbituric acid reactive species (TBARS) in platelet and of reactive species (RS) in serum species; and iv) to analyze the enzymatic antioxidant profile - through the activity of superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) in platelets - and non-enzymatic profile - through the content of total thiols (T-SH) and non-protein thiols (NPSH) in platelet and of the levels of vitamin C in plasma vitamin E in serum. The study group had non-small cell lung cancer and was treated at the Hematology/Oncology Section at the University Hospital of Santa Maria. The project was approved by the Ethics Committee of the Federal University of Santa Maria, CAAE (Certificate of Appreciation Presentation for Ethics) and is registered under number: 0061.0.243.000-10. Results showed that patients with lung cancer presented an increase in serum levels of IL-6, which are closely related to the development and progression of tumor, since this cytokine has proinflammatory and pro-tumor activities. The levels of IL-17 were decreased in these patients, which may be related to the advanced stage of the development of lung cancer in these subjects. Patients with lung cancer showed a decrease in E-NTPDase activity for the hydrolysis of ADP, which contributes to the expansion of procoagulant effects commonly observed in patients with neoplastic diseases.This hypothesis is strengthened by the increased platelet aggregation observed when ADP was used as the agonist process. Patients enrolled in this study showed a decrease in the CD39 expression in platelets, which is in agreement with that observed for the NTPDase activity in platelets.The studied group had an increase in the ecto-5'-nucleotidase activity and a decrease in the E-ADA activity in platelets. This suggests that the extracellular adenosine levels were elevated leading to the advance of the tumor development due to the promoting actions characteristics of adenosine such as tumor growth and of stimulating angiogenesis. Regarding the oxidative profile, the activity of δ-ALA-D enzyme was inhibited in patients with lung cancer, which may predict the occurrence of oxidative stress in these patients. This scenario can be confirmed by the elevated levels of TBARS and RS observed in patients with lung cancer. This overproduction of oxidants may also be causing the inhibition of SOD and CAT enzymes in platelets and thus their structure and the function may be compromised. Furthermore, there was a decrease in the levels of important non-enzymatic antioxidants in patients with lung cancer, showing that their beneficial actions may be occurring in an insufficient way. High levels of T-SH and possibly glutathione are implicated in the development of tumor resistance to chemotherapy. Therefore, the results described here suggest that lung cancer exerts a significant change in serum levels of IL-6 and IL-17, in the activity of the enzymes of the purinergic system in platelets, as well as in the oxidative profile of these patients. Thus, it is hoped that this work may have contributed to a better understanding of the role of the purinergic system and biomarkers of inflammation and oxidative stress in the pathophysiology of lung cancer. / O câncer de pulmão tornou-se uma das doenças neoplásicas mais comumente diagnosticadas, além de uma das mais letais em todo o mundo, caracterizando-se, portanto, como um problema de saúde pública. Essa disseminação do câncer de pulmão na população mundial, que é claramente observada em dados estatísticos, está intimamente relacionada ao consumo de tabaco, sendo o tabagismo considerado um dos principais fatores de risco que levam ao desenvolvimento de câncer desde a década de 50. As pesquisas têm demonstrado que há uma estreita relação entre: tabagismo - processos inflamatórios - eventos pró-trombóticos - câncer de pulmão. Nesse contexto, torna-se importante a análise de biomarcadores de inflamação, já que sítios inflamados são ambientes propícios para o desenvolvimento de tumores, assim como o estudo da atividade das enzimas ecto-nucleotídeo trifosfato difosfoidrolase (E-NTPDase), ecto-5 -nucleotidase, ectonucleotídeo pirofosfatase/fosfodiesterase (E-NPP) e ecto adenosina desaminase (E-ADA), que estão envolvidas na regulação dos níveis de nucleotídeos e nucleosídeo de adenina amplamente envolvidos na inflamação e na agregação plaquetária.Trabalhos revelam que o estresse oxidativo está intimamente associado ao desenvolvimento e à progressão de neoplasias, razão pela qual torna-se extremamente relevante a avaliação desses aspectos das funções celulares em um grupo de pacientes com câncer de pulmão. Diante disso, os objetivos deste estudo foram: a) verificar os níveis séricos de citocinas como a IL-6, IL-17, IL-4, IL-2, IL-10, interferon- (INF-) e o fator de necrose tumoral (TNF); b) avaliar a atividade da E-NTPDase, da E-NPP, da ecto-5 -nucleotidase e da E-ADA em plaquetas, bem como a agregação plaquetária; c) avaliar a atividade da δ-aminolevulínico desidratase (δ-ALA-D) eritrocitária, os níveis de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) em plaquetas e de espécies reativas (ER) no soro; d) analizar o perfil antioxidante enzimático - através da atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e da catalase (CAT) em plaquetas e o perfil antioxidante não enzimático - através do conteúdo de tióis totais (T-SH) e tióis não protéicos (NPSH) em plaquetas e dos níveis de vitamina C no plasma e de vitamina E no soro, em um grupo de pacientes com câncer de pulmão de não pequenas células, atendidos no setor de Hematologia/Oncologia do Hospital Universitário de Santa Maria. Quanto aos aspectos éticos, o projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Santa Maria, CAAE (Certificado de Apresentação para Apreciação Ética) e está registrado sob o número: 0061.0.243.000-10. Os resultados encontrados demonstram que os pacientes com câncer de pulmão apresentaram um incremento nos níveis séricos de IL-6 os quais estão intimamente relacionados com o desenvolvimento e a progressão tumoral, visto que essa citocina apresenta atividade pró-inflamatória e pró-tumoral. Além disso, os níveis de IL-17 estão diminuídos nesses pacientes, o que pode estar relacionado com o estágio avançado de desenvolvimento do câncer de pulmão nos indivíduos estudados. Ademais, os pacientes com neoplasia pulmonar mostraram uma diminuição na atividade da E-NTPDase para a hidrólise do ADP, fato que contribui para a ampliação dos efeitos pró-coagulantes comumente observados em pacientes com doenças neoplásicas. Essa hipótese é reforçada pelo aumento da agregação plaquetária observado quando ADP foi utilizado como agonista do processo. Os pacientes envolvidos nesse estudo apresentaram uma diminuição na expressão da CD39 em plaquetas, que está de acordo com o observado para a atividade da NTPDase nas mesmas. Ainda, os pacientes com câncer de pulmão tiveram um aumento na atividade da ecto-5 -nucleotidase e uma diminuição na atividade da E-ADA em plaquetas, sugerindo que os níveis extracelulares de adenosina estão elevados nos mesmos, proporcionando avanço no desenvolvimento tumoral tendo em vista as ações promotoras de crescimento tumoral e de estímulo à angiogênese características da adenosina. Em relação ao perfil oxidativo, a atividade da enzima δ-ALA-D apresentou-se inibida em pacientes com câncer de pulmão, o que pode predizer a ocorrência de um quadro de estresse oxidativo nesses pacientes. Esse cenário pode ser confirmado pelos elevados níveis de TBARS e de ER verificados nos pacientes com neoplasia pulmonar. Essa superprodução de oxidantes também pode estar ocasionando a inibição das enzimas SOD e CAT nas plaquetas e, desse modo, a função e a estrutura das mesmas pode estar comprometida. Além disso, houve uma diminuição nos níveis de importantes antioxidantes não enzimáticos nos pacientes com câncer de pulmão, mostrando que suas ações benéficas podem estar sendo exercidas de modo insuficiente. Por outro lado, os níveis elevados de T-SH e, possivelmente, da glutationa, estariam implicados no desenvolvimento de resistência tumoral à quimioterapia. Portanto, os resultados aqui descritos sugerem que o câncer de pulmão exerce uma importante alteração nos níveis séricos de IL-6 e IL-17, na atividade das enzimas do sistema purinérgico em plaquetas, bem como no perfil oxidativo desses pacientes, podendo os parâmetros mencionados nesta pesquisa serem úteis na clínica médica, para o monitoramento da patologia. Espera-se, assim, que esse trabalho possa ter contribuído para o melhor entendimento do papel do sistema purinérgico e dos biomarcadores de processos inflamatórios e de estresse oxidativo na fisiopatologia do câncer de pulmão.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lung cancer has become one of the most commonly diagnosed neoplastic diseases, as well as one of the most lethal worldwide, characterized, therefore, as a public health problem. This spread of lung cancer in the world population, which is clearly seen in statistics, is closely related to smoking, and smoking is considered one of the main risk factors that lead to the development of cancer since the year 1950. Research has also shown that there is a close relationship between cigarette consumption, the emergence of events pro-inflammatory and immunosuppressive and the development of lung cancer. In this context, it is important to study enzyme nucleotide triphosphate diphosphohydrolase (NTPDase), adenosine deaminase (ADA) and acetylcholinesterase (AChE), which are involved in the control of inflammatory processes and in the regulation of immunological events, and changes in their activities have been observed in several diseases, including cancer. Studies reveal that oxidative stress is closely associated with the development and progression of cancer, being extremely important to evaluate these aspects of cellular functions in a group of patients with lung cancer. The objective of this study was to investigate the activity of NTPDase and its expression (CD39) in lymphocytes, ADA and butyrylcholinesterase (BChE) in serum, AChE, superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) in whole blood and the content of protein thiols (T-SH) and non-protein thiols (NPSH) in the serum of 31 patients with lung cancer, non small cell, treated at the Hematology/Oncology, University Hospital of Santa Maria. The results showed a significant increase in NTPDase activity for both, hydrolysis of ATP and ADP, in lymphocytes of patients with lung cancer. These results suggest that the pro-inflammatory effects triggered by the ATP in the extracellular environment may be reduced in these patients. However there was an increase of ADA activity in serum of patients with lung cancer when compared with the control group, a fact that promotes a drop in levels of extracellular adenosine. Thus, it is known that adenosine has anti-inflammatory properties, this increase of ADA activity could be providing an exacerbation of pro-inflammatory events in targeted patients in the study. Another important finding was the increase of AChE activity in whole blood in patients with lung cancer, compared with the control group. This likely reduced levels of acetylcholine (ACh) in blood also cause a decrease in anti-inflammatory activity characteristic of this molecule. Already, as the activity of SOD and CAT as well as the levels of T-SH and NPSH, all showed superior results in patients with lung cancer when compared with the control group. Thus, it is evident that thiol compounds may be acting in detoxification reactions and protecting these patients. Therefore, the results reported here suggest that lung cancer has a significant change in the enzyme activity of purinergic and cholinergic systems involved in inflammatory processes, and the oxidative profile in these patients, and the parameters mentioned in this research be useful in clinical medicine, to monitor the disease. / O câncer de pulmão tornou-se uma das doenças neoplásicas mais comumente diagnosticadas, além de uma das mais letais em todo o mundo, caracterizando-se, portanto, como um problema de saúde pública. Essa disseminação do câncer de pulmão na população mundial, que é claramente observada em dados estatísticos, está intimamente relacionada ao consumo de tabaco, sendo o tabagismo considerado um dos principais fatores de risco que levam ao desenvolvimento de câncer desde a década de 50. Pesquisas têm demonstrado, também, que há uma estreita relação entre o consumo de cigarros, o aparecimento de eventos pró-inflamatórios e imunossupressores e o desenvolvimento de câncer de pulmão. Nesse contexto, torna-se importante o estudo das enzimas nucleotídeo trifosfato difosfoidrolase (NTPDase), adenosina desaminase (ADA) e acetilcolinesterase (AChE), que estão envolvidas no controle dos processos inflamatórios e na regulação dos eventos imunológicos, sendo que alterações nas suas atividades têm sido observadas em várias doenças, incluindo o câncer. Trabalhos revelam, ainda, que o estresse oxidativo está intimamente associado ao desenvolvimento e à progressão de neoplasias, razão pela qual é extremamente relevante a avaliação desses aspectos das funções celulares em um grupo de pacientes com câncer de pulmão. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar a atividade da NTPDase e a sua expressão (CD39) em linfócitos, da ADA e da butirilcolinesterase (BChE) em soro, da AChE, da superóxido dismutase (SOD) e da catalase (CAT) em sangue total e o conteúdo de tióis protéicos (T-SH) e não-protéicos (NPSH) no soro de 31 pacientes com câncer de pulmão de não pequenas células, atendidos no setor de Hematologia/Oncologia do Hospital Universitário de Santa Maria. Os resultados encontrados demonstraram um aumento significativo na atividade da NTPDase, tanto para a hidrólise do ATP, quando do ADP, em linfócitos de pacientes com câncer de pulmão. Esses resultados sugerem que os efeitos pró-inflamatórios desencadeados pelo ATP no meio extracelular podem estar diminuídos nesses pacientes. Contudo foi verificado um aumento da atividade da ADA no soro de pacientes com câncer de pulmão quando comparada com o grupo controle, fato que promove uma queda dos níveis de adenosina extracelulares. Dessa forma, sabendo-se que a adenosina apresenta propriedades anti-inflamatórias, esse aumento da atividade da ADA poderia estar proporcionando uma exacerbação dos eventos pró-inflamatórios nos pacientes alvo do estudo. Outra constatação importante foi o aumento da atividade da AChE em sangue total nos pacientes com câncer de pulmão, em comparação com o grupo controle. Essa provável redução dos níveis de acetilcolina (ACh) sanguíneos também provocaria uma diminuição da atividade anti-inflamatória característica dessa molécula. Já, quanto à atividade da SOD e da CAT, bem como quanto aos níveis de T-SH e NPSH, todos apresentaram resultados superiores no grupo de pacientes com neoplasia pulmonar quando comparados com o grupo de controle. Com isso, evidencia-se que os compostos tiólicos podem estar atuando nas reações de destoxificação e proteção dos pacientes com câncer de pulmão. Portanto, os resultados aqui descritos sugerem que o câncer de pulmão exerce uma importante alteração, tanto na atividade das enzimas dos sistemas purinérgico e colinérgico envolvidas nos processos inflamatórios, quanto no perfil oxidativo desses pacientes, podendo os parâmetros mencionados nesta pesquisa serem úteis na clínica médica, para o monitoramento da patologia.

Introdução: O câncer de pulmão é um dos tipos mais comuns de câncer, sendo ele responsável pelo maior número de mortes por neoplasias no mundo. Pacientes com câncer de pulmão apresentam alta prevalência de desnutrição, que está relacionada com piora do prognóstico. A desnutrição ocorre em 60% dos pacientes no momento do diagnóstico, levando a um mau prognóstico, independente do estágio do tumor. Avaliação nutricional de pacientes com câncer deve ser realizada à luz de qualquer proposta terapêutica, ainda que esta seja paliativa. Neste sentido, o método validado de Avaliação Subjetiva Global Produzida pelo Próprio Paciente (ASG-PPP) e adaptado por Ottery et al para pacientes oncológicos a partir da Avaliação Subjetiva Global, ajuda a identificar precocemente os pacientes que estão em risco nutricional. A nutrição é fundamental nestes pacientes em doença avançada, pois fornece a quantidade adequada de nutrientes, tem um importante papel psicológico, social, espiritual e cultural, além de ajudar a manter um sentido de autonomia e bem-estar. Objetivo: Relacionar a Capacidade Funcional através do índice de Karnofsky e o estado nutricional, sinais e sintomas avaliados pelo método subjetivo (ASG-PPP), com a sobrevida de pacientes com neoplasia pulmonar mestastática. Pacientes e métodos: Trata-se de um estudo transversal, constituído por 51 pacientes, ambos os sexos, portadores de neoplasia pulmonar com doença metastática em estadiamento IIIb e IV, atendidos em nível ambulatorial e hospitalar no Hospital Santa Rita, Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre. A sobrevida dos pacientes foi verificada ao final do estudo, através de revisão de prontuários e contato telefônico com o responsável pelo paciente. Resultados: Os pacientes apresentaram-se com idade 61,84±10,83 anos (40 a 82 anos); 34 (66,7%) eram gênero masculino e 17 (33,3%) do feminino. A mediana do tempo de sobrevida foi de 186 dias (IC 95%: 158,8; 213,2). Os pacientes internados tiveram sobrevida significativamente inferior (mediana=145 dias (IC 95%=135 - 155) aos que foram atendidos ambulatorialmente (mediana=221 dias (IC 95%=199 - 243). Os pacientes em estágio IV tiveram sobrevida significativamente inferior (mediana=176 dias; IC 95%=127 - 225) àqueles em estágio IIIb (mediana=221; IC 95%=147 - 295). Os pacientes com metástase hepática tiveram sobrevida significativamente inferior (mediana=115 dias; IC 95%=74 - 155) aos sem metástase hepática (mediana=199; IC 95%=174 - 224). Os pacientes com metástase pleural apresentaram sobrevida significativamente superior (mediana=386 dias; IC 95%=129 - 643) aos sem metástase pleural (mediana=174; IC 95%=133 - 214). Não houve diferença estatisticamente significativa entre as curvas de sobrevida dos diferentes estágios nutricionais (teste de log rank; p=0,651). Os acamados tiveram sobrevida significativamente inferior (mediana=115 dias; IC 95%=87 - 143) que os com capacidade física normal (mediana=255 dias; IC 95%=202 - 308). Quanto maior a depleção corporal total, pior a sobrevida do paciente (p=0,014). O aumento de 1 ponto neste item da ASG-PPP (RDI=1,70; IC 95%=1,12 – 2,59) pode aumentar o risco de óbito, em média 70%. O índice de Karnofsky também se associou significativamente com a sobrevida (p=0,016), sendo que para um aumento de 10% na escala de nível de desempenho, o risco de óbito diminuiu em 23% (RDI=0,77; IC 95%=0,76 – 0,79). Os sintomas mais prevalentes que afetaram a alimentação entre os pacientes foram a falta de apetite (66,7%), depressão (51%) e dor (39,2%) e os menos relatados foram dor na boca e vômitos (5,9%). Os fatores que permaneceram associados estatisticamente com o óbito após o ajuste pela análise multivariada de Regressão de Cox foram metástase hepática e internação hospitalar como fatores de risco para óbito e metástase pleural e melhor índice de Karnofsky como fatores protetores. Conclusão: A sobrevida dos pacientes eutróficos foi levemente superior a dos pacientes em risco nutricional e a dos severamente desnutridos. Quanto maior a depleção corporal total e pior o índice de Karnofsky maior o risco de óbito. Não foi encontrada uma associação estatisticamente significativa entre os valores de Hemograma, Albumina Sérica e Contagem Total de Linfócitos (CTL) com o estado nutricional da população em estudo e a sobrevida. / Introduction: Lung cancer is one of the most common cancers in the world, and it is today the most lethal of the neoplastic diseases. Patients with lung cancer show high prevalence of malnutrition, the latter being related to worsening of the prognosis. Malnutrition occurs in 60% of the patients at the moment of diagnosis, leading to a bad prognosis, regardless of the tumor stage. Nutritional evaluation of patients with cancer should be conducted in the light of a therapeutic proposal, even if it’s palliative. In this way, the validated method Scored Patient-Generated Subjective Global Assessment (PG-SGA), adapted by Ottery et al for oncologic patients from the questionnaire of Subjective Global Assessment, helps to precociously identify patients that are in nutritional risk. Nutrition is fundamental in these patients with advanced disease for it supplies the adequate amount of nutrients, performs an important psychological, spiritual and cultural role, besides helping to build a sense of autonomy and well-being. Objective: to relate Functional Capacity through the Karnofsky Index and the nutritional state, signs and symptoms evaluated by the subjective method (PG-SGA), to the survival of patients with metastatic pulmonary neoplasia. Patients and methods: It’s a transversal study, constituted by 51 patients, both genders, carriers of pulmonary neoplasia with metastatic disease on stages IIIb and IV, both in and outpatients at Santa Rita Hospital, Complexo Hospitalar Santa Casa de Porto Alegre. The survival of the patients in the study was assessed at the end of the study, through review of the chart and phone contact with the patient’s keeper. Results: The average age is 61.84 (± 10.83 varying between 40 and 82), being 34 (66.7%) male and 17 (33.3%) female. The median of survival is 186 days (CI 95%; 158.8; 213.2). The inpatients have a significantly inferior survival (median=145 days; CI 95%=135 – 155) than the outpatients (median=221 days; CI 95%=199 – 243). Patients on stage IV have a significantly inferior survival (median=176 days; CI 95%=127 - 225) than patients on stage IIIb (median=221; CI 95%= 147 - 295). Patients with hepatic metastasis have a significantly inferior survival (median=115 days; CI 95%=74 - 155) than patients without hepatic metastasis (median=199 days; CI 95%=174 - 224). Patients with pleural metastasis have a significantly superior survival (median=386 days; CI 95%=129 – 643) than patients without pleural metastasis (median=174; CI 95%=133 – 214). There was no meaningful statistical difference between survival curves of different nutritional stages (log rank test; p=0,652). Bedridden patients have a significantly inferior survival (median=115 days; CI 95%=87 – 143) than patients with normal physical capacity (median=255 days; CI 95%=202 – 308). The higher the total body depletion, the lower the patient survival (p=0.014). The increase of 1 point in this item of the PG-SGA (IDR=1.70; CI 95%=1.12 – 2.59) may increase risk of death, averagely, by 70%. Karnofsky index was also significantly associated with survival (p=0.016), seeing that for an increase of 10% in the performance scale the risk of death decreased in 23% (IDR=0.77; CI 95%=0.76 – 0.79). The most prevalent symptoms that affect nourishment among the patients were lack of appetite (66.7%), depression (51%) and pain (39.2%) and the least mentioned were mouth pain and vomit (5.9%). Factors that remain statistically associated with death after the adjust by the multivariate analysis by regression of Cox were hepatic metastasis and hospital internment as risk factors for death, and pleural metastasis and better Karnofsky index as protective factors. Conclusion: The survival of eutrophic patients was mildly superior to that of patients in nutritional risk and to that of severely malnourished patients. The higher the total body depletion and the worse the Karnofsky index, the higher the risk of death. No significant statistical association was found between Hemogram, Serum Albumin, and Total Lymphocyte Count (TLC) with the nutritional status of the population in study and survival.

O câncer de pulmão é responsável por aproximadamente 13% do total de casos de neoplasias malignas e por cerca de 1.4 milhões de mortes por ano em todo mundo. Esta neoplasia apresenta-se sob dois principais subtipos: câncer de pulmão de pequenas células (CPPC) e câncer de pulmão de não-pequenas células (CPNPC). Cerca de 85% dos casos de câncer de pulmão são do tipo CPNPC. Os sinais e sintomas são secundários ao crescimento do tumor primário, ao comprometimento lobo-regional, à disseminação à distância, ou são secundários às síndromes paraneoplásicas. Essas características refletem diretamente sobre as taxas de mortalidade; de cada 100 novos casos, 80 são inoperáveis e a maioria morre dentro de 3 anos. Isso significa que, apesar dos diversos avanços no diagnóstico e tratamento, o prognóstico do câncer de pulmão permanece sendo extremamente ruim, com sobrevida média de 10 meses, e cumulativa total em 5 anos de aproximadamente 12%. Atualmente, o prognóstico e a decisão terapêutica de pacientes com câncer de pulmão é baseada no TNM, Embora esse seja o procedimento considerado padrãoouro entre os profissionais de saúde, ele não leva em consideração características biológicas do tumor. Nesse contexto, a identificação de biomarcadores para câncer pode agregar importantes informações ao já estabelecido sistema TNM e resultar em tratamentos mais eficientes e em menores taxas de mortalidade. Existem 5 fases distintas que conceitualizam o desenvolvimento de um biomarcador tumoral. Através dessas fases consecutivas, é possível que se desenvolvam ferramentas úteis para triagem populacional, capazes de serem implementadas na rotina clínica para predição de desfecho do paciente, resposta terapêutica e monitoramento da doença. O presente projeto avaliou o valor prognóstico dos principais genes citados na literatura como potenciais biomarcadores para CPNPC, e verificou-se que nenhum deles apresentou significância na correlação estatística que indica poder prognóstico. Além disso, identificamos e validamos o papel prognóstico da cofilina-1 por meio de dados de microarranjo e quantificação de seu imunoconteúdo em biópsias de CPNPC. Para tanto, fizemos uso de meta-análise de bancos de dados e análise densitométrica das reações imuno-histoquímicas, seguida de correlação com dados de grau de diferenciação tumoral, classificação histológica, sexo, idade e desfecho relativo a cada caso. Além disso, desenvolvemos um método de baixo custo, fácil execução e ampla aplicação e reproducibilidade, capaz de quantificar a proteína em amostras biológicas, com potencial para ser implementado na rotina clínica e aplicamos esse método em uma coorte restrospectiva de CPNPC. Confirmamos assim o papel prognóstico da cofilina-1. Estes achados seguem a lógica das fases de desenvolvimento de um biomarcador e representam um grande passo no seu processo de validação. / Lung cancer accounts for approximately 13% of all malignant tumor cases and for about 1.4 million deaths per year worldwide. This cancer has two main subtypes: Small Cell Lung Cancer (SCLC) and Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC). About 85% of cases of lung cancer are NSCLC type. The signs and symptoms are secondary to the primary tumor growth, to regional lobe commitment and distant spread, or are secondary to paraneoplastic syndromes. These features reflect directly on mortality rates; 80 in every 100 new cases are inoperable and most die within 3 years. This means that, despite many advances in diagnosis treatment, the prognosis of lung cancer remains extremely poor, with median survival of 10 months, and total cumulative survival in 5-year of approximately 12%. Currently, prognosis and therapeutic decisions in patients with lung cancer is based on TNM. Although this procedure is considered gold standard among health professionals, it does not take into account the biological characteristics of the tumor. In this context, the identification of cancer biomarkers may add important information to the already established TNM system and result in better treatments and lower mortality rates. There are five distinct phases that conceptualize a tumor biomarker development of. Through these successive phases, it is possible to develop useful tools for population screening, capable of implementation in clinical practice for prediction of patient outcome, therapeutic response and disease monitoring. This project evaluated the prognostic value of major genes mentioned in literature as potential biomarkers for NSCLC and found that none of them showed statistical significance in the correlation that indicates prognostic power. It also identified and validated the prognostic role of cofilin-1 by microarray data and quantification of their immunocontent in biopsies of NSCLC. For this purpose, we used data metaanalysis and immunohistochemical reactions densitometric analysis, followed by correlation with data from tumor grade, histological classification, sex, age and outcome for each case. In addition, we developed a low-cost protocol, of easy implementation and wide application and reproducibility, able to quantify the protein in biological samples, with the potential to be implemented in clinical practice. We applied this method in a retrospective cohort of NSCLC and confirm the prognostic role of cofilin-1. These findings follow the logical phases of biomarker development and represent a major step in its validation process.

INTRODUÇÃO: Pacientes com câncer de pulmão metastático compreendem uma população bastante heterogênea. A média de sobrevida é de 8-10 meses, porém 25-30% dos pacientes morrem dentro de 6 meses e aproximadamente 20% sobrevivem mais que 18 meses após a disseminação da neoplasia. Por isso, além da Escala de Karnosfky (KPS) e ECOG, outros fatores são necessários para estimar o prognóstico destes pacientes, proporcionando assim uma melhor programação da terapia antitumoral e qualidade de vida, além da possibilidade de estratificar grupos para avaliação de novas drogas. A circunferência muscular do braço (CMB) estima a reserva de proteína corporal, sendo um indicador precoce de depleção nutricional. É uma medida objetiva, rápida, de baixo custo e nãoinvasiva, em comparação com outras investigações bioquímicas. OBJETIVO: Avaliar a CMB como fator prognóstico em pacientes com câncer de pulmão metastático. MÉTODOS: Foi realizada análise de sobrevida em 56 pacientes com câncer de pulmão não pequenas células (CPNPC), em estadio IV, com mais de uma metástase, os quais tiveram suas CMBs mensuradas logo após o diagnóstico. Os resultados da CMB foram classificados de acordo com o Percentual de Adequação, ajustado por sexo e idade. Os pacientes foram caracterizados como eutróficos (CMB > 90%) ou depletados (CMB <90%), e suas sobrevidas foram comparadas. RESULTADOS: A amostra apresentou idade média de 63 anos (47-80). A média do Percentual de Adequação foi de 89% (66-122), apresentando depleção 55% dos pacientes. A sobrevida média foi de 6,2 meses (95% IC:5,1-7,3). Nos pacientes eutróficos, a média de sobrevida foi 10,2 meses (95% IC: 9,2-11,1), e nos depletados foi de 5 meses (95% IC: 4,2-5,8), apresentando diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos (P < 0.001). Esta diferença permaneceu significante na análise multivariada (P<0,001, análise de COX) com as co-variáveis KPS, idade, sexo, quimioterapia. CONCLUSÃO: Avaliação da CMB é um forte fator prognóstico em pacientes com CPNPC. Neste estudo, os pacientes depletados, com Percentual de Adequação da CMB < 90% tiveram baixa sobrevida global. / INTRODUCTION: Stage IV patients with lung cancer comprises a very heterogenous population. The median survival is 8-10 months but 25-30% of patients dies within 6 months and about 20% of patients survive longer than 18 months after metastatic spread. Strong prognostic factors other than karnofsky status or ECOG status are still needed to even better estimate the prognosis of these patients and to help in the decision making process of planning standard treatment options or to stratify patients for inclusion in innovative treatment trials. The mid arm muscular circunference (MAMC) is a bedside anthropometric measurement that estimates corporal protein reserve which is an early indicator of nutritional depletion. It has the advantages of being objective, rapid, repeatable, non-invasive and in-expensive in comparison to various biochemical investigations. OBJECTIVE: Our purpose was to evaluate MAMC as a potential prognostic factor in patients with metastatic lung cancer. METHODS: A prospective survival analysis of 56 non-selected, consecutive patients (29 women) with metastatic non small lung cancer who had their MAMC measured in the first nutritional evaluation. The MAMC results were expressed as a percentage of the expected reference values adjusted for sex and age. Patients were categorized as normal (MAMC > 90%) or depleted (AMC < 90%) and their overall survival was compared. RESULTS: The mean age of patients was 63 years (range 47 - 80). The mean MAMC percentage of the expected value was 89 (range 66 – 122), with 55% of our patients (31) classified as depleted by MAMC measurement. Median overall survival of all patients was 6,2 months (95% CI: 5,1 – 7,3). In the group of patients with normal MAMC, median overall survival was 10,2 months (95% CI: 9.2 – 11.1). In patients classified as depleted, the mean overall survival was 5.0 months (95% CI: 4.2 – 5.8). The overall survival differences between these two groups defined by the MAMC (normal x depleted), was highly statistically significant (P < 0.001 by the logrank test, HR=0.21, 95%CI: 0.09 – 0.5 for patients with normal MAMC). These differences remained significant in a multivariated analysis (P<0.001 by the Cox proportional hazards method), with the Karnofsky status, age, chemotherapy and sex as covariates. CONCLUSIONS: One measurement of mid arm muscular circumference in the first nutritional evaluation is a strong prognostic factor in patients with metastatic non small cell lung cancer. In our series, patients with <90% of expected MAMC had poor overall survival.

Câncer de Pulmão de Não-pequenas células (CPNPC) é o maior problema de saúde pública atualmente no mundo.Encontramos em nossas pesquisas que os níveis de mRNA da CFL-1 (cofilina) podem ser usados como um biomarcador prognóstico em biópsias de tumores de CPNPC. Em nossos estudos, estabelecemos e optimizamos um método simples de imunohistoquímica semiquantitativa (SQ-IHC) para quantificar em biópsias de tumores sua aplicação em uma coorte retrospectiva de pacientes diagnosticados com CPNPC, para explorar seu papel prognóstico. Tivemos acesso a uma coleção de arquivos médicos bem delineada de 50 tumores de pacientes, juntamente com informações relevantes clínicopatológicas de 5 anos de acompanhamento hospitalar. A análise imunoistoquímica e semiquantitativa da cofilina foi realizada em um estudo cego para confiabilidade do resultado clínico. A associação entre imunoconteúdo de cofilina e resultado clínico foi assegurando utilizando as curvas de mortalidade de Kaplan-Meier e o test log-rank. Pacientes foram agrupados pela expressão do biomarcador ou pelo seu estadiamento. Imunoconteúdo de cofilina (em densidade óptica) em biópsias de tumor foram capazes de determiner entre bom e mau prognóstico, onde altos níveis de cofilina foram correlacionados com baixa razão de sobrevida. Um método simples de imunoistoquímica semiquantitativa foi bem desenvolvido para avaliação quantitativa de cofilina em CPNPC. Nosso método mostrou boa sensibilidade/especificidade para indicar resultado em pacientes e por isso deve ser empregado em estudo prospectivo, de larga escala, com triagens clínicas randomizadas para estabelecer o valor prognóstico do imunoconteúdo de cofilina em CPNPC. / Nonsmall cell lung cancer (NSCLC) is a major public health problem worldwide. Previously we found that CFL1 (cofilin-1) mRNA levels can be used as a prognostic biomarker in NSCLC tumor biopsies. In this study, we established and optimized a simple semi-quantitative immunohistochemistry (SQ-IHC) method for cofilin quantification in tumor biopsies and applied it in a retrospective cohort of NSCLC patients, to exploit prognostic role. We accessed a well-defined archival collection of tumor samples from 50 patients with relevant clinicopathologic information and 5 years follow-up. Immunohistochemistry and semi-quantitative analysis of cofilin were performed blinded to clinical outcome. Association between cofilin immunocontent and clinical outcome was assessed using standard Kaplan-Meier mortality curves and the log-rank test. Patients were clustered according to either biomarker expression level or NSCLC stage grouping. Cofilin immunocontent (in optical densities) in tumor biopsies was able to discriminate between good and bad prognosis, where high cofilin levels are correlated with lower overall survival rate (P < .05). A simple semi-quantitative immunohistochemical method has been developed for quantitative evaluation of cofilin in NSCLC. Our method showed good sensitivity/specificity to indicate the outcome of patients and should be further employed in a prospective, large-scale, randomized clinical trial to establish the prognostic value of cofilin immunocontent in NSCLC.

O câncer de pulmão é responsável por aproximadamente 13% do total de casos de neoplasias malignas e por cerca de 1.4 milhões de mortes por ano em todo mundo. Esta neoplasia apresenta-se sob dois principais subtipos: câncer de pulmão de pequenas células (CPPC) e câncer de pulmão de não-pequenas células (CPNPC). Cerca de 85% dos casos de câncer de pulmão são do tipo CPNPC. Os sinais e sintomas são secundários ao crescimento do tumor primário, ao comprometimento lobo-regional, à disseminação à distância, ou são secundários às síndromes paraneoplásicas. Essas características refletem diretamente sobre as taxas de mortalidade; de cada 100 novos casos, 80 são inoperáveis e a maioria morre dentro de 3 anos. Isso significa que, apesar dos diversos avanços no diagnóstico e tratamento, o prognóstico do câncer de pulmão permanece sendo extremamente ruim, com sobrevida média de 10 meses, e cumulativa total em 5 anos de aproximadamente 12%. Atualmente, o prognóstico e a decisão terapêutica de pacientes com câncer de pulmão é baseada no TNM, Embora esse seja o procedimento considerado padrãoouro entre os profissionais de saúde, ele não leva em consideração características biológicas do tumor. Nesse contexto, a identificação de biomarcadores para câncer pode agregar importantes informações ao já estabelecido sistema TNM e resultar em tratamentos mais eficientes e em menores taxas de mortalidade. Existem 5 fases distintas que conceitualizam o desenvolvimento de um biomarcador tumoral. Através dessas fases consecutivas, é possível que se desenvolvam ferramentas úteis para triagem populacional, capazes de serem implementadas na rotina clínica para predição de desfecho do paciente, resposta terapêutica e monitoramento da doença. O presente projeto avaliou o valor prognóstico dos principais genes citados na literatura como potenciais biomarcadores para CPNPC, e verificou-se que nenhum deles apresentou significância na correlação estatística que indica poder prognóstico. Além disso, identificamos e validamos o papel prognóstico da cofilina-1 por meio de dados de microarranjo e quantificação de seu imunoconteúdo em biópsias de CPNPC. Para tanto, fizemos uso de meta-análise de bancos de dados e análise densitométrica das reações imuno-histoquímicas, seguida de correlação com dados de grau de diferenciação tumoral, classificação histológica, sexo, idade e desfecho relativo a cada caso. Além disso, desenvolvemos um método de baixo custo, fácil execução e ampla aplicação e reproducibilidade, capaz de quantificar a proteína em amostras biológicas, com potencial para ser implementado na rotina clínica e aplicamos esse método em uma coorte restrospectiva de CPNPC. Confirmamos assim o papel prognóstico da cofilina-1. Estes achados seguem a lógica das fases de desenvolvimento de um biomarcador e representam um grande passo no seu processo de validação. / Lung cancer accounts for approximately 13% of all malignant tumor cases and for about 1.4 million deaths per year worldwide. This cancer has two main subtypes: Small Cell Lung Cancer (SCLC) and Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC). About 85% of cases of lung cancer are NSCLC type. The signs and symptoms are secondary to the primary tumor growth, to regional lobe commitment and distant spread, or are secondary to paraneoplastic syndromes. These features reflect directly on mortality rates; 80 in every 100 new cases are inoperable and most die within 3 years. This means that, despite many advances in diagnosis treatment, the prognosis of lung cancer remains extremely poor, with median survival of 10 months, and total cumulative survival in 5-year of approximately 12%. Currently, prognosis and therapeutic decisions in patients with lung cancer is based on TNM. Although this procedure is considered gold standard among health professionals, it does not take into account the biological characteristics of the tumor. In this context, the identification of cancer biomarkers may add important information to the already established TNM system and result in better treatments and lower mortality rates. There are five distinct phases that conceptualize a tumor biomarker development of. Through these successive phases, it is possible to develop useful tools for population screening, capable of implementation in clinical practice for prediction of patient outcome, therapeutic response and disease monitoring. This project evaluated the prognostic value of major genes mentioned in literature as potential biomarkers for NSCLC and found that none of them showed statistical significance in the correlation that indicates prognostic power. It also identified and validated the prognostic role of cofilin-1 by microarray data and quantification of their immunocontent in biopsies of NSCLC. For this purpose, we used data metaanalysis and immunohistochemical reactions densitometric analysis, followed by correlation with data from tumor grade, histological classification, sex, age and outcome for each case. In addition, we developed a low-cost protocol, of easy implementation and wide application and reproducibility, able to quantify the protein in biological samples, with the potential to be implemented in clinical practice. We applied this method in a retrospective cohort of NSCLC and confirm the prognostic role of cofilin-1. These findings follow the logical phases of biomarker development and represent a major step in its validation process.