Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:13:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Colhone_MarcelleCarolina_M.pdf: 3874270 bytes, checksum: b5d79e5cde6aed06f67783a5f55086f1 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o fluxo sangüíneo alterado, isquemia, proliferação celular e a presença de microrganismos resultam em queda acentuada de pressão parcial de oxigênio (hipóxia) no tecido lesado. Macrófagos se adaptam a hipóxia, alterando seu metabolismo, produção de linfocinas pro-inflamatórias e atividade fagocítica. No presente trabalho comparamos os efeitos da hipóxia (5% de O2) e da normóxia (21 % de 02) na infecção de macrófagos com o protozoário parasita Leishmania amazonensis. Macrófagos de duas diferentes origens (linhagem celular murina 774 e macrófagos peritoneais murinos) expostos a hipóxia mostraram redução na porcentagem de células infectadas e no número de parasitas intracelulares por célula. A cinética da infecção indicou que a hipóxia não deprime a fagocitose de L. amazonensis, mas induz macrófagos a reduzirem o parasitismo intracelular. Além disso, a. hipóxia não age sinergicamente com interferon gama (lFN-y) elipopolissacarídeo (LPS) em macrófagos para induzir morte do parasita. Experimentos também demonstram ausência de correlação entre a produção de óxido nítrico e o controle da infecção em macrófagos sob condições hipóxicas. Proteínas do choque térmico de 70kDa (HSP70) é induzida por hipóxia em muitos tipos de células e contribui para sua sobrevivência durante exposição a condições hipóxicas. Análises da expressão de HSP70 em linhagem celular murina J774, expostas à hipóxia, mostram uma notável redução na expressão de HSP70. Macrófagos infectados com L. amazonensis também reduziram a expressão de HSP70. Macrófagos infectados com amastigotas de L. amazonensis sob condições hiperbáricas (HBO) (2 horas, 2,5 ATA, 100% 02) apresentaram significativa redução na porcentagem de células infectadas e no número de parasitas intracelulares por células. Todos os resultados fornecem evidências de que a hipóxia, que ocorre em várias condições patológicas, e a HBO, podem alterar a susceptibilidade de macrófagos a infecção com Leishmania / Abstract: The altered blood flow, isquemia, cell proliferation and the presence of microorganisms cause hypoxia (low pO2) in injured tissues. Macrophages adapt to hypoxia and alter their metabolism, pro-inflammatory Iymphokines production and phagocytosis activity. In the present study we compared the effect of 5% oxygen tension (hypoxia) and a normal tension of 21 % oxygen (normoxia) on macrophage infection by the protozoan parasite Leishmania amazonensis. Macrophages from two different sources (murine cell line J774 and murine peritoneal macrophages) exposed to hypoxia showed a reduction of the percentage of infected cells and of the number of intracellular parasites per cell. The kinetic of infection indicated that hypoxia did not depress L. amazonensis phagocytosis but induced macrophages to reduce intracellular parasitism. Furthermore, hypoxia did not act synergistically with gamma interferon (IFN-y) and bacterial lipopolisaccharides (LPS) in macrophages to induce parasite killing. Experiments also indicated no correlation between nitric oxide production and control of infection in macrophages under hypoxic condition. Heat shock protein 70 (HSP70) is induced by hypoxia in the most of mammalian cell types and contributes to their ability to survive during hypoxic episodes. Analyses of the Hsp70 in murine cell line J774 exposed to hypoxia indicated a notable reduction in HSP70 expression. Macrophages infected with L. amazonensis also showed a reduction in HSP70expression. Macrophages infected with L. amazonensis amastigotes under hyperbaric condition (HBO) (2 hours, 2,5 ATA, 100% 02) showed a significant decrease of the percentage of infected cells and number of intracellular parasites per cell. Taken together our results provided the first evidence that hypoxia, which occurs in various pathological conditions, and HBO treatment, can alter macrophage susceptibility to a parasite infection / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-08-13T18:01:36Z : No. of bitstreams: 1 000742572_20160301.pdf: 159688 bytes, checksum: 397b8b8e4d98156b2f6194944307556d (MD5) Bitstreams deleted on 2016-03-02T17:37:23Z: 000742572_20160301.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-02T17:38:08Z : No. of bitstreams: 1 000742572.pdf: 160099 bytes, checksum: 306666f7ec361c35fa92b731b60772e7 (MD5) / Diabetes mellitus (DM) é um importante fator de predisposição para o desenvolvimento de infecções, incluindo a candidíase. Embora a incidência e a gravidade das doenças infecciosas em pacientes diabéticos estejam com frequência relacionadas a disfunções da resposta imune, seus mecanismos ainda não foram bem esclarecidos. No presente estudo avaliou-se a influência da condição de hipoinsulinemia-hiperglicemia (HH) na evolução da candidíase experimental sistêmica. Parâmetros histológicos, microbiológicos e imunológicos envolvendo medula óssea, cérebro, baço e fígado, níveis plasmáticos de quimiocina e de citocinas, atividade macrofágica e distribuição de granulócitos e subpopulações de monócitos do sangue periférico foram avaliados. Para tanto, camundongos suiços, HH-induzidos ou não pela aloxana, foram inoculados com Candida albicans pela veia da cauda e avaliados 12, 24 e 96 horas e 7 dias após infecção. A presença de fungos foi avaliada em: sangue, medula óssea, rins, fígado, cérebro e baço. A atividade macrofágica foi estudada pela resposta de fagócitos peritoneais cultivados ou não com C. albicans mortas pelo calor, avaliando-se a produção de peróxido de hidrogénio e de óxido nítrico e os níveis de TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 e CCL2 em sobrenadande de cultura. Os níveis plasmáticos destas citocinas também foram determinados. A distribuição de granulócitos e das subpopulações de monócitos circulantes foi determinada por citometria de fluxo. Os resultados mostraram aumento da mortalidade em camundongos HH; apesar da ausência de diferenças de resposta tecidual entre os grupos infectados; notamos diferenças importantes na carga fúngica presente nos diversos tecidos examinados (especificar). Estes animais também exibiam elevados níveis plasmáticos de IL-6 e TNF-α, e uma produção exacerbada de TNF-α pelos macrófagos. Após infecção ... / Diabetis mellitus (DM) is an important predisposing factor for the development of infections, including candidiasis. Although the incidence and severity of infectious diseases in diabetic patients are related to dysfunction in the immune function, the mechanisms involved in the high susceptibility to this fungal infection are not clear. In the present study, we evaluated the influence of hypoinsulinemia-hyperglycemia (HH) on plasma levels of chemokine/cytokines, macrophage activity and distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets in a murine model of systemic candidiasis. C. albicans was intravenously inoculated in alloxan-induced HH mice, which were evaluated 12, 24 and 96 hours, and 7 days after infection. Colony-forming unit analysis and/or histopathological examination were performed on blood, bone-marrow, kidney, brain, liver and spleen. Peritoneal phagocytes were cultured with or without heat-killed C. albicans, and the production of hydrogen peroxide and nitric oxide were determined. The levels of TNF-α, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-12p70 and CCL2 were measured in the culture supernatants and also in the plasma of the mice. The distribution of peripheral blood granulocytes and monocytes subsets were performed by flow cytometry. Our findings showed an increased mortality in the infected HH mice, but they showed no significant differences in fungal recovery. Upon histopathological examination, no differences were observed between both infected groups, but strong discrepancies in fungal load were found among the tissues examined. High plasma levels of IL-6 and TNF-α as well as an excessive TNF-α-mediated macrophage response were also observed in the infected HH-induced mice. Soon after the fungal challenge, increased percentage of granulocytes and inflammatory monocytes was observed. C.albicans-infected HH mice presented a higher percentage of granulocytes than the non-HH ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-14Bitstream added on 2014-06-13T20:00:43Z : No. of bitstreams: 1 tumitan_arp_dr_arafcf.pdf: 486259 bytes, checksum: e8184ac2899ff2bbb1e4a6c4b9f77604 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste estudo foi verificar a influência da infecção por Y. enterocolitica na modulação de macrófagos M1 e M2 em camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6). Camundongos de ambas as linhagens foram infectados com Y. enterocolitica O:8 WA 2707. Células do lavado peritoneal e células esplênicas foram retiradas no 1º, 3º e 5º dia pós-infecção. Em cultura de macrófagos foi verificada a atividade das enzimas iNOS e arginase, medidas por seus produtos NO/citrulina e ornitina, respectivamente, e a produção de TGFb-1. Em cultura de linfócitos foram verificadas as respostas Th1 e Th2, avaliadas pela produção das citocinas IFN-g e IL-4. No 1º e 3º dia após infecção com Y. enterocolitica, os macrófagos de camundongos C57BL/6 aumentaram a produção de NO/citrulina e não produziram TGFb-1; enquanto que os macrófagos de BALB/c aumentaram a produção de ornitina e de TGFb-1. Os linfócitos de C57BL/6 aumentaram a produção de IFN-g e não produziram IL-4, enquanto que os BALB/c apresentaram um aumento mais discreto nos níveis de IFN-g e produziram IL-4 no 5º dia pós-infecção. / The objective of this study was to verify the modulation of Y. enterocolitica infection in M1 and M2 macrophage modulation in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice. Both strains of mice were infected with Y. enterocolitica O:8 WA 2707. Peritoneal macrophages and spleen cells were obtained on days 1, 3 and 5 post-infection. We verified the iNOS and the arginase activities in macrophage cultures, measured by their NO/citruline and ornithine products, respectively. The TGF b-1 production was also measured in supernatants of macrophage cultures. The Th1 and Th2 responses were evaluated in supernatants of lymphocyte cultures, by IFNg and IL-4 production. In the 1st and 3rd day after infection with Y. enterocolitica, macrophages from C57BL/6 mice increased their NO/citruline production and they didn't produce TGF b-1 ; while macrophages from BALB/c mice increased their ornithine and TGF b-1 production. The lymphocytes from C57BL/6 mice increased their IFNg production and didn't produce IL-4, while BALB/c showed a discreet increase in the IFNg levels and produced IL-4 in the 5th day post-infection.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-24T23:44:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 294418.pdf: 1061040 bytes, checksum: 208afd9a3637548afef095f87e292252 (MD5) / A vetorização de agentes tuberculostáticos através de nanopartículas é uma estratégia promissora para o tratamento da tuberculose pulmonar. Dentre os fármacos integrantes do esquema terapêutico, a isoniazida (INH) é o mais antigo e utilizado, apresentando excelente atividade antimicobacteriana. Embora amplamente utilizada, a INH acarreta efeitos adversos relacionados à sua toxicidade hepática e neuronal, além do rápido desenvolvimento de resistência do bacilo devido principalmente à baixa penetração intracelular do fármaco. Mecanismos de resistência rapidamente desenvolvidos por este patógeno intracelular têm intensificado a busca por novas estratégias terapêuticas, bem como por moléculas com atividade antimicobacteriana. Além disso, problemas relacionados à baixa eficiência de encapsulação da isoniazida em nanopartículas poliméricas requerem o aprimoramento da formulação farmacêutica. Assim, o presente trabalho teve como objetivo principal o desenvolvimento de nanopartículas de PLGA contendo isoniazida e seu análogo, denominado JVA 001, bem como a avaliação comparativa da atividade antimicobacteriana de cada sistema. Para a obtenção de nanopartículas, foram testadas as técnicas de dupla-emulsão com evaporação do solvente, nanoprecipitação e salting-out. Após a padronização da formulação estéril, a eficiência de encapsulação e o teor de fármaco foram determinados nas nanopartículas através de um método de quantificação por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), da isoniazida e seu análogo, o JVA 001. A eficiência de encapsulação média obtida com a isoniazida foi de 21%, enquanto que com o JVA 001, alcançou 61%. A formulação selecionada permitiu a obtenção de partículas esféricas submicrônicas, com diâmetro médio de 142 ?m. Fotomicrografias obtidas utilizando-se microscopia eletrônica de varredura, emissão de campo ou microscopia de força atômica mostraram partículas com formato esférico e superfície lisa. A análise por calorimetria exploratória diferencial indicou a ocorrência de interações entre JVA 001 e a matriz polimérica nas nanopartículas de PLGA. Além disso, o espectro de difração de raios-X mostrou diferenças na estrutura cristalina do composto sintetizado a partir da conjugação da isoniazida com o grupamento citral. A atividade antimicobacteriana do JVA 001 foi avaliada in vitro, empregando-se o método do MTT, através do tratamento direto em culturas de Mycobacterium tuberculosis (Mtb), cepa H37Rv, e intracelularmente, em macrófagos murinos infectados. Tanto a isoniazida livre quanto nanoencapsulada reduziram significativamente a viabilidade do Mtb em cultura, de maneira dose e tempo dependente. Da mesma forma, JVA 001 inibiu o crescimento micobacteriano in vitro, entretanto, nanopartículas contendo o análogo JVA 001 foram mais efetivas na inibição do crescimento micobacteriano em macrófagos infectados, reforçando o potencial de nanopartículas poliméricas como carreador intracelular de fármacos. Os resultados obtidos neste trabalho revelam um potente análogo da INH com alta atividade contra M. tuberculosis in vitro e sugerem uma investigação mais aprofundada da utilização de sistemas carreadores nanopartículados tratamento farmacológico da tuberculose pulmonar.

Made available in DSpace on 2015-01-26T13:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-20Bitstream added on 2015-01-26T13:30:33Z : No. of bitstreams: 1 000801731.pdf: 1068394 bytes, checksum: 9cab2382bde2426047b33204b6520359 (MD5) / Atualmente diversas pesquisas em Periodontia e Implantodontia visam estudar novos procedimentos e materiais que otimizem o processo cicatricial. O reparo envolve a proliferação de várias células que atuam sob a coordenação de proteínas chamadas fatores de crescimento e/ou citocinas, nos quais muitos estudos têm se concentrado e confirmado seu papel especial no processo de reparação. Artin M é uma lectina isolada de sementes de Artocarpus integrifólia e foi utilizado no tratamento tópico de lesões por queimadura de pele proporcionando aceleração da cicatrização, e redução da necrose. Em estudos recentes, foi demonstrado que o Artin M também estimulou a proliferação de fibroblastos e a reparação tecidual de lesões em mucosa palatina de ratos. Buscando um melhor entendimento da forma de atuação desta lectina, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do Artin M na expressão gênica e produção proteica de citocinas e fatores de crescimento envolvidos no processo de reparo tecidual. Culturas primárias de fibroblastos gengivais e macrófagos de rato foram tratadas com Artin M nas concentrações de 1 ; 2,5 e 5,0 μg/ml por 4, 8, 12 e 24 h para análise da expressão gênica através da reação em cadeia da polimerase após transcrição reversa de maneira quantitativa, em tempo real (RT-qPCR) e, nas mesmas concentrações por 48 e 72h após estímulo para análise quantitativa da concentração proteica dos fatores de crescimento (VEGF e TGFβ) e das citocinas pró-inflamatórias (IL-1, IL-6 e TNFα) em sobrenadante de culturas de células por meio de kits ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). Os resultados demonstraram um estímulo significativo (p<0,05; ANOVA) na expressão gênica das citocinas IL-1 e TNFα tanto pelos macrófagos como os fibroblastos. A secreção proteica dos fibroblastos gengivais demonstrou aumento nos níveis de TGFβ, enquanto nos macrófagos houve aumento para TNFα. Os resultados... / Currently, several studies in Periodontics and Implantology seek for new procedures and material that optimize the healing process. The healing process involves the proliferation of various cells that act under the coordination of proteins called growth factors and/or cytokines, which have been focused by many researches that have confirmed their special role in the repair process. Artin M is a lectin isolated from Artocarpus integrifolia seed and used in the topical treatment of skin burn injuries, providing accelerated healing and necrosis reduction. Recently, some studies demonstrated that Artin M also stimulates fibroblast proliferation and wound healing in rat oral mucosa. Seeking a better understanding of the lectin action, the aim of this study was to evaluate the effects of Artin M on gene expression and protein production of cytokines and growth factors involved in tissue repair. Primary cultures of rat gingival fibroblasts and macrophages were treated with Artin M at concentrations of 1, 2.5, and 5.0 μg / ml for 4, 8, 12 and 24 h for gene expression analysis by quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and at the same concentrations for 48 and 72h for quantitative analysis of protein concentration of growth factors (VEGF and TGFβ ) and inflammatory cytokines ( IL-1 , IL-6 and TNFα ) in culture supernatants by ELISA (Enzyme linked Immunosorbent Assay). The results demonstrated significant (p < 0.05, ANOVA ) expression of IL-1 and TNF-α by macrophages as well as fibroblasts. In relation to the protein levels, gingival fibroblasts produced increased levels of TGFβ, while macrophages synthesized significant levels of TNF-α. The results suggest that Artin M has a role in the increasing gene and protein expression of relevant cytokines in the repair process.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-29Bitstream added on 2014-06-13T20:16:43Z : No. of bitstreams: 1 jorjao_al_me_sjc.pdf: 320621 bytes, checksum: 5ee9ea49b097ea172952fd6818fa4169 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / De acordo com a literatura, o uso frequente de probióticos em humanos favorece a modulação do sistema imunológico, por mecanismos ainda não totalmente definidos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos induzirem a liberação de mediadores pró e anti-inflamatórios (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 e óxido nítrico) por macrófagos de camundongo (RAW 264.7). Para tanto, foram realizadas 3 preparações do microrganismo: SpL: suspensão de bactérias vivas (5 x 107 UFC/mL), SpLA: suspensão de bactérias autoclavadas a 121ºC por 15 min (5 x 107 células/mL); e SnLA: sobrenadante da suspensão anterior (SpLA) após centrifugação. As células (macrófagos RAW 264.7) foram cultivadas (37ºC, 5% de CO2) em três diferentes situações: na presença de SpL, SpLA ou SnLA. Após 2 h e 30 min de cultivo, o meio de cultura foi trocado e as células foram cultivadas por mais 16 h. Em seguida, os sobrenadantes foram removidos e estocados em freezer (-80ºC) para posterior análise. Como controle positivo foi utilizado LPS de Escherichia coli (10 EU/mL) e como controle negativo solução fisiológica. A quantificação de citocinas foi realizada pelo teste imunoenzimático (ELISA) utilizando anticorpos específicos. A produção de óxido nítrico foi determinada indiretamente pela concentração de nitrito detectada pelo reagente de Griess. Os resultados foram analisados estatisticamente, pela análise de variância ANOVA, com nível de significância de 5%, e pelo teste de Tukey. As suspensões SpL e SpLA foram capazes de induzir produção significativamente superior de TNF-α, IL-6, IL-10 e óxido nítrico em relação ao controle negativo (p<0,05). SnLA também induziu aumento significativo na... / According to the literature, the frequent use of probiotics in humans favors the modulation of the immune system by mechanisms not yet fully defined. The aim of this study was to evaluate the ability of Lactobacillus rhamnosus or their products induce the release of proinflammatory mediators and anti-inflammatory (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 and nitric oxide) by mouse macrophages (RAW 264.7). To this end, there were three preparations of the microorganism: SPL: suspension of live bacteria (5 x 107 UFC/ mL), SPLA: bacteria suspension autoclaved at 121 ° C for 15 min (5 x 107 UFC / mL) and SnLA: supernatant (SPLA) after centrifugation. The cells (RAW 264.7 macrophages) were cultured (37 ° C, 5% CO2) in three different situations: in the SpL, SPLA or SnLA presence. After 2 h 30 min cultivation, the culture medium was changed and cells were cultured for more 16 h. Then, the supernatants were removed and stored in a freezer (-80 °C) for later analysis. As positive control was used Escherichia coli LPS (10 EU / mL) and physiological solution as negative control. Cytokine quantitation was performed by immunoenzymatic test (ELISA) using specific antibodies. The production of nitric oxide was indirectly determined by nitrite concentration detected by the Griess reagent. The results were statistically analyzed by ANOVA with a significance level of 5%, and Tukey test. SPL and SPLA suspensions were able to induce significantly higher production of TNF-α, IL-6, IL-10 and nitric oxide than the negative control (p <0.05). SnLA also induced a significant increase in the production of TNF-α, IL-10 and nitric oxide (p <0.05), however, did not induce significant production of IL-6 in relation to the negative control (p> 0.05). It was not observed production of IL-4 and IL-1β, by any of the suspensions analyzed. In relation to... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Jose Francisco Figueiredo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:45:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Belline_Paula_D.pdf: 5802227 bytes, checksum: 5e741aa3b11f4fc27b7fe698e1c43b88 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O Sistema Renina Angiotensina (SRA) é um mecanismo importante para a regulação da homeostase cardiovascular via balanço de sódio em indivíduos normais e hipertensos. Recentemente, diversos trabalhos têm comprovado a existência de um SRA local em diferentes tecidos, inclusive em células do Sistema Imunológico. Nosso estudo teve como objetivo analisar em cultura a ação de Angiotensina II (AlI) sobre algumas funções de macrófagos provenientes do peritôneo de camundongos (BALB/c e NOD - Diabéticos Não Obesos). Primeiramente, determinamos a curva dose-resposta de Angiotensina II (AII) com relação à atividade fagocitária nos períodos de 1 e 3 horas de tratamento. Verificamos que a dose de AII que estimulou a fagocitose foi 10-12 M. Para verificarmos a presença de receptores de AII, determinamos também uma curva dose-resposta do antagonista do receptor ATl, DuP 753, conhecido comercialmente como Losartan®. O protocolo com DuP 753 foi realizado na presença e ausência de AII. Nossos resultados mostraram que apesar de inibirmos a atividade fagocitária em diferentes concentrações de DuP, a maior inibição, tanto em animais normais quanto em animais diabéticos, foi com a dose de 1 O-6 M. Em seguida resolvemos avaliar o efeito citotóxico de DuP 753 para comprovarmos que seu efeito inibitório não foi causado por uma alteração da viabilidade celular. Realizamos 3 testes de citotoxicidade: MTT (Brometo de [3-( 4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5 difeniltetrazolio), análise do conteúdo de ácidos nucléicos (CAN) e a liberação de lactato desidrogenase (LDH). Os 3 testes comprovaram que DuP 753 nas concentrações utilizadas não exerceu efeito tóxico para macrófagos em cultura. Além da atividade fagocitária, analisamos também a produção do radical superóxido através da redução do ferricitocromo c. Nossos resultados demonstraram que a dose estimuladora de AII (10-12 M) e a dose inibitória de DuP (10-6 M) com relação à atividade fagocitária das células, não alteraram a produção do ânion superóxido. Isto mostra que a função fagocitária e a produção do radical superóxido são ativadas provavelmente por concentrações diferentes de AII. Finalmente demonstramos por imunofluorescência os tipos de receptores de AII presentes em macrófagos BALB/c e NOD. Verificamos a existência de receptores do tipo ATI e AT2 e que o tratamento das células com AII e DuP parece alterar o número destes receptores. Isto comprova a influência do SRA sobre a função fagocitária de uma das células do Sistema Imunológico / Abstract: The Renin Angiotensin System (RAS) is an important regulatory mechanism of cardiovascular homeostasis in normal and hypertensive subjects. Recently, several reports have been showed the existence of a local RAS in different cells and tissues, inclusive immunological cells. The aim of this study was evaluated in culture the effect of Angiotensin II (AII) on peritoneal mice macrophages (BALB/c and Non Obese Diabetic - NOD). The dose response curve of AII on phagocytic activity was determined during 1 and 3 hours of treatment and the stimulant dose of the phagocytosis was AII 10-12 M. To verify if this stimulus was obtained through AT1 receptor, the dose response curve of DuP 753 was determined. The protocol with DuP 753 was realized in the presence and absence of AII. The results showed that the inhibition of the phagocytic activity occurred in different concentrations of DuP, but the higher inhibition, in normal and diabetic animals, it was with 10-6 M. In order to evaluate the cytotoxic effect of DuP 753 and to show that the inhibition effect was not caused by an alteration of the cellular viability, were realized 3 cytotoxic assays: MTT reduction, analysis of nucleic acid content (NAC) and lactate dehydrogenase release (LDH). All assays indicated that cell viability was maintained afier treatment with DuP 753 in concentrations used. In addition of the phagocytic activity, the effect of AII and DuP 753 in production of superoxide anions was also investigate through the ferricytochrome c reduction. The results demonstrated that the phagocytic stimulant dose of AII (10-12 M) and the inhibition phagocytic dose of DuP (10-6 M) did not influence the superoxide production of macrophages. These results showed that the phagocytic function and superoxide production are probably activated by different concentrations of AII. Finally, an immunofluorescence study was performed in order to identify the type of AII receptors are present in BALB/c and NOD macrophages. The treatment of the cells with AII and DuP changed the immunoreactive of AT1 and AT2 receptors. This shows the influence of RAS on the function and metabolism of lmmunological Cell System / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T17:56:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Farias_AlessandrodosSantos_M.pdf: 12791699 bytes, checksum: d944ad5362f5af1484e5d9a39b4c8a00 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A Esclerose múltipla (EM) é doença desmielinizante do sistema nervoso central (SNC) que mais acomete adultos jovens. Baseado principalmente nas similaridades clínicas e histopatológicas a Encefalomielite experimental auto-imune (EAE) tem sido usada extensivamente como modelo de estudo da EM. A EAE é uma doença auto-imune, que pode ser induzida em animais suscetíveis, pela imunização com mielina ou alguns componentes da mielina ou ainda por transferência adotiva de linfócitos T CD4 do tipo Th1. Os linfócitos Thl produzem preferencialmente citocinas pró-inflamatórias como LFNy, TNFa e linfotoxina (TNFP). Assim, a EAE é caracterizada histologicamente pela presença de células mononucleares no SNC, dano na bainha de mielina e dos oligodendrócitos. Embora as principais células envolvidas EAE sejam linfócitos T, células mononucleares como os macrófagos que migram dos órgãos linfóides periféricos para o SNC, assim como as células da glia, participam ativamente da reação inflamatória, que resulta no dano à bainha de mielina. Vários relatos sugerem a participação dos metabólitos do oxigênio, principalmente o óxido nítrico nos processos desmielinizantes. Há evidências mostrando o aumento na produção do NO via óxido nítrico sintase induzida (iNOS) nas lesões desmielinizantes. No entanto, a participação do NO gera polêmica; por um lado as evidências apontam para o efeito neuroprotetor, enquanto outras mostram a atuação desse mediador na patogênese da EAE. O presente estudo, visa investigar o papel do NO, produzido via iNOS, na regulação da EAE, para isso utilizamos camundongos deficientes de iNOS ("knockout") e comparamos a evolução clínica e a presença de mediadores inflamatórios, com os animais correspondentes não modificados geneticamente. O animal "knockout" (iNOS-/-) apresentou significativa diminuição na evolução clínica, acompanhada da diminuição de células positivas para TNFa na lesão inflamatória, na fase aguda da doença. Trata-se de observação relevante pois o TNFa é citocina com comprovado efeito mielinotóxico. Esses resultados demonstram a fundamental contribuição do NO em associação com TNFa, no controle da EAE na fase aguda, também confirmam a importante participação dos macrófagos na patogênese EAE, nessa fase da doença, ainda que a EAE seja desencadeada por linfócitos TCD4. / Abstract: Multiple sclerosis (MS) is the most common human demyelinating disease of the central nervous system (CNS). Based on the fact that it shares similarities in relation to course of the disease and histology, Experimental auto-immune encephalomyelitis (EAE) has been used extensively as an animal model for MS. EAE is a Thl cell-mediated autoimmune disease induced by immumzation with myelin components or by adoptive transfer of autoreactive T cells. This leads to a characteristic relapsing and remitting paralytic disease in mice model of EAE. The Thl cells, characteristically produce IL2, IFNy, TNFa and lymphotoxin (TNFp), which participate in the inflammatory reactions. Histological examination of the CNS generally reveals the presence of both a rich inflammatory mononuclear cell infiltrate and demyelination resulting from bystander activation of resident microglia and recruited, infiltrating monocytes. Antigen-presenting cells generate the reactive oxygen and nitrogen species that may damage different cell types. Despite knowledge about the induction and regulation of NO production, the role of NO in tissue in demyelination is highly controversial. While many investigators have concluded that NO is involved in the pathogenesis of EAE, others have reported quite oppositing protective effects. The present study was conducted to investigate the specific role of NO induced by iNOS in the regulation of EAE in iNOS knockout C57BL/6 and wild-type mice. A less severe form of the disease than did the wild type control mice was observed in the iNOS -/- mice. Although the levels of TNFa diminished in the periphery for both groups, an increase in the number of TNFa positive cells was detected in the central nervous system during the acute phase of EAE induced in the WT mice, whereas no production of TNFa was detected in the KO mice. These findings suggest that NO and TNFa contribute to the pathogenesis during acute EAE. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Trichophyton rubrum, importante agente de dermatofitoses, é um fungo queratinofílico, capaz de parasitar tecidos como pele e unha. É o principal responsável pelas dermatofitoses crônicas e refratárias ao tratamento e como é uma espécie antropofílica encontra-se muito bem adaptado ao parasitismo humano. Por tratar-se de uma micose cutânea, torna-se necessário o estudo dos fenômenos que ocorrem durante o encontro deste fungo com uma das principais células do sistema imunológico que primeiramente reconhecem o antígeno. Assim sendo, o objetivo deste trabalho é estudar a interação de T.rubrum com macrófagos, para aumentar o conhecimento dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica nesta importante patologia. Para isso, foram realizados ensaios de fagocitose de conídios de T.rubrum, seguidos da análise da expressão de moléculas de superfície celular, dosagem de citocinas e viabilidade de macrófagos. Verificamos que o exoantígeno de T.rubrum provocou diminuição da fagocitose de conídios e partículas de zymosan pelos macrófagos. Entretanto, o exoantígeno não interferiu na expressão de moléculas de superfície celular e não foi capaz de estimular os macrófagos a secretar TNF-&#945;, IL-12, IL-10 e óxido nítrico. Já os conídios fagocitados por macrófagos, provocaram diminuição significativa na expressão de suas moléculas de superfície, tais como MHC classe II, CD80 e CD54. Após fagocitose de conídios, os macrófagos foram capazes de secretar uma grande quantidade de TNF-&#945; e IL-10 e após 8 horas de cultivo, os conídios internalizados iniciaram processo de formação de hifa, provocando lise e a conseqüente morte destas células. Por estes achados e pelos estudos prévios já realizados com o T.rubrum, pensamos que a persistência desta infecção fúngica possa estar relacionada com a ação inibitória do fungo sobre os macrófagos, levando à cronicidade observada nestas lesões. / Trichophyton rubrum is the most common pathogen causing dermatophytosis, accounting for approximately 80% of the reported cases of onychomycosis. Since 90% of the chronic dermatophyte infections are caused by T. rubrum, it is likely that this pathogen must have evolved mechanisms that evade or suppress cell-mediated immunity. Several reports have highlighted the participation of phagocytes in the immune defense against fungi; however, few studies have addressed the role of these cells in dermatophytosis. In this study, we investigated the interactions of resident and peritoneal macrophages with T. rubrum. We show here that the interaction of T. rubrum conidia with resident macrophages results in the production of TNF-&#945; and IL-10 but not IL-12 and nitric oxide. Infected macrophages down-regulated the expression of co-stimulatory molecules (CD80 and CD54). We also show that phagocytosis of T. rubrum conidia is inhibited by the addition of fungal exoantigens or mannan. Cytotoxicity assays indicated that after 8 h of conidia ingestion macrophage viability decreased drastically. Electron microscopy revealed that the ingested conidia grow and differentiate into hyphae inside macrophages leading to rupture of the macrophage membrane.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:27:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276155.pdf: 1327907 bytes, checksum: c871d158d79651580afbc11a1f0e9dbf (MD5) / Estudos moleculares e de biologia demonstram que o táxon Trypanosoma cruzi é composto por diferentes linhagens. Em 2005, foi descrito um surto de doença de Chagas Agudo (DCA) no município de Navegantes em Santa Catarina associado ao consumo de caldo de cana contaminado com o T. cruzi. Análises moleculares identificaram as linhagens TcI em gambás (cepas SC90 e SC91), TcI/TcII em triatomíneos (cepas SC92 e SC93) e TcII em pacientes (cepas SC94-SC102). Neste sentido, o presente trabalho objetivou estudar possíveis mecanismos envolvidos na seleção de populações do grupo TcII em infecções humanas ocasionadas por cepas mistas TcI/TcII de T. cruzi. Para tanto, as cepas SC90, SC92, SC93, SC94, SC95, SC96 e Y foram utilizadas nos ensaios de lise pelo sistema complemento, interação com macrófagos murino e humano na presença e ausência de soro imune e IFN-?, ensaios de Western blot e cinética da proporção das linhagens TcI e TcII em cepas mistas após diferentes passagens em macrófagos humanos por meio de PCR semiquantitativo e PCR quantitativo. Os ensaios de lise pelo sistema complemento não mostraram diferenças de sensibilidade entre as cepas estudadas. Já nos estudos de interação T. cruzi-macrófagos murinos verificou-se um aumento na taxa de infecção e no número médio de amastigotas quando formas tripomastigotas das diferentes cepas foram previamente incubadas com soro chagásico. Além disso, as cepas do grupo TcII apresentaram uma maior taxa de infecção em macrófagos e após 72 horas de interação, apresentaram valores médios do número de amastigotas duas vezes superiores ao observado para cepas TcI. Contudo, não houve diferença significativa no número médio de amastigotas no tempo inicial de infecção entre TcI e TcII. Ensaios de Western blot confirmaram uma maior expressão da gp82 em formas tripomastigotas das cepas TcII. Macrófagos ativados com IFN-? infectados com as cepas Y, SC90 e SC96 foram capazes de controlar a proliferação dos parasitos independente da cepa utilizada, de forma dependente da NOS2. A análise da proporção de TcI e TcII nas cepas mistas SC92, SC93 e na mistura artificial, SC90+SC96, antes e após a conclusão do ciclo biológico em macrófagos murinos revelou uma alteração no perfil molecular dessas cepas, sendo observado um completo desaparecimento do fragmento de DNA de 200 pb (TcI) na cepa mista artificial (SC90+SC96), enquanto nas cepas SC92 e SC93 verificou-se uma diminuição de cerca de 3 vezes na intensidade do fragmento de 200 pb. Quando os ensaios foram realizados com a cepa SC92 (três passagens seriadas em macrófagos humanos), constatou-se um progressivo aumento na proporção de TcII, uma vez que a proporção inicial era de 77,4% para TcI e 22,6% para TcII e após a terceira passagem foi verificado 93,2% para TcII. Em conjunto, estes resultados sugerem que a manutenção de populações de T. cruzi II em infecções humanas ocasionadas por cepas mistas pode estar relacionada com características intrínsecas do parasito, como a capacidade infectiva e o tempo de duplicação intracelular. Embora seja ainda possível que mecanismos efetores dos macrófagos estejam envolvidos com essa seleção.