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Detecção e análise molecular do vírus da cinomose caninaPozza, Michel January 2005 (has links)
O vírus da Cinomose Canina é uma doença multisistêmica cosmopolita com altos índices de mortalidade que afeta cães domésticos e diversos animais selvagens. Desde a década de 1960 tem sido controlado através de campanhas de vacinação porém, atualmente tem ocorrido o surgimento de diversos casos, em todo o mundo, de cães vacinados que desenvolveram a doença. O diagnóstico da Cinomose Canina é difícil e tem sido feito habitualmente através dos sinais clínicos da doença. No Brasil, bem como no Rio Grande do Sul somos carentes de dados sobre a epidemiologia e distribuição da Cinomose Canina. O objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de uma técnica de RT-PCR para o diagnóstico do vírus da Cinomose Canina e a caracterização de amostras selvagens. Foram realizados testes de sensibilidade, especificidade e reprodutibilidade para padronizar a técnica de RT-PCR. Foram analisadas 4 amostras suspeitas, 3 amostras vacinais e 3 amostras selvagens. As amostras suspeitas submetidas à técnica de RT-PCR não amplificaram, entretanto as 3 amostras selvagens e vacinais tiveram sua identidade confirmada sendo posteriormente caracterizadas. A enzima PvuII e EcoRV revelaram-se importantes na diferenciação das amostras selvagens e vacinais. Este estudo forneceu informações que devem ser melhor estudadas para se alcançar uma ferramenta abrangente no diagnóstico e caracterização do Vírus da Cinomose Canina em nossa região.
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Desenvolvimento de marcadores microssatélites e sua aplicação em populações de Melanophryniscus dorsalis (Anura: Bufonidae)Medeiros, Mayara Delagnelo January 2014 (has links)
Melanophryniscus dorsalis, conhecido popularmente por flamenguinho, pertence à família Bufonidae (Anura) e apresenta coloração aposemática, com uma linha vermelha médio-dorsal num fundo preto e manchas vermelhas na parte ventral. A espécie possui tamanho pequeno, hábito de vida diurno e reprodução explosiva ligada a grandes precipitações. Seu habitat é caracterizado por campos ou vegetação baixa de dunas em solo arenoso nas zonas costeiras do Rio Grande do Sul e sul de Santa Catarina. É considerada como vulnerável nas listas vermelhas da IUCN, brasileira e do estado do Rio Grande do Sul e em perigo no estado de Santa Catarina. Acredita-se que a espécie tenha sofrido declínios populacionais e sua principal ameaça seja a perda e degradação do habitat devido à urbanização. A fragmentação causada pela degradação do habitat pode levar a um isolamento das populações, e consequente diminuição na dispersão, aumento da endogamia e redução da variabilidade genética, podendo ocasionar diminuição do fitness, bem como a capacidade de adaptação a mudanças ambientais. Com o objetivo de avaliar a diversidade genética e estruturação populacional de M. dorsalis, foram desenvolvidos marcadores microssatélites e aplicados em populações da espécie ao longo de sua distribuição. Primers foram desenhados para nove loci de microssatélites desenvolvidos, e caracterizados em 35 indivíduos pertencentes a duas populações. Estes nove loci foram utilizados em 80 espécimes, oriundos de 10 locais amostrados entre Laguna (SC) e Rio Grande (RS) englobando toda a distribuição conhecida. A heterozigosidade média observada variou entre 0,47 e 0,64 e o número médio de alelos entre 3,33 e 6,44 nas populações amostradas. Os resultados obtidos mostraram um indício na estruturação genética influenciada por canais d’água como barreiras geográficas ao fluxo gênico, proporcional à distância entre as margens de cada rio ou canal avaliado. O isolamento por distância também foi um fator de diferenciação genética entre as populações amostradas. Foi observada evidência de endogamia em várias localidades, que pode estar relacionada ao modo de reprodução explosiva da espécie. Porém, as três populações testadas para gargalo de garrafa não apresentaram resultados significativos com exceção da localidade de Ilha dos Marinheiros para um dos modelos de mutação testados, podendo estar relacionado ao isolamento de uma pequena população num ambiente insular e a uma distância considerável das demais populações. Mesmo não demonstrando efeitos de gargalo, é necessária especial atenção à espécie pela constante degradação e fragmentação de seu habitat. As populações devem ser tratadas como diferentes unidades de manejo devido a sua estruturação genética apresentada e vê-se a necessidade da criação de mais unidades de conservação ao longo da distribuição de M. dorsalis, para a conservação efetiva da diversidade genética. / Melanophryniscus dorsalis, known as “flamenguinho”, belongs to the Bufonidae Family (Anura), has aposematic color with a red middorsal line in a black background and red spots on their ventral portion. The species has small body size, diurnal habits and explosive breeding during heavy rainfalls. Its habitat is characterized by restricted dunes environment with little vegetation cover, along the seacoast of Rio Grande do Sul and south of Santa Catarina states. The species is considered as vulnerable in IUCN’s, Brasilian’s and Rio Grande do Sul state’s Red Lists and endangered in the Red List of Santa Catarina state. It is believed that M. dorsalis has undergone population declines and is being threatened mainly for the loss and decline of its habitat due to urbanization. Fragmentation caused by these factors may lead to populations’ isolation and less migration between populations, higher levels of inbreeding and genetic variability reduction, and may cause lower fitness, as also less adaptability toward climate changes. The objective in this study was to evaluate genetic diversity and population structure of M. dorsalis, throughout its distribution. For that, microsatellite markers were developed and characterized into 35 individuals belonging to two populations. Primers were designed for nine microsatellite loci, which were used into 80 specimens from ten distinct localities between Laguna (SC) and Rio Grande (RS). Mean observed heterozygosity ranged from 0.47 to 0.64 while the mean number of alleles, from 3.33 to 6.44 on sampled populations. Results recovered showed an evidence of genetic structure influenced by water channels as geographic barriers for gene flow, according to their range between shores. Isolation by distance was also a factor of genetic differentiation among populations sampled. Evidence of inbreeding was observed in several localities, which might be related to species’ explosive breeding behavior. Although, the three populations tested for bottlenecks didn’t show significant results with exception of Ilha dos Marinheiros locality for one of mutational models tested. This may be connected to the isolation of a small population in an island. Even without demonstrating bottleneck effects, careful attention toward the species is necessary. Populations must be treated separately as different management units due to the genetic structure observed and there’s a need for the creation of more conservation units throughout M. dorsalis distribution in order to conserve genetic diversity effectively.
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Avaliação da variabilidade genética de espécies nativas do grupo Petunia integrifolia e sua aplicabilidade no estudo de Petunia hybrida (Solanaceae)Fregonezi, Aline Mitcheli Carvalho Ramos January 2011 (has links)
O gênero Petunia Juss. (Solanaceae) é conhecido mundialmente através do híbrido artificial Petunia hybrida e as duas espécies parentais, P. integrifolia e P. axillaris, são nativas do Sul da América do Sul. Porém, P. integrifolia é formada por um complexo de espécies semelhantes na estrutura floral, mas diferentes no habitat e distribuição. O objetivo deste trabalho é contribuir para um melhor detalhamento da origem da espécie comercial P. hybrida e determinar a variabilidade genética nas espécies e subespécies do grupo integrifolia. Neste trabalho foram utilizadas 13 populações naturais distribuídas entre os cinco taxa que compõem o complexo: Petunia bajeensis, Petunia inflata, Petunia integrifolia subsp. integrifolia, Petunia integrifolia subsp. depauperata e Petunia interior. Além disso, foram incluídas 22 variedades de P. hybrida abrangendo as duas principais classificações comerciais: Grandiflora e Multiflora. Dez marcadores de microssatélites desenvolvidos para Petunia integrifolia subsp. depauperata foram transferidos para as outras espécies do grupo integrifolia. Padrões de diversidade genética e estruturação populacional foram estudados utilizando sete destes loci de microssatélites. Dados de sequência de marcadores plastidiais foram adicionados para permitir uma comparação entre as espécies do gênero Petunia e as variedades comerciais através de uma rede de haplótipos. A probabilidade de ancestralidade foi inferida entre as populações estudadas e as variedades de P. hybrida. A análise da AMOVA mostrou que 66% da variação genética estão entre os indivíduos amostrados. A espécie P. bajeensis apresentou baixa variabilidade comparada com as outras do complexo integrifolia e se mostrou geneticamente muito distinta do restante do grupo. Foi detectado um relacionamento genético muito próximo entre as espécies P. inflata e P. interior, bem como para as subespécies de P. integrifolia. Dados de cpDNA revelaram um compartilhamento de haplótipos entre variedades comerciais e as espécies P. integrifolia subsp. integrifolia, P. axillaris e P. altiplana. Os resultados obtidos permitiram excluir as espécies P. bajeensis e P. integrifolia subsp. depauperata como possíveis parentais de flor roxa da petúnia-dejardim e apontar para populações de P. inflata e P. interior localizadas na região noroeste do Rio Grande do Sul e arredores. Este foi o primeiro estudo realizado com a utilização de marcadores microssatélites em populações naturais de Petunia e forneceu novas ferramentas moleculares para estudos futuros. / The results allowed to exclude P. bajeensis e P. integrifolia subsp. depauperata as possible purple-flowered parents of garden petunias, pointing P. inflata e P. interior populations, located in northwestern Rio Grande do Sul and surrounding regions, as possible parents. This was the first study that used microsatellite markers in natural Petunia populations, and provided new molecular tools for future investigations.
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Avaliação reprodutiva de touros Braford por meio de marcadores moleculares STRs e SNPs e da termografia infravermelho / Evaluation of reproductive bulls braford through molecular markers strs and snps and the termografy infrared radiationMenegassi, Silvio Renato Oliveira January 2014 (has links)
A identificação de alelos e genótipos associados a características reprodutivas, somente foi possível a partir do desenvolvimento e da localização de marcadores moleculares polimórficos no genoma, especialmente os short tandem repeated (STRs) e os single nucleotide polymorphysm (SNPs). A termografia infravermelho tem sido amplamente empregada como um método não invasivo na determinação da temperatura da superfície corporal, mostrando-se uma técnica promissora na avaliação da adaptação a efeitos ambientais. Portanto, O objetivo geral deste estudo foi identificar marcadores moleculares relacionados à fertilidade de touros e utilizar a termografia infravermelho na avaliação adicional ao exame da aptidão reprodutiva desses animais, medindo-se a temperatura da superfície escrotal. A amostra constou de 87 touros submetidos à analise e acompanhamento da mensuração do perímetro escrotal (PE), dos 7 aos 24 meses de idade. Esses touros foram analisados andrologicamente aos 24 meses pela Classificação Andrológica por Pontos (CAP). Subsequentemente, 17 reprodutores da amostra tiveram seu PE medido e foram examinados e pontuados pelo CAP aos 28, 32 e 36 meses de idade. Não foi verificada associação entre os marcadores STRs BMS3004, HEL5, AFZ1, IDVGA51 e ILSTS002 e a desempenho reprodutivo em ambos os experimentos. O SNP FSHR mostrou significativa relação com o genótipo GG para menor PE aos 24 meses. Os genótipos CG e GG foram significativos para identificação do PE inferior a 29 cm e o genótipo CC para maior pontuação no CAP. Durante o experimento II no SNP FSHR foi encontrada relação ao maior PE aos 7meses, 24meses, 28 meses, 32 meses e 36 meses de idade com o genótipo CC, mas nada foi encontrado de relação com o CAP em ambos os marcadores. Em conclusão, observamos uma forte associação do SNP FSHR com o genótipo GG para PE reduzido e CAP superior no genótipo CC, e a possibilidade de quando encontrado os genótipos CG e GG, encontrar um PE inferior a dois desvios a menos da média da raça. Durante o experimento II também foram avaliados os efeitos sazonais do ambiente sobre a qualidade do sêmen em reprodutores, utilizando-se termografia infravermelho. Variações de gradiente de temperatura escrotal foram significativamente maiores no outono (4.5°C) e inverno (4.0°C) do que na primavera (2.9°C) e verão (0.9°C) (P<0,05). Temperaturas do globo ocular foram mais baixas no inverno (27.6°C) e outono (26.8°C) em relação ao verão (33.9°C) e primavera (31.1°C) (P<0,05). Motilidade do sêmen,movimento de massa e vigor diminuíram no verão em comparação com as outras estações. Concluiu-se que a termografia infravermelho pode ser adotada como um método indireto para avaliar gradiente testicular e suas consequências aos aspectos físicos seminais. / The identification of alleles and genotype associated with these features was only possible through the development and localization of polymorphic molecular markers in the bovine genome, especially the short tandem repeated (STR) and single nucleotide polymorphysm (SNP). Infrared thermography has been widely used as a noninvasive method for determining the temperature of the body surface. This tecnhique shows a promising method to assess the adaptation of environmental effects. Therefore, the aim of this study was to identify molecular markers that are linked to bulls fertility. We also evaluted the uses of infrared thermography to evaluate the reproductive performance of bulls, measuring the surface temperature of the scrotum. Samples were collected from of 87 bulls submitted to analysis from 7 to 36 mo of age measurement of scrotal circumference and analyzed by BBSE. Subsequently, 17 bulls the previous sample measured and had their PE and was examined by BBSE at 28, 32 and 36 mo old. There was no significant association between markers BMS3004 STRs, HEL5, AFZ1, IDVGA51 ILSTS002 and reproductive performance in both experiments. The FSHR SNP showed a significant association with the GG genotype for low SC at 24 mo. The CG and GG genotypes were different for identification of SC less than 29 cm and CC genotype for highest score the BBSE. During the second experiment, in relation to the SNP FSHR at 7, 24, 28, 32 and 36 mo of age were found different with the CC genotype, but no correlation was found in relation to the BBSE in both markers. In conclusion, we observed a strong association of FSHR SNP genotype GG higher for SC and BBSE reduced the possibility of CC genotype and when found the CG and GG genotypes. During the second experiment also, we evaluated the seasonal effects of the environment on semen quality in breeding using infrared thermography images data that were collected using an infrared camera. Changes in temperature scrotal gradient were significantly higher in autumn (4.5° C) , winter (4.0°C) and spring (2.9°C) compared to the summer (0.9°C) (P < 0.05). Ocular temperatures were lower in winter (27.6°C) and autumn (26.8°C) compared to summer (33.9°C) and spring (31.1°C) (P < 0.05). Sperm motility, mass motion and vigor decreased in the summer compared with other seasons. It was concluded that infrared thermography can be used as an indirect method to assess testicular gradient and its consequences to the seminal physical aspects.
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Expressão de genes cloroplastidiais de cana-de-açúcar (Saccharum spp.)em reposta à secaMANSO, Taciana Conceição 31 January 2014 (has links)
Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T15:23:20Z
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Previous issue date: 2014 / CNPq; FACEPE / A cana-de-açúcar é uma gramínea com grande capacidade de acumular sacarose
em seu colmo, a qual é purificada para produção de açúcar, etanol e biodiesel.As
plantas são capazes de perceber alterações ambientais e modificar o perfil de
expressão gênica, ativando mecanismos de defesa, incluindo a regulação da
fotossíntese nos cloroplastos. Assim, o conhecimento do perfil de expressão do
genoma cloroplastidial viabiliza a identificação dos genes que regulam a
respostaaestresses abióticos. Através de busca in silico por transcritos
cloroplastidiais em banco de ESTs de cana-de-açúcar, foram identificados12 genes
com expressão em bibliotecas de folha em diferentes estágios de
desenvolvimento,utilizados para desenho deprimers específicos. O RNA total foi
extraído a partir de folhas+1 de cana-de-açúcar das variedades RB92579 (tolerante)
e RB72454 (sensível) submetidas a estresse por déficit hídrico. Após transcrição
reversa, aqPCR foi conduzida no sistema Rotor-Gene 6000 e a validação dos dados
foirealizada no programa REST 2009. A análise in silicomostrouuma prevalência dos
genes cloroplastidiaisem bibliotecas de folhas. As análises de expressão gênica
apontam a perfis de expressão diferenciados nas variedades analisadas. O aumento
nos níveis dos transcritos codificantes para componentes dos fotossistemas parece
auxiliar a cana-de-açúcar na tolerância à seca, pela reposição e/ou aumento do
número de fotossistemas na membrana do tilacóide. Enquanto que a repressão do
gene petA (citocromo b6f) pode favorecer a redução da produção de espécies
reativas de oxigênio (ROS). O gene rbcLapresentou uma indução navariedade
tolerante em comparação com a sensível, podendo estar relacionado com a alta
produtividade atribuída a essa variedade. Assim, indicamos os genes cloroplastidiais
psaA, psaB, psbA,psbD e petA os mais relacionados à tolerância à seca, podendo
ser fortes candidatos a marcadores moleculares cloroplastidiais de tolerância à seca,
visando auxiliar programas de melhoramento genético de cana-de-açúcar.
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CARACTERIZAÇÃO Morfoagronômica e Molecular de Feijão ComumFERNANDES, L. P. A. 31 August 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-08-31 / O feijoeiro (Phaseolus vulgaris) é uma leguminosa importante para a população mundial por ser fornecedora de proteínas. A modernização da agricultura têm provocado a perda de diversidade genética do feijoeiro. As atividades de coleta e caracterização do germoplasma permitem conhecer genótipos regionais e contribuem para minimizar a perda da diversidade genética. O objetivo deste trabalho foi caracterizar 20 genótipos de feijoeiro do banco de germoplasma do Departamento de Produção Vegetal do Centro de Ciências Agrárias e Engenharias da Universidade Federal do Espírito Santo, por meio de marcadores morfoagronômicos, convivência com trapoeraba e marcadores moleculares. Foram utilizados 5 genótipos comerciais e 15 regionais adquiridos com produtores familiares, no município de Alegre, Espírito Santo, região do Caparaó Capixaba. Foram realizadas análises morfoagronômicas, análise da convivência com a planta daninha Commelina diffusa e análises moleculares utilizando-se 9 iniciadores ISSR. Os resultados mostraram que não houve concordância completa entre os agrupamentos feitos através dos caracteres qualitativos e moleculares. Há significativa diversidade genética na amostra de genótipos de feijoeiro provenientes do município de Alegre, Espírito Santo, região do Caparaó Capixaba (regionais), mas entre os genótipos comerciais, a diversidade é relativamente estreita. As cultivares comerciais estudadas apresentaram pequena dissimilaridade entre si. A trapoeraba pode influenciar no desenvolvimento do feijoeiro, sendo que as cultivares podem apresentar comportamento diferente em relação à convivência. A caracterização morfoagronômica e molecular mostraram-se eficientes na diferenciação dos genótipos e para ambos, os acessos foram considerados distintos.
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Diversidade Genética de Schizolobium Parahyba Var. Amazonicum (huber. Ex. Ducke) Barneby, em Área de Plantio do Espírito Santo.SILVA JUNIOR, A. L. 26 August 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-08-26 / Schizolobium parahyba var. amazonicum (Huber ex. Ducke) Barneby, é conhecido popularmente como Paricá e endêmica da Floresta Amazônica. Sua madeira é de grande aceitação no setor madeireiro, devido seu tronco bem formado e reto, com superfície lisa, textura uniforme e alburno branco. Apresenta, ainda, importância ecológica, podendo ser utilizado em projetos de recuperação de áreas degradadas devido ao seu rápido crescimento. Para o paisagismo é considerada uma espécie ornamental, em virtude de sua intensa floração amarela, de aroma doce. Entretanto, apesar da importância e potencialidades da espécie, não há disponibilidade de material geneticamente melhorado, selecionado para as condições ambientais do Espírito Santo. Neste sentido, o presente estudo objetivou caracterizar a diversidade genética em uma população de S. amazonicum, estabelecida em uma área de floresta plantada na região sul do estado do Espírito Santo. Informações sobre a estrutura e diversidade genética populacional são necessárias em programas de pré-melhoramento e conservação de germoplasma desta espécie, principalmente quando se deseja utilizar este plantio como pomar de sementes. O delineamento experimental foi blocos casualizados, sendo constituído por 3 blocos e 5 tratamentos, ou seja, cinco espaçamentos (3x2 m, 3x3 m, 3x4 m, 4x4 m e 5x5 m). Inicialmente, foi realizado o inventário florestal da população para obtenção das variáveis dendrométricas diâmetro a altura do peito (DAP) e altura total (Ht). A análise de variância e o Teste de Tukey revelaram que apenas os tratamentos exerceram efeito sobre as variáveis dendrométricas. Portanto, foram escolhidos os que apresentaram médias superiores e que não diferiram estatisticamente entre si, sendo os tratamentos T3, T4 e T5 representando os espaçamentos 3x4 m, 4x4 m e 5x5 m, respectivamente. Logo, para seleção das árvores matrizes foi realizado a média geral das variáveis DAP e Ht para os tratamentos escolhidos, sendo marcadas e georreferenciadas 57 árvores em cada tratamento, totalizando 171 árvores. Para o propósito do estudo foram utilizados 11 primers Inter Simple Sequence Repeats (ISSR), que geraram 79 bandas polimórficas (58%). Sobre o conteúdo de informação polimórfica (PIC) realizado para os marcadores ISSR, foi encontrado média de 0,37, caracterizando-os como mediamente informativos. O número de locos encontrados (n = 79), foi maior do que o estabelecido como número ótimo (n = 69). Os resultados obtidos pelo dendrograma corroboraram com a análise bayesiana realizada pelo programa STRUCTURE, que de acordo com o método ΔK o número mais provável de K agrupamentos foi definido como dois (K = 2). Assim, um grupo foi formado com a maioria dos indivíduos (153 genótipos) e o segundo com a minoria (18 genótipos). Foi encontrada alta diversidade genética, com número de alelos observados (Na = 2,00), número de alelos efetivos (Ne = 1,65), índice de diversidade de Nei (H = 0,375) e índice de Shannon (I = 0,554). Com este estudo foi possível verificar que os marcadores ISSR se mostraram eficientes para caracterização da diversidade genética em S. amazonicum, e que a população pode ser utilizada como pomar para coleta de sementes e produção de mudas com maior variabilidade genética.
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Síntese, Caracterização e Avaliação do Sistema ZnAl2O4:TR3+ como Marcador Luminescente para Resíduo de TiroLUCENA, Marcella Auxiliadora de Melo 31 January 2012 (has links)
Submitted by João Arthur Martins (joao.arthur@ufpe.br) on 2015-03-03T18:16:33Z
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Previous issue date: 2012 / CNPq, INCT-INAMI, PROPESQ, CAPES e FACEPE / Anualmente o número de mortes com o uso de armas de fogo tem crescido e tornando a violência armada uma das maiores preocupações da sociedade atual. No que diz respeito ao uso delituoso de armas de fogo, uma importante ferramenta para a produção de prova material é a caracterização de resíduos de tiro (GSR, Gunshot Residue). Entretanto, nos dias atuais, os peritos criminais encontram grandes dificuldades para a sua caracterização de forma rápida e precisa, em especial quando o GSR é gerado por munição livre de chumbo (NTA). Neste trabalho o espinélio ZnAl2O4:TR3+ (TR = Eu, Tb, Dy, Eu-Dy ou Tb-Dy) foi utilizado como marcador luminescente para identificação de GSR. A luminescência do material, conferida pelos íons TR3+, associada a sua estabilidade térmica e química, foi utilizada para que o GSR pudesse ser identificado visualmente, coletado e submetido a análises complementares. Amostras de ZnAl1,95TR0,05O4 (TR = Tb3+, Dy3+, Eu3+-Dy3+ ou Tb3+-Dy3+) foram sintetizadas pelo método de combustão, caracterizadas óptica e estruturalmente e submetidas a testes de incorporação na munição (carga de projeção ou massa iniciadora/primer). Os resultados mostraram que foi possível visualizar facilmente as partículas luminescentes de GSR sobre as mãos do atirador, sobre a arma e no local do disparo, bem como nos suportes utilizados para os testes com primer sob radiação UV (254 nm). Estas partículas foram coletadas e analisadas por FTIR, Raman, Espectroscopia de Emissão e MEV/EDS. Observou-se que, por meio da adição do marcador, é possível caracterizar de forma inequívoca o GSR, mesmo quando produzido por NTA. A presença do marcador ZnAl2O4:TR3+ efetivamente confere uma assinatura química e óptica ao GSR que permite tal caracterização. Observou-se também que o uso de diferentes centros emissores permite a marcação seletiva da munição, abrindo perspectivas para uma futura codificação. Os melhores resultados foram obtidos com marcadores contendo Eu3+ ou Tb3+ e com alta cristalinidade. No tocante à estrutura todas as amostras apresentaram como fase majoritária o espinélio ZnAl2O4, e contaminação de ZnO.
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Avaliação reprodutiva de touros Braford por meio de marcadores moleculares STRs e SNPs e da termografia infravermelho / Evaluation of reproductive bulls braford through molecular markers strs and snps and the termografy infrared radiationMenegassi, Silvio Renato Oliveira January 2014 (has links)
A identificação de alelos e genótipos associados a características reprodutivas, somente foi possível a partir do desenvolvimento e da localização de marcadores moleculares polimórficos no genoma, especialmente os short tandem repeated (STRs) e os single nucleotide polymorphysm (SNPs). A termografia infravermelho tem sido amplamente empregada como um método não invasivo na determinação da temperatura da superfície corporal, mostrando-se uma técnica promissora na avaliação da adaptação a efeitos ambientais. Portanto, O objetivo geral deste estudo foi identificar marcadores moleculares relacionados à fertilidade de touros e utilizar a termografia infravermelho na avaliação adicional ao exame da aptidão reprodutiva desses animais, medindo-se a temperatura da superfície escrotal. A amostra constou de 87 touros submetidos à analise e acompanhamento da mensuração do perímetro escrotal (PE), dos 7 aos 24 meses de idade. Esses touros foram analisados andrologicamente aos 24 meses pela Classificação Andrológica por Pontos (CAP). Subsequentemente, 17 reprodutores da amostra tiveram seu PE medido e foram examinados e pontuados pelo CAP aos 28, 32 e 36 meses de idade. Não foi verificada associação entre os marcadores STRs BMS3004, HEL5, AFZ1, IDVGA51 e ILSTS002 e a desempenho reprodutivo em ambos os experimentos. O SNP FSHR mostrou significativa relação com o genótipo GG para menor PE aos 24 meses. Os genótipos CG e GG foram significativos para identificação do PE inferior a 29 cm e o genótipo CC para maior pontuação no CAP. Durante o experimento II no SNP FSHR foi encontrada relação ao maior PE aos 7meses, 24meses, 28 meses, 32 meses e 36 meses de idade com o genótipo CC, mas nada foi encontrado de relação com o CAP em ambos os marcadores. Em conclusão, observamos uma forte associação do SNP FSHR com o genótipo GG para PE reduzido e CAP superior no genótipo CC, e a possibilidade de quando encontrado os genótipos CG e GG, encontrar um PE inferior a dois desvios a menos da média da raça. Durante o experimento II também foram avaliados os efeitos sazonais do ambiente sobre a qualidade do sêmen em reprodutores, utilizando-se termografia infravermelho. Variações de gradiente de temperatura escrotal foram significativamente maiores no outono (4.5°C) e inverno (4.0°C) do que na primavera (2.9°C) e verão (0.9°C) (P<0,05). Temperaturas do globo ocular foram mais baixas no inverno (27.6°C) e outono (26.8°C) em relação ao verão (33.9°C) e primavera (31.1°C) (P<0,05). Motilidade do sêmen,movimento de massa e vigor diminuíram no verão em comparação com as outras estações. Concluiu-se que a termografia infravermelho pode ser adotada como um método indireto para avaliar gradiente testicular e suas consequências aos aspectos físicos seminais. / The identification of alleles and genotype associated with these features was only possible through the development and localization of polymorphic molecular markers in the bovine genome, especially the short tandem repeated (STR) and single nucleotide polymorphysm (SNP). Infrared thermography has been widely used as a noninvasive method for determining the temperature of the body surface. This tecnhique shows a promising method to assess the adaptation of environmental effects. Therefore, the aim of this study was to identify molecular markers that are linked to bulls fertility. We also evaluted the uses of infrared thermography to evaluate the reproductive performance of bulls, measuring the surface temperature of the scrotum. Samples were collected from of 87 bulls submitted to analysis from 7 to 36 mo of age measurement of scrotal circumference and analyzed by BBSE. Subsequently, 17 bulls the previous sample measured and had their PE and was examined by BBSE at 28, 32 and 36 mo old. There was no significant association between markers BMS3004 STRs, HEL5, AFZ1, IDVGA51 ILSTS002 and reproductive performance in both experiments. The FSHR SNP showed a significant association with the GG genotype for low SC at 24 mo. The CG and GG genotypes were different for identification of SC less than 29 cm and CC genotype for highest score the BBSE. During the second experiment, in relation to the SNP FSHR at 7, 24, 28, 32 and 36 mo of age were found different with the CC genotype, but no correlation was found in relation to the BBSE in both markers. In conclusion, we observed a strong association of FSHR SNP genotype GG higher for SC and BBSE reduced the possibility of CC genotype and when found the CG and GG genotypes. During the second experiment also, we evaluated the seasonal effects of the environment on semen quality in breeding using infrared thermography images data that were collected using an infrared camera. Changes in temperature scrotal gradient were significantly higher in autumn (4.5° C) , winter (4.0°C) and spring (2.9°C) compared to the summer (0.9°C) (P < 0.05). Ocular temperatures were lower in winter (27.6°C) and autumn (26.8°C) compared to summer (33.9°C) and spring (31.1°C) (P < 0.05). Sperm motility, mass motion and vigor decreased in the summer compared with other seasons. It was concluded that infrared thermography can be used as an indirect method to assess testicular gradient and its consequences to the seminal physical aspects.
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Identificação específica de Colletotrichum, caracterização da agressividade e efeito de indutores químicos no controle da antracnose em maracujá amareloALMEIDA, Luis Carlos Cordeiro de 28 February 2005 (has links)
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Previous issue date: 2005-02-28 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Anthracnose, caused by Colletotrichum gloeosporioides and Colletotrichum sp., is the most important post harvest disease on the yellow passion fruit. The disease management measures have not been satisfactory ever during the pre or post harvest period. Aiming to contribute to the program of cultivar resistance, 33 isolates were obtained from three producing regions of Pernambuco State, to: i) identify specie with genetic marker (PCR primer); ii) to know the pathogen aggressiveness on post harvested yellow passion fruits; iii) aggressiveness characterization using: biochemical (extra cellular enzymatic activity on specific solid media), physiological (micelial growth on PDA) and genetic (RAPD primer)markers. Also, it was studied anthracnose control on post harvested yellow passion fruit using acibenzolar-S-methyl (ASM), DL -amine-n-butyric acid (BABA) and methyl jasmonate (MJ) chemical inducers. None DNA extracted from isolates reacted with C. gloeosporioides and C. acutatum PCR primers markers, but 18 DNAs reacted with Colletotrichum of Passiflora PCR primermarker, although isolates not identified genetically showed morphological characteristics similar to C. gloeosporioides. Yellow passion fruits inoculations showed two isolate groups for aggressiveness: high (AG-1) and low (AG-2), but aggressiveness did not correlate with origin and teleomorphic and anamorphic morphotype. The biochemical (amilolytic, celullolytic, lypolytic and proteolytic enzymatic activities) and physiological (micelial growth) markers separated isolates in groups, but they were not a satisfactory makers to aggressiveness. It was not detected pectinolytic enzymatic activity by isolates because the used method it was not appropriated. Bands produced by reaction of 33 DNAs with 18 primers showed that AG-1 isolates are more related to each other than AG-2 isolates, being possible to separate isolates in two genetic groups,which not totality related with AG-1 and AG-2 isolates. The reactions of the RAPD OPA-9 primer with isolates DNA produced bands in position 14, on agarose gel, which allowed characterization of the 85.7 % of AG-1 isolates, showing error of 15.7 % by including three isolates from AG-2 into AG-1, but without technique importance. Study with the chemical ASM, BABA e MJ inducers showed that ASM and MJ, at 12.5; 25.0, 50.0 and 100.0 ppm concentrations, and BABA, at 50, 100, 500 and 1000 ppm concentrations, did not reduce Colletotrichum conidia germination, but BABA and JM stimulate this physiological process. ASM and JM reduced mycelium growth and BABA showed contrary effect. Yellow passion fruits immersed in ASM (100ppm), BABA (1000 ppm) and MJ (100 ppm) suspension and water (control), followed by Colletotrichum inoculation 24 hours after treatment, did not show anthracnose control. / A antracnose, causada por Colletotrichum gloeosporioides e Colletotrichum sp. é uma das doenças em pós-colheita mais importantes do maracujazeiro amarelo. Apesar da existência de medidas de manejo tanto para a pré-colheita como para a pós-colheita, o controle não é satisfatório. Visando contribuir com um programa para aumentar a resistência da planta, foram coletados 33 isolados de Colletotrichum, obtidos de três regiões produtoras do estado de Pernambuco, para: i) identificação específica com marcadores genéticos primers de PCR; ii) conhecer agressividades em maracujá amarelo; iii) caracterizá-la com marcador bioquímico, pela produção de enzimas hidrolíticas extra celulares em meios sólidos específicos, fisiológico, pelo crescimento micelial em meio de BDA e genético, com primers de RAPD. Também se estudou o controle da antracnose em maracujá amarelo com uso dos indutores químicosacibenzolar-S-metil (ASM), ácido LD -amino–n–butírico (BABA) e jasmonato metílico (JM). Nenhum DNA dos isolados reagiu com os primers de PCR marcadores para C. gloeosporioides e C. acutatum, mas 18 reagiram com o primer de PCR marcador para Colletotrichum de Passiflora, embora os isolados não identificados geneticamente apresentassem características morfológicas semelhantes às de C. gloeosporioides. Inoculações em maracujá amarelo permitiram separar os isolados em dois grupos de agressividade: alta (GA-1) e baixa (GA-2), embora a agressividade não tenha se correlacionado com a origem e os morfotipos teleomorfo e anamorfo. Os marcadores bioquímico (atividade enzimática amilolítica, celulolítica, lipolítica e proteolítica) e o marcador fisiológico (crescimento micelial) separaram os isolados em grupos, mas não se mostraram satisfatórios como marcadores para agressividade. Nãofoi detectada atividade enzimática pectinolítica devido ao método ter sido inadequado.As bandas geradas pelas reações de 18 primers com os DNAs dos isolados permitiram observar que os isolados do GA-1 são mais próximos geneticamente entre si do que os isolados do GA-2, sendo possível dividi-los em dois grupos genéticos que não se relacionaram totalmente com os isolados do GA-1 e GA-2. O marcador banda na posição 14 em gel de agarose, resultante das reações dos DNAs dos isolados com o primer de RAPD OPA-9, possibilitou a caracterização de 85,7 % dos isolados do GA-1, com um erro de 15,7 % ao caracterizar como do GA-1 três isolados do GA-2, mas sem importância técnica. Os estudos com os indutores ASM, BABA e JM, evidenciaram que ASM e JM, nas concentrações 12,5; 25,0; 50,0; e 100,0 ppm, e BABA, nas concentrações 50; 100; 500; e 1000 ppm, não reduziram a germinação de conídios de Colletotrichum sp., mas BABA e JM estimularam este processo fisiológico. Os indutores ASM e JM reduziram o crescimento micelial e BABA apresentou efeito contrário. A imersão de maracujá amarelo em suspensão de ASM (100 ppm), JM (100 ppm), BABA (1000 ppm) e em água (testemunha) seguida de inoculação feita 24 h após com Colletotrichum sp. não resultou em controle da doença.
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