Clays and clay minerals (phyllosilicates) have been used for millennia to treat a range of human maladies, such as infected wounds and diseases of the skin. The unique chemistry of phyllosilicates allows them to support the wound environment and encourage healing. Their physicochemical properties can also be utilised to develop modified drug-release formulations and also enables their incorporation into polymer matrices for the development of advanced wound care materials. By developing novel antibacterial phyllosilicate-polymer composite materials it should be possible to support wound healing, whilst simultaneously treating infections locally to avoid systemic adverse effects and prevent the development of antimicrobial resistance. In this research project the clay minerals kaolin (KN), refined montmorillonite (rMMT), montmorilonite K10 (MMTK10), Laponite® RD (LRD), and Laponite® XL21 (LXL21) were investigated for their differing structure and physicochemical properties. Their ability to adsorb and desorb the antibacterial agents tetracycline (TC), doxycycline (DC) and ciprofloxacin (CIP) was determined through a series of adsorption kinetics and isotherm studies. LRD and LXL21 were shown to have the highest drug-carrying capacity and were also able to relinquish this drug-load to inhibit the proliferation of key wound pathogens; Staphylococcus epidermidis, Propionibacterium acnes, and Pseudomonas aeruginosa. XRD and FTIR analyses demonstrated that these drug molecules could be adsorbed into the interlayer space and edge groups of the Laponite® particles. LXL21-CIP composites were successfully incorporated into alginate polymer matrices through interaction of the exposed edge-groups on LXL21 and the hydroxyl groups of the alginate to produce novel nanocomposite film and foam materials. Selection of candidate materials was initially undertaken qualitatively with the support of a tissue viability nurse at the Royal Liverpool and Broadgreen University Hospitals NHS Trust. Important properties for wound-dressings such as adsorptive capacity, water vapour transmission rate, and keratinocyte compatibility were measured quantitatively and compared to materials already used for wound care in the UK. Both the film and foam materials were shown to have properties that would be beneficial for wound healing and were also able to release CIP in a controlled manner with notable activity against S. epidermidis, P. acnes, and P. aeruginosa. The nanocomposite film formulation developed in this research project showed promise for future clinical applications and future work should be undertaken to further optimise their manufacture and fully characterise their ability to support the healing of infected wounds. Although the nanocomposite foams require further research, the work presented in this thesis suggests they could also be promising materials for wound care applications.

Resumo: A retomada dos estudos relativos à Geografia Médica e da Saúde no Brasil, aconteceu a partir das últimas duas décadas do século XX. Esta retomada representa uma ampliação do campo de interesses dos estudos geográficos, momento no qual a geografia pode ser considerada uma ciência plural, ou seja, preocupada com vários subcampos do conhecimento nos quais a espacialidade do objeto de estudo toma relevância. No presente trabalho encontram-se algumas reflexões relativas à construção histórica da geografia médica e da saúde no Brasil. A substituição da perspectiva unicausal e determinística ambiental da origem dos problemas de saúde-doença das populações e sua ligação com a geografia médica, pela perspectiva multicausal e crítica ligadas à geografia da saúde, são aspectos ressaltados na análise. O texto explicita alguns exemplos relativos à estruturação deste campo do conhecimento no Brasil e conclui que há suportes teóricos e metodológicos que valorizam a Geografia da Saúde como uma nova corrente do pensamento Geográfico no país, pois ela possui um período significativo de amadurecimento, objetos de estudo, métodos de pesquisa e abordagens metodológicas que permeiam as várias escolas geográficas bem como um respeitado número de autores que vinculam seus estudos cada vez mais à esta área da Geografia.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T18:56:50Z : No. of bitstreams: 1 mantovanineto_f_me_botfm.pdf: 1481420 bytes, checksum: 1b888bb63cac554aeea6a214944c0cf2 (MD5) / Pesquisas envolvendo seres humanos têm sido realizadas há muito tempo. Com o passar dos anos, regulamentações foram sendo instituídas com o objetivo de proteger os direitos e integridade dos participantes e de assegurar que os dados e resultados dos estudos fossem dignos de credibilidade. Hoje, além de regulamentações locais, os estudos clínicos devem ser conduzidos de acordo com normas internacionais (Good Clinical Practice - GCP) de pesquisa clínica. Neste trabalho, tentamos avaliar, através de questionários, o crescimento da pesquisa clínica no Brasil, nos últimos cinco anos. Fizemos contato com 61 indústrias farmacêuticas situadas na cidade de São Paulo e 200 investigadores brasileiros, envolvidos em estudos clínicos. 44% das indústrias comprometeram-se a responder um questionário. Desses 44%, obtivemos retorno de 59% delas. A taxa de resposta por parte dos investigadores foi de 23%. Comparações de dados em dois períodos distintos (há cinco anos e atualmente) demonstraram aumento, estatisticamente significativo, de número de pessoas nos departamentos de pesquisa, número de protocolos, número de pacientes envolvidos em estudos clínicos, número de centros habilitados e estados onde as pesquisas são conduzidas. Houve ainda, diminuição de protocolos fase IV, aumento de protocolos fase II e III, e mais investimentos financeiros por parte das indústrias farmacêuticas. Através de respostas abertas e subjetivas, concluímos que, além do crescimento quantitativo, houve crescimento qualitativo da pesquisa clínica no Brasil. Hoje, o país é considerado emergente e com grande potencial para desenvolvimento de novos produtos... / Clinical research has been conducted for a long time. Along the years, resolutions have been implemented to assure that the rights and integrity of trial subjects are protected, and that the data and reported results are credible. Nowadays, besides local resolutions, clinical trials must be conducted according to international guidelines (Good Clinical Practices – GCP). In this study we tried to evaluate, through questionnaires, the growth of clinical research in Brazil in the last five years. Sixty-one pharmaceutical industries located in São Paulo city and 200 Brazilian investigators involved with clinical trials were contacted. Forty-four percent of the industries committed to answer a questionnaire. Results were obtained from 59% of them. The rate of response from the investigators was 23%. Comparing data from two different points in time (five years ago and nowadays) there was significant difference in the number of members working in clinical research departments, number of protocols, number of trial patients, number of qualified sites, and number of states where the trials have been conducted. It was also observed a decrease in phase IV trials, increase of phase II and III trials, and more financial investments from industries in this area. Opened and spontaneous responses allowed us to conclude that clinical research in Brazil has not only increased, but has also improved its quality. Today, Brazil is considered to be an emergent country and presents with high potential to develop new products. Although clinical research has grown, one of the biggest concerns to conduct clinical trials in the country is the lack of trained and qualified human resources to... (Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Marcelo Fabiano de Franco / Resumo: Pesquisas envolvendo seres humanos têm sido realizadas há muito tempo. Com o passar dos anos, regulamentações foram sendo instituídas com o objetivo de proteger os direitos e integridade dos participantes e de assegurar que os dados e resultados dos estudos fossem dignos de credibilidade. Hoje, além de regulamentações locais, os estudos clínicos devem ser conduzidos de acordo com normas internacionais (Good Clinical Practice - GCP) de pesquisa clínica. Neste trabalho, tentamos avaliar, através de questionários, o crescimento da pesquisa clínica no Brasil, nos últimos cinco anos. Fizemos contato com 61 indústrias farmacêuticas situadas na cidade de São Paulo e 200 investigadores brasileiros, envolvidos em estudos clínicos. 44% das indústrias comprometeram-se a responder um questionário. Desses 44%, obtivemos retorno de 59% delas. A taxa de resposta por parte dos investigadores foi de 23%. Comparações de dados em dois períodos distintos (há cinco anos e atualmente) demonstraram aumento, estatisticamente significativo, de número de pessoas nos departamentos de pesquisa, número de protocolos, número de pacientes envolvidos em estudos clínicos, número de centros habilitados e estados onde as pesquisas são conduzidas. Houve ainda, diminuição de protocolos fase IV, aumento de protocolos fase II e III, e mais investimentos financeiros por parte das indústrias farmacêuticas. Através de respostas abertas e subjetivas, concluímos que, além do crescimento quantitativo, houve crescimento qualitativo da pesquisa clínica no Brasil. Hoje, o país é considerado emergente e com grande potencial para desenvolvimento de novos produtos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Clinical research has been conducted for a long time. Along the years, resolutions have been implemented to assure that the rights and integrity of trial subjects are protected, and that the data and reported results are credible. Nowadays, besides local resolutions, clinical trials must be conducted according to international guidelines (Good Clinical Practices - GCP). In this study we tried to evaluate, through questionnaires, the growth of clinical research in Brazil in the last five years. Sixty-one pharmaceutical industries located in São Paulo city and 200 Brazilian investigators involved with clinical trials were contacted. Forty-four percent of the industries committed to answer a questionnaire. Results were obtained from 59% of them. The rate of response from the investigators was 23%. Comparing data from two different points in time (five years ago and nowadays) there was significant difference in the number of members working in clinical research departments, number of protocols, number of trial patients, number of qualified sites, and number of states where the trials have been conducted. It was also observed a decrease in phase IV trials, increase of phase II and III trials, and more financial investments from industries in this area. Opened and spontaneous responses allowed us to conclude that clinical research in Brazil has not only increased, but has also improved its quality. Today, Brazil is considered to be an emergent country and presents with high potential to develop new products. Although clinical research has grown, one of the biggest concerns to conduct clinical trials in the country is the lack of trained and qualified human resources to... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Pesquisas cientÃficas buscando a utilizaÃÃo de antÃgenos de Coccidioides posadasii sÃo comuns na literatura especializada, uma vez que, sÃo instrumentos relevantes para diagnÃstico e possÃvel efeito imunoprotetor em humanos. Diante do exposto, foi realizada caracterizaÃÃo bioquÃmica de antÃgeno protÃico oriundo de C. posadasii. busca ativa de casos humanos de coccidioidomicose no Estado do CearÃ, bem como, avaliaÃÃo da resposta imunolÃgica in vivo. Para concretizar tais objetivos, a caracterizaÃÃo bioquÃmica do antÃgeno foi realizada por meio de eletroforese (SDS-PAGE e 2D-PAGE), detecÃÃo de proteases, glicoproteÃnas e sequenciamento N-terminal e foram buscados, ativamente, quadros de coccidiodiomicose em trÃs caÃadores de tatu com a respectiva descriÃÃo clÃnica e avaliaÃÃo laboratorial. Ademais, foi descrito modelo murino de coccidioidomicose com testagem de possÃvel efeito imunoprotetor do antÃgeno in-house. Quanto a anÃlise bioquÃmica, observou-se delimitaÃÃo de bandas nas faixas de 45-67 kDa e 67-97 kDa (SDS-PAGE), detecÃÃo de glicoproteÃnas, proteases e sequenciamento N-terminal demonstrando serem as bandas uma β-glucosidase e uma glutamina sintetase. Nos casos clÃnicos, foram encontrados queixas pneumÃnicas, exame micolÃgico direto, cultivo de escarro, imunodifusÃo radial dupla (com antÃgeno in-house) e PCR positivos para C. posadasii. No modelo murino, o grupo infectado, na presenÃa de antÃgeno e adjuvante, apresentou, na anÃlise histopatolÃgica, menores alteraÃÃes pulmonares que os demais grupos, alÃm de maior estÃmulo linfÃide esplÃnico. No que concerne a dosagem de citocinas (IL-6, IL-12 e TNFα), nÃo se observou diferenÃa significativa entre os grupos, mas uma tendÃncia à resposta imunoprotetora. O grupo infectado, sem imunoproteÃÃo, apresentou maior perda ponderal. Na anÃlise macroscÃpica, o mÃximo comprometimento foi a presenÃa de 2 granulomas, neste Ãltimo grupo. Na anÃlise dos hemogramas, a sÃrie branca demonstrou maiores diferenÃas entre os grupos. Em conclusÃo, o antÃgeno in-house se mostrou tratar-se de uma β-glicosidase e uma glutamina sintetase que tenderam a estimular a imunidade celular em modelo murino. AlÃm disso, a descriÃÃo de casos humanos contribui para a difusÃo do diagnÃstico precoce da coccidioidomicose e requer investigaÃÃes laboratoriais complementares. / Scientific researches seeking to use Coccidioides posadasii antigens are common in the literature, as relevant instruments to diagnosis and possible immunoprotector effect in humans. Thus, we performed biochemical characterization of protein antigen derived from C. posadasii, an active search for human cases of coccidioidomycosis in CearÃ, as well as evaluation of immune response in vivo. To achieve these goals, the biochemical characterization of the antigen was performed by electrophoresis (SDS-PAGE and 2D-PAGE), detection of proteases, glycoproteins and N-terminal sequencing and we reported three human cases of coccidiodiomycosis in armadillo hunters with its clinical description and laboratory evaluation. Further, a murine model was described testing a possible imunoprotector effect with an in-house antigen. For biochemical analysis, it was observed delimitation bands in ranges 45-67 kDa and 67-97 kDa (SDS-PAGE), detection of glycoproteins, proteases and N-terminal sequencing demonstrating the bands being a β-glucosidase and a glutamine synthetase. In clinical cases, it was found pneumonic disease, direct mycological examination, sputum culture, double radial immunodiffusion (antigen in-house) and PCR positive for C. posadasii. In the murine model, the infected group, in the presence of antigen and adjuvant, showed, histologically, lung disorders smaller than the other groups, and increased splenic lymphoid stimulus. Regarding the cytokines (IL-6, IL-12 and TNF), there was no significant difference between groups, but a trend toward immunoprotective response. The infected group, without immunoprotection, showed greater weight loss. In the macroscopic analysis, the maximum commitment was the presence of 2 granulomas in the latter group. In the analysis of blood counts, the white run showed major differences between groups. In conclusion, the in-house antigen showed that it was a β-glucosidase and a glutamine synthetase which tended to stimulate cellular immunity in a murine model. Moreover, the description of human cases contributes to the spread of early diagnosis of coccidioidomycosis and requires additional laboratory investigations.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Burkholderia pseudomallei à um bacilo Gram-negativo causador da melioidose uma doenÃa infecciosa severa e geralmente fatal, a qual pode ser adquirida atravÃs da inoculaÃÃo, inalaÃÃo e ingestÃo do microrganismo que se encontra distribuÃdo no ambiente. No Brasil a melioidose à considerada uma doenÃa emergente descrita pela primeira vez em 2003 no Nordeste brasileiro O presente estudo consistiu em identificar o gene hppD que codifica a produÃÃo de um precursor importante na sÃntese de melanina e avaliar fenotipicamente a produÃÃo do pigmento em cepas de B pseudomallei atravÃs de meios contendo substratos fenÃlicos. Aliado ao estudo foi realizada a comparaÃÃo do perfil de sensibilidade e curva de morte entre cepas melanizadas e nÃo melanizada ante ao imipenem alÃm da avaliaÃÃo da possÃvel aÃÃo do sesquiterpeno farnesol como um inibidor de β-lactamases Os isolados utilizados no estudo pertencem ao LaboratÃrio de PatÃgenos Reemergentes e Emergentes-LAPERE UFC Para o cumprimento da metodologia as cepas foram recuperadas do estoque realizado a extraÃÃo de DNA e a identificaÃÃo do gene hppD atravÃs de reaÃÃo de PCR A expressÃo fenotÃpica de melanina foi avaliada atravÃs de subcultivos em meio Brain Heart infusion (BHI) acrescido de Ãcido cafÃico. O teste de sensibilidade com cepas melanizadas e nÃo melanizadas foi realizado utilizando-se o teste de microdiluiÃÃo em caldo padronizado pelo CLSI segundo documento M07-A8 A curva de morte foi realizada a partir da incubaÃÃo do inÃculo com imipenem no intervalo de 0,125 Âg/ mL a 0,5 Âg/ mL por 1 e 2 horas, seguida da contagem das colÃnias A avaliaÃÃo do farnesol como um possÃvel inibidor de β-lactamases foi realizada atravÃs da combinaÃÃo in vitro do farnesol com antibiÃticos β-lactÃmicos (amoxicilina ampicilina oxacilina imipenem amoxicilina-Ãcido clavulÃnico utilizando-se o teste de microdiluiÃÃo em caldo. O gene hppD foi detectado em todas as cepas de B pseudomallei testadas alÃm da produÃÃo de pigmento em meios contendo substratos fenÃlicos Em relaÃÃo ao perfil de sensibilidade as cepas nÃo melanizadas e melanizadas apresentaram o mesmo valor de CIM porÃm as cepas melanizadas demonstraram maior capacidade de sobrevivÃncia quando em contato com a droga do que as cepas nÃo melanizadas. Em relaÃÃo ao farnesol todas as cepas testadas foram inibidas por este composto com CIM variando de 75 a 150ÂM Dentre as combinaÃÃes dos β-lactÃmicos testadas com farnesol, todas as drogas apresentaram reduÃÃo estatisticamente significativa: amoxicilina (p=0,0001) amoxicilina-Ãcido clavulÃnico (p=0,0005), ampicilina (p=0,0026), oxacilina (p=0,0001) e imipenem (p=0,0105). Por fim as combinaÃÃes com amicacina e gentamicina nÃo apresentaram reduÃÃo estatisticamente significativa pois os aminoglicosÃdeos praticamente repetiram seus valores quando combinados com farnesol Esse estudo abre perspectivas acerca de um novo fator de virulÃncia melanina ainda nÃo descrita para B pseudomallei, alÃm do sesquiterpeno farnesol como um possÃvel inibidor de β-latamases nessa espÃcie

As LesÃes gÃstricas (LG) se desenvolvem a partir da mucosa normal infectada por Helicobacter pylori (H pylori) e podem progredir para o cÃncer gÃstrico (CG) atravÃs de um processo com mÃltiplas etapas A capacidade de H pylori provocar LG està associada com alguns fatores de sua virulÃncia que quando expressa entra em contato com as cÃlulas gÃstricas promovendo a ativaÃÃo da resposta imune inata. Esta, por sua vez, ativa a transcriÃÃo de citocinas inflamatÃrias como as interleucinas (ILs) IL1B (-511) IL1RN (VTNR) IL6 (-174) e IL8 (-251) Tais ILs possuem genes polimÃrficos que alteram sua expressÃo e, consequentemente, a intensidade da resposta inflamatÃria do hospedeiro Assim este estudo objetiva verificar a associaÃÃo entre os polimorfismos de ILs com as LG e o CG na progressÃo para o CG Neste estudo foi obtido DNA de 324 pacientes sendo 118 com CG e 206 com LG prÃ-malÃgnas (LGPM) coletadas em quatro hospitais de Fortaleza-CE A identificaÃÃo dos polimorfismos foi feita por PCR-RFLP e PCR e a detecÃÃo de H pylori por PCR A anÃlise genotÃpica da comparaÃÃo entre as LGPM e CG demonstrou uma associaÃÃo do CG com os genÃtipos IL8TT (p=0,0065) IL6GG (p=0,0012) e IL1RNLL (p=0,0052) Na associaÃÃo das ILs 3x3 observou-se que os haplotipos mais inflamatÃrios estavam associados ao CG jà na anÃlise 4x4 o haplotipo T-T-G-*2 (IL1BxIL8xIL6xIL1RN) foi o mais associado ao CG (p=2,89x10-5) sendo este um bom marcador para este tipo de cÃncer Na comparaÃÃo da GCI com o CG observou-se a associaÃÃo do alelo IL6G com o CG (p=0,0389) A comparaÃÃo entre GCA e CG demonstrou que os genÃtipos IL8AT (p=0,0016) IL1RNL*2 (p=0,0049) e IL6GG (p=0,0004) estÃo associados ao CG e a anÃlise da associaÃÃo das ILs 4x4 demonstrou que o haplotipo T-T-G-*2 (IL1BxIL8xIL6xIL1RN) foi associado ao CG (p=5,72x10-5) confirmando a importÃncia deste haplotipo como bom marcador para o CG Na comparaÃÃo da MI com CG observou-se associaÃÃo significativa do CG com IL8AT (p=0,0426) e IL6GG (p=0,0475) Deste modo, pode-se concluir que os genÃtipos mais inflamatÃrios de todas as ILs estavam associados ao CG e que, de acordo com a anÃlise haplotipica, o haplotipo mais inflamatÃrio (T-T-G-*2) à um bom marcador para o CG / As LesÃes gÃstricas (LG) se desenvolvem a partir da mucosa normal infectada por Helicobacter pylori (H pylori) e podem progredir para o cÃncer gÃstrico (CG) atravÃs de um processo com mÃltiplas etapas A capacidade de H pylori provocar LG està associada com alguns fatores de sua virulÃncia que quando expressa entra em contato com as cÃlulas gÃstricas promovendo a ativaÃÃo da resposta imune inata. Esta, por sua vez, ativa a transcriÃÃo de citocinas inflamatÃrias como as interleucinas (ILs) IL1B (-511) IL1RN (VTNR) IL6 (-174) e IL8 (-251) Tais ILs possuem genes polimÃrficos que alteram sua expressÃo e, consequentemente, a intensidade da resposta inflamatÃria do hospedeiro Assim este estudo objetiva verificar a associaÃÃo entre os polimorfismos de ILs com as LG e o CG na progressÃo para o CG Neste estudo foi obtido DNA de 324 pacientes sendo 118 com CG e 206 com LG prÃ-malÃgnas (LGPM) coletadas em quatro hospitais de Fortaleza-CE A identificaÃÃo dos polimorfismos foi feita por PCR-RFLP e PCR e a detecÃÃo de H pylori por PCR A anÃlise genotÃpica da comparaÃÃo entre as LGPM e CG demonstrou uma associaÃÃo do CG com os genÃtipos IL8TT (p=0,0065) IL6GG (p=0,0012) e IL1RNLL (p=0,0052) Na associaÃÃo das ILs 3x3 observou-se que os haplotipos mais inflamatÃrios estavam associados ao CG jà na anÃlise 4x4 o haplotipo T-T-G-*2 (IL1BxIL8xIL6xIL1RN) foi o mais associado ao CG (p=2,89x10-5) sendo este um bom marcador para este tipo de cÃncer Na comparaÃÃo da GCI com o CG observou-se a associaÃÃo do alelo IL6G com o CG (p=0,0389) A comparaÃÃo entre GCA e CG demonstrou que os genÃtipos IL8AT (p=0,0016) IL1RNL*2 (p=0,0049) e IL6GG (p=0,0004) estÃo associados ao CG e a anÃlise da associaÃÃo das ILs 4x4 demonstrou que o haplotipo T-T-G-*2 (IL1BxIL8xIL6xIL1RN) foi associado ao CG (p=5,72x10-5) confirmando a importÃncia deste haplotipo como bom marcador para o CG Na comparaÃÃo da MI com CG observou-se associaÃÃo significativa do CG com IL8AT (p=0,0426) e IL6GG (p=0,0475) Deste modo, pode-se concluir que os genÃtipos mais inflamatÃrios de todas as ILs estavam associados ao CG e que, de acordo com a anÃlise haplotipica, o haplotipo mais inflamatÃrio (T-T-G-*2) à um bom marcador para o CG

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Cryptococcus neoformans species Complex comprises the main agents of cryptococcosis, an important systemic mycosis of nature and opportunistic. These species are capable of expressing multiple virulence factors that contribute to the development of resistance to antifungal therapeutic use. Research seeking new effective therapy measures are necessary. Heat shock proteins (Hsp) have been shown to be a promising molecular target for medical treatment of various diseases such as various forms of cancer and atherosclerosis. Studies have demonstrated that the expression of these chaperonins is also required for the maintenance of cellular homeostasis in different fungal pathogens. From this perspective, this study aimed to investigate the effect of blocking the protein Hsp90 front of sensitivity to antifungal agents in vitro planktonic cells and sessile, production of virulence factors in vitro and in vivo virulence in Cryptococcus neoformans species Complex. Therefore, the action of yeast Hsp90 protein was blocked with radicicol drug - an antibiotic capable of inhibiting the ATPase activity of Hsp90 - and then the cultures were evaluated for in vitro susceptibility to antifungal agents for therapeutic use in planktonic cells and associated in biofilms. We also assessed the effect of inactivation of Hsp90 on the production of virulence factors capsule, melanin and proteases. In addition, the in vivo virulence was investigated in a model of experimental infection using the nematode Caenorhabditis elegans. The results revealed that radicicol inhibited the growth of planktonic cells Cryptococcus spp. (n=12) with values of minimum inhibitory concentration (MIC) ranging from 0.5 to 2 &#956;g/mL. We observed synergy between pharmacological and radicicol azoles. Furthermore, blockade of Hsp90 potentiated the effect of in vitro antifungal agents, particularly for the fluconazole and itraconazole, which MIC values were reduced by up to 64 times the face of isolated cells (n=12). Although the blockade of Hsp90 by isolated radicicol was not able to inhibit biofilm formation and biofilm formed of Cryptococcus spp. (n=12) (p>0.05), the inactivation of Hsp90 potentiated the effect of amphotericin B, azoles, especially fluconazole, when tested in combination with radicicol (p<0.05). Moreover, blockade of Hsp90 significantly reduced the volume of capsular Cryptococcus spp. (n=4) (p<0.05). However, no difference was observed in production of melanin by radicicol treated cells (n=4) (p>0.05) as well as the production of protease by strains of Cryptococcus spp. (n=4) (p>0.05). By contrast, inactivation of Hsp90 decreased virulence Cryptococcus spp. in vitro and in vivo in C. elegans (p<0.0001) as well as maximize the effect of fluconazole in vitro and in vivo. Therefore, Hsp90 is an important target for the development of antifungal strategies. However, further studies are needed to better understand the role of Hsp90 in fungal pathogens of the genus Cryptococcus spp. / O Complexo Cryptococcus neoformans/C. gattii compreende os principais agentes da criptococose, uma importante micose de natureza sistÃmica e carÃter oportunista. Essas espÃcies sÃo capazes de expressar mÃltiplos fatores de virulÃncia que contribuem para o surgimento de resistÃncia aos antifÃngicos de uso terapÃutico. Pesquisas que buscam novas medidas eficazes de terapia sÃo necessÃrias. ProteÃnas do choque tÃrmico (Hsp) tÃm se demonstrado um alvo molecular promissor em Ãrea mÃdica para o tratamento de diversas doenÃas, tais como diferentes tipos de cÃncer e aterosclerose. Estudos demonstram que a expressÃo dessas chaperoninas tambÃm à necessÃria para a manutenÃÃo da homeostase celular em diferentes patÃgenos fÃngicos. Nessa perspectiva, o presente estudo teve como objetivo investigar o efeito do bloqueio das proteÃnas Hsp90 frente à sensibilidade a antifÃngicos in vitro em cÃlulas planctÃnicas e sÃsseis, produÃÃo de fatores de virulÃncia in vitro e virulÃncia in vivo no Complexo Cryptococcus neoformans/C. gattii. Para tanto, a aÃÃo das proteÃnas Hsp90 fÃngicas foi bloqueada com o fÃrmaco radicicol â um antibiÃtico capaz de inibir a atividade ATPÃsica das Hsp90 â e, em seguida, as culturas foram avaliadas quanto à sensibilidade in vitro a antifÃngicos de uso terapÃutico em cÃlulas planctÃnicas e associadas em biofilmes. TambÃm foi avaliado o efeito da inativaÃÃo das Hsp90 sobre a produÃÃo dos fatores de virulÃncia cÃpsula, melanina e proteases. AlÃm disso, a virulÃncia in vivo foi investigada em modelo de infecÃÃo experimental utilizando o nematÃdeo Caenorhabditis elegans. Os resultados revelaram que o radicicol inibiu o crescimento das cÃlulas planctÃnicas de Cryptococcus spp. (n=12), com valores de concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) que variaram de 0,5 â 2 &#956;g/mL. Observou-se sinergismo farmacolÃgico entre o radicicol e os azÃlicos. Ademais, o bloqueio das Hsp90 potencializou o efeito dos antifÃngicos in vitro, sobretudo para o fluconazol e o itraconazol, os quais tiveram os valores de CIM reduzidos em atà 64 vezes frente Ãs cÃlulas isoladas (n=12). Embora o bloqueio das Hsp90 pelo radicicol isolado nÃo tenha sido capaz de inibir a formaÃÃo de biofilme e biofilme formado de Cryptococcus spp. (n=12) (p>0,05), a inativaÃÃo das Hsp90 potencializou o efeito da anfotericina B e derivados azÃlicos, sobretudo o fluconazol, quando testados em combinaÃÃo com o radicicol (p<0,05). AlÃm disso, o bloqueio das Hsp90 reduziu significativamente o volume capsular de Cryptococcus spp. (n=4) (p<0,05). PorÃm, nÃo observou-se diferenÃa na produÃÃo de melanina por cÃlulas tratadas com o radicicol (n=4) (p>0,05) assim como na produÃÃo de proteases pelas cepas de Cryptococcus spp. (n=4) (p>0,05). Em contrapartida, a inativaÃÃo das Hsp90 diminuiu a virulÃncia de Cryptococcus spp. in vitro e in vivo em C. elegans (p<0,0001) alÃm de potencializar o efeito do fluconazol in vitro e in vivo. Portanto, as Hsp90 sÃo um importante alvo para o desenvolvimento de estratÃgias antifÃngicas. Todavia, estudos mais aprofundados sÃo necessÃrios para melhor compreender o papel das Hsp90 nos patÃgenos fÃngicos do gÃnero Cryptococcus spp.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Tendo em vista que algumas propriedades terapÃuticas da curcumina jà sÃo bem descritas, dessa forma o presente estudo aponta para um efeito antifÃngico da curcumina frente a cepas de leveduras patogÃnicas resistentes ao fluconazol, cepas de Candida spp. e Cryptococcus neoformans. Todas as cepas estudadas foram inibidas pela curcumina, com diferentes graus de inibiÃÃo entre as espÃcies com CIMs variando entre 8-64 &#956;g/mL. ApÃs a exposiÃÃo das cepas de C. albicans a curcumina, foi observado uma diminuiÃÃo no nÃmero de cÃlulas viÃveis, indicando assim danos Ãs membranas celulares, com possÃvel comprometimento de suas funÃÃes. Os nossos resultados revelaram que apÃs o tratamento com a curcumina, constatamos uma intensificaÃÃo na marcaÃÃo com PI (Iodeto de propÃdio), indicando alteraÃÃes nas membranas celulares. No presente trabalho, a funÃÃo mitocondrial das cÃlulas de C. albicans parece ter sido afetada apÃs exposiÃÃo à curcumina. O colapso no &#916;&#968;m (Potencial Transmembrana Mitocondrial) pode conduzir a aberturas de poros transientes nas membranas mitocondriais. Em relaÃÃo aos diversos mecanismos de aÃÃo descritos para a curcumina, existem evidÃncias de que o DNA à um dos alvos celulares desta molÃcula. Nossos dados sugerem que apÃs a exposiÃÃo à curcumina, as cÃlulas de C. albicans, apresentaram quebras totais nas cadeias de DNA. Em conclusÃo, o composto curcumina apresenta atividade antifÃngica in vitro contra cepas de Candida spp. e Cryptococcus neo-formans resistentes ao fluconazol. AlÃm de promover danos ao DNA e externalizaÃÃo da fosfatidilserina, o respectivo composto parecem atuar em sÃtios especÃficos prÃximos a mitocÃndria das cÃlulas de C. albicans, levando à morte por apoptose. / Considering that some therapeutic properties of curcumin are well described, so the present study points to an antifungal effect of curcumin against strains of pathogenic yeasts resistant to fluconazole, strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans. All strains studied were inhibited by curcumin with different degrees of inhibition among species with MICs ranging from 8-64 mg / ml. After exposure strains of C. albicans, curcumin a decrease in the number of viable cells was observed, thus indicating damage to cell membranes, with possible compromise of their functions. Our results showed that after treatment with curcumin, found in more intense staining with PI (Propidium iodide), indicating changes in cell membranes. In this study, the mitochondrial function of C. albicans cells appears to have been affected after exposure to curcumin. The collapse in &#916;&#968;m (Mitochondrial Transmembrane Potential) can lead to openings of transient pores in the mitochondrial membranes. In relation to the different mechanisms of action described for curcumin, there is evidence that DNA is one of the celular targets of this molecule. Our data suggest that after exposure to curcumin, cells of C. albicans showed total breaks in DNA strands. In conclusion, the compound curcumin has antifungal activity in vitro against strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans resistant to fluconazole. In addition to promoting DNA damage and externalization of phosphatidylserine, the respective compound seem to act at specific sites near mitochondria of C. albicans cells, leading to death by apoptosis.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Clostridium difficile à um bacilo Gram positivo, anaerÃbio estrito, formador de esporos e produtor de toxinas. Atualmente, representa a principal causa de diarreia hospitalar associada ao uso de antibiÃticos. Pacientes oncolÃgicos sÃo um dos principais grupos de risco para infecÃÃo por C. difficile (CDI), visto que o uso de agentes quimioterÃpicos pode alterar a mucosa intestinal. AlÃm disso, estes pacientes normalmente sÃo imunodeprimidos e frequentemente utilizam antibiÃticos de largo espectro. Tendo em vista a patogenicidade do C. difficile e a importÃncia da doenÃa induzida por essa bactÃria em ambiente hospitalar este estudo visou determinar a incidÃncia e caracterizaÃÃo fenotÃpica e genotÃpica de cepas de C. difficile isoladas de pacientes oncolÃgicos internados do Hospital Haroldo JuaÃaba, Fortaleza, CearÃ. Durante o perÃodo de 12 meses (maio/2013 a maio/2014) foram coletadas 41 amostras de fezes diarreicas. Toxinas A e/ou B foram detectadas a partir das fezes por meio de um kit de detecÃÃo comercial ELISA. Em seguida, as amostras foram cultivadas em Agar Cicloserina, Cefoxitina, Frutose (CCFA) e incubadas em anaerobiose. As cepas isoladas foram processadas e realizadas identificaÃÃo fenotÃpica e anÃlise de detecÃÃo dos genes das toxinas e do fragmento do gene tpi (identificaÃÃo definitiva) por PCR convencional. A sensibilidade das cepas isoladas a 12 antimicrobianos foi determinada por meio de E-test. TambÃm foi realizado a genotipagem das cepas por meio da anÃlise molecular PFGE. 46,3% (19/41) das amostras foram positivas para presenÃa das toxinas A/B por ELISA e/ou cultura do C. difficile. Dessas amostras, foram isolados C. difficile de trÃs amostras (15,8% - 3/19). Em todos os isolados foram detectados os genes tpi, tcdA e tcdB. O domÃnio de ligaÃÃo da toxina binÃria (cdtB) nÃo foi detectado assim como tambÃm nÃo foram observadas deleÃÃes no gene tcdC nos isolados. Todas as cepas apresentaram o mesmo genÃtipo, NAP4. Com relaÃÃo à sensibilidade das cepas aos antimicrobianos foi verificado resistÃncia a dois ou mais antimicrobianos (azitromicina, tetraciclina, ciprofloxacina, levofloxacina, ceftriaxona e cefotaxima). 57,9% (11/19) faziam uso de antibiÃticos e quimioterÃpicos. Este trabalho descreveu a incidÃncia de CDI em pacientes oncolÃgicos, e evidenciou pela primeira vez a presenÃa de C.difficile em casos associados a comunidade (CA-CDI) nesses pacientes no Brasil, ressaltando a importÃncia do estudo dessa bactÃria para a compreensÃo da situaÃÃo epidemiolÃgica dessa infecÃÃo e de sua dispersÃo entre unidades hospitalares brasileiras. / Clostridium difficile is a strictly anaerobic, spore-forming, toxin-producing Gram positive bacillus. Currently, it is the main cause of nosocomial diarrhea associated with antibiotic use. Cancer patients are a major risk group for C. difficile infection (CDI), since the use of chemotherapeutic agents can alter the intestinal mucosa. Furthermore, these patients are often immunosuppressed and often use broad spectrum antibiotics. Considering the pathogenicity of C. difficile and the importance of this infection in hospitalized patients, this study aimed to determine the incidence and the phenotypical and genotypical characterization of strains of C. difficile isolated from cancer patients at Haroldo JuaÃaba Hospital, Fortaleza, CearÃ. During the 12 month period (May/2013 to May/2014) 41 diarrheic fecal samples were collected. Toxins A/B were detected from feces through a commercial ELISA detection kit. Then, the samples were cultivated on cefoxitine-cycloserine-frutose agar (CCFA) and incubated anaerobically. Isolates were submitted to several analyses, including phenotypical identification, detection of toxin genes and of a fragment of the tpi gene (definitive identification) by conventional PCR. The susceptibility of the strains to 12 antimicrobial agents was determined by E-test. Genotyping of the strains was also performed through molecular PFGE analysis. Out of 41 samples, 46.3% (19/41) were positive for either one or both of the performed tests: detection of toxin A/B and/or culture of C. difficile. C. difficile was recovered from three samples (15.8% - 3/19). The tpi, tcdA and tcdB genes were detected in all of the isolates. The binding domain of the binary toxin (cdtB) was not detected as well as no deletions were observed in the tcdC gene of the analysed isolates. All strains belonged to the same genotype, NAP4. Regarding the antimicrobial susceptibility of the strains, resistance to two or more antibiotics (azithromycin, tetracycline, ciprofloxacin, levofloxacin, ceftriaxone and cefotaxime) was observed. Out of the 19 positive patients, 57.9% (11/19) were using antibiotics and under chemotherapy. This paper describes the incidence of CDI in patients with cancer, and shows for the first time the detection of community-associated Clostridium difficile infection (CA-CDI) in those patients in Brazil, highlighting the importance of studying this bacterium for understanding the epidemiological situation of this infection and its spread among Brazilian hospitals.