Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2016-09-19T13:30:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) KETSIA SABRINA DO NASCIMENTO MARINHO_PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE HUMANA E MEIO AMBIENTE_CENTRO ACADÊMICO DE VITÓRIA_2016.pdf: 1867724 bytes, checksum: ab27218d60feb94b0dc49adbdb83440b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T13:30:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) KETSIA SABRINA DO NASCIMENTO MARINHO_PÓS-GRADUAÇÃO EM SAÚDE HUMANA E MEIO AMBIENTE_CENTRO ACADÊMICO DE VITÓRIA_2016.pdf: 1867724 bytes, checksum: ab27218d60feb94b0dc49adbdb83440b (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CAPES / O ácido úsnico, composto resultante do metabolismo secundário liquênico apresenta relevantes atividades biológicas e diversos casos de hepatotoxicidade já relatados. O desenvolvimento de alternativas inovadoras, a exemplo da encapsulação do ácido úsnico em microesferas, permite aumentar a eficiência terapêutica e diminuir os seus efeitos tóxicos. Ensaios pré-clínicos sobre o ciclo reprodutivo são necessários para a incorporação de novas moléculas na indústria farmacêutica, determinando as condições de uso seguro para a saúde. Em vista disto, este trabalho objetivou a investigação do potencial teratogênico do ácido úsnico encapsulado em microesferas de copolímero de ácido láctico e glicólico, como uma maneira de minimizar os seus efeitos tóxicos no organismo em desenvolvimento. As microesferas contendo ácido úsnico foram preparadas utilizando a técnica de emulsão múltipla (A/O/A), seguida de evaporação do solvente, e caracterizadas através da eficiência de encapsulação. No estudo experimental de toxicidade foram utilizadas 12 ratas Wistar, que foram submetidas ao estudo do ciclo estral no intuito de se determinar o período fértil, e em seguida, pareadas com machos (2:1). Após a confirmação da gestação, as fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em grupos, controle (n=6) e tratado (n=6). As fêmeas do grupo controle receberam 1,0 mL de solução fisiológica; e as do grupo tratado receberam doses orais de 25 mg/kg/dia de ácido úsnico encapsulado em microesferas (MS-AU) durante o período da organogênese, pela via oral de administração (gavagem). Ao 20° dia de gestação as fêmeas foram sacrificadas e seus fetos retirados, analisados e pesados juntamente com sua respectiva placenta. O efeito causado pelo tratamento com as MS-AU foi avaliado através da variação de peso corpóreo, peso do fígado, análises bioquímicas e análises histomorfométricas do fígado. As microesferas contendo ácido úsnico apresentaram-se com uma eficiência de encapsulação de 99,0 ± 0,82 %. Foi observada uma redução (86,12 ± 20,69) de cerca de 22% no ganho de peso durante a gestação quando comparado às ratas prenhes não tratadas (110,85 ± 10,03). Não houve diferença no peso dos fígados em todos os grupos de animais. Não houve alterações significativas nas enzimas aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase após o tratamento dos animais com o MS-UA. Os fetos provenientes dos animas tratados com MS-AU durante a prenhez, apresentou uma diminuição significativa no peso médio (4,65 ± 0,41) em relação aos não tratados (4,85 ± 0,35), no entanto, não foi observado nenhum tipo de malformação externa. A análise microanatomia do fígado das ratas prenhes do grupo controle e grupo experimental estavam dentro dos padrões de normalidade. Apesar disso, as análises histomorfométricas revelaram um aumento no número total de hepatócitos, com médias celulares entre o grupo experimental e o controle (37,56 ± 7,94; 35,48 ± 6,00, respectivamente). Como também uma diminuição significativa no tamanho médio do núcleo destes hepatócitos (55,89 ± 13,00 μm2), quanto aos demais animais do grupo controle (58,25 ± 13,00 μm2). Porém, nenhuma alteração foi observada para as células de kupffer e área celular dos hepatócitos. Na análise histomorfométrica do fígado dos fetos obtidos das ratas prenhes expostas as MS-AU foi observado um aumento significativo (43,31 ± 7,17) de aproximadamente 13% na quantidade de hepatócitos em relação aos animais não tratados; e uma diminuição (0,04 ± 0,26) de cerca de 56% no número de megacariócitos, comparado ao grupo controle (0,09 ± 0,37). Os dados aqui apresentados demonstram que a administração de MS-AU na dose de 25 mg/kg é capaz de induzir fetotoxicidade no período da organogênese. Porém, não sendo suficiente ao ponto de causar efeitos teratogênicos como foi evidenciado para o composto na sua forma livre em estudos anteriores. Estes resultados sugerem que a encapsulação do ácido úsnico ajuda a diminuir os efeitos tóxicos causados pela sua exposição em um período tão suscetível ao aparecimento de efeitos teratogênicos. / The usnic acid it is a compound resulting from lichen secondary metabolism presents relevant biological activity and several cases of hepatotoxicity have been reported. The development of innovative alternatives, such as the encapsulation of usnic acid microspheres can increase the therapeutic efficiency and decrease its toxic effects. Pre-clinical trials of the reproductive cycle are required for the incorporation of new molecules in the pharmaceutical industry, determining the safe use of health conditions. In view of this, this study aimed to investigate the teratogenic potential of usnic acid encapsulated into poly(lactide-co-glicolide) microspheres as a way to minimize its toxic effects in the developing organism. Microspheres containing usnic acid was prepared using the technique of multiple emulsion (w/o/w), followed by evaporation of the solvent, and characterized by encapsulation efficiency. In experimental toxicity study we used 12 Wistar rats, which were subjected to the study of the estrous cycle in order to determine the fertile period, and then paired with males (2: 1). Upon confirmation of pregnancy, females were randomly assigned to groups: control (n = 6) and treated (n = 6). The control group of females received 1.0 mL of saline solution; and the treated group received oral doses of 25 mg/kg/day of usnic acid encapsulated in microspheres (MS-AU) during the period of organogenesis, by oral administration (gavage). The 20th day of gestation the females were sacrificed and their fetuses removed, analyzed and weighed along with their respective placenta. The effect caused by the treatment with MS-AU was evaluated by body weight variation, liver weight, biochemical analysis and histomorphometric liver analysis. Microspheres containing usnic acid presented with an encapsulation efficiency of 99.0 ± 0.82%. Was observed a reduction (86.12 ± 20.69) of about 22% weight gain during pregnancy when compared to untreated pregnant rats (110.85 ± 10.03). There was no difference in liver weights in all groups of animals. There were no significant changes in enzymes aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase after treatment of the animals with MS-AU. Fetuses from animals treated with MS-AU during pregnancy showed a significant decrease in weight average (4.65 ± 0.41) compared to untreated (4.85 ± 0.35), however, it was not observed any external malformations. The microanatomy of the liver of pregnant rats in the control group and experimental group were within normal limits. Despite this, histomorphometric analyzes revealed an increase in the total number of hepatocytes, with cells average between the experimental group and the control group (37.56 ± 7.94 μm2; 35.48 ± 6.00 μm2, respectively). As well as a significant decrease in the average size of the nucleus of these hepatocytes (55.89 ± 13.00) how much the other control group (58,25 ± 13,00). However, no change was observed for cells and Kupffer cell area of hepatocytes. The histomorphometric analysis of the liver of fetuses obtained from pregnant rats exposed the MS-AU was observed a significant increase (43.31 ± 7.17) of approximately 13% in the amount of hepatocytes compared to untreated animals; and a decrease (0.04 ± 0.26) of about 56% in the number of megakaryocytes, compared to the control group (0.09 ± 0.37). The data presented herein demonstrate that administration of MS-AU at the dose of 25 mg/kg is capable of inducing Fetotoxicity the period of organogenesis. However, it is not enough as to cause teratogenic effects as was evidenced for the compound in its free form in previous studies. These results suggest that the encapsulation of usnic acid helps to reduce the toxic effects caused by their exposure in a period as susceptible to the onset of teratogenic effects.

Os fungos endofíticos constituem uma fonte promissora para descoberta de novos compostos ativos de interesse biotecnológico. Nas últimas décadas, os fungos endofíticos têm recebido atenção no meio científico devido aos compostos que produzem, com estruturas únicas e atividades biológicas de relevância em diversas áreas, inclusive agronômica. Um dos maiores problemas nesta área são as doenças causadas por fungos fitopatogênicos que acometem as culturas. Dentre elas, a antracnose é uma das principais doenças que atinge diversas culturas no Brasil, gerando grandes perdas agrícolas, principalmente as culturas do morango, guaraná e citrus, causadas por fungos do gênero Colletotrichum. Esse trabalho teve como objetivo investigar extratos de linhagens dos fungos endofíticos Fusarium e Penicillium, isolados de folhas do guaranazeiro, com atividade à fitopatógenos do gênero Colletotrichum isolados das culturas de guaraná, morango e citrus. Para tanto foi realizado uma triagem inicial de duas linhagens de fungos, dentre nove, por ensaios biológicos in vitro de cultivo pareado na atividade antifúngica aos três fitopatógenos. As duas linhagens selecionadas, apresentaram os maiores índices de antagonismo contra os três fitopatógenos e foram identificadas como Fusarium sp e Penicillum pinophilum. Os extratos e as frações semipurificadas se mostraram com grande potencial na inibição do crescimento do fitopatógeno do gênero Colletotrichum, causador da antracnose, que provoca grandes perdas nas culturas de importância econômica do Brasil. / Endophitic fungi are a promising source for discovery of new active compounds of biotechnological interest. In recent decades, endophytic fungi have received attention in the scientific community because of compounds they produce, with unique structures and biological activities of relevance in several areas, including agronomy. One of the greatest problems in this is diseases caused by phytopathogenic fungi that affect the crops. Among them, anthracnose is a major disease that affects several crops in Brazil, generating large agricultural losses, especially strawberry crops, guarana and citrus caused by fungi of the genus Colletotrichum. This study investigated endophytic fungi strains of Fusarium and Penicillium extracts isolated from guarana leaves, with activity to phytopathogens of the genus Colletotrichum isolated from guarana crops, strawberry and citrus. For that, it was conducted an initial screening of two strains of fungi, among nine, using in vitro biological assays of cultivation paired in antifungal activity to the three pathogens. The two strains selected had the highest rates of antagonism against the three phytopathogens and were identified as Fusarium sp and Penicillium pinophilum. Extracts and semi-purified fractions were shown with great potential to inhibit pathogen growth of the genus Colletotrichum, which causes anthracnose and, thus, great losses to crops of economic importance in Brazil.

Os fungos endofíticos constituem uma fonte promissora para descoberta de novos compostos ativos de interesse biotecnológico. Nas últimas décadas, os fungos endofíticos têm recebido atenção no meio científico devido aos compostos que produzem, com estruturas únicas e atividades biológicas de relevância em diversas áreas, inclusive agronômica. Um dos maiores problemas nesta área são as doenças causadas por fungos fitopatogênicos que acometem as culturas. Dentre elas, a antracnose é uma das principais doenças que atinge diversas culturas no Brasil, gerando grandes perdas agrícolas, principalmente as culturas do morango, guaraná e citrus, causadas por fungos do gênero Colletotrichum. Esse trabalho teve como objetivo investigar extratos de linhagens dos fungos endofíticos Fusarium e Penicillium, isolados de folhas do guaranazeiro, com atividade à fitopatógenos do gênero Colletotrichum isolados das culturas de guaraná, morango e citrus. Para tanto foi realizado uma triagem inicial de duas linhagens de fungos, dentre nove, por ensaios biológicos in vitro de cultivo pareado na atividade antifúngica aos três fitopatógenos. As duas linhagens selecionadas, apresentaram os maiores índices de antagonismo contra os três fitopatógenos e foram identificadas como Fusarium sp e Penicillum pinophilum. Os extratos e as frações semipurificadas se mostraram com grande potencial na inibição do crescimento do fitopatógeno do gênero Colletotrichum, causador da antracnose, que provoca grandes perdas nas culturas de importância econômica do Brasil. / Endophitic fungi are a promising source for discovery of new active compounds of biotechnological interest. In recent decades, endophytic fungi have received attention in the scientific community because of compounds they produce, with unique structures and biological activities of relevance in several areas, including agronomy. One of the greatest problems in this is diseases caused by phytopathogenic fungi that affect the crops. Among them, anthracnose is a major disease that affects several crops in Brazil, generating large agricultural losses, especially strawberry crops, guarana and citrus caused by fungi of the genus Colletotrichum. This study investigated endophytic fungi strains of Fusarium and Penicillium extracts isolated from guarana leaves, with activity to phytopathogens of the genus Colletotrichum isolated from guarana crops, strawberry and citrus. For that, it was conducted an initial screening of two strains of fungi, among nine, using in vitro biological assays of cultivation paired in antifungal activity to the three pathogens. The two strains selected had the highest rates of antagonism against the three phytopathogens and were identified as Fusarium sp and Penicillium pinophilum. Extracts and semi-purified fractions were shown with great potential to inhibit pathogen growth of the genus Colletotrichum, which causes anthracnose and, thus, great losses to crops of economic importance in Brazil.

Esponjas do gênero Dysidea (Ordem: Dictyoceratida) caracterizam-se por apresentarem grande diversidade de metabólitos secundários, muitos dos quais apresentam potentes atividades biológicas. Este trabalho descreve o estudo de duas amostras de esponjas da espécie Dysidea robusta, DR1 e DR2, coletadas no litoral da Bahia em 1999. Tal estudo consistiu no fracionamento das amostras, nas análises de seus extratos brutos por LC-MS e técnicas de RMN- mono e bidimensionais. Dentre os extratos de DR1, a fração DR1-EP-5A obtida do extrato éter de petróleo apresentou uma mistura de três ceramidas saturadas (22, 23 e 24). Já da amostra DR2, as frações do extrato aquoso DR2-AQ-6B e DR2-AQ-6D mostraram ser constituídas por derivados do ácido pirodisinóico (18, 19, 20 e 21). Com exceção do ácido pirodisinóico (18), os demais compostos isolados ainda não foram relatados na literatura. / Sponges of the genus Dysidea (Order: Dyctioceratida) are characterized as sources of several biologically active secondary metabolites. This work describes the study of two samples of D.robusta, DR1 and DR2, both collected at the Bahia state coastline, in 1999. The investigation aimed the crude extract fractionation and analysis by LC-MS and by 1D and 2D NMR techniques. Among the extracts DR1, the fraction DR1-EP-5A obtained from the petroleum ether extract showed a mixture of three saturated ceramides, represented by 22, 23 and 24. From the DR2 sample, the fractions obtained from the aqueous extract DR2-AQ-6B and -6D presented pirodisinoic acid derivates 18, 19, 20 and 21. Except for pyrodisinoic acid (18), all other isolated compounds haven´t been reported in the literature yet.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-29T14:39:18Z No. of bitstreams: 1 Milena Dutra da Silva.pdf: 584735 bytes, checksum: 4ed04e843193f8526a523d7cedcbdb96 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-29T14:39:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Milena Dutra da Silva.pdf: 584735 bytes, checksum: 4ed04e843193f8526a523d7cedcbdb96 (MD5) Previous issue date: 2008-02-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Myracrodruon urundeuva Allemão (Anacardiaceae), Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) T. D. Penn. (Sapotaceae) and Zizyphus joazeiro Mart. (Rhamnaceae) are native species of the caatinga, widely used as medicinal, specially parts from the stem bark of adult individuals. In general, it is collected hazardously and can let the plant to die and, consequently, reduce the biodiversity. This study aimed to characterize the anatomical, histochemical and phytochemical profile of these species, to the botanical certification, to identify and to localize the accumulation of the metabolites, comparing young stem and mature leaves in young and adult individuals. Usual methods in plant anatomy, phytochemical tests to detect the metabolites classes and specific phytochemical tests to phenolic compounds, iridoids and starch were made. M. urundeuva shows amphystomatic leaves with anomocytic stomata; unicellular simple and glandular trichomes, more abundant over the veins; idioblasts with prismatic crystals in the spongy parenchyma; secretory ducts associated with the phloem in the main vein of the leaf vein, in the petiole and in the stem. S. obtusifolium shows hypostomatic leaves with actinocytic stomata; tector trichomes in the leaf lamina and in the petiole; unistratified hypodermis, with idioblasts with druses; sclereids in the mesophyll; secretory ducts in the medulla of the petiole and the stem. Z. joazeiro shows anomocytic and tetracytic stomata, unistratified hypodermis, with idioblasts with druses, braciform cells in the spongy parenchyma, prismatic crystals in the main vein of the leaf, cap of gelatinous fibers in the stem. Z. joazeiro shows cumarin molecules and cinamic derivates in the stem, only in adult individuals. The other species show similar characteristics related to the metabolites in the stem and in the leaves, in young and adult individuals with different stadium of development. / Myracrodruon urundeuva Allemão (Anacardiaceae), Sideroxylon obtusifolium (Roem. & Schult.) T. D. Penn. (Sapotaceae) e Zizyphus joazeiro Mart. (Rhamnaceae) são espécies nativas da caatinga, amplamente utilizadas como medicinais, especialmente de partes do caule de plantas adultas. Em sua grande maioria, eles são coletados de forma danosa, podendo ocasionar a morte do vegetal e, por conseguinte, a perda da biodiversidade. Este estudo objetivou caracterizar o perfil anatômico, histoquímico e fitoquímico dessas espécies, para certificação botânica, identificação e localização de acúmulo de metabólitos, comparando partes jovens de caule e folhas maduras em indivíduos jovens e adultos. Foram utilizados métodos usuais em anatomia vegetal, testes fitoquímicos para detecção das classes de metabólitos e testes histoquímicos específicos para compostos fenólicos, triterpenos e amido. M. urundeuva apresenta folhas anfiestomáticas com estômatos anomocíticos; tricomas unicelulares simples e glandulares, em maior quantidade sobre as nervuras; idioblastos com cristais prismáticos no parênquima esponjoso; ductos secretores associados ao floema na nervura principal da lâmina foliar, no pecíolo e no caule. S. obtusifolium apresenta folhas hipoestomáticas com estômatos actinocíticos; tricomas tectores na lâmina foliar e no pecíolo; hipoderme uniestratificada, com idioblastos contendo drusas; esclereídeos no mesofilo; ductos de secreção na região medular do pecíolo e do caule. Z. joazeiro apresenta estômatos anomocíticos e tetracíticos, hipoderme uniestratificada, com idioblastos contendo drusas, células do esponjosobraciformes, cristais prismáticos na nervura principal da folha, calotas de fibras gelatinosas no caule. Z. joazeiro apresentou moléculas de cumarinas e derivados cinâmicos no caule, apenas na planta adulta, as demais espécies apresentaram características comuns quanto à presença dos metabólitos e sua localização no caule e nas folhas, em indivíduos jovens e adultos. Isto indica que os metabólitos ocorrem em indivíduos com graus de desenvolvimento variado.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-22T12:40:38Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Nataliane Marques de Vasconcelos.pdf: 1186432 bytes, checksum: 7aaaefe15061c83ecc86656db0d731f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-22T12:40:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação - Nataliane Marques de Vasconcelos.pdf: 1186432 bytes, checksum: 7aaaefe15061c83ecc86656db0d731f1 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / A resistência microbiológica aos antibióticos constitui uma série problemas de saúde pública por dificultar o tratamento das infecções. As actinobactérias são fontes importantes para a descobertas de novas moléculas com atividades biológicas. A este grupo, o gênero Streptomyces possuem dentre outros, dois grupos de enzimas multimoduladoras conhecidas como policetídeo sintase (PKS) e peptídeo sintase não ribossomal (NRPS), genes relacionados com a produção de metabólitos secundários. O presente trabalho teve como objetivo investigar o potencial in vitro de metabólitos bioativos produzidos por Actinobactérias isoladas do bioma Caatinga com atividade contra diferentes isolados clínicos de Candida spp. Após ensaio primário das 45 actinobactérias apenas a linhagem PR- 32 apresentou atividade contra Candida spp, com halos de até 20 mm no meio ISP2. Posteriormente, essa linhagem foi cultivada em seis diferentes meios de cultura sendo observada melhor produção do metabólito secundário no meio 400 em 48 horas (h) de fermentação. A determinação da concentração mínima inibitória (CMI) foi determinada a partir do extrato etanólico da biomassa de PR- 32 em pH 7.0 e foi evidenciada uma CMI entre 31,25 μg/mL a 3,9 μg/mL para as leveduras testadas. A cinética de morte reforçou o resultado da CMI e mostrou que no período de 4-8 h o extrato inibiu as cepas de Candida spp. A caracterização da actinobactéria foi identificada por metodologias clássicas e pela pesquisa do gene 16S rRNA como Streptomyces sp. PR- 32. Os resultados desta caracterização sugerem uma possível espécie nova, contudo outras análises ainda precisam ser realizadas. Foi evidenciada a presença do gene nrps com aproximadamente 750 kb. Diante destes resultados podemos concluir que Streptomyces sp. PR- 32 é um isolado promissor para produção de compostos antifúngicos, sendo possível sugerir que a atividade biológica deste metabólito secundário é regulado por peptídeo sintase não ribossomal (NRPS). / The microbial resistance to antibiotics is a series of public health problems for hindering the treatment of infections. The actinomycetes are important sources for new molecules with biological activities discovered. In this group, the genus Streptomyces have among others, multimoduladoras two groups of enzymes known as polyketide synthase (PKS) and non-ribosomal peptide synthase (NRPS), genes involved in production of secondary metabolites. This study aimed to investigate the potential in vitro bioactive metabolites produced by isolated Actinobacteria biome Caatinga with activity against different clinical isolates of Candida spp. After screening of actinomycetes in 45 primary test only the PR- 32 strain showed activity against Candida spp, with halos of up to 20 mm in the middle ISP2. Subsequently, this strain was grown in six different culture media is best seen in secondary metabolite production means 400 at 48 h of fermentation. The determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) was determined from the ethanolic extract of the biomass of PR- 32 at pH 7.0 and one MIC was observed between 31.25 mg / mL 3.9 mg / mL for yeast tested. The kinetics of death reinforced the result of CMI and showed that in the 4-8 hour period the extract inhibited the strains of Candida spp. The characterization of actinobacteria was identified by classical methods and research 16S rRNA gene as Streptomyces sp. PR- 32. The results of this characterization suggests a possible new species, but other tests that must be performed. the presence of the NRPS gene of approximately 750 kb was observed. From these results we conclude that Streptomyces sp. PR- 32 is a promising isolated to produce antifungal compounds, it is possible to suggest that the biological activity of this secondary metabolite is regulated by peptide synthase not ribosomal (NRPS).

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-06T15:39:14Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Armando C. Garcia.pdf: 2450304 bytes, checksum: adcfc8fa060149a887ed8f134e8e63ea (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-06T15:39:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Armando C. Garcia.pdf: 2450304 bytes, checksum: adcfc8fa060149a887ed8f134e8e63ea (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-06T15:39:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Armando C. Garcia.pdf: 2450304 bytes, checksum: adcfc8fa060149a887ed8f134e8e63ea (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-06T15:39:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação_ Armando C. Garcia.pdf: 2450304 bytes, checksum: adcfc8fa060149a887ed8f134e8e63ea (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-12-13 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Endophytic fungi are microorganisms that live in interne tissues of plants, without causing them immediate damage. They are considered an important source to the production of secondary metabolites with antimicrobial, antitumor activities, among others. The present work describes the chemical and biological study of the secondary metabolites produced by the endophytic fungus Phomopsis sp. isolated from the plant Passovia stelis. For that, the fungus at hand was cultivated in large scale using the liquid medium of dextrose potato. The ethylacetat crude extract was obtained through extraction from the broth and then submitted to larvicide assay against larvae of the mosquito Aedes aegypti and antimicrobial against the pathogenic bacteria Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. It was also performed assays against the enzyme anticholinesterase, antioxidants and antifungal against Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum. In the selective larvicide, 3 fractions showed bioactivity (100 ppm) in 24h. In the dosing assay larvicide, the extract of the fungus Phomopsis sp. showed bioactivity with LD50 of 84.7, 81.6 and 79.5 ppm and LD90 de 147.8, 140.2 and 137.7 ppm after 24, 48 e 72 h, respectively. The crude extract was analyzed using TLC, HPLC and NMR and then purified through column chromatography and HLPC-DAD. From F4, the 3-nitropropionic acid was isolated, which is used in neurological research. Succinic acid, which is considered one of the construction blocks in chemical synthesis industry, was isolated from the fraction F7. Other 3 esterified substances, derivatives of tyrosol, were isolated of the fraction F1, and one of them unpublished. In the antioxidant assay, two fractions (F5, F6) showed positive results and in the assay against the enzyme anticholinesterase four fraction (F2, F5, F6, F7) presented bioactivity. These results demonstrate the expressive biopotency of the fungus Phomopsis sp. and open a new perspective for further studies. / Fungos endofíticos são fungos que vivem no tecido interno das plantas sem que lhes causem prejuízo imediato. Esses microrganismos são considerados uma fonte importante para a produção de metabólitos secundários com ação antimicrobiana, antitumoral, entre outras. Este trabalho descreve o estudo químico e biológico dos metabólitos secundários produzidos pelo fungo endofítico Phomopsis sp. isolado da planta Passovia stelis. Para tanto, o fungo em questão foi cultivado em escala ampliada, utilizando meio líquido de batata dextrose. O caldo obtido foi extraído com acetato de etila fornecendo o extrato bruto. Este foi submetido à ensaio larvicida, frente as larvas do mosquito Aedes aegypti, antimicrobiano frente às bactérias patogênicas Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa. Também foram realizados ensaios anticolinesterase, antioxidante e antifúngico frente aos fungos Cladosporium cladosporioides e Cladosporium sphaerospermum. No ensaio larvicida de dose, o extrato do fungo Phomopsis sp. exibiu bioatividade com valores de DL50 de 84,7; 81,6 e 79,5 ppm e DL90 de 147,8; 140,2 e 137,7 ppm respectivamente, nas leituras realizadas após 24, 48 e 72 h. No ensaio larvicida seletivo, três frações obtiveram bioatividade em 100 ppm nas primeiras 24 horas. Após análise por CCD, CLAE e RMN, o extrato bruto foi fracionado por cromatografia em coluna e por CLAE-DAD. Da fração F4 foi isolado o ácido 3-nitropropiônico que é muito utilizado em pesquisas neurológicas. Da fração F7 foi isolado o ácido succínico tido como um dos principais blocos de construção na indústria da síntese química. Outras três substâncias da classe dos ésteres, derivados do tirosol foram isolados da fração F1 sendo uma delas inédita. No ensaio antioxidante duas frações (F5, F6) deram resultado positivo e no ensaio anticolinesterásico quatro frações (F2, F5, F6, F7) mostraram atividade. Estes resultados mostraram a expressiva biopotência do fungo Phomopsis sp, abrindo novas perspectivas atrativas para estudos futuros.

Esponjas do gênero Dysidea (Ordem: Dictyoceratida) caracterizam-se por apresentarem grande diversidade de metabólitos secundários, muitos dos quais apresentam potentes atividades biológicas. Este trabalho descreve o estudo de duas amostras de esponjas da espécie Dysidea robusta, DR1 e DR2, coletadas no litoral da Bahia em 1999. Tal estudo consistiu no fracionamento das amostras, nas análises de seus extratos brutos por LC-MS e técnicas de RMN- mono e bidimensionais. Dentre os extratos de DR1, a fração DR1-EP-5A obtida do extrato éter de petróleo apresentou uma mistura de três ceramidas saturadas (22, 23 e 24). Já da amostra DR2, as frações do extrato aquoso DR2-AQ-6B e DR2-AQ-6D mostraram ser constituídas por derivados do ácido pirodisinóico (18, 19, 20 e 21). Com exceção do ácido pirodisinóico (18), os demais compostos isolados ainda não foram relatados na literatura. / Sponges of the genus Dysidea (Order: Dyctioceratida) are characterized as sources of several biologically active secondary metabolites. This work describes the study of two samples of D.robusta, DR1 and DR2, both collected at the Bahia state coastline, in 1999. The investigation aimed the crude extract fractionation and analysis by LC-MS and by 1D and 2D NMR techniques. Among the extracts DR1, the fraction DR1-EP-5A obtained from the petroleum ether extract showed a mixture of three saturated ceramides, represented by 22, 23 and 24. From the DR2 sample, the fractions obtained from the aqueous extract DR2-AQ-6B and -6D presented pirodisinoic acid derivates 18, 19, 20 and 21. Except for pyrodisinoic acid (18), all other isolated compounds haven´t been reported in the literature yet.

Os microrganismos atraem considerável atenção por serem uma fonte de compostos biotecnológicos e farmacêuticos. Diversos produtos naturais peptídicos produzidos por fungos e bactérias são sintetizados por grandes enzimas, conhecidas como peptídeo sintetase não ribossômica (NRPS) e policetídeo sintase (PKS). A bioprospecção dos microrganismos isolados do solo de Terra Preta Antropogênica (TPA) da Amazônia Ocidental é de grande importância para o conhecimento deste bioma tropical. Este estudo correlacionou a presença de sideróforos e de compostos antimicrobianos produzidos pelos microrganismos isolados de TPA e dos solos adjacentes com a presença dos genes que codificam para NRPS e PKS. Linhagens bacterianas foram isoladas das amostras do solo coletadas de 10, 20 e 40 cm de profundidade. Os isolados foram cultivados em meio líquido específico por 2 dias a 28oC. Um total de 143 isolados foi testado para a atividade de sideróforo e para isso, as linhagens foram inoculadas em um meio com baixa concentração de ferro (MM9) contendo o complexo cromoazurol S-Fe3. Do total, 72 isolados apresentaram reação positiva para a produção de sideróforo. O DNA genômico dos isolados foi extraído e a amplificação por PCR foi realizada usando iniciadores específicos para NRPS e PKS. Os resultados mostraram que quinze isolados apresentaram o gene que codifica para NRPS, vinte isolados para PKS e somente dez isolados apresentaram ambos os genes. A presença de genes de NRPS e PKS em 31% dos isolados testados sugere que a produção dos sideróforos possa ocorrer pela via não ribossomal. Dois isolados foram selecionados para estudos de identificação e caracterização dos compostos. O isolado TP11 foi identificado como Pseudomonas putida através de seqüenciamento do 16S rRNA e apresentou resultado negativo para hidroxamato e catecol, sugerindo que o tipo de sideróforo não possui nenhum destes grupos funcionais. O isolado TP16 foi identificado como Pseudomonas putida e apresentou produção de sideróforo do tipo catecol e hidroxamato, sugerindo a produção de mais de um sideróforo. Além disso, esta linhagem produziu um composto antimicrobiano, com atividade de sideróforo identificado por espectrometria de massas como pseudomonina com massa molar de 330 Da. / Microorganisms have attracted considerable attention as a source for biotechnological and pharmaceutical agents. Several peptidic natural products synthesized by fungi and bacteria are assembled by large enzymes, referred as nonribosomal peptide synthetase (NRPS) and polyketide synthase (PKS). Bioprospection of microorganisms isolated from Anthropological Dark Earth soil of Brazilian Occidental Amazon is of great importance to the knowledge of this tropical biome. This study aimed to correlate the presence of siderophores and antimicrobial compounds produced by microorganisms isolated from Dark Earth and adjacent soils of Brazilian Amazon with the presence of genes encoding NRPS and PKS. Bacterial strains were isolated from soil samples collected at 10, 20 and 40 cm depth. The isolates were grown in specific liquid medium for 2 d at 28oC. A total of 143 isolates were screened for siderophore activity and for this, bacterial strains were inoculated on plates containing an iron-limited medium (MM9) amended with a chromeazurol S-Fe3 complex. From the total, seventy-two isolates showed positive reaction for siderophore production. Genomic DNA of the isolates was extracted and PCR amplification was carried out using specific primers for NRPS and PKS. The results showed that fifteen isolates presented NRPS, twenty isolates presented PKS and only ten isolates showed both genes. The presence of NRPS and PKS genes in 31% of the isolates tested suggests that production of siderophores may occur by a nonribosomal pathway. Two isolates were selected for further studies. Isolate TP11 was identified as Pseudomonas putida by 16S rDNA sequencing analysis and was negative for hydroxamate and catechol, suggesting that the siderophore type has no hydroxamate- or catechol-type functional groups. The isolate TP16 was identified as Pseudomonas putida and showed the production of catechol and hydroxamate siderophore-type, suggesting the production of more than one siderophore. In addition, this strain produced an antimicrobial compound, with siderophore activity identified through mass spectrometry as pseudomonine with a molar mass of 330 Da.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-06-02T18:09:18Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rafaela Araújo Guimarães - 2014.pdf: 1551849 bytes, checksum: b39011c17618c122fad17d142b0288ec (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-06-03T12:41:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rafaela Araújo Guimarães - 2014.pdf: 1551849 bytes, checksum: b39011c17618c122fad17d142b0288ec (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-03T12:41:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rafaela Araújo Guimarães - 2014.pdf: 1551849 bytes, checksum: b39011c17618c122fad17d142b0288ec (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-08-21 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Sarocladium oryzae, the causal agent of rice sheath rot disease is described as antagonistic to rice pathogens. Rice blast is a major rice disease and is responsible for losses up to 100% in productivity. The disease control is done by integrated management, where the main practices are use of resistant cultivars and chemical control. The biocontrol agents or their metabolites may to be more practical to be including them as components in the management. The in objectives of this study a consist to evaluate of S. oryzae isolates for the morphological variability, genetics, biochemistry and antagonistic activity to rice pathogens; evaluate effect of S. oryzae filtrade on conidial germination and appressorium formation of M. oryzae; evaluate potential of conidia and filtrate S. oryzae in the suppression of leaf blast severity and quantify activity of enzymes involved in interaction M. oryzae x rice plant x S. oryzae. Isolates were characterized for color, texture, colony diameter, conidia size and hyphae thickness. In genetic studies, we used RAPD marker primers, and cerulenin production was quantified by HPLC. Antagonism in vitro was assessed by dual culture method. The effect of S. oryzae on conidial germination and appressorium formation of M. oryzae was evaluated using hydrophobic surface. Rice cultivar BRS Primavera, M. oryzae isolate (Py 10.900) and S. oryzae, isolate So 03, were utilized to study plant-pathogen-antagonist relationship. Plants were sprayed, with conidial suspension (CS), 3x105 conídios.mL-1 and culture filtrate (CF) 100% of S. oryzae, two days before inoculation with M. oryzae. S. oryzae isolates showed morphological variability, polymorphism in DNA. A majority of S. oryzae isolates (60%) ware able to produce cerulenin and over 55% were antagonistic to C. miyabeans, M. oryzae, M. albescens and T. cucumeris. The isolate So 29 showed largest inhibition zone. Filtrate of isolates So 03 and So 29 delayed conidia germination by 89.5% and inhibited appressoria formation of M. oryzae by 85%. CS reduced of leaf blast severity in 68.8% and CF in 75.5%. The enzymes β-1,3-glucanase and peroxidase exhibited maximum activity in plants sprayed with CF, when as the activity was high for SA and lipoxygenase in relation to CS treatment, compared to their respective controles, in the absence of M. oryzae. After inoculation with M. oryzae, the lipoxygenase and phenylalanine ammonia-lyase activity in both treatments CF and CS, showed differences compared to controls (plants inoculated with M. oryzae and water only). S. oryzae presented variability to characteristics evaluated and showed potential antagonism against to rice pathogens. Changes in enzyme activity indicate their role in induction resistance in plants in M. oryzae x rice x S. oryzae interaction. / Sarocladium oryzae, agente causal da podridão da bainha do arroz, é descrito como antagonista a patógenos de arroz. A brusone, principal doença do arroz é responsável por perdas de até 100% na produtividade. O controle desta doença é feito pelo uso do manejo integrado, onde as principais práticas são o uso de cultivares resistentes e o controle químico. O uso de agentes de biocontrole ou seus metabólitos pode ser mais uma prática a ser inserida ao manejo. Os objetivos deste estudo foram: avaliar isolados de S. oryzae quanto à variabilidade morfológica, genética, bioquímica e quanto à atividade antagônica aos patógenos de arroz; avaliar o efeito do filtrado de S. oryzae na germinação de conídios e na formação de apressórios de M. oryzae; avaliar o potencial da suspensão de conídios e do filtrado de S. oryzae na supressão da brusone foliar e quantificar a atividade das enzimas relacionadas à patogênese e do fitohormônio ácido salicílico (AS) envolvidos na interação M. oryzae x arroz x S. oryzae. Os isolados foram caracterizados quanto à cor, textura, diâmetro da colônia, tamanho dos conídios e espessura das hifas. No estudo genético, utilizou-se marcador RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e a produção de cerulenina foi quantificada em HPLC. O antagonismo in vitro foi avaliado pelo método da cultura pareada. A ação de S. oryzae sobre a germinação de conídios e a formação de apressórios de M. oryzae foi avaliada em superfície hidrofóbica. Plantas de arroz da cultivar BRS Primavera, um isolado virulento de M. oryzae (Py 10.900) e o isolado So 03 de S. oryzae, foram avaliados no estabelecimento das relações planta-patógeno-antagonista. As plantas foram pulverizadas com S. oryzae, na forma de suspensão de conídios (SC) - 3x105 conídios.mL-1 e filtrado (FI) 100% concentrado, dois dias antes da inoculação com M. oryzae. Os isolados de S. oryzae apresentaram variabilidade morfológica e polimorfismo no DNA. A maioria dos isolados de S. oryzae (60%) foi capaz de produzir cerulenina e mais de 55% foram antagônicos a C. miyabeans, M. oryzae, M. albescens e T. cucumeris. O isolado So 29 apresentou o maior halo de inibição no pareamento. Os filtrados dos isolados So 03 e So 29 retardaram a germinação dos conídios em 89,5% e inibiram a formação dos apressórios de M. oryzae em 85%. A SC reduziu a severidade da brusone foliar em 68,8% e o FI em 75,5%. Os maiores valores de atividade enzimática específica em relação ao controle antes da presença de M. oryzae foram para β-1,3-glucanase e peroxidase no tratamento com FI, enquanto que, na SC foram lipoxigenase e AS. Depois da presença de M. oryzae a lipoxigenase e a fenilalanina-amônia liase apresentaram atividade tanto com FI quanto na SC, diferindo dos controles (plantas inoculadas com água e com M. oryzae, somente). S. oryzae apresentou variabilidade para as características avaliadas e potencial antagônico aos patógenos do arroz. As alterações na atividade enzimática indicam a indução de resistência em plantas na interação M. oryzae x arroz x S. oryzae.