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El objetivo de este estudio fue obtener lactobacilos nativos productores de exopolisacàridos de interés biotecnológico, que tengan una potencial utilidad en las diferentes industrias como bioespesantes naturales mejorando así las propiedades reológicas de los productos. Para lograr este objetivo se tomaron 30 muestras de alimentos fermentados y de fuentes naturales nativas obteniéndose 15 aislados productores de exopolisacáridos (EPS), luego se seleciono 5 aislados que produjeron la mayor cantidad de EPS. A los aislados seleccionados se les sometió a crecer a diferentes parámetros fisicoquímicos como: temperatura, pH y fuente de carbono, encontrándose que en algunos casos las condiciones óptimas de producción diferían de las de crecimiento. Asimismo los aislados fueron identificados por los métodos fenotípicos y bioquímicos tradicionales y por la prueba molecular denominada reacción en cadena de la polimerasa usando cebadores específicos para el espaciador intergénico entre los genes ribosómicos 16S y 23S. Del estudio se obtuvo que la cepa Q5-3 identificada como Lactobacillus plantarum, produjo 1.535 g/L de EPS y presento la mejor producción de EPS con glucosa a pH 5.5 y 30°C. La obtención de una cepa de Lactobacillus plantarum productora de EPS es un aporte valioso ya que le da un valor agregado a las distintas propiedades ya conocidas de este microorganismo tan utilizado en la industria alimentaria. -- Palabras clave: Bacterias Ácido Lácticas, lactobacilos, espaciador intergénico16S-23S, exopolisacárido. / -- The purpose of the present study was to obtain some original lactobacillus from Perú which had be producers of exopolysaccharide of biotechnology importance with a potential utility to industry as natural biothikeners, improving the rheological properties of the products. To achive this purpose, 30 samples were taken from fermented foods and native nature source, obtaining 15 isolated producers of exopolysaccharide (EPS). Then, 5 isolated were selected because they produced the higher quantity of EPS. All isolated selected were grown to several condition such as temperature, pH and source of carbone. It was found that in some cases the optimus condition of production was different from growth. The isolated were identified by biochemistry and phenotypic traditional methods. In addition, molecular tools as PCR (polimerase chain reaction) were also used to identify the isolated. It was found that the Q5-3 strain, identifying as Lactobacillus plantarum, produced 1.535 g/L of EPS. This strain had the best production of EPS (with glucose) as pH 5.5 and 30°C. The discovery of the Lactobacillus plantarum producer strain of EPS is an important contribution because it provides an addition value to this well-known microorganism. -- Key words: lactic acid bacteria, lactobacilli, intergenic spacer 16S-23S, exopolysaccharides. / Tesis

El estrés oxidativo ocasionado por la exposición de sujetos nativos a mediana altura por acción de los radicales libres de oxígeno, fue evaluado por la actividad de enzimas antioxidantes eritrocitarias. Se determinaron las actividades de las enzimas antioxidantes: Glutatión Peroxidasa (GPx), Superóxido Dismutasa (SOD) y Catalasa (CAT); y la concentración de Malondialdehído (MDA) como un indicador de la peroxidación lipídica, en eritrocitos de 60 personas aparentemente sanas: 30 residentes de mediana altura (Huaraz, 3050 msnm) y 30 residentes de nivel del mar (Lima, 154 msnm). Se encontró diferencia estadísticamente significativa entre la actividad de Superóxido dismutasa (SOD) de los nativos de mediana altura (938.4 ± 239.5 U /g Hb) y los de nivel del mar (769.3 ± 279.9 U /g Hb), (p<0,05); así como la actividad de la Catalasa (CAT) a mediana altura (110.7 ± 42.5 kU /g Hb) y los del nivel de mar (83.7 ± 40.4 kU /g Hb), (p<0.05). No se encontró diferencia estadísticamente significativa entre la actividad de la Glutatión peroxidasa (GPx) a mediana altura y nivel del mar (65.1 ± 25.7 U /g Hb vs. 56.4 ± 14.6 U /g Hb), respectivamente. La concentración de Malondialdehído en los nativos de mediana altura no mostraron diferencia estadística significativa (35.1 ± 21.7 μmoles /g Hb) con los de nivel del mar (27.1 ± 6.3 μmoles /g Hb), (p>0,05). La exposición a la mediana altura influye en la actividad de enzimas antioxidantes eritrocitarias, especialmente en la SOD y CAT que juegan un rol importante en la detoxificación de especies reactivas de oxigeno, lo que explicaría el incremento de su actividad a mediana altura. Palabras clave: Superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa, catalasa, malondialdehído, peroxidación lipídica, hipoxia y estrés oxidativo en la altura. / --- The effect of oxidative stress by exposure to medium altitude native subjects by the action of oxygen free radicals was assessed by the activity of erythrocyte antioxidant enzymes. It was determined the levels of the antioxidants enzymes: Glutathione Peroxidase (GPx), Superoxide Dismutase (SOD) and Catalase (CAT); and the concentration of Malondialdehyde (MDA) like an indicator of the lipid peroxidation in erythrocytes of 60 seemingly healthy people: 30 residents at the medium altitude (Huaraz, 3050 m above sea level) and 30 residents at sea level (Lima, 154 m above sea level). It was found significant difference stadistic between the activity of Superoxide dismutase higher in the native of medium altitude (938.4 ± 239.5 U/g Hb) and people living at sea level (769.3 ± 279.9 U/g Hb), (p<0,05). The activity of catalase at medium altitude (110.7 ± 42.5 kU/g Hb) and people living at sea level (83.7 ± 40.4 kU/g Hb), (p<0.05). It was not found significant difference stadistic between the activity obtained of Glutathione Peroxidase at medium altitude and sea level (65.1 ± 25.7 U/g Hb vs. 56.4 ± 14.6 U/g Hb), respectively. The levels of Malondialdehyde in the native of medium altitude not significant diference (35.1 ± 21.7 μmoles/g Hb) that sea level obtained (27.1 ± 6.3 μmoles/g Hb), (p>0,05). Exposure to medium altitude influences the activity of erythrocyte antioxidant enzymes, especially SOD and CAT play an important role in the detoxification of reactive oxygen species, which may explain the increased activity at a medium altitude. Keys word: Superoxide dismutase, glutathione peroxidase, catalase, malondialdehyde, lipid peroxidation, hypoxia and oxidative stress at high altitude. Keys word: Superoxide dismutase, glutathione peroxidase, catalase, malondialdehyde, lipid peroxidation, hypoxia and oxidative stress at high altitude. / Tesis

Orientador: Denis Otávio Vieira Andrade / Banca: Guilherme Gomes / Banca: Rafael Parelli Bovo / Resumo: O tamanho do alimento e a temperatura corpórea são dois fatores que reconhecidamente influenciam a resposta metabólica pós-prandial dos vertebrados ectotérmicos. Leptodactylus latrans é uma espécie generalista que consome desde invertebrados até pequenos vertebrados, de forma que sua dieta é composta por itens de tamanho variável, os quais sempre são ingeridos inteiros. A temperatura corpórea de L. latrans está sujeita a disponibilidade de nichos térmicos adequados nos ambientes onde ocorre, os quais são possivelmente explorados através da termorregulação comportamental. No presente estudo, nós avaliamos os efeitos do tamanho da presa e da temperatura corpórea sobre a resposta metabólica pós-prandial, em indivíduos adultos da rã-manteiga, Leptodactylus latrans (Anura, Leptodactylidae) através da quantificação das taxas de consumo de oxigênio antes e após a alimentação. A resposta metabólica pós-prandial de L. latrans pode ser caracterizada por um rápido aumento nas taxas de consumo de oxigênio logo após a ingestão do alimento, até atingir valores máximos entre 85,93 ± 9,92 e 224,54 ± 26,08 mLO2.kg-1. h-1, dentro de 1-2 dias. Após este pico, houve um retorno paulatino da taxa metabólica aos níveis de jejum entre 3 a 7 dias após a alimentação. De maneira geral, encontramos que a ingestão de presas maiores causa um maior incremento metabólico e aumenta a duração da digestão. Já o incremento da temperatura é acompanhado pela diminuição da duração da digestão às e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Meal size and body temperature affect markedly the post-prandial metabolic response of ectothermics vertebrates. Leptodactylus latrans is a generalist anuran species feeding on diverse prey itens, from invertebrates to small vertebrates, with considerable size variation and that are always ingested whole. The body temperature of L. latrans is largely dependent of the availability of thermal niches in the environment, which are possibly explored by means of behavioral thermoregulation. In the present study, we investigated the effects of meal size and body temperature on the post-prandial metabolic response of adults of the Neotropical leptodatylid frog, Leptodactylus latrans (Anura, Leptodactylidae) by quantifying the rates of oxygen consumption before and after meal ingestion. The post-prandial metabolic response of L. latrans can be characterized by the rapid increase in the rates of oxygen consumption shortly after meal ingestion, until reach peak between 85,93 ± 9,92 e 224,54 ± 26,08 mLO2.kg-1. h-1, within 1-2 days post-feeding. Thereafter, metabolism gradually return to the pre-feeding values within 3 to 7 days post-feeding. In general, we found that the ingestion of larger meals were followed by greater metabolic increment and by longer digestion duration. Temperature increment caused digestion duration to decrease at the expenses of greater post-prandial metabolic rates. In both cases, we did not found evidences that cardiorespiratory compromises could... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Jane Maria Bertocco Ezequiel / Coorientador: Eric Haydt Castello Branco van Cleef / Banca: Henrique Leal Perez / Banca: Mauro Dal Secco de Oliveira / Banca: André Pastori D'Áurea / Banca: Robson Sfaciotti Barducci / Resumo: A glicerina bruta tem sido utilizada como ingrediente energético na alimentação dos ruminantes, e devido a sua baixa capacidade de acidificação do ambiente ruminal, a partir de produtos da sua fermentação, pode ser utilizada para evitar distúrbios metabólicos decorrentes de sistemas de confinamento com alto concentrado. Neste sentido, experimentos foram conduzidos com o objetivo de avaliar a inclusão crescente de glicerina bruta (83% de glicerol) em substituição total ou parcial ao milho das dietas para ovinos em confinamento. No experimento 1, foram distribuídos aleatoriamente em baias individuais cinquenta e cinco cordeiros mestiços de 3 meses de idade (Santa Inês × Dorper, 21,7 ± 2,7 kg de peso corporal), dispostos em um delineamento de blocos ao acaso. Foram utilizadas quatro dietas experimentais contendo 0, 10, 20 ou 30% MS de glicerina bruta. Para as avaliações, três animais foram abatidos no final do período de pré-adaptação (d0), doze no final do período de adaptação (d14) e o restante (n = 40) quando atingiram ~35 kg PC. Foram avaliados o comportamento alimentar, o desempenho em confinamento, as características de carcaça e carne, os componentes comestíveis da não-carcaça e os compartimentos do estômago e fígado dos animais. Independentemente da inclusão de glicerina bruta, foram observadas diferenças significativas entre os períodos do confinamento para as variáveis peso inicial e final, GMPD e CMS. A inclusão de mais de 10% de glicerina bruta nas dietas aumentou os... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Crude glycerin has been used as a source of energy in ruminant diets, however, due to low capacity ruminal acidifying from products of their fermentation, it can be used to prevent ruminal metabolic problems. Two trials were conducted to evaluate the effects of crude glycerin (83% of glycerol) in diets of feedlot as ingredient able to reduces nutritional metabolic disorders in total or partial replacement of corn. In experiment 1, fifty-five 3-month-old crossbred lambs (Santa Inês × Dorper, 21.7 ± 2.7 kg bodyweight) were randomly allocated in individual pens indoors, assigned to a complete randomized block design and fed with four experimental diets, containing 0, 10, 20 or 30% crude glycerin. Three animals were slaughtered at the end of the pre-adaptation period (d0), twelve at the end of the adaptation period (d14), and the remaining (n= 40) when they reached ~35 kg BW. The feed intake, feeding behaviour, growth performance, carcass and meat traits, edible non-carcass components, stomach compartments and liver were evaluated. Regardless of the inclusion of crude glycerin, significant differences among feedlot periods were observed for the initial and final BW, shrunk final BW, ADG and DMI. The inclusion of more than 10% of crude glycerin in the diets increased days on feed and decreased DM intake and average daily gain. Crude glycerin increased number of chews and the time spent chewing per feed bolus. There were no effects of crude glycerin on pH and colour of Longissimus ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tesis Magíster en Bioquímica, Área de Especialización en Bioquímica Toxicológica y Diagnóstico Molecular, y Memoria para optar al Título de Bioquímico / dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) es una coenzima con múltiples funciones. Participa en el metabolismo redox como molécula transportadora de electrones en procesos metabólicos, actúa como indicador del estado energético celular, y es también sustrato de numerosas enzimas implicadas en la desacetilación de reguladores transcripcionales y la movilización de Ca2+ intracelular, entre otros. Diversas investigaciones sugieren que la disminución de los niveles de NAD+ es un factor importante en la progresión de enfermedades cardiovasculares. En diferentes modelos de miocardiopatías se ha observado una disminución en la expresión de la enzima marcapaso de la síntesis de NAD+, Nampt. También se ha descrito que los niveles de NAD+ están disminuidos en condiciones de riesgo cardiovascular como son el envejecimiento, dislipidemia y diabetes mellitus tipo 2. El objetivo de este trabajo fue determinar los efectos de la disminución de NAD+ en el metabolismo y la capacidad adaptativa de los cardiomiocitos. Se utilizó el inhibidor de Nampt, FK866, para disminuir los niveles de NAD+ en cultivos primarios de cardiomiocitos de ratas neonatas. Se evaluó la viabilidad, el metabolismo mitocondrial y la respuesta adaptativa del cardiomiocito a estímulos de insulina, peróxido de hidrógeno (H2O2) y norepinefrina (NE). Los resultados mostraron que la disminución de NAD+ por FK866 redujo el metabolismo mitocondrial sin afectar la viabilidad de los cardiomiocitos. Además, disminuyó la fosforilación de Akt en respuesta a insulina, la sobrevida frente a H2O2 y previno el aumento del área celular y sarcomerización en respuesta a NE. Para evaluar la relación de causalidad entre la disminución de NAD+ y estos efectos, se rescataron los niveles de NAD+ mediante la administración de nicotinamida mononucleótido (NMN). Se observó la recuperación de los parámetros metabólicos y la sobrevida a H2O2, pero no se restableció la respuesta hipertrófica. En conclusión, este trabajo muestra que NAD+ es esencial para el metabolismo mitocondrial del cardiomiocito, y sugiere su participación en la vía de señalización de insulina y en la respuesta adaptativa a H2O2 y NE. / The nicotinamide adenine dinucleotide (NAD+) is a coenzyme with multiple functions. In redox metabolism participates as an electron carrier in metabolic processes, is a cellular energetic status indicator and it is also substrate of many enzymes involved in transcription factor deacetylation and Ca2+ mobilization, among others. Several reports suggest that NAD+ levels are an important factor in cardiovascular diseases progression. In different cardiomyopathy models the expression of the NAD+ synthesis rate-limiting enzyme, Nampt is diminished. Also NAD+ levels are decreased in cardiovascular risk conditions such as aging, dyslipidemia and type 2 diabetes mellitus. The aim of this work was to determine the effects of NAD+ decrease on cardiomyocytes’ metabolism and adaptive capability. The Nampt inhibitor, FK866, was used to reduce NAD+ levels in primary cultures of neonatal rat cardiomyocytes, and viability, mitochondrial metabolism, and cardiomyocytes adaptive response to insulin, hydrogen peroxide (H2O2) and norepinephrine (NE) stimuli were assessed. The results showed that the NAD+ reduction induced by FK866 decreased mitochondrial metabolism without affecting cardiomyocytes viability. Insulin-stimulated Akt phosphorylation and H2O2-survival were also diminished and cellular area increase and sarcomerization induced by NE was prevented. The causality between NAD+ decrease and those effects was assessed through NAD+ levels recovery by nicotinamide mononucleotide (NMN) administration. Both metabolism and H2O2-survival were reestablished, but not the hypertrophic response. In conclusion this work reveals that NAD+ is essential for cardiomyocyte mitochondrial metabolism, and suggest its participation on insulin signaling pathway and adaptive responses to H2O2 and NE. / Fondap; Fondecyt

Grado de magíster en fisiología / La esteatosis hepática no alcohólica (EHNA) es una de las patologías más comunes en las sociedades de occidente. La EHNA está fuertemente relacionada con la obesidad y los trastornos asociados a ella, la génesis de esta patología no está del todo clara, debido a los múltiples factores que pueden promover la acumulación de grasa en el hígado. Al contrario, se ha descrito que la autofagia podría contribuir al manejo correcto de los lípidos en las células hepáticas, mediante un proceso específico llamado lipofagia. La autofagia es un mecanismo altamente conservado en células eucariontes y consiste en un proceso catabólico de organelos, proteínas y de constituyentes citoplasmáticos, mediado por los lisosomas. Diversos estudios han descrito que la autofagia está disminuida en condiciones de obesidad y EHNA. Por otra parte, se ha encontrado que el ejercicio físico de tipo aeróbico aumenta los niveles de autofagia. El objetivo de este proyecto es estudiar la regulación de la autofagia/lipofagia en el hígado por el ejercicio físico crónico, en ratones con EHNA inducida por alimentación con una dieta alta en grasas. La hipótesis de esta tesis es: El ejercicio aeróbico crónico de 8 semanas revierte la disminución de la lipofagia en hígado graso inducido por una alimentación con dieta alta de grasa en ratones. Los animales utilizados son ratones C57BL/6. 36 ratones divididos en dos grupos fueron sometidos a una alimentación con dieta control (DC) y dieta alta en grasas (DAG) durante 3 meses. Posterior a esos 3 meses estos grupos experimentales fueron sub-divididos en 4, DC n=9, y DC más ejercicio físico (DCE n=9), DAG n=9, DAG más ejercicio físico (DAGE n=9). Los grupos que realizaron ejercicio físico fueron sometidos a un protocolo de ejercicio físico crónico durante 8 semanas, 5 veces por semana. Entre los resultados se encuentra que el ejercicio físico aeróbico crónico mejora la condición física aeróbica tanto de los animales controles como de los sometidos a una dieta alta en grasas. El peso del hígado de ratones sometidos a una dieta alta en grasas más ejercicio es menor en comparación a la dieta alta en grasa sin ejercicio. Se encontró que el ejercicio físico disminuye el daño hepático medido mediante la alanina aminotransferasa y además presenta un mejor metabolismo de la glucosa. El grupo sometido a ejercicio físico y dieta alta en grasas presenta menor área de las gotas de lípidos con respecto al grupo alto en grasas sin ejercicio. Los animales alimentados con dieta alta en grasas presentan mayor relación entre LC3II/LC3I, sin embargo, el ejercicio crónico no cambio esta relación. La lipofagia no presenta diferencias entre los diferentes grupos, encontrando resultados similares en todos ellos, por lo que el ejercicio físico no estaría induciendo este proceso en el hígado. Conclusiones: el ejercicio físico aeróbico crónico mejora la condición física aeróbica, disminuye el peso del hígado en el grupo sometido a una dieta alta en grasas, reduce el daño hepático, mejora la tolerancia a la glucosa, cambia la morfología de los lípidos intrahepáticos y no modifica el proceso de autofagia/lipofagia. En resumen, el ejercicio físico aeróbico crónico mejora aspectos metabólicos que favorecen la reducción de la esteatosis hepática no alcohólica, por lo tanto, estos resultados sugieren que el ejercicio físico puede ser de ayuda en el tratamiento de esteatosis hepática. / Non-alcoholic Fatty liver Diseases hepatic steatosis (NAFLD) is one of the most common pathologies in western societies. NAFLD is strongly related to obesity and related disorders. However, the genesis of this pathology is not entirely clear, due to the multiple factors that promote the accumulation of fat in the liver. By contrast, it has been described that autophagy could contribute to the correct handling of lipids in liver cells, through a specific degradation process called lipophagy. Autophagy is a highly conserved mechanism in eukaryotic cells and consists of a catabolic process of organelles, proteins and cytoplasmic constituents, mediated by lysosomes. Several studies have described that autophagy is decreased in conditions of obesity and NAFLD. On the other hand, it has been found that aerobic physical exercise increases the levels of autophagy. The objective of this project was to study the if chronic physical exercise regulates regulation of autophagy/lipophagy in the liver in mice with high fat diet-induced NAFLD. The hypothesis of this thesis is " 8-week chronic aerobic exercise reverses the decrease of lipophagy in high fat diet-induced fatty liver in mice." The animal model used was C57BL/6 mice. 36 mice were divided into two groups were subjected to a control diet (DC) or high-fat diet (HFD) for 12 weeks. After these 12 weeks, groups were sub-divided into 4 groups, DC (n = 9), and DC plus physical exercise (DCE, n = 9), HFD (n = 9), HFD plus physical exercise (HFDE, n = 9). The groups that performed physical exercise were subjected to a protocol of chronic physical exercise for 8 weeks, 5 times a week. The results showed that chronic aerobic physical exercise improves the aerobic physical condition of both control animals and those subjected to an HFD. The liver weight of mice subjected to a HFD plus exercise is lower compared to the HFD without exercise. It was found that physical exercise reduces liver damage measured by alanine aminotransferase and also improves glucose tolerance. The group subjected to physical exercise and HFD has a lower area of lipid droplets compared to the HFD group. Mice fed with HFD have a higher relationship between LC3II/LC3I, however, chronic exercise does not change this relationship. The lipophagy does not present differences between the different groups, finding similar results in all of them, so that physical exercise would not be inducing this process in the liver. The conclusions are that chronic aerobic exercise improves aerobic fitness, decreases liver weight, reduces liver damage, improves glucose tolerance and changes the morphology of intrahepatic lipids (and autophagy) in mice fed with HFD. In summary, chronic aerobic physical exercise improves metabolic aspects that favor the reduction of NAFLD, therefore, these results suggest that physical exercise can be of help in the treatment of hepatic steatosis.

La mayoría de pacientes a los que se practica un trasplante de progenitores hematopoyéticos han recibido previamente múltiples transfusiones de hematíes. Cada transfusión recibida se traduce en 0.2 gramos de hierro que se depositan en el organismo sin que exista ningún sistema fisiológico capaz de eliminar el hierro sobrante. Es lógico pensar que tras múltiples transfusiones muchos de estos pacientes sufran una importante sobrecarga corporal de hierro. En otros pacientes, como los aquejados de hemocromatosis primaria y secundaria, sabemos que la sobrecarga de hierro es fuente de toxicidad. En el caso especial de los pacientes sometidos a trasplante de progenitores hematopoyéticos, la sobrecarga de hierro puede ser especialmente peligrosa durante las fases de aplasia y de reducción significativa de las defensas inmunitarias por las que pasan estos pacientes. En este trabajo se investiga si la sobrecarga férrica es un trastorno frecuente entre los pacientes que reciben un autotrasplante de progenitores hematopoyéticos, si dicha sobrecarga se asocia con morbimortalidad infecciosa, si existe algún germen en particular asociado a las infecciones en el contexto de sobrecarga férrica y si la sobrecarga férrica comporta una mayor mortalidad durante el trasplante. Además se investiga la evolución de algunos parámetros metabólicos del hierro durante el trasplante. El trabajo está basado en cuatro artículos. En el primero se demuestra que el valor de ferritina pre-trasplante y de saturación de transferrina en el dia -4 del trasplante constituyen factores pronósticos de la mortalidad global y de la mortalidad tóxica del trasplante. En el segundo artículo se demuestra que la sobrecarga hepática de hierro es muy frecuente entre los pacientes que mueren tras un trasplante hematopoyético. Además se demuestra que es frecuente la asociación entre dicha sobrecarga y la muerte por infección invasiva por el hongo aspergillus. En el tercer artículo. Se investiga si diversos parámetros asociados a sobrecarga de hierro pueden predecir la aparición de toxicidad e infección durante los primeros tres meses tras el trasplante (mucositis grave, bacteriemias y fiebre). Se demuestra que el nivel de ferritina pre trasplante se asocia con dichas variables. Por último, en el último artículo se demuestra que la elevada saturación de transferrina que se produce durante el acondicionamiento del trasplante es debida al stop de la eritropoyesis.En general, estos trabajos demuestran que existe una asociación entre sobrecarga férrica e incremento de morbilidad precoz y mortalidad durante el trasplante hematopoyético. Con posterioridad a los artículos recogidos en esta tesis, otros artículos han estudiado el mismo tema y han llegado a la misma conclusión. Sin embargo, el diseño de estos estudios no permite contestar si también existe una relación causa-efecto. Podría ser que aquellos pacientes con más hierro posiblemente han sido más transfundidos, y quizá esa mayor necesidad de transfusiones indica asimismo un peor pronóstico de la enfermedad. Pero las importantes relaciones del hierro con la generación de radicales libre y toxicidad nos explican que pueda comportarse como un agente tóxico. Por otra parte, su valor importantísimo para la virulencia de los gérmenes también nos explica su papel en el incremento de la infección.Esta tesis constituye un trabajo pionero en este tema. Previa a la publicación de los trabajos que conforman esta tesis no existía prácticamente literatura sobre el efecto de la sobrecarga férrica en el curso del trasplante. Hemos observado que tras su publicación se han multiplicado los trabajos internacionales sobre este tema. Por ello es posible que en unos años tengamos respuesta a muchas de las preguntas que en esta tesis se plantean. / Most patients who practiced a haematopoietic stem cell transplantation have previously received multiple transfusions of red blood cells. Each received transfusion translates into 0.2 grams of iron, that are deposited in the body without any physiological system capable of removing excess iron. It is logical to think that after multiple transfusions, many of these patients suffer a significant iron overload. In other patients, such as those suffering from primary and secondary hemochromatosis, we know that iron overload is a source of toxicity. In the special case of patients undergoing haematopoietic stem cell transplantation, iron overload can be especially dangerous during the aplasia phase, with a significant reduction in the immune system. This paper investigates whether the iron overload is a common disorder among patients receiving an hematopoietic transplant, if this iron overload is associated with infectious morbidity, whether a particular germ is associated with infections in the context of iron overload and if the iron overload involves an increased mortality during the transplant. It also investigates the evolution of some iron metabolic parameters during the transplant.The work is based on four articles. The first one shows that the value of pre-transplant ferritin and transferrin saturation in the day -4 of conditioning are prognostic factors for overall mortality toxic related mortality. The second article shows that the hepatic iron overload is very common among patients who die after an hematopoietic transplant. It also shows that there is often an association between the iron overload and death from invasive infection by the fungus aspergillus. In the third article, we investigate whether various parameters associated with iron overload may predict the occurrence of toxicity and infection during the first three months after transplantation (severe mucositis, bacteraemia and fever). We show that the level of pre-transplant ferritin is associated with these three variables. Finally, the last article demonstrates that the high transferrin saturation that occurs during conditioning for transplantation is due to the stop of erythropoiesis.In general, these studies show an association between iron overload and increased morbidity during early hematopoietic transplantation and mortality . Since the articles collected in this thesis, other articles have studied the same subject and have reached the same conclusions. However, the design of these studies can not answer if a cause-effect relationship exists. It could be that patients with more iron may have been more transfused, and perhaps the greater need for transfusions also indicates a worse prognosis of the disease. But the relationships of iron with the generation of free radical toxicity may explain how this element can function as a toxic agent. Moreover, its major value to the virulence of the germs also explains his role in the increase of the infection.This thesis is a pioneering work on this issue. Before the publication of works that comprise this thesis there was virtually no literature on the effect of iron overload in the course of transplantation. After their publication others international works appeared about this topic. It is therefore possible that in some years answers about questions raised in this thesis will appear.

La interleuquina -6 (IL-6) es una citoquina pleiotrópica cuya función principal se da en el sistema inmune en el control de la inflamación. Realiza importantes funciones en la homeostasis del sistema nervioso central (SNC), en la respuesta al ejercicio físico e incluso en el metabolismo (particularmente en funciones relacionadas con la insulina). Diversos estudios han demostrado que la IL-6 podría tener un papel en el control del peso corporal tanto a nivel de SNC como periférico, aunque no está claro si la IL-6 endógena que participa en la regulación del peso corporal a nivel del SNC procede del mismo SNC o bien de la periferia. La IL-6 secretada por tejidos periféricos no inmunológicos podría tener un papel importante y esto es actualmente motivo de debate. En la última década se ha puesto de relevancia la capacidad del músculo esquelético de secretar mioquinas. La IL-6 es la principal mioquina producida y liberada durante la contracción muscular por lo que se ha postulado que podría ser un factor que media los efectos del ejercicio a nivel metabólico. El tejido adiposo también la produce y secreta siendo la principal fuente de IL-6 en situaciones no inflamatorias. Dado el importante papel que juegan el músculo esquelético y el tejido adiposo en el control del metabolismo y que ambos son los principales órganos secretores de IL-6 en situaciones no inflamatorias, decidimos estudiar el papel de de la IL-6 producida por estos tejidos en el metabolismo y en el control del peso corporal. Para ello desarrollamos dos modelos de knock-out condicionales para la IL-6: uno en el músculo esquelético y el otro en el tejido adiposo. Estos animales se han caracterizado en condiciones basales y en respuesta a una dieta en grasas. Se hizo el seguimiento del peso y de la ingesta, se estudió la respuesta a la glucosa y a la insulina y se analizó el peso de diferentes tejidos, los niveles varios metabolitos y hormonas y la expresión de algunos genes implicados en el metabolismo y en la inflamación. Los datos obtenidos muestran que la deficiencia de IL-6 tanto muscular como adipocitaria tiene efectos dependientes del sexo. No se observaron alteraciones en el crecimiento en ninguno de los modelos pero sí diferencias en la ganancia de peso. Los machos deficientes en IL-6 muscular engordaron menos que sus controles y en el caso de las hembras se observó lo contrario. Estas diferencias se exacerbaron en los animales alimentados con la dieta grasa. Por lo que respecta a la deficiencia de IL-6 adipocitaria los efectos en la ganancia de peso sólo se vieron en los ratones alimentados con dieta grasa en donde la deficiencia de IL-6 sólo mostró efecto significativo en las hembras que ganaron menos peso que las controles. El estudio de la ingesta y de los neuropéptidos hipotalámicos que controlan la ingesta y el gasto energético sugiere que los efectos de la IL-6 se darían sobretodo en el control del gasto energético y no tanto por cambios en la ingesta. Así, en condiciones basales los machos deficientes en IL-6 muscular presentaron un perfil de activación del gasto energético y en las hembras lo contrario. Por lo que se refiere a la deficiencia de IL-6 adipocitaria, aunque no hubo diferencias en el peso, sí las hubo en los neuropéptidos hipotalámicos. En resumen, la IL-6 tiene efectos en el control de la homeostasis energética a nivel central y periférico. La disminución de los niveles plasmáticos de IL-6, según su origen, tiene diferentes efectos a nivel local regulando la expresión de otro u otros factores que probablemente sea o sean los responsables de los efectos observados. / Interleukine 6 is a pleiotropic cytokine whose main function is regulating inflammation in the immune system. However, IL-6 also affects the central nervous system (CNS), and it participates in the exercise response and in metabolism (mainly insulin-related functions). Several studies show that IL-6 could have a role in the control of body weight in both the CNS and the periphery. It is unknown, and currently the matter of debate, whether CNS-acting IL-6 is produced in situ or elsewhere. It would then be possible that IL-6 produced by non-immunologic tissues had an important role in the control of body weight. In the last few decades, it has been shown that skeletal muscle produces and secretes myokines. IL-6 is the most abundant and it is produced during muscular contraction, possibly participating in some of the exercise-induced metabolic changes. Adipose tissue also produces and secretes this cytokine and it is the main source of IL-6 in non-inflammatory conditions. Skeletal muscle and adipose tissue play an important role in metabolism. These tissues are also the main source of IL-6 in non-inflammatory conditions. That is why we decided to investigate the metabolic role of IL-6 produced by these tissues and its actions in the control of body weight. We generated two different IL-6 conditional knock-outs: one in the skeletal muscle and the other in the adipose tissue. These animals were characterized in basal conditions and after being fed a high fat diet. Body weight and food intake were measured. Glucose and insulin response were studied. Several tissues were weighted. Some metabolites and hormones levels and metabolic and inflammatory gene expression were also analyzed. In both models IL-6 deficiency had a sex-dependent effect. Our data suggest that these mice had a normal growth. However, there were changes in body weight gain. Muscular IL-6 deficient mice gained less weight than controls, whereas in females the opposite occurred. These differences were exacerbated in mice fed a high fat diet. Regarding the adipose IL-6 deficiency model, adipose IL-6 deficiency only had an effect in body weight in mice fed a high fat diet. Thus, knockout females showed resistance to obesity, gaining less weight than controls. In males this effect was smaller and not significant. Food intake and hypothalamic neuropeptides controlling food intake and energy expenditure were analyzed, too. Our data suggest that body weight changes would be mainly caused by changes in energy expenditure rather than by changes in food intake. Thus, in basal conditions muscular IL-6 deficient males showed energy expenditure activation and in females the opposite occurred. In the case of adipose IL-6 deficiency, although body weight gain in basal conditions was unchanged, hypothalamic neuropeptide expression was altered. In conclusion, IL-6 has either central or peripheral effects on the control of energy homeostasis. Decreased levels of IL-6 have, depending on their origin, different local effects in the regulation of other factors that probably caused the observed changes.