Orientador: Ana Marisa Fusco de Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Maristela Pereira / Banca: Luis Octávio Regasini / Resumo: A criptococose é uma micose sistêmica e oportunista causada principalmente pelas leveduras Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Entre as principais manifestações clínicas estão o desenvolvimento de meningite, encefalite, meningoencefalite e infecções pulmonares. Estima-se que mais de um milhão dos casos de criptococose ocorrem por ano em indivíduos HIV positivos, o que classifica esta doença como a terceira mais importante entre as infecções fúngicas sistêmicas. A ecologia deste gênero está diretamente relacionada ao meio ambiente, sendo a espécie C. neoformans, comumente encontrada em excretas secas de pombos (Columbia livia) e a espécie C. gattii é encontrada, principalmente, em plantas, como espécies de Eucalyptos. O tratamento da criptococose é realizado com os fármacos antifúngicos, anfotericina B e fluconazol, sendo este último de ação fungistática utilizado para tratamento de longo prazo, que apesar de eficiente, pode causar uma série de reações adversas e ainda desenvolvimento de resistência. Tendo em vista o difícil controle da levedura e o tratamento, este trabalho tem como objetivo principal, a pesquisa de substâncias naturais com alto potencial antifúngico com finalidade saneante e medicamentosa, combatendo a levedura em seu nicho ecológico natural e também atuando no combate à infecção no hospedeiro. Uma forma de diminuir os casos desta infecção é através do processo de desinfecção ambiental com produtos saneantes, os quais apresentam capacidade fungicida. Por meio do projeto Biota/FAPESP, foram selecionados dois triterpenóides quinonamétideos extraídos de Maytenus ilicifolia, a maitenina e a pristimerina, as quais apresentaram potentes CIMs anti-Cryptococcus, mais de 90 % de eficiência na desinfecção e baixa toxicidade, o que revela que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryptococcosis is a systemic mycosis caused mainly by opportunistic yeast Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Among the main clinical manifestations are the development of encephalitis, meningoencephalitis and pulmonar infections. It is estimated that more than one million cases of cryptococcosis occur per year in HIV positive individuals, which classifies the disease as the third among the most importante systemic fungal infections. The ecology of this genus is directly related to the environment. Specie C. neoformans is commonly found in dried excremento of pigeons (Columbia livia) and the species C. gattii is found primarily in plants such as Eucalyptus species. Cryptococcosis treatment is performed with the antifungal drugs amphotericin B and fluoconazole, the later being of a fungistatic used to treat long-term, while effective, may cause a number of adverse reactions and also the development of resistence. Given the difficult control of the yeast and treatment, this work has as main objective, the research of natural substances with high potential antifungal drug with purpose and saneante, fighting yeast in their natural ecological niche and also acting in fighting infection in the host. One way to reduce the cases of infection is through the capacity fungicide. Through the Project BIOTA / FAPESP, we selected two quinonametides triterpenids extracted from Maytenus ilicifolia, the maitenin and pristimerin, which showed potente anti-Cryptococcus MICs, more than 90 % of the disinfection efficiency and low toxicity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Coorientador: Danielle Cardoso Geraldo Maia / Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Eduardo Bagagli / Resumo: A esporotricose é uma doença micótica causada pelo fungo termodimórfico Sporothrix schenckii. A resposta imune inata permite o reconhecimento de um amplo espectro de agentes patogênicos através dos PRRs, como os NLRs. Esses receptores, moléculas adaptadoras ASC e proteases caspase-1 formam os inflamassomas, complexo multiprotéico responsável pela maturação da IL-1β e IL-18. Evidências experimentais mostram que o inflamassoma tem importante papel na defesa antifúngica do hospedeiro, entretanto não há informações disponíveis sobre seu envolvimento em infecções causadas pelo S. schenckii. A indução da imunidade celular depende da interação entre antígenos, macrófagos e linfócitos, pois quando ativadas essas populações celulares liberam mediadores imunológicos, estabelecendo uma ligação entre as respostas imunológicas inata e a adaptativa. O objetivo deste trabalho foi avaliar o envolvimento do inflamassoma, por meio da determinação de caspase-1, e citocinas na resposta imunológica induzida pelo fungo S. schenckii em modelo experimental de esporotricose sistêmica utilizando camundongos Balb/c infectados e não infectados durante oito semanas. Os resultados encontrados mostraram que entre a 4ª e 6ª semanas de infecção ocorre imunossupressão do hospedeiro, com consequente agravamento da doença, pois a produção de NO permaneceu elevada neste período, assim como houve diminuição da liberação da IL-1β, IL-17, IL-23, citocinas pró-inflamatórias que agem protegendo o hospedeiro. Neste mesmo período, a diminuição do percentual de caspase-1 ativa, seguido pela menor liberação de IL-1β e IL-18, demonstrou que o inflamassoma estava com sua ativação inibida, colaborando para uma maior disseminação do patógeno, já que estão diretamente relacionada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a fungal disease caused by the thermo-dimorphic fungus Sporothrix schenckii. The innate immune response enables the recognition of a broad spectrum of pathogens through PRRs, such as NLRs. These receptor, ASC and caspase-1 form inflammasomes, complex multiprotein responsible for maturation of IL-1β and IL-18. Experimental evidence shows that inflammassome plays an important role in antifungal host defense, however there is no information available about his involvement in infections caused by S. schenckii. The induction of cellular immunity depends on the interactions between antigens, macrophages and lymphocytes because when activated, these cell populations release immune mediators to establishing a link between the innate and adaptive immune responses. The aim of this study was to evaluate the involvement of inflamassoma, through the determination of caspase-1, and cytokines in the immune response induced by the fungus S. schenckii in an experimental model of systemic sporotrichosis using Balb/c mice infected and uninfected for eight weeks. The results showed that between the fourth and sixth weeks of infection occurs immunosuppression of the host, with consequent worsening of the disease, because NO production encontrouse high during this period, as well as decreased release of IL-1β, IL-17, IL-23, pro-inflammatory cytokines that act to protect the host. In this same period, the decrease in the percentage of active caspase-1, followed by lower release of IL-1β and IL-18, showed that inflammasome was inhibited its activation, contributing to further spread of the pathogen, since it is directly related with the innate response and optimization of an adaptive response. The production of IFN-γ remained increased during all weeks... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria José Soares mendes Giannini / Coorientador: Ana Marisa Fusco-Almeida / Coorientador: Oscar Zaragoza / Banca: Marcia de Souza Carvalho Melhem / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Maristela Pereira / Banca: Christiane Pienna Soares / Resumo: A incidência de infecções fúngicas oportunistas tem aumentado nas últimas décadas devido à crescente proporção de pacientes imunocomprometidos em nossa sociedade. Candida krusei é descrita como um dos agentes de infecções fúngicas em pacientes susceptíveis. Embora sua prevalência seja baixa entre as infecções fúngicas (2-7%), a resistência intrínseca ao fluconazol torna esta levedura importante no contexto relacionado à epidemiologia e na procura de novas alternativas terapêuticas. Modelos de organismos não mamíferos são alternativas viáveis para estudar a virulência de fungos e eficácia de drogas. Neste trabalho utilizou-se Galleria mellonella e Caenorhabditis elegans como modelos para estudar a virulência e avaliar a eficácia antifúngica de anfotericina B e fluconazol durante a infecção por C. krusei, bem como cultura de macrófagos e testes de agrotransformação. No modelo de G. mellonella foi realizada a caracterização completa da interação de C. krusei por meio da determinação do índice de fagocitose, quantificação da densidade hemocitária, melanização, estudos de filamentação, carga fúngica e histopatologia. Além disso, foi realizado estudo de eficácia antifúngica entre G. mellonella e C. elegans mostrando resultados compatíveis entre os dois modelos. Além disso, utilizou-se cultura de macrófagos RAW 267.7 para verificar o efeito das duas drogas sobre a fagocitose e produção de citocinas quando as células foram infectadas com C. krusei. Não houve alterações quanto à fagocitose nesse modelo, entretanto a produção de TNF-α mostrou-se excessivamente aumentada com o tratamento com anfotericina sugerindo que além do efeito direto da droga existem também mecanismos de imunomodulação envolvidos nessa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The incidence of opportunistic fungal infections has increased in the last decades due to the increasing proportion of immunocompromised patients. Candida krusei is described as one of the agents of fungal infections in susceptible patients. Although its prevalence is low among fungal infections (2-7%), the intrinsic resistance to fluconazole makes this yeast important in this context related to epidemiology and new therapies. Models of non-mammalian are viable alternatives to study virulence of fungi and drug efficacy. In this work we used Galleria mellonella and Caenorhabditis elegans as models for studying virulence and evaluate the efficacy of antifungal agent's amphotericin B, fluconazole and caspofungin during infection by C. krusei, and C. albicans, as well as, macrophages and agrotransformation studies. The model of G. mellonella was done full characterization of the interaction with C. krusei by determining the phagocytosis index, measuring the density haemocytic, melanization, filamentation studies, fungal burden and histopathology. In addition, we conducted a study of antifungal efficacy between G. mellonella and C. elegans showing compatible results between the two models. Furthermore, we used macrophage culture RAW 267.7 to determine the effect of drugs amphotericin B and fluconazole on phagocytosis and production of cytokines when the cells were infected with C. krusei and C. albicans. There was no change on the phagocytosis in this model, however, the production of TNF-α was shown to be excessively increased with treatment with amphotericin suggesting that in addition to the direct effect of the drug, immunomodulation mechanisms are also involved in this response. The construction of transformants... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Luis Octávio Regasini / Banca: Eduardo Bagagli / Resumo: Paracoccidioides brasiliensis e P. lutzii são fungos dimórficos, agentes etiológicos da paracoccidioidomicose, que é uma micose humana sistêmica geograficamente confinada na América Latina. Vários antifúngicos podem ser utilizados para o tratamento dessa doença, tais como anfotericina B, sulfamídicos e azólicos (itraconazol) e de maneira geral seu uso é prolongado. As limitações frequentes dos antifúngicos e o aumento na incidência das infecções fúngicas sistêmicas têm ressaltado a necessidade da descoberta e do desenvolvimento de novos fármacos. O objetivo deste estudo foi comparar a atividade antifúngica de anfotericina B, itraconazol e galatos de alquila anti-complexo de Paracoccidioides por métodos fenotípicos e proteômicos. Para tanto foi padronizado o teste de sensibilidade para selecionar o galato de maior potência, utilizando o documento M27-A2 (2002), modificado pela adição de Alamar Blue. Adicionalmente, análises proteômicas foram realizadas antes e após tratamento com o antifúngico selecionado para verificar o perfil das possíveis proteínas-alvo. A atividade antifúngica foi estudada contra isolados de P. brasiliensis (S1, S2 e PS3) e P. lutzii, (Pb01-like), e depois o teste foi estendido para mais seis isolados. O valor da CIM do ácido gálico variou de 31,25 a 0,250 mg/L para todos os isolados. Os galatos mostraram valores de CIM entre 16 a 0,004 mg/L. O menor valor de CIM foi observado para seis galatos que possuem uma substituição por uma cadeia relativamente longa de carbonos. O perfil proteico dos isolados Pl01 e Pb18 foi estudado por eletroforese 2D após contato com anfotericina B , itraconazol e o galato de decila (todos a uma concentração de 0,125 mg/L. Mais de 130 spots para ambos os fungos foram observados e a maioria destas proteínas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis and P. lutzii are dimorphic fungi, etiological agents of paracoccidioidomycosis, which is a systemic human mycosis geographically restricted to Latin America. Various antifungal agents may be used to treat this disease, such as amphotericin B, sulfamidic agents and itraconazole, and these drugs are used in long-term therapies. The limitations of antifungals and increased incidence of systemic fungal infections has underscored the need for discovery and development of new drugs. The objective of this study was to compare the antifungal activity of amphotericin B, itraconazole and alkyl gallates anti-Paracoccidioides complex by phenotypic and proteomic methods. Thus, the susceptibility test was applied to select the most potent gallate, using the document M27-A2 (2002), modified by the addition of Alamar Blue. Finally, proteomic analyses was developed before and after the treatment with the antifungal agent selected, to study the protein profile after this treatment. The antifungal activity was evaluated against isolates of P. brasiliensis (S1, S2 and PS3) and P. lutzii (PB01-like), and after, the test has been extended to six isolates. The MIC values of gallic acid varied from 31.25 to 0.250 mg/L for all isolates. The gallates showed MIC values ranging from 16 to 0,004 mg/L. The lowest MIC value was observed for six gallates bearing a substitution for a long side chain. The protein profile of isolates Pb18 and Pl01 was studied by 2D electrophoresis after contact with amphotericin B, itraconazole and decyl gallate, all in the concentration of (0.125 mg/L ). More than 130 spots for both species were observed, and the most of these proteins... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Paulo Câmara Marques Pereira / Coorientador: Fátima Regina Vilani Moreno / Banca: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Banca: Maria Esther Salles Nogueira / Banca: Sônia Maria Usó Ruiz Silva / Banca: Silvio Luís de Oliveira / Resumo: A doença de Jorge Lobo é micose cutânea-subcutânea de evolução crônica causada pelo fungo Lacazia loboi. Esta micose é predominante na região Amazônica e afeta principalmente trabalhadores rurais que vivem em contato constante com a vegetação e o solo, como é o caso dos seringueiros dessa região. Até o momento não existem estudos sobre a participação do estado nutricional na resposta imunológica abordando a doença de Jorge Lobo; assim, este estudo tem por finalidade avaliar os efeitos da desnutrição protéico-calórica na resposta imune de camundongos isogênicos da linhagem BALB/c inoculados com L. loboi, empregando parâmetros imunológicos e histopatológicos. O presente estudo foi desenvolvido com 120 camundongos do sexo masculino, da linhagem BALB/c, com idade aproximada de 12 semanas e cerca de 25g de peso corporal. Foram constituídos quatro grupos: G1: 30 camundongos inoculados com o fungo L. loboi, recebendo restrição dietética de 20% da dieta normal; G2: 30 camundongos não inoculados, recebendo restrição dietética de 20% da dieta normal; G3: 30 camundongos inoculados, recebendo dieta normal; G4: 30 camundongos sadios. Os animais dos grupos G1 e G2 foram submetidos previamente, por 20 dias, antes do início do estudo, a restrição dietética com oferta diária de 80% da quantidade ingerida pelos grupos G3 e G4. Após instalada a desnutrição, os animais foram inoculados no coxim plantar, via intradérmica, com fungo L. loboi e depois de 4 meses (período de aparecimento das lesões macroscópicas no coxim plantar), os animais foram sacrificados e submetidos ao lavado peritoneal e à necrópsia para a retirada dos órgãos: fígado e baço. Os coxins plantares foram removidos para determinação da viabilidade e do número total de fungos, além do histopatológico. As células do lavado peritoneal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Jorge Lobo's disease is a cutaneous and subcutaneous mycosis with chronicle evolution caused by the fungus Lacazia loboi. This mycosis is predominant in the Amazon region and affects mainly rural workers who live in constant contact with the vegetation and the soil, such as the rubber tappers in this region. Up to this date there haven't been studies about the participation of the nutritional state in the immunological response approaching the Jorge Lobo; thus, this study aims to evaluate the effects of the protein-calorie malnutrition in the immune response of the isogenic mice lineage BALB/c inoculated with L. loboi, using hystopatological and immunological parameters. The present study was developed with 120 male mice lineage BALB/c, with approximately 12 weeks old and circa 25g of body weight. Four groups were made: G1: 30 mice inoculated with L. loboi fungus, receiving diet restriction of 20% of the normal diet; G2: 30 non inoculated mice, receiving diet restriction of 20% of normal diet; G3: 30 mice inoculated receiving normal diet; G4: 30 healthy mice. The animals in the groups G1 and G2 were previously submitted for 20 days before the beginning of the study to a diet restriction with a daily offer of 80% of the quantities ingested by groups G3 e G4. After malnutrition was installed the animals were inoculated in the plantar cushion, via intradermic, with L. loboi fungus and after 4 months (period of the appearance of the macroscopic lesions in the plantar cushion), the animals were sacrificed and submitted to a peritoneal washing and to a necropsy to remove the organs: liver and spleen. The plantar cushions were removed for determining the viability and the total number of fungi, besides the hystopatological. The cells in the peritoneal washing were used for: total cell culture for the dosage of cytokine IFN-γ, macrophage... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Orientador no exterior: Joshua Daniel Nosanchuk / Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Carlos Pelleschi Taborda / Banca: Mauro Cintra Giudice / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Maria Aparecida de Resende Stoianoff / Resumo: Dermatófitos são fungos que apresentam a capacidade de invadir os tecidos queratinizados do homem e dos animais, produzindo a dermatofitose. Biofilmes são comunidades estruturadas de microrganismos que se agrupam de maneira organizada a uma superfície ou que se aderem uns aos outros, dentro de uma matriz extracelular que eles mesmos produzem. Pela primeira vez, neste trabalho, foi descrita a formação de biofilmes por isolados clínicos e cepas ATCC de dermatófitos. Também se avaliou a sensibilidade das cepas frente aos antifúngicos convencionais e derivados sintéticos do ácido protocatecuico, determinando sua toxicidade e eficiência, tanto nas formas planctônicas como de biofilme. A identificação molecular dos isolados clínicos mostrou concordância com a identificação convencional. Todas as cepas e isolados foram capazes de formar biofilmes nos quatro meios testados. Trichophyton. rubrum ATCC 28189, ATCC MYA-4438, T. rubrum 143 e Trichophyton. mentagrophytes 66 produziram mais biomassa e matriz extracelular que T. mentagrophytes ATCC 11481 (p<0.05). RPMI 1640, BHI e DMEM estimularam maior produção de biomassa e matriz extracelular que o meio de queratinócitos. Todas as espécies foram capazes de formar biofilmes maduros em 72 h e uma rede de hifas circundadas em vários pontos por uma matriz extracelular foi mostrada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Na microscopia confocal, aparentemente os meios RPMI e DMEM produziram biofilmes mais espessos e o meio BHI, biofilmes mais densos e compactos. As melhores atividades anti-dermatófitos foram expressas pelos protocatecuatos de butila, pentila, hexila, nonila e decila, que exibiram baixa toxicidade para as células HaCat, NHOK e HepG2 nas regiões da concentração inibitória mínima (CIM). Nonila foi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Dermatophytes are fungi that have the ability to invade keratinized tissues of human and animals, producing a condition called dermatophytosis. Biofilms are structured microbial communities that are organized by adhering to a surface, as well as to each other via an extracellular polymeric matrix. For the first time, in this work, the biofilm formation by ATCC strains and clinical isolates of dermatophytes was described. Also, the susceptibilities of the strains to conventional antifungal drugs and to the synthetic derivatives of protocatechuic acid were evaluated, determining its toxicity and efficacy. The molecular identification corroborated with the conventional one. All strains were able to form biofilms in the four media tested. Trichophyton. rubrum ATCC 28189, Trichophyton. mentagrophytes 66, and T. rubrum 143 produced more biomass, polysaccharide structures and extracellular matrix than T. mentagrophytes ATCC 11481 (p <0.05). RPMI 1640, BHI and DMEM stimulated increased production of biomass and extracellular matrix when compared to the medium for keratinocytes. All species were able to form mature biofilms in 72 hours. The SEM results showed a coordinated network of hyphae in all directions, surrounded by an extracellular matrix. In confocal microscopy, apparently RPMI and DMEM media produced thicker biofilms, while the BHI produced denser and compact biofilms. The greatest antidermatophytes activities were expressed by butyl, pentyl, hexyl, nonyl and decyl, protocatechuates, which exhibit low toxicity to HaCat, HepG2 and NHOK cells in the regions of minimal inhibitory concentrations (MIC). Nonyl was the compound with improved selectivity index for HaCat and HepG2 cells; for NHOK cells, the most selective compounds were nonyl and hexyl. Fluconazole, griseofulvin... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A esporotricose, micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, acomete o homem e várias espécies de animais, sendo os felinos domésticos a espécie mais comumente envolvida nos relatos zoonóticos da enfermidade. Considerando as dificuldades terapêuticas no tratamento da micose, incluindo toxicidade e o desenvolvimento de resistência aos antifúngicos disponíveis, o estudo objetivou avaliar a eficácia in vivo do imunomodulador (1-3) glucana e em associação ao Itraconazol no tratamento da esporotricose sistêmica experimental, além de avaliar a presença do S. schenckii na cavidade oral e a produção de óxido nítrico. Foram utilizados 96 ratos Wistar, machos, os quais foram divididos em seis grupos de 16 animais, sendo eles G1: 0,5mg de glucana previamente (três doses) e pós a inoculação; G2: 0,5 mg glucana pós inoculação; G3: grupo controle; G4: 0,5mg de glucana associada a 10mg/kg de itraconazol; G5: 10mg/kg de itraconazol; e grupo G6: duas doses de 0,5mg de glucana associado a 10mg/kg de itraconazol. Os animais foram inoculados com 0,1ml do inóculo fúngico pela via intraperitoneal e veia lateral da cauda, após uma semana iniciou-se o tratamento dos grupos, quando estes apresentavam sinais clínicos da enfermidade. Após acompanhamento clínico durante a cinco semanas de tratamento e isolamento do agente na cavidade oral dos animais, estes foram eutanasiados e necropsiados para a coleta de sangue, avaliação anatomopatológica dos órgãos, retroisolamento do agente, quantificação das unidades formadoras de colônias (UFC) do baço e quantificação de óxido nítrico. Na primeira avaliação foi observado no grupo G1, uma prevenção da enfermidade desencadeada pela glucana, uma vez que, os animais pertencentes a esse grupo não apresentaram sinais clínicos, lesões anatomopatológicas e obtiveram a menor quantificação de UFC (p<0,5). No entanto no final do período experimental o G4 foi significativamente melhor dentre os grupos de tratamento, pois, findou o período com 70% dos animais sem qualquer alteração clínica, lesões macroscópicas nos órgãos e retroisolamento do agente, além de demonstrar menor quantificação nas UFCs e não ocorrer nenhum óbito decorrente da enfermidade. Os grupos G2, G5 e G6 foram significativamente melhor que o grupo controle uma vez que este grupo apresentou uma mortalidade de 31,25%, além de que 100% dos animais permanceram com alterações clínicas, lesões em órgão como fígado, baço e testículo e demonstraram maior quantificação de UFC (p<0,5). Quanto á produção de óxido nítrico foi verificado maior quantidade nos grupos que receberam a glucana em detrimento aos demais grupos. Em vista dos resultados obtidos conclui-se que a glucana induz a produção de óxido nítrico e os cinco tratamentos demostraram resultados satisfatórios, no entanto, a associação do antifúngico e (1-3) glucana propiciou uma regressão mais precoce das lesões no tratamento da esportricose sistêmica experimental. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which affects humans and a wide variety of animals, domestic cats involved in reports of zoonotic illness. Considering the difficulties in the therapeutic treatment of ringworm, including toxicity and the development of resistance to antifungals available, the study aimed to evaluate the efficacy of the immunomodulator in vivo (1-3) glucan and in combination with Itraconazole in the treatment of experimental systemic sporotrichosis, beyond to evaluate the presence of S. Schenckii in the oral cavity of experimental animals and the production of oxide nitric. Were used 96 male Wistar rats, which were divided into 6 groups of 16 animals, and they were G1: 0.5 mg of glucan in advance (three doses) and after inoculation G2: 0.5 mg glucan after inoculation; G3: control group; G4: 0.5 mg of glucan associated with 10mg/kg of itraconazole; G5: 10mg/kg of itraconazole, and G6: two doses of 0.5 mg of glucan associated 10mg/kg of the itraconazole. The animals were inoculated with 0.1 ml of fungal inoculum by intraperitoneal and lateral tail vein, after one week started treatment groups when they showed clinical signs of disease. After clinical monitoring during the five weeks of treatment and isolation of the agent in the oral cavity of animals, they were euthanized and necropsied to collect blood, anatomopathological evaluation of organs, organ cultures of the agent, and quantification of colony forming units (CFU) of spleen. In the first evaluation was observed in G1, a prevention of the disease triggered by glucan, since the animals from this group showed no clinical signs, anatomopathologicals lesions and obtained the smaller number of CFU (p <0.5). However at the end of experimental period the G4 was significantly better among the treatment groups, therefore, ended the period with 70% of animals without any clinical alteration, macroscopic lesions in organs and organ cultures of the agent, beyond to demonstrate smaller number in CFUs and not occur any deaths resulting from illnes .The groups G2, G5 and G6 were significantly better than the control group since this group had a mortality rate of 31.25%, besides that 100% of the animals remained with clinical changes, lesions in organs such as liver, spleen and testis and demonstrated greater quantification of CFU (p <0,5). As the production of nitric oxide has been found much in the groups receiving the glucan rather than to the other groups. In view of these obtained results it is concluded that glucan induces the production of nitric oxide and the five treatments demonstrated efficacy to the reference sporotrichosis experimental systemically, however, the combination of antifungal (1-3) glucan provided an early regression of the lesions.

A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica caracterizada por ser uma doença granulomatosa. As formas benignas da doença são caracterizadas por uma infecção localizada, contendo granulomas compactos com poucos fungos; já nas formas mais graves, ocorre um processo granulomatoso frouxo com focos de necrose e intensa disseminação fúngica. Objetivou-se avaliar o desenvolvimento de lesões granulomatosas em baço, fígado, pulmão e epiplon de camundongos, após infecção pela via intraperitoneal com o isolado de alta virulência, Pb18, em diferentes períodos de infecção após tratamento com fármacos, os quais possuem mecanismo de ação relacionado com a alteração no balanço entre a síntese e degradação dos produtos do colágeno, interferindo diretamente na formação do granuloma A citocina IFN-<font face=\"Symbol\">g, o antibiótico Tetraciclina e as drogas antiinflamatórias Lumiracoxib e Celecoxib. Avaliamos a presença de alguns componentes do granuloma (colágeno, células do infiltrado inflamatório, de citocinas primordiais para sintese/degradação da MEC do granuloma, presença de P. brasiliensis). / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis that is endemic in Latin America, whose causative agent is the thermal dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb). PCM is a granulomatous disease, and the formation of granulomas can be understood as a mechanism of the body to block and limit the invasiveness of the fungus or its antigenic components, once unable to lyse them. Bening forms of the disease are characterized by a localized infection, where granulomasa are compact and contain few fungi. More severe forms present loose granulomatous processes with foci of necrosis and severe fungal. Studies in which granulomatous response was developed in resistant (A/J) and susceptible (B10.A) mice to the high virulence isolate Pb18 showed the presence of different patterns of injuries related to the type of extracellular matrix (ECM) components and the different cells types in the area, suggesting a important role of these elements in the formation and constitution of the granuloma and thus the outcome of infection. In our project, we aimed to evaluate the development of granulomatous lesions in the spleen, liver, lung and omentum of mice susceptible to PCM after intraperitoneal infection with Pb18, at different periods of infection (acute and chronic) with or without treatment with drugs. These drugs have mechanisms of action closely related to the change in the balance between synthesis and degradation of collagen Thus, they interfere directly in the granuloma formation and in maintaining the viability of fungi and also with the development of fibrosis. Which is a common and devastating sequelae of numerous infections including the PCM, with the characteristic proliferation of fibroblasts and deposition of ECM. The treatments were chosen based on prior knowledge on their effects on the course of experimental murine PCM. IFN-<font face=\"Symbol\">g was chosen due to its antifibrotic effect, being an activator of macrophages in infection by P. brasiliensis and increasing the fungicidal effect of neutrophils. The antibiotic tetracycline was used because of its inhibitory effect on the synthesis of extracellular matrix, limiting antimicrobial activity and the ability of collagenase to degrade ECM. Finally, the antiinflammatory drugs Celecoxib and Lumiracoxib (inhibitors of the COX-2 enzyme) 11 were used because they cause an increase in the expression of collagen type III and type IV. We analyzed the components of the granuloma (collagen, inflammatory cells, cytokines essential for synthesis / degradation of the ECM of the granuloma, the presence of P. brasiliensis). Among the cytokines analyzed, we studied the importance of TNF-<font face=\"Symbol\">&#945 in the formation of granulomas and regulation of matrix metalloproteinases (MMP) synthesis and function. We analyzed TGF-<font face=\"Symbol\">b because it negatively modulate the secretion of nitric oxide by macrophages and promote the accumulation of ECM and is believed to be the central mediator of the process of fibrosis in several pathologies. IFN-<font face=\"Symbol\">g was studied because of its correlation to the preferential Th1 immune response in diseases and infectious processes of fungal and bacterial infections, and also because it modulates fibroblast function.

A esporotricose, micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, acomete o homem e várias espécies de animais, sendo os felinos domésticos a espécie mais comumente envolvida nos relatos zoonóticos da enfermidade. Considerando as dificuldades terapêuticas no tratamento da micose, incluindo toxicidade e o desenvolvimento de resistência aos antifúngicos disponíveis, o estudo objetivou avaliar a eficácia in vivo do imunomodulador (1-3) glucana e em associação ao Itraconazol no tratamento da esporotricose sistêmica experimental, além de avaliar a presença do S. schenckii na cavidade oral e a produção de óxido nítrico. Foram utilizados 96 ratos Wistar, machos, os quais foram divididos em seis grupos de 16 animais, sendo eles G1: 0,5mg de glucana previamente (três doses) e pós a inoculação; G2: 0,5 mg glucana pós inoculação; G3: grupo controle; G4: 0,5mg de glucana associada a 10mg/kg de itraconazol; G5: 10mg/kg de itraconazol; e grupo G6: duas doses de 0,5mg de glucana associado a 10mg/kg de itraconazol. Os animais foram inoculados com 0,1ml do inóculo fúngico pela via intraperitoneal e veia lateral da cauda, após uma semana iniciou-se o tratamento dos grupos, quando estes apresentavam sinais clínicos da enfermidade. Após acompanhamento clínico durante a cinco semanas de tratamento e isolamento do agente na cavidade oral dos animais, estes foram eutanasiados e necropsiados para a coleta de sangue, avaliação anatomopatológica dos órgãos, retroisolamento do agente, quantificação das unidades formadoras de colônias (UFC) do baço e quantificação de óxido nítrico. Na primeira avaliação foi observado no grupo G1, uma prevenção da enfermidade desencadeada pela glucana, uma vez que, os animais pertencentes a esse grupo não apresentaram sinais clínicos, lesões anatomopatológicas e obtiveram a menor quantificação de UFC (p<0,5). No entanto no final do período experimental o G4 foi significativamente melhor dentre os grupos de tratamento, pois, findou o período com 70% dos animais sem qualquer alteração clínica, lesões macroscópicas nos órgãos e retroisolamento do agente, além de demonstrar menor quantificação nas UFCs e não ocorrer nenhum óbito decorrente da enfermidade. Os grupos G2, G5 e G6 foram significativamente melhor que o grupo controle uma vez que este grupo apresentou uma mortalidade de 31,25%, além de que 100% dos animais permanceram com alterações clínicas, lesões em órgão como fígado, baço e testículo e demonstraram maior quantificação de UFC (p<0,5). Quanto á produção de óxido nítrico foi verificado maior quantidade nos grupos que receberam a glucana em detrimento aos demais grupos. Em vista dos resultados obtidos conclui-se que a glucana induz a produção de óxido nítrico e os cinco tratamentos demostraram resultados satisfatórios, no entanto, a associação do antifúngico e (1-3) glucana propiciou uma regressão mais precoce das lesões no tratamento da esportricose sistêmica experimental. / Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which affects humans and a wide variety of animals, domestic cats involved in reports of zoonotic illness. Considering the difficulties in the therapeutic treatment of ringworm, including toxicity and the development of resistance to antifungals available, the study aimed to evaluate the efficacy of the immunomodulator in vivo (1-3) glucan and in combination with Itraconazole in the treatment of experimental systemic sporotrichosis, beyond to evaluate the presence of S. Schenckii in the oral cavity of experimental animals and the production of oxide nitric. Were used 96 male Wistar rats, which were divided into 6 groups of 16 animals, and they were G1: 0.5 mg of glucan in advance (three doses) and after inoculation G2: 0.5 mg glucan after inoculation; G3: control group; G4: 0.5 mg of glucan associated with 10mg/kg of itraconazole; G5: 10mg/kg of itraconazole, and G6: two doses of 0.5 mg of glucan associated 10mg/kg of the itraconazole. The animals were inoculated with 0.1 ml of fungal inoculum by intraperitoneal and lateral tail vein, after one week started treatment groups when they showed clinical signs of disease. After clinical monitoring during the five weeks of treatment and isolation of the agent in the oral cavity of animals, they were euthanized and necropsied to collect blood, anatomopathological evaluation of organs, organ cultures of the agent, and quantification of colony forming units (CFU) of spleen. In the first evaluation was observed in G1, a prevention of the disease triggered by glucan, since the animals from this group showed no clinical signs, anatomopathologicals lesions and obtained the smaller number of CFU (p <0.5). However at the end of experimental period the G4 was significantly better among the treatment groups, therefore, ended the period with 70% of animals without any clinical alteration, macroscopic lesions in organs and organ cultures of the agent, beyond to demonstrate smaller number in CFUs and not occur any deaths resulting from illnes .The groups G2, G5 and G6 were significantly better than the control group since this group had a mortality rate of 31.25%, besides that 100% of the animals remained with clinical changes, lesions in organs such as liver, spleen and testis and demonstrated greater quantification of CFU (p <0,5). As the production of nitric oxide has been found much in the groups receiving the glucan rather than to the other groups. In view of these obtained results it is concluded that glucan induces the production of nitric oxide and the five treatments demonstrated efficacy to the reference sporotrichosis experimental systemically, however, the combination of antifungal (1-3) glucan provided an early regression of the lesions.

A Paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, é uma importante micose endêmica na América Latina. Afeta principalmente trabalhadores rurais em idade produtiva. A doença é associada com vários graus de disfunções da imunidade celular de acordo com a severidade da apresentação clínica. Neste trabalho analisamos a atividade fagocítica, apresentação antigênica e a capacidade linfoproliferativa de células dendríticas derivadas de monócitos (moDC) in vitro, frente a glicoproteína de 43 kDa (gp43) do P. brasiliensis, um exoantígeno secretado pela parede do fungo que possui atividade proteolítica e o antígeno somático de Candida albicans (CSA) usado como controle. A suspensão de células enriquecida de monócitos foi obtida através do gradiente de densidade Ficoll-Hypaque/Percoll, utilizando-se amostras de indivíduos saudáveis e pacientes com PCM. Os monócitos foram então cultivados na presença do fator de crescimento para granulócitos e monócitos (GM-CSF) e interleucina-4 (IL-4). Após a diferenciação em células dendríticas (DC), foram realizados ensaios de fagocitose, estimulação antigênica, linfoproliferação e análise da expressão das moléculas de superfície CD14, CD11c, CD86, HLA-DR e CD1a por citometria de fluxo. Sobrenadantes foram coletados para análise da produção de citocinas. Os resultados obtidos sugerem que a gp43 inibe a ativação das DCs dos pacientes por um mecanismo que envolve diminuição da expressão de moléculas de superfície, causando disfunção na resposta imune associada com altos níveis de secreção de IL-10. As DCs de indivíduos saudáveis fagocitam a gp43 e apresentam o antígeno de forma eficiente, enquanto que as DCs dos pacientes apresentaram diminuição da função fagocítica. Por outro lado, foram encontrados altos níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) produzidos pelas DCs dos pacientes, havendo uma contribuição para a resposta inflamatória e imunidade inata de pacientes com PCM / Paracoccidioidomycosis (PCM), caused by the dimorfic fungus Paracoccidioides brasiliensis, is the most important endemic mycosis in Latin America. It affects rural workers at their productive period of live. PCM is associated with varying degrees of cellular immune dysfunction according to the severity of the clinical presentation. Here, we analyzed the phagocytic activity, antigen presentation and lymphoproliferation capacity of human monocyte-derived dendritic cells (moDC) in vitro challenged with the exoantigen 43 kDa of P. brasiliensis (gp43) and Candida albicans somatic antigen as control (CSA). The monocytes enriched suspension was obtained through gradient of Ficoll-Hypaque/Percoll density from health individuals and patients with PCM. The cells were cultivated in the presence of granulocytemonocyte colony stimulating factor (GM-CSF) and interleukin-4 (IL-4). After differentiation, DCs were stimulated with gp43 and CSA and analysed phagocytosis capacity. The following surfaces molecules such as CD14, CD11c, CD86, HLA-DR and CD1a were analyzed by flow cytometry. The supernatants were collected for cytokine analysis. In addition, we also verify the cellular morphology by microscopy examination. Taken together, these results suggest that P. brasiliensis inhibits activation of immature DC of patients by a mechanism that involves decreased expression of the surfaces molecules and this can result in dysfunction of the hostimmune response, associated with and high levels of interleukin-10 (IL-10) secretion. The results suggest that health individuals DC internalized gp43 and produced antigen presentation very efficient, while the patients DC inhibits activation by a mechanism involving lesser expression of the surfaces molecules. On the other hand, the high levels of interleukin-12 (IL-12) and tumor necrosis factoralpha (TNF-a) in patients DC could contribute to inflammatory response and innate immunity in human PCM