Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326970.pdf: 2559263 bytes, checksum: f6ddabd021001d36d6d6bc050fdafe9c (MD5) Previous issue date: 2014 / O câncer é caracterizado pelo crescimento descontrolado de células que invadem o tecido circundante e podem produzir metástases em locais distantes do órgão afetado. Entre os tipos de câncer destaca-se o melanoma que é caracterizado pela proliferação anormal dos melanócitos e possui predominância em indivíduos de pele e olhos claros. O melanoma representa 4% das neoplasias malignas da pele, considerado grave devido à elevada propensão para produzir metástases. Tem sido relatado que a enzima ácido graxo sintase (FASN), responsável pela síntese endógena do ácido graxo palmitato, está superexpressa em células de melanoma e esta alta expressão está associada a um pior prognóstico. Também é relatado que o aumento desta enzima parece ser necessário para a proliferação e sobrevivência das células tumorais. Recentemente demonstramos que as imidas cíclicas, mais especificamente as maleimidas e seus derivados, possuem relevante atividade antitumoral in vivo e que esta atividade parece estar relacionada a modulação adipogênica e portanto, pode exercer influência na atividade da enzima FASN. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade dos derivados maleimídicos em diferentes linhagens celulares de melanoma humano (SK-MEL-19, SK-MEL-28, SK-MEL-147) como também a atividade antiadipogênica em pré-adipócitos murinos 3T3-L1. Como resultados, observou-se que os derivados do ácido N-fenil-maleâmico apresentaram uma concentração citotóxica que promove a morte em 50% das células, CC50 = 200, enquanto que os derivados da N-fenilmaleimida mostraram uma CC50 de 10 a 32 µM para todas as linhagens de melanoma analisadas, sugerindo que o anel imídico é responsável pela referida atividade. Além disso, os compostos denominados M2 e M7, maleimidas com susbstituintes -H e -OCH3, respectivamente, mostraram-se três vezes mais seletivos para a linhagem SK-MEL-147 do que na linhagem não-tumoral de melanócitos. Ainda, o M2 e o M7 induziram a fragmentação de DNA na SK-MEL-28 e na SK-MEL-147, com maior expressão na segunda linhagem, sugerindo morte celular por apoptose. Na linhagem SK-MEL-147 os compostos M2 e M7 induziram a apoptose, como também a diminuição da expressão da FASN. Com relação a atividade antiadipogênica, o M2 e o M7 diminuíram a diferenciação celular de pré-adipócitos evidenciado pela diminuição de lipídios intracelulares. A partir destes resultados, conclui-se que os derivados da N-fenilmaleimida M2 e M7 foram capazes de induzir a apoptose em células de melanoma humano e que este efeito pode estar relacionado, em parte, com a inibição da expressão gênica da enzima FASN.<br> / Abstract : Cancer is characterized by uncontrolled growth of cells that might invade surrounding tissues and metastasize to distant sites of the affected organ. Among cancers, melanoma is well known for abnormal proliferation that arises in melanocytes, which susceptibility correlates to a large degree with light skin, and eyes color. Melanoma represents 4 % of malignancies of the skin and is considered a severe disease due to intrinsic propensity to metastasize. It has been reported that the enzyme fatty acid synthase (FASN), responsible for the endogenous synthesis of fatty acids palmitate, is overexpressed in melanoma and this overexpression is generally correlated with poor prognosis. It is also reported that the increased expression of this enzyme seems to be necessary for the proliferation and survival of tumor cells. Recently, we demonstrated that cyclic imides, more specifically maleimides and derivatives, exerted important in vivo antitumoral activity. Likewise, we suggested that this activity seems to be related to modulations in adipogenic pathways and therefore, could alter the FASN activity. In view of this scenario, the aim of this study was to evaluate the cytotoxicity and the effect of the maleimides derivatives on FASN expression in different human melanoma cell lines (SK-MEL-19, SK-MEL-28, SK-MEL-147), as well as, a possible anti-adipogenic activity in murine preadipocytes 3T3-L1. As results, it was observed that derivatives of N-phenyl-maleamic acids showed CC50s = 200 while the derivatives of N- phenylmaleimide showed CC50s from 10 to 32 µM for all melanoma cell lines, suggesting that the imidic ring is responsible for that activity. Likewise, the compounds M2 and M7, derivatives with substituent -H and -OCH3 respectively, showed three-fold increment in selectivity for SKMEL-147 when compared with non-tumoral melanocytes. Furthermore, M2 and M7 induced DNA fragmentation in SK- MEL-28 and SK-MEL -147, more expressively in the last one, suggesting cell death by apoptosis. M2 and M7 also induced apoptosis in SK-MEL-147 cell line, as well as a decrease in FASN gene expression. Regarding anti-adipogenic activity, M2 and M7 decreased cell differentiation of pre-adipocytes by reducing the intracellular lipids amount. Taken together, we concluded that the derivatives M2 and M7 were capable to induce apoptosis in melanoma cell line and this activity is related, in part, to the inhibition FASN expression.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T12:39:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 269447.pdf: 1011841 bytes, checksum: 083f4b25bbb361ca9c1d3c1b300e3548 (MD5) / Este estudo demonstrou as propriedades antioxidantes e secundariamente a citotoxicidade de cinco complexos nitrosilados de rutênio: trans-[Ru(NH3)4(L)(NO)]Cl3 (A - D; sendo que (A) L = Cafeína, (B) L = Teofileno, (C) L = Metil-1-imidazol, (D) L = Benzoimidazol), e (E) cis-[Ru(NH3)4(NO)2]Cl3. Somente o complexo (A) apresentou significante reatividade identificada pelo método de reatividade antioxidante total (TAR) e também atividade sequestradora de radical ânion superóxido através da redução do nitro blue tetrazólio (NBT). Os complexos (A), (B), (C), (D) e (E) exibiram capacidade sequestradora de radicais hidroxilas ("OH). O potencial decresceu na respectiva ordem: D>A>B>C>E (a maioria dos valores foi menor que 15 µM). O sistema gerador de radicais hidroxilas foi o complexo Fe-ácido nitriloacético (NTA) e a oxidação da deoxirribose. A inibição da mioglobina induzida por radical monóxido de nitrogênio ("NO) foi observada para os complexos seguindo a ordem: C>B>D>E>A. A proteção da peroxidação lipídica em microssomas (MC) induzida por sistema ascorbato/H2O2 Fe3+ foi potente para os complexos (D) e (E), demonstrando valores de IC50 inferiores a 100 µM (de modo dependente da concentração). Adicionalmente, a lipoperoxidação induzida por radical ascorbila em lipossomas de fosfatidilcolina de soja foi inibida por todos os complexos, demonstrando valores de IC50 inferiores a 180 µM, no qual apresentou potencial decrescente, seguindo a ordem: D>A>C>B>E. Quando avaliado em microssomas, alguns valores foram similares. Além disto, o complexo (A) protegeu a lipoperoxidação induzida por radiação UV em MC, e somente o complexo (D) protegeu a lipoperoxidação induzida por peroxinitrito. Nenhum dos complexos demonstrou citotoxicidade em hepatócitos, mas os complexos (A) e (C) causaram a morte de células tumorais linfoblásticas de murinos (L1210). / This study shows the antioxidant and secondary the cytotoxic activity of five different ruthenium nitrosyl complexes: trans-[Ru(NH3)4(L)(NO)]Cl3 (A - D; being (A) L = Caffeine, (B) L = Theophylline, (C) L = Methyl-1-imidazole, (D) L = Benzoimidazole), and (E) cis-[Ru(NH3)4(NO)2]Cl3. Only the complex (A) (L = Caffeine) presented significant reactivity identified by the total antioxidant reactivity (TAR) assay and also potential scavenger activity of superoxide anion (O2"?) through the nitro blue tetrazolium (NBT) reduction test. The complexes (A), (B), (C), (D) and (E) showed capability to scavenge hydroxyl radicals ("OH). The respective potential decreased following the order D>A>B>C>E (most of the values of IC50 were smaller than 15 µM). The system to generate the free radical used was Fe-acetonitrile acid (NTA) and deoxyribose oxidation protection. The inhibition of myoglobin oxidation potential induced by nitrogen monoxide ("NO) was observed for the complexes following the order C>B>D>E>A. The protection of lipid peroxidation in microsomes (MC) induced by H2O2 Fe3+ ascorbate system was effective for complexes (D) and (E), with values of IC50 below 100 µM (concentration-dependent manner). In addition, lipoperoxidation promoted by ascorbyl radical in soybean phosphatidylcholine liposomes was inhibited in all samples presenting values of IC50 lower than 180 µM, in which presented potential decrease following the order D>A>C>B>E. When evaluated in microsomes, some values of IC50 were similar. Furthermore, complex (A) protected also the lipoperoxidation induced by UV radiation in MC and only complex (D) protected lipoperoxidation induced by peroxynitrite. None of the complexes showed cytotoxicity tested in hepatocytes, but the complexes (A) and (C) caused significant death to a leukemic lymphoblastic cell line (L1210).

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-02-09T03:02:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336853.pdf: 4946218 bytes, checksum: bfd0e43173c8c1a525f2bb6a81de4026 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os cardenolídeos, tais como digoxina e oubaína, são conhecidos por sua eficácia no tratamento da insuficiência cardíaca congestiva e como fármacos antiarrítmicos. Recentemente, foram detectadas novas atividades farmacológicas para esses "antigos" fármacos. Tendo em vista o crescente interesse na pesquisa e desenvolvimento desta classe de compostos como potenciais quimioterápicos, frente a diversas linhagens celulares tumorais, o presente trabalho de tese objetivou avaliar os efeitos citotóxicos em células tumorais de três cardenolídeos (glucoevatromonosídeo, digitoxigenina monodigitoxosídeo e convalotoxina), previamente selecionados pela sua potente ação citotóxica. Inicialmente, eles foram avaliados em linhagens celulares tumorais de diferentes origens e todos demonstraram uma potente ação, em concentrações nanomolares, em todas as linhagens testadas, especialmente nas células de tumor de pulmão (A549). Essa linhagem tumoral foi então selecionada para a continuação dos experimentos para detectar o tipo de morte celular causada por esses três cardenolídeos. O glucoevatromonosídeo (GEV), composto mais promissor, também foi investigado em células U937 (linfoma histiolítico). Todos os três causaram bloqueio da fase G2/M, enquanto que a convalotoxina (CON) aumentou o número de células em subG0 do ciclo celular. O GEV foi capaz de inibir a expressão de importantes proteínas relacionadas ao ciclo celular, como ciclina B1 e p53 em A549. Ainda, esse composto causou bloqueio em subG0 em células U937, demonstrando um efeito dependente do tipo celular. O efeito de morte celular causado pelo GEV também foi tipo celular dependente, já que foi observada morte celular pela ação de caspases nas células U937 e independente da ação das caspases em células A549. A digitoxigenina monodigitoxosídeo não apresentou efeito significativo de morte celular em células A549. A CON aumentou o número de núcleos picnóticos e células Anexina-V positivas, configurando morte celular apoptótica. Alem disso, os três compostos foram capazes de inibir a migração e invasão celulares, em células A549, bem como de reduzir a expressão das proteínas: MMP2, MMP9 e FAK (proteína de adesão focal), que são essenciais no processo de metástase. Além disso, o GEV foi capaz de inibir a expressão de importantes cinases, geralmente super expressas em células tumorais. O conjunto desses dados sugere que estes compostos, especialmente o GEV, podem ser considerados candidatos promissores para o desenvolvimento de uma forma farmacêutica a ser usada no tratamento do câncer de pulmão.<br> / Abstract : Cardenolídeos such as ouabain and digoxin are known for their efficacy in treating congestive heart failure as antiarrhythmic drugs. Recently, new pharmacological activities have been found (antiviral and antitumor) to these "old" drugs. Given the growing interest in research and development of this group of compounds, as potential chemotherapeutic agents, this work aimed to evaluate the cytotoxic effects on tumor cells of three cardenolides (glucoevatromonoside, digitoxigenin monodigitoxoside and convallatoxin) previously selected for its potent cytotoxic action. Initially, they were screened in tumor cell lines of different origins and all of them showed potent action at nanomolar concentrations in all cell lines tested, particularly in lung tumor cells (A549). This cell line was then selected for further investigation to detect the kind of cell death caused by these three cardenolides. Glucoevatromonoside (GEV) was the most promising compound, and also investigated in U937 cells (histiocytic lymphoma). All these compounds block G2/M phase, whereas the convallatoxin increased the number of cells in subG0 phase. GEV was able to inhibit the expression of important proteins related to cell cycle, such as Cyclin B1 and p53. Beyond that, this compound caused cell cycle blockage in subG0 phase in U937 cells, demonstrating dependent cell type effect. The effect of cell death caused by GEV was also cell type dependent. In U937 cells, GEV showed a caspase dependent cell death while it is independent of caspase in A549 cells. Digitoxigenin monodigitoxoside did not show a significant percentage of cell death in A549 cells. Convallatoxin increased the number of pyknotic nuclei and Annexin-V positive cells, setting apoptotic cell death in A549 cells. Furthermore, the three compounds are capable of inhibiting cell migration and invasion in A549 cells as well as to reduce the expression of some proteins as MMP2, MMP9 and FAK (focal adhesion protein), which are essential in the process of metastasis. Moreover, GEV was able to inhibit the expression of important kinases, usually over expressed in tumor cells.. Taken together, these data suggest that these compounds, especially GEV can be considered promising candidates for the development of a pharmaceutical form to be used in the treatment of lung cancer.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-24T02:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é uma desordem maligna resultante da proliferação clonal de células progenitoras T ou B. Conforme os protocolos de tratamento para LLA, em torno de 80 % das crianças diagnosticadas com LLA entram em remissão completa. No entanto, o tratamento de pacientes adultos com LLA tem demonstrado poucas melhorias nas últimas duas décadas, devido à resistência apresentada pelos linfoblastos leucêmicos à quimioterapia. As chalconas são precursoras dos flavonóides presentes nas plantas superiores e exercem uma ampla variedade de efeitos farmacológicos. Mudanças nas moléculas das chalconas podem resultar em diferentes atividades biológicas. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi investigar a sensibilidade de células de LLA de origem murina L-1210 a uma série de onze chalconas sintéticas derivadas do 2-naftaldeído, bem como os mecanismos citotóxicos envolvidos. A triagem preliminar da citotoxicidade da série de chalconas mostrou que apenas as chalconas (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(2'-hidroxi-4',6'-dimetoxi-fenil)-2-propen-1-ona (chalcona 1), (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(3',4',5'-trimetoxi-fenil) -2- propen-1-ona (chalcona 2), (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(3'-metoxi-4'-hidroxi -fenil) -2- propen-1-ona (chalcona 9) e (2e)-3-(2-naftalenil)-1-(2',5'-dimetoxi-fenil)-2- propen-1-ona (chalcona 11) apresentavam efeito citotóxico significativo. A análise da exposição da fosfatidilserina pela Anexina V-FITC mostrou que a morte celular induzida por essas quatro chalconas ocorreu por indução da apoptose. Para estudar os mecanismos pelos quais esses compostos provocaram apoptose, foi realizada a avaliação do ciclo celular e da expressão da proteína p53, Bcl-2, Bax e caspase 3. Os resultados obtidos mostram que as chalconas 1, 2, 9 e 11 aumentaram a expressão da p53; envolvem as proteínas da via mitocondrial, diminuindo a expressão de Bcl-2 e aumentando a expressão de Bax; aumentando a expressão da caspase 3 ativa e, atuam de maneira diferente no ciclo celular. A chalcona 1 causou bloqueio celular na fase G0/G1 e as chalconas 9 e 11 na fase G2/M. Esses resultados sugerem que a atividade distinta das chalconas derivadas do mesmo núcleo fundamental nas vias de sinalização apoptótica tem correlação direta com a respectiva estrutura química. Mais estudos precisam ser realizados para o completo entendimento das vias pelas quais essas chalconas induzem a apoptose, no entanto, os resultados obtidos apresentam-se promissores para o desenvolvimento de novos fármacos antineoplásicos. Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a malignant disorder resulting from a clonal proliferation of T or B lymphoid cells progenitors. According to the multicenter protocols, about 80 % of all children diagnosed with ALL reach a complete remission. However, the treatment of adults has shown few improvements over the last two decades, because of leukemic lymphoblasts' resistance to chemotherapy. Chalcones are precursors of flavonoids in higher plants and display a wide variety of pharmacological effects. Changes in chalcones molecules can result in different biological activities. The aim of the present work was to investigate the cytotoxicity of eleven synthetic chalcones derived from 2-naftaldehyde in murine acute lymphoblastic leukemia cells. A preliminary screening of chalcones series showed that only (2E)-3-(2-naftalenil)-1-(2'-hydroxy- 4',6'- dimethoxy-phenyl)-2-propen-1-one (chalcone 1), (2E) 1-(3',4',5'-trimethoxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 2), 2E)-1-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 9) and (2E)-1-(2',5'-dimethoxyphenyl)-3-(2-naphtyl)-2-propen-1-one (chalcone 11) have a significant cytotoxic effect. The analysis of the exposure of phosphatidylserine by Anexina V-FITC showed that these chalcones induced cell death by apoptosis. To investigate the mechanism of apoptosis, the cell cycle and p53, Bcl-2, Bax and caspase 3 expression were evaluated. The results showed that chalcones 1, 2, 9 and 11 increased p53 expression; involved mitochondrial apoptosis pathway, reducing the expression of Bcl-2 and increasing the expression of Bax; increasing the expression of active caspase 3 and act differently in the cell cycle. Chalcone 1 blocked cell cycle progression on the G0/G1 phase and chalcones 9 and 11 on G2/M phase. In spite of these four chalcones are derivated from 2-naftaldehyde, they showed different effects on cell cycle and p53, Bcl-2, Bax and caspase 3. These observations strongly suggest a straighter relation between cytotoxic activity and chemical structure. More investigations are necessary in order to understand the mechanisms that chalcones induce apoptosis, however, the results obtained are promising for the development of new antineoplasic drugs.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:00:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 223441.pdf: 2772291 bytes, checksum: ad47726fad89085141b9c3d6ce889814 (MD5) / A raiva humana é uma doença de etiologia viral com grande impacto na saúde pública, principalmente por seu curso fatal, na grande maioria dos casos. Apesar da difundida e estabelecida profilaxia através da vacinação, acredita-se que a raiva seja responsável por aproximadamente 40.000 a 70.000 mortes por ano, especialmente em áreas endêmicas. Atualmente, não há disponibilidade de qualquer fármaco antiviral com ação específica contra o vírus rábico. Em combinação com a profilaxia, um fármaco antiviral poderia ser usado para o tratamento da raiva humana e aumentar a proteção contra a encefalite causada pelo vírus. Os compostos fenólicos (CF) são derivados do metabolismo vegetal secundário, podendo ser obtidos através de síntese. Muitos estudos demonstraram que os CF possuem inúmeras atividades farmacológicas, incluindo ações vasodilatadora, antialérgica, antiinflamatória, antiviral, entre outras. Neste trabalho, a potencial atividade anti-rábica in vitro de 24 CF foi avaliada utilizando-se células McCoy e a cepa PV do vírus rábico. A citotoxicidade (CC50) foi determinada pelo ensaio colorimétrico do MTT e a atividade anti-rábica (CE50) foi estimada através da técnica de inibição do efeito citopático viral. Isoprinosina e quetamina foram utilizadas como controles positivos. A padronização do ensaio do MTT para avaliação da atividade anti-rábica também foi realizada, mas os resultados mostraram que este ensaio é inadequado para tal avaliação. Os compostos testados apresentaram índices de seletividade (IS= CC50/CE50) que variaram de 1,0 a 3,9. Seis CF não inibiram o efeito citopático viral em qualquer grau, em concentrações = a seus valores de CC50. Quatro CF apresentaram valores de IS > 3,0. Através dos resultados obtidos, foram sugeridas algumas possíves relações estrutura-atividade. Observou-se que a presença de hidroxilas livres e de grupamentos éteres influenciou a atividade anti-rábica. Contudo, estudos adicionais são necessários para o estabelecimento dessa relação.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T08:20:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 298731.pdf: 2640348 bytes, checksum: 66abf5a6ff506b9eaf011da9254befe8 (MD5) / Dihidrocucurbitacina B foi isolada do extrato diclorometânico das raízes de Wilbrandia ebracteata e submetida a reações de O-glicosilação, a fim de obter derivados glicosilados bioativos. Duas metodologias distintas foram utilizadas para o acoplamento de glicose e galactose, na formação da ligação O-glicosídica com dihidrocucurbitacina B. A reação clássica de Köenigs-Knorr forneceu o derivado 16-ortoéster peracetilado de dihidrocucurbitacina B (7), enquanto a reação com imidatos resultou no composto 2-O-?-galactosídeo de dihidrocucurbitacina B (12). As estruturas dos compostos obtidos, bem como de dihidrocucurbitacina B, foram confirmadas através de espectroscopia de RMN 1D e 2D, IV e espectrometria de massas (ESI-TOF). Cabe destacar que os compostos obtidos neste trabalho, são inéditos na literatura. Os derivados glicosídicos foram avaliados com relação à citotoxicidade em linhagem celular de adenocarcinoma humano pulmonar (A549) e apresentaram valores de CC50 maiores que o composto natural dihidrocucurbitacina B, ou seja, mostram-se menos citotóxicos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:19:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327752.pdf: 2546428 bytes, checksum: 44776ff9553591693f0fe33695179aad (MD5) Previous issue date: 2014 / O melanoma é um tipo de câncer de pele extremamente agressivo, devido à alta propensão em produzir metástases. As mutações do tipo B-RAF e N-RAS são frequentemente encontradas em pacientes com essa doença. Por isso, a busca por novas moléculas que inibam essas proteínas tem se intensificado nos últimos tempos. Após muitos anos sem aprovação de um novo medicamento para o melanoma metastático, em 2011 o FDA (Food and Drug Administration) aprovou o vemurafenibe (inibidor da B-RAFV600E). Porém, muitos pacientes já adquiriram resistência a esse fármaco e manifestaram efeitos colaterais relevantes. Embora a detecção precoce resulte em aumento das taxas de cura, o prognóstico do melanoma metastático é desfavorável para os pacientes. Em trabalho anterior do nosso grupo sais de isotiourônio apresentaram uma importante seletividade para ação antitumoral. Neste sentido, este trabalho tem o objetivo de avaliar in vitro a atividade citotóxica e antimetastática dos sais de isotiourônio (MF01, MF02 e MF03), sal de N- fenilisotiourônio (MF12) e sais de isotiossemicarbazidas (MF14 e MF15) em linhagens de melanoma (B16-F-10, SK-MEL-19, SK-MEL-28 e SK-MEL-147) com diferentes mutações. Os sais de isotiourônio apresentaram as CC50 (concentração do composto que causa 50% de morte celular) mais baixas, entre 7 a 28 µM para as linhagens tumorais. Os outros sais não mostraram atividade relevante. Quando a citotoxicidade foi comparada com uma célula não tumoral, os sais demonstraram ser mais seletivos para as células tumorais. Baseado nestes resultados avaliou-se a expressão dos genes N-RAS e B-RAF, que se encontram frequentemente mutados no melanoma. Os compostos MF02 e MF03 aumentaram a expressão de B-RAF. Já o sal MF01 diminuiu significativamente a expressão de N-RAS. A incubação dos sais com as linhagens de melanoma não alterou a progressão do ciclo celular, entretanto foi observado um aumento de células em apoptose quando tratadas com os compostos, principalmente com o MF01. Além disso, constatou-se que os compostos MF01 e MF02 diminuíram significativamente a migração e a invasão celular. Ainda, o vemurafenibe (PLX4032) foi associado aos sais MF01, MF02 e MF03. Esta associação resultou em citotoxicidade mais acentuada quando comparada com os compostos isolados. Diante dos resultados, ressalta-se que os sais de isotiourônio demonstraram os melhores resultados, especialmente o MF01 que diminuiu a expressão de N-RAS, aumentou o número de células apoptóticas, diminuiu a proliferação, migração e invasão celular e, além disso, quando associado ao PLX4032, resultou em efeito sinérgico.<br> / Abstract : Melanoma is a very aggressive type of skin cancer due to an intrinsic high propensity to metastasize. Mutation in B-RAF and N-RAS are often found in patients with this disease. Therefore, the search for new molecules that inhibit these proteins has been intensified recently. In 2011, after many years with no new drug approval for metastatic melanoma, the FDA (Food and Drug Administration) has approved the vemurafenib (inhibitor of B-RAFV600E). However, many patients have already acquired resistance to this drug and showed severe side effects. Although early detection results in higher cure rates, the prognosis of metastatic melanoma is very unfavorable. In a recent work of our group it was found a selective antitumoral action for isothiouronium salts. For this reason, this work aims to evaluate in vitro the cytotoxic and antimetastatic activities of isothiouronium salts (MF01, MF02 and MF03), N- phenylisothiouronium (MF12) e isothiosemicarbazides salts (MF14 e MF15) in different melanoma cell lines (B16-F10, SK-MEL-19, SK-MEL-28 e SK-MEL-147) with different mutations. The isothiouronium salts presented lowest CC50s (concentration of compound that causes 50 % of cell death) ranging between 7 - 28 µM for tumoral cell lines. The other salts, however, did not show significant activity. When the cytotoxicity was compared to a non-tumoral cell, salts presented high selectivity towards tumoral cells. Next, gene expression of N-RAS and B-RAF was also evaluated. MF02 and MF03 compounds induced a increased expression of B-RAF, since the MF01 salt significantly decreased the expression of N-RAS. Melanoma cells incubated with the salts did not alter the cell cycle phases, however, it was observed an increase in the amount of apoptotic cells, especially with MF01. Besides that, it was observed that MF01 and MF02 significantly decrease cell migration and cell invasion. Finally, MF01, MF02 and MF03 salts were associated with vemurafenib (PLX4032). These combinations resulted in a marked decrease in cell viability when compared to the compounds alone. Considering the results, the isothiouronium salts demonstrated interesting results, specially MF01 which decreased the expression of N-RAS, increased the number of apoptotic cells, decreased cell proliferation, migration and invasion. Moreover, when combined with PLX4032 resulted in a synergistic effect.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2015-04-29T21:08:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333005.pdf: 22437127 bytes, checksum: 7fff9aa514916f2595f87a73d886c766 (MD5) Previous issue date: 2014 / Diversos setores da indústria estão utilizando nanopartículas (NP)metálicas. Contudo, é difícil prever o comportamento dessas no meioambiente sem estudos toxicológicos. Dadas às característicasparticulares das NP, como reduzido tamanho, maior área superficial ecapacidade de aglomeração/dispersão, estas podem se translocarfacilmente pelos compartimentos ambientais potencializando os riscosao meio ambiente e ao homem. A NP de óxido de cromo III (NP Cr2O3)é aplicada na indústria principalmente como pigmentos, catalisadores ematerial refratário, contudo o seu efeito tóxico aos organismos vivos épouco conhecido. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito daNP Cr2O3 na população de algas unicelulares Chlamydomonasreinhardtii, bactéria luminescente marinha Aliivibrio fischeri,microscrustáceo Daphnia magna e investigar o efeito citotóxico, atravésdo ensaio de MTT e lipoperoxidação, sobre células Vero. As C.reinharditii foram expostas às NP Cr2O3 para avaliar os efeitos sobre aprodução de espécies reativas de oxigênio (ROS), atividade esterase,viabilidade celular e fotossistema II. Para o estudo com D. magna,foram realizados teste de toxicidade aguda e crônica. Foram feitos testesde inibição de luminescência com A. fischeri, para os tempos de 15 e 30minutos. As células Vero foram expostas às NP por 24 horas, paraobservação do efeito citotóxico e quantificação de MDA. Os testes comalgas mostraram, em 24 horas, um aumento significativo no nível deROS para toda a população exposta à NP Cr2O3 e CE50,24h de 1,57±0,53g L-1. D. magna mostrou-se sensível à NP Cr2O3, apresentando umaCE50,48h de 101,74 mg L-1. Foi observado efeito crônico sobre D. magnacom valor de CEO de 10 mg L-1 para reprodução e crescimento, e CEO50mg L-1 para o parâmetro longevidade. A bactéria A. fischeri semostrou menos sensível à NP apresentando valores de CE50,15min de769,17±19,69 mg L-1 e CE50,30min de 980,00±134,35 mg L-1. Osresultados obtidos nas avaliações toxicológicas com células Verodemonstraram que a NP Cr2O3 possui um potencial efeito citotóxico,pois reduz a viabilidade celular das células Vero (CE50,24h =0,97±0,56 g L-1). Os resultados demonstraram que a NP Cr2O3 possuipotencial para causar efeito de toxicidade aguda e crônica, bem comoalterações a nível celular em organismos de água doce e salgada.<br> / Abstract : Metallic nanoparticles (NPs) are being used in several industrial fields.However, the toxicologic studies default hinders the observation of thebehavior of these particles on the environment. The intrinsiccharacteristics of NPs such as: low size, larger surface area and capacityto agglomeration / dispersion, facilitate its displacement through ofenvironmental compartments potentiating the environment and humansrisks. Although Chromium (III) oxide nanoparticles (Cr2O3 NP) areapplied in industry mainly as pigments, catalysts and refractory materialforms, studies developed to evaluate its toxic effect on living organismsare scarce. Thus the present study has aimed to evaluate the toxic effectsof Cr2O3 NP on the unicellular algae population Chlamydomonasreinhardtii, the marine luminescent bacteria Aliivibrio fischeri, themicrocrustacean Daphnia magna and to investigate the cytotoxic effectby MTT and lipid peroxidation assay on Vero cells. C. reinhardtii wereexposed to Cr2O3 NP to evaluate its effects on reactive oxygen species(ROS) production, esterase activity, cell viability and photosystem II. D.magna were exposed to NPs suspensions to perform acute and chronictoxicity tests. A. fischeri was exposed to NPs suspensions at 15 and 30minutes to perform luminescence inhibition tests. Vero cells wereexposed to Cr2O3 NPs to a 24h period to observe the cytotoxic effectthrough the MTT assay and to MDA quantification. The results withalgae showed in 24 hours, an significant increase of ROS levels for theentire population exposed to Cr2O3 NPs and EC50,24h of 1.57±0.53 g L-1.The D. magna was sensitive to Cr2O3 NPs, at EC50,48h of 101.74 mg L-1.With respect to chronic toxicity, Cr2O3 NPs showed a statisticallysignificant effect (p < 0.05) on the growth and reproduction parameters(OEC = 10 mg L-1). In relationship to A. fischeri assay, the resultsshowed less sensitivity to NP demonstrating values of EC50,15min =769.17±19.69 mg L-1 and EC50,30min = 980.00±134.35 mg L-1. Theresults obtained of Vero cells showed that Cr2O3 NPs has the cytotoxiceffect potential because it reduces cell viability of Vero cells (CE50,24h =0.97±0.56 g L-1). The results showed that the Cr2O3 NPs have potentialto cause toxic effects (acute and chronic), as well as changes at thecellular level in fresh and salt water organisms.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:32:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318270.pdf: 3642332 bytes, checksum: bdee1a16252bb2f6286cc9d22aa6a8de (MD5) Previous issue date: 2013 / As leucemias agudas são desordens heterogêneas do sistema hematopoiético caracterizadas pela expansão clonal de uma população de células neoplásicas malignas que sofrem bloqueio maturativo quanto à sua diferenciação. O tratamento mais efetivo para as leucemias, a quimioterapia, está associado a altas taxas de recidiva e a elevados índices de morbidade e mortalidade. Estudos demonstram que as chalconas e seus derivados possuem atividade citotóxica e apresentam potencial para o desenvolvimento de novos fármacos. Assim, o objetivo do presente estudo é a busca por novos compostos a partir de três chalconas sintéticas derivadas do 1- e do 2-naftaldeído que tenham atividade contra células leucêmicas com pouco ou nenhum efeito em células normais. Entre os compostos avaliados, a chalcona A1 apresentou resultados mais promissores e foi selecionada para estudos posteriores. Para os ensaios de citotoxicidade, as células K562, Jurkat, U937, Kasumi, NB4 e CEM foram incubadas com a chalcona A1 em concentrações crescentes por 24, 48 e 72 h. A viabilidade celular foi determinada pelo método do MTT, onde se observou que o composto reduziu a viabilidade celular das seis linhagens de forma dependente da concentração e do tempo de incubação. A fim de verificar a efetividade do composto em um modelo de tumor sólido, foram utilizadas células de adenocarcinoma de cólon humano HT-29. Os resultados demonstram que a chalcona A1 também apresentou citotoxicidade de forma dependente do tempo e da concentração, porém com CI50 mais elevada em comparação às linhagens leucêmicas. Para avaliar a seletividade do composto para células tumorais, a chalcona foi incubada com fibroblastos humanos de medula óssea (JMA) e com células mononucleadas de indivíduos saudáveis. A chalcona A1 não reduziu significativamente a viabilidade celular em ambos os modelos. A apoptose foi confirmada pela observação morfológica após coloração com brometo de etídio e laranja de acridina, pelo ensaio de fragmentação do DNA e por citometria de fluxo pelo método da Anexina V. A investigação do efeito no ciclo celular mostrou que o composto A1 causou bloqueio significativo em diferentes fases nas seis linhagens avaliadas. A fim de investigar os mecanismos pelos quais o composto causou morte celular, investigou-se o efeito da chalcona A1 no potencial mitocondrial e na expressão das proteínas survivina e KI-67 nas células K562, Jurkat e Kasumi, e das proteínas Bcl-2, Bax, FasR, AIF e caspase-3 nas linhagens K562 e Jurkat. Os resultados demonstraram que o composto reduziu o potencial mitocondrial, diminuiu a expressão da proteína antiapoptótica Bcl-2 e aumentou a expressão da proteína pró-apoptótica Bax, sugerindo que o mecanismo de morte celular envolve a via intrínseca. Na linhagem Jurkat, foi observado também aumento de FasR, o que indica o envolvimento da via extrínseca. Além disso, o mecanismo de ação da chalcona A1 envolve o aumento da expressão da caspase-3 e a diminuição da expressão da proteína antiapoptótica survivina e do marcador de proliferação celular KI-67. Em experimentos ex vivo, a chalcona A1 reduziu a viabilidade de células mononucleadas de oito pacientes portadores de diferentes tipos de leucemia aguda, o que confirma os resultados de citotoxicidade encontrados in vitro <br>

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