Orientador: José Dirceu Ribeiro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T16:03:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vervloet_LeticiaAlves_D.pdf: 6473435 bytes, checksum: 49bac4286557616573190a6494802cbb (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Objetivo: Determinar a prevalência e as características da pneumonia adquirida na comunidade (PAC) e derrames pleurais parapneumônicos (DPP) relacionados a Mycoplasma pneumoniae em um grupo de crianças e adolescentes. Métodos: Estudo observacional retrospectivo com 121 pacientes hospitalizados com PAC e DPP em um hospital de referência terciária, entre 2000 e 2008, divididos em seis grupos (G1 a G6) segundo o agente etiológico: M. pneumoniae com ou sem coinfecção, em 44 pacientes; outros agentes que não M. pneumoniae, em 77; M. pneumoniae sem coinfecção, em 34; Streptococcus pneumoniae, em 36; Staphylococcus aureus, em 34; e coinfecção M. pneumoniae/S. pneumoniae, em 9, respectivamente. Resultados: Na comparação entre os grupos, G1 apresentou frequências maiores em gênero feminino, tosse seca, uso prévio de beta-lactâmicos e maior tempo de evolução, assim como menor uso de assistência ventilatória e de drenagem torácica que G2, enquanto G3 teve maiores frequências em uso prévio de beta-lactâmicos e tosse seca, maior tempo de evolução e menor frequência de uso de drenos torácicos que G4 e G5, ao passo que G3 teve média de idade maior e menor frequência de náuseas/vômitos que G4, assim como menor uso de assistência ventilatória que G5. A coinfecção M. pneumoniae/S. pneumoniae aumentou a duração dos sintomas até a admissão. . Conclusões: Nesta amostra, a prevalência de PAC e DPP por M. pneumoniae foi de 12,75%, com evolução mais prolongada e quadro mais leves, que por outros microorganismos. Nossos dados sugerem a necessidade de uma maior diligência na investigação de M. pneumoniae em crianças e adolescentes com PAC e DPP em nosso meio / Abstract: Objective: To determine the prevalence and the characteristics of Mycoplasma pneumoniae-related community-acquired pneumonia (CAP) and parapneumonic pleural effusion (PPE) in children and adolescents. Methods: This was a retrospective observational study involving 121 patients with CAP/PPE hospitalized in a tertiary referral hospital between 2000 and 2008, divided into six groups according to the etiologic agent (G1 to G6, respectively): M. pneumoniae with or without co-infection, in 44 patients (group 1); etiologic agents other than M. pneumoniae, in 77 (group 2); M. pneumoniae without co-infection, in 34 (group 3); Streptococcus pneumoniae, in 34 (group 4); Staphylococcus aureus, in 34 (group 5); and M. pneumoniae/S. pneumoniae co-infection, in 9 (group 6). Results: In comparison with group 2, group 1 showed higher frequencies of females, dry cough, and previous use of beta-lactam antibiotics; longer disease evolution; and lower frequencies of use of mechanical ventilation and chest tube drainage. In comparison with groups 4 and 5, group 3 showed higher frequencies of previous use of beta-lactam antibiotics and dry cough; longer disease evolution; a lower frequency of use of chest tube drainage; a higher mean age and a lower frequency of nausea/vomiting (versus group 4 only); and a lower frequency of use of mechanical ventilation (versus group 5 only). M. pneumoniae/S. pneumoniae co-infection increased the duration of symptoms prior to admission. Conclusions: In this sample, the prevalence of M. pneumoniae-related CAP/PPE was 12.75%, with evolution longer and more prolonged course than other microorganisms. Our data suggest that M. pneumoniae-related CAP and PPE in children and adolescents should be more thoroughly investigated in Brazil / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Os efeitos clastogênicos causados por diferentes cepas Ureaplasma urealyticum e por cepas do gênero Mycoplasma foram avaliados \"in vitro\", utilizando-se culturas temporárias de linfócitos humanos. Inibições, total ou parcial da mitose foram produzidos pelos sorotipos II, III e X de Ureaplasma urealyticum, independentemente das concentrações dos inóculos de micoplasmas utilizados. Já os sorotipos I, VII e XII do Ureaplasma urealyticum, a cepa Mycoplasma hominis ATCC 23114 e a cepa Mycoplasma pneumoniae foram influenciadas pela concentração dos micoplasmas. Mitoses alteradas foram observadas nas cepas Ureaplasma urealyticum VIII, IX e X. A maior frequência de alterações foram de gaps cromatídicos e quebras cromatídicas. Os resultados obtidos neste modelo experimental \"in vitro\" revelaram haver comportamentos diferentes entre os vários sorotipos de Ureaplasma urealyticum e entre espécies do gênero Mycoplasma. Essas diferenças observadas, \"in vitro\", poderão de alguma forma contribuir para melhor compreensão dos efeitos da colonização desses microorganismos em humanos. / Clastogenic effect caused by different strains of Ureaplasma urealyticum and by strains of Mycoplasma sp were evaluated in vitro by using temporary cultures of human linphocytes. Mitotic inhibitions, either total or partial were produced by serotypes lI, III and X of Ureaplasma urealyticum, indenpendently of the concentration of microorganisms used. Otherwise, the kind of clastogenic effect of Ureaplasma urealyticum of serotypes I, VII and XII, Mycoplasma hominis strain 23144 and Mycoplasma pneumoniae varied with the different concentrations of these mycoplasmas used in the test. Mitotic alterations were observed in Ureaplasma urealyticum of sorotypes VII, IX and X. Cromatidic gaps and cromatidic rupture were the most frequent kind of alterations evidenced. The results obtained in the present in vitro experiment revealed that the occurence of different kind of clastogenic effect depends on the serotypes of Ureaplasma urealyticum and on the strains of Mycoplasma sp. The variability of the effect obtained will contribute to the better comprehension of the effects of colonization of these microorganisms in humans and stimulate future in vivo investigation.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_silvana_beutinger_marchioro.pdf: 842737 bytes, checksum: 032d940f684cacf69ead32db6268d1cc (MD5) Previous issue date: 2013-06-27 / Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) is the causative agent of enzootic pneumonia (EP) in pigs, a chronic respiratory disease characterized by low mortality and high morbidity, responsible by significant economic losses in the pig industry worldwide. M. hyopneumoniae infection can be controlled by optimizing management practices and housing conditions, as well as with the use of antibiotics and vaccination. Commercial vaccines consist of adjuvanted inactivated whole cell preparations, and are frequently used worldwide in countries with an intensive pig production. The currently available vaccines are beneficial from an economic point of view, but they do not provide a sustainable control of the disease. They cannot prevent colonization of M. hyopneumoniae in the respiratory tract, and do not significantly reduce the transmission of the pathogen. Also, little is known about the exact mechanisms of the partial protection they induce. In this context, the general aims of this thesis were to assess the mode of the action of an existing commercial vaccine on the one hand and to develop and evaluate a new recombinant vaccine against M. hyopneumoniae on the other hand, looking for more effective strategies for disease control. For development of the recombinant vaccine a chimeric protein was developed and evaluated. This protein was based on proteins known to play a role in the adhesion and that were able to induce an immune response and a partial protection against M. hyopneumoniae infection when evaluated individually. From the studies described in this thesis, it can be concluded that intramuscular vaccination with an adjuvanted bacterin is able to stimulate both systemic and local immune responses, and that the new recombinant vaccine developed against EP might be promises strategies to control the disease. / Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) é o agente etiológico da pneumonia enzoótica (EP) suína, uma doença crônica de baixa mortalidade e alta morbidade, responsável por perdas econômicas significativas na cadeia suinícola em todo o mundo. A infecção por M. hyopneumoniae pode ser controlada pela otimização das práticas de manejo e das condições de alojamento, bem como com o uso de antibióticos e vacinação. Vacinas comerciais consistem em preparações de células inteiras inativadas do agente, fornecidas com adjuvante, e são frequentemente utilizadas em todo o mundo. As vacinas disponíveis atualmente são benéficas do ponto de vista econômico, mas elas não fornecem um controle sustentável da doença. Elas não previnem a colonização do M. hyopneumoniae no trato respiratório, e não reduzem significativamente a transmissão do agente patogênico. Além disso, pouco se sabe sobre os mecanismos exatos envolvidos na proteção que elas induzem. Desta forma, os objetivos gerais desta tese foram avaliar o modo de ação de uma vacina comercial existente e desenvolver e avaliar uma nova vacina recombinante contra M. hyopneumoniae, buscando estratégias mais eficazes para o controle da doença. Para o desenvolvimento desta vacina recombinante uma proteína quimérica foi produzida, baseada em proteínas envolvidas na adesão do agente e que foram capazes de induzir uma resposta imune e uma proteção parcial contra a infecção por M. hyopneumoniae quando avaliadas individualmente, e avaliada seu potencial protetor em teste de infecção experimental de suínos. A partir dos estudos descritos nesta tese, pode-se concluir que a vacinação intramuscular com uma bacterina comercial é capaz de estimular tanto uma resposta imune sistêmica quanto local, e que a nova vacina recombinante desenvolvida contra a EP pode ser considerada uma estratégia promissora para o controle da doença.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_clarice_brinck_brum.pdf: 480743 bytes, checksum: f4748bb0a3a428b8f8c66eba6a7b2602 (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of swine enzootic pneumonia (EP), one of the most important respiratory diseases which affect swine worldwide. This disease is characterized by retarded development, especially in animals in the growing and finishing phase, causing significant economic losses in the herd. The presumptive diagnostic is based on clinical signs and lesions, however, laboratory tests are needed for a conclusive diagnosis of disease. Although the culture of the agent is considered the gold standard, it is not used routinely because of the slow growth of the bacterium and interference by other mycoplasmas. Therefore, there is a need for development of more sensitive and specific diagnostic methods for this disease. This study aimed the standardization and validation of an ELISA for detection of antibodies against M. hyopneumoniae. For this, six recombinant proteins of M. hyopneumoniae considered species-specific (P46, P95, P97 like, P102AB, Lppt and hypothetical protein 987) were evaluated. They were used as antigen for coating ELISA plates. Each of these proteins was confronted with three sets of pig serum. The sensitivity and specificity obtained for each protein were respectively: P95, 74.3% e 97.6%; P46, 53.7% e 97.6%; Lppt, 28.4% e 97.2%; 987, 27.1% e 96.1%; P102AB, 65.5% e 97.6%; P97 like, 72.6% e 97.2%. Using the set cut-off point, we calculated the positive predictive value, which ranged from 17.4% (for prevalence of 10%) to 99.4% (for prevalence of 90%), and negative predictive value which ranged from 34.5% to 99.5% depending on the prevalence of disease in a given area. These data show that the proteins P95, P46, P97 and P102AB like are potential targets to be use in diagnostic tests to detect antibodies against M. hyopneumoniae. / O Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da Pneumonia Enzoótica Suína (PES), uma das principais doenças respiratórias que acomete suínos no mundo. Esta doença é caracterizada por retardo no desenvolvimento, principalmente em animais em fase de crescimento e terminação, ocasionando perdas econômicas significativas no rebanho. O diagnóstico presuntivo é baseado em sinais clínicos e na presença de lesões, no entanto, testes laboratoriais são necessários para o diagnóstico conclusivo da doença. Embora o cultivo do agente seja considerado o padrão ouro, o mesmo não é usado como rotina, devido ao crescimento extremamente lento deste agente e a interferência por outros micoplasmas. Desta forma, há a necessidade do desenvolvimento de métodos de diagnósticos mais sensíveis e específicos para esta doença. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um ELISA indireto para a detecção de anticorpos contra M. hyopneumoniae. Para isso, foram testadas individualmente seis proteínas recombinantes de M. hyopneumoniae expressas em E. coli, consideradas espécie-específica (P46, P95, P97 like, P102AB, Lppt e proteína hipotética 987), utilizadas como antígeno na sensibilização de placas de ELISA. Cada uma destas proteínas foi confrontada com 3 categorias de soros de suínos. A sensibilidade e especificidade obtida para cada uma das proteínas foram respectivamente as seguintes: P95, 74,3% e 97,6%; P46, 53,7% e 97,6%; Lppt, 28,4% e 97,2%; 987, 27,1% e 96,1%; P102AB, 65,5% e 97,6%; P97 like, 72,6% e 97,2%. Usando o ponto de corte definido, foi calculado o valor preditivo positivo que variou de 17,4% (para prevalências de 10%) a 99,4% (para prevalências de 90%), e o valor preditivo negativo que variou de 34,5% a 99,5% dependendo da prevalência da doença em uma determinada área. Estes dados mostram que proteínas como a P95, P46, P102AB e P97 like são potenciais alvos para uso em testes de diagnóstico para detecção de anticorpos contra M. hyopneumoniae.

A aterosclerose é um processo sistêmico crônico, caracterizado pela presença de lesões, espessamento da parede arterial com acúmulo de lipídeos, e resposta inflamatória e fibroproliferativa. Muitos processos associados à oxidação da LDL, ao aumento de expressão de fatores prótrombóticos, moléculas de adesão próinflamatórias, citocinas e fatores quimiotáticos estão envolvidos na fisiopatologia da doença aterosclerótica. Trabalhos anteriores mostraram a presença de Mycoplasma pneumoniae (Mic) em placas lipídicas vulneráveis, associada à liberação de micropartículas (MPs) capazes de interagir com o ambiente e influenciar o processo aterogênico. Assim, a H&S Ciência e Biotecnologia, desenvolveu o complexo PTCTS que tem em sua composição nanopartículas naturais provenientes de plantas medicinais (PTC) associadas à enzima transialidase (TS) para combater as MPs e o Mic, além de ter efeito antilipemiante e antiaterosclerótico. O presente estudo teve como objetivo verificar os efeitos dos diferentes componentes do PTCTS administrados por via oral em relação à eficácia, toxicidade e mecanismo de ação na terapia antiaterosclerótica em coelhos hipercolesterolêmicos. Foram estudados coelhos da raça Nova Zelândia separados randomicamente em 6 grupos de tratamento: Controle Negativo (CNeg n=6), Controle Positivo (CPos n=6), Partículas orgânicas (PTC n=6), Transialidase (TS n=5), Partículas orgânicas associadas à transialidase (PTCTS n=6), e PTCTS com adição de PDTC (n=6). Os animais foram alimentados com dieta enriquecida com colesterol por doze semanas, exceto o CNeg, e receberam seus respectivos tratamentos durante as últimas seis semanas, concomitantemente à dieta hipercolesterolêmica. Tiveram sangue coletado durante as fases basal, pré e pós tratamento, para avaliação bioquímica do perfil lipídico, transaminases hepáticas e quantificação de MPs associadas a antígenos de Mic e LDLox no soro. Ao fim do experimento, foram sacrificados, e tiveram a aorta colhida em conjunto com o monobloco de órgãos para análises morfométrica, histológica, e imunohistoquímica, de forma a verificarmos os efeitos do PTCTS e seus compostos. O composto PTCTS via oral se mostrou eficaz quanto a eliminação de MPs associadas tanto a antígenos de Mic como de LDLox, e apesar de não ter tido os efeitos antiateroscleróticos e antilipemiantes esperados, reduziu não significativamente a área de placa na porção abdominal da aorta, induziu a aorta ao remodelamento positivo, permitindo um fluxo livre mesmo com uma grande área de placa, e evitando assim a obstrução do vaso. Seus componentes, quando administrados isoladamente tiveram efeitos parciais, as PTC sobre o remodelamento do vaso e redução de placa na aorta abdominal, e a TS sobre a redução do colesterol total, comprovando que a associação de ambos possui atividade mais completa e balanceada. A adição do PDTC ao complexo levou ao efeito oposto, ao inibir a atividade de eliminação de MPs apresentada pelo PTCTS, bem como ao induzir remodelamento negativo dos vasos. Nenhum dos componentes apresentou toxicidade nos órgãos estudados. Os dados encontrados neste trabalho experimental reforçam a teoria infecciosa na patogenia da aterosclerose, bem como a de que MPs originadas de tais microorganismos possam estar induzindo a produção de radicais livres e influenciando a oxidação de lípides, de forma que a remoção de tais patógenos do sangue circulante pode ser um novo caminho terapêutico no tratamento da aterosclerose / Atherosclerosis is a chronic systemic process, characterized by lesions, thickening of the arterial wall with accumulation of lipids, inflammatory and fibroproliferative response. Many processes associated with the oxidation of LDL, increase expression of prothrombotic factors, adhesion molecules, proinflammatory cytokines and chemotactic factors are involved in the pathophysiology of atherosclerosis. Previous works have shown the presence of Mycoplasma pneumoniae (Mic) in vulnerable lipid plaques, associated with the release of microparticles (MPs) able to interact with the environment and influence the atherogenic process. Thus, H&S Science and Biotechnology developed the PTCTS complex, which has in its composition natural nanoparticles from medicinal plants (PTC) associated with transialidase enzyme (TS), to combat MPs and Mic, that together have antilipemiante and antiaterosclerotic effects. This study aimed to determine the effects of different components of PTCTS administered orally regarding the efficacy, toxicity and mechanism of action in antiatherosclerotic therapy in hypercholesterolemic rabbits. It was studied White New Zealand rabbits separated randomly into six treatment groups: Negative Control (CNeg n=6), Positive Control (CPos n=6), organic particles (PTC n=6), transialidase (TS n=5) organic particles attached to transialidase (PTCTS n=6) and PTCTS with addition of PDTC (n=6). The animals were fed with a diet enriched with cholesterol for twelve weeks, except the CNeg, and received their treatments during the last six weeks, concurrently with hypercholesterolemic diet. Blood samples were taken during the baseline, pre and post treatment phases for biochemical evaluation of the lipid profile, liver transaminases and quantification of MPs associated with Mic antigens and oxLDL in the serum. At the end of the experiment they were sacrificed and the aorta was harvested together with the monoblock of organs for morphometric analysis, histology and immunohistochemistry, so we could check the effects of PTCTS and their compounds. The compound PTCTS orally is effective at removing MPs associated with both Mic and oxLDL antigens, and despite not having had the expected antiatherosclerotic and antilipemiantes effects, reduced not significantly plaque area in the abdominal portion of aorta, and induced its ascendant portion to positive remodeling, allowing a free flow even with large plate area, avoiding obstruction of the vessel. Its components when administered alone had partial effects, PTC on the remodeling of the vessel and plaque reduction in the abdominal aorta, and TS on the reduction of total cholesterol, proving that the combination of both has more complete and balanced activity. The addition of PDTC to the complex led to the opposite effect to inhibit MPs scavenging activity displayed by PTCTS as well as to induce negative remodeling of vessels. None of the components presented toxicity in the organs studied. The data found in experimental work reinforce the infectious theory on the pathogenesis of atherosclerosis as well as that originating MPs such microorganisms may be inducing the production of free radicals and oxidation of lipids, so that the removal of such pathogens from circulating blood may be a new therapeutic approach in the treatment of atherosclerosis

Fatores de risco clássicos descritos como associados ao desenvolvimento da aterosclerose nem sempre conseguem explicar uma variabilidade da evolução da doença entre um indivíduo e outro. Evidências consistentes mostram que a inflamação exerce papel crucial na patogenia da aterosclerose. Recentemente, a infecção por alguns agentes, principalmente a C. pneumoniae, tem sido progressivamente aventada como possível fator colaborador no processo de aterogênese. O Mycoplasma pneumoniae, bactéria que utiliza colesterol para sua proliferação, foi descrito no interior de placas gordurosas humanas, conjuntamente com a C.pneumoniae. Objetivo - O presente estudo tem como objetivo verificar se antígenos dos agentes infecciosos M. pneumoniae e C. pneumoniae estão presentes na parede das artérias aortas normais dos coelhos, animal que tem sido freqüentemente utilizado no estudo da aterosclerose, e se a introdução de dieta rica em colesterol leva a proliferação desses microorganismos concomitante com o desenvolvimento da placa aterosclerótica e de inflamação. Material e Métodos - Foram estudados 39 coelhos da raça Nova Zelândia, divididos em três grupos conforme a alimentação: Grupo A - dieta normal , Grupo B - dieta com 1% de colesterol por 8 semanas e Grupo C - dieta com 1% de colesterol por 12 semanas. O colesterol total e frações foram dosados bioquimicamente, após sacrifício dos animais. Avaliou-se macroscopicamente a quantidade de placas de gordura na superfície da aorta através da coloração pelo Sudan IV e microscopicamente dois segmentos transversais: um torácico e um abdominal os quais foram submetidos a reações de Imunohistoquímica para antígenos infecciosos. Resultados - Antígenos da C. pneumoniae e M. pneumoniae estiveram presentes em todos os animais estudados, porém em quantidades progressivamente maiores nos grupos A, B e C. Houve forte correlação positiva entre a quantidade de antígenos infecciosos e espessura da camada íntima, inflamação e quantidade de gordura, à histologia tanto no segmento torácico quanto no abdominal. Houve correlação negativa entre perímetro do vaso e tamanho das placas no segmento torácico, cujas placas apresentaram maior porcentagem de fibrose comparadas com o segmento abdominal, indicando que as placas dessa região apresentam mais características evolutivas para placa estável, ou seja, remodelamento negativo do vaso e capa de fibrose. A intensidade da inflamação tanto na adventícia quanto na íntima se correlacionou positivamente à quantidade de ambos os patógenos reforçando a hipótese de que esses patógenos estão influenciando no desencadeamento da inflamação e desenvolvimento de aterosclerose. Os níveis plasmáticos de colesterol total e suas frações também se correlacionaram positivamente com os agentes infecciosos. Em conclusão - A alimentação rica em colesterol levou a aumento da intensidade de antígenos de Mycoplasma pneumoniae e C. pneumoniae presentes na íntima da aorta de coelhos, em correlação com aumento da espessura intimal e inflamação na parede do vaso, favorecendo de forma intensa a hipótese de que esses agentes têm papel importante na aterogênese. A presença desses microorganismos em pequena quantidade nos animais controles reforça a idéia de que esses microorganismos são habitantes usuais de mamíferos e que fatores de risco tais como o colesterol induzem sua proliferação e o desenvolvimento da aterosclerose / Classical risk factors described to be associated with the development of atherosclerosis do not completely explain the variability of the disease occurring among the individuals. Consistent evidences show that inflammation exerts a fundamental role in the pathogenesis and severity of atherosclerosis. Recentently, some infectious agents, specially the Chlamydophila pneumoniae (C.pneumoniae), have progressively been claimed as possible factor acting in the progression of atherosclerosis. Mycoplasma pneumoniae (M.pneumoniae), a bacterium that needs cholesterol for proliferation, has been described in human fat plaques, in conjunction with C.pneumoniae. Objective - The present study has the objective of analyzing if M. pneumoniae and C. pneumoniae antigens are present at the rabbit aorta arterial walls, as the rabbit is an animal model frequently used in studies of atherosclerosis; and if the cholesterol enriched diet may cause proliferation of these microorganisms concomitantly with the development of atherosclerotic plaques and inflammation. Material and Methods - 39 aortas from New Zealand rabbits divided in three groups according to the diet were studied: Group A -normal dieta, Group B - 1% cholesterol enriched diet for 8 weeks and Group C - 1% cholesterol enriched diet for 12 weeks. The serum levels of total and fractions of cholesterol were biochemically measured after animals killed. A macroscopic study of the percentage area occupied by fat at the intimal aorta surface was performed, using the Sudan IV stain. A microscopic study was performed in two transversal segments: a thoracic and an abdominal one, which were submitted to immunohistochemistry for detection of these infectious agents. Results - C. pneumoniae and M. pneumoniae Ags were present in all studied animals, however in progressively higher amounts in groups A, B and C. There was a strong positive correlation between microscopic amounts of infectious antigens and intimal thickness, inflammation and intraplaque fat, both at the thoracic and abdominal segments. There was a negative correlation between vessel perimeter and plaque area at the thoracic segment, where the plaques presented higher percentage of fibrosis compared with the abdominal segment, suggesting that the thoracic region plaques have characteristics for progression to estabilization: negative remodeling of the vessel and fibrous cap. The quantity of Inflammation at both intima and adventitia correlated positively with these infectious agents, re-inforcing the hypothesis that infectious antigens are inducing inflammation and development of atherosclerosis. Serum levels of total cholesterol and their fractions also positively correlated with the amount of infectious antigens. In conclusion - A rich cholesterol diet caused an increase of M. pneumoniae and C.pneumoniae antigens at intima of rabbit aortas, in strong positive correlation with intimal thickness and inflammation of the aorta wall, favoring the hypothesis that these infectious agents have important role in atherogenesis. The presence of small amount of these microorganisms\' antigens at the controls re-inforces the Idea that these microorganisms are usual inhabitants of mammals and that the risk factors such as cholesterol induce their proliferation and acceleration of atherosclerogenesis.

Os ratos Wistar são amplamente empregados como modelo animal na pesquisa biomédica e o controle sanitário dos biotérios é essencial para garantir a qualidade dos experimentos. O objetivo do estudo foi a caracterização do estado sanitário da colônia de ratos Wistar em sistema de criação convencional e para tanto determinar as bactérias, fungos, virus e parasitos, bem como caracterizar as lesões anatomopatológicas do sistema respiratório. Foram utilizados 273 ratos (N), machos (M) e fêmeas (F), das faixas etárias 4, 8, 12, 16 a 20 semanas e entre 12 a 18 meses, para as determinações de peso e condição corpórea (N=273, 140M, 133F); avaliação bacteriológica de orofaringe, mucosa intestinal e lavado traqueobrônquico (N=40, 20M, 20F); determinação de anticorpos para vírus e bactérias (N=20, 10M, 10F); exame parasitológico (N=60, 30M, 30F); identificação molecular de Mycoplasma pulmonis em amostras de pulmão (N=25, 15M, 10F), e caracterização anatomopatológica da cavidade nasal, orofaringe, laringe, traqueia e pulmão (N=106, 53M, 53F). Foram realizadas ainda avaliações microbiológicas das salas dos ratos em três períodos com isolamento de Micrococcus spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Aspergillus spp. e Penicillium spp. O peso se mostrou homogêneo dentro da faixa etária e gênero, com apenas sete animais magros (2,56%) e nove em sobrepeso (3,30%). Não foram isoladas bactérias patogênicas na orofaringe, mucosa intestinal e lavado traqueobrônquico por cultivo. Mycoplasma pulmonis foi determinado em 72% das amostras pulmonares e em 100% dos soros testados. Em 35% foram detectados anticorpos para Reovirus tipo III e em 100% para bacilos associados ao epitélio respiratório ciliado. Syphacia muris foi diagnosticada em 91,67%, Eimeria spp. em 3,33% e Entamoeba muris em 1,67%. Lesões relacionadas a infecção por agentes exógenos foram observadas em cavidade nasal e na orofaringe, laringe e traqueia a partir da 4 semanas de idade e, em pulmão desde as 12 semanas, com aumento de frequência de ocorrência e do grau de progressão, com o avançar da idade, nos vários segmentos estudados. Concluímos que a caracterização do estado sanitário dos ratos permite conhecer as particularidades do modelo biológico utilizado e compor base de dados para auxiliar no desenho e na interpretação experimental dos pesquisadores, além de garantir uma base para o programa de monitorização sanitária de biotérios em condições similares / The Wistar rats are widely used as an animal model in biomedical research and the health monitoring of animal facilities is essential to ensure the experiments quality. The aim of this study was to characterize the Wistar rats colony’s health status in a conventional breeding facility, to determine both bacteria, fungi, viruses and parasites, as well as characterize the anatomopathological lesions of the respiratory system. 273 rats (N) were used, males (M) and females (F), ages 4, 8, 12, 16 and 20 weeks, and between 12 to 18 months, for weight and body condition determination (N=273, 140M,133F); bacteriological evaluation of the oropharynx, intestinal mucosa and tracheobronchial lavage (N=40, 20M, 20F); antibodies to viruses and bacteria determination (10M, 10F); parasite examination (N=60, 30M, 30F); molecular identification of Mycoplasma pulmonis in lung samples (N=25, 15M, 10F) and histopathological characterization of the nasal cavity, oropharynx, larynx, trachea and lung (N=106, 53M, 53F). Microbiological evaluations of the rats rooms were made in three periods with isolation of Micrococcus spp., Staphylococcus spp., Bacillus spp., Aspergillus spp. and Penicillium spp. Weight proved to be homogeneous within age and gender, with only seven lean animals (2.56%) and nine overweight (3.30%). Pathogenic bacteria weren’t isolated by cultivation in the oropharynx, intestinal mucosa and tracheobronchial lavage. Mycoplasma pulmonis was determined in 72% of lung samples and in 100% of tested serum. In 35% antibodies were detected to Reovirus type III and 100% for cilia-associated respiratory bacillus. Syphacia muris was diagnosed in 91.67%, Eimeria spp. in 3.33%, and Entamoeba muris in 1.67%. Lesions related to infection by exogenous agents were observed in the nasal cavity and oropharynx, larynx and trachea from the 4 weeks of age, and lungs from 12 weeks, with an increase of occurrence frequency and degree of progression, with advancing age, in the various studied segments. We conclude that the characterization of rats health status allows us to know the particularities of the animal model used, and compose a database to assist in the design and experimental interpretation of researchers, as well as ensure a basis for the health monitoring program of breeding and research facilities in similar conditions

Das hochadaptierte, zellwandlose Bakterium Mycoplasma pneumoniae gehört zu den häufigsten Erregern von ambulant erworbenen Pneumonien. Während den alle 3-7 Jahre auftretenden Epidemien könnten gefährdete Personengruppen bei Verfügbarkeit einer effektiven Vakzinierung vor einer Infektion geschützt werden. Ziel dieser Arbeit war die Erarbeitung von Grundlagen zum Aufbau einer schützenden Immunantwort durch Immunisierung mit rekombinant hergestellten Teilbereichen verschiedener Adhärenzproteine von M. pneumoniae. Da die bereits bekannten Adhäsine des Erregers einerseits unverzichtbare Virulenzfaktoren darstellen und andererseits als dominante Immunogene des Bakteriums beschrieben wurden, war die Feincharakterisierung dieser Proteine im Hinblick auf ihre Eignung als Vakzinekandidat Ausgangspunkt der Untersuchungen. Definierte Teilbereiche des Hauptadhäsins P1 und weiterer adhärenzassoziierter Proteine wurden rekombinant hergestellt und auf ihre Antigenität qualitativ und quantitativ mit Seren experimentell infizierter Tiere und Seren von Patienten mit bestätigter M. pneumoniae-Infektion geprüft. Dabei gingen der C-terminale Bereich des P1-Adhäsins (RP14; AS 1287-1518) und das Protein P30 (RP30; AS 17-274) als hoch antigene Protein(regionen) hervor. Die Oberflächenexposition beider Proteinbereiche wurde experimentell bestätigt. Parallel dazu sollte der Einfluss der monospezifischen Seren gegen die rekombinanten Proteine auf die Adhärenz von M. pneumoniae an verschiedene Zelllinien bewertet werden. Nach Entwicklung eines quantitativen und schnell durchzuführenden in vitro Adhärenzhemmtests wurde gezeigt, dass Antikörper sowohl gegen RP14 als auch gegen RP30 die Adhärenz des Erregers an humane Zellen signifikant reduzieren. Im Hinblick auf die Beeinflussung von mehr als einer an der Adhärenz beteiligten Struktur wurden beide Adhäsinregionen in einem Hybridprotein vereinigt, wodurch die adhärenzhemmende Wirkung des entsprechenden Serums in vitro mehr als additiv verstärkt werden konnte und dem Effekt des polyspezifischen Serums gegen M. pneumoniae entspricht. In Immunisierungs- und Infektionsversuchen mit dem Hybridprotein konnte über eine neu etablierte sehr sensitive real-time PCR basierend auf einer Multicopy-Targetsequenz in M. pneumoniae jedoch nur in einem Teil der Versuchstiere eine signifikante Hemmung der Kolonisierung des Respirationstraktes mit dem Erreger nachgewiesen werden. Eine Steigerung der humoralen Immunantwort durch Zugabe des mukosalen Adjuvans MALP-2 konnte nicht ausreichend belegt werden. Dagegen wurde durch Immunisierung auf intranasalem Wege eine signifikante Erhöhung des sekretorischen IgA-Titers in der BAL auf das Vierfache erreicht. Um einen stabil hohen sekretorischen Antikörperspiegel im Tiermodell zu erreichen, sind weitere Optimierungen des Immunisierungsschemas notwendig. Der Einsatz des Hybridproteins HP14/30, bestehend aus mehreren immunogenen und funktionalen Adhäsinbereichen, hat sich als sehr vielsprechend zur Entwicklung einer effektiven Vakzinierung von Risikopopulationen zur Prophylaxe von Infektionen mit M. pneumoniae erwiesen.

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