El nematodo de vida libre Caenorhabditis elegans es un organismo modelo para el estudio del sistema nervioso y enfermedades humanas. Este nematodo del suelo ofrece un gran potencial para análisis genéticos, en parte debido a su rápido ciclo de vida (3-días), pequeño tamaño (1,5 mm de largo) y fácil cultivo en el laboratorio.Progresos sustanciales en la identificación de genes que codifican para un gran número de proteínas responsables de la liberación de neurotransmisores, la detección postsináptica y las señales corriente abajo, han avanzado nuestro entendimiento de la mecanística de cómo las neuronas se comunican he interactúan. Caenorhabditis elegans es también un valioso modelo para el estudio de agentes antihelmínticos relacionados al sistema nervioso. Los receptores “Cys-loop” musculares de nematodos son de importancia clínica porque son blancos de drogas antihelmínticas. Los nematodos parásitos causan sustanciales muertes y morbidez en humanos y pérdidas en el ganado y animales domésticos. C. elegans es entonces una valiosa plataforma para el estudio de blancos antihelmínticos porque comparte características fisiológicas y farmacológicas con los nematodos de vida parasitaria, y es sensible a la mayoría de las drogas antihelmínticas. También ha emergido como un organismo modelo útil para el estudio de enfermedades neuromusculares humanas y testeo de drogas. En este trabajo de Tesis nosotros exploramos a diferentes niveles los receptores involucrados en la coordinación de la locomoción de los gusanos. En C. elegans los músculos de la pared del cuerpo reciben innervación de las neuronas motoras colinérgicas (excitatorias) y GABAérgicas (inhibitorias). La acetilcolina (ACh) liberada desde las neuronas motoras estimula la contracción muscular sobre un lado del cuerpo, y simultáneamente activa una neurona motora inhibitoria que se proyecta hacia el lado opuesto del cuerpo y libera GABA, el cual relaja los músculos. Debido a que C. elegans contiene un receptor de GABA y dos tipos farmacológicamente diferentes de receptores de ACh (AChR), el AChR sensible a levamisol (L-AChR) y el AChR sensible a nicotina (N-AChR), decidimos dividir este trabajo en dos capítulos para una lectura más conveniente. En el Capítulo I, exploramos los AChRs. El AChR es un miembro de la familia de receptores “Cys-loop”, la cual media la transmisión sináptica rápida en vertebrados e invertebrados. AChR pueden ensamblarse de cinco subunidades tipo-α idénticas ‒ formando receptores homoméricos ‒ como el receptor de vertebrados α7 o el N-AChR de C. elegans (ACR-16) o de diferentes subunidades α y no-α formando receptores heteroméricos, como los nicotínicos musculares de vertebrados y los L-AChRs musculares de nematodos. El músculo de C. elegans contiene siete diferentes subunidades de AChRs, cinco de las cuales han sido mostradas como componentes del L-AChR adulto. Para dilucidar la razón de tal diversidad de subunidades, exploramos sus roles funcionales en células musculares de la Larva 1 (L1). Por medio de ensayos de canal único y corrientes macroscópicas demostramos que las subunidades tipo-α UNC-38 y UNC-63 como la no-α UNC-29 son requeridas para L-AChRs funcionales. Asimismo exploramos en detalle la contribución de las subunidad tipo-α LEV-8 y ACR-8. Nuestro estudio revela que la subunidad LEV-8 es un componente del L-AChR nativo en L1 pero se comporta como una subunidad no esencial. Esta juega un rol clave en el mantenimiento de una baja velocidad y extendido de la desensibilización de los L-AChRs. También mostramos que en ausencia de la subunidad tipo-α ACR-8, la propiedades de los canales de L-AChRs no son modificadas, por lo tanto indicando que ACR-8 no es un componente del L-AChR en L1. Este estudio revela que las células L1 expresan un tipo principal de L-AChR compuesto de cinco diferentes subunidades: UNC-38, UNC-63, UNC-29, LEV-1, y LEV-8. El análisis de una doble mutante nula lev-8;acr-8, la cual muestra un fenotipo descoordinado y es resistente a levamisol, revela que ACR-8 puede reemplazar a LEV-8 en su ausencia, por lo tanto atribuyéndosele un rol a esta subunidad. En el Capítulo II, exploramos el UNC-49R. Los canales de cloro activados por GABA juegan un importante rol inhibitorio en el sistema nervioso de vertebrados e invertebrados. El receptor muscular de GABA de C. elegans está codificado por el gen unc-49, el cual es traducido en tres subunidades: UNC-49A, UNC-49B y UNC-49C. Ha sido mostrado que en el estado adulto de C. elegans el receptor de GABA está compuesto de las subunidades B y C. Los UNC-49Rs comparten superposiciones estructurales y farmacológicas con los receptores GABAA de mamífero en algunos aspectos y difieren grandemente en otros. Estas diferencias podrían ser explotadas en el diseño de drogas antiparasíticas. Sin embargo, la información sobre las propiedades funcionales de los receptores de nematodos es todavía escasa. Por medio de ensayos de corrientes macroscópicas y de canal único desciframos como los receptores de GABA de células musculares al estadio L1 de C. elegans son activados y modulados por agonistas y agentes antihelmínticos. Mostramos que muscimol, el cual es un agonista selectivo de los GABAARs, y piperazina, un antihelmíntico ampliamente utilizado, son ambos capaces de activar al UNC-49R. Los efectos de estas drogas a nivel molecular están relacionados con efectos comportamentales en ensayos de parálisis. Es interesante el hecho de que nuestros resultados revelan que la ivermectina (IVM), la cual es un modulador de muchos receptores “Cys-loop”, inhibe los receptores de GABA como también los L-AChRs de C. elegans, ambos involucrados en el movimiento coordinado. Más aún, la IVM muestra efectos sinérgicos sobre la parálisis inducida por ambos agonistas GABAérgicos y colinérgicos. Por lo tanto, reforzando la importancia de la investigación sobre la combinación de drogas antihelmínticas como estrategia tendiendo a reducir el incremento de problemas de resistencia a drogas. En general, nuestros estudios en el capítulo II proveen nueva información concerniente a la activación de los GABAARs en el músculo de C. elegans. Mostramos por primera vez la actividad de canal único del UNC-49R nativo, como también que muscimol y piperazina son agonistas de este receptor. Nuestro estudio también provee más información sobre los complejos y pleiotrópicos efectos de la IVM. La IVM es un inhibidor de los receptores de GABA y L-AChR. La elucidación de las bases estructurales y mecanísticas bajo las acciones pleiotrópicas de la IVM en la familia de receptores “Cys-loop” puede abrir puertas para el diseño de nuevas drogas. En resumen, en esta Tesis doctoral caracterizamos el L-AChR y la activación del UNC-49R, ambos involucrados en la locomoción coordinada. La caracterización de estos receptores “Cys-loop” en un organismo genéticamente manipulable y modelo de nematodos parásitos provee nuevas avenidas de exploración para drogas selectivas, como también para definir los determinantes estructurales de la activación y modulación en la familia de receptores “Cys-loop”. / The free-living nematode Caenorhabditis elegans is a model organism to study the nervous system and human diseases. This soil nematode offers great potential for genetic analysis, partly because of its rapid (3-day) life cycle, small size (1.5-mm-long adult) and ease of laboratory culture. Substantial progress in the identification of genes encoding for a large number of proteins responsible for neurotransmitter release, postsynaptic detection and downstream signaling has advanced our understanding of the mechanisms by which neurons communicate and interact. Caenorhabditis elegans is also a valuable model for the study of anthelmintic agents related to the nervous system. Nematode muscle Cys-loop receptors are of clinical importance because they are targets of anthelmintic drugs. Nematode parasites cause substantial mortality and morbidity in humans and losses in livestock and domestic animals. C. elegans is a valuable platform for the study of anthelmintic targets because it shares physiological and pharmacological characteristics with parasitic nematodes, and it is sensitive to most anthelmintic drugs. It has also emerged as a useful model organism for studying human neuromuscular diseases and for drug testing. In this Thesis we have explored at different levels the receptors involved in worm coordinated locomotion. In C. elegans, the body wall muscles receive innervations from both cholinergic (excitatory) and GABAergic (inhibitory) motor neurons. Acetylcholine released from motor neurons stimulates muscle contraction on one side of the body, and simultaneously activates an inhibitory motor neuron that projects to the opposite side of the body to release GABA. Since muscle cells contain one GABA and two different pharmacological types of acetylcholine receptors (AChR), the levamisole-sensitive AChR (L-AChR) and the nicotine-sensitive AChR (N-AChR), we decided to divide this work into two chapters for a more suitable lecture. In Chapter I, we explored AChRs. The AChR is a member of the Cys-loop receptor family, which mediates fast synaptic transmission in vertebrates and invertebrates. AChRs can assemble from five identical α-type subunits, forming homomeric receptors, such as vertebrate α7 or C. elegans ACR-16 (N-AChR) or from different α and non-α subunits forming heteromeric receptors, such as vertebrate and C. elegans muscle L-AChRs. Caenorhabditis elegans muscle contains seven different AChR subunits, five of which have been shown to be components of the adult levamisole-sensitive AChRs (L-AChRs). To elucidate the reason for such subunit diversity, we explored their functional roles in the larva 1 (L1) muscle cells. By single-channel and macroscopic current recordings we demonstrate that the -type UNC-38 and UNC-63 as well as the non- UNC-29 subunits are required for functional L-AChRs. We explored in detail the contribution of the α-type LEV-8 subunit. Our study reveals that it is a component of native L1 L-AChRs but behaves as a non-essential subunit. It plays a key role in maintaining a low rate and extent of desensitization of L-AChRs. We also show that in the absence of the α-type ACR-8 subunit, L-AChR channel properties are not modified, thus indicating that ACR-8 is not a component of L1 L-AChRs. This study reveals that L1 muscle cells express a main L-AChR type composed of five different subunits: UNC-38, UNC-63, UNC-29, LEV-1, and LEV-8. The analysis of a double lev-8; acr-8 null mutant, which shows an uncoordinated and levamisole-resistant phenotype, reveals that ACR-8 can replace LEV-8 in its absence, thus attributing a functional role to this subunit. In Chapter II, we have explored the UNC-49R. The GABA-gated chloride channels play an important inhibitory role in the nervous system of vertebrates and invertebrates. The C. elegans muscle GABA receptor is encoded by the unc-49 gene, which is translated into three subunits: UNC-49A, UNC-49B, and UNC-49C. In adult C. elegans the GABA receptor has been shown to be composed of B and C subunits. UNC-49 receptors share significant structural and pharmacological overlap with mammalian GABAA receptors in some aspects and differ greatly in others. These differences could be exploited in parasitic drug design. However, the information about functional properties of nematode receptors is still scarce. By analyzing at the macroscopic and single-channel level we deciphered how GABA receptors from C. elegans L1 muscle cells are activated and modulated by agonists and anthelmintic agents. We show that muscimol, which is a GABAAR selective agonist, and piperazine, a widely used anthelmintic, are both able to activate the UNC-49R. The effects of these drugs at the molecular level are related to behavioral effects in paralysis assays. Interestingly, our results reveal that ivermectin, which has been shown to modulate several Cys-loop receptors, inhibits C. elegans GABA receptors as well as L-AChRs, which are also involved in the coordinated movement. Moreover, ivermectin shows synergistic effects on the paralysis induced by both GABAergic and nicotinic agonists, thus reinforcing the importance of research on anthelmintic drug combinations as a strategy tending to reduce the increasing problem of drug resistance. In general, our study from chapter II provides novel information regarding GABAA receptor activation in C. elegans muscle. It shows for the first time single-channel activity of UNC-49 native receptor, and reveals that muscimol and piperazine, a widely used anthelmintic agent, are agonists. Our study also provides further information about the complex and pleiotropic effects of IVM: IVM is an inhibitor of C. elegans GABAR and levamisole-sensitive AChRs. Elucidation of the structural and mechanistic bases underlying the pleiotropic actions of IVM at the Cys-loop receptor family may open doors for novel drug design. In summary, in this doctoral thesis we characterized the L-AChR and the activation of the UNC-49R, both involved in the coordinated locomotion.The characterization of these Cys-loop receptors in a genetically tractable organism and model of parasitic nematodes provides new avenues of exploration for selective drugs as well as for defining structural determinants of activation and modulation in Cys-loop receptor family.

Se ha estimado la presencia de los nematodos entomopatogenos en Cataluña, evaluando su aparición en función de la situación geográfica, las condiciones climáticas y el tipo de hábitat analizado (cultivo, prado natural y bosque). Se han analizado los factores edaficos, climáticos y culturales que determinan la presencia y persistencia de los nematodos entomopatogenos en los suelos de cultivos. Se han determinado las especies de nematodos entomopatogenos de las familias steinernematidae y heterorhabditidae presentes en Cataluña, valorando los caracteres morfológicos que permiten su diferenciación y estudiando la variabilidad existente entre las diversas cepas de cada especie. Finalmente se ha evaluado la aplicabilidad de los nematodos entomopatogenos en el control de diversos insectos que se desarrollan en hábitats crípticos y en el suelo, analizando algunos aspectos biológicos y ecológicos que determinan la capacidad de infección de los nematodos en los mismos.

En la República Argentina, los conocimientos referentes a este tema son escasos y fragmentarios: Ahmad, (1974), en un relevamiento sobre enemigos naturales realizado en las provincias del centro de nuestro país, solo cita la presencia de nematodos asociados a curculionidos. Teniendo en cuenta todos estos aspectos, y considerando que la explotación agrícola es uno de los pilares mas sobresalientes de la economía argentina, en el presente trabajo se realizo un estudio taxonómico de los nematodos asociados a dos familias de Coleopteros (Curculionidae y Chrysomelidae), analizándose los distintos tipos de asociación existentes entre ellos.

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo / Se realizó un estudio para determinar el estado sanitario de un huerto de manzanos (Malus domestica Borkh.) cultivar Brookfield sobre patrón M26, con alta infestación de nemátodos fitoparásitos, ubicado en la comuna de Las Cabras, Región del Libertador Bernardo O'Higgins, durante la temporada 2010-2011. Se tomaron muestras de suelo y raíces. Los individuos del suelo se extrajeron mediante el método de tamizado y en raíces mediante la incubación de tejidos. La determinación de géneros y especies, indicó la presencia dominante de Pratylenchus, y otros géneros en bajas poblaciones, tales como Mesocriconema, Helicotylenchus, Hemicycliophora, Tricodorus y Xiphinema. La identificación de especies de Pratylenchus spp. se realizó con claves taxonómicas, en base a caracteres morfométricos y morfológicos de la hembra, como la región labial, estilete y estructuras asociadas, intestino medio y recto, sistema excretor y órganos reproductivos, y presencia o ausencia de machos. Las mediciones correspondieron a los índices propuestos por de Man. Se estudiaron además los efectos de dos nematicidas granulares, oxamil (Vydate 10G) y cadusafos (Rugby 10G), en dosis de 30 kg/ha, sobre las poblaciones de nemátodos fitoparásitos, siendo aplicados en dos oportunidades, diciembre de 2010 y abril de 2011.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo , mención Fitotecnia

En un estudio efectuado en plantas enraizadas de vitis vinífera L. var. Chardonnay en macetas, se aplicaron los siguientes tratamientos: compost A, elaborado con residuos de té, guano de pollo y orujo de uva; compost B, elaborado con residuos de té, escobajo y orujo de uva; residuos sólidos de té; orujo de uva y guano seco de pollo. Cada una de estas enmiendas orgánicas fueron aplicadas en cobertera e incorporadas al suelo. Además de estos tratamientos existió un testigo químico (Fenamiphos) y un testigo absoluto. El objetivo de este estudio fue evaluar la eficiencia nematicida de las enmiendas orgánicas sobre Meloidogyne spp. y constatar sus efectos en las variables de crecimiento vegetativo de las plantas. Se estableció un diseño experimental completamente al azar con 11 tratamientos y 6 repeticiones, siendo la unidad experimental una planta de vid. Se determinó la población de nematodos de segundo estado juvenil (estado infestivo) de Meloidogyne spp., la cantidad de nódulos y huevos por gramo de raíz y el índice reproductivo, determinando de esta manera la tasa de reproducción de los nematodos, además se evaluó el peso fresco de la parte aérea y peso fresco de la masa radical. El testigo químico fue el tratamiento que obtuvo menor población final de Meloidogyne spp. y al evaluar la actividad nematicida de las enmiendas orgánicas, el compost A incorporado al suelo, orujo de uva en cobertera y residuos sólidos de té en cobertera obtuvieron índices reproductivos bajos no diferentes estadísticamente del testigo químico. En cuanto al peso fresco de la parte aérea no existieron diferencias significativas. Con respecto a la evaluación del peso fresco de la masa radical el testigo químico presentó el valor más bajo comparado con los tratamientos de compost B en cobertera y residuos sólidos de té en cobertera. / In a study made on rooted plants of vitis vinífera L. Var. Chardonnay in pots, the following treatments were applied: compost A, elaborated from tea residue, chicken manure and grape marc; compost B, elaborated from tea residue, the scrapings of a grape bunch; solid tea residues; grape marc and dry chicken manure. Each of these organic amendments was both applied in cover and incorporated into the soil. Also it there was a chemical control (Fenamiphos) and an absolute control. The aim of this study was to evaluate the nematicidal efficiency of the organic amendments against root-knot nematode Meloidogyne spp. and to check their effects on the variables of the vegetative growth of the plants. Experimental design was completely at random with 11 treatments and 6 replications and the experimental unity was one vine. The population of second stage juveniles (infested state) of Meloidogyne spp. was determined, as well as the quantity of nodules and eggs per gram of root and the reproductive index. In addition fresh weight of the aerial part and of the root mass were measured. The chemical control was the treatment with least final population of Meloidogyne spp. and when compost A, incorporated into the soil, grape marc in cover and solid tea residues, obtained low reproductive index not statistically different from the chemical control. Respect to fresh weight of roots, the chemical control showed the lowest value compared with the treatments of compost B in cover and solid tea residues in cover.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Señala que la neumogastroenteritis verminosa es la principal enfermedad parasitaria en camélidos sudamericanos (CSA), representando aproximadamente el 46% de pérdidas ocasionadas por enfermedades parasitarias en la industria alpaquera, siendo el nematodo Lamanema chavezi uno de los principales agentes etiológicos involucrados. No obstante, los estudios sobre morfología y anatomía de este nematodo son incompletos, a esto se suma la divergencia taxonómica del mismo. Por estos motivos, el presente estudio tuvo por objetivo redescribir morfoanatómicamente a L. chavezi en sus tres estadíos evolutivos; huevo, larva y adulto, empleando las técnicas de microscopía óptica y electrónica de barrido, con el fin de aportar detalles no conocidos que puedan ayudar a conocer aspectos biológicos y relaciones entre los grupos de nematodos afines. Se colectaron estadíos adultos del intestino delgado (duodeno-yeyuno) de alpacas (Vicugna pacos) aplicando el Método de Travassos, y huevos a partir de muestras de heces de animales parasitados mediante la técnica de flotación. Un porcentaje de los huevos se incubaron para la obtención de larvas. El muestreo se realizó en el Camal Municipal del distrito de Nuñoa, provincia de Melgar-Puno, y el procesamiento, la microscopía óptica y la técnica de microscopía electrónica se desarrolló en las instalaciones de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se redescribió a L. chavezi en sus tres estadíos evolutivos, anotando todas sus características. Los principales hallazgos incluyen la presencia del rudimento de corona foliácea, seis papilas cefálicas, características de las crestas del sinlophe, presencia de papilas en la bolsa copulatríz, características de las alas de las espículas, de los huevos y de las larvas L3. La evaluación de todas las características morfoanatómicas de este parásito permitió su caracterización fenotípica, complementa el conocimiento de la morfo anatomía del mismo que pueden ser usados para fines diagnósticos, biológicos y taxonómicos. / Tesis

As-p18 es una de las proteínas más abundantes del fluido que baña a la larva infectiva, L3, dentro de los huevos, particularmente resistentes, del parásito Ascaris suum. Es una proteína que une lípidos, perteneciente al grupo de las FABPs, aunque por presentar características únicas, exclusivas para nematodos, se las asocia a un nuevo subcluster, las nemFABPs. Dentro de las peculiaridades de las nemFABPs se destacan: poseer señal de secreción, estar bajo una estricta regulación de síntesis y poseer una estructura con ciertas características no presentes en otros miembros de la superfamilia. Tomando como base estas diferencias, se ha propuesto que las nemFABPs presentarían funciones específicas, de relevancia en la supervivencia de estos organismos, tal vez involucrando la captación, la distribución y/o el almacenamiento de lípidos. Con la finalidad de contribuir al entendimiento de la estructura y función de este singular grupo de proteínas, se abordaron estudios estructurales y de dinámica, empleando la técnica de Resonancia Magnética Nuclear (RMN). Por otra parte, se determinaron las propiedades de unión a lípidos, haciendo uso de variadas técnicas biofísicas y bioquímicas. Por último se analizó la capacidad de As-p18 para transferir ácidos grasos a membranas modelo y se realizaron ensayos preliminares para caracterizar la interacción con las mismas. El plegamiento tridimensional determinado en solución, mostró que As-p18 presenta componentes estructurales que caracterizan a la familia de FABPs. Dentro de los mismos se encuentran: el barril β, formado por 10 hebras β antiparalelas cubierto por el motivo hélice-vuelta-hélice; la hendidura o gap entre las hebras βD y βE; una cavidad interna que incluye al sitio de unión al ligando y que involucra residuos de aminoácidos polares e hidrofóbicos; y una región portal postulada como lugar de entrada del ligando, delimitada por los loops entre βC-βD y βE-βF, y la α-hélice II. Sin embargo, a pesar de presentar un plegamiento FABP canónico, As-p18 mostró características que la diferencian de cualquier estructura de FABP descrita hasta el presente. Los loops entre las hebras βB y βC, y βG y βH, son notablemente más largos que los presentes en cualquier otra FABP, llegando al doble de longitud para el primer caso. En cuanto a los residuos que estabilizan la unión del ligando, se comprobó la participación de la Arginina 43, que dada su ubicación relativa en la proteína, representa un elemento atípico respecto a lo observado para otras FABPs. Aminoácidos hidrofóbicos protruyentes, que flanquean la región portal, estarían potencialmente involucrados en interacciones proteína-proteína o proteína-membrana. Los estudios de unión a lípidos mediante TLC y cromatografía gaseosa mostraron que la proteína recombinante une de manera exclusiva ácidos grasos (AGs) dentro de un entorno lipídico celular como el provisto por E. coli. Entre los AGs seleccionados del medio por la proteína, se comprobó un enriquecimiento relativo de ácido oleico (18:1). La particular afinidad por este lípido se corroboró mediante experimentos de fluorescencia involucrando el desplazamiento competitivo de una sonda fluorescente. Asimismo, estudios por Calorimetría de Titulación Isotérmica (ITC) y RMN, permitieron establecer un único sitio de unión, de alta afinidad, donde la contribución entálpica fue preponderante. En cuanto a la habilidad de As-p18 para ceder AGs a vesículas o membranas modelo, se ha propuesto que la transferencia de ligandos ocurre mediante interacciones proteína-membrana. En este sentido, se analizaron de forma preliminar qué factores modulan dicha interacción. En resumen, los resultados obtenidos en este trabajo de Tesis contribuirían a la comprensión del rol de As-p18 en los huevos infectivos de A. suum. De manera más general, constituyen el paso inicial para el mejor entendimiento del nuevo subcluster, nemFABP, dentro de la familia de las FABPs.

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El gusano cabezudo, Capnodis tenebrionis (L.) (Coleoptera: Buprestidae), es una importante plaga de cultivos de frutales de hueso y de pepita en zonas mediterráneas. Este trabajo engloba los estudios llevados a cabo para probar la eficacia de los nematodos entomopatógenos en el control de Capnodis tenebrionis.Se realizó el aislamiento de nematodos entomopatógenos de cultivos de frutales de hueso en dos regiones mediterráneas de la Península Ibérica. Se recogieron un total de 630 muestras de suelo (de 210 campos) en Cataluña y 90 muestras de suelo (de 30 campos) en la región de Murcia, resultando un 5,2% y un 20% de suelos positivos para la presencia de nematodos entomopatógenos. Se recogieron diez aislados de steinernemátidos y tres heterorhabdítidos utilizando el método de Galleria mellonella. Las especies aisladas fueron identificadas como Steinernema feltiae y Heterorhabditis bacteriophora.Se evaluó la eficacia de los nematodos entomopatógenos contra la larva neonata de Capnodis tenebrionis. Las cepas de nematodos utilizadas en este ensayo fueron dos Steinernema carpocapsae, una S. feltiae, una S. arenarium y una Heterorhabditis bacteriophora. Las larvas neonatas fueron expuestas a 3 y 48 IJs/cm2 en tubos de ensayo con arena estéril, resultando una mortalidad de 60-91% y 96-100%, respectivamente. A la concentración de 150 IJs/larva, todas las cepas de nematodos fueron muy virulentas. Sin embargo, en el ensayo a baja concentración (10 IJs/larva), S. arenarium resulto ser la cepa más virulenta. Se evaluó también el rango de penetración como un indicador de la capacidad de infección de los nematodos. El porcentaje más elevado fue obtenido por S. arenarium (36%), seguido por H. bacteriophora (30.6%), S. feltiae (23.1%), y S. carpocapsae (20.7%).Se evaluó también la virulencia de cepas contra larvas, pupas y adultos de C. tenebrionis. La mortalidad larvaria varió de 50 a 100%, la de pupas de 0 a 70% y la de adultos de 66.7% a 100%. Los resultados de este estudio sugieren que algunos de los aislados de los nematodos testados pueden ser utilizados para cotrolar C. tenebrionis.Se evaluó la tolerancia al calor, desecación e hipoxia, el efecto de la temperatura en la capacidad de infección y reproducción y la capacidad de migración vertical en columnas de arena de diferentes cepas de nematodos entomopatógenos. Los resultados mostraron diferencias entre especies y dentro de cada una de las especies. Se analizaron todos los factores importantes para la presencia de C. tenebrionis, destacando tres cepas de S. feltiae.Se estudió la susceptibilidad de las larvas de C. tenebrionis en el interior de plántulas. Los nematodos fueron capaces de localizar y matar las larvas de C. tenebrionis en el interior de las raíces. S. feltiae obtuvieron una eficacia de entre 79.68% y 88.24%, las cepas de H. bacteriophora strains entre 71.66 y 76.47%. S. carpocapsae (B14) y S. affine (Gspe3) causaron el menor control de C. tenebrionis larvae (62.03% y 34.76%, respectivamente). Se realizó un ensayo de campo con una cepa de S. feltiae aislada de una larva muerta de C. tenebrionis. Se aplicaron los nematodos por riego superficial e inyección. En ambos tratamientos se utilizó una dosis de 1 millón de IJ por arbol durante 4 u 8 semanas. Se evaluó número, estadio y localización de cada insecto en el tronco del árbol. Steinernema feltiae Bpa redujo la población de C. tenebrionis en ambos tratamientos, con un cotrol entre 88,3% y 97%. No se observaron diferencias significativas entre ambos tratamientos. La persistencia de los nematodos se observó hasta 6 semanas después de haber sido aplicados. Los resultados indican que S. feltiae Bpa es adecuada para el control de C. tenebrionis en cultivos de cerezos. / The Mediterranean flat-headed rootborer, Capnodis tenebrionis (L.) (Coleoptera: Buprestidae), is an economically important pest of stone fruit and seed fruit in Mediterranean areas. This report summarizes the studies carried out to prove the efficacy of entomopathogenic nematodes to control C. tenebrionis:Entomopathogenic were isolated from stone-fruit orchards in two Mediterranean regions of Spain. A total of 630 soil samples from Catalonia and 90 soil samples from Murcia were evaluated resulting in 5.2% and 20% of the soils testing positive for nematodes, respectively. Ten steinernematid isolates and three heterorhabditid isolates were recovered using the Galleria mellonella baiting method. Based on morphometric data, molecular data and cross-breeding experiments the nematode species were identified as Steinernema feltiae and Heterorhabditis bacteriophora. The efficacy of five entomopathogenic nematode strains was tested against the neonate larvae of Capnodis tenebrionis. The nematode strains screened included two Steinernema carpocapsae, one S. feltiae, one S. arenarium and one Heterorhabditis bacteriophora. Exposure of neonate larvae to 3 and 48 IJs/cm2 resulted in mortality between 60-91% and 96-100%, respectively. At a concentration of 150 IJs/larva, all of the nematode strains were highly virulent. S. carpocapsae caused infection and mortality to larvae more quickly than the other strains. The penetration rate as an indicator of entomopathogenic nematode infection was also evaluated. The highest value was recorded for S. arenarium (36%), followed by H. bacteriophora (30.6%), S. feltiae (23.1%), and S. carpocapsae (20.7%).The virulence of 14 Steinernema feltiae isolates, one S. carpocapsae and three Heterorhabditis bacteriophora isolates was compared in the laboratory against larvae, pupae and adults of Capnodis tenebrionis. Larval mortality ranged from 50 to 100% and pupae mortality from 0 to 70% and adults from 66.7% to 100%. Significant differences in mortality between C. tenebrionis males and females were observed. The results of this study suggest that some of the isolate strains have potential for improved biological control of C. tenebrionis.Environmental tolerance to heat, desiccation and hypoxia, the effect of temperature on infectivity and reproduction and nematode migration in sand columns were compared among isolates and one S. carpocapsae strain. Results showed differences among species and a great variability within species. Beneficial traits for each strain were added up to identify a superior candidate to control Mediterranean flat-headed rootborer, Capnodis tenebrionis. When all analyzed factors were considered, three S. feltiae isolates (Bpa, Sor and M116) obtained the best scores, and when hypoxia was removed, two of the strains (Bpa and Sor) continued ranking superior to other strains.The susceptibility of larvae of Capnodis tenebrionis to entomopathogenic nematodes was examined using GF-677@ potted trees (peach x almond hybrid) as the host plant. The nematode strains tested included nine Steinernema feltiae, one S. affine, one S. carpocapsae and two Heterorhabditis bacteriophora. Nematodes showed the ability to locate and kill larvae of C. tenebrionis just after they enter into the roots of the tree. S. feltiae strains provided an efficacy ranging from 79.68% to 88.24%. H. bacteriophora strains resulted in control of 71.66-76.47%. S. carpocapsae (B14) and S. affine (Gspe3) caused lower control of C. tenebrionis larvae (62.03% and 34.76%, respectively). The influence of foraging strategy and the use of native nematodes to control C. tenebrionis larvae inside the roots is discussed.The potential control of the entomopathogenic nematode Steinernema feltiae (Filipjev) (strain Bpa), isolated from a dead C. tenebrionis larva, was tested in a cherry tree orchard in Ullastrell, Barcelona (Spain). Nematode infective juveniles (IJs) were applied by drench and injection. In both the treatments, a rate of 1 million IJs was applied per tree every week during 4 or 8 weeks, with a total dose of 4 x 106 IJs/tree and 8 x 106 IJs/tree. Number, stage and localization of insects in each tree trunk were recorded. In both the experiments, S. feltiae significantly reduced the population of C. tenebrionis providing control ranging from 88.3% to 97%. No significant differences were recorded between the different treatments. Persistence of nematodes was recorded until 6 weeks after application. Results indicate that the application of S. feltiae (Bpa) provides adequate control of C. tenebrionis in cherry trees.