Made available in DSpace on 2015-06-19T02:07:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000470631-Texto+Parcial-0.pdf: 431429 bytes, checksum: b5055842a739822ab3818d061be0160a (MD5) Previous issue date: 2015 / Several companies wordwide produce kits with 99mTc labelling for diagnosing neuroendocrine tumors. Aiming at producing this kind of product in Brazil, a formulation was proposed, based on the methodology developed by Guggenberg et ul, using HYNIC-TOC, SnCl2, EDDA, tricine, mannitol and ascorbic acid. For labelling the cold kit, metastable radionuclide technetium (99mTc), produced by a 99Mo generator was used. The product was stored at temperatures of 0 to 8°C and at 25°C before labelling. After the product was labelled, it was kept at room temperature for up to 4 hours. The time of exposure was sufficient to observe the shelf life of the product for each storage method. Considering a radiochemical purity (RCP) of 80%, the product remained stable during the eight-month storage at 0 to 8°C before labelling and up to 4 hours after labelling. Therefore, the use of this product is possible in centers of nuclear medicine for a longer period during the day. / No mundo, diversas empresas produzem kits para diagnóstico de tumores neuroendócrinos para marcação com 99m Tc. Com a intenção de nacionalizar esse tipo de produto no Brasil, uma formulação foi proposta e baseada na metodologia desenvolvida por Guggemberg et al, utilizando HYNIC-TOC, SnCL2, EDDA, tricina, manitol e ácido ascórbico. Para marcação do cold kit, foi utilizado o radionuclídeo tecnécio metaestável(99m Tc), produzido por um gerador de 99Mo. O produto foi armazenado em temperaturasde 0 a 8°C e a 25°C antes da marcação. Após marcação do produto, esse foi mantido em temperatura ambiente por até quatro horas. O tempo de exposição foi suficiente para observar a vida do produto em cada método de armazenamento. Considerando-se em limite de PRQ (pureza radioquímica) de 80%, o produto se mostrou estável durante os oito meses, quando armazenado entre 0 a 8°C antes da marcação, e até quatro horas pós-marcação. Sendo assim, possível a utilização desse produto, em centro de medicina nuclear, por período mais longo durante o dia.

Orientador: Flávio Ruas de Moraes / Coorientador: Julieta Rodini Egracia de Moraes / Coorientador: Cleni Mara Marzocchi-Machado / Banca: Aureo Evangelista Santana / Banca: Rogério Salvador / Banca: Luiz Lehmann Coutinho / Banca: Antonio Vicente Mundim / Resumo: A patogenia da sepse envolve múltiplas inter-relações na dinâmica entre os diversos componentes relacionados ao hospedeiro e ao patógeno, com altas taxas de mortalidade em várias espécies animais. Embora seja uma das principais causas de mortalidade de peixes, há escassez de literatura sobre seus fenômenos fisiopatológicos e em seus mecanismos de modulação. Assim, neste trabalho, objetivou-se estudar os aspectos fisiopatológicos da evolução da reposta séptica induzida por Aeromonas hydrophila em Piaractus mesopotamicus - pacus. O inóculo utilizada foi determinada pela DL50 (DL50-96h) e estimada em 1,78 x 109. A sepse foi induzida pela inoculação na cavidade celomática e seguiram-se as coletas de sangue nos tempos pré-determinados de 1, 3, 6 e 9 horas após indução e o grupo controle. Verificou-se rápido aumento da cortisolemia com inibição da absorção de glicose, seguido de hipocortisolemia e hiperglicemia. Os hormônios da tireoide, apresentando diminuição imediata de suas concentrações séricas T3 e T4. Este último apresentou aumento 6 HPI. As alterações hormonais induzidas pela sepse desencadearam alterações nas vias metabólicas com aumento do catabolismo protéico e lipídico, utilização da via da glicólise anaeróbica transitória e lesão hepática. O leucograma demonstrou leucopenia e trombocitopenia seguido de cessar da quimiotaxia dos leucócitos após 6 HPI e graves alterações morfológicas em leucócitos e eritrócitos. As variáveis do sistema imune inato apresentaram aumento da produção de EROs 3 HPI, seguido de diminuição, sem alteração da concentração da lisozima sérica e progressivo aumento do ALS e AAB. Após inoculação ip. de A. hydrophila, foram evidenciados sinais clínicos de aeromonose, bacteremia crescente e sobrevida de 57,14 % depois 36 HPI / Abstract: The pathogenesis of sepsis involves multiple interrelationships in the dynamics between various components related to the host and the pathogen, with high mortality rates in several animal species. Although it is a major cause of fish deaths, there is lack of literature about its physiopathology and the mechanisms of modulation. This work aimed to study the physiopathological aspects of the evolution of the septic response induced by Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus - pacu. The dose was determined by the LD50 (LD50-96h) and estimated in 1,78 x 109. Sepsis was induced by the administration in the coelomic cavity and was followed by the collection of blood in the pre-determined times of 1, 3, 6, and 9 hours after induction and more control. There was a rapid increase of cortisol concentration in plasma, inhibition of glucose uptake, followed by hypocortisolemia and hyperglycemia. Thyroid hormones have immediate reduction of serum concentration of T3 and T4. The latter showed an increase after 6 HPI. Hormonal changes induced by sepsis-triggered changes in metabolic pathways enhancing protein and lipid catabolism, use of transient anaerobic glycolysis via and liver damage. The leucocyte count showed leukopenia and thrombopenia followed by cessation of leukocyte migration after 6 HPI and severe morphological changes in leukocytes and erythrocytes. The innate immune variables showed increased production of ROS after 3 HPI, followed by reduction without changing the concentration of serum lysozyme and progressive increase in SHA and ABA. After ip inoculation of A. hydrophila in pacu, clinical signs were evident of Aeromonas infection, growing bacteremia and survival of 57,14 % after 36 HPI / Doutor

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:18Z : No. of bitstreams: 1 000849627.pdf: 553636 bytes, checksum: 5dfc24590b221b9994b1d94923ed02d2 (MD5) / A patogenia da sepse envolve múltiplas inter-relações na dinâmica entre os diversos componentes relacionados ao hospedeiro e ao patógeno, com altas taxas de mortalidade em várias espécies animais. Embora seja uma das principais causas de mortalidade de peixes, há escassez de literatura sobre seus fenômenos fisiopatológicos e em seus mecanismos de modulação. Assim, neste trabalho, objetivou-se estudar os aspectos fisiopatológicos da evolução da reposta séptica induzida por Aeromonas hydrophila em Piaractus mesopotamicus - pacus. O inóculo utilizada foi determinada pela DL50 (DL50-96h) e estimada em 1,78 x 109. A sepse foi induzida pela inoculação na cavidade celomática e seguiram-se as coletas de sangue nos tempos pré-determinados de 1, 3, 6 e 9 horas após indução e o grupo controle. Verificou-se rápido aumento da cortisolemia com inibição da absorção de glicose, seguido de hipocortisolemia e hiperglicemia. Os hormônios da tireoide, apresentando diminuição imediata de suas concentrações séricas T3 e T4. Este último apresentou aumento 6 HPI. As alterações hormonais induzidas pela sepse desencadearam alterações nas vias metabólicas com aumento do catabolismo protéico e lipídico, utilização da via da glicólise anaeróbica transitória e lesão hepática. O leucograma demonstrou leucopenia e trombocitopenia seguido de cessar da quimiotaxia dos leucócitos após 6 HPI e graves alterações morfológicas em leucócitos e eritrócitos. As variáveis do sistema imune inato apresentaram aumento da produção de EROs 3 HPI, seguido de diminuição, sem alteração da concentração da lisozima sérica e progressivo aumento do ALS e AAB. Após inoculação ip. de A. hydrophila, foram evidenciados sinais clínicos de aeromonose, bacteremia crescente e sobrevida de 57,14 % depois 36 HPI / The pathogenesis of sepsis involves multiple interrelationships in the dynamics between various components related to the host and the pathogen, with high mortality rates in several animal species. Although it is a major cause of fish deaths, there is lack of literature about its physiopathology and the mechanisms of modulation. This work aimed to study the physiopathological aspects of the evolution of the septic response induced by Aeromonas hydrophila in Piaractus mesopotamicus - pacu. The dose was determined by the LD50 (LD50-96h) and estimated in 1,78 x 109. Sepsis was induced by the administration in the coelomic cavity and was followed by the collection of blood in the pre-determined times of 1, 3, 6, and 9 hours after induction and more control. There was a rapid increase of cortisol concentration in plasma, inhibition of glucose uptake, followed by hypocortisolemia and hyperglycemia. Thyroid hormones have immediate reduction of serum concentration of T3 and T4. The latter showed an increase after 6 HPI. Hormonal changes induced by sepsis-triggered changes in metabolic pathways enhancing protein and lipid catabolism, use of transient anaerobic glycolysis via and liver damage. The leucocyte count showed leukopenia and thrombopenia followed by cessation of leukocyte migration after 6 HPI and severe morphological changes in leukocytes and erythrocytes. The innate immune variables showed increased production of ROS after 3 HPI, followed by reduction without changing the concentration of serum lysozyme and progressive increase in SHA and ABA. After ip inoculation of A. hydrophila in pacu, clinical signs were evident of Aeromonas infection, growing bacteremia and survival of 57,14 % after 36 HPI

Orientador : Gilberto D'Assunção Fernandes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:37:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_HeloisaHelenadeAraujo_M.pdf: 4240166 bytes, checksum: 531bf942014691e1a6c9d8b99878df85 (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: O presente trabalho compreende o estudo de alterações na resposta imune decorrentes de modificações neuroendócrinas e endócrinas causadas pelo estresse e por lesão no hipocampo dorsal.o objetivo desta pesquisa foi a investigação da importância do hipocampo na modulação do SI pelo SNC, tendo-se em consideração sua estreita relação com os mecanismos endócrinos que modulam a RI e que são desencadeados pelo estresse. Os resultados obtidos permitem as seguintes conclusões: 1 - A lesão na região do hipocampo processada em nossos experimentos não foi efetiva em causar modificações nos níveis basais de corticosterona plasmática, pelo fato de ter destruído áreas inespecíficas para determinação de influências diferenciadas no eixo HHA. 2 - A diminuição do peso do timo decorrente da lesão no hipocampo não foi em conseqüência do mecanismo de ação da corticosterona e estudos pormenorizados são necessários para identificar outros fatores envolvidos neste mecanismo. 3 - A lesão no hipocampo não influenciou os níveis de corticosterona plasmática logo após o estresse e sim na manutenção destes até o quinto dia, sugerindo, nesta ocasião, uma ausência de percepção ao estímulo estressante. 4 - o hipocampo dorsal exerce papel importante na modulação do SI pelo SNC desde que a lesão desta estrutura causou um aumento da resposta imune. 5 - A lesão no hipocampo e a alteração da resposta imunológica ao estresse, confirma os dados da literatura baseados em estudos neuroendócrinos de que o hipocampo é via moduladora para expressão de resposta aos estímulos p-stressantes. 6 - O aumento de resposta imune nos ratos lesados no hipocampo, submetidos ou não à contenção, pode ser atribuído, dentre outros fatores, à diminuição dos níveis de corticosterona e, portanto, de seus efeitos imunossupressivos. A ausência de percepção do estímulo estressante após cinco dias nestes ratos, evidenciado por baixos níveis de corticosterona e aumento da RI, reforça esta noção / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-06-18T13:18:31Z No. of bitstreams: 1 470631 - Texto Parcial.pdf: 431429 bytes, checksum: b5055842a739822ab3818d061be0160a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-18T13:18:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 470631 - Texto Parcial.pdf: 431429 bytes, checksum: b5055842a739822ab3818d061be0160a (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Several companies wordwide produce kits with 99mTc labelling for diagnosing neuroendocrine tumors. Aiming at producing this kind of product in Brazil, a formulation was proposed, based on the methodology developed by Guggenberg et ul, using HYNIC-TOC, SnCl2, EDDA, tricine, mannitol and ascorbic acid. For labelling the cold kit, metastable radionuclide technetium (99mTc), produced by a 99Mo generator was used. The product was stored at temperatures of 0 to 8?C and at 25?C before labelling. After the product was labelled, it was kept at room temperature for up to 4 hours. The time of exposure was sufficient to observe the shelf life of the product for each storage method. Considering a radiochemical purity (RCP) of 80%, the product remained stable during the eight-month storage at 0 to 8?C before labelling and up to 4 hours after labelling. Therefore, the use of this product is possible in centers of nuclear medicine for a longer period during the day. / No mundo, diversas empresas produzem kits para diagn?stico de tumores neuroend?crinos para marca??o com 99m Tc. Com a inten??o de nacionalizar esse tipo de produto no Brasil, uma formula??o foi proposta e baseada na metodologia desenvolvida por Guggemberg et al, utilizando HYNIC-TOC, SnCL2, EDDA, tricina, manitol e ?cido asc?rbico. Para marca??o do cold kit, foi utilizado o radionucl?deo tecn?cio metaest?vel(99m Tc), produzido por um gerador de 99Mo. O produto foi armazenado em temperaturasde 0 a 8?C e a 25?C antes da marca??o. Ap?s marca??o do produto, esse foi mantido em temperatura ambiente por at? quatro horas. O tempo de exposi??o foi suficiente para observar a vida do produto em cada m?todo de armazenamento. Considerando-se em limite de PRQ (pureza radioqu?mica) de 80%, o produto se mostrou est?vel durante os oito meses, quando armazenado entre 0 a 8?C antes da marca??o, e at? quatro horas p?s-marca??o. Sendo assim, poss?vel a utiliza??o desse produto, em centro de medicina nuclear, por per?odo mais longo durante o dia.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431890-Texto+Completo-0.pdf: 1738256 bytes, checksum: 1de40e064eb7209fe3bee4e61b0b071b (MD5) Previous issue date: 2011 / INTRODUCTION: Traumatic events experienced in childhood may lead to psychiatric diseases in adult life, including major depressive disorder (MDD). It is still obscure to what extent early life stress is associated with biological relevant changes in MDD. OBJECTIVES: To investigate both neuroendocrine and immunological correlates in recurrent MDD with history of childhood maltreatment (CMT) and current PTSD symptoms. METHODS: Thirty-eight female MDD patients with or without childhood trauma and 19 healthy controls took part in this study. Results from this work were presented in 3 original scientific articles and one scientific review. Evaluations included the detection of salivary levels of cortisol and dehydroepiandrosterone sulphate (DHEAS), assessed by radioimmunoassay; induced mitogenesis of isolated T-cells and cellular sensitivity to synthetic (dexametasone) and natural (epinephrine and DHEAS) substances were evaluated by colorimetric assays; Th1/Th2 cytokines (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a, IFN-g) were assessed by flow cytometry; plasma levels of BDNF, TNF-a and its soluble receptors (sTNFR1 and sTNFR2) were assessed by ELISA. RESULTS: MDD patients with or without previous trauma had similarly lower salivary cortisol and DHEAS in parallel with blunted T-cell proliferation. PBMCs of depressives were significantly less sensitive to dexamethasone (DEX) or epinephrine (EPI) than controls. PBMCs of MDD patients produced significantly lower IL-2, IL- 4 and TNF-a levels when compared to healthy controls. MDD patients also presented higher plasma sTNFR1 and sTNFR2 levels and reduced plasma BDNF. CONCLUSION: Even though several biological changes have been detected in MDD subjects when compared to controls, few alterations were correlated to early life stress. Therefore, we conclude that a history of early life stress did not modify the blunted neuroendocrine and immunological alterations presented by recurrent depressed patients. / INTRODUÇÃO: Sabe-se que experiências traumáticas na infância podem levar ao surgimento de distúrbios psiquiátricos na vida adulta, incluindo a depressão maior (DM). Contudo, ainda se desconhece o grau de alterações biológicas que eventos estressores traumáticos vivenciados na infância podem produzir em indivíduos com depressão. OBJETIVOS: Investigar parâmetros neuroendócrinos e imunológicos em mulheres adultas deprimidas, com sintomas de Estresse Pós- Traumático (TEPT) e história de abuso e negligência infantil (ANI).MÉTODOS: Trinta e oito mulheres com DM com ou sem história de abuso e negligência infantil e sintomas de TEPT e 19 mulheres saudáveis fizeram parte da coleta de dados desta tese. Os resultados deste trabalho foram divididos em 3 artigos científicos originais e uma revisão do tema. As avaliações incluíram dosagens de níveis salivares de cortisol e de sulfato de dehidroepiandrosterona (DHEAS) por radioimunoensaio; a mitogênese induzida de linfócitos T de sangue periférico foi avaliada por ensaio colorimétrico, bem como a sensibilidade de linfócitos T a moduladores sintéticos (dexametasona) e naturais (epinefrina e sulfato de dehidroepiandrosterona); a secreção de citocinas de perfis Th1/Th2 (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-a, IFN-g) por células mononucleares foi identificada por citometria de fluxo; e os níveis plasmáticos de BDNF, além de TNF-a e seus receptores solúveis (sTNFR1 e sTNFR2), foram identificados por ELISA. RESULTADOS: Pacientes deprimidas com ou sem trauma infantil apresentaram níveis reduzidos e semelhantes de cortisol salivar e DHEAS em paralelo com proliferação reduzida de linfócitos T. As células mononucleares de sangue periférico das pacientes deprimidas foram menos sensíveis à dexametasona (DEX) ou epinefrina (EPI) e produziram níveis significativamente reduzidos de IL-2, IL-4 e TNF-a quando comparadas ao grupo de controles. As pacientes deprimidas apresentaram ainda níveis plasmáticos elevados de sTNFR1 e sTNFR2, além de redução dos 6 níveis de BDNF. CONCLUSÕES: Embora muitas alterações biológicas tenham sido identificadas nas mulheres com DM em relação ao grupo de mulheres saudáveis, poucas foram correlacionadas com história de abuso e negligência na infância. Sendo assim, de uma forma geral, conclui-se que a história de abuso e negligência na infância não impacta significativamente as alterações neuroendócrinas e imunológicas apresentadas por pacientes com depressão maior.

O exercício físico regular é uma importante maneira de tratar e proteger contra o desenvolvimento de diversas doenças crônicas e seus efeitos no sistema nervoso central (SNC) podem revelar mecanismos importantes no processo saúde-doença. Aqui, mostramos que o exercício promove plasticidade sináptica em um processo que é dependente da adaptação funcional e morfológica das mitocôndrias neuronais. A ausência de UCP2, uma proteína desacopladora do fluxo de prótons, leva a anulação destes efeitos benéficos do exercício. Além dos efeitos do exercício no cérebro, também estudamos como o hipotálamo, uma região importante em diversas funções homeostáticas, regula o balanço energético e outros comportamentos em camundongos. Focamos principalmente na função de uma população de neurônios localizada no núcleo arqueado do hipotálamo, chamada de neurônios NPY/AgRP. Esses neurônios são orexigênicos, isto é, são responsáveis por promover aumento da ingesta de alimentos. Primeiramente, estudamos o papel da proteína Sirt1 nestes neurônios. Sirt1 é uma proteína com atividade deacetilase que está relacionada com adaptações metabólicas em períodos de balanço energético negativo, como restrição calórica e jejum. Portanto, tanto Sirt1 como os neurônios NPY/AgRP estão ativados em situações metabólicas semelhantes. Mostramos que o bloqueio da atividade de Sirt1 nesse grupo de neurônios, utilizando fármacos ou modelos de camundongos transgênicos, leva a uma diminuição da atividade neuronal e também a diminuição do apetite e do peso corporal. Esses efeitos foram dependentes da sinalização através dos receptores de melanocortinas e também da presença de UCP2. Essa função crucial de Sirt1 nos neurônios NPY/AgRP nos levou a estudar os animais deficientes em Sirt1 em modelos de restrição calórica. Animais nocaute para Sirt1 nos neurônios NPY/AgRP não tiveram nenhuma anormalidade metabólica em resposta a tal dieta. Entretanto, estes animais apresentaram resposta comportamental alterada em protocolos que testam atividade exploratória, principalmente em resposta à novidade. Subsequentemente, mostramos que esses neurônios são importantes para a plasticidade sináptica de neurônios dopaminérgicos na zona tegmental ventral. Corroborando o papel desta área na regulação de comportamentos motivacionais, nossos resultados mostram que os neurônios NPY/AgRP são críticos para o desenvolvimento desses neurônios dopaminérgicos e consequentemente para a regulação de uma série de comportamentos motivacionais, como resposta à cocaína e à novidade. Portanto, nossos resultados sugerem que o hipotálamo é importante para o desenvolvimento cerebral, com possível impacto em diversas funções cerebrais não classicamente relacionadas a este. Tais descobertas podem ser relevantes na pesquisa translacional. / Exercise is a behavioral intervention that promotes beneficial effects in many chronic diseases. The effects of exercise in the central nervous system (CNS) can shed light on mechanisms relevant to pathophysiology of diseases. Here, we demonstrate that exercise promotes synaptogenesis in the hippocampus in a process that is dependent on mitochondrial adaptations. In the absence of the mitochondrial uncoupling protein UCP2, the beneficial effects of exercise are abrogated. In addition to study the effects of exercise on the brain, we also investigate the role of the hypothalamus, a brain area important in several homeostatic functions, in the regulation of energy balance and other behaviors. We focused on the role of the NPY/AgRP neurons located in the arcuate nucleus of the hypothalamus, which exert an orexigenic tone in the brain, promoting food intake. We first investigated potential cellular pathways that could be important in the maintenance of neuronal activity. Sirt1 is a deacetylase that senses the metabolic state of the cell and is activated during negative energy balance (for example, fasting and calorie restriction). The similarities between the metabolic states that activate Sirt1 and the AgRP neurons led us to evaluate the role of this protein in NPY/AgRP neuronal function. We found that Sirt1 is important to NPY/AgRP activation and consequent feeding behavior. Animals with decreased Sirt1 activity are leaner and eat less. These results were dependent of melanocortin signaling and the presence of UCP2. The critical role of Sirt1 in the AgRP neurons led us to evaluate the adaptive response of mice knockout for Sirt1 specifically in the AgRP neurons during calorie restriction. We show here that calorie restriction promotes the activity of NPY/AgRP neurons in the brain, and that disrupting Sirt1 in these cells lead to impaired behavioral but not metabolic responses to calorie restriction. These findings highlight the pivotal role of the NPY/AgRP neurons during calorie restriction in regulation of complex behaviors.!Subsequently,! we show that impairment of AgRP neuronal function in mice increases exploratory behavior unrelated to feeding. Behavioral responses to cocaine, were also altered in these animals. As a neurobiological substrate of these altered behaviors, in Agrp-Sirt1 KO mice, ventral tegmental (VTA) dopamine (DA) neurons, which targeted by AgRP efferents, exhibited enhanced spike- timing-dependent long-term potentiation (STDLTP), decreased amplitude of mIPSCs, and increased DA levels in basal forebrain. Early postnatal ablation of AgRP neurons led to a phenotype resembling that of Agrp- Sirt1 KO mice, with enhanced LTP in VTA-DA cells and altered response to novelty. These observations reveal a fundamental regulatory role of AgRP neurons in determining the set point of the DA reward circuitry and associated behaviors during development. Our results are likely important in translational research.

O exercício físico regular é uma importante maneira de tratar e proteger contra o desenvolvimento de diversas doenças crônicas e seus efeitos no sistema nervoso central (SNC) podem revelar mecanismos importantes no processo saúde-doença. Aqui, mostramos que o exercício promove plasticidade sináptica em um processo que é dependente da adaptação funcional e morfológica das mitocôndrias neuronais. A ausência de UCP2, uma proteína desacopladora do fluxo de prótons, leva a anulação destes efeitos benéficos do exercício. Além dos efeitos do exercício no cérebro, também estudamos como o hipotálamo, uma região importante em diversas funções homeostáticas, regula o balanço energético e outros comportamentos em camundongos. Focamos principalmente na função de uma população de neurônios localizada no núcleo arqueado do hipotálamo, chamada de neurônios NPY/AgRP. Esses neurônios são orexigênicos, isto é, são responsáveis por promover aumento da ingesta de alimentos. Primeiramente, estudamos o papel da proteína Sirt1 nestes neurônios. Sirt1 é uma proteína com atividade deacetilase que está relacionada com adaptações metabólicas em períodos de balanço energético negativo, como restrição calórica e jejum. Portanto, tanto Sirt1 como os neurônios NPY/AgRP estão ativados em situações metabólicas semelhantes. Mostramos que o bloqueio da atividade de Sirt1 nesse grupo de neurônios, utilizando fármacos ou modelos de camundongos transgênicos, leva a uma diminuição da atividade neuronal e também a diminuição do apetite e do peso corporal. Esses efeitos foram dependentes da sinalização através dos receptores de melanocortinas e também da presença de UCP2. Essa função crucial de Sirt1 nos neurônios NPY/AgRP nos levou a estudar os animais deficientes em Sirt1 em modelos de restrição calórica. Animais nocaute para Sirt1 nos neurônios NPY/AgRP não tiveram nenhuma anormalidade metabólica em resposta a tal dieta. Entretanto, estes animais apresentaram resposta comportamental alterada em protocolos que testam atividade exploratória, principalmente em resposta à novidade. Subsequentemente, mostramos que esses neurônios são importantes para a plasticidade sináptica de neurônios dopaminérgicos na zona tegmental ventral. Corroborando o papel desta área na regulação de comportamentos motivacionais, nossos resultados mostram que os neurônios NPY/AgRP são críticos para o desenvolvimento desses neurônios dopaminérgicos e consequentemente para a regulação de uma série de comportamentos motivacionais, como resposta à cocaína e à novidade. Portanto, nossos resultados sugerem que o hipotálamo é importante para o desenvolvimento cerebral, com possível impacto em diversas funções cerebrais não classicamente relacionadas a este. Tais descobertas podem ser relevantes na pesquisa translacional. / Exercise is a behavioral intervention that promotes beneficial effects in many chronic diseases. The effects of exercise in the central nervous system (CNS) can shed light on mechanisms relevant to pathophysiology of diseases. Here, we demonstrate that exercise promotes synaptogenesis in the hippocampus in a process that is dependent on mitochondrial adaptations. In the absence of the mitochondrial uncoupling protein UCP2, the beneficial effects of exercise are abrogated. In addition to study the effects of exercise on the brain, we also investigate the role of the hypothalamus, a brain area important in several homeostatic functions, in the regulation of energy balance and other behaviors. We focused on the role of the NPY/AgRP neurons located in the arcuate nucleus of the hypothalamus, which exert an orexigenic tone in the brain, promoting food intake. We first investigated potential cellular pathways that could be important in the maintenance of neuronal activity. Sirt1 is a deacetylase that senses the metabolic state of the cell and is activated during negative energy balance (for example, fasting and calorie restriction). The similarities between the metabolic states that activate Sirt1 and the AgRP neurons led us to evaluate the role of this protein in NPY/AgRP neuronal function. We found that Sirt1 is important to NPY/AgRP activation and consequent feeding behavior. Animals with decreased Sirt1 activity are leaner and eat less. These results were dependent of melanocortin signaling and the presence of UCP2. The critical role of Sirt1 in the AgRP neurons led us to evaluate the adaptive response of mice knockout for Sirt1 specifically in the AgRP neurons during calorie restriction. We show here that calorie restriction promotes the activity of NPY/AgRP neurons in the brain, and that disrupting Sirt1 in these cells lead to impaired behavioral but not metabolic responses to calorie restriction. These findings highlight the pivotal role of the NPY/AgRP neurons during calorie restriction in regulation of complex behaviors.!Subsequently,! we show that impairment of AgRP neuronal function in mice increases exploratory behavior unrelated to feeding. Behavioral responses to cocaine, were also altered in these animals. As a neurobiological substrate of these altered behaviors, in Agrp-Sirt1 KO mice, ventral tegmental (VTA) dopamine (DA) neurons, which targeted by AgRP efferents, exhibited enhanced spike- timing-dependent long-term potentiation (STDLTP), decreased amplitude of mIPSCs, and increased DA levels in basal forebrain. Early postnatal ablation of AgRP neurons led to a phenotype resembling that of Agrp- Sirt1 KO mice, with enhanced LTP in VTA-DA cells and altered response to novelty. These observations reveal a fundamental regulatory role of AgRP neurons in determining the set point of the DA reward circuitry and associated behaviors during development. Our results are likely important in translational research.

O exercício físico regular é uma importante maneira de tratar e proteger contra o desenvolvimento de diversas doenças crônicas e seus efeitos no sistema nervoso central (SNC) podem revelar mecanismos importantes no processo saúde-doença. Aqui, mostramos que o exercício promove plasticidade sináptica em um processo que é dependente da adaptação funcional e morfológica das mitocôndrias neuronais. A ausência de UCP2, uma proteína desacopladora do fluxo de prótons, leva a anulação destes efeitos benéficos do exercício. Além dos efeitos do exercício no cérebro, também estudamos como o hipotálamo, uma região importante em diversas funções homeostáticas, regula o balanço energético e outros comportamentos em camundongos. Focamos principalmente na função de uma população de neurônios localizada no núcleo arqueado do hipotálamo, chamada de neurônios NPY/AgRP. Esses neurônios são orexigênicos, isto é, são responsáveis por promover aumento da ingesta de alimentos. Primeiramente, estudamos o papel da proteína Sirt1 nestes neurônios. Sirt1 é uma proteína com atividade deacetilase que está relacionada com adaptações metabólicas em períodos de balanço energético negativo, como restrição calórica e jejum. Portanto, tanto Sirt1 como os neurônios NPY/AgRP estão ativados em situações metabólicas semelhantes. Mostramos que o bloqueio da atividade de Sirt1 nesse grupo de neurônios, utilizando fármacos ou modelos de camundongos transgênicos, leva a uma diminuição da atividade neuronal e também a diminuição do apetite e do peso corporal. Esses efeitos foram dependentes da sinalização através dos receptores de melanocortinas e também da presença de UCP2. Essa função crucial de Sirt1 nos neurônios NPY/AgRP nos levou a estudar os animais deficientes em Sirt1 em modelos de restrição calórica. Animais nocaute para Sirt1 nos neurônios NPY/AgRP não tiveram nenhuma anormalidade metabólica em resposta a tal dieta. Entretanto, estes animais apresentaram resposta comportamental alterada em protocolos que testam atividade exploratória, principalmente em resposta à novidade. Subsequentemente, mostramos que esses neurônios são importantes para a plasticidade sináptica de neurônios dopaminérgicos na zona tegmental ventral. Corroborando o papel desta área na regulação de comportamentos motivacionais, nossos resultados mostram que os neurônios NPY/AgRP são críticos para o desenvolvimento desses neurônios dopaminérgicos e consequentemente para a regulação de uma série de comportamentos motivacionais, como resposta à cocaína e à novidade. Portanto, nossos resultados sugerem que o hipotálamo é importante para o desenvolvimento cerebral, com possível impacto em diversas funções cerebrais não classicamente relacionadas a este. Tais descobertas podem ser relevantes na pesquisa translacional. / Exercise is a behavioral intervention that promotes beneficial effects in many chronic diseases. The effects of exercise in the central nervous system (CNS) can shed light on mechanisms relevant to pathophysiology of diseases. Here, we demonstrate that exercise promotes synaptogenesis in the hippocampus in a process that is dependent on mitochondrial adaptations. In the absence of the mitochondrial uncoupling protein UCP2, the beneficial effects of exercise are abrogated. In addition to study the effects of exercise on the brain, we also investigate the role of the hypothalamus, a brain area important in several homeostatic functions, in the regulation of energy balance and other behaviors. We focused on the role of the NPY/AgRP neurons located in the arcuate nucleus of the hypothalamus, which exert an orexigenic tone in the brain, promoting food intake. We first investigated potential cellular pathways that could be important in the maintenance of neuronal activity. Sirt1 is a deacetylase that senses the metabolic state of the cell and is activated during negative energy balance (for example, fasting and calorie restriction). The similarities between the metabolic states that activate Sirt1 and the AgRP neurons led us to evaluate the role of this protein in NPY/AgRP neuronal function. We found that Sirt1 is important to NPY/AgRP activation and consequent feeding behavior. Animals with decreased Sirt1 activity are leaner and eat less. These results were dependent of melanocortin signaling and the presence of UCP2. The critical role of Sirt1 in the AgRP neurons led us to evaluate the adaptive response of mice knockout for Sirt1 specifically in the AgRP neurons during calorie restriction. We show here that calorie restriction promotes the activity of NPY/AgRP neurons in the brain, and that disrupting Sirt1 in these cells lead to impaired behavioral but not metabolic responses to calorie restriction. These findings highlight the pivotal role of the NPY/AgRP neurons during calorie restriction in regulation of complex behaviors.!Subsequently,! we show that impairment of AgRP neuronal function in mice increases exploratory behavior unrelated to feeding. Behavioral responses to cocaine, were also altered in these animals. As a neurobiological substrate of these altered behaviors, in Agrp-Sirt1 KO mice, ventral tegmental (VTA) dopamine (DA) neurons, which targeted by AgRP efferents, exhibited enhanced spike- timing-dependent long-term potentiation (STDLTP), decreased amplitude of mIPSCs, and increased DA levels in basal forebrain. Early postnatal ablation of AgRP neurons led to a phenotype resembling that of Agrp- Sirt1 KO mice, with enhanced LTP in VTA-DA cells and altered response to novelty. These observations reveal a fundamental regulatory role of AgRP neurons in determining the set point of the DA reward circuitry and associated behaviors during development. Our results are likely important in translational research.

Diversos procedimentos são capazes de induzir a recuperação de memórias traumáticas (RecMem). Técnicas de psicoterapia têm sido usadas para reduzir a resposta emocional às memórias traumáticas, através de processos de re-estruturação e re-significação das vivências, baseados na resiliência dos sujeitos. Durante a RecMem podem ocorrer sinais clínicos de ativação autonômica que não são reações devidas a estressores externos. Pelo contrário, constituem o resultado de estímulos de natureza psíquica gerados internamente. Assim, é possível se especular se eles podem funcionar como estressores puramente psicológicos e, como tais, induzir respostas autonômicas e neuroendócrinas. O objetivo deste trabalho é o de se determinar se estas respostas ocorrem, assim como o de identificar suas características qualitativas e quantitativas. Seis voluntários de ambos os sexos, previamente selecionados e avaliados por testes psicológicos (SICD, Hamilton e BDI) e de cronotipagem, foram submetidos a duas condições: 1. condição controle (CC), e 2. condição de recuperação (CR). Em ambas as condições, os sujeitos foram colocados em ambiente controlado, com coleta de material destinado a dosagens de ACTH, adrenalina, cortisol, prolactina, TSH e GH (hormônios envolvidos com as respostas ao estresse), a cada 15 minutos, por 2 horas, com a primeira coleta 30 minutos antes do início dos procedimentos. Em ambas as condições, os sujeitos repousaram durante estes 30 minutos. Na CC os sujeitos permaneceram em repouso e na CR foram submetidos aos processos de RecMem, com seguimento psicoterapêutico subseqüente. Os dados obtidos foram avaliados quanto ao perfil das curvas tempo e resposta para cada hormônio e submetidos a testes estatísticos de comparação da secreção hormonal em ambas as condições. Concluímos que existiram respostas autonômicas e neuroendócrinas compatíveis com estresse psicológico que não são constantes em todos os sujeitos, onde se ressalta a variabilidade das respostas individuais obtidas. / Several procedures are capable to induce retrieval of traumatic memories (RecMem). Psychotherapy techniques have been used to reduce the traumatic memories emotional response through rebuilding and re-meaning of the traumatic memories based on the subject´s resilience. Clinical signs of autonomic activation may be seen during RecMem, not representing reactions to external stressors. On the contrary, they are the result of psychic inputs internally generated. Therefore, it is possible to speculate that they can act as pure psychological stressors and, as such, able to induce autonomic and neuroendocrine responses. The aim of the present report is to determine whether these responses actually happen, as well as to determine their qualitative and quantitative characteristics. Six volunteers of both sexes, previously selected, and submitted to psychological testing (SCID, Hamilton and BDI) as well as chronotype determination, were submitted to two conditions: 1. Control condition (CC) and 2. Retrieval condition (CR). The subjects were placed in a controlled environment in both conditions, with ACTH, cortisol, adrenalin, prolactin, TSH and GH (stress related hormones) blood testing at every 15 minutes, for 2 hours; the first sample was obtained 30 minutes before the beginning of the procedures. In both conditions the subjects rested during these 30 minutes. In the CC the subjects remained resting, and in the CR were submitted to RecMem procedures followed by psychotherapeutic support. The resulting data were analyzed in their time-response curve profiles as well as were submitted to hormonal secretion statistical evaluation in both conditions. We conclude for autonomic and neuroendocrine responses compatible with psychological stress, that are not the same in all subjects, high lightening the variability of individual obtained responses.