Orientador: Ananda Virginia de Aguiar / Resumo: Myracrodruon urundeuva é uma espécie madeireira natural com grande potencial de uso comercial no Brasil, principalmente nas regiões do Pantanal, do Cerrado e da Caatinga, onde ocorre a exploração de espécies nativas. A exploração intensiva tem causado grande perda de indivíduos e o isolamento de populações em ilhas, devido à fragmentação do habitat da espécie. Assim, a adoção de estratégias para conservação ex situ de espécie nativas torna-se indispensável. Duas propostas foram idealizadas neste trabalho. A primeira foi estimar a variabilidade genética e ganho genético com a seleção de um teste de progênies. O teste de progênie consorciado com as espécies Myracrodruon urundeuva, Terminalia argentea e Astronium fraxinifolium, foi instalado em 12 de julho de 1994 na Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão (FEPE), do campus de Ilha Solteira (FEIS/UNESP) na cidade Selvíria – MS. O delineamento utilizado foi o de blocos completos casualizados, contendo 28 progênies, seis plantas por parcela e quatro repetições para as espécies instaladas. Os caracteres altura e diâmetro a altura do peito (DAP) foram mensurados aos 24 anos após o plantio. Verificou-se a existência de variação genética significativa entre as progênies para os caracteres analisados. A alta taxa de sobrevivência indica boa adaptação da espécie em testes consorciados. As estimativas do coeficiente de variação genética tiveram resultados de 19,41% e 17,26% para DAP e altura, em nível de indivíduo, e de 9,7% e 8,63%, entr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Myracrodruon urundeuva is a natural timber species with great potential for commercial use in Brazil, especially in the Pantanal, Cerrado and Caatinga regions, where native species are exploited. Intensive exploitation has caused great loss of individuals and the isolation of populations on islands due to the fragmentation of the species' habitat. Thus, the adoption of strategies for ex situ conservation of native species becomes indispensable. Two proposals were conceived in this work. The first was to estimate the genetic variability and genetic gain with the selection of a progeny test. The progeny test consortium with the species Myracrodruon urundeuva, Terminalia argentea and Astronium fraxinifolium, was installed on July 12, 1994 at the Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão (FEPE), at the campus of Ilha Solteira (FEIS / UNESP) in the city Selvíria MS. The design was a randomized complete block, containing 28 progenies, six plants per plot and four replications for the species installed. The height and diameter of the chest height (dch) were measured at 24 years after planting. There was significant genetic variation between the progenies for the characters analyzed. The high survival rate indicates good adaptation of the species in intercropping tests. Estimates of the coefficient of genetic variation showed results of 19.41% and 17.26% for DBH and height, at the individual level, and of 9.7% and 8.63% among progenies. The individual heritabilities ranged from moderate... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Em busca de novas estratégias para o reparo de tecidos pulpares com células-tronco faz-se necessário compreender melhor o nicho em que elas se encontram. Uma forma é observar o mecanismo de ativação sobre estas células durante o reparo de tecidos pulpares após sofrer uma injúria. Assim, foi proposto estudar a localização e composição do nicho das célulastronco da polpa dental através da exposição pulpar induzida in vitro em dentes humanos e in vivo em dentes de ratos, através da incorporação de Bromodeoxiuridina (BrdU) e Iododeoxiuridina (IdU) e co-expressão com proteínas de células-tronco. Para o ensaio in vitro, 33 terceiros molares humanos com rizogênese incompleta foram divididos em 3 grupos: dentes com exposição pulpar induzida e mantidos em cultivo (GCE, grupo cultura exposição) (n=15); dentes sem injúria e mantidos em cultivo (GCC, grupo cultura controle) (n=15); dentes hígidos apenas (GH, grupo hígido) (n=3). Os grupos GCE e GCC, foram cultivados com BrdU (10 l/ml) por 24h e posteriormente analisados após 2, 5 e 14 dias. Para o ensaio in vivo, 12 ratos Wistar receberam IdU (1mg/ml) diluído na água por 30 dias. Após 45 dias foram divididos em 2 grupos: grupo in vivo com exposição pulpar (GIVE) (n=17 dentes) e grupo in vivo controle (GIVC) (n=16 dentes). No GIVE foi realizada a exposição pulpar no primeiro molar e em seguida restaurado com Coltosol. Após 2, 4 e 8 dias pós-operatórios as amostras foram coletadas e processadas para análise histológica e imuno-histoquímica. As proteínas CD90, CD146, PDGFr e BrdU foram analisadas em duas áreas: lesão e centro em molares humanos enquanto, as proteínas CD90, NG2 e IdU foram analisadas em uma área única, em molares de rato. As análises estatísticas foram efetuadas pelos testes de Mann- Whitney e Kruskal-Wallis, p 5%. Em dentes humanos, na área de lesão do grupo GCE, células BrdU positivas foram encontradas nos três períodos, sendo presentes em maior número células PDGFr positivas nos dias 2 e 5 e células CD90 positivas no 14º dia; no centro pulpar, no 2º dia pós injúria houve um número semelhante de células CD90, CD146 e PDGFr positivas, sendo encontradas em maior porcentagem no 5º dia células PDGFr e CD90 positivas e 14º dia células CD90 positivas. No grupo GCC na área equivalente à lesão, células CD90 (2 e 5 dias) e PDGFr (14 dias) positivas foram encontradas em maior percentual; no centro pulpar, o número de células positivas para CD90, CD146 e PDGFr foi semelhante em todos os períodos, sendo encontradas células BrdU positivas no 2º dia. Em molares de ratos, no GIVE houveram mais células NG2 positivas no 2º dia, IdU no 4º dia e CD90 no 8º dia. No GIVC, o CD90 foi altamente expresso em todos os períodos analisados, a proteína NG2 também foi expressa em odontoblastos e CD90 na camada subodontoblástica em molares de rato. Todas as proteínas mencionadas coexistem no tecido pulpar humano e animal formando populações celulares heterogêneas perivasculares e perineurais encontradas em maior concentração em regiões próximas à área de injúria, sugerindo que nichos perivasculares e perineurais participam em conjunto na homeostase pulpar em resposta à injúria. / In pursuit of new strategies for pulp tissue repair with stem cells, it is necessary to better understand the niche in which they are found. One way is to observe the mechanism of these cells activation during the repair of pulp tissues after suffering an injury. Thus, it was proposed to study the location and composition of the dental pulp stem cell niche through induced dental pulp exposure in vitro in human teeth and in vivo in rat teeth by incorporating Bromodeoxyuridine (BrdU) and Iododeoxyuridine (IdU) and co-expression with stem cell proteins. For the in vitro assay, 33 human third molars with incomplete rhizogenesis were divided into 3 groups: teeth with induced pulp exposure and maintained in culture (GCE, group cultured with pulp exposure) (n = 15); healthy teeth maintained in culture (GCC, control cultured group) (n = 15); healthy teeth only (GH, healthy group) (n = 3). GCE and GCC groups were cultured with BrdU (10 l / ml) for 24 h and subsequently analyzed after 2, 5 and 14 days. For the in vivo assay, 12 Wistar rats received IdU (1mg / ml) diluted in water for 30 days. After 45 days were divided into 2 groups: in vivo group with pulp exposure (GIVE) (n = 17 teeth) and in vivo control group (GIVC) (n = 16 teeth). In GIVE, the pulp exposure was performed on the first molar and then restored with Coltosol. After 2, 4 and 8 postoperative days the samples were collected and processed for histological and immunohistochemical analysis. CD90, CD146, PDGFr and BrdU proteins were analyzed in two areas: injury and center in human molars whereas, CD90, NG2 and IdU were analysed in a single area in rat molars. Statistical analyzes were performed by the Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests, p 5%. In human teeth, in the lesion area of the GCE group, BrdU positive cells were found in the three periods, while a greater number of PDGFr positive cells on days 2 and 5 and CD90 positive cells on the 14th day was found; in the pulp center, on the second day after injury there were a similar number of CD90, CD146 and PDGFr positive cells, and found in greater percentage in the 5th day PDGFr and CD90 positive cells and in 14th day CD90 positive cells. In the GCC group, in the area equivalent to injury site, CD90 (2 and 5 days) and PDGFr (14 days) positive cells were found in a higher percentage; in the pulp center, the number of cells positive for CD90, CD146 and PDGFr was similar in all periods, and BrdU positive cells were found on day 2. In rat molars, GIVE presented more positive cells for NG2 on day 2, for IdU on day 4 and CD90 on day 8. In the GIVC, CD90 was highly expressed in all periods analysed, the NG2 protein was also expressed in odontoblasts and CD90 in the subodontoblastic layer in rat molars. All mentioned proteins coexist in the human and animal pulp tissue forming heterogeneous perivascular and perineural cellular populations found in greater concentration in regions near the area of injury, suggesting that perivascular and perineural niches participate together in pulpal homeostasis in response to injury.

Duas espécies de cetáceos apresentam padrões de distribuição peculiares ao longo da costa brasileira, muito provavelmente em resposta às condições hidrográficas e topográficas que ocorrem entre 20 e 33°S. A primeira espécie, a franciscana ou toninha (Pontoporia blainvillei), é um golfinho de distribuição restrita do Brasil até a Argentina, que ocorre primariamente na plataforma continental interna, raramente ultrapassando os 50 m de profundidade. Já a segunda espécie, o golfinho-pintado-do-Atlântico (Stenella frontalis), é um golfinho de distribuição restrita ao Oceano Atlântico, que ocupa principalmente a plataforma continental. Estas duas espécies apresentam hiatos ao longo da sua distribuição no Brasil que tem consequências na morfologia e estrutura genética das espécies. Através da aplicação de diferentes métodos, o principal objetivo deste estudo foi investigar a influência do ambiente marinho no padrão de distribuição e na estrutura genética destas duas espécies com ênfase na costa brasileira. No primeiro capítulo, investigou-se a relação do ambiente marinho com o padrão de distribuição da franciscana. Para tanto, uma revisão e atualização da distribuição das áreas de manejo da franciscana (FMA), e dos limites dos hiatos, ao longo do Brasil foram realizadas. Análises de nicho ecológico sugerem que os hiatos fazem parte do nicho fundamental da franciscana que seriam, portanto, relativamente adequados para a espécie.No entanto, o estreitamento da plataforma continental parece ser o principal fator que explica a ausência da espécie nos hiatos e, inclusive poderia explicar a diferenciação genética entre algumas FMAs No segundo e terceiro capítulos, a relação entre similaridade genética e distâncias geográficas e ambientais foram investigadas para o golfinho-pintado-do- Atlântico em duas escalas: ao longo de praticamente toda distribuição e em uma escala mais restrita com ênfase no Brasil. Populações geneticamente distintas ao longo de toda distribuição da espécie foram identificadas com base em um marcador mitocondrial, que podem ser resultado Isolamento por Distância e Isolamento por Resistência, relacionados tanto com condições ambientais contemporâneas quanto do passado (Último Glacial Máximo). As análises de estrutura populacional do golfinho-pintado-do-Atlântico no Brasil, investigada mais profundamente com marcadores genômicos, indicam ao menos a existência de três populações (Brasil, Colômbia e Oceânica) suportanto, portanto, a hipótese de uma população isolada no sudeste do Brasil. De forma geral, conclui-se que o ambiente marinho e, principalmente, fatores como extensão da plataforma continental, batimetria e temperatura tem um papel fundamental para explicar o padrão de distribuição destas espécies no Brasil. Além disso, outros processos podem estar envolvidos na estruturação genética do golfinho-pintado-do-Atlântico e também da franciscana como, por exemplo, estrutura social, filopatria e a história evolutiva destas espécies. O maior desafio para conservação da franciscana é seu status de Criticamente Ameaçada no Brasil e, em relação ao golfinho-pintado-do-Atlântico é a deficiência de dados. Uma vez que ambas espécies ocorrem na porção mais desenvolvida do país, os resultados aqui obtidos têm impacto direto na conservação destas espécies, porque trazem informações que podem ser utilizadas em planos futuros de conservação e manejo. / Along Brazilian coastal waters, either franciscana and Atlantic spotted dolphins exhibited distributional gaps, which is most likely resulting from changes in the environmental features between 20 and 33°S. The former species, franciscana (Pontoporia blainvillei), is a river dolphin with restricted distribution from Brazil to Argentina, recorded mainly up to 50 m deep over the inner shelf. The second species, Atlantic spotted dolphin (Stenella frontalis), is a delphinine dolphin distributed across the Atlantic Ocean, being mainly recorded over the continental shelf. The distribution patterns that these species showed in Brazil have a direct influence on the morphology/ecology and genetic struture of both species. Different approaches were applied to address the main goal of this study, which was investigating the influence of marine environment in shaping the distribution pattern, as well as genetic strcuture of franciscana and Atlantic spotted dolphin with emphasis in the Brazilian coastal waters. In the first chapter, I investigated the franciscana distribution in Brazil using an ecological niche modeling approach. In order to do that, I performed a review of records of the species along Brazial and, updated the limits of franciscana management areas (FMAs) and distributional gaps. The results suggested that gaps are within franciscana fundamental niche and, therefore, both gaps would be suitable for franciscana. However, the narrow of continental shelf seems to be the main factor inhibiting the presence of franciscana in these areas. Furthermore, the narrowing of continental shelf play a role to explain the genetic differentiation among FMAs. In the second and third chapters, the relationship between genetic distances and geographic and environmental distances were investigated both in a restrict and a broad scale. I found genetically distinct populations 12 across Atlantic spotted dolphin distribution based on mtDNA, that are probably resulting of Isolation-by-Distance and Isolation-by-Resistance related both with contemporary and past conditions (e.g. Last Glacial Maximum). Furthermore, I investigated population struture using genomic markers (Single Nucleotide Polymorphisms, SNPs) across Western South Atlantic, Caribbean and Eastern Atlantic. The results suggested at least three different populations, and therefore, confirmed previous hypothesis of an isolated population in the southeastern Brazil. Overall, I concluded that marine envinronment, especially the extension of continental shelf, bathymetry and sea surface temperature, are the main factors that explaning the distribution pattern of franciscana and Atlantic spotted dolphin in Brazil. Besides that, other process such as, social structure and phylopatry, as well as biogeographical process might be investigated in further studies. Franciscana is considered “Critically endangered” in Brazil, and Atlantic spotted dolphin has not enough data to determine its conservation status. Since both species are recorded in the most developed region of the country with high anthropic pressure, my results could help in future management and conservation plans for both species in a regional scale.

Made available in DSpace on 2015-03-05T16:20:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 24 / Bolsa para curso e programa de Pós Graduação / Pequenos roedores formam um importante elemento faunístico na Floresta com Araucária. Em geral, considera-se que há uma forte relação entre a produção de sementes (pinhões) pela Araucaria angustifolia e a abundância desses animais. Isso devido ao alto conteúdo energético dos pinhões e alta produção dessas sementes, concentrada principalmente nos meses de inverno, quando há um decréscimo na disponibilidade de outros recursos tróficos. No presente estudo, avaliei a importância da A. angustifolia na dieta de pequenos roedores silvestres em área de Floresta com Araucária (Estação Ecológica de Aracuri-Esmeralda, no município de Muitos Capões, RS, Brasil). Realizei sete séries mensais ou bimestrais de captura de pequenos roedores (sete noites de captura por série), de outubro/2008 a julho/2009, representando períodos sem (out/08 a fev/09) e com (abr a jul/09) o recurso pinhão disponível na floresta. Utilizei 30 armadilhas do tipo “pitfall” (baldes de 62 litros) e 50 armadilhas tipo ratoeira (“snap trap”). Capt / Small rodents comprise an important faunal component of the Brazilian Araucaria Forests. It is suggested that there is a strong relation between seed production of the araucaria „pine‟ Araucaria angustifolia and small-rodent abundance. Such relation would be due to the high energetic content of this conifer‟s seeds (known as „pinhões‟) and also high seed production. Such production is concentrated during autumn and winter months, when there is reduction in overall resource availability. In the present study I evaluated the importance of A. angustifolia in the diet of wild small rodents in an area of Araucaria Forest in southern Brazil (Ecological Station of Aracuri-Esmeralda, Muitos Capões, RS, Brazil). I conducted seven capture sessions (seven nights each) monthly of bi-monthly from October/2008 to July/2009, representing a period out of A. angustifolia seed production (October to February) and during seed production (April to July). I used 30 pitfall traps (62 l) and 50 snap traps. Dur

Orientador: Marco Aurélio Pizo / Banca: Milton Cezar Ribeiro / Banca: Leonardo Liberali Wedekin / Resumo: Informações básicas a respeito da biologia dos táxons são escassas, mesmo para os ameaçados de extinção, o que dificulta a elaboração de estratégias de conservação. Dados sobre densidade e tamanho populacional estão entre os mais importantes para a conservação das aves. O barbudinho (Phylloscartes eximius) é um passeriforme endêmico da Mata Atlântica e seus principais fatores de ameaça são a perda e fragmentação de habitat. Acredita-se que esteja sob acentuado declínio populacional, fato que o coloca na categoria de "Quase Ameaça" em nível global. No entanto, até o momento, nenhum estudo sistemático que envolvesse sua demografia foi realizado. Dessa maneira, o objetivo desse capítulo foi estimar sua densidade e tamanho populacional no Parque Estadual da Cantareira (PEC), uma importante área de ocorrência da espécie no Estado de São Paulo. Foram estabelecidos 100 pontos fixos dentro de buffers de 100 m criados ao redor de todas as trilhas do PEC. Durante as amostragens dos pontos, as distâncias entre o observador e as aves foram medidas ou estimadas e, com auxílio do software DISTANCE 6.2, foram criados então modelos estatísticos, ajustando-os às distâncias amostradas. Entre maio e dezembro de 2014 foram obtidas 46 detecções da espécie em 600 pontos, amostrando cada um dos 100 pontos seis vezes cada, o que resultou nos valores estimados de 12,7 indivíduos/km² e abundância de 967 indivíduos no PEC. Esse valor de densidade é considerado baixo quando comparado com outra espécie do gênero (P. kronei; 208 indivíduos/km²), assim como outros passeriformes insetívoros da Mata Atlântica. Como estratégia de conservação, sugere-se que sua densidade, assim como estudos que visem conhecer sua estrutura demográfica, seja estimada em outros locais de ocorrência. Deve-se também realizar monitoramentos em longo prazo da espécie / Abstract: Basic information about the biology of the taxa is scarce, even for endangered ones, which hinders the development of conservation strategies. Data on population density and size are among the most important for the conservation of birds. The Southern Bristle-Tyrant (Phylloscartes eximius) is a passerine bird endemic to the Atlantic Forest and its main threat is habitat loss and fragmentation. Its populations are apparently declining, what put it in the "Near Threatened" global threat category. However, up to date, no systematic study involving its demography has been conducted. Thus, the aim of this chapter was to estimate its density and population size at the Cantareira State Park (CSP), a stronghold for the species at São Paulo State. A hundred fixed sampling points were established within 100 m buffers created around all the CSP trails. During sampling, the distance between the observer and the birds were measured or estimated and, with the help of software DISTANCE 6.2, statistical models were created and fitted to the sampled distances. Between May and December 2014, 46 detections of the species were obtained in 600 points, sampling six times each one of the 100 points, this resulted in estimated values of 12.7 individuals/ km² and abundance of 967 individuals in the CSP. This density value is considered low when compared to other species of the genus (P. kronei; 208 indivíduos/km²), as well as other insectivorous passerines of the Atlantic Forest. As a conservation strategy, studies on the density and demographic structure of the species should be performed at other places of occurrence, and these information must be associated with long-term monitoring of the species / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Custódio Domingues / Resumo: Introdução: A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) consiste em uma neoplasia hematopoiética maligna de células-tronco, caracterizada pela aquisição do gene de fusão BCR-ABL1 associado à translocação [t(9;22) (q34;q11)]. O início é insidioso com progressão lenta seguida por uma fase acelerada, que culmina na crise blástica. Os nichos da medula óssea estão relacionados com o microambiente tumoral, afetando a sobrevivência e a proliferação das células-tronco leucêmicas. Objetivos: Análise da quantidade e distribuição de células-tronco hematopoiéticas nos diferentes nichos na LMC em diferentes fases e correlação destes achados com a distribuição de galectina-3 nas fases acelerada e blástica. Material e métodos: Revisão clínico-morfológica de 20 pacientes na fase crônica da LMC, 1 paciente na fase acelerada e 1 paciente na crise blástica. Análise imunofenotípica (CD34, CD31, CD44, CD117 e galectina-3) em Tissue Microarrays para avaliação dos diferentes nichos e sua correlação com a matriz proteica. Resultados: Observou-se aumento na expressão de todos os marcadores na fase crônica quando comparados ao controle. Na fase acelerada há aumento na expressão de CD44 e galectina-3 quando comparado ao controle enquanto que na crise blástica há aumento na expressão de CD44 e CD117. Conclusão: A LMC constitui uma neoplasia mieloproliferativa em que o remodelamento dos nichos malignos favorece a manutenção das células-tronco leucêmicas. O presente estudo demonstrou elevação em todos os marcadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: Chronic Myeloid Leukemia (CML) is a malignant hematopoietic stem cell neoplasm, characterized by the acquisition of the translocation-associated BCR-ABL1 gene [t(9;22)(q34;q11)]. The onset is insidious with the slow progression followed by an accelerated phase, culminating in the blast crisis. The bone marrow niches are related to the tumor microenvironment, the survival and proliferation of the leukemic stem cells. Objectives: To analyze the amount and distribution of hematopoietic stem cells in different niches in CML in different phases and correlate these findings with the galectin-3 distribution in the accelerated and blastic phases. Material and methods: Clinical-morphological review of 20 patients in CML chronic phase, 1 patient in the accelerated phase and 1 patient in the blast crisis. Immunophenotypic analysis (CD34, CD31, CD44 and galectin-3) in Tissue Microarrays to evaluate the different niches and correlation with the protein matrix. Results: We observed the presence of all markers in the chronic phase when compared to the control. In the accelerated phase there is an increase in expression of CD44 and galectin-3, when compared to control while in blast crisis there is an increase in expression of CD44 and CD117. Conclusion: CML is a myeloproliferative neoplasm in which remodeling of malignant niches favors the maintenance of leukemic stem cells. The present study demonstrated an increase in expression of all immunohistochemical markers at differen... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O nicho endosteal da medula óssea abriga as células-tronco hemopoéticas (CTH) em quiescência/autorrenovação. As CTH podem ser classificadas em dois grupos: células que reconstituem a hemopoese em longo prazo (LT-CTH) e curto prazo (CT-CTH). Investigamos, neste trabalho, os efeitos da desnutrição proteica (DP) no tecido ósseo e a participação do nicho endosteal na sinalização osteoblasto-CTH. Para tanto, utilizamos camundongos submetidos à DP induzida pelo consumo de ração hipoproteica. Os animais desnutridos apresentaram pancitopenia e diminuição nas concentrações de proteínas séricas e albumina. Quantificamos as CTH por citometria de fluxo e verificamos que os desnutridos apresentaram menor porcentagem de LT-CTH, CT-CTH e de progenitores multipotentes (PMP). Avaliamos a expressão das proteínas CD44, CXCR4, Tie-2 e Notch-1 nas LT-CTH. Observamos diminuição da expressão da proteína CD44 nos desnutridos. Isolamos as células LT-CTH por cell sorting e avaliamos a expressão gênica de CD44, CXCR4 e NOTCH-1. Verificamos que os desnutridos apresentaram menor expressão de CD44. Em relação ao ciclo celular, verificamos maior quantidade de LT-CTH nas fases G0/G1. Caracterizamos as alterações do tecido ósseo femoral, in vivo. Observamos diminuição da densidade mineral óssea e da densidade medular nos desnutridos. A desnutrição acarretou diminuição da área média das seções transversais, do perímetro do periósteo e do endósteo na cortical do fêmur dos animais. E na região trabecular, verificou-se diminuição da razão entre volume ósseo e volume da amostra e do número de trabéculas, aumento da distância entre as trabéculas e prevalência de trabéculas ósseas em formato cilíndrico. Avaliamos a expressão de colágeno, osteonectina (ON) e osteocalcina (OC) por imuno-histoquímica, e de osteopontina (OPN) por imunofluorescência no fêmur e verificamos diminuição da marcação para OPN, colágeno tipo I, OC e ON nos desnutridos. Evidenciamos, pela técnica do Picrosírius, desorganização na distribuição das fibras colágenas e presença de fibras tipo III nos fêmures dos desnutridos, além de maior número de osteoclastos evidenciados pela reação da fosfatase ácida tartarato resistente. Os osteoblastos da região femoral foram isolados por depleção imunomagnética, imunofenotipados por citometria de fluxo e cultivados em meio de indução osteogênica. Observamos menor positividade para fosfatase alcalina e vermelho de alizarina nas culturas dos osteoblastos dos desnutridos. Avaliamos, por Western Blotting, a expressão de colágeno tipo I, OPN, osterix, Runx2, RANKL e osteoprotegerina (OPG), e, por PCR em tempo real, a expressão de COL1A2, SP7, CXCL12, ANGPT1, SPP1, JAG2 e CDH2 nos osteoblastos isolados. Verificamos que a desnutrição acarretou diminuição da expressão proteica de osterix e OPG e menor expressão gênica de ANGPT1. Avaliamos a proliferação das células LSK (Lin-Sca1+c-Kit+) utilizando ensaio de CFSE (carboxifluoresceína succinimidil ester). Foi realizada cocultura de células LSK e osteoblastos (MC3T3-E1) na presença e ausência de anti-CD44. Após uma semana, verificamos menor proliferação das LSK dos desnutridos. O bloqueio de CD44 das LSK do grupo controle diminuiu a proliferação destas em três gerações. Entretanto, nos desnutridos, esse bloqueio não afetou a proliferação. Concluímos que a DP promoveu alterações no tecido ósseo e nas CTH. Entretanto, não podemos afirmar que as alterações observadas no sistema hemopoético foram decorrentes de alterações exclusivas do nicho endosteal. / The bone marrow endosteal niche hosts hematopoietic stem cells (HSC) in quiescence/self-renewal. HSC can be classified into two groups: cells capable of renewing indefinitely (LT-HSC) or repopulating in the short term (ST-HSC). In this work, we investigated the effects of protein malnutrition (PM) on bone tissue and the involvement of the endosteal niche in osteoblast-CTH signaling. Therefore, we used mice subjected to PM induced by the consumption of hypoproteic feed. Malnourished animals presented pancytopenia and decreased concentration of serum protein and albumin. We quantified the HSC by flow cytometry and found that the malnourished ones had lower percentage of LT-HSC, ST-HSC and multipotent progenitors (MPP). We assessed the expression of the CD44, CXCR4, Tie-2 and Notch-1 proteins in LT-HSC. We observed decreased expression of CD44 protein with the malnourished ones. We isolated the LT-HSC cells by means of cell sorting and assessed the gene expression of CD44, CXCR4 and NOTCH-1. We found that malnutrition had lower expression of CD44. Regarding the cell cycle, we see greater amount of LT-HSC in the G0 and G1 phases. We characterized the changes of the femoral bone tissue in vivo. We observed a decrease in the bone mineral density and medullar density in malnourished animals. As for malnourished animals, the femoral cortical region showed a significant decrease in tissue area, periosteal and endosteal perimeter. The femoral trabecular region of malnourished animals showed decreased bone volume/tissue volume ratio, decreased trabecular number, increased trabecular separation and prevalence of rod-like trabeculae. We investigated the expression of collagen, osteonectin (ON) and osteocalcin (OC) by means of immunohistochemistry and the expression of osteopontin (OPN) by immunofluorescence and we found that malnourished animals showed decreased labeling for OPN, type I collagen, OC and ON in the cortical region of the femur. Picrosirius staining was used to analyze disorganization of collagen fibers and presence of type III fibers in the femurs of the malnourished. Cortical and trabecular regions of malnourished animals presented a higher number of osteoclasts as shown by tartrate-resistant acid phosphatase reaction. Moreover, osteoblasts were isolated from the femoral region by immunomagnetic depletion and immunophenotyped by flow cytometry and cultured in osteogenic induction medium. Results proved less positive for alkaline phosphatase and alizarin red in the cultures of osteoblasts of malnourished animals. We assessed, by means of Western blotting, type I collagen expression, OPN, osterix, Runx2, RANKL and osteoprotegerin (OPG) and, by real time PCR, the expression of COL1A2, SP7, CXCL12, ANGPT1, SPP1, JAG2 and CDH2 with the isolated osteoblasts. We found that malnutrition led to osterix and OPG decreased protein expression and lower ANGPT1 gene expression. We evaluated LSK cell (Lin-Sca1+c-Kit+) proliferation by CFSE (carboxyfluorescein succinimidyl ester). LSK cells and osteoblasts (MC3T3-E1) cocultures were performed in the presence and absence of anti-CD44. After a week, we found lower proliferation of LSK in the malnourished. The LSK CD44 blocking in the control group decreased the proliferation of these three generations. However, as for the malnourished, such blockage did not affect proliferation. We concluded that the PM has promoted changes in bone tissue and the CTH. However, we can\'t claim that the alterations observed in hematopoietic system were due to endosteal niche-only changes.

Orientador: Ingrid Koch / Resumo: Neste estudo, nós desenvolvemos marcadores moleculares e aplicamos abordagens integrativas em filogeografia e ecologia para investigar e descrever a história biogeográfica das chapadas da região oeste do Cerrado brasileiro. Utilizando como modelo duas espécies do gênero Rauvolfia L. (Apocynaceae, Rauvolfioideae), Rauvolfia weddelliana Müll.Arg. e Rauvolfia gracilis I.Koch & Kin.-Gouv., típicas destes ambientes, nós desenvolvemos um conjunto de marcadores nucleares microssatélites e sequenciamos espaçadores de cloroplasto, com os quais estimamos métricas de diversidade genética e estruturação populacional. A partir destes dados, nós reconstruímos relações filogenéticas entre as linhagens, estimamos tempos de divergência e realizamos simulações demográficas e modelos de distribuição, com o intuito de testar possíveis cenários biogeográficos. Em sequência, nós desenvolvemos modelos de distribuição potencial em escala de comunidade e análises espaciais, para estimar o impacto relativo das flutuações climáticas do Pleistoceno sobre o endemismo no Cerrado, quando comparadas a outros processos. Os resultados estão apresentados em três capítulos. No primeiro, intitulado “Development and cross-validation of microsatellite markers for Rauvolfia weddelliana Müll.Arg. (Apocynaceae) species complex”, nós descrevemos o desenvolvimento de uma biblioteca de microssatélites específica para R. weddelliana e testamos sua transferabilidade para a espécie R. gracilis. Nós isolamos dez marcadores ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study, we developed molecular markers and applied integrative approaches in phylogeography and ecology to investigate and describe the biogeographic history of the plateaus of the west region of the Cerrado in Brazil. Using as models two species of the genus Rauvolfia L. (Apocynaceae, Rauvolfioideae), Rauvolfia weddelliana Müll.Arg. and Rauvolfia gracilis I.Koch & Kin.-Gouv., typical from these habits, we developed a set of nuclear microsatellite markers and sequenced chloroplast spacers, which we used to estimate metrics of genetic diversity and population structure. From this data, we reconstructed phylogenetic relationships between lineages, estimated divergence times and conducted demographic simulations and distribution models, intending to test possible biogeographic scenarios. In sequence, we also developed community wise models of potential distribution and conducted spatial analysis to estimate the relative impact of climatic shifts of the Pleistocene on the endemism of the Cerrado, when compared to other processes. Our results are presented in three chapters. In the first, entitled “Development and cross-validation of microsatellite markers for Rauvolfia weddelliana Müll.Arg. (Apocynaceae) species complex”, we describe the development of a specific microsatellite library to R. weddelliana and tested its transferability to the species R. gracilis . We isolated ten transferable markers with high polymorphism content that may now be applied to genetics studies ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A competição interespecífica pode representar uma força importante na determinação da distribuição e da abundância de organismos na natureza. Comunidades naturais compostas por espécies que utilizam o mesmo recurso de forma semelhante supostamente são estruturadas pela competição interespecífica. Tal força interativa no decorrer da evolução pode ter levado à diferenciação de nicho entre os competidores no passado, sendo esse fator relevante para explicar a coexistência de espécies ecologicamente similares. As comunidades reprodutivas de anuros tropicais são caracterizadas por alta diversidade e grande sobreposição espacial de espécies, por isso representam um ótimo modelo de estudo para avaliar o papel da competição em escala local. Nessas comunidades reprodutivas a alta densidade de machos de diferentes espécies em atividade de vocalização poderia causar problemas de comunicação intraespecífica por interferência acústica. Por essa razão, considerando a hipótese de que o ambiente acústico pudesse ser partilhado, os pesquisadores vêm avaliando, na grande maioria das vezes de forma empírica, estratégias que as espécies de anuros podem empregar para reduzir a competição por canais acústicos no interior da comunidade, como a separação espectral (uso de diferentes faixas de frequência) e a diferenciação de uso espacial e/ou temporal. Nesse contexto, no presente trabalho estudei agregações de anuros formadas em 16 ambientes reprodutivos de seis localidades de Mata Atlântica do estado de São Paulo, com o principal objetivo de testar, por meio de modelos nulos, se ocorre partilha de nicho acústico e espacial entre as espécies. Foram gravados os cantos de anúncio dos machos de cada espécie presente nos ambientes reprodutivos, e seus sítios de vocalização foram caracterizados quanto à natureza e altura do substrato. Os testes por modelos nulos não evidenciaram qualquer padrão, tanto na ocupação do ambiente acústico como na distribuição no gradiente vertical. A propriedade acústica temporal \"duração de canto\" não reduziu a sobreposição espectral das espécies no ambiente reprodutivo, e é possível que as fêmeas, da grande maioria das espécies, localizem seus parceiros em agregações heteroespecíficas com base na frequência dominante e não sofram prejuízo com a interferência acústica. Contudo, essa é uma hipótese que ainda deve ser testada dentro das agregações reprodutivas de anuros da Mata Atlântica. Os resultados, de maneira geral, corroboraram a ideia de que fatores abióticos, heterogeneidade ambiental e diversidade filogenética podem ser mais importantes para explicar a ocorrência de espécies nas ricas agregações de anuros na Mata Atlântica. / Interspecific competition may represent a relevant force determining the distribution and abundance of organisms in nature. Natural communities composed by species that use the same resource in a similar fashion are, supposedly, structured by interspecific competition. This interactive force in the course of evolution may have led to niche differentiation among competitors in the past, and this is a relevant factor to explain the coexistence of ecologically similar species in the same habitat. Reproductive aggregations of tropical frogs are characterized by high diversity and large spatial species overlap, therefore they represent an excellent model to evaluate the importance of competition on local scale. In these communities the high density of breeding males of different species in calling activity could cause a masking effect on intraspecific acoustic communication. Therefore, considering the hypothesis that the acoustic environment could be shared, researchers have been evaluating, in most cases empirically, strategies employed by frogs to reduce competition for acoustic channels within the community, as the spectral separation (using different frequency bands) and spatial and/or temporal segregation. In this context, this paper studied the formation of anuran reproductive aggregations in 16 aquatic breeding sites belonging to six localities in the Atlantic Forest in the state of São Paulo, with the main objective of testing, using null models, whether niche partitioning occurs between species, considering spectral and spatial occupancy. It were recorded the advertisement calls of males from each species present in breeding sites, and their calling sites were characterized by their nature and height of the calling substrate. Tests for null models showed absence of significant patterns both on acoustic domain and the distribution on vertical gradient. Call duration did not reduce the species spectral overlap in the breeding sites and it is possible that reproductive females locate their specific males in heterospecific aggregations based on dominant frequency and not suffer with masking effect on acoustic communication. However, this is a hypothesis that should be tested within the anuran breeding aggregations in the Atlantic forest. All results support the idea that other factors, such as abiotic conditions, environmental heterogeneity and phylogenetic diversity, may be more decisive to explain the occurrence of species in the rich aggregations of breeding frogs in the Atlantic forest.

Made available in DSpace on 2016-04-29T14:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stella Marina Yuri Hiroki.pdf: 4656342 bytes, checksum: 129441c89b83633a1ef5afd35bf55f85 (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / The web 2.0 allied with the structure of the networks changed the relationships between people in contemporary society. Individuals began to communicate without the necessity for physical movement and were able to share interests, dreams and affinities through the digital environment. This research proposes a study of the constitution of the Polyvore website that deals with fashion and an analysis of aesthetic modifications that change fashion from this social network, the formation of aesthetic standards about fashion and relationships between people and fashion today from this website. The consumer market has become more diverse to meet the desires of the people and particularly the fashion market was also influenced by these new relationships developed within the internet and then, the social networks allowed a narrowing in the relationship between individuals. So, on fashion, the website Polyvore found users and market to operate with a fashion platform. To support this research, it were used the works of Castells, Musso, Parente and Santaella to explain the structure of the network for the development of Social Networks . On the studies about consumption of fashion information through the concepts of subjectivity and playfulness we used the works of Huizinga on the playful; Simmel, Pitombo, Mesquita and among others to analyze the playful vocation of fashion. For concepts involving subjectivity, it were used the reflections of Deleuze, Guattari, Santaella and Mesquita. On the analysis of social network Polyvore were explored the concepts of narrativity based on the work of Murray; for niche culture the references were the works about tribalism from Maffesoli and The Long Tail from Anderson and for the phenomenon of gamification, we used the thoughts of Lemos and Santaella and the testimonials of users. It was concluded from the study that social networks are still in full development and every day new platforms appears to attend the desires and interests of the users. Through the study of Polyvore, we observed that Polyvore has established itself as a major information center for fashion companies. In the investigation of the functioning of Polyvore , we realized that three major phenomena are developed by users and by the tools of the website: narrativity, culture niche and gamification / web 2.0 aliada a estrutura das redes modificou as relações entre as pessoas na sociedade contemporânea. Os indivíduos passaram a se comunicar sem a necessidade de deslocamento físico e puderam compartilhar interesses, sonhos e afinidades através do ambiente digital. A presente pesquisa propõem um estudo da constituição do website Polyvore que trata da moda e uma análise das modificações estéticas que alteram a moda a partir desta rede social, da formação de padrões estéticos sobre moda e das relações entre as pessoas e a moda nos dias de hoje a partir deste website. O mercado consumidor tornou-se mais diversificado para atender aos desejos das pessoas e, particularmente, o mercado da moda também foi influenciado por estas novas relações desenvolvidas dentro da internet e assim, criaram-se as redes sociais que possibilitaram um estreitamento nos relacionamento entre os indivíduos. Desta forma, na moda, o website Polyvore encontrou usuários e mercado para atuar com uma plataforma de moda. No suporte à pesquisa estão as obras de Castells, Musso, Parente e Santaella ao se tratar da estrutura da Redes para o desenvolvimento das Redes Sociais. Nos estudos relativos ao consumo da informação de moda através dos conceitos de ludicidade e subjetividade utilizou-se as obras de Huizinga sobre o lúdico; Simmel, Pitombo, Mesquita e entre outros para analisar a vocação lúdica da moda. Para os conceitos que envolvem a subjetividade, foram utilizada as reflexões de Deleuze, Guattari, Santaella e Mesquita. Na análise da rede social Polyvore foram explorados os conceitos de narratividade com base na obra de Murray; para a cultura de nicho as referências foram os trabalhos de tribalismo de Maffesoli e A Cauda Longa de Anderson e para o fenômeno de gamification, utilizou-se os pensamentos de Lemos e Santaella e os depoimentos dos usuários. Concluiu-se a partir do estudo que as redes sociais ainda estão em pleno desenvolvimento e a cada dia são apresentadas novas plataformas para atender aos anseios e interesses dos usuários. Através do estudo do Polyvore, observamos que o Polyvore consolidou-se como uma grande central de informações para as empresas de moda. Na investigação do funcionamento do Polyvore, percebemos que três grandes fenômenos são desenvolvidos pelos usuários e pelas ferramentas disponbilizadas: a narratividade, a cultura de nicho e o gamification