GH and its principal mediator IGF-I have important effects on metabolic and cardiovascular (CV) status. While acquired GH deficiency (GHD) is often associated to increased CV risk, the consequences of congenital GHD are not known. We have described a large group of patients with isolated GHD (IGHD) due to a homozygous mutation (c.57+1G>A) in the GH releasing hormone receptor gene, and shown that adult GH-naïve individuals have no evidence of clinically evident premature atherosclerosis. To test weather subclinical atherosclerosis is anticipated in untreated IGHD, we ruled a cross-sectional study of 25 IGHD and27 adult controls matched for age and gender. A comprehensive clinical and biochemical panel and coronary artery calcium scores by multi-detector tomography were evaluated. Height, weight, IGF-I, homeostasis model assessment of insulin resistance, creatinine and creatinokinase were lower in IGHD group. Median and interquartile range of calcium scores distribution was similar in the two groups: IGHD 0 (0) and control 0 (4.9). The vast majority of the calcium scores [20 of 25 IGHD (80%) and 18 of 27 controls (66.6%)] were equal to zero (difference not significant). There was no difference in the calcium scores classification. None of IGHD subjects had minimal calcification, which were present in 4 controls. Three IGHD and four controls had mild calcification. There were two IGHD individuals with moderate calcification and one control with severe calcification. Our study provides evidence that subjects with congenital isolated lifetime and untreated severe IGHD do not have accelerated subclinical coronary atherosclerosis. / O GH e seu principal mediador IGF-I têm importantes efeitos no perfil metabólico e cardiovascular (CV). Enquanto a deficiência adquirida do hormônio do crescimento (DGH) está frequentemente associada ao aumento no risco CV, as consequências da deficiência congênita não são conhecidas. Descrevemos um grande grupo de pacientes com deficiência isolada de hormônio do crescimento (DIGH) secundária a mutação homozigótica (c.57+1G>A) no gene do receptor do hormônio liberador do GH, e mostramos que indivíduos adultos depletados de GH não têm evidência de aterosclerose prematura clinicamente manifesta. Para testar se a aterosclerose subclínica se antecipa na DIGH não tratada, realizamos um estudo transversal com 25 portadores de DIGH e 27 controles adultos pareados por sexo e idade. Características clínicas e bioquímicas e escore de cálcio (EC) coronário pela tomografia computadorizada por múltiplos detectores, foram avaliados. Altura, peso, IGF-I, modelo de homeostase de avaliação da resistência a insulina (HOMAIR), creatinina e creatinoquinase foram menores no grupo DIGH. Mediana e intervalo interquartis da distribuição do EC foram similares entre os dois grupos: DIGH 0(0) e controles 0 (4.9). A vasta maioria dos EC [20 de 25 DIGH (80%) e 18 de 27 controles (66.6%)] foi igual a zero (diferença não significativa). Não houve diferença na classificação de EC. Nenhum dos indivíduos portadores de DIGH apresentou calcificação mínima, a qual estava presente em 4 controles. Três portadores de DIGH e 4 controles tinham calcificação leve. Dois portadores de DIGH com moderada calcificação e 1 controle com calcificação severa. Nosso estudo fornece evidências de que indivíduos com DIGH congênita, isolada, vitalícia e não tratada não têm aterosclerose coronariana subclínica precoce.

Orientadores: Jose Wilson Magalhães Bassani, Rosana Almada Bassani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Eletrica e de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:06:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo_RafaeldeAlmeida_M.pdf: 2095157 bytes, checksum: 9fa58fb47d65f96bb946104c547ac025 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A infusão intravenosa de solução hiperosmótica de NaCI tem se mostrado eficaz como tratamento único para a condição de choque hemorrágico, mas o conhecimento de seus efeitos sobre o coração ainda é limitado. Neste trabalho, desenvolvemos instrumentação para registro de encurtamento celular e investigamos o efeito direto de soluções hiperosmóticas de NaCI sobre a atividade contrátil e transientes de Ca2+ em miócitos ventriculares isolados de rato. A amplitude do encurtamento celular (?EC) e dos transientes de Ca2+ (?[Ca2+]i, medida com indo-1) foi registrada em miócitos estimulados a 0,5 Hz antes e depois do incremento da osmolaridade extracelular em 85 mOsm/l pela adição de sacarose (HiperSac) ou NaCI (HiperNac) à solução de perfusão. Variações do conteúdo de Ca2+ e da liberação fracional de Ca2+ do retículo sarcoplasmático (RS) também foram avaliadas. Simulação computacional (LabHeart v. 4.9.5) de transientes de Ca2+ e curva corrente-tensão da troca Na+-Ca2+ (NCX) foram usados para auxiliar o entendimento dos resultados. A perfusão dos miócitos com solução HiperNac provocou redução transitória, seguida de recuperação de ?[Ca2+]i e ?EC. Por outro lado, a perfusão com HiperSac reduziu de maneira persistente a ?EC, sem alterar ?[Ca2+];. O aumento da liberação fracional de Ca2+ do RS (p< 0,05) provocado pela solução HiperNac pode ter contribuído para a recuperação de ?[Ca2+];. A hiperosmolalidade per se prolongou o relaxamento, sem afetar a cinética de {Ca2+]j, possivelmente por aumento da viscosidade intracelular. A queda mais lenta de [Ca2+]; durante o transiente induzido por cafeína é compatível com redução da extrusão de Ca2+ via NCX devida ao acúmulo intracelular lento de Na+ na condição de hiperosmolaridade. Os resultados da simulação computacional estão de acordo com esta hipótese / Abstract: Intravenous injection of hyperosmolar NaCI solution has been used as the sole treatment for hemorrhagic shock, but its effects on heart muscle are not completely elucidated. In this work, we developed instrumentation for cell shortening measurement and investigated the direct effects of hyperosmolar NaCI solution on contractile activity and cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in isolated rat ventricular myocyte. Cell shortening (LlEC) and Ca2+ transient amplitude (?[Ca2+]j, measured with indo-1) were recorded in myocytes stimulated at 0.5 Hz before and after increasing extracellular osmolarity in 85 mOsm/l by sucrose (HiperSac) or NaCI (HiperNac) addition to the perfusate. Sarcoplasmatic reticulum (RS) Ca2+ load and fractional release were estimated. Computational simulation (LabHeart, v. 4.9.5) of Ca2+ transient and Na+-Ca2+ exchange voltage-current relationship was performed. HiperNac perfusion caused transient decrease of ?[Ca2+]i and LlEC, followed bya gradual recovery. HiperSac perfusion caused a monophasic decrease of LlEC, but did not change ?[Ca2+]i. Increased fractional RS Ca2+ release (pc:; 0.05) in the presence of HiperNac may have contributed to the delayed recovery of ?[Ca2+]i. Hyperosmolarity per se prolonged cell relaxation, but did not affect [Ca2+]i decline kinetics, possibly by increased intracellular viscosity. Slower [Ca2+]i decay during caffeine-induced transients indicates decreased NCX-mediated Ca2+ efflux transport following progressive intracellular [Na+] accumulation due to extracellular hyperosmolarity. Computational simulation results agree with this hypothesis / Mestrado / Engenharia Biomedica / Mestre em Engenharia Elétrica

GH is important for the development and function of the immune system, but there is controversy on whether GH deficiency (GHD) is associated to immune disorders. A model of isolated GHD (IGHD), without others deficits or hormones replacement, may exclude if the lack of GH is associated with increased susceptibility to infections or with an altered responsiveness of the immune response. Our objective was to study the frequency of infectious diseases and the cellular and humoral immune response in adults with congenital, untreated IGHD. The study was performed in two steps: in the first, a cross-sectional study, 35 adults IGHD due to a homozygous mutation in the GHRH receptor gene and 31 controls were submitted to a clinical questionnaire to evaluate past and current history of infectious diseases, physical examination, and serology for tripanosomiasis, leishmaniasis, HIV, tetanus, hepatitis B and C. The only exclusion criterion for this first step was age less than 20 years old. In the second step, a study of cases with a control group for comparison of immune cellular and humoral response between the groups. The exclusion criteria were age less than 20 and more than 65 years old; diagnosis of HIV, infection or acute diseases; history of malignancies; autoimmune diseases; glucocorticoid and anti-allergic medications use; or current pregnancy. The immune response was evaluated in a subset of these subjects by serum total IgG, IgM, IgE and IgA measurement, skin tests (Protein Purified Derived (PPD), streptokinase and candidin), and response to vaccination for hepatitis B and tetanus (in individuals with negative serology), and to bacillus Calmette-Guérin (BCG) in subjects nonreactive to PPD. There was no difference between the groups in history of infectious diseases and baseline serologic data. IGHD subjects had lower total IgG, but within normal range, and a smaller induration diameter in streptokinase skin test, but no difference in the frequency of positivity to streptokinase (IGHD 2 in 21; controls 5 in 20). There was no difference in the positivity to PPD (IGHD 4 in 24; controls 10 in 28) and to candidin (IGHD 3 in 21; controls 1 in 19), or in the response to any of the vaccinations between the groups. The controls had a higher frequency of one positive skin test. In conclusion, adult untreated IGHD did not present an increased frequency of infections or significant alterations in the immunological tests, but we found lower total IgG levels and lower positivity to at least one skin test, without detectable clinical impact. / O hormônio do crescimento (GH) é importante para o desenvolvimento e função do sistema imunológico, mas há controvérsias se a deficiência do GH (DGH) é associada a distúrbios imunes. Um modelo de deficiência isolada do GH (DIGH), sem outros déficits ou reposições hormonais, excluiria efeitos confundidores na análise das ações do GH na imunidade, podendo esclarecer se a ausência do GH é associada a uma maior susceptibilidade a infecções ou a uma alteração na resposta imunológica. Nosso objetivo foi estudar a frequência de doenças infecciosas e a resposta imune celular e humoral em adultos com DIGH congênita e não tratada. O estudo foi realizado em duas partes: na primeira, estudo transversal com 35 adultos DIGH devido à mutação homozigótica (C.57 + 1G > A) no gene do receptor do hormônio liberador do GH (GHRH) e 31 controles, que foram submetidos a um questionário clínico para avaliar a história prévia e atual de doenças infecciosas, exame físico e foram dosadas as sorologias para doença de Chagas, leishmaniose, HIV, tétano, hepatites B e C. O único critério de exclusão para esta primeira etapa foi ter menos de 20 anos de idade. Na segunda parte, foi feito um estudo de casos com grupo controle para comparação da resposta imunológica celular e humoral entre os grupos. Os critérios de exclusão foram ter menos do que 20 e mais do que 65 anos de idade, diagnóstico de HIV, infecções agudas, malignidades, doenças autoimunes como artrite reumatóide, lúpus eritematoso sistêmico, uso de medicações antialérgicas e glicocorticóides ou condições como gravidez. A resposta imune foi avaliada em um subgrupo destes indivíduos através das dosagens das imunoglobulinas séricas: IgG total, IgA, IgE e IgM, de testes cutâneos (Derivado Proteico Purificado (PPD), estreptoquinase e candidina), e da resposta à vacinação para hepatite B e tétano (nos indivíduos com sorologia negativa) e ao bacilo Calmette-Guérin (BCG), nos indivíduos que tivessem PPD negativo. Não houve diferença entre os grupos na história de doenças infecciosas e dados sorológicos basais. Indivíduos com DIGH apresentaram menores níveis de IgG total, mas dentro da variação normal e menor diâmetro da induração no teste cutâneo com estreptoquinase, embora sem diferença na positividade a este teste (DIGH 2 em 21; controles 5 em 20). Também não houve diferença na positividade ao PPD (DIGH 4 em 24; controles 10 em 28) e à candidina (DIGH 3 em 21; controles 1 em 19) nem na resposta às vacinações entre os grupos. Os controles tiveram uma maior frequência de um teste cutâneo positivo. Em conclusão, adultos com DIGH não tratada não apresentaram uma maior frequência de infecções ou alterações significantes nos testes imunológicos, mas apresentaram menores níveis de IgG total e menor positividade a pelo menos um teste cutâneo, embora sem impacto clínico.

Neste trabalho,estudamos o índice de Poincaré-Hopf, definido para singularidades isoladas de campos de vetores sobre variedades diferenciáveis. Além disso, investigamos algumas definições de índices de campos de vetores definido sem variedades singulares, como o índice de Schwartz e o índice GSV. Estudaremos estes invariantes no caso específico em que (V; 0) é um germe de uma interseção completa com singularidade isolada na origem / In this work, we study thePoincaré-Hopf index, defined for isolated singularities of vector fields on manifolds. Moreover, we investigate some definitions of indices of vector fields defined on singular varieties, as the Schwartz index and the GSV index. We study these invariants in the case where (V; 0) is a germ of a complete intersection with an isolated singularity at the origin

Nesta tese abordaremos dois tipos de problemas relacionados aos célebres Teorema da Fibração de Milnor e Teorema da Fibração de Milnor-Lê para o caso real com valores críticos não isolados. Primeiramente, asseguramos fibrações do tipo Milnor-Lê para F : (Xm, 0) &rarr; (Yn, 0), germe de aplicação subanalítico com X e Y espaços subanalíticos sobre C \\ {0} uma curva subanalítica conexa em Y e sobre um subespaço analítico suave W &sub; Y de dimensão p, n &ge; p &ge; 2, sob algumas condições. Em particular, mostramos a existência das fibrações sobre o discriminantes de germe de aplicações subanalíticos, caso esse ainda não estudado na literatura, normalmente o conjunto dos valores críticos são desconsiderados. Finalizando nossa análise da categoria subanalítica, certificamos que existe a fibração de Milnor-Lê para f : (X, 0) &rarr;(Rp, 0), com dimensão de X maior que p &ge; 2, subanalítica e X subanalítico com valores críticos não isolados, definindo d-regularidade. Abordamos estes problemas utilizando resultados de campos de vetores rugosos. Em uma segunda etapa apresentamos um novo critério necessário e suficiente para verificar a importante propriedade de transversalidade de um germe de aplicação real f de classe Cl, l &ge; 1. Fazendo uso também de uma recente ferramenta desenvolvida, a D-regularidade, verificamos condições para a existência das fibrações do germe de aplicação &Psi; F, X : (Cn, 0) &rarr; (C, 0) não holomorfo, dado por &Psi; (z, z&#772;) = &Sigma;nj=1 kjtjzj a<sub<jzj bj, aj, bj &ge; 0 com aj = bj para pelo menos um j e aj &ne; bj para ao menos um j, com j = 1, ... , n. Observamos que &Psi;F, X são polinômios homogêneos pesados mistos com R+ -ação. Consideramos &Psi;F, X : (R2n ,0) &rarr; (R2, 0) germe de aplicação analítico real. Estudamos a topologia dessas fibrações nos reais, constatando que o discriminante tem dimensão 1 e por isso tem ambas as fibrações conhecidas. Por fim exibimos um homeomorfismo entre as fibras dos valores regulares e dos valores críticos. / In this thesis two types of problems related to the famous Milnor Fibration Theorem and Milnor-Lê Fibration Theorem for the real case with non-isolated critical values will be addressed. Primarily, we assure the fibrations of type Milnor-Lê for the germ F : (X, 0) &rarr; (Y, 0) subanalytic with X and Y subanalytic spaces on C \\ {0} a subanalytic connected curve in Y and over a smooth analytical subspace W &sub; Y of dimension p, n &ge p &ge; 2, under some conditions. In particular, we show the existence of the fibrations about the discriminants of subanalytical map-germ, if this not been studied in the literature, usually the set of critical values are disregarded. Finalizing our analysis of this subanalytic category, we certify that there exist the fibrations of type Milnor-Lê to f : (X, 0) &rarr; (Rp, 0), with dimension of X greater than p &ge; 2, subanalytic and X subanalytic with non-isolated critical values, setting d -regularity. We address these problems using results of the rugose vector fields. In a second part, we present a new necessary and sufficient criterion to verify the important transversality property of a real map-germ f of class Cl, l &ge; 1. Using a recent developed tool, D-regularity, we verify conditions for the existence of the fibrations of map-germ &Psi; F, X : (Cn, 0) &rarr; (C, 0) non holomorphic, given by &Psi; (z, z&#772;) = &Sigma;nj=1 kjtjzj ajzb<sup<j, aj, bj &ge; 0 with aj = bj for at least one j and aj &ne; bj for at leeast one j = 1, ..., n. We note that &Psi; F, X are mixed weighted homogeneous polynomials with R+-action. We consider &Psi;F, X : (R2n, 0) &rarr; (R2, 0) real analytic map-germ. We studied the topology of these fibrations, noting that the discriminant has dimension 1 and therefore has both the fibrations known. Lastly we show a homeomorphism between the fibers of the regular values and the critical values for a case special this family.

O imprinting genômico é um processo regulado epigeneticamente que faz com que os alelos sejam expressos de acordo com a sua origem parental. No cromossomo 11 (11p15.5), existem duas regiões controladoras de imprinting (ICR1 e ICR2), que controlam a expressão de genes marcados (imprinted). Os padrões de metilação dessas regiões podem ser alterados pela dissomia uniparental (DUP), que ocorre quando parte de ou um cromossomo inteiro do mesmo par de homólogos é herdado de somente um genitor. Erros mitóticos podem gerar mosaicismo com uma linhagem de células com DUP e a outra biparental. As síndromes de Silver-Russell (SSR) e Beckwith-Wiedemann (SBW) são doenças de alterações do imprinting genômico, envolvendo os cromossomos 7 (SSR) e 11 (SSR e SBW). A Hemihiperplasia Isolada (HHI) parece corresponder a uma forma mais leve da SBW.. No presente trabalho, foi realizada uma varredura in silico para busca de novos microssatélites nos cromossomos 7 e 11, e selecionados seis do tipo tetra ou pentanucleotídeos, no cromossomo 7, e 12, no cromossomo 11. O perfil de metilação nas ICRs foi verificado por três técnicas distintas: MS-MLPA, DESM-RT e por uma nova estratégia desenvolvida neste trabalho denominada DESM-QFPCR. Foram avaliados 32 pacientes com SBW, 16 HHI, 20 com SSR e seus pais, quando disponíveis, além de um paciente com fenótipo aparentemente normal com cariótipo 46,XX/46,XY e cuja placenta apresentou displasia mesenquimal placentária (DMP) a qual está associada à SBW. Os novos marcadores apresentaram alta taxa de heterozigose (média de 70%), e ausência das características indesejáveis dos dinucleotídeos predominantemente utilizados para detecção de DUP. Seis marcadores estão entre genes controlados pelas ICRs 1 e 2. A DUP paterna do cromossomo 11 (DUPpat Cr11), sempre restrita a 11p15.5, foi responsável por 13% dos casos de HHI e 19% dos de SBW. As alterações estruturais foram confirmadas por minissequenciamento quantitativo de SNPs e por MS-MLPA. Um paciente apresentou duplicação paterna abrangendo ambas as ICRs. Uma deleção não descrita anteriormente no gene CDKN1C foi observada em uma paciente e sua mãe. Para os pacientes com DUPpat Cr11, foram investigados microssatélites em 13 autossomos e nos cromossomos sexuais para detecção de mosaicismo global. Apenas o paciente com DMP apresentou mosaicismo [células androgenéticas (25-30%) e biparentais], sugerindo evento de dupla fertilização. Nos pacientes com SSR, foi observada hipometilação na ICR1 em 25% dos casos. Para a SBW, foi observada hipermetilação na ICR1 e hipometilação na ICR2 em 6% e 42% dos casos, respectivamente. Os casos com DUPpat Cr11 apresentaram alteração de metilação em ambas as ICRs. As frequências de alterações (epi) genéticas encontradas foram semelhantes às previamente descritas na literatura para as SBW, SSR e HHI. Neste trabalho, foi desenvolvida uma nova técnica para estudo de metilação do DNA de ICRs e testados marcadores microssatélites inéditos na região 11p15, que quando comparados com metodologias mais tradicionais de avaliação, como DESM-RT e MS-MLPA, mostraram elevada correlação dos resultados. Os achados mostram a complexidade da etiologia das doenças estudadas no presente trabalho e os dados moleculares serão imprescindíveis para o aconselhamento genético adequado para cada caso em particular e suas famílias. / Genomic imprinting is a epigenetically regulated process where the alleles are expressed in terms of their parental origin. On chromosome 11 (11p15.5) there are two regions controlling imprinting (ICR1 and ICR2), which control imprinted gene expression. The methylation patterns in these regions may be altered by uniparental disomy (UPD), which occurs when part or whole chromose is inherited from only one parent. Mitotic errors can lead to mosaicism with a cell line with DUP and other, biparental. The Silver-Russell syndrome (SRS) and Beckwith-Wiedemann syndrome (BWS) are diseases of abnormal genomic imprinting, involving chromosomes 7 (SSR) and 11 (SRS and BWS). The Isolated Hemihiperplasia (IHH) seems to correspond to a milder form of the SBW. In the present study, we performed an in silico scan to search for new microsatellites on chromosomes 7 and 11, and selected six tetra- and/or pentanucleotides on chromosome 7, and 12 on chromosome 11. The pattern of methylation in ICRs was verified by three different techniques: MS-MLPA, DESM-RT and a new strategy developed in this work called DESM-QFPCR. We evaluated 32 patients with BWS, HHI 16, with 20 SSR and their parents, when available, and one patient with apparently normal phenotype with karyotype 46, XX/46, XY and whose placenta showed placental mesenchymal dysplasia (PMD) which is associated with SBW. The new markers showed a high heterozygosity rate (average 70%), and absence of undesirable characteristics of dinucleotides, predominantly used for detection of DUP. Six markers spans genes controlled by the ICRs 1 and 2. The paternal UPD for chromosome 11 (UPDpat Cr11), all restricted to 11p15.5, was responsible for 13% of cases of HHI and 19% of the SBW. Structural changes were confirmed by quantitative SNaPshot sequencing of SNPs and MS-MLPA. One patient had paternal duplication encompassing both ICRs. A not previously described deletion in the gene CDKN1C was observed in one patient and her mother. For patients with DUPpat Cr11, microsatellites were investigated in 13 autosomes and sex chromosomes to detect wide mosaicism. Only patients with DMP showed mosaicism [androgenetic cells (25-30%) and biparental], suggesting double fertilization. In patients with SRS, ICR1 hypomethylation was observed in 25% of cases. For BWS, ICR1 hypermethylation and in ICR2 hypomethylation were observed 6% and 42% of cases, respectively. All cases with UPDpat Cr11 presented abnormal methylation in both ICRs. The (epi) genetic change frequencies were similar to those previously described in the literature for BWS, SRR andIHH. In the present work, we developed a new technique to study DNA methylation of ICRs and tested novel microsatellite markers in the 11p15 region, which showed high correlation of results, when compared with more traditional methods such as RT-DESM and MS-MLPA. The results show the complex etiology of these diseases and the molecular data are essential for appropriate patient and families genetic counseling.

O Hipogonadismo hipogonadotrófico isolado (HHI) congênito é uma síndrome clínica rara causada por defeito na produção ou secreção do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) pelo hipotálamo ou por resistência hipofisária à ação do GnRH. O HHI é mais prevalente em homens e cerca de 50% a 60% dos indivíduos afetados apresentam anosmia ou hiposmia associada, caracterizando a síndrome de Kallmann. Diversos genes já foram associados à patogênese do HHI congênito, porém, a maioria dos casos ainda permanece sem diagnóstico molecular definido. Até recentemente, a identificação das causas genéticas dos pacientes com HHI era realizada por sequenciamento de genes candidatos, empregando a técnica de Sanger. No entanto, com o número crescente de genes descritos nos últimos anos, esse processo vem se tornando impraticável. Novas metodologias de sequenciamento (sequenciamento paralelo em larga escala) foram desenvolvidas permitindo a genotipagem simultânea de diversas regiões, com maior velocidade e menor custo relativo. O atual projeto foi desenvolvido com o objetivo de rastrear genes candidatos em pacientes portadores de HHI congênito utilizando-se o sequenciamento paralelo em larga escala, visando ampliar o conhecimento genético do HHI. Realizamos o sequenciamento paralelo em larga escala (SPLE) de 130 pacientes com HHI congênito utilizando um painel contendo 36 genes relacionados ao HHI. Inicialmente, identificamos 104 variantes, potencialmente patogênicas em 77 pacientes (59,2%). Após a filtragem inicial, foi realizada uma análise individualizada de cada variante e com isso foram mantidos 41 (31,5%) pacientes com variantes classificadas como patogênicas ou provavelmente patogênicas. Os genes KAL1, FGFR1, CHD7 e GNRHR foram os mais frequentemente afetados. Esses resultados confirmam a importância dos genes classicamente associados ao HHI congênito. Destaca-se a alta prevalência de variantes no CHD7 (10,8%), gene bastante extenso, levando à dificuldade técnica de sequenciá-lo pelos métodos tradicionais, até então sem estudos nessa coorte. O CHD7 é um gene originalmente associado à complexa síndrome de CHARGE, porém, nos últimos anos vem sendo cada vez mais associados ao HHI congênito. Dentre os resultados, ressaltamos a identificação de uma mutação inédita no gene GNRH1, causa rara de HHI, e a identificação de variantes deletérias no gene IGSF10, recentemente descrito associado ao atraso puberal, mas sem papel claro no fenótipo de HHI, em dois pacientes que tiveram reversibilidade do hipogonadismo. Variantes provavelmente patogênicas em genes com poucas descrições ou até mesmo sem relatos de associação ao fenótipo de HHI (SPRY4, FLRT3, IGSF1, NSMF, SOX10 e OTX2) também foram identificadas nessa coorte, ampliando nosso conhecimento genético do HHI. A oligogenicidade, previamente descrita com prevalência de 2,5% a 7%, em nosso estudo esteve presente em 22% dos pacientes, demonstrando uma ampliação das descrições de oligogenicidade quando comparados aos estudos prévios utilizando somente a técnica de Sanger. A nova técnica de sequenciamento genético (SPLE), utilizada em nosso estudo, foi capaz de ampliar de 22% para 31,5% (41 em 130 pacientes) a porcentagem de pacientes com diagnóstico molecular definido, quando comparado aos dados prévios utilizando a técnica de Sanger, mostrando-se rápida, confiável e eficaz / Congenital isolated hypogonadotropic hypogonadism (IHH) is a rare condition caused by GnRH deficiency, due to defective hypothalamic gonadotropin-releasing hormone (GnRH) production or secretion, or by pituitary resistance to the GnRH action. Congenital IHH is more prevalent in men and about 50% to 60% of affected individuals present with associated anosmia or hyposmia, characterizing Kallmann\'s syndrome. Several genes have already been associated with the pathogenesis of congenital IHH, but most cases still remain without a molecular diagnosis. Until recently, identification of the genetic causes of IHH was performed by sequencing candidate genes using the Sanger technique. However, with the growing number of genes and the genetic complexity of IHH, it has become almost impossible to keep the screening of all candidate genes updated using the traditional techniques. The advent of next-generation sequencing (NGS) has allowed the simultaneous genotyping of several regions, faster and with lower relative cost. The present project was developed with the objective of tracking candidate genes in patients with congenital IHH using large-scale parallel sequencing, in aiming to increase the genetic knowledge of this rare condition. A total of 130 unrelated patients with IHH was studied by targeted NGS, using a panel containing 36 IHH associated genes. Initially, 104 potentially pathogenic variants were identified in 77 patients (59.2%). However, after an individualized analysis of each variant, the number of patients considered to carry pathogenic or probably pathogenic variants dropped to 41 (31.5%). The genes KAL1, FGFR1, CHD7 and GNRHR were the most frequently affected and these results confirm the importance of genes classically associated with IHH. It is noteworthy the high prevalence of variants in CHD7 (10.8%), a rather extensive gene, leading to technical difficulty of sequencing by traditional methods, which had not been studied in this cohort. CHD7 is the causative gene of CHARGE syndrome, however it has been recently identified in a growing number of congenital IHH patients with or without additional features of the syndrome. Among the results, we emphasize a novel mutation in the GNRH1 gene, a rare cause of IHH, and the identification of deleterious variants in the IGSF10 gene, recently associated with pubertal delay but without a clear role in the IHH phenotype, in two patients with reversible hypogonadism. Probably pathogenic variants in genes with few descriptions or even no reports of association with the IHH phenotype (SPRY4, FLRT3, IGSF1, NSMF, SOX10 and OTX2) were also identified in this cohort, increasing the genetic knowledge of IHH. Oligogenicity, previously described with a prevalence of 2.5% to 7%, was observed in 22% of our patients, demonstrating an increase in oligogenicity cases when compared to previous studies using only the Sanger sequencing. In conclusion, targeted NGS was able to increase the percentage of patients with molecular diagnosis from 22% to 31.5% in our cohort when compared to the previous data using the Sanger sequencing, and has been shown to be a fast, reliable and effective tool in the molecular diagnosis of congenital IHH

O objetivo deste trabalho foi aperfeiçoar o filtro lento em escala domiciliar (FLD) à realidade das comunidades isoladas brasileiras com o uso conjunto de pré-tratamento e pós-tratamento acessíveis. As espécies cactáceas Opuntia cochenillifera e Opuntia ficus indica foram avaliadas em ensaios de tratabilidade como coagulantes naturais em pó. A melhor condição para remoção de turbidez e cor aparente foi com 30 mg.L-1 de O. cochenillifera em pH sem a necessidade de correção (± 6,8). O pré-tratamento adaptado às comunidades isoladas utilizando o coagulante natural apresentou valores compatíveis de turbidez (7,83 ± 2,32 uT) para inserção aos filtros. Os FLDs em fluxo contínuo (taxa de filtração de 1,22 m³/m².dia) e em fluxo intermitente (taxa de filtração máxima de 2,79 m³/m².dia) demonstraram redução da turbidez, da cor aparente, dos coliformes totais e da Escherichia coli e produziram água filtrada com ausência de cistos de Giardia spp. e oocistos de Cryptosporidium spp. O FLD em fluxo contínuo teve a maior eficiência em relação à turbidez (± 81,2%); enquanto que o FLD operado em fluxo intermitente apresentou melhores eficiências para a remoção da cor aparente (48,4%), dos coliformes totais (2,60log ± 0,99) e da E. coli (2,86log ± 0,79). Os principais microrganismos atuantes no schmutzdecke dos FLDs foram ciliados (como, por exemplo, a Vorticella sp.), nematódeos e rotíferos. A esponja-vegetal (Luffa cylindrica) e o quiabo (Hibiscus esculentus) foram ponderados como desinfetantes alternativos para o pós-tratamento aos FLDs. As sementes da L. cylindrica e o fruto da H. esculentus foram avaliados através do preparo do extrato e as folhas da L. cylindrica através do preparo em pó. A melhor condição para inativação de E. coli foi com 1 g.L-1 do extrato de H. esculentus em pH sem a necessidade de correção (± 6,8) durante um tempo de contato de 30 min. Essa condição forneceu 1,12log (± 0,16) para a inativação de E. coli, contudo não afetou a viabilidade dos (oo)cistos de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Em ensaios toxicológicos com Chironomus xanthus, a água filtrada não apresentou toxicidade. / The aim of this study was to improve the household-scale slow sand filter (HSSF) to the reality of isolated Brazilian communities with combined use of pre-treatment and post-treatment approachable. Cacti species Opuntia cochenillifera e Opuntia ficus indica were evaluated in Jar tests as powder natural coagulants. The best condition for turbidity and apparent color removal was with 30 mg.L-1 of O. cochenillifera at pH without correction (± 6,8). Pre-treatment adapted to isolated communities using natural coagulant showed compatible turbidity values (7.83 ± 2.32 uT) for insertion into the filters. The HSSFs with continuous (filtration rate of 1,22 m³/m².day) and intermittent operation (maximum filtration rate of 2,79 m³/m².day) demonstrated reductions in turbidity, apparent color, total coliforms and Escherichia coli and produced filtered water without Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts. The HSSF in continuous operation had the highest turbidity efficiency (± 81.2%); while the HSSF in intermittent operation had showed better efficiencies for the apparent color (48,4%), total coliforms (2,60log ± 0,99) and E. coli (2,86log ± 0,79). The main microorganisms active in the schmutzdecke were ciliates (for example, Vorticella spp.) nematodes and rotifers. Luffa cylindrica and Hibiscus esculentus were evaluated as alternative disinfectant for post-treatment to HSSF. L. cylindrica seed and H. esculentus fruit were tested as extract and L. cylindrica leave was tested powder. The best condition for E. coli inactivation was with 1 g.L-1 of H. esculentus extract at pH without correction (± 6,8) during 30 min. This condition provided 1,12log (± 0,16) for E. coli inactivation, however did not affect Giardia spp. cysts and Cryptosporidium spp. oocysts viability. In toxicological tests with Chironomus xanthus, the filtered water showed no toxicity.

Orientador: Mara Martins Jacomeli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Educação / Made available in DSpace on 2018-08-22T14:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_MariaAngelica_D.pdf: 3012362 bytes, checksum: abe1b7b90e84ccee1e1bbbcafcc0b9cb (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Esta pesquisa tem por objeto a organização do trabalho didático nas escolas isoladas paulistas. Fundamentando-se no método histórico-crítico, estabeleceu a organização do trabalho didático como categoria de análise, objetivando analisar a história e a forma como as escolas isoladas se organizaram didaticamente, no período de 1893 a 1932. Ao partir da tese de que as escolas isoladas carregaram vestígios do método lancasteriano (ou mútuo), tornou-se necessário um recuo ao Período Imperial, aprofundando o estudo sobre as escolas de primeiras letras para, em seguida, investigar as escolas isoladas. Para tanto, foi realizada uma revisão bibliográfica tendo como referência teórica os trabalhos de Saviani (2008); Alves (2001, 2005); Neves (2003); Marcílio (2005); Bastos e Faria Filho (1999); Souza (1998, 2006, 2009); Reis Filho (1995); Infantosi (1983); Nagle (1976); Schelbauer (1998). Os documentos constantes no Arquivo do Estado de São Paulo (AESP) foram as fontes primárias consultadas. No primeiro período republicano, a necessidade de universalização da instrução pública levou à criação dos grupos escolares, que atendiam, inicialmente, os grandes centros urbanos; para os centros menores e bairros populosos, criaram-se as escolas reunidas. Nos bairros periféricos, nas vilas e áreas rurais foram adotadas as escolas isoladas cuja função era dar uma formação básica - leitura, escrita e as operações elementares da aritmética - à população pobre, residente nesses locais. A organização do trabalho didático, nessas escolas, se aproximava da organização adotada nas escolas de primeiras letras sob o método mútuo presentes no Período Imperial. A história das escolas isoladas está marcada por aspectos tanto de suas antecessoras, as escolas de primeiras letras, quanto da moderna escola burguesa. Funcionando em casebres, elas herdaram das escolas de primeiras letras, principalmente, o atendimento, em uma só sala, de crianças em diferentes níveis de adiantamento, o controle da presença, os registros administrativos; da escola burguesa, dentre outros aspectos, o controle e a divisão ordenada do tempo. / Abstract: This research has as object organization of the didactic work in isolated schools in São Paulo. Basing on the historical-critical method, established the organization of the didactic work as a category of analysis, in order to study the history and analyze how schools are organized didactically isolated in the period from 1893 to 1932. When from the thesis that the isolated schools carry traces of the lancasterian system (or mutual), it became necessary to a retreat Imperial Period, deepening the study of the schools of first letters to then to investigate the isolated schools. To this end, was conducted a bibliography review with reference to the theoretical work Saviani (2008), Alves (2001, 2005), Neves (2003); Marcílio (2005); Bastos and Faria Filho (1999); Souza (1998, 2006, 2009); Reis Filho (1995); Infantosi (1983), Nagle (1976); Schelbauer (1998). The documents in the Arquivo do Estado de São Paulo (AESP) were the primary sources consulted. In the first Republican period, the need for universal public education led to the creation of school groups, which met initially to large urban centers; for smaller centers and populous neighborhoods, schools were created together. In the suburbs, towns and rural areas were adopted isolated schools whose function was to provide a basic education - reading, writing and elementary arithmetic operations - to the poor population of these locations. The organization of the didactic work in these schools approached the organization adopted in schools of the first letters under the mutual method present in the imperial period. The history of isolated schools is marked by both aspects of its predecessors, the schools of first letters, as the modern bourgeois school. Working in hovels, they inherited the school of first letters mainly care in one room, children at different levels of play, controlling presence, administrative records; the bourgeois school, among other things, control and orderly division of time. / Doutorado / Filosofia e História da Educação / Doutora em Educação

In canonical boundary layer transition, a uniform laminar flow perturbed by 2-d T-S waves develops downstream into 3-d waves, which eventually break down with turbulent spots appearing. Previous experimental studies have established that this kind of development is absent, is by-passed, in transition induced by free-stream turbulence or surface roughness. However a common, characteristic feature of the late, three-dimensional stage is the prevalence of streamwise vorticity and streaks. Isolated and multiple streamwise vortices are present in both, canonical transition and bypass transition. This thesis de-scribes an experimental study of the late stages of boundary layer transition after a single or a pair of streamwise vortices have formed. The present work can be considered both as a study of transition induced by surface roughness and as a study of the late stages of transition in general. The experiments were made on a zero-pressure-gradient boundary layer in a low speed wind tunnel. Various hill configurations, mounted on a flat plate, were used to create isolated and multiple streamwise vortices. Particle image velocimetry (PIV) and hot-wire anemometry used for measurements. Numerical simulations of the initial laminar stage were carried out to understand the vortex formation at the edge of the hills. Computations have shown that the streamwise vorticity induced by the spanwise asymmetry of the hill rolls up into a single streamwise vortex. The streamwise vortex causes high speed fluid to be brought close to the wall and low speed fluid to move away. In turn, streamwise velocity profiles acquire inflections in both the spanwise and wall-normal directions. Previous studies have concluded that the inviscid instability of inflectional profiles are essential, or at least common, precursors to transition. Another view of the structure of bypass transition induced involves a secondary instability of streaks that can be sinuous or varicose. These two types follow from instabilities of the inflectional spanwise and wall-normal profiles of the streamwise velocity, respectively. However the present study confirms that the occurrence of inflections is not sufficient for transition. The first series of experiments were with smooth Gaussian shaped hills that spanned one-half of the tunnel. Two hill shapes were taken, steep and shallow. Isolated streamwise vortices formed by the side of the hill. Hill heights were less than that of the incoming boundary layer, and they were mounted within the subcritical part of the boundary layer. At low free stream speeds, streaks formed, with inflectional wall-normal and spanwise velocity profiles, but without effecting transition. The necessary conditions for inviscid instability Rayleigh’s inflexion-point theorem and Fjortoft’s theorem are satisfied for these low-speed non-transitional cases. Transition observed at higher speeds show two kinds of development. With the steep hill, the streamwise vortex is not too close to the plate and it exhibits oscillations over some distance before flow breaks down to turbulence; streamwise velocity signals exhibited the passage of a wave packet which intensified before break-down to turbulence. This dominant mode persists far downstream from the hill even while the flow breaks down and frequency content grows over a range of scales. With the shallow hill, the breakdown develops continuously without such a precursor stage; there was a broad range of frequencies present immediately downstream of the hill. For the steep hill the maximum fluctuation is observed on the upwash side of the vortex. With the shallow hill, the fluctuation level is maximum at the location between low and high speed streak. Features of breakdown to transition caused by these single streamwise vortices are found to be similar to those in transition by other causes such as surface roughness, freestream turbulence etc. With the steep hill, the growth of fluctuations(urms, the peak levels of streamwise velocity component fluctuations) is remarkably similar to that in the K-type transition. Unlike in freestream induced transition, the initial growth of u2 rms,max with downstream distance was not linear. Profiles of urms/urms,max vs. y/δ∗where δ∗,is the displacement thickness is partially matching with the optimal disturbances, for the steep hill case. The phase velocity matches as in previous measurements of roughness induced transition. The flow exhibits the breakup of a shear layer near the outer edge of the boundary layer into successive vortices. This breakdown pattern resembles to those in the recent numerical simulations. The passing frequency of these vortices scales with freestream velocity, similar to that in single-roughness induced transition. Quadrant analysis of streamwise and wall-normal velocity fluctuations show large ejection events in the outer layer. The difference in the route to transition between the steep and shallow hills was considered to the relative proximity of the initial streamwise vortex to the flat plate and its interaction with the wall. To examine this conjecture, two configurations were prepared to produce two types of counter-rotating streamwise vortices. One is a hill that span the tunnel except for a short gap, and the other, its complement, is a short span hill. The short-gap hill produce a pair of vortices with the common flow directed away from the wall. This resulted in a separation bubble that formed a short distance downstream and breakdown to turbulence. The short-span hill configuration seems to have a stabilizing effect. With the short gap hill, transition occurs for lower freestream speeds than with the isolated vortices considered before. Also, the breakdown location is further downstream when the gap is larger. The initial velocity profiles look similar for transitional and non-transitional flow cases, and are inflectional, which clearly indicates that inflectional instabilities are not effective here. A separation index was computed to identify unsteadiness of the separated flow region. The separation is itself steady, where as the reattachment is unsteady. Fluctuations grow near this reattachment zone. The unsteadiness of the reattachment coexists with the appearance of strong fluctuations and transition. It is likely that the this last stage of breakdown results when the shear layer, lifted up by the separation bubble, breaks down near the edge of the boundary layer and the consequent unsteadiness is in the reattachment also. Coherent cat’s-eye-like patterns were observed in a longitudinal, plane normal to the wall. With isolated vortices sinuous oscillations and with stream-wise vortex pairs varicose oscillations were observed in wall-parallel planes. In both cases passing frequency of these vortices scales with freestream velocity. Λ-type vortices were identified in spanwise plane with counter-rotating legs. These experiments have identified some possible roles of streamwise vortices in the last stages of boundary layer transition. Vortices may undergo their own instability in the background shear layer, evident as oscillations, if they are not too close to the wall. Otherwise the breakdown is without such a stage. Wall interaction of these vortices seems to be a necessary last stage. Inflectional instability is not indicated. Wall interaction that results in separation results in break-down in the unsteady reattachment zone. Breakdown coexists with the reattachment and not at separation, even though it may be the separating shear layer that breaks down.