A alteração do clima da Terra induzida pelas atividades humanas e a poluição têm sido apontados como potenciais estressores sinergísticos que ameaçam a persistência de populações de anuros em ambientes naturais. Entretanto, mediante um cenário complexo de mudanças antropogênicas globais, o conhecimento acerca do efeito isolado de estressores, bem como de sua interação, é ainda incipiente. Além do aquecimento como tendência central, a mudança climática tem sido relacionada, de modo cada vez mais consistente, ao aumento de eventos extremos, que podem resultar no aumento da ocorrência e da magnitude de temperaturas diárias extremas quentes e frias, impondo desafios adicionais à biota. No presente trabalho, foi testada a hipótese de que o aquecimento e a flutuação termal diária interferem na toxicidade da atrazina sobre larvas de três espécies de anuros (Dendropsophus minutus, Leptodactylus podicipinus e Physalaemus nattereri) que habitam áreas de cultivo de cana-de-açúcar, onde a utilização desse herbicida é frequente. Para testar essa hipótese, foram estudados os efeitos do aquecimento (23-27 ºC para D. minutus e L. podicipinus e 28-32 ºC para P. nattereri), da flutuação termal diária (23±4 ºC e 27±4 ºC para D. minutus e L. podicipinus e 28±4 ºC para P. nattereri) e da exposição à atrazina (120 μg/L para D. minutus e L. podicipinus e 30, 120 e 180 μg/L para P. nattereri), de maneira isolada e combinada, no desenvolvimento larval dessas espécies. A fim de compreender tais efeitos, foram monitorados os seguintes parâmetros: tempo de desenvolvimento, massa e comprimento na metamorfose, condição corpórea, proteínas e lipídios hepáticos totais, atividade de enzimas antioxidantes (catalase, GST e SOD) e nível de peroxidação lipídica. As respostas encontradas foram diferentes entre as funções de desempenho fisiológico analisadas, com possíveis consequências positivas ou negativas para a aptidão, além de terem sido espécie-específicas. Além disso, no caso do efeito combinado dos estressores analisados, foram observadas interações sinergísticas, neutras ou mesmo antagônicas. De modo isolado, a atrazina e a flutuação termal promoveram o retardo ou a aceleração do desenvolvimento, enquanto o aquecimento acelerou ou não teve efeito sobre o mesmo. A atrazina, surpreendentemente, promoveu a melhora da condição corpórea, enquanto a flutuação termal diária promoveu a melhora, a piora ou não teve efeito sobre esse parâmetro, e, por fim, o aquecimento piorou ou não alterou a condição corpórea. Os três fatores testados, de modo isolado, promoveram a ativação da catalase e, de modo menos frequente, da GST, embora apenas o aquecimento, de modo isolado, tenha induzido o dano oxidativo, com aumento do nível de LPO tendo sido observado na espécie D. minutus. Os fatores analisados (aquecimento, flutuação termal diária e exposição a concentrações ecologicamente relevantes de atrazina) tiveram efeito sinergístico em D. minutus, em que houve piora da condição corpórea, e neutro em L. podicipinus, espécie na qual não foi verificada alteração nesse parâmetro. Houve ainda sinergismo na indução de dano oxidativo (aumento do nível de LPO), constatado nas três espécies analisadas nos casos mais severos de combinação de estressores. O presente trabalho evidencia a complexidade da interação de fatores ambientais e, portanto, reafirma a necessidade de estudar os efeitos das mudanças globais sobre a biota para a melhor definição dos limites de tolerância e da capacidade de resiliência das espécies / Global climate change, induced by human activities, and pollution has been considered as potential synergistic stressors that threaten the persistence of amphibian populations in natural environments. However, considering the complexity of anthropogenic global changes, the current state of knowledge on the isolated effects of these variables, and their interactions, is still incipient. Besides the tendency to average global warming, climate change has been consistently associated to enhanced extreme events, which may result in an increase of frequency and magnitude of extreme hot and cold daily temperatures, imposing additional challenges to the biota. In this study, we tested the hypothesis that the increase in temperature and daily thermal fluctuation intensify the toxicity of atrazine on larvae of three anuran species (Dendropsophus minutus, Leptodactylus podicipinus and Physalaemus nattereri), which inhabit industrial sugarcane cultures areas, where the use of this herbicide is frequent. To test this hypothesis, the effects of the increase in temperature (23-27 °C for D. minutus and L. podicipinus, and 28-32 °C for P. nattereri), the daily thermal fluctuation (23 ± 4 °C and 27 ± 4 °C for D. minutus and L. podicipinus, and 28 ± 4 °C for P. nattereri), and the exposition to atrazine (120 μg/L for D. minutus and L. podicipinus, and 30, 120 and 180 μg/L for P. nattereri) on the larval development of these species were studied in an isolated and in a combined way. To evaluate the effects of these stressors, time of metamorphosis, mass and length, body condition, total hepatic proteins and lipids, antioxidant enzymes (catalase, GST and SOD) activity, and lipid peroxidation (LPO) were monitored. The responses were variable, which possible positive or negative consequences to fitness, according to the endpoint, and were species-specific. Moreover, the interactive effects of these stressors were synergistic, antagonistic, and even neutral. Atrazine and thermal fluctuation led to a delay or acceleration of the metamorphosis, while the warming accelerated or did not affect development. Surprisingly, exposure to atrazine improved body condition, whereas the daily thermal fluctuation improved, worsened or did not affect this parameter, and, finally, the increase of temperature worsened or did not affect body condition. All stressors promoted the activation of catalase, and, less frequently, activated GST. However, the increase in temperature was the only isolated factor to induce oxidative damage as observed in D. minutus. The factors studied here (increasing in temperature, daily thermal fluctuation and exposure to environmentally relevant concentrations of atrazine) had synergistic effect on the induction of oxidative damage in the all species analyzed. This study highlights the complexity of interaction among stressors and, therefore, reaffirms the need to study the effects of environmental changes on the biota to better understand the limits of tolerance and resilience of the species

A melatonina (MEL) é uma indolamina lipofílica com conhecida ação antioxidante por via direta, através da formação e ação de seus metabólitos, dentre eles o N1-acetil- N2- formil-5 metoxikinuramina (AFMK), ou por ação via receptores de membrana (MT1 e MT2). No entanto, não se sabe a dose ideal para utilização e sua estabilidade nos diferentes sistemas de cultivo in vitro (CIV) embrionário bovino. Neste trabalho, para avaliar se há perda de MEL para o sistema de CIV, determinou-se pela técnica de HPLC a concentração real de melatonina no meio CIV em sistema com e sem óleo mineral após a adição de diferentes doses iniciais de MEL (DM; 0, 25, 50, 100ng/ml), e assim, avaliadas em diferentes tempos de incubação (0, 24, 72 e 144 horas). Em seguida, avaliou-se a ação e consumo da melatonina no CIV de embriões submetidos ao estresse oxidativo induzido. A CIV foi realizada em atmosfera controlada (38,5ºC, 5% O2, 5% CO2 e 90% N2). No quinto dia de cultivo embriões, que apresentavam no mínimo 16 células, foram divididos aleatoriamente entre os grupos 0, 25, 50 e 100ng/ml de MEL, e todos receberam indução com 5&micro;M de menadiona durante 24 horas. Após este período, o meio foi coletado para análise de HPLC (MEL e AFMK) e os embriões foram cultivados apenas com as DM até D8. Os blastocistos (D8) foram destinados para avaliação de espécies reativas de oxigênio (ROS), contagem de blastômeros (nBLAST), detecção de atividade de caspase-3 e -7 (CASP) através de microscopia confocal de epifluorescência, e expressão gênica (GRP78, SOD1 e HSP60). Foi também analisada a taxa de blastocisto (TXBL). Constatou-se que não há migração para o óleo, ou degradação da MEL ao longo do tempo de CIV. Na utilização da dose de 50ng/ml de MEL no cultivo de embriões com estresse oxidativo induzido há consumo da melatonina no meio e formação de AFMK (p&lt;0.05), maior TXBL (45,93 vs. 33,06%, p&lt;0.05) e nBLAST (143 vs. 93,1, p&lt;0.05), e redução de ROS (0,84 vs. 1,66 pixels, p&lt;0.05) e CASP (0,91 vs. 1,54 pixels, p&lt;0.05), se comparado ao grupo sem MEL. Contudo, não houve alteração na expressão gênica. Conclui-se que a melatonina mostrou comportamento estável nas condições de cultivo, podendo ser usada em sistemas com e sem óleo e possui ação antioxidante na dose de 50ng/ml, aumentando a produção e qualidade de embriões in vitro submetidos ao estresse oxidativo induzido. A melatonina (MEL) é uma indolamina lipofílica com conhecida ação antioxidante por via direta, através da formação e ação de seus metabólitos, dentre eles o N1-acetil- N2- formil-5 metoxikinuramina (AFMK), ou por ação via receptores de membrana (MT1 e MT2). No entanto, não se sabe a dose ideal para utilização e sua estabilidade nos diferentes sistemas de cultivo in vitro (CIV) embrionário bovino. Neste trabalho, para avaliar se há perda de MEL para o sistema de CIV, determinou-se pela técnica de HPLC a concentração real de melatonina no meio CIV em sistema com e sem óleo mineral após a adição de diferentes doses iniciais de MEL (DM; 0, 25, 50, 100ng/ml), e assim, avaliadas em diferentes tempos de incubação (0, 24, 72 e 144 horas). Em seguida, avaliou-se a ação e consumo da melatonina no CIV de embriões submetidos ao estresse oxidativo induzido. A CIV foi realizada em atmosfera controlada (38,5ºC, 5% O2, 5% CO2 e 90% N2). No quinto dia de cultivo embriões, que apresentavam no mínimo 16 células, foram divididos aleatoriamente entre os grupos 0, 25, 50 e 100ng/ml de MEL, e todos receberam indução com 5µM de menadiona durante 24 horas. Após este período, o meio foi coletado para análise de HPLC (MEL e AFMK) e os embriões foram cultivados apenas com as DM até D8. Os blastocistos (D8) foram destinados para avaliação de espécies reativas de oxigênio (ROS), contagem de blastômeros (nBLAST), detecção de atividade de caspase-3 e -7 (CASP) através de microscopia confocal de epifluorescência, e expressão gênica (GRP78, SOD1 e HSP60). Foi também analisada a taxa de blastocisto (TXBL). Constatou-se que não há migração para o óleo, ou degradação da MEL ao longo do tempo de CIV. Na utilização da dose de 50ng/ml de MEL no cultivo de embriões com estresse oxidativo induzido há consumo da melatonina no meio e formação de AFMK (p<0.05), maior TXBL (45,93 vs. 33,06%, p<0.05) e nBLAST (143 vs. 93,1, p<0.05), e redução de ROS (0,84 vs. 1,66 pixels, p<0.05) e CASP (0,91 vs. 1,54 pixels, p<0.05), se comparado ao grupo sem MEL. Contudo, não houve alteração na expressão gênica. Conclui-se que a melatonina mostrou comportamento estável nas condições de cultivo, podendo ser usada em sistemas com e sem óleo e possui ação antioxidante na dose de 50ng/ml, aumentando a produção e qualidade de embriões in vitro submetidos ao estresse oxidativo induzido / Melatonin (MEL) is a lipophilic indolamine with well-known antioxidant properties, by an scavenger action, producing its metabolites such as N1-acetil- N2- formil-5 metoxykinuramin (AFMK) or through a membrane receptor pathway (MT1 and MT2). Although, little is known about its stability and ideal dose on in vitro bovine embryo culture (IVC). In this work, to evaluate if there is any loss of MEL to the IVC systems, we determinate by HPLC, the real concentration of MEL in each system, with and without mineral oil, after the addition of different initial doses of MEL (DM; 0, 25, 50, 100ng/ml), and then analyzed at different incubation period (0, 24, 72 e 144 hours). Then, it was evaluated the action and consumption of MEL in IVC of embryos submitted to induced oxidative stress. The IVC was done in controlled atmosphere (38,5ºC, 5% O2, 5% CO2 e 90% N2). At Day 5, embryos over 16 cells were randomly divided in the treatments 0, 25, 50 and 100 ng/ml of MEL, and all received the induction with 5&microM of menadione during 24 hours. After incubation, the media was collected for HPLC analysis (MEL and AFMK) and embryos returned for culture with DM until Day8 (D8). The blastocysts (D8) were designated to Reactive oxygen species (ROS) evaluation, total number of cell (nBLAST), detection of caspase-3 and -7 activity (CASP) and gene expression (GRP78, HSP60 and SOD1). Blastocyst rate (TXBL) was also assessed. Result show that there is no loss of MEL to the oil, or degradation over incubation time. At 50ng/ml there was a consumption of melatonin in the media and formation of AFMK (p&lt;0.05), higher TXBL (45,93 vs. 33,06%, p&lt;0.05) and nBLAST (143 vs. 93,1, p&lt;0.05), lower ROS (0,84 vs. 1,66 pixels, p&lt;0.05) and CASP (0,91 vs. 1,54 pixels, p&lt;0.05), when in contrast with the group without MEL. However, there was no difference in gene expression. In conclusion, melatonin has a stable behavior in IVC system, which allows the use in system with and without oil. Also, at the dose of 50ng/ml has an antioxidant effect, improving quality and production of embryos culture in vitro at induced oxidative stress

Introdução: As doenças crônicas não transmissíveis (DCNT), como o diabetes, apresenta estreita relação com os marcadores do estresse oxidativo e da inflamação. Estes marcadores podem ser modulados pelos compostos bioativos presentes nos alimentos. Os compostos fenólicos presentes no alecrim (Rosmarinus officinalis L.) possuem atividades biológicas importantes, como antioxidante, antiinflamatória, anticarcinogênica, entre outras. Objetivo: Avaliar o efeito dos compostos fenólicos do alecrim (Rosmarinus officinalis L.) na inflamação aguda e sobre os marcadores de estresse oxidativo de ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina. Métodos: Extrato aquoso (EA) e frações ricas em compostos fenólicos foram obtidos das folhas de alecrim e avaliados quanto à sua composição em fenólicos e capacidades antioxidante e anti-inflamatória in vitro. Ratos Wistar, machos, foram tratados com EA, fração hidroalcoólica (FHA) ou fração de ácidos fenólicos livres (AFL). O efeito do EA, FHA e AFL foram avaliados em ratos diabéticos. Foi avaliada a atividade anti-inflamatória in vivo do EA nos modelos de inflamação aguda: edema de pata e bolsa de ar. O efeito do EA também foi investigado em células de hepatócitos humano (HepG2). Para análise dos resultados utilizou-se a análise de variância (ANOVA, post-hoc Tukey), adotando como nível de significância p<0,05. Resultados: O EA e suas frações apresentaram alto conteúdo em compostos fenólicos, entre eles os flavonoides. Os ácidos rosmarínico e carnósico foram os compostos majoritários das frações de ácidos fenólicos. A composição em compostos fenólicos contribuiu significativamente para a expressiva capacidade antioxidante e inibitória da lipoxigenase in vitro. O EA de alecrim alterou positivamente a atividade das enzimas antioxidantes, reduziu as concentrações séricas de TNF-&#945 e IL-6; e aumentou níveis de LTB4 em animais diabéticos quando comparado ao grupo controle diabético (D-H2O). A AFL não atenuou os marcadores de estresse oxidativo do diabetes. Na inflamação aguda, o EA reduziu o edema de pata semelhante à indometacina (p>0,05). Houve redução significativa (p<0,05) das concentrações de LTB4, PGE2, TNF-&#945; e IL-6 em exsudatos de ratos pré-tratados com EA e submetidos ao estímulo inflamatório com carragenina no modelo de bolsa de ar. Esta redução foi acompanhada pela diminuição no recrutamento de neutrófilos, quando comparados ao grupo controle (p<0,05). Foi observada redução na produção de óxido nítrico em neutrófilos tratados com EA e estimulados com LPS. O EA nas concentrações de 1 a 50 &#181;g/mL manteve a viabilidade de células HepG2 e reduziu a produção de espécies reativas em condições basais e hiperglicêmicas, além de manter os níveis de GSH e aumentar a expressão dos genes HO-1 e SOD-2 em células tratadas com 10 &#181;g/mL de extrato quando comparados ao grupo normoglicêmico (p<0,05). Conclusão: O EA de alecrim apresenta propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, observadas tanto in vitro como em animais, podendo apresentar benefício nas DCNT, nas quais o estresse oxidativo e a inflamação atuam de forma significativa, como no diabetes. / Introduction: Non-transmissible chronic diseases, such as diabetes, are strongly associated with oxidative stress and inflammation markers, which are known to be modulated by bioactive compounds found in foods. Polyphenols present in rosemary (Rosmarinus officinalis L.) display important biological activities, including among others, antioxidant, anti-inflammatory and anticarcinogenic effects. Objective: To assess the effects of polyphenols from rosemary (Rosmarinus officinalis L.) on acute inflammation and oxidative stress markers in rats with streptozotocin-induced diabetes. Methods: Aqueous extract and phenolic acid fractions were obtained from rosemary leaves and assayed for their phenolic composition and in vitro antioxidant and anti-inflammatory activities. The effects of the aqueous extract (EA), the hydroalcoholic fraction (FHA) and the free phenolic fraction (AFL) were assessed in diabetic male Wistar rats. The in vivo anti-inflammatory activity of EA was evaluated against two models of acute inflammation: paw edema and air pouch. The effect of EA was also investigated in human hepatocyte cells (HepG2). Results were compared using a one-way Analysis of Variance (ANOVA) and the Tukey post-test at a significance level of p<0.05. Results: Polyphenols, mainly flavonoids, occurred in high quantities in EA and its fractions. Rosmarinic and carnosic acids were found chiefly in the phenolic fractions. The rich phenolic composition contributed significantly to the high in vitro antioxidant activity and lipoxygenase inhibiting capacity observed. The rosemary aqueous extract (EA) positively affected antioxidant enzyme activities, reduced serum TNF-&#945; and IL-6 concentrations and elevated LTB4 levels in diabetic rats, compared with those in the diabetic control group (D-H2O). Treatment with AFL did not attenuate the oxidative stress markers altered by diabetes. In the acute inflammation models, paw edema was reduced by EA as successfully as by indomethacin (p>0.05) and LTB4, PGE2, TNF-&#945; and IL-6 concentrations in air pouch exudates in carrageenan-stimulated rats were significantly lowered by treatment with EA (p<0.05). Neutrophil recruitment was also reduced, compared with the control group (p<0.05). Treatment with EA also led to the reduction in nitric oxide production by LPS-stimulated neutrophils. In addition to preserving HepG2 cell viability, EA at concentrations between 1 and &#181;50 g.mL-1 was also able to diminish ROS production under basal and hyperglycemic conditions, preserve GSH levels and increase HO-1 e SOD-2 gene expression in cells (extract at &#181;10 g.mL-1), compared with the normoglycemic group (p<0.05). Conclusion: The aqueous extract of rosemary exhibits antioxidant and anti-inflammatory activity in vitro and in animals. This could be of great benefit in the treatment of nontransmissible chronic diseases, such as diabetes, which are strongly associated with oxidative stress and inflammation.

Tetraidrofurano (THF) é um solvente muito utilizado industrialmente, com demonstrada ação carcinogênica em animais experimentais, mas pouco se sabe sobre sua toxicidade celular, danos a biomoléculas e genotoxicidade. Em trabalho anterior realizado no laboratório, foi verificado que adutos de DNA são formados a partir da reação de THF oxidado com 2\'-desoxiguanosina (dGuo), 2\'-desoxiadenosina (dAdo) e 2\'-desoxicitidina (dCyd) in vitro. A ocorrência dessas lesões em sistemas biológicos expostos a THF nunca foi demonstrada e pode indicar uma via de ação genotóxica desse solvente, até o momento não considerada nos estudos de carcinogênese e toxicidade. Neste trabalho foi investigada a indução de lesões em DNA e RNA de sistemas biológicos expostos ao THF, assim como alterações epigenéticas. Como sistemas biológicos foram utilizados homogenato de fígado de camundongos, cultura de células HepG2 e fígado e rim de camundongos que foram, em trabalho anterior, expostos a vapores do solvente. Métodos de HPLC-ESI-MS/MS foram validados para quantificação de todas as lesões em DNA. Foi verificado que THF é um solvente de baixa citoxicidade para células HepG2, sendo necessárias concentrações acima de 50 mM por período de incubação superior a 24 h para ser observada perda de viabilidade. Houve indução de dano oxidativo em DNA de células HepG2 e de fígado de camundongos expostos. Uma vez que o solvente esteja oxidado, a espécie reativa THF-OH presente no meio de cultura é capaz de reagir com RNA e DNA das células e DNA de homogenato de fígado de camundongos, gerando adutos com dAdo, dGuo e Ado. A espécie reativa possui maior afinidade por dGuo que por dAdo no DNA. Entretanto, as células HepG2 não biotransformaram THF para o intermediário reativo. Além disso, THF induziu hipermetilação no DNA das células HepG2 expostas a 50 e 100 mM do solvente e em DNA de fígado de camundongos fêmeas C57BL/6J expostos a vapores de THF (vapor de 1 mL/h, 6h/dia, 5 dias). Este estudo mostra pela primeira vez a reatividade do solvente THF oxidado (contendo THF-OH) com DNA e RNA em sistemas biológicos, assim como alteração epigenética induzida pelo solvente, e servirá para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na indução de câncer por THF. / Tetrahydrofuran (THF) is a widely used industrial solvent with demonstrated carcinogenic action in experimental animals, but little is known about its cellular toxicity and genotoxic damage to biomolecules. Previous work of this group showed that DNA adducts are formed from the reaction of oxidized THF with 2\'-deoxyguanosine (dGuo), 2\'-deoxyadenosine (dAdo), and 2\'-deoxycytidine (dCyd) in vitro. The occurrence of these lesions in biological systems exposed to THF has never been demonstrated and may indicate a genotoxic pathway of this solvent, so far not considered in carcinogenesis and toxicity studies. It was investigated here the induction of DNA and RNA lesions in biological systems exposed to THF, as well as epigenetic changes. The biological systems used were mice liver homogenate, HepG2 cell culture, and liver and kidney of mice that were exposed to solvent vapors in a previous work. HPLC-ESI-MS/MS methods were validated for quantitation of all lesions in DNA. It was found that THF is of low cytotoxicity to HepG2 cells, requiring concentrations above 50 mM for incubation period over 24 h to induce loss of viability. DNA oxidative damage was induced in HepG2 cells and liver of exposed mice. Once the solvent is oxidized, the reactive species THF-OH present in the culture medium is able to react with DNA and RNA of HepG2 cells and DNA from mice liver homogenate, generating adducts with dAdo, dGuo and Ado. The reactive species has higher affinity for dGuo than for dAdo in DNA. However, HepG2 cells were not able to activate THF to the reactive intermediate. In addition, THF induced DNA hypermethylation in HepG2 cells exposed to 50 and 100 mM of the solvent and in liver of C57BL/6J female mice exposed to THF vapors (1 mL vapor / h 6h/dia, 5 days). This study shows for the first time the reactivity of oxidized THF (containing THF-OH) with DNA and RNA in biological systems, as well as epigenetic change induced by the solvent, and may contribute for a better understanding of the mechanisms involved in the induction of cancer by THF.

Orientador: Débora Cristina Damasceno / Resumo: Objetivos: Avaliar as alterações bioquímicas geradas pela programação fetal frente ao diabete intrauterino materno e/ou pela dieta hiperlipídica (DHL) oferecida a filhas de ratas diabéticas. Principais métodos: Ratas Sprague-Dawley receberam Streptozotocin ou tampão citrato no 5º dia de vida e foram submetidos a um teste oral de tolerância à glicose na idade adulta para avaliação do nível glicêmico como critério de inclusão e exclusão. Posteriormente, foram acasaladas para obtenção da prole que, após o desmame, as fêmeas receberam dieta hiperlipídica ou padrão de acordo com o grupo experimental. Aos 120 dias, as ratas foram anestasiadas e mortas para coleta de sangue para determinação das concentrações de colesterol total (CHO), lipoproteína de densidade muito baixa (VLDL), triglicérides (TG), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e avaliação dos marcadores de estresse oxidativo [níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), peróxido de hidrogênio (H2O2), grupos tióis (SH), e atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GSH-Px), e catalase (CAT). Principais achados: Os animais advindos de um ambiente intrauterino desfavorável apresentaram redução nos níveis de TBARS, H2O2, GSH-Px, ALT, AST, TG, CHO e VLDL e aumento de SOD. Além disso, os animais que receberam a DHL tiveram diminuição da atividade de GSH-Px e CAT e maior no nível de SOD. Significado: Portanto, a programação fetal causada pela hiperglicemi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aims: The present study aimed at evaluating the biochemical changes generated by fetal programming on the intrauterine maternal diabetes and/or by the hyperlipidic diet (HFD) offered to offspring of diabetic rats. Main methods: Sprague-Dawley rats received Streptozotocin or citrate buffer in the day 5 of life and were submitted to an oral glucose tolerance test in adulthood to assess the glycemic level as inclusion and exclusion criteria. Later, they were mated to obtain the offspring. After weaning, the females received a high fat diet (HFD) or standard diet (SD) according to the experimental group. At 120 days, the rats were anesthetized and killed for blood collection to determine the concentrations of total cholesterol (CHO), very low density lipoprotein (VLDL), triglycerides (TG), activities of aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and measurement of oxidative stress biomarkers [levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), hydrogen peroxide (H2O2), thiols groups (SH), and activities of the enzymes superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GSH-Px), and catalase (CAT)]. Key findings: The animals from an unfavorable intrauterine showed reduction in the levels of TBARS, H2O2, GSH-Px, ALT, AST, TG, CHO and VLDL and increase in SOD activity. In addition, animals from diabetic dams and receiving HFD after weaning decreased GSH-Px and CAT activities, and elevated SOD levels. Significance: Therefore, maternal hyperglycemia-induce... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A fragmentação do DNA espermático é uma das principais causas de infertilidade nos machos. Alterações na integridade do DNA podem ser decorrentes da ação de espécies reativas de oxigênio (EROS), de defeitos na protaminação e da apoptose. A sensibilidade do espermatozoide ovino frente as biotecnologias reprodutivas pode ser resultado de uma alta suscetibilidade a ação de EROS ou alterações na protaminação espermática desencadeadas por estresse oxidativo induzido por estresse térmico, tornando o espermatozoide mais suscetível a fragmentação de DNA. Com o objetivo de entender mais este processo, foi realizado um primeiro experimento para avaliar o status oxidativo, os atributos espermáticos e a expressão gênica de proteínas envolvidas nos processos de protaminação em diferentes níveis de suscetibilidade a peroxidação lipídica (baixo, médio, alto e altíssimo) em sêmen ovino. Foi observado um aumento da atividade enzimática da glutationa peroxidase e uma diminuição da atividade enzimática da glutationa redutase no plasma seminal no grupo com suscetibilidade a peroxidação lipídica alta e altíssima. Com relação a catalase, não foi verificado esse aumento, no entanto houve maior imunodetecção desta enzima. Em relação a condição espermática, observou-se um aumento na porcentagem de defeitos totais e lesões nas membranas acrossomal e plasmática, além de porcentagens menores de espermatozoides com baixo potencial de membrana mitocondrial no grupo com maior suscetibilidade a peroxidação lipídica. Este mesmo grupo também apresentou alta suscetibilidade ao dano da cromatina e aumento do número de cópias do gene da protamina 1 (PRM1) em espermatozoides. O segundo experimento avaliou os atributos de espermatozoides provenientes do ejaculado e do epidídimo frente ao estresse térmico induzido por insulação testicular (tratado), assim como as relações com o status antioxidante. Observou-se diminuição da motilidade, vigor, turbilhonamento e aumento na porcentagem de defeitos maiores e menores, e de lesões na membrana acrossomal e plasmática em espermatozoides ejaculados no grupo tratado. Essas diferenças não foram observadas em espermatozoides epididimais. Uma maior atividade enzimática da glutationa peroxidase e da glutationa redutase foi observada no plasma seminal do grupo tratado. Foi verificado uma diminuição de espermatozoides com alto potencial de membrana mitocondrial no grupo tratado, indicando que o metabolismo mitocondrial parece estar envolvido no quadro de estresse oxidativo. Um terceiro estudo foi conduzido para verificar o efeito do estresse térmico na integridade da cromatina espermática, na protaminação do DNA espermático e na ativação de vias apoptóticas em testículo ovino. Em espermatozoides provenientes do ejaculado, houve um aumento da porcentagem de células com suscetibilidade a fragmentação da cromatina no grupo tratado; não observado em espermatozoides epididimais. Uma alta porcentagem de espermatozoides com fragmentação de DNA grau III (ensaio COMETA) e aumento do número de cópias de mRNA da proteína de transição 1 (TNP1) em espermatozoides provenientes do ejaculado, foi observada no grupo tratado. Já em espermatozoides provenientes do epidídimo, a PRM1 apresentou maior expressão no 30&omicron; dia do ciclo espermático comparado a 7&omicron; dia, enquanto que a TNP1 comportou-se de maneira contrária. Em relação a ativação de vias apoptóticas em testículo ovino, a proteína anti-apoptótica Bax foi imuno-identificada em espermatócitos e a Blc-2 em espermátides, sem diferença entre os grupos. Em conclusão, a alta susceptibidade dos espermatozoides ovinos a peroxidação lipídica altera o status oxidativo ocasionando um quadro de estresse oxidativo, principal causador de dano a cromatina. Adicionalmente, o estresse oxidativo induzido por estresse térmico prejudica os atributos espermáticos e aumenta a suscetibilidade dos espermatozoides a fragmentação de DNA. / Sperm DNA fragmentation is referred as one of the main causes of male\'s infertility. Among the etiologies of abnormalities on DNA integrity the action of reactive oxygen species (ROS), protamination failures and apoptosis are considered the most important. The known sensitivity of ram´s sperm to reproductive biotechnologies could be a result of a higher susceptibility to the action of ROS or changes in sperm protamination triggered by oxidative stress induced by heat stress. This would increase the susceptibility of sperm DNA to fragmentation. Initially, the ram sperm quality, seminal protamine gene expression and oxidative status were evaluated in semen samples of different levels of susceptibility to lipid peroxidation (low, medium, high and very high). There was an increase on glutathione peroxidase and decreased glutathione reductase enzymes&#39; activity in groups with high and very high susceptibility to lipid peroxidation. However, only catalase showed increased immunodetection. An increase on total defects and damaged acrosomal and plasmatic membranes were observed in the group showing the highest susceptibility to lipid peroxidation. Also, the percentage of sperm with low mitochondrial membrane potential, the percentage of sperm susceptible to chromatin damage and the number of copies of protamine 1 (PRM1) mRNA were increased in the group showing higher susceptibility to lipid peroxidation. The second study evaluated sperm\'s attributes from the epididymis and ejaculated sperm subjected to heat stress induced by testicular insulation (treated group), as well as correlations with the antioxidant status. We observed decrease on motility, vigor, and mass motility and increase on the percentages of sperm showing major and minor defects, and damaged plasma and acrosome membranes in the treated group. These differences were not observed in epididymal sperm. Increased enzymatic activities of glutathione peroxidase and glutathione reductase were observed in the treated group. Mitochondrial metabolism appeared to be involved in the oxidative homeostasis imbalance. This was effectively observed by a decrease on the percentage of sperm with high mitochondrial membrane potential in the treated group. A third study was conducted to determine the effect of heat stress induced by testicular insulation on the integrity of chromatin, protamination and apoptotic activation pathway in ram testis. An increase on the percentage of sperm with susceptibility to chromatin fragmentation in the treated group was observed. However, the previous findings were not observed in epididymal sperm. A higher percentage of sperm showing DNA fragmentation level III (Comet assay) and an increase on the number of copies of transition protein 1(TNP1) mRNA were observed in the treated group. In epididymal sperm, a higher expression of the PMR1 gene was observed on the 30th day of the espermatogenic cycle, while TNP1 behaved contrarily. In the testicular samples, the anti-apoptotic protein Bax was detected only in spermatocytes while Bcl-2 was observed singularly in spermatids, with no difference between groups. In conclusion, the disruption of oxidative homeostasis may be exacerbated by the higher susceptibility of ram\'s sperm to lipid peroxidation, which could be the main etiology of chromatin damage. In addition, oxidative stress induced by heat stress impairs sperm attributes and DNA integrity.

O estresse orgânico decorrente da queimadura é intenso e prolongado. O hipercatabolismo e o hipermetabolismo secundários alteram o sistema de pró e anti-oxidantes. Pela necessidade de reepitelização da área doadora e receptora, a cirurgia reparadora pode desencadear ou perpetuar o estresse oxidativo. Objetivos: Em pacientes vítimas de trauma térmico agudo (Grupo Queimadura) e naqueles em pós-operatório de seqüelas de queimaduras (Grupo Seqüela), comparar o estresse oxidativo e os níveis de anti e pró-oxidantes com os obtidos no pré-operatório de pacientes com seqüelas de queimaduras (Grupo Controle). Casuística e métodos: O estudo foi conduzido na Unidade de Queimados do HCFMRPUSP. O Grupo Queimadura (n=11) incluiu pacientes com 48 horas do trauma térmico agudo, SCQ 10%. Os pacientes que necessitaram de correção cirúrgica das seqüelas do trauma térmico, ocorrido 1ano (n=8), foram avaliados no pré-operatório (Grupo Controle) e após 48 horas da cirurgia (Grupo Seqüela). Todos os voluntários foram submetidos à antropometria e quantificação da ingestão alimentar. Foi realizada a avaliação laboratorial do estado nutricional, dos marcadores da atividade inflamatória e dos anti e pró-oxidantes. Resultados: Em pacientes vítimas de trauma térmico agudo, foi documentado estresse orgânico caracterizado pelo aumento das proteínas de fase aguda como a PCR [8,76 (0,91 34,54) vs 0,40 (0,01 0,97)mg/dL, p=0,0004] e ferritina (254,45 ± 84,25 vs 145,10 ± 88,80ng/mL, p=0,014), além da diminuição da albumina (3,55±0,65 vs 4,16±0,26g/dL, p=0,004), da transferrina (110,67±55,13 vs 238,70±67,99mg/dL, p=0,0003), do colesterol (126,82 ± 32,19 vs 193,75 ± 51,64mg/dL, p=0,002) e triglicérides séricos (95,54 ± 36,84 vs 168,75 ± 54,83mg/dL, p=0,003), ferro [30,00 (6,00-73,00) vs 109,00 (70,00 - 252,00)µg/dL, p=0,0004] e zinco (63,55 ± 23,34 vs 92,72 ± 16,65mg/dL, p=0,014). O estresse oxidativo diminuiu os níveis séricos das vitaminas C [0,45 (0341,30) vs 0,93 (0,48 1,30)mg/dL, p=0,016], A (1,55 ± 0,87 vs 3,35 ± 0,72µmol/L, p=0,0002) e da vitamina E (9,49 ± 3,4 vs 4,96 ± 1,60µmol/g lipídeo, p=0,003). Não houve modificação nos níveis do GSH [40,37 (30,27 87,46 ) vs 49,90 (10,09 54,95)µmol/L, p= 0,48] e do MDA [1,75 (1,15 2,74) vs 1,77 (1,62 6,82nmol/g proteína), p=0,043]. O procedimento cirúrgico para correção das seqüelas de queimaduras determinou aumento da proteína C reativa [0,40 (0,01 0,97) vs 2,53 (0,56 4,70)mg/dL, p=0,01], mas não alterou os níveis de anti e pró-oxidantes, exceto a diminuição dos níveis séricos de vitamina A (3,35 ± 0,72 vs 2,52 ± 0,90µmol/L, p=0,006) Conclusões: O estresse orgânico decorrente do trauma térmico agudo diminuiu as respostas anti-oxidantes. Exceto pela queda nos níveis séricos de vitamina A, a cirurgia reparadora acarretou estresse orgânico, sem modificação na resposta anti e pró-oxidante. / Organic stress due to burns is intense and prolonged, Secondary hypercatabolism and hypermetabolism alter the pro- and anti-oxidant system. Due to the need for reepithelialization of the donor and recipient areas, reparative surgery can trigger or perpetuate the oxidative stress. Objectives: To compare the oxidative stress and the levels of anti- and pro-oxidants in patients victims of acute thermal trauma (Burn Group) and in patients during the postoperative period after surgery for burn sequels (Sequel Group) with those obtained preoperatively in patients with burn sequels (Control Group). Cases and methods: The study was conducted at the Burn Unit of HCFMRPUSP. The Burn Group (n=11) consisted of patients studied 48 hours after acute thermal trauma, SCQ 10%. The patients who required surgical correction of the sequels of thermal trauma suffered 1 year before (n=8) were assessed during the preoperative period (Control Group) and 48 hours after surgery (Sequel Group). All volunteers were submitted to anthropometry and to quantitation of food intake. Laboratory evaluation of nutritional status, of the markers of inflammatory activity and of the anti- and pro-oxidant levels was performed. Results: Organic stress was documented in the patients victims of acute thermal trauma, characterized by an increase of acute phase proteins such as C-reactive protein (CRP) [8.76 (0.91 34.54) vs 0.40 (0.01 0.97) mg/dL, p=0.0004] and ferritin (254.45 ± 84.25 vs 145.10 ± 88.80 ng/mL, p=0.014) and by a reduction of serum cholesterol (126.82 ± 32.19 vs 193.75 ± 51.64 mg/dL, p=0.002), triglycerides (95.54 ± 36.84 vs 168.75 ± 54.83 mg/dL. p=0.003), iron [30.00 (6.00 73.00) vs 109.00 (70.00 252.00) µg/dL, p=0.0004], and zinc (63.55 ± 23.34 vs 92.72 ± 16.65 mg/dL, p=0.014). Oxidative stress reduced the serum levels of vitamins C [0.45 (0341.30) vs 0.93 (0.48 1.30) mg/dL, p=0.016] and A (1.55 ± 0.87 vs 3.35 ± 0.72 µmol/L, p=0.0002), and did not modify the levels of vitamin E (9,49 ± 3,4 vs 4,96 ± 1,60µmol/g lipídeo, p=0,003)or of the anti-oxidant substance GSH [40.37 (30.27 87.46 ) vs 49.90 (10.09 54.95) µmol/L, p= 0.48, but caused a fall in MDA levels [1.04 (0.75 1.39) vs 1.26 (1.07 4.30 nmol/L), p=0.007]. The surgical procedure for the correction of burn sequels caused an increase in CRP [0.40 (0.01 0.97) vs 2.53 (0.56 4.70) mg/dL, p=0.01], but did not change the levels of anti- or pro-oxidants, except for a reduction of serum vitamin A levels (3.35 ± 0.72 vs 2.52 ± 0.90 µmol/L, p=0.006) Conclusions: The organic stress due to acute thermal stress reduced the antioxidant responses. Except for the fall in serum vitamin A levels, reparative surgery caused organic stress, with no change in the anti- or pro-oxidant response.

As espécies reativas de oxigênio (ERO) em baixos níveis são necessárias para as funções normais do espermatozoide, as quais estão envolvidas com a capacidade de fertilização. Entretanto, várias evidências demonstram que a produção excessiva de ERO leva ao estresse oxidativo, que por sua vez está relacionado à infertilidade masculina. Uma correlação positiva entre os níveis excessivos de ERO e concentrações anormais de espermatozoides, motilidade e morfologia tem sido descrita. Além disso, a capacidade antioxidante total do sêmen tem sido significativamente menor em casos de infertilidade comparado com casos férteis. O estresse oxidativo também tem sido relacionado ao envelhecimento e há evidências de que o acúmulo de radicais livres danifica o DNA do espermatozoide e prejudica a fertilização. A Organização Mundial da Saúde tem enfatizado a importância da avaliação do estresse oxidativo seminal e recomendado que cada laboratório estabeleça os valores de referência para os parâmetros do sêmen em sua população. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado redox no sêmen humano e sua correlação com os parâmetros do espermograma. Para tanto, avaliou-se a medida de ERO (quimioluminescência, QL), a atividade antioxidante (QL e catalase), a peroxidação lipídica (malondialdeído, MDA), a medida dos produtos avançados de oxidação proteica (AOPP) e apoptose/necrose (anexina/iodeto de propídeo, citometria de fluxo) no sêmen humano de homens saudáveis e férteis (Controles; n=7). As metodologias foram padronizadas para aplicá-las à análise do sêmen de homens que estavam em investigação de infertilidade (Pacientes; n=23), e correlacionar os resultados com os parâmetros do espermograma. Os principais resultados mostraram 1) a medida de ERO no sêmen de Pacientes sem alterações no espermograma (Pacientesa; n=9) foi maior do aquela para sêmen dos Pacientes com alterações no espermograma (Pacientesb; n=14) e dos Controles, sugerindo comprometimento da qualidade do sêmen pelo aumento de ERO, mesmo com espermograma normal; 2) não houve diferenças entre os grupos quanto à peroxidação lipídica (MDA), aos AOPP, catalase e apoptose/necrose; 3) quanto às correlações entre os parâmetros analisados, observou-se: correlação positiva entre a medida de ERO no sêmen in natura e no sêmen lavado do grupo Pacientes, validando a utilização do sêmen in natura para esta metodologia; correlação positiva entre a medida de ERO in natura e a apoptose, número de espermatozoides e número de leucócitos somente para o grupo Pacientesb; correlação entre a medida de ERO in natura e a motilidade progressiva somente para o grupo Controle; correlação entre apoptose e número de espermatozoides nos grupos Pacientes e Pacientesa; estes resultados mostram correlações particulares em cada grupo e correlações compartilhadas, que caracterizam Controles e Pacientes. O perfil da presença e da ausência destas correlações no grupo Controle pode estabelecer um padrão de referência para as análises do estresse oxidativo no sêmen. Os resultados poderão contribuir para a aplicação da medida das ERO e das suas correlações com parâmetros do espermograma na análise de rotina do sêmen humano, para a investigação da infertilidade e de patologias do sistema reprodutor masculino. / Reactive oxygen species (ROS) at low levels are required for normal function of sperm, which are involved in fertilization capacity. However, evidences show that the excessive production of ROS leads to oxidative stress, which in turn is related to male infertility. A positive correlation between excessive levels of ROS and abnormal sperm concentration, motility and morphology has been described. Moreover, the total antioxidant capacity of the semen has been significantly lower in cases of infertility compared with fertile cases. Oxidative stress has also been associated with aging and there is evidence that the excess of free radicals damages the DNA of sperm and impairs fertilization. The World Health Organization has emphasized the importance of the evaluation of seminal oxidative stress and recommended that each laboratory establish reference values for the parameters of semen in their population. The aim of this study was to evaluate the redox state in human semen and its correlation with semen parameters. For this purpose, we evaluated the measurement of ROS (chemiluminescence, CL), the antioxidant activity (CL and catalase), lipid peroxidation (malondialdehyde, MDA), the advanced oxidation protein products (AOPP) and apoptosis / necrosis (annexin / propidium iodide flow cytometry) in semen of healthy, fertile men (Controls, n = 7). The methods were standardized to apply them to the analysis of semen of men who were in infertility investigation (Patients, n = 23), and to correlate the results with the parameters of sperm. The main results showed: 1) the measurement of ROS in the semen of patients with normal semen (Patientsa, n = 9) was higher than that for semen of patients with abnormal semen analysis (Patientsb, n = 14) and Controls, suggesting impairment of the quality semen by increasing ROS, despite normal semen; 2) no differences were found among the groups regarding to lipid peroxidation (MDA), the AOPP, catalase and apoptosis / necrosis; 3) concerning the correlations among the parameters analyzed, we observed: positive correlation between the measurement of ROS in semen in natura and washed semen of Patients group, validating the use of semen in natura for this method; positive correlation between the measurement of ROS in semen in natura and apoptosis, number of spermatozoa and leukocytes only for the Patientsb group; correlation between the measurement of ROS in semen in natura and progressive motility only for the Control group; correlation between apoptosis and number of spermatozoa in the groups Patients and Patientsa; these results show particular and shared correlations in each group, which characterize Controls and Patients. The profile of the presence and absence of these correlations in the Control group may establish a reference standard for the analysis of oxidative stress in the semen. These results may contribute to the use of the measurement of ROS and their correlations with semen parameters in routine analysis of human semen, for the investigation of infertility and disorders of the male reproductive system.

O consumo crônico de etanol é um importante fator de risco no desenvolvimento de doenças cardiovasculares induzindo elevação da pressão arterial, inflamação, disfunção vascular e aumento do estresse oxidativo em vários tecidos. Além disso, o consumo crônico de etanol induz aumento dos níveis de Fator de necrose tumoral-? (TNF-?). O tecido adiposo perivascular (Perivascular adipose tissue - PVAT) é reconhecido como uma importante fonte de adipocinas e citocinas pró-inflamatórias e esse tecido está envolvido na fisiopatologia de diferentes doenças cardiovasculares. A hipótese deste trabalho é a de que o consumo crônico de etanol estimule a produção de TNF-? no tecido vascular, que por sua vez, induzirá um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), redução da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO), inflamação vascular, prejuízo na função do PVAT, alteração da reatividade vascular e aumento da pressão arterial. Portanto, o objetivo deste estudo foi investigar a participação do TNF-? nas disfunções vasculares induzidas pelo consumo de etanol e avaliar o papel do PVAT em tais danos. O trabalho mostra que o consumo crônico de etanol por 12 semanas induziu aumento da pressão arterial sistólica (PAS) em camundongos machos C57BL/6 (Wild Type -WT) e este aumento foi menor nos animais nocautes para os receptores R1 do TNF-? (TNFR1-/-). O tratamento com etanol não alterou o relaxamento vascular induzido por acetilcolina e nitroprussiato de sódio (NPS). O consumo de etanol induziu aumento da geração de ânion superóxido (O2-), aumento das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e redução dos níveis de peróxido de hidrogênio (H2O2) em aortas com e sem PVAT (PVAT+ e PVAT-, respectivamente) de animais WT, mas não em camundongos TNFR1-/-. Houve aumento da atividade da catalase (CAT) e da superóxido dismutase (SOD) em aorta PVAT- e PVAT+ e redução dos níveis plasmáticos da glutationa reduzida (GSH) em animais WT, mas não em TNFR1-/-, após o consumo crônico de etanol. Não houve alteração na atividade da glutationa peroxidase (GPx) na aorta dos grupos estudados após o consumo de etanol. Observou-se redução dos níveis de nitrato/nitrito (NOx) em aortas de animais WT após o consumo de etanol, porém não em camundongos TNFR1-/-. O consumo de etanol gerou aumento tecidual das citocinas TNF-? e IL-6 e aumento da atividade da mieloperoxidase (MPO), evidenciando uma exacerbada inflamação vascular e indicando migração de neutrófilos para o tecido aórtico. Tais alterações não foram observadas em animais TNFR1-/-. Os resultados mostram pela primeira vez a participação do TNF-? no aumento da pressão arterial, no aumento do estresse oxidativo e nos prejuízos vasculares induzidos pelo consumo crônico de etanol. O tecido adiposo perivascular não apresentou qualquer efeito benéfico nas alterações supracitadas. / Chronic ethanol consumption is an important risk factor in the development of cardiovascular diseases, inducing increased blood pressure, inflammation, vascular dysfunction and enhanced oxidative stress in several tissues. Furthermore, chronic ethanol consumption induces the production of Tumor necrosis factor-? (TNF-?). Perivascular adipose tissue (PVAT) is known as an important source of adipokines and proinflammatory cytokines. This tissue is involved in the pathophysiology of different cardiovascular diseases. The hypothesis of this work is that the chronic ethanol consumption stimulates the production of TNF-?, which in turn, will induce an increase in reactive oxygen species (ROS) generation, nitric oxide (NO) reduction, vascular inflammation, impairment of PVAT function, alterations of vascular reactivity and increased blood pressure. Therefore, the aim of this study was to investigate the role of TNF-? in chronic ethanol consumption-induced vascular dysfunctions and to evaluate the role of PVAT in such damages. This study demonstrated that chronic ethanol consumption for 12 weeks induced an increase in systolic blood pressure (SBP) in C57BL/6 mice (wild type-WT) and this increase was blunted in TNF-? receptor 1 knockout mice (TNFR1-/-). There was no change in vascular relaxation induced by acetylcholine and sodium nitroprusside (NPS). Ethanol consumption increased the superoxide anion (O2-) generation, thiobarbituric acid reactive species (TBARS) and reduction of hydrogen peroxide (H2O2) levels in aorta without and with PVAT (PVAT- and PVAT+, respectively) from WT animals, but not from TNFR1-/- mice. There was an increase in catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) activities in aorta PVAT- and PVAT+, decrease on plasma reduced-glutathione (GSH) levels from ethanol-treated WT but not in TNFR1-/-. Ethanol consumption did not change glutathione peroxidase (GPx) activity in any group. Nitrate/nitrite (NOx) aortic levels were decreased in WT animals, but not in TNFR1-/- after chronic ethanol consumption. Ethanol consumption increased TNF-?, IL-6 cytokines and myeloperoxidase activity (MPO) which suggest a strong vascular inflammation and migration of neutrophils into the aortic tissue. Such changes were not observed in TNFR1-/- mice. The results show for the first time the participation of TNF-? in the increase of blood pressure, increase of oxidative stress and vascular dysfunction induced by the chronic ethanol consumption. The perivascular adipose tissue had no beneficial effect on these changes.

O exercício físico intenso altera o sistema antioxidante, aumentando a geração de radicais livres e/ou diminuindo a concentração de antioxidantes. Assim o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da oferta de vitamina C através de um suplemento alimentar e dieta rica em ácido ascórbico no estresse oxidativo induzido pelo exercício. A amostra foi composta por 13 nadadores de elite (6 homens e 7 mulheres), com idades entre 18 e 26 anos, IMC médio 21,8kg/m², que treinavam em média 19,4h semanais. Os atletas foram submetidos à carga de exercício aguda em 3 fases, controle (C), dieta rica em vitamina C (D) e suplemento de vitamina C (S), nas quais amostras de sangue foram colhidas antes, imediatamente após e 24 horas depois do exercício, para determinação bioquímica e do estresse oxidativo. O uso de suplementos alimentares foi feito pela maioria dos nadadores (92,3%), e os suplementos mais usados eram Maltodextrina, associação de proteína e carboidrato, enquanto o relato do consumo de antioxidantes não foi muito freqüente (25%). Em relação ao consumo de antioxidantes, os nadadores apresentavam consumo alimentar variável de vitamina C, sendo que muitos deles apenas adequaram o consumo devido à adição feita pelo estudo. O consumo de vitamina E foi inadequado para todos os atletas, já o consumo de selênio, retinol e zinco tiveram uma grande oscilação. Durante as fases o único antioxidante que apresentou flutuações foi o ácido ascórbico, que foi menor na fase C em relação às outras fases. Para a maioria dos indivíduos o consumo de carboidrato e fibras se mostrou insuficiente, e o de lipídeos e calorias adequados, enquanto o consumo de proteínas variou bastante. O uso de dieta rica em vitamina C favoreceu uma menor peroxidação lipídica em nadadores de alto rendimento, já que apresentou menores valores de FOX, e diminuição da peroxidação lipídica após exercício, pela diminuição dos valores de TBARS, enquanto tiveram aumento dos níveis de vitamina C no plasma logo após o exercício. Enquanto o uso de suplemento de vitamina C, que também conteve a peroxidação lipídica após exercício, aumentou o poder antioxidante nos mesmos nadadores, devido maiores níveis do antioxidante GSH. Os quais sem uso de nenhuma adição de vitamina C tiveram um maior dano hepático e tecidual, pois apresentaram maiores níveis de TGO, menores níveis de antioxidantes, devido aos baixos níveis de vitamina C e GSH, e um aumento do ácido úrico, um antioxidante que aumenta em situações onde há grande quantidade de radicais livres presentes. Ainda pode-se verificar que, antes do exercício, quanto mais ácido ascórbico na dieta mais vitamina C, menos TGO e menos ácido úrico no sangue; e ainda logo após o exercício e 24 horas depois quanto mais ácido ascórbico menos TGO e menos ácido úrico séricos. Sendo assim as mudanças observadas com a adição de vitamina C à dieta de nadadores de alto rendimento sugere um importante papel do ácido ascórbico plasmático e da suplementação alimentar na defesa contra o estresse oxidativo induzido pelo exercício / The strenuous exercise alters the antioxidant system by increasing the generation of free radicals and / or decreasing the concentration of antioxidants. Then the aim of this study was to investigate the effects of supply of vitamin C through a dietary supplement and diet rich in ascorbic acid in the exercise-induced oxidative stress. The sample was compound of 13 elite swimmers (6 men and 7 women) aged between 18 and 26 years, average BMI 21.8 kg / m², who trained on average 19.4 hours per week. The athletes were submitted to acute exercise load in three phases: control (C), diet rich in vitamin C (D) and supplement vitamin C (S), in which blood samples were collected before, immediately after and 24 hours after exercise to biochemical determination and oxidative stress. The use of dietary supplements is done by most of the swimmers (92.3%), and supplements most used were maltodextrin, association of protein and carbohydrate, while the report of consumption of antioxidants was not very frequent (25%). Regarding the consumption of antioxidants, the swimmers had dietary vitamin C variable, and many of them just adjusted consumption due to addition made by the study. The consumption of vitamin E was inadequate for all athletes, while the consumption of selenium, retinol and zinc had a great oscillation. During the phases the only antioxidant that showed fluctuations was ascorbic acid, which was lower in phases C when compared to other phases. For most individuals the consumption of carbohydrates and fibers were insufficient, and lipid and calories adequate, while protein intake varied widely. The use of diet rich in vitamin C favored a lower lipid peroxidation in swimmers high performance, then showed lower values of FOX, and decreased lipid peroxidation after exercise by the decrease in TBARS values, while they had increased levels of vitamin C plasma immediately after exercise. While the use of supplement vitamin C, which also contained the lipid peroxidation after exercise, increased the antioxidant power of the same swimmers, due higher levels of the antioxidant GSH. This without use addition of vitamin C had a greater damage liver and tissue, because they showed higher levels of TGO, lower levels of antioxidants, due lower levels of vitamin C and GSH, and increased uric acid, an antioxidant that increases in situations where there are lots amount the free radicals presents. Further can be seen that, before exercise, the more ascorbic acid in vitamin C diet, less TGO and less uric acid in blood, and even after exercise and 24 hours after the more ascorbic acid less serum TGO and uric acid. Thus the observed change with the addition of vitamin C to the diet of high-performance swimmers suggests an important role of ascorbic acid and dietary supplementation in protecting against exercise-induced oxidative stress.