Desde su descubrimiento, los antibióticos han marcado un hito importante en el tratamiento de enfermedades y han permitido la realización de intervenciones quirúrgicas antes consideradas como letales. Sin embargo, el uso excesivo de antibióticos puede alterar la microbiota, causando disbiosis y aumentando la predisposición al desarrollo de diversas patologías a largo plazo. Antibióticos de amplio espectro como la Oxitetraciclina (OTC) se utilizan de manera desmesurada en diversas industrias agroalimentarias. La relación entre el mecanismo de acción de OTC y alteraciones de la microbiota es aún desconocida. Actualmente, se conoce que OTC funciona como inhibidor de la síntesis de proteínas durante la fase de elongación. Dicho fase de la síntesis de proteínas es altamente conservada entre las bacterias y no explicaría el efecto diferenciado entre géneros bacterianos asociados a disbiosis. Al unirse a la subunidad menor 30S del ribosoma, existe la posibilidad de que OTC también actúe en otras fases de la síntesis proteica. Entre ellas destaca la iniciación de la traducción del ARNm al presentar al menos dos mecanismos alternativos, utilizados diversamente entre las bacterias. El primero utiliza los factores de iniciación IF1, IF2 e IF3, mientras que el segundo utiliza principalmente IF1 e IF2. En el presente estudio se evalúa a OTC como posible inhibidor de la iniciación de la síntesis de proteínas dependiente de los tres factores mediante métodos bioquímicos y análisis informático de modelamiento estructural. Los resultados indican que IF1 es susceptible a OTC, probablemente por su posicionamiento cercano al antibiótico en el ribosoma. Como consecuencia, OTC induce una mayor estabilización de IF1 en el ribosoma, que va en aumento a través de los complejos intermediarios de iniciación, alcanzando un incremento del 40%. La estabilización de IF1, reducción de su capacidad de disociación del ribosoma, conllevaría a una inhibición de la formación del complejo de iniciación 70S. Los resultados aquí expuestos sugieren un nuevo mecanismo de acción de OTC durante la iniciación de la síntesis de proteínas. El entendimiento del nuevo mecanismo de acción de OTC contribuye con una explicación novedosa y base para el entendimiento de disbiosis mediada por el fármaco. Además, los resultados proporcionan las bases de futuras investigaciones para el desarrollo de nuevos antibióticos que actúen en el mismo blanco molecular. / Antibiotics have stablished an important milestone since their discovery, allowing the treatment of infectious diseases and surgical procedures otherwise considered lethal. However, recent studies show that the use of antibiotics can alter the microbiota, causing dysbiosis and leading to the development of diverse pathologies. In particular, broad- spectrum antibiotics such as Oxytetracycline (OTC) are widely used in agricultural and food industries. The relationship between the molecular mechanism of OTC and microbiota modifications is still unknown. The current model suggests that OTC inhibits the elongation phase of protein synthesis inhibitor. This phase of protein synthesis is highly conserved among bacteria and cannot explain the differentiated effect of OTC among bacterial genus. OTC could act in other phases of protein synthesis since the drug binds to 30S small ribosomal subunit. Among these, mRNA translation initiation stands out since it is represented by at least two alternative mechanisms in bacteria. The first mechanism uses initiation factors IF1, IF2 and IF3, while the second uses mainly IF1 and IF2. In the present study, OTC has been evaluated as a potential protein synthesis inhibitor acting at initiation of translation. Particularly, the study focuses in the mechanism that uses all three initiation factors employing biochemical methods and computer analysis of structural modelling. The results indicate that IF1 is susceptible to OTC, probably due to the near positioning with respect to the antibiotic in the ribosome. Consequently, OTC increases the stabilization of IF1 in the ribosome up to 40% along all intermediate initiation complexes. IF1 stabilization would inhibit of 70S initiation complex formation, suggesting a new mechanism of action for OTC during translation initiation. This finding would explain how OTC causes dysbiosis and provides further basis for future research of new antibiotics with a similar molecular mechanism. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En producción animal, el uso de antimicrobianos es una práctica que tiene como objetivo tratar enfermedades de origen bacteriano. Sin embargo, cuando estas terapias farmacológicas no son realizadas de manera adecuada existe la posibilidad que residuos de fármacos puedan permanecer en los productos y subproductos de origen animal. En particular, el subproducto plumas por su composición estructural presenta afinidad por las tetraciclinas, lo que permite suponer el traspaso de residuos de este antimicrobiano en altas concentraciones y por tiempos más prolongados hacia las plumas en comparación a tejidos comestibles. Estas, al ser transformada en harina de pluma, son utilizadas principalmente como pienso alimenticio en dietas de diversos sistemas productivos, reincorporándose a la cadena alimenticia y llegando de manera indirecta a la población humana, siendo un riesgo para la salud pública. Basándose en los efectos adversos que pueden generar los fármacos, la Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura (FAO) y la organización mundial de la salud (OMS), a través de su comité de expertos (JECFA), establecen los límites máximos residuales para los antibióticos en tejidos comestibles. No obstante, no existe suficiente información científica sobre plumas que permita establecer medidas de control sobre la presencia de residuos de antimicrobianos en esta matriz. Para evaluar la depleción de oxitetraciclina (OTC) y su metabolito activo (4epi-OTC) en musculo, hígado y plumas, se utilizaron 60 pollos broiler criados bajo condiciones ambientales controladas, a los cuales se les administró un tratamiento con una formulación comercial de oxitetraciclina al 10% oral durante siete días. Las concentraciones del analito y su metabolito en las matrices analizadas fueron calculadas a través de la ecuación del análisis de regresión lineal de las curvas de calibración de matriz fortificada (r ≥ 0.95). Se estableció el período de resguardo para las tres matrices con un 95% de confianza, dando como resultado 46 días en plumas, 12 días en músculo y 6 días en hígado. / In animal production, the use of antibiotics is a practice that has as objective the treatment of bacterial diseases. However, when these pharmacologic therapies are not performed in the correct way, there is a chance that pharmacologic residues could stay in the animal products and subproducts. In particular, the feathers subproduct, because of its structural composition, it presents some kind of affinity for tetracyclines, which suggests the transfer of high concentrations and for longer times of this antibiotic to feathers, compared to edible tissues. These feathers, after being transformed into feather meal, are mainly used as animal feed in diets of various food production systems, returning to the food chain and indirectly reaching the human population, becoming a risk for public health. Based on the adverse effects that drug can generate, Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) and World Health Organization (WHO), through its committee of experts (JEFCA), establish the maximum residue limits for antibiotics in edible tissues. However, there is insufficient scientific information about feathers that allow to establish control measures over the presence of antimicrobial residues in this matrix. To evaluate oxytetracycline (OTC) and its active metabolite (4epi-OTC) depletion in muscles, liver and feathers, they were used 60 broilers raised under controlled conditions, which were administered a treatment with a commercial formulation of 10% oral oxytetracycline during seven days. The concentrations of analyte and its metabolite in the matrices analyzed were calculated by the equation of linear regression analysis of standard curves of fortified matrix (r ≥ 0.95). The withdrawal time was established for the three matrices with 95% confidence, resulting 46 days in feathers, 12 days in muscle and 6 days in liver / Proyecto U-INICIA VID 2013 “Evaluación de la bioacumulación de residuos de antimicrobianos en subproductos de aves y su relación con la concentración de estos residuos en tejidos comestibles”. Proyecto FIV 2013 “Bioacumulación de oxitetraciclina, clortetraciclina y sus epímeros en plumas de aves tratadas y su relación con la concentración de estos residuos en tejidos comestibles”

Evalúa el efecto combinado de dosis y formas de dosificación sobre la presencia de residuos de oxitetraciclina en huevos durante el periodo de administración. También se buscó determinar la persistencia de estos residuos durante el periodo de supresión. Se utilizaron 20 gallinas de postura comercial de 50 semanas de edad, divididas aleatoriamente en cinco tratamientos de cuatro repeticiones cada uno, a las cuales se le suministró oxitetraciclina por 7 días. Los tratamientos durante el experimento fueron Tratamiento A: Oxitetraciclina en dosis profiláctica (118 g/1000 L) vía agua de bebida; Tratamiento B: Oxitetraciclina en dosis terapéutica (156 g/1000 L) vía agua de bebida; Tratamiento C: Oxitetraciclina en dosis profiláctica (200 g/t) vía alimento; Tratamiento D: Oxitetraciclina en dosis terapéutica (156 g/1000L y 300 g/t) vía agua de bebida y alimento, respectivamente; Tratamiento E: Agua y alimento libres de oxitetraciclina, como grupo control. Las aves contaron con alimento y agua ad libitum así como 14 horas de luz diaria. Posteriormente se evaluó la presencia residual de antibióticos en los huevos por puesta diaria durante el periodo de administración y por los próximos 14 días, haciendo uso de una prueba microbiológica de difusión agar. Se observó diferencia estadística significativa entre tratamientos en términos de halo de inhibición (p < 0,05) a partir del 3er y 4to día de dosificación. Este efecto se prolongó hasta el 3er y 4to día del periodo de retiro, donde el Tratamiento D presentó residuos con el mayor tamaño de halo de inhibición, además de mostrar niveles residuales en un menor tiempo y con una mayor persistencia en comparación a los otros tratamientos. / Tesis

El amplio uso de antibióticos en producción animal ha aportado sin duda un importante beneficio para la sanidad y el bienestar de los animales. Aunque, en los últimos años este uso ha sido objeto de duras críticas y presiones legales debido a la controversia originada entre el riesgo y el efecto beneficioso de estas sustancias. La oxitetraciclina, por su amplio espectro bacteriano y por su elevado uso tanto preventivo como terapéutico, se encuentra dentro del grupo de antibióticos que mayores críticas han recibido. Por su posible efecto perjudicial para la salud del consumidor y por su posible fallida de la eficacia nos ha conducido a estudiar en profundidad las características farmacocinéticas que presenta este fármaco después de su administración por vía intramuscular en bovino así como la evaluación de la eficacia del tratamiento y la posible presencia de residuos en los tejidos destinados al consumo.Para realizar el estudio cinético, se administró dos formulaciones comerciales oleosas a terneras de raza Frizona, de peso entre 125 y 130, por vía intramuscular a una dosis de 30 mg/kg, en las tablas del cuello, se tomaron muestras de plasma a diferentes tiempos de muestreo hasta 10 días postadministración y se analizaron por cromatografía liquida de alta eficacia (CLAE) y según un método analítico previamente validado. Se calcularon los parámetros farmacocinéticos siguientes: concentración máxima (Cmax, AUC, MRT, Tmax, T1/2?). Se evaluó la bioequivalencia de ambas especialidades utilizadas y finalmente se evaluó la eficacia terapéutica de este fármaco frente a diferentes microorganismos causantes del complejo respiratorio.Para realizar el estudio de residuos, se administró una formulación oleosa por vía intramuscular (30 mg/kg) a 12 terneras y se sacrificaron a diferentes tiempos (28, 35 y 42 días postadministración), se tomaron muestras de los diferentes tejidos diana y se analizaron por cromatografía líquida de alta eficacia y según un método analítico previamente validado y se calculó el tiempo de espera de esta especialidad. Los resultados del estudio de farmacocinética mostraron que ambas especialidades se correspondían a un perfil cinético de formulación retardada y los valores del t1/2? y el MRT obtenidos después de la administración de las dos especialidades ensayadas fueron significativamente altos, ajustándose el perfil cinético a un proceso de absorción de aplicar la estadística, ambas formulaciones demuestran que son bioequivalentes.Los estudios de eficacia demuestran que ambas formulaciones son eficaces frente a Micoplasma hyopneumoniae y Moraxella Boris.El tiempo de espera fue de 45.5 días para riñón y de 54,6 días para el hígado. No fue posible su cálculo en el caso del músculo y en el punto de inyección debido a que en el último tiempo de sacrificio realizado aún se observaron concentraciones por encima del límite máximo de residuos. / The wide use of antibiotics in animal production has contributed an important benefit for the health and the well-being of animals. However, the use of antibiotics has been recently criticized and there have been legal pressures to avoid it, due to the lack of a clear relation between its beneficial effects and its risk.The oxytetracycline, because of its broad bacterial spectrum and its wide prevention and therapeutic use, is within the group of antibiotics that has been mostly criticized. The possible perjudicial effect on the health of the potential consumers and the possible lack of effectiveness, have encouraged us to study in detail the pharmacokinetics characteristics that this group of drugs present after its administration by intramuscular bovine route. We have studied as well the effectiveness of the treatment and the possible presence of residues in animal tissues intended for human consumption.In order to perform the kinetic study, we administered two commercial long acting formulations by intramuscular route at single doses of 30 mg/kg into to neck to 14 cows, whose weight was bet8ween 125 and 130 kg, We took samples from serum at different times from sampling up to 10 days post administration. Those samples were analyzed by high performed liquid chromatography (HPLC) and according to an analytic method previously validated. The following pharmacokinetics parameters were calculated: maximum concentration (Cmax), Area under curve (AUC), Mean residence time (MRT), maximum time (Tmax) and half life (T1/2). The bioequivalence between the two formulations used was evaluated and finally the therapeutic effectiveness of this drug in front of different microorganisms causing the respiratory diseases.In order to study the residues of oxytetracycline, we administered a long acting formulation by intramuscular route (30mg/kg) to 12 cows. The animals were then slaughtered at different times (28, 35 and 42 days following administration). Samples of the different target tissues (muscle, liver and kidney) were collected and they were analyzed using high performance liquid chromatograph in accordance with analytical method previously validated. The withdrawal period was calculated for this speciality.The results of the pharmacokinetic study showed that both formulations belonged to a kinetic profile of a long acting formulation and the values for the t1/2? and the MRT obtained after the administration were highly significant. It was shown that both formulations were bioequivalent. The effectiveness study showed that both formulations were effective against the Mycoplasme hyopneumoniae and Moraxella Boris.The withdrawal period was 45.5 days for the case of kidney and 54.6 days for the case of liver. It was not possible to calculate those values for the case of the muscle and in the injection site due to the presence of concentrations beyond the maximum limit of residues.

LIMA, Antonio Carlos Nogueira de. Residualidade da oxitetraciclina no tecido do camarão marinho Litopenaeus vannamei (Boone, 1931) (Crustacea, Decapoda) submetido a tratamento antibiótico. 2004, 63f. Dissertação (Mestrado em Ciências Marinhas Tropicais) – Instituto de Ciências do Mar, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2004. / Submitted by Debora Oliveira (deby_borboletinha@hotmail.com) on 2011-11-22T14:33:17Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_acndlima.pdf: 458671 bytes, checksum: 442211ae93ecb93782b6e4c5883992e3 (MD5) / Approved for entry into archive by Nadsa Cid(nadsa@ufc.br) on 2011-11-23T18:58:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_acndlima.pdf: 458671 bytes, checksum: 442211ae93ecb93782b6e4c5883992e3 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-23T18:58:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_acndlima.pdf: 458671 bytes, checksum: 442211ae93ecb93782b6e4c5883992e3 (MD5) Previous issue date: 2004 / Shrimp culture is a very important economic activity in the world and the fastest growing industry in Northeast Brazil. Problem with diseases are common in aquaculture and at the least seven species of Vibrio bacteria have been registered infecting shrimps during different culture stages. Oxytetracycline (OTC) has been widely used against these pathogens. In this research the distribution and residue depletion of OTC in Litopenaeus vannamei tissue were evaluated after 14 days of exposure to medicated feed containing 4g.kg-1. Two trials were conducted: in indoor tanks under laboratory controlled conditions and in outdoor encrosures installed in a commercial shrimp grow-out pond. Medicated animals were sampled periodically, during treatment period and thereafter. The tissue levels of OTC were measured by hight performance liquid cromatograph-HPLC. Although in both treatments shrimp were similar conditions, OTC peak concentrations were different. After 7 and 12 days off exposure to OTC, residual values in shrimp tissues were 17,21 μg.g-1 and 3,78 μg.g-1 for the laboratory and field studies, respectivally. Mean OTC residual tissue concentration observed both in the laboratory and field trial are within the limits of minimum inibitory concentration (MIC) refered to vibriosis treatment. During the first 72 hours after the treatment ceased drug residues dropped fast, slowing down afterwords. A save residue level of 0,1μg.g-1 following the European Community requirements, were attained at day sixteen of OTC withdrawl. After 25 days of OTC withdraw no drug residues could be detected. However, it is reccommended a longer withdrawl period as a safeward to obtain complet drug depletion. / O cultivo de camarões é uma importante atividade econômica e tornou-se a indústria que mais cresce no Nordeste brasileiro atualmente. Problemas com enfermidades são comuns na aqüicultura e pelo menos sete espécies de bactérias do gênero Vibrio têm sido registradas infectando camarões durante diferentes estágios de cultivo. A oxitetraciclina (OTC) tem sido utilizada mundialmente contra esses patógenos. Na presente pesquisa, a distribuição e depleção de resíduos de OTC no tecido de Litopenaeus vannamei foram avaliadas depois de 7 dias de exposição à ração medicada contendo 4g.kg-1. Foram conduzidos dois experimentos: em tanques sob condições controladas em laboratório e em gaiolas instaladas em um viveiro de uma unidade de cultivo. Os animais medicados foram amostrados periodicamente, durante o tratamento e pós-tratamento. Os níveis de OTC foram analisados por cromatografia líquida de alta eficiência-CLAE. Embora em ambos os ambientes experimentais o tratamento tenha sido semelhante, os picos de OTC foram diferentes. Depois de 7 e 12 dias de exposição, as concentrações no tecido dos camarões foram 17,21 μg.g-1 e 3,78 μg.g-1 nos estudos realizados em laboratório e campo, respectivamente. A concentração média observada nos ambientes em estudo manteve-se dentro dos limites da concentração inibitória mínima-CIM, referida para o tratamento de vibrioses. Durante as primeiras 72 horas após cessado o tratamento, resíduos da droga reduziram muito rapidamente, sendo eliminados mais lentamente depois deste período. O nível residual de segurança de 0,10 μg.g–1, imposta pela Comunidade Européia, foi alcançado no 16o. dia de pós-tratamento. Depois do 25o. dia nenhum resíduo da droga pôde ser detectado. Entretanto, devido à influência de fatores ambientes neste processo, recomenda-se um período de eliminação mais longo como medida de segurança para obtenção da eliminação completa da droga.

Tesis entregada a la Universidad De Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al grado de Magíster en Ciencias Biológicas. / El aumento en la aparición de microrganismos resistentes a los antibióticos es de gran preocupación en el ámbito de salud pública debido al aumento de la mortalidad y costos de tratamiento causado por las enfermedades que provocan. Se han detectado concentraciones de residuos de antibióticos sobre los niveles inhibitorios en aguas residuales, y los tratamientos actuales no son capaces de eliminar estos residuos. En relación con todo esto, los antibióticos de tipo tetraciclina son de gran interés debido a su alto uso, alto nivel de excreción y a su alta persistencia en el medio ambiente. Se ha reportado el uso de enzimas de tipo laccasa de hongos basidiomicetos para la oxidación de diferentes tetraciclinas mostrando distintas eficiencias. Sin embargo, las propiedades observadas aún están por debajo de lo requerido para una aplicación industrial y la optimización ha sido hasta ahora afrontada desde el ámbito de la Biocatálisis y no desde la Ingeniería de Enzimas. En este trabajo se estudió el uso de la laccasa del hongo ascomiceto Botrytis aclada expresada en P. pastoris para la oxidación de tetraciclinas, enzima que presenta una alta tolerancia a inhibición por iones cloruro y alta producción heteróloga. Se produjo y purificó la enzima y se probó su capacidad para oxidar oxitetraciclina e inactivar oxitetraciclina, clortetraciclina y tetraciclina. Bajo la hipótesis de que el sitio de unión de tetraciclinas corresponde al sitio canónico de las Laccasas y con la información disponible sobre el mecanismo catalítico, se modeló la interacción con estos 3 antibióticos y se calculó su energía de unión por métodos in silico. Además, las constantes de disociación de los distintos complejos fueron estudiadas in vitro mediante análisis de la inhibición competitiva ejercida por el antibiótico sobre la actividad de oxidación de ABTS de la laccasa. Observamos que la energía calculada correlaciona con la constante de disociación determinada para los tres antibióticos, mostrando una afinidad por Clortetraciclina > Tetraciclina > Oxitetraciclina. / The high apparition rate of antimicrobial resistant bacteria is of great concern for public health care due to the rise in mortality and the high cost associated to treat the illnesses caused by them. Antibiotic residual concentrations highly over the inhibitory levels have been detected in wastewaters. Now, wastewater treatment plants are not able to remove this kind of residues. In this matter, tetracycline antibiotics are of great concern due to their high use, high excretion rates and persistence in the environment. The use of Laccases from basidiomycetes for the oxidation of a variety of tetracyclines has been reported, showing variable performance. However, the observed oxidation rates are still under the required for industrial applications. Antibiotics removal has been optimized using approaches from the biocatalysis field and not from rational design enzyme engineer. In this work, we studied the use of laccase from Botrytis aclada, an ascomycete fungus, for the oxidation of tetracyclines. This enzyme shows high tolerance to chloride inhibition and high heterologous production rates. The enzyme was expressed and purified, and we proved its capacity to oxidase oxytetracycline and to inactivate oxytetracycline, and tetracycline. Having in mind the hypothesis that the binding site of tetracyclines is the canonical laccase active site, we modeled the interaction with those three antibiotics and calculated the energy of binding using in silico approaches. Also, we determined in vitro the dissociation constants of the complexes by analyzing inhibition kinetics using the antibiotic as a competitive inhibitor of the enzymatic ABTS oxidation. We observed a good correlation between the calculated Energy and the dissociation constants, showing higher affinity for Chlortetracycline > Tetracycline > Oxytetracycline. / CONICYT-PCHA/MagísterNacional/2016 – folio 22160435 y proyecto FONDEF-VIU16E0084. / Agosto 2019

Submitted by Bruna Rodrigues (bruna92rodrigues@yahoo.com.br) on 2016-09-23T13:08:05Z No. of bitstreams: 1 TeseZADP.pdf: 1197588 bytes, checksum: 4e1f7602ee6da5dec0dbca0315893fa4 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:01:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseZADP.pdf: 1197588 bytes, checksum: 4e1f7602ee6da5dec0dbca0315893fa4 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:01:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseZADP.pdf: 1197588 bytes, checksum: 4e1f7602ee6da5dec0dbca0315893fa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T18:01:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseZADP.pdf: 1197588 bytes, checksum: 4e1f7602ee6da5dec0dbca0315893fa4 (MD5) Previous issue date: 2015-06-15 / The actual agricultural production system requires the use of chemicals such as pesticides and antimicrobials. These compounds, when reach aquatic environments, can cause serious environmental problems and affect target and non-target organisms such as microorganisms, that play key ecological functions to the ecosystem functioning. So, the objectives of this study were: (i) to evaluate the bactericidal action of oxytetracycline (OTC) and fungicide imazalil (IMZ) on bacterial ecological function of pesticide fipronil degradation; (II) evaluate the effect of oxytetracycline on density and aquatic bacterial diversity; (III) to monitor changes in bacterial dynamics in the presence of fipronil. Water was sampled in Beija-Flor Reservoir for mounting the experiments. Microcosms were prepared in triplicates for six different treatments: water; water and OTC; water and IMZ; water and fipronil; water, fipronil and OTC; water, fipronil and IMZ. The microcosms were kept in the dark at 21oC. Samples were collected at 1, 5, 10, 20, 45 and 70 days of incubation. It was determined the water pH, the dissolved organic carbon (DOC), total nitrogen (TN), OTC and fipronil concentrations. Water samples from the microcosms were also used for bacterial density analysis by epifluorescence microscopy and diversity by DGGE band profiles analysis. The presence of OTC alone and especially mixed with IMZ affects bacterial diversity, but does not cause significant effect on fipronil degradation, suggesting the existence of functional redundancy among the individuals that formed the bacterial community. The oxytetracycline, at certain concentrations, promotes a bacterial density decrease and diversity increase, probably by mediating the coexistence of species as a result of the growth control of the best competitive bacteria. Fipronil may cause bacterial density increase but, concerning its diversity, initially in the experiment, it was reduced, comparing with the control samples. However, after 70 days, the diversity was similar, suggesting that the community was reestablished, leading us to consider that the community was resilient to the impact caused by fipronil. / O atual sistema de produção agropecuário exige a utilização de produtos químicos como os antimicrobianos e agrotóxicos. Estes compostos, ao alcançarem os ambientes aquáticos, podem trazer sérios problemas ambientais e afetar vários organismos, como os microrganismos, que desempenham funções ecológicas fundamentais ao funcionamento ecossistêmico. Desta maneira, os objetivos deste trabalho foram: (I) avaliar a ação do bactericida oxitetraciclina (OTC) e fungicida imazalil (IMZ) na função ecológica bacteriana de degradação do agrotóxico fipronil; (II) avaliar o efeito da oxitetraciclina na densidade e diversidade bacteriana aquática; (III) acompanhar alterações na dinâmica bacteriana na presença do fipronil. Foi coletada água da Represa do Beija-Flor para a montagem dos experimentos. Foram preparados microcosmos em tréplica para seis tratamentos distintos: água; água e OTC; água e IMZ; água e fipronil; água, fipronil e OTC; água, fipronil e IMZ. Os microcosmos foram mantidos a 21 oC, no escuro. Foram feitas amostragens nos tempos 1, 5 10, 20, 45 e 70 dias de incubação. Foram determinados o pH da água, carbono orgânico dissolvido (COD), nitrogênio total (NT) e as concentrações de OTC e fipronil. Amostras de água provenientes dos microcosmos foram utilizadas para análise bacteriana de densidade por microscopia de epifluorescência e análise de diversidade por meio dos perfis de bandas do DGGE. A presença da OTC sozinha e principalmente em mistura com IMZ, afeta a diversidade bacteriana, porém não causa efeito significativo na degradação do fipronil, sugerindo existência de redundância funcional entre os indivíduos que constituíram a comunidade bacteriana. A oxitetraciclina, em determinadas concentrações, causa a diminuição na densidade bacteriana e pode promover o aumento da diversidade, provavelmente por mediar à coexistência de espécies em consequência do controle do crescimento de bactérias mais competitivas. O fipronil pode causar o aumento da densidade bacteriana mas quanto à diversidade, no início do experimento, ela foi menor que nas amostras controle. Porém, após 70 dias, as diversidades ficam semelhantes, sugerindo que a comunidade se reestabeleceu, podendo esta ser considerada resiliente a perturbação causada pelo fipronil.

Orientador: Felix Guillermo Reyes Reyes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-09T00:18:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maia_PatriciaPenido_D.pdf: 738805 bytes, checksum: 45cdc642b12e037677eca58fb443a574 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Antimicrobianos como fungicidas e/ou bactericidas têm sido utilizados para a melhoria da qualidade de produtos vegetais destinados à alimentação humana ou para sua maior produtividade em várias fases de sua obtenção, tais como: preparo do solo, crescimento, colheita, industrialização e comercialização. Entretanto, vários destes compostos podem permanecer como resíduos nos alimentos consumidos, e, dependendo de sua toxicidade e nível de exposição, podem apresentar risco à saúde do consumidor. Entre estas substâncias estão os agentes antimicrobianos usados para combater ou prevenir o aparecimento de alterações de origem microbiana no alimento. O desenvolvimento de métodos analíticos para a identificação e quantificação destes agentes em produtos vegetais é de grande interesse, uma vez que a exposição crônica em baixos níveis antimicrobianos pode promover a resistência bacteriana a antibióticos, assim como reações alérgicas. Dessa forma, o presente trabalho objetivou desenvolver metodologia para o isolamento, identificação e quantificação de resíduos de oxitetraciclina em tomate, o qual é muito sensível a bacterioses, assim como comparou os níveis residuais encontrados nos frutos de cultura protegida (estufa) e cultura de campo. A metodologia analítica desenvolvida foi aplicada na análise de tomates comercializados na região de Campinas/SP e Alfenas/MG. Os dados obtidos foram comparados com os limites máximos de resíduos (LMRs) e os intervalos de segurança estabelecidos pela legislação brasileira em condições de plantio no campo. Foi validado, ainda, um método para quantificação dos antibióticos oxitetraciclina e estreptomicina em formulações para uso agrícola utilizadas para tratamento de tomates / Abstract: Antimicrobials as fungicides and/or bactericides have been used for the improvement of the quality of vegetal products destined to the human feed and for its higher productivity in some phases of its cultivation, such as: preparation of the ground, growth, harvest, industrialization and commercialization. However, several of these compounds can remain as residues in consumed foods, and, depending on its toxicity and level of exposure, they can present a risk to the health of the consumer. Among these substances are the antibiotics used to combat or to prevent the appearance of alterations of microbial origin in the food. The development of analytical methods for the identification and quantification of these agents in vegetal products is of great interest, once the chronic exposure to low levels of antimicrobials can promote bacterial resistance to the antibiotics, as well as allergic reactions. Therefore, the present study aimed to develop a methodology for the isolation, identification and quantification of residues of oxytetracycline in tomato, which is very sensible to bacterioses, as well as was compared the residual levels found in fruits cultivated in greenhouse and open field. The developed analytical methodology was applied in the analysis of tomatoes purchased in the region of Campinas/SP and Alfenas/MG. The obtained data were compared with the maximum residue limits (MRLs) and the intervals of security established by the Brazilian legislation in conditions in the field. It was validated a method for quantification of antibiotics oxytetracycline and streptomycin in agricultural formulations used for treatment of tomatoes / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Hoy en día la industria farmacéutica posee estándares de calidad bastante exigentes y cada día se hace más necesario conocerlos y manejarlos para el profesional Químico Farmacéutico. El período de práctica prolongada se constituye de esta manera en una herramienta fundamental para profundizar los conocimientos en el tema y comenzar a aplicarlos. Pfizer Chile S.A. es una empresa líder en el mercado farmacéutico y sus estándares de calidad cumplen con las normas vigentes hoy en el país. Para conocer y manejar estas normas fue necesario involucrarse directamente en cada una de las áreas que permiten conseguir un producto garantizado y eficaz. Con este fin, se realizaron una serie de actividades durante los seis meses de práctica profesional, estas fueron: Revisión de material de empaque: el material de empaque es de gran importancia para que un producto cumpla satisfactoriamente con las exigencias actuales, ya que, es la cara visible de este y la carta de presentación del fármaco al cuerpo médico, químico farmacéutico y pacientes. En esta área se revisó un gran número de materiales de empaque (etiquetas, cajas, blister, folletos informativos, etc.) con el fin de asegurar el cumplimiento de las características de calidad y contenido (registros). Este proceso se realiza dentro del laboratorio para productos acondicionados de manera local y en las dependencias del importador y distribuidor para aquellos productos que ingresan al país terminados. Análisis de medicamentos: Se realizó un acucioso análisis de todos los parámetros exigidos para cada producto (identificación y valoración de los principios activos, identificación de los principios activos, control de peso, control de contenido, viscosidad, dureza, tiempo de disolución, etc.) según corresponda. Durante el período de práctica se realizó un gran número de análisis y se logró adquirir la experiencia necesaria en la aplicación de distintos métodos analíticos tanto para productos terminados como para materias primas, así como también los requisitos necesarios para que estos sean aprobados. Desarrollo, implementación y validación de metodología analítica para la identificación y cuantificación por HPLC de Oxitetraciclina Clorhidrato e Hidrocortisona Micronizada en suspensión para Spray: esta etapa constituye el objetivo final de la práctica profesional por lo que las etapas y estudios realizados se encuentran detallados en este trabajo. Aseguramiento de calidad: involucra el estudio y ejecución de los criterios y actividades desarrolladas en este ámbito por el profesional Químico Farmacéutico. Se implementó el POS (Procedimiento Operativo Estándar) de validación para Pfizer Chile SA basándose en las exigencias de Pfizer internacional y los parámetros más actuales referentes a este tema. Luego se desarrolló un estudio de mantenimiento de la cadena de frío en el transporte de materiales y productos refrigerados, además se diseño un instructivo y un POS. Se realizó una revisión exhaustiva del material de los artes de productos farmacéutico con el fin de establecer una línea de tiempo que permitiese adelantar posibles problemas con materiales importados y la ley actualmente vigente en el país

A atividade de antimicrobianos, entre os quais os usados como Antibióticos Promotores de Crescimento (APC´s), quando liberados no solo podem influenciar diretamente na sua biota. Muitas das bactérias presentes em solos cultiváveis e florestais têm papel fundamental na imobilização de minerais e processos de decomposição. Sendo assim, extinguindo-se ou alterando-se as bactérias presentes neste meio, a degradação de compostos xenobióticos, por exemplo, ficaria comprometida, havendo ainda a preocupação do desenvolvimento de bactérias resistentes. Além disso, também são praticamente inexistentes os estudos que tratam a respeito da interação entre antibióticos tetraciclínicos, com constituintes da matéria orgânica do solo no Brasil. Dentro deste contexto, procedeu-se a caracterização de amostras de latossolos oriundas de mata nativa e pastagem, ambas de texturas argilosa e arenosa, bem como os ácidos húmicos extraídos dos mesmos. Foram conduzidos ensaios de sorção dessas amostras com o antibiótico oxitetraciclina, desenvolvendo metodologia de determinação deste composto por LC-MS. Constatou-se que a concentração hidrogeniônica é o fator que mais tem influência no processo de sorção solo-OTC e AH-OTC; com destaque para a condição de pH 5,0, situação da qual mais se aproximam os valores de pH reais dos solos brasileiros. Tal condição apresentou as alterações mais expressivas no que diz respeito às possíveis interações ocorridas entre o antibiótico e os ácidos húmicos. A variável textura do solo também se mostrou importante, seguida pelo teor de matéria orgânica e manejo. / The antimicrobials activity, among then the ones used as growth promoter, when released in soil, could influence directly its biota. Many organisms present in cultivable soils have an important function in metals retaining and decomposition processes. Modifying or excluding these bacterias, de xenobiotic compunds degradation, for example, would be at risk, with the worring of resistant bactérias development. Besides this, the studies envolving tetracyclinic antibiotics interaction with the organic matter in Brazil are scarce. In this contexto, the soil samples characterization from forest and pasture, both with clay and sandy textures, was carried out, and also done with the extracted humic acids from them. Sorption experiments were carried out with the soil and the humic acids, and the oxytetracycline. It was developed a method for OTC determination using LC-MS. It was also found that the pH was the most important variable which influence in the sorption process soil-OTC and HA-OTC, especially at pH 5,0. The most significant modifications concerning the samples interactions with OTC occurred at this condition. The texture also showed important results, followed by the organic matter concentration and soil manure.