Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-26T18:48:58Z No. of bitstreams: 1 TESE Filipe Colaço Mariz.pdf: 10437063 bytes, checksum: 39022646be419996ba34ec6bd45492a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-26T18:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Filipe Colaço Mariz.pdf: 10437063 bytes, checksum: 39022646be419996ba34ec6bd45492a1 (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / CAPES / O Papilomavírus (PV) é um reconhecido agente de lesões hiperproliferativas benignas que, sob determinadas circunstâncias, podem evoluir para lesões cancerosas. Em humanos, o HPV está relacionado ao desenvolvimento do câncer cervical e anogenital, enquanto o BPV é o agente de cânceres em bovinos e equinos. Atualmente, duas vacinas estão licenciadas para profilaxia contra o HPV, as quais se baseiam em partículas semelhantes ao vírus (VLPs, virus-like particles) obtidas a partir da produção da proteína L1 em sistemas de expressão heteróloga. Apesar de comprovadamente eficazes, ambas as vacinas apresentam importantes limitações relacionadas ao baixo espectro de proteção e elevado custo, o que impede sua implementação sobretudo nos países em desenvolvimento. Neste trabalho, apresentamos o desenvolvimento de duas plataformas biotecnológicas para produção de candidatos vacinais contra o HPV e BPV. Uma das plataformas emprega um sistema genético baseado no promotor constitutivo do gene PGK1 da levedura Pichia pastoris para expressão intracelular da proteína L1 de HPV16. Em paralelo, diferentes candidatos vacinais do HPV e BPV foram desenvolvidos para expressão em Leishmania tarentolae através do emprego de distintos sistemas genéticos. As análises de expressão por dot blotting e western blotting com anticorpos monoclonais demonstram a presença dos candidatos vacinais no lisado das leveduras recombinantes, enquanto evidências obtidas por microscopia eletrônica de transmissão sugerem a formação de VLPs no citoplasma dos clones cultivados. Em contrapartida, as análises por ultracentrifugação e purificação com resina de heparina-sepharose evidenciaram a formação de capsômeros e VLPs quiméricas a partir dos candidatos vacinais produzidos em L. tarentolae. Interessantemente, nossos ensaios apresentam evidências de uma modificação pós-traducional ainda não revelada em espécies de Leishmania, denominada SUMOilação. Demonstramos por diferentes abordagens que tal modificação, ao ser realizada na proteína L2, ocorre através de um padrão semelhante ao descrito em células de mamíferos. Futuros ensaios focarão na determinação dos níveis de produção a partir de cultivos em biorreator e na imunogenicidade de candidatos vacinais desenvolvidos. Esses resultados demonstram a viabilidade do emprego de P. pastoris e L. tarentolae como plataforma vacinal para o desenvolvimento de abordagens potencialmente mais econômicas e de largo espectro contra a papilomatose humana e animal. / Infection by Papillomavirus (PV) is a well-known cause for the establishment of hyperproliferative and benign lesions (warts) that can evolve to carcinoma under specific circumstances. In human, HPV is related to cervical and other anogenital cancer, while BPV is the causal agent of different types of cancer in cattle. The current HPV vaccines licensed for prophylaxis against cervical cancer are based on virus-like particles (VLPs) obtained through the expression of major capsid L1 protein in heterologous expression systems. Although highly effective, both vaccines present important limitations related to their low spectrum of protection and high cost, which compromises their implementation worldwide, mainly in developing countries. Herein, we present the development of two biotechnologic platforms for production of vaccine candidates against HPV and BPV. The first one employs a genetic system based on the Pichia pastoris PGK1 constitutive promoter for intracellular expression of HPV16 L1 protein. In parallel, we designed different HPV16 and BPV1 vaccine candidates for expression in the protozoan Leishmania tarentolae through distinct genetic systems. Expression analysis by dot blotting and western blotting using monoclonal antibodies demonstrated the detection of L1 protein in the total protein lysate of recombinant yeasts, in addition to the electron microscopy evidences suggesting VLP assembling within the cytosol of the clones. In the other hand, ultracentrifugation and purification on heparin-sepharose resin evidenced the assembling of capsomeres and VLP by expressing of L1-based candidates in L. tarentolae. Interestingly, our set of data indicates the occurrence of a post-translational modification by small ubiquitine-like modifier (SUMO) still not revealed in Leishmania species. For the first time, we demonstrate that such modification (SUMOylation), when presented in the L. tarentolae-expressed HPV16 L2 protein, takes place in a mammalian-like pattern. Future studies will focus on immunogenicity assays with the vaccine candidates developed here. The data presented here demonstrated the feasibility of P. pastoris PGK1-based system and L. tarentolae as platforms for the developing of low cost and large spectrum vaccine strategies against human and animal papillomatosis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 327460.pdf: 2499608 bytes, checksum: 83bd5999f368f885e667daa4c2881631 (MD5) Previous issue date: 2014 / O Papilomavirus Humano (HPV) e Chlamydia trachomatis (CT) são responsáveis pelas Doenças Sexualmente transmissíveis, de origem viral e bacteriana, mais prevalentes na população sexualmente ativa. O HPV desempenha papel central na etiologia de praticamente todos os casos de câncer cervical, entretanto, admite-se que outros fatores possam, conjuntamente com o vírus, modular o risco de transição da infecção cervical para a malignidade. Além do HPV, diversos estudos estão considerando a CT como um cofator no desenvolvimento de neoplasias intraepiteliais cervicais e outras alterações celulares significativas em mulheres com histórico de infecção por HPV. Diante disto, o objetivo deste estudo foi estimar a prevalência de HPV, CT e a coinfecção HPV/CT por métodos moleculares (PCR-multiplex, microarray, RFLP e sequenciamento) em amostras cervicais de mulheres atendidas no Sistema Único de Saúde da cidade de São Miguel do Oeste/SC. Trata-se de um estudo transversal, cujo desfecho é a positividade ao HPV e à CT. Durante o período de novembro de 2011 a março de 2013, foram coletadas amostras cervicais de 325 mulheres sexualmente ativas e que procuraram o serviço de saúde para rastreio rotineiro do câncer cervical. As amostras foram submetidas à PCR-multiplex padronizada neste estudo, utilizando os conjuntos de iniciadores PGMY0911, CTP1/CTP2 e PCO3/PCO4. As amostras positivas para HPV foram submetidas à técnica de PCR-RFLP (Polimorfismo dos Fragmentos de Restrição), microarray e sequenciamento. A prevalência do DNA de HPV foi de 24,6% na amostra estudada. Já em relação à CT a prevalência foi de 11,1% e 4,6% da amostragem total, apresentando coinfecção para HPV/CT. Observou-se associação do HPV com as seguintes variáveis: citologia (p<0,001), idade (p=0,001), idade de início da atividade sexual (p= 0,008) e o uso de anticoncepcional oral (p=0,048). Encontrou-se associação entre a CT e o número de parceiros ao longo da vida (p=0,048). Observou-se associação entre as variáveis: idade (p=0,006) e uso de anticoncepcional oral (p=0,011) com a presença da coinfecção HPV/CT. A genotipagem das amostras pelas três metodologias (RFLP, sequenciamento e microarray) identificou 32 genótipos diferentes de HPV, dentre eles o 16, 39, 53, 68 e 56 foram os mais prevalentes. A PCR-multiplex, padronizada neste estudo, mostrou-se útil no rastreio simultâneo do HPV e da CT, assim como a metodologia PCR-RFLP apresentou um bom desempenho para a identificação concomitante de até dois tipos deHPV em uma mesma amostra. O sequenciamento mostrou-se uma excelente ferramenta para a identificação de infecções por um único tipo viral, enquanto o Papillocheck® foi o método capaz de detectar amostras polinfectadas. A PCR-multiplex associada a PCR-RFLP pode ser utilizada como um método de rastreio e identificação de genótipos de HPV em infecções simples ou como discriminatório entre infecções simples ou múltiplas, enquanto que a análise por uma metodologia com maior poder discriminatório, pode ser utilizada como método complementar, principalmente em locais com poucos recursos financeiros. Embora a sensibilidade do RFLP tenha sido inferior ao desejável para a maioria dos tipos virais, o alto valor preditivo negativo desta metodologia define sua utilidade no rastreio do HPV, visto que resultados negativos em metodologias com elevado valor preditivo negativo são confiáveis.<br> / Abstract : The Human Papillomavirus (HPV) and Chlamydia trachomatis (CT) are responsible for the most prevalent sexually transmitted disease caused by virus and bacteria. HPV has a central role in the etiology of virtually all cervical cancers; however it is believed that other factors may also modulate the risk of a cervical infection progress to malignancy. Many studies consider CT as a cofactor in cervical intraepithelial neoplasia development as well other significant cell abnormalities in women with history of HPV infection. The aim of this study was to estimate the prevalence of HPV, CT and HPV/CT coinfection by molecular methods in cervical samples from women attending public health services at São Miguel do Oeste/SC. This is a cross-sectional study and the outcomes are positive results to HPV, CT or HPV/CT coinfection. A total of 325 cervical samples were collect from sexually active women seeking cervical cancer screening from November 2011 to March 2013. HPV, CT and coinfections were detected by PCR-multiplex using the consensus primers, PGMY0911, CTP1/CTP2 e PCO3/PCO4. HPV-positive samples were typed by PCR-RFLP, microarray and sequencing. The HPV, CT and HPV/CT prevalence were 24.6%, 11.1% and 4.6% respectively. Statistics associations were observed for HPV with the variables cytology (p<0,001), age (p=0,001), first sexual intercourse (p= 0,008) and oral contraceptive use (p=0,048). There was a significant association between CT and number of partners along the life and age (p = 0.006), and oral contraceptive use (p = 0.011) with HPV/CT coinfection. A total of 32 HPV different genotypes were identified by RFLP, microarray and sequencing and the most prevalent types were 16, 39, 53, 68 and 56. The multiplex-PCR proved to be useful to simultaneously detect HPV and CT. The RFLP showed good performance to identify up to two viral types in the same sample. The sequencing methodology proved to be an excellent tool for the identification of a single viral type, while the Papillocheck® was the best method for samples infected for more than two viral types. The PCR-RFLP has a high predictive negative value and can be used as a screening method. To samples with more than two viral types a complementary methodology with high discriminatory power can be used. Alternatives protocols like combination of a cheap in house RFLP and an expensive commercial methodology with high discriminatory power can be used, specially in places with few financial resources to ensure best quality to screening.

Submitted by Rafael Santana (rafael.silvasantana@ufpe.br) on 2018-01-23T19:41:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Tese Morse Edson Pessoa Júnior.pdf: 2236839 bytes, checksum: bc09012f3fd9a4849400deb2db1397df (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-23T19:41:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Tese Morse Edson Pessoa Júnior.pdf: 2236839 bytes, checksum: bc09012f3fd9a4849400deb2db1397df (MD5) Previous issue date: 2016-08-18 / A papilomatose bovina é uma doença infecto-contagiosa causada pelo Papillomavírus Bovino (BPV). Existem relatos na literatura de bovinos infectados com mais de um tipo de BPV, além de animais que não apresentam os sintomas da doença O estudo tem como objetivos, genotipar os animais quanto à infecção pelo BPV e ao desenvolvimento da papilomatose cutânea; analisar a presença de co-infecções em lesões cutâneas e em tecido sanguíneo, avaliar a associação de polimorfismos dos genes MBL2 e TNF-alfa com a papilomatose bovina. Foram coletadas 127 amostras de sangue de bovinos e 35 amostras de lesões cutâneas, realizada a tipificação dos BPVs por PCR e o estudo de associação dos SNPs dos genes TNF-alfa e MBL2, por PCR e sequenciamento. Os tipos de BPV mais encontrados nas amostras de sangue foram: BPV 10 (97,75%), BPV 12 (92,13%), BPV 2 e BPV 9 com (88,76%). Os tipos de BPV mais encontrados nas lesões foram: BPV 2 e BPV 3 (100%), BPV 11 (97,1%), BPV 10 (94,2), BPV 12 (91,42%), BPV 4 (82,85%), BPV 6 (80,0 %). A co-infecção foi detectada em 99% das amostras de sangue. Nas amostras de lesões foi constatado a co-infecção em 100% das amostras. As sequências obtidas para o gene MBL2 apresentaram 245 sítios conservados e 02 variáveis, o gene TNF-alfa apresentou 638 sítios conservados e um variável. Nas amostras avaliadas, não foram encontradas associações com os SNPs dos genes MBL2 (exon1) com um p-value de 0.837, TNF-alfa (-1044 a -406) com um p-value de 0.782 e a papilomatose bovina. / Bovine papillomatosis is an infectious disease caused by Bovine Papillomavirus (BPV). There are reports in the literature of infected cattle with more than one type of BPV, and animals that do not show symptoms of the disease The study aims, genotyping animals as the BPV infection and the development of cutaneous papillomatosis; analyze the presence of co-infections in skin lesions and blood tissue, evaluate the association of polymorphisms of genes MBL2 and TNF-alpha with bovine papillomatosis. 127 were collected bovine blood samples and 35 samples of skin lesions, carried out the characterization of BPVs PCR and SNP association study of TNF-alpha and MBL2 by PCR and sequencing. The BPV types most commonly found in blood samples were BPV 10 (97.75%), BPV 12 (92.13%), BPV 2 and 9 with BPV (88.76%). The BPV types most commonly found in lesions were BPV BPV 2 and 3 (100%), BPV 11 (97.1%), BPV 10 (94.2), BPV 12 (91.42%), BPV 4 (82, 85%), BPV 6 (80.0%). Co-infection was detected in 99% of the blood samples. In lesions of the samples was found to co-infection in 100% of the samples. The sequences obtained for the MBL2 gene are conserved sites 245 and 02 variables, TNF-alpha gene showed 638 and a variable conserved sites. In the analyzed samples, associations were found with the SNPs of the MBL2 (exon1) with a p-value of 0.837, TNF-alpha (-1044 to -406) with a p-value of 0782 and bovine papillomatosis.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2010-04-06T11:52:20Z No. of bitstreams: 1 2009_TainaRaiolAlencar.pdf: 3887574 bytes, checksum: 9c81623652a4b5376d8833723c68e511 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-04-06T16:22:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_TainaRaiolAlencar.pdf: 3887574 bytes, checksum: 9c81623652a4b5376d8833723c68e511 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-04-06T16:22:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_TainaRaiolAlencar.pdf: 3887574 bytes, checksum: 9c81623652a4b5376d8833723c68e511 (MD5) Previous issue date: 2009 / Mais de 100 tipos de HPV foram descritos, dos quais 13 são classificados como de alto risco devido à sua associação com o desenvolvimento do câncer cervical. O presente estudo investigou a variabilidade e filogenia dos HPV de alto risco -31, -33, - 35, -52 e -58, isolados a partir de amostras do Distrito Federal. Para tanto, a LCR e os genes E6 e L1 foram sequenciados. Diversos variantes foram detectados, incluindo 13 novos variantes de todos os tipos analisados. A análise filogenética dos isolados de HPV-31, -33, -35 e -58 não revelaram agrupamentos étnicos ou geográficos como observados previamente para os HPV-16 e -18. A análise do HPV-35 mostrou uma topologia dicotômica característica de subtipos do HPV. Interessantemente, quatro agrupamentos foram identificados na análise de variantes de HPV-52, dos quais dois puderam ser classificados como ramos Asiático e Europeu. Além disso, nós comparamos a atividade do promotor de E6/E7 de variantes moleculares do HPV-58 detectados no Distrito Federal, uma vez que este é o segundo tipo mais frequentemente detectado em lesões cervicais de alto grau nessa região. Para este propósito, as sequências da LCR do protótipo do HPV-58 e de três variantes foram amplificadas e clonadas à montante do gene repórter luciferase e transfectados transientemente em células C33. Para comparação, também foram analisadas as sequências da LCR dos HPV-18 e -16. O protótipo do HPV-58 e os variantes Bsb-329 e Bsb-327 mostraram atividade transcricional similar ao HPV-16, mas cerca de seis vezes menor que o HPV- 18. Interessantemente, o variante de HPV-58 Bsb-295 apresentou uma alta atividade transcricional, mesmo comparável ao HPV-18. Esse variante de HPV-58 é o único isolado em que foi detectada a substituição nucleotídica na posição 7788. Foram construídos mutantes por meio de mutagênese sítio-dirigida com o intuito de analisar o impacto dessa alteração nucleotídica na atividade do promotor viral. A introdução da mutação 7788 no isolado protótipo do HPV-58 levou a uma atividade transcricional similar ao observado para o variante Bsb-295 e o protótipo do HPV-18. Em conjunto, os dados indicam que essa única variação é capaz de aumentar a atividade do promotor viral e poderia levar a uma maior expressão dos oncogenes virais E6 e E7 in vivo. Entretanto, estudos adicionais são necessários para identificar os fatores transcricionais celulares envolvidos nessa regulação. O estudo dos variantes de HPV é crucial para entender a sua distribuição geográfica e as diferenças biológicas desses vírus, contribuindo ainda para estudos sobre sua infectividade e patogenicidade. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / More than 100 HPV types have been described, of which 13 are classified as high-risk due to their association with the development of cervical cancer. The present study explores nucleotide variability and phylogeny of high-risk HPV-31, -33, -35, -52 and -58, isolated from samples from Distrito Federal. For this purpose, the LCR and E6 and L1 genes were sequenced. Several variants of these HPV types were detected, including 13 new variants among all types analyzed. The phylogenetic analysis of HPV- 31, -33, -35 and -58 isolates did not reveal any ethnic or geographical clustering, as observed previously for HPV-16 and -18. HPV-35 analysis showed a dichotomic branching characteristic of HPV subtypes. Interestingly, four clusters relative to the analysis of HPV-52 variants were identified, of which two could be classified as Asian and European branches. In addition, we compared E6/E7 promoter activity of HPV-58 molecular variants detected in Distrito Federal, since this is the second most frequent type detected among high-grade cervical lesions in this geographical area. For this porpouse, complete LCR sequences from HPV-58 prototype and three more variants were amplified, cloned upstream of the luciferase reporter gene and transiently transfected in C33 cells. For comparison, plasmids containing HPV-18 or -16 prototype LCR sequences were also analyzed. HPV-58 prototype and HPV-58 variants Bsb-329 and Bsb-327 showed promoter activity similar to HPV-16 but about six times lower than HPV-18. Interestingly, HPV-58 variant Bsb-295 presented a high promoter activity, even comparable to HPV-18. This HPV-58 variant is the only isolate in which we detected a substitution in nucleotide position 7788. Mutants were constructed by site-direct mutagenesis in order to analyze the impact of this nucleotide alteration on viral promoter activity. The introduction of the 7788 mutation in the HPV-58 prototype isolate led to a transcription activity similar to that observed for HPV-58 variant Bsb- 295 and HPV-18 prototype. Taken together, these data indicate that this single nucleotide variation is capable of enhancing viral promoter activity and could lead to a higher expression of E6 and E7 viral oncogenes in vivo. Nevertheless, additional studies are necessary to further identify cellular transcriptional factors involved in this regulation. The study of HPV variants is crucial to understand the intrinsic geographical relatedness and biological differences of these viruses and further contributes to studies concerning their infectivity and pathogenicity.

Dossertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-31T10:46:48Z No. of bitstreams: 1 2011_EliziarioCesardeVasconcelosLeitao.pdf: 1950856 bytes, checksum: a273cb1804896fbcfa1d95f0ed6f3d79 (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-12-23T11:03:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_EliziarioCesardeVasconcelosLeitao.pdf: 1950856 bytes, checksum: a273cb1804896fbcfa1d95f0ed6f3d79 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-12-23T11:03:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_EliziarioCesardeVasconcelosLeitao.pdf: 1950856 bytes, checksum: a273cb1804896fbcfa1d95f0ed6f3d79 (MD5) / O câncer bucal é uma das neoplasias malignas mais comuns nas regiões de cabeça e pescoço, responsável por elevada incidência na população e altas taxas de óbito. A exposição aos produtos do fumo e álcool tem sido considerada a maior causa de seu desenvolvimento. Todavia, algumas evidências apontam para o fato de que o Vírus do Papiloma Humano (HPV) possa participar em sua gênese e progressão. O objetivo principal deste trabalho é a investigação da presença de sequências gênicas dos tipos circulantes do HPV em lesões escamosas que ocorrem na cavidade bucal, embasada em estudo clínico e epidemiológico das neoplasias incidentes. Amostras de 26 pacientes atendidos no Serviço de Estomatologia do Hospital Regional da Asa Norte, selecionados por apresentarem lesões clinicamente suspeitas de malignidade, foram biopsiadas com finalidade diagnóstica comparativa. Aplicou-se formulário próprio para a coleta de dados clínicos e epidemiológicos com prévia aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa em Seres Humanos. Os resultados mostraram que dos 26 pacientes estudados, 21 deles (84.61%) tiveram o diagnóstico de carcinoma epidermóide, dos quais 15 apresentaram o de cavidade bucal (71%) e 6, o de orofaringe (29%). Entre os pacientes estudados, predominou o gênero masculino, 69,2%, preponderando a ancestralidade caucásica, 57,7%, seguido de mestiços com 38,5% e de origem negra africana com 3,8%. A faixa etária predominante foi de 60-69 anos com 34,6%, seguida da de 70-79 anos com 19,2%. Dos pacientes da amostra, 80,8% declararam ser tabagistas crônicos e 65,4%, etilistas crônicos. Em nenhum dos 26 pacientes da amostra, detectaram-se sequências gênicas dos tipos mais frequentes de HPV investigados nos tecidos biopsiados através do emprego da hibridação do ácido nucléico do HPV pela técnica da captura híbrida 2 da Qiagen. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The oral cancer is one of the most common malignant neoplasia of head and neck, exhibiting high incidence in the general population, accounting for high rates of death. Exposure to tobacco smoking products and alcohol ingestion have been considered the major cause of oral cancer development. Besides, some scientific reports point out to the possible involvement and co-participation of the Human Papillomavirus in the etiology and progression of oral cancer. The main objective of this research work was to investigate the presence of genic sequences of circulating HPV types in squamous lesions that happen to occur in the oral cavity based on clinical and epidemiological studies of incident neoplasias. Samples of 26 patients attended in the Stomatology Service of the Hospital Regional da Asa Norte, Brasília, were selected as they presented clinical lesions suspected of câncer and had the lesions surgically removed for histopatological and molecular analysis and for diagnostic purposes. Appropriate forms were applied to collect clinical and epidemiological data. In order to investigate the presence of distinct types of HPV in the tissues removed, the HPV DNA virus hybrid capture assay was employed (Qiagen). The results showed that of 26 patients studied, 80.76% (21) had the histopathological diagnostic of carcinoma epidermoid , which 71% in the oral cavity (15) and 29% the oropharynx (06). Of all patients enrolled in the study, male gender predominate, 69,2%, and prevailed the caucasian ancestry, 57,7%, followed by the mixed racial representatives compounding 38,5% and of african ancestry of 3,8%. Relating to the age distribution, the 60-69 years old group predominated accounting for 34,6%, followed by the 70-79 years old group representing 19,2% of them. Chronic tabagists were represented by 80.8% and alcohol chronic consumer by 65.4% of all patients. None of the patients had HPV DNA segment detected by the assay previously mentioned.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:54:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6487_1.pdf: 7697187 bytes, checksum: 77c7654199970aa3ac51293a3871d243 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Os Papilomavírus humano (HPV) são responsáveis por causar lesões epiteliais, podendo evoluir a diversos tipos de carcinomas. Segundo a Organização Mundial de Saúde, a infecção pelo HPV é o principal fator de risco para o câncer cervical sendo detectado em aproximadamente 99% dos casos. O HPV 16, assim como o HPV 18, são os genótipos virais mais prevalentes em carcinomas cervicais invasivos no mundo. O teste molecular é mais eficiente em exames preventivos, ratificando sua utilização para a triagem do HPV e, desta forma, favorecendo a prevenção das lesões causadas pelo vírus. A presente dissertação teve como objetivo identificar os genótipos prevalentes do HPV em amostras cervicais consideradas normais e com alterações. O estudo de corte transversal foi realizado com 241 mulheres de 18 a 60 anos, atendidas numa Unidade de Saúde da Família do município de Olinda - PE. As amostras de DNA foram extraídas de células de raspado do colo uterino utilizando kit comercial. A infecção pelo HPV foi investigada através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando os primers consensus MY09/11 e GP5+/6+. Alterações celulares foram visualizadas pelo exame citopatológico (Papanicolaou). O PapilloCheck&#61650; HPV-screen DNA-chip foi utilizado para genotipar os HPV presentes nas amostras biológicas. Através do exame citopatológico observou-se que apenas 2,90% das pacientes apresentaram alterações celulares características da infecção pelo HPV, enquanto que o diagnóstico molecular permitiu detectar a presença do DNA viral em 23,23% das pacientes. Os dois pares de primers testados tiveram eficiências similares, sendo o MY09/11 com 15,35% e, o GP5+/6+ com 17,01%, entretanto o percentual de concordância entre ambos foi de apenas 39,28%. Neste estudo, o HPV6 (16,94%) e os HPV16 e HPV11, cada um com 10,16%, foram os genótipos virais mais prevalentes, em conjunto respondendo por quase 30% dos casos. O percentual de amostras com múltipla infecção foi de 22,03% sendo o HPV52 o genótipo mais prevalente (8,47%). Neste estudo o HPV 18 não figurou como sendo um dos genótipos mais prevalentes. A alta prevalência dos genótipos HPV6, 16 e 11 contribui para a discussão sobre estratégias de implantação de uma vacina contra o HPV, melhorando assim, a qualidade da assistência à saúde, além de reduzir os gastos públicos com tratamentos. Contudo, estudos incluindo uma maior amostragem em diferentes áreas do município se faz necessário para obter uma visualização mais detalhada da prevalência genotípica do HPV na região

O câncer de cabeça e pescoço é considerado a sexta neoplasia mais prevalente no mundo, com mais de seiscentos mil novos casos diagnosticados a cada ano, e a quinta mais prevalente no Brasil, com mais de mil e quinhentas pessoas acometidas anualmente, tornando-se responsável, mundialmente, por quatro por cento da mortalidade por câncer. O tipo mais comum é o carcinoma epidermoide (CECP), sendo sua patogênese historicamente associada ao uso de tabaco e álcool, porém, nas últimas décadas, a infecção pelo HPV tem sido associada à doença. Definir o prognóstico e o risco de desenvolvimento, assim como o sucesso do tratamento em resposta a uma determinada medicação e/ou procedimento, constituem a principal razão para a identificação de biomarcadores, já que sua expressão pode refletir diversos processos em andamento nas células tumorais. Vários estudos correlacionaram a expressão de survivina, nos tumores sólidos, com um curso clinicamente desfavorável da doença, resistência a fármacos, pior prognóstico e menor sobrevida do paciente. p16 pode fornecer evidências do potencial maligno de uma lesão, e sua superexpressão pode ser considerada um marcador de prognóstico favorável. A expressão elevada de PD-L1 pode ser um importante facilitador para o crescimento tumoral e metástases. O objetivo deste trabalho foi identificar, por imunohistoquímica, os níveis de expressão de p16, survivina e PD-L1 em amostras de lesões malignas de cabeça e pescoço na presença e na ausência de infecção viral por HPV e relacioná-los com os achados clínicos dos pacientes. Foram utilizadas trinta e três amostras teciduais, obtidas por biópsia de lesões de cabeça e pescoço, com finalidade diagnóstica, provenientes do Serviço de Oncologia Do Hospital Geral de Caxias do Sul e do banco de dados do Laboratório Diagnose. As amostras foram selecionadas retrospectivamente, tendo como critério de seleção a presença de carcinoma epidermoide de cabeça e pescoço. A determinação da presença do HPV e tipagem viral foi realizada pelo método da reação em cadeia da polimerase e a expressão proteica por imunohistoquímica. Os resultados foram avaliados considerando a proporção de células positivas comparadas ao número total de células no campo. A superexpressão de p16 nos CECPs pode ser um indicativo da participação da infecção por HPV durante o processo de carcinogênese, sendo que a relação entre a superexpressão de p16 e presença de infecção por HPV não foi observada em alguns dos casos avaliados, podendo indicar: falha na realização da PCR, não detectando a presença do HPV; a não participação do HPV no processo de carcinogênese; o sinergismo entre as vias carcinogênicas HPV+ e HPV- (tabagismo/etilismo). Além disso, a superexpressão de p16 em conjunto com a expressão de survivina e/ou PD-L1 indicam um comportamento intermediário entre os cânceres HPV+ e HPV- (via carcinogênica tabagismo/etilismo). p16, survivina e PD-L1 são indicativos da via carcinogênica HPV+ e podem predizer se houve sinergismo entre as vias carcinogênicas, bem como indicar o comportamento dos tumores, entretanto não devem ser utilizados isoladamente, incluindo a PCR para HPV. Os biomarcadores avaliados neste trabalho podem ser úteis no manejo clínico dos pacientes, além de auxiliar no desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas, sendo necessária a obtenção de um maior número de casos e de informações sobre a expressão desses biomarcadores. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES / Head and neck cancer is considered the sixth most prevalent neoplasm in the world, with more than six hundred thousand new cases diagnosed each year and the fifth most prevalent in Brazil, with more than one thousand five hundred people affected annually, being responsible, worldwide, by four percent of cancer mortality. The most common type is squamous cell carcinoma (CECP), its pathogenesis has been historically associated with tobacco and alcohol use, but in the last decades HPV infection has been associated with the disease. Defining the prognosis and risk of development, as well as the success of the treatment in response to a particular medication and/ or procedure, are the main reason for the identification of biomarkers, and their expression may reflect several processes in progress in tumor cells. Several studies have correlated the expression of survivin in solid tumors with a clinically unfavorable course of the disease, drug resistance, worse prognosis and shorter patient survival. p16 may provide evidence of the malignant potential of an injury, and its overexpression may be considered a favorable prognostic marker. Elevated PD-L1 expression may be an important facilitator for tumor growth and metastasis. The objective of this work was to identify, by immunohistochemistry, the levels of expression of p16, survivin and PD-L1 in samples of head and neck malignant lesions in the presence and absence of HPV viral infection and to relate them to the clinical findings of patients. Thirty-three tissue samples were used, obtained by biopsy of head and neck lesions, for diagnostic purposes, coming from the Oncology Service of the General Hospital of Caxias do Sul and from the Diagnose Laboratory database. Samples were retrospectively selected, having as selection criterion the presence of squamous cell carcinoma of the head and neck. The determination of the presence of HPV and viral typing was performed by the polymerase chain reaction method and the protein expression by immunohistochemistry. The results were evaluated considering the proportion of positive cells compared to the total number of cells in the field. The overexpression of p16 in CECPs may be indicative of the participation of HPV infection during the carcinogenesis process, being that the relationship between p16 overexpression and the presence of HPV infection was not observed in some of the evaluated cases, which may indicate: failure in the PCR achievement, not detecting the presence of HPV; the non-participation of HPV in the process of carcinogenesis; the synergism between the carcinogenic pathways HPV+ and HPV- (smoking/alcoholism). In addition, the overexpression of p16 in conjunction with the expression of survivin and/or PD-L1 indicates an intermediate behavior, between cancers HPV+ and HPV- (pathway carcinogenic smoking/alcoholism). p16, survivin and PD-L1 are indicative of the carcinogenic pathway HPV+, and may predict if there was synergism between carcinogenic pathways as well as indicate the behavior of tumors, however should not be used in isolation, including PCR for HPV. The biomarkers evaluated in this study may be useful in the clinical management of patients, besides helping in the development of new therapeutic modalities, being necessary to obtain a greater number of cases and information on the expression of these biomarkers.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:07:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo892_1.pdf: 4743586 bytes, checksum: eae92dbe2a7cf093e03b863301aadbbc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Os papilomavírus formam um grupo de vírus altamente diverso e específico que infectam mamíferos, aves e répteis. O conhecimento acerca da sua diversidade genética e evolução ainda é pobre, não existindo um cenário compreensivo que elucide as relações filogenéticas desses vírus. Assim, um estudo que visa ao entendimento da variabilidade genética entre os papilomavírus é fundamental para o aumento do conhecimento de sua complexa história evolutiva. Esse trabalho consistiu na análise de 53 sequências genômicas completas de papilomavírus, representando toda sua diversidade conhecida. Estudos de genômica comparativa foram realizados analisando o tamanho dos genomas; conteúdo gênico; variabilidade genética; estatística de códons; pressão seletiva; e recombinação. Regiões de baixa entropia foram utilizadas para a construção de ávores filogenéticas baseadas em quatro métodos diferentes. A metodologia empregada permitiu a identificação de regiões que são conservadas entre os papilomavírus que infectam hospedeiros diferentes, ajudando a entender suas relações evolutivas. Isto é muito importante porque, apesar da grande variação existente entre os genomas dos papilomavírus, fomos capazes de encontrar regiões que são claramente compartilhadas, apresentando baixos níveis de complexidade de informação, com o objetivo de fazer predições. Topologias coerentes foram obtidas com altos valores de confiança, apesar de não haver consistência em alguns nós internos. Esses resultados indicaram que tais regiões são bons marcadores para realização de inferências filogenéticas com menor custo computacional, resultando em um incremento na compreensão da diversificação dos papilomavírus

A papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa de ocorrência mundial, que assola o rebanho brasileiro, sem qualquer atitude efetiva de controle, e que tem como enfermidades associadas a tumores de bexiga hematúria enzoótica e tumores de trato digestório superior caraguatá, responsáveis por sensíveis perdas para a pecuária. Várias tentativas vacinais têm sido empreendidas com finalidades profiláticas ou terapêuticas, porém sem resultados eficazes. Esta situação se deve a aspectos relacionados à estrutura viral que dificultam uma manipulação eficiente para produção de produtos vacinais. Para que tais dados possam ser obtidos, faz-se necessário uma melhor compreensão da ação das proteínas recombinantes. A clonagem em vetores bacterianos para a expressão e purificação dessas proteínas serve a diferentes propósitos. Entre eles, a produção de insumos imunológicos, como testes diagnósticos ou mesmo vacinas. O presente projeto visou à expressão e purificação da proteína de capsídeo recombinante L2 de BPV-2. A proteína foi expressa em bactéria e tentou-se a purificação por coluna de afinidade; entretanto, problemas na purificação não possibilitaram a conclusão deste objetivo. Todas as abordagens e protocolos utilizados nesse trabalho são discutidos para contribuição ao conhecimento do processo. / The bovine papillomatosis is an infectious disease of worldwide occurrence, plaguing the Brazilian herd, without any effective attitude control, and whose illnesses associated with bladder tumors \"enzootic hematuria\" and upper digestive tract tumors \"caraguatá\" sensitive responsible for losses to livestock. Several attempts have been undertaken vaccine with prophylactic or therapeutic purposes, but without effective results. This is due to issues related to viral structure that hinder efficient manipulation for production of vaccine products. In order to obtain such information, it is necessary better understanding of the action of recombinant proteins. The bacterial cloning vectors for the expression and purification of such proteins serve different purposes. Among them, the production of immune inputs, such as diagnostic tests or vaccines. This project aimed the expression and purification of recombinant L2 capsid protein of BPV-2. The protein was expressed in bacteria and purification was carried out by affinity column. However, difficulties in the purification process, impaired the full completion of this objective. All the attempted approaches and protocols were discussed and potential solutions proposed.

A papilomatose bovina é uma doença infectocontagiosa de ocorrência mundial, que assola o rebanho brasileiro, sem qualquer atitude efetiva de controle, e que tem como enfermidades associadas a tumores de bexiga hematúria enzoótica e tumores de trato digestório superior caraguatá, responsáveis por sensíveis perdas para a pecuária. Várias tentativas vacinais têm sido empreendidas com finalidades profiláticas ou terapêuticas, porém sem resultados eficazes. Esta situação se deve a aspectos relacionados à estrutura viral que dificultam uma manipulação eficiente para produção de produtos vacinais. Para que tais dados possam ser obtidos, faz-se necessário uma melhor compreensão da ação das proteínas recombinantes. A clonagem em vetores bacterianos para a expressão e purificação dessas proteínas serve a diferentes propósitos. Entre eles, a produção de insumos imunológicos, como testes diagnósticos ou mesmo vacinas. O presente projeto visou à expressão e purificação da proteína de capsídeo recombinante L2 de BPV-2. A proteína foi expressa em bactéria e tentou-se a purificação por coluna de afinidade; entretanto, problemas na purificação não possibilitaram a conclusão deste objetivo. Todas as abordagens e protocolos utilizados nesse trabalho são discutidos para contribuição ao conhecimento do processo. / The bovine papillomatosis is an infectious disease of worldwide occurrence, plaguing the Brazilian herd, without any effective attitude control, and whose illnesses associated with bladder tumors \"enzootic hematuria\" and upper digestive tract tumors \"caraguatá\" sensitive responsible for losses to livestock. Several attempts have been undertaken vaccine with prophylactic or therapeutic purposes, but without effective results. This is due to issues related to viral structure that hinder efficient manipulation for production of vaccine products. In order to obtain such information, it is necessary better understanding of the action of recombinant proteins. The bacterial cloning vectors for the expression and purification of such proteins serve different purposes. Among them, the production of immune inputs, such as diagnostic tests or vaccines. This project aimed the expression and purification of recombinant L2 capsid protein of BPV-2. The protein was expressed in bacteria and purification was carried out by affinity column. However, difficulties in the purification process, impaired the full completion of this objective. All the attempted approaches and protocols were discussed and potential solutions proposed.