Introdução: O câncer de cabeça e pescoço vem aumentando sua incidência, sendo o quinto tipo de câncer mais comum e a sexta causa de morte por câncer no mundo, portanto é causa importante de morbimortalidade da população. O entendimento dos fatores de risco como tabagismo, etilismo e infecção pelo papilomavirus (HPV) é de fundamental importância, tanto para ações de prevenção e controle da doença, bem como avaliação de fatores prognósticos e terapêuticos. Objetivos: O presente estudo visa analisar as características clínicas, buscar o principal sítio anatômico tumoral e avaliar os fatores prognósticos entre os pacientes tabagistas ou não, e portadores ou não do HPV, que foram tratados cirurgicamente. Casuística e Métodos: Foram analisadas as variáveis clínicas e prognósticas dos grupos de pacientes tabagistas, não tabagistas, HPV negativo e HPV positivo. A amplificação do DNA viral, detecção e genotipagem do HPV se deu através da extração do DNA total a partir de blocos parafinados. Resultados: A amostra total foi composta por 399 pacientes, sendo que 266 eram tabagistas, 33 não tabagistas, e desses últimos, cinco eram HPV positivo. Houve diferença estatística em relação sexo, sendo que para o tabagista o predomínio foi do sexo masculino e para o HPV positivo foi o feminino. O paciente tabagista apresentou-se mais jovem (média 57,9 anos) que o não tabagista (média 64,1 anos). O sítio anatômico mais comum para os tabagistas foi a laringe e para o HPV positivo foi a cavidade oral e orofaringe. O tempo livre de doença foi de 63,6 meses para os tabagistas, 31,3 meses para os não tabagistas e 29,3 meses para os HPV positivo, havendo diferença quanto às curvas de sobrevidas livre da doença dos fumantes e não fumantes. Dos pacientes que foram á óbito pela neoplasia, o paciente HPV positivo foi o que apresentou menor tempo de sobrevida. Não houve diferença estatística entre os grupos quanto às curvas de sobrevidas global e da doença. Discussão: Apesar da literatura mostrar que o paciente não tabagista e o paciente HPV positivo geralmente serem mais jovens e apresentarem melhor prognóstico do que os típicos pacientes tabagistas, isso não foi observado nesse estudo, pois o paciente não tabagista apresentou-se com mais idade ao diagnóstico da doença e com pior prognóstico que o tabagista, e o paciente HPV positivo apresentouse com menor tempo até o óbito pela doença quando comparado ao paciente tabagista. Conclusões: O câncer nos pacientes tabagistas acometeu mais o sexo masculino, localizou-se principalmente na laringe e apresentou melhor prognóstico quando comparado aos não tabagistas. O câncer nos pacientes HPV positivo acometeu mais o sexo feminino e localização tumoral foi principalmente a cavidade oral e a orofaringe. / Introduction: Head and Neck cancer has been increasing its incidence, and it is the fifth most common type of cancer and the sixth leading cause of cancer death in the world, so it is an important cause of morbidity and mortality of the population. Understanding the risk factors such as smoking, alcohol use and papillomaviruses (HPV) infection is of fundamental importance, both for prevention and control of disease like for assessment of prognostic and therapeutic factors. Objectives: This study aims to analyze the clinical, seek the main site anatomical of the tumor and evaluate the prognostic factors among smokers or not, with the presence or absence of the HPV, which were surgically treated. Methods: The variables clinical and prognostic were analyzed in the groups of smokers, nonsmokers, HPV negative and HPV positive. The amplification of viral DNA, detection and genotyping of the HPV were made through the extraction of total DNA from paraffin blocks. Results: The total sample consisted of 399 patients, 266 were smokers, 33 nonsmokers, and this latter group had five patients HPV positive. There was statistical difference regarding sex, for smokers the prevalence was male and for HPV positive was female. The smoker patient was younger (mean 57.9 years) than the non-smoker (mean 64.1 years). The most common anatomic site for the smokers was the larynx and for the HPV positive was the oral cavity and oropharynx. The diseasefree interval was 63.6 months for smokers, 31.3 months for nonsmokers and 29.3 months for HPV positive, with difference between free disease survival curves of the smokers and nonsmokers. Of the patients who died by disease, HPV positive patient showed the shorter survival. There was no statistical difference between the groups in terms of overall survival curves and of the disease. Discussion: Although the literature show that the nonsmoker patient and HPV positive patients are generally younger and present a better prognosis than the typical smokers, this was not observed in this study because the nonsmoker patient presented with more age at diagnosis of disease and a worse prognosis than the smoker, and the HPV positive patient presented with shorter survival of the disease when compared to smoking patients. Conclusions: The cancer in smokers affected more males, was located mainly in the larynx and showed better prognosis when compared to nonsmokers. The cancer in patients positive HPV affected more females and tumor location was mainly oral cavity and oropharynx.

Papilomavírus (PVs) são vírus amplamente estudados, sendo enfatizada sua capacidade de infectar os tecidos epitelial e mucoso em diversos animais, incluindo humanos, causando lesões benignas que podem, ocasionalmente, resultar em câncer. Dentre os gêneros que infectam animais, os Deltapapillomavirus têm uma importância veterinária, ecológica e histórica, pois são capazes de infectar seu hospedeiro natural e outros animais. Por isso, esse trabalho contempla todos os tipos virais pertencentes aos Delta-PVs, incluindo sua história. Dentre as proteínas traduzidas pelos PVs, três são consideradas proteínas oncogênicas: E5, E6 e E7. Determinar a estrutura de uma proteína é crucial para a elucidação da sua função, possibilitando aplicações nas áreas de engenharia de proteínas, anotação genômica e desenho racional de fármacos. A estrutura tridimensional da proteína E6 de cada tipo viral pertencente ao gênero Deltapapillomavirus foi determinada por modelagem molecular por homologia. A história evolutiva dessas proteínas foi avaliada com base na geração de árvores filogenéticas e suas propriedades físico-químicas foram analisadas. Além disso, devido ao seu alto grau de conservação, a E6 demonstrou ser útil como um marcador molecular. Apesar de serem consideradas raras, foram observadas lesões papilomatosas em carneiros em uma fazenda do estado de São Paulo. Foi realizado o diagnóstico molecular dessas lesões. Os resultados mostraram pela primeira vez no mundo que, apesar de serem ovinos, o agente causador da papilomatose era um papilomavírus bovino, o BPV2, um Delta-PV. Logo, além de discutir os Delta-PVs, esta tese demonstra na prática a habilidade desse gênero em romper a barreira espécie-específica. / Papillomaviruses (PVs) are widely studied viruses, emphasizing their ability to infect the epithelial and mucosal tissues in several animals, including humans, causing benign lesions that may occasionally result in cancer. Among the genera that infect animals, Deltapapillomaviruses have a veterinary, ecological and historical importance because they are capable of infecting their natural host and other animals. Therefore, this work contemplates all viral types belonging to the Delta-PVs, including their history. Among the proteins translated by the PVs, three of them are considered oncogenic proteins: E5, E6 and E7. Determining the structure of a protein is crucial to the elucidation of its function, allowing applications in the areas of protein engineering, genomic annotation and rational design of drugs. The three-dimensional structure of the E6 protein of each viral type belonging to the genus Deltapapillomavirus was determined by molecular modeling by homology. The evolutionary history of these proteins was evaluated based on the generation of phylogenetic trees and their physicochemical properties were analyzed. In addition, due to its high degree of conservation, E6 has been shown to be useful as a molecular marker. Despite being considered rare, papillomas lesions were observed in sheep on a farm in the state of São Paulo. The molecular diagnosis of these lesions was performed. The results showed for the first time in the world that, despite being ovines, the causative agent of papillomatosis was a bovine papillomavirus, BPV2, a Delta-PV. Thus, in addition to discussing Delta-PVs, this thesis demonstrates in practice the ability of this genre to break the species-specific barrier.

Introdução: Os Papilomavírus Humano (HPV) são vírus com capacidade de infectar a pele ou as mucosas. Existem mais de 100 tipos diferentes; destes, 13 são considerados oncogênicos. Avaliar a Qualidade de Vida (QV) em mulheres com HPV tem sido reportado como importante estratégia para implementar intervenções quanto ao impacto físico, psicossocial e econômico, além de fomentar a decisão de implantação de um programa de imunização efetivo. Considerando-se a inexistência de instrumentos brasileiros específicos para a avaliação da QV entre mulheres com HPV, a elaboração de um instrumento será de grande importância para avaliar esse construto. Objetivo: Desenvolver a Fase 1 da elaboração da escala para avaliação de qualidade de vida de mulheres com diagnóstico de Papilomavírus Humano (EQUALI-HPV). Metodologia: Trata-se de uma pesquisa metodológica. Esse tipo de estudo versa sobre a elaboração, a validação e a avaliação dos instrumentos e das técnicas de investigação, bem como refere-se aos estudos sobre métodos de obtenção, de organização e análise de dados. O processo de elaboração seguiu as etapas de elaboração dos itens, validação aparente e de conteúdo, validação semântica e pré-teste. Fizeram parte da amostra: 20 mulheres com HPV na fase de elaboração dos itens; cinco especialistas na etapa de validação semântica e 38 mulheres com HPV para o pré-teste. Os dados foram inseridos em planilha Excel, com dupla digitação e uso de procedimento de validação. Após, utilizou-se análise estatística descritiva para a caracterização dos sujeitos segundo variáveis sociodemográficas e clínicas por meio do software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), 20.0. Resultados: A partir da realização da revisão integrativa da literatura e de entrevistas com a população alvo, foram elaborados 98 itens os quais foram submetidos à validação aparente e de conteúdo em que 66 itens do instrumento sofreram mudanças na redação ou na alocação de domínio. Após, 11 mulheres procederam à validação semântica do instrumento e, por fim, foi aplicado o pré-teste em 38 mulheres com HPV. Conclusão: Foram finalizadas as etapas de elaboração dos itens, validação aparente e de conteúdo, validação semântica e pré- teste que constituem a Fase 1 deste estudo, a Fase 2 contemplará a realização de testes psicométricos para que a EQUALI-HPV esteja apta ao uso / Introduction: The Human Papillomavirus (HPV) are types of viruses with the capability of infect the skin and mucous. There are more than 100 different types; among those, 13 are considered oncogenic. Evaluating the Quality of Life (QoL) in women with HPV has been reported as an important strategy to implement interventions regarding the physical, psychosocial, and economic impact, and also, besides promoting the decision of implantation of an effective immunization program. Considering the non existence of Brazilian instruments that are specific to evaluate the QoL among women with HPV, and the elaboration of an instrument will be of great importance to evaluate this construct. Objective: To develop the phase 1 of the development of the scale to evaluate the quality of life of women with a diagnosis of Human Papillomavirus (EQUALI-HPV). Methodology: It is a methodological research. This type of study presents a discussion about the elaboration, validation, and evaluation of the instruments and the techniques of investigation, as well as how it refers to the studies about methods of obtainment, organization, and analysis of the data. The process of elaboration followed the elaboration steps of the items, the apparent validation and of the content, the semantic validation, and pre-test. Sample was constituted by: 20 women with HPV in the phase of elaboration of the items; five specialists in the semantic validation phase and 38 women with HPV for pre-test. The data were inserted in Excel spreadsheets, with double digitation and with use of a validation procedure. Then, it was used a descriptive statistical analysis for the characterization of the subjects according to sociodemographic and clinical variables by using the software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS), 20.0. Results: From the development of an integrative review of the literature and interviews with the target public, 98 items were elaborated and submitted to the apparent and content validations, a total of 66 items of the instrument suffered changes or in the domain allocation. Then, 11 women preceded to the semantic validation of the instrument and, at last, the pre-test was applied to 38 women with HPV. Conclusion: The following steps were concluded: elaboration of the items, apparent validation and of the content, semantic validation, and pre-test that constituted the phase 1 of this study. The phase 2 includes the conducting of psychometric tests so that the EQUALI-HPV will be able to be used

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, assim como acometem o tecido mucoso onde podem causar tumores benignos que podem evoluir para a malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, já que há a desvalorização dos animais a serem comercializados devido à aparência e depreciação do couro. Em humanos, a identificação dos tipos de papilomavírus (HPV) envolvidos bem como o relato de co-infecções são bem estabelecidos. Já foram descritos na literatura mais de 200 tipos de HPVs, o que ainda é pouco explorado na área da Medicina Veterinária, em que somente 21 tipos de papilomavírus bovino (BPV) foram caracterizados até o momento. A presente dissertação visou investigar a diversidade de BPV presentes em um papiloma de um bovino oriundo do Estado de Rondônia. A partir do DNA extraído da lesão, foi realizada a rooling circle amplification (RCA) seguida do sequenciamento de última geração (Ilumina MiSeq). O emprego dessas metodologias culminou na identificação do BPV13, que atualmente é bem caracterizado, e de três prováveis novos tipos de BPVs que haviam sido descritos em um único estudo recente. Estes resultados confirmam a presença de co-infecção em lesões de papilomatose bovina e demonstram que estas técnicas possibilitaram a detecção de espécies que não são identificadas pelos métodos convencionais. Este conhecimento sobre a diversidade de BPV servirá de base para o melhor entendimento da biologia do vírus e para a geração de vacinas profiláticas ou terapêuticas eficazes. / Papillomaviruses are an extensive family of viruses associated with epitheliotropic lesions, as well as affecting mucosal tissue where they can cause benign tumors that may progress to malignancy. Bovine papillomatosis is an economically relevant disease, since there is a devaluation of the animals to be marketed due to the appearance and depreciation of the leather. In humans, the identification of the types of papillomavirus (HPV) involved as well as the reporting of co-infections is well established. More than 200 types of HPV have been described in the literature, which is still little explored in the area of Veterinary Medicine, in which only 21 types of bovine papillomavirus (BPV) have been characterized. This study aimed to investigate the diversity of BPV present in a papilloma of a bovine animal from the State of Rondônia. From the DNA extracted from the lesion, the rooling circle amplification (RCA) was performed followed by the last generation sequencing (Ilumina MiSeq). The use of these methodologies culminated in the identification of BPV13, which is currently well characterized, and of three putative new BPVs types that had been described in a single recent study. These results confirm the presence of co-infection in bovine papillomatosis lesions and demonstrate that these techniques enabled the detection of species that are not identified by conventional methods. This knowledge on BPV diversity will serve as a basis for a better understanding of the biology of the virus and for the generation of effective prophylactic or therapeutic vaccines.

INTRODUÇÃO: O papilomavírus humano (HPV) é o agente mais frequentemente encontrado em doenças sexualmente transmissíveis e é responsável por cerca de 40% dos cânceres vulvo-vaginais. Esse trabalho abordou a resposta imune em lesões vulvares, considerando-se as células dendríticas CD1a+, FXIIIa+ e S-100+, citocinas TNF-, IFN- e IL-10 e a molécula de adesão E-caderina. MÉTODOS: Foram utilizadas 49 lesões de vulva pelo HPV (condiloma acuminado, NIV-I, NIV-II e NIV-III) e 11 bióspias com diagnóstico de vulvite crônica inespecífica. Foram constituídos quatro grupos: lesões de baixo grau (condiloma e NIV I), lesões de alto grau (NIV II e III), vulvites inespecíficas e pele normal. A detecção das células, citocinas e E-caderina foi feita através de método imuno-histoquímico. RESULTADOS: As células de Langerhans (CD1a+) estavam distribuídas em todo o epitélio, sobretudo nas camadas suprabasal e espinhosa. Não diferiram entre os grupos de lesões HPV+, mas estavam diminuídas em número e tamanho quando comparadas à pele normal (p<0.0001). As células S-100+ ou FXIIIa+ estavam localizadas em toda a extensão do estroma, sem diferença estatística entre as lesões pelo HPV. Embora os DDFXIIIa+ estivessem aumentados em tamanho nas lesões de vulva, seu número não diferiu da pele normal. Não se observou diferenças numéricas das células S-100+ entre os grupos de lesão e pele normal. Foi possível detectar maior número de DDFXIIIa+ sobre as células S-100+ no grupo de lesões de baixo grau (p = 0,0008) e de alto grau (p = 0,0031). As citocinas foram detectadas em pequenas quantidades nos grupos de lesões, porém sem diferença estatística. Para a análise da expressão de e-caderina, o grupo de vulvites crônicas inespecíficas foi utilizado como controle. Em 91.0% das vulvites inespecíficas foi observado padrão homogêneo e difuso da expressão de e-caderina na camada espinhosa baixa e média. Ambos os grupos de lesões HPV+ exibiram padrões semelhantes de expressão de e-caderina, com marcação difusa ou focal na camada espinhosa baixa e média. Não houve imuno-reatividade nas áreas de displasias. Como resultado da reação de dupla-marcação, feita através da utilização da hibridização in situ para detecção do DNA do HPV e imunohistoquímica para DDFXIIIa+, foi possível identificar antígenos virais no citoplasma dessas células. CONCLUSÕES: o HPV interfere na expressão das células de Langerhans, pois estas estavam diminuídas, com morfologia alterada em relação à pele normal; os DDFXIIIa+ apresentam-se aumentados em número sobre as células S-100+, o que poderia refletir um mecanismo local compensatório contra o HPV; as lesões de baixo e alto grau não apresentam diferenças significativas quanto à densidade de células expressando TNF-, IFN- e IL-10, embora TNF- predomine entre as três citocinas; há uma correlação positiva entre os DDFXIIIa+ e a expressão de TNF-, o que poderia ser explicado por sua capacidade em produzir tal citocina a partir de um provável estímulo desencadeado pelo HPV; o HPV influencia na expressão de E-caderina na vulva, com destaque para a ausência de expressão nas áreas de displasia; o DNA do HPV encontrado no interior dos DDFXIIIa+ aliado às alterações na morfologia celular, a sobreposição destas sobre as células S-100+ e a relação encontrada com a citocina TNF-, nos permitem sugerir que os DDFXIIIa+ têm um papel importante como células apresentadoras de antígeno frente à infecção pelo HPV. / INTRODUCTION: The human papillomavirus (HPV) is the most frequent agent in sexually transmitted diseases and is responsible for almost 40% of vulvovaginal cancer. We studied the immune response in vulvar lesions, considering the CD1a+, FXIIIa+ and S-100+ dendritic cells, TNF-, IFN- and IL-10 cytokines and the adhesion molecule E-cadherin. METHODS: We used 49 vulvar lesions mediated by HPV (condylomata acuminata, VIN-I, VIN-II e VIN-III) and 11 biopsies diagnosed as chronic non-specific vulvitis. Four groups were formed: low-grade lesions (condylomata and VIN-I), high-grade lesions (VIN-II and III), non-specific vulvitis and normal skin. The detection of cells, cytokines and e-cadherin was performed by immunohistochemistry reaction. RESULTS: Langerhans cells (CD1a+) were distributed through epithelia, mainly in suprabasal and spinous layer. They did not differ between HPV groups, but were decreased in number and size when compared to normal skin (p<0.0001). The S-100+ ou FXIIIa+ cells were distributed through stroma and did not differ between HPV lesions. Although the FXIIIa+DD were increased in size in vulvar lesions, their number did not differ from normal skin. The S-100+ cells did not differ in number between the groups of lesions and normal skin. We detected an increased number of FXIIIa+DD over S-100+ cells in the group of low-grade (p = 0.0008) and high-grade lesions (p = 0.0031). The cytokines were detected in small quantities in both the lesions groups, with no statistical difference. The group of chronic non-specific vulvitis was used as control group to analyse the expression of e-cadherin. 91.0% of non-specific vulvitis presented a homogeneous and diffuse pattern of expression in spinous layer Both the HPV+ groups of lesions presented similar patterns of e-cadherin expression, with a focal or diffuse localization in spinous layer. The dysplastic epithelium did not present immunoreactivity. As a result of the double-staining, using in situ hibridization to detect DNA of HPV and immunohistochemistry to FXIIIa+DD, it was possible to observe viral antigens in the cytoplasm of such cells. CONCLUSIONS: The HPV interfere with the expression of Langerhans cells, since they were decreased when compared to the normal skin; the FXIIIa+DD were increased in number over S-100+ cells, suggesting a local compensatory mechanism against the HPV; the low and high grade lesions did not differ in the number of cells expressing TNF-, IFN- and IL-10, although TNF- predominate among the three cytokines; there is a positive correlation between the FXIIIa+DD and the expression of TNF- that could be explained by their role as TNF-producing cells following a stimulus of HPV; the HPV changes the expression of E-cadherin in vulvar lesions, mainly in dysplastic epithelium; HPV DNA visualized in the cytoplasm of FXIIIa+DD and the cellular morphological changes, the increased number over S-100+ cells and the correlation with TNF-, allow us to suggest that FXIIIa+DD play an important role as antigen presenting cells in the infection by HPV.

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:23:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 331477.pdf: 1071945 bytes, checksum: f22bfff2945af4ca54bbd4f73dd77312 (MD5) Previous issue date: 2014 / A infecção pelo HPV é um fator de risco independente para o desenvolvimento dos carcinomas de células escamosas da cabeça e pescoço (CCECP). Estudos recentes demonstram que os CCECP HPV positivos representam uma classe diferenciada de tumores, resultando em implicações clínicas e biológicas favoráveis no tratamento e prognóstico dos pacientes. Ainda não existe um consenso sobre o método mais adequado para a detecção do HPV nas diversas amostras biológicas. Além disso, no Brasil existem poucos estudos a respeito da associação do HPV nos tumores da cavidade oral e, assim como no âmbito global, seus resultados são discordantes. O objetivo deste estudo foi avaliar a utilização dos conjuntos de oligonucleotídeos iniciadores (primers) GP5+/6+, MY09/11 e PGMY09/11 para a detecção do DNA do HPV pela reação em cadeira da polimerase (PCR) e verificar a prevalência da infecção pelo HPV nos pacientes com carcinoma de células escamosas da cavidade oral (CCEO) atendidos no Ambulatório de Estomatologia da Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC). Para isto, foram coletadas amostras de tecido oral fixado em formalina e embebido em parafina (FFEP) dos pacientes atendidos no período de setembro de 2006 a dezembro de 2013, com resultados histopatológicos positivos para CCEO. As amostras foram submetidas à PCR convencional utilizando os primers GP5+/6+, MY09/11 e PGMY09/11 e as amostras negativas nestas reações foram submetidas à nested PCR com os primers MY/GP+ e PGMY/GP+. Nenhuma das amostras (0,0%) foi detectada positiva para o HPV nas PCRs com os primers GP5+/6+ e MY09/11, enquanto 13% (3/23) foram positivas para o vírus quando foi utilizado o conjunto de primers PGMY09/11. O uso da nested PCR PGMY/GP+ aumentou a detecção do HPV para 17,4% (4/23), enquanto na nested PCR MY/GP+ nenhuma das amostras (0,0%) foi positiva para o vírus. Com isso, apenas 17,4% do total de casos de CCEO foram associados ao HPV, sendo que a maioria dos casos (73,9%) foi associada ao consumo de tabaco e/ou álcool. Não foi observada associação estatística entre a presença do HPV e os outros fatores de risco para o CCEO (sexo, idade, consumo de álcool, tabaco e outros). A nested PCR PGMY/GP+ se mostrou a técnica mais adequada para a pesquisa do DNA do HPV em amostras FFEP de CCEO.<br> / Abstract: HPV is an independent risk factor for the development of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). Recent studies have shown that HPV-positive HNSCC represents a distinct group of tumors with favorable biological and clinical behavior which leads to a better treatment response and survival outcomes. However, there is still no consensus on the most appropriate method for the detection of HPV in HNSCC. Besides, in Brazil there are only a few studies about the role of HPV in HNSCC, and even as globally, the results are conflicted. The aim of this study was to evaluate the use of GP5+/6+, MY09/11 and PGMY09/11 primer sets for the detection of HPV DNA by polymerase chain reaction (PCR) and to determine the rate of HPV infections in patients with oral squamous cell carcinomas (OSCC) from Stomatology Clinic of Federal University of Santa Catarina (UFSC). The specimens were taken from formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) oral tissues from patients treated between September 2006 and December 2013. The specimens were tested using simple PCR with GP5+/6+, MY09/11 and PGMY09/11 primer sets. All negative samples were subsequently tested by nested PCR MY/GP+ and PGMY/GP+. The PGMY09/11 primers detected HPV DNA in 13.0% (3/23) of the samples while GP5+/6+ and MY09/11 primers did not detect the virus in any samples. The prevalence of HPV raise to 17.4% (4/23) with the use of nested PGMY/GP+, but the nested MY/GP+ was not able to detect the virus DNA in any samples. In the study population, HPV detection rate was 17.4%. Most of the the total OSCC cases (73.9%) was related with tobacco and/or alcohol use, but no statistical association was observed between HPV infection and other risk factors for OSCC (sex, age, alcohol use, tobacco use, and others). PGMY/GP+ are the preferred primer set for the detection of HPV DNA by PCR using FFPE samples from OSCC.

A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é a principal responsável pelo desenvolvimento de lesões intraepiteliais e, potencialmente, do câncer cervical (CC). A presença de fatores como inflamação e outros agentes infecciosos contribuem para a instalação e persistência do vírus. A inclusão da pesquisa do HPV e de outros agentes infecciosos relacionados junto a programas de rastreamento do CC ainda é controversa. Além disso, sabe-se que o processo inflamatório e as lesões celulares decorrentes da presença de HPV e seus cofatores provocam alterações na expressão de diversas proteínas, entre elas a S100A4, que poderia funcionar como biomarcador de exposição. Desta forma, foram analisadas amostras de esfregaços cervicais para investigação da relação do diagnóstico citológico com a presença de agentes infecciosos, além do padrão de expressão da proteína S100A4. Nossos resultados demonstraram que o aparecimento de lesões ou atipias citológicas apresentou associação com a presença de HPV, tanto na infecção simples como na infecção por múltiplos genótipos de alto risco oncogênico, sugerindo a pesquisa molecular do HPV complementar à citologia. A presença de infecção latente pelo HPV também foi observada, a qual deve ser acompanhada com exames citológicos periódicos. A infecção por Chlamydia trachomatis desempenha importante papel como cofator para o desenvolvimento do CC e foi prevalente na população estudada, demonstrando associação com a presença de diferentes genótipos de HPV. Tanto nas pacientes sintomáticas como nas assintomáticas houve a detecção de leveduras do gênero Candida, sendo que a mais prevalente foi a C. albicans apresentando-se sensível à Anidulafungina e Anfotericina B, na maioria dos casos, e resistente ao Fluconazol. Com relação à expressão da proteína S100A4, houve associação com as alterações citológicas características do HPV, nas quais houve redução de sua expressão à medida que aumentou o grau da lesão. No entanto, também observamos que há expressão fisiológica da proteína S100A4 no epitélio escamoso estratificado da ectocérvice que varia de acordo com o grau de maturação celular e a presença de alterações citológicas inflamatórias, onde foi demonstrado aumento da sua expressão. Portanto, a avaliação da expressão da proteína S100A4 pode auxiliar no diagnóstico precoce do câncer de colo do útero nas lesões intraepiteliais cervicais positivas para HPV. Analisando-se globalmente, estes resultados sugerem a inclusão da pesquisa molecular de HPV e C. trachomatis, bem como a identificação de leveduras do gênero Candida complementares à citologia esfoliativa junto a programas de rastreamento. Além disso, a proteína S100A4, mostrou-se promissora como biomarcador dos efeitos celulares dos fatores associados. Observa-se que a associação de diferentes metodologias permite a detecção precoce de lesões e, consequentemente, contribuem para a redução da incidência do CC. / Human papillomavirus (HPV) infection is the main responsible for the development of intraepithelial lesions and potentially cervical cancer (CC). The presence of factors such as inflammation and other infectious agents contribute to the onset and persistence of the virus. The inclusion of HPV research and other infectious agents associated in the CC screening programs is still controversial. In addition, it is known that inflammation and cell injury caused by the presence of HPV and their cofactors cause changes in gene expression and function of several proteins, including the S100A4 which could function as a biomarker of exposure. Thereby, samples of cervical specimens were analyzed to investigate the relationship of cytological diagnosis in the presence of infectious agents, other than the standard expression of S100A4 protein. Our results demonstrated that the development of lesions or cytological atypia was associated with the presence of HPV in either simple infection or infection by multiple genotypes of high oncogenic risk, indicating the importance of molecular HPV analysis complementary to cytology. The presence of latent infection was also observed and must be monitored with periodic cytological examinations. The Chlamydia trachomatis infection plays an important role as a cofactor for the development of CC and was prevalent in the population studied, demonstrating association with the presence of different HPV genotypes. For both symptomatic and asymptomatic patients there was a yeast detection of Candida, and the most prevalent was the Candida albicans presenting sensitive to Anidulafungin and Amphotericin B, in most cases, and resistant Fluconazole. Regarding the S100A4 protein expression, there was association with abnormal cytological HPV characteristics where a reduction of expression could be observed and the degree of injury increased. However, we also observed that there are physiological expression of S100A4 protein in the stratified squamous epithelium of the ectocervix and this varies according to the degree of cell maturation and the presence of inflammatory cell alterations, increased expression where demonstrated. Therefore, the evaluation of the expression of S100A4 protein may assist in the early diagnosis of cervical cancer in cervical intraepithelial lesions positive for HPV. Overall, these results suggest the inclusion of molecular research of HPV and C. trachomatis, and the identification of yeasts Candida complementary to exfoliative cytology in screening programs. In addition, the S100A4 protein has shown to be promising as a biomarker for cellular effects of associated factors. It was observed that the association of different methodologies allows early detection of lesions and therefore contribute to reducing the incidence of CC.

Os papilomavírus constituem uma extensa família de vírus associados a lesões epiteliotrópicas, assim como acometem o tecido mucoso onde podem causar tumores benignos que podem evoluir para a malignização. A papilomatose bovina é uma doença economicamente relevante, já que há a desvalorização dos animais a serem comercializados devido à aparência e depreciação do couro. Em humanos, a identificação dos tipos de papilomavírus (HPV) envolvidos bem como o relato de co-infecções são bem estabelecidos. Já foram descritos na literatura mais de 200 tipos de HPVs, o que ainda é pouco explorado na área da Medicina Veterinária, em que somente 21 tipos de papilomavírus bovino (BPV) foram caracterizados até o momento. A presente dissertação visou investigar a diversidade de BPV presentes em um papiloma de um bovino oriundo do Estado de Rondônia. A partir do DNA extraído da lesão, foi realizada a rooling circle amplification (RCA) seguida do sequenciamento de última geração (Ilumina MiSeq). O emprego dessas metodologias culminou na identificação do BPV13, que atualmente é bem caracterizado, e de três prováveis novos tipos de BPVs que haviam sido descritos em um único estudo recente. Estes resultados confirmam a presença de co-infecção em lesões de papilomatose bovina e demonstram que estas técnicas possibilitaram a detecção de espécies que não são identificadas pelos métodos convencionais. Este conhecimento sobre a diversidade de BPV servirá de base para o melhor entendimento da biologia do vírus e para a geração de vacinas profiláticas ou terapêuticas eficazes. / Papillomaviruses are an extensive family of viruses associated with epitheliotropic lesions, as well as affecting mucosal tissue where they can cause benign tumors that may progress to malignancy. Bovine papillomatosis is an economically relevant disease, since there is a devaluation of the animals to be marketed due to the appearance and depreciation of the leather. In humans, the identification of the types of papillomavirus (HPV) involved as well as the reporting of co-infections is well established. More than 200 types of HPV have been described in the literature, which is still little explored in the area of Veterinary Medicine, in which only 21 types of bovine papillomavirus (BPV) have been characterized. This study aimed to investigate the diversity of BPV present in a papilloma of a bovine animal from the State of Rondônia. From the DNA extracted from the lesion, the rooling circle amplification (RCA) was performed followed by the last generation sequencing (Ilumina MiSeq). The use of these methodologies culminated in the identification of BPV13, which is currently well characterized, and of three putative new BPVs types that had been described in a single recent study. These results confirm the presence of co-infection in bovine papillomatosis lesions and demonstrate that these techniques enabled the detection of species that are not identified by conventional methods. This knowledge on BPV diversity will serve as a basis for a better understanding of the biology of the virus and for the generation of effective prophylactic or therapeutic vaccines.