Haemosporidians, including the avian malaria parasites, are a diverse group of blood parasites that infect terrestrial vertebrates worldwide. There is variability in parasite prevalence (presence) and parasitemia (infection intensity); infections range from virtually inconsequential to lethal. Prevalence and parasitemia of avian malaria in the Tufted Titmouse (Baeolophus bicolor) were determined (n=81). The genera Plasmodium and Parahaemoproteus were detected and quantified from bird blood using microscopy, polymerase chain reaction (PCR), and quantitative PCR (qPCR). Thirteen lineages of malaria parasites were found. Sequence data from the parasite’s mitochondrial cytochrome b gene indicate that prevalence is 69.1% (Plasmodium-89.3%; Parahaemoprotues-7.1%; double infection-3.6%). Parasitemia was low in all infected birds. Seasonally, parasite prevalence varied significantly. Avian malaria prevalence and parasitemia were not associated with host sex, age, or health. Observations of infection in this naturally infected bird provide details on host susceptibility that are applicable to the understanding of malaria parasites in other avian hosts.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se infectaron ratones de las cepas ACA, A.Sw y C57BL/6 con 2.000 tripomastigotes sanguíneos del clon Dm 28c de Trypanosoma cruzi. Los animales de la cepa ACA se comportaron como altamente susceptibles a la infección, con un 100 % de mortalidad antes de las tres semanas postinfección. Por el contrario, las cepas A.Sw y C57BL/6 se mostraron como resistentes sobreviviendo el 100 % de los animales, pasados los 6 meses postinfección. Las cepas ACA (H2f ) y A.Sw (H2S) son congénicas, es decir sólo difieren en el cromosoma 17, donde se ubica el Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC). Los resultados anteriores implicarían que genes ligados al haplotipo H2S serían importantes en el fenómeno de resistencia a la infección. Algo semejante ocurre con la cepa C57BL/6 que porta el haplotipo H2b y se comporta como resistente al igual que otras cepas descritas como tal, como las cepas B10 y LP también portadoras del haplotipo H2b , pero diferentes en el resto de los cromosomas a la cepa C57BL/6. Todo esto apoyaría la idea que una determinada combinación de genes MHC es importante en la resistencia o susceptibilidad a la infección con T.cruzi, en el modelo murino. Las cepas ACA y A.Sw presentaron los más altos niveles de parasitemia, siendo una cepa susceptible y la otra resistente, lo que estaría de acuerdo con la idea que los niveles de parasitemia no se correlacionan siempre con la resistencia o susceptibilidad a la infección. El estudio histopatológico de tejidos de los animales infectados mostró que el tejido más afectado es miocardio, menos músculo esquelético y prácticamente no se observaron alteraciones importantes en intestino delgado. El mayor número de células parasitadas fue observado en la cepa ACA, que fue la única que mostró correlación positiva entre cantidad de parásitos intracelulares y cantidad de parásitos circulantes

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas es producida por el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi, que presenta tres estados morfológicos en su ciclo biológico: amastigote, tripomastigote y epimastigote. Aproximadamente 25 millones de personas en América latina, son afectadas por este parásito. El tratamiento clínico actual se hace con las drogas antichagásicas nifurtimox y benznidazol, que actúan mediante la formación de radicales libres y/o intermediarios electrofílicos durante su metabolismo. Al respecto, el glutatión (GSH) y derivado bis-glutationil-espermidina (tripanotión, T(SH)2) son los principales agentes antiradicalarios con los que cuenta el parásito. Previamente se ha reportado que la susceptibilidad del T. cruzi a la acción de ambas drogas depende del contenido de glutatión libre y conjugado. L-Butionina (S, R) Sulfoximina (BSO) es un inhibidor de la enzima γ-glutamilcisteína sintetasa (γ-GCS), etapa limitante en la síntesis de glutatión y por tanto puede hacer más susceptible al parásito al efecto de nifurtimox y benznidazol. En esta Memoria se estudió el efecto de nifurtimox y benznidazol con o sin BSO, en un modelo in vitro de infección con T. cruzi usando células VERO como hospedero. En este modelo, BSO 25 μM disminuyó el IC50 de nifurtimox y benznidazol (concentración necesaria para disminuir en un 50% el número de amastigotes por cien células VERO o índice endocítico) en cerca del 60%. Estos resultados indican que BSO es capaz de aumentar el efecto tripanocida de las drogas antichagásicas nifurtimox y benznidazol, sobre la forma amastigota de T. cruzi, en todas las cepas estudiadas. Por otra parte, también se estudió el efecto de nifurtimox y benznidazol y su asociación con BSO en un modelo in vivo. Los resultados indican que al usar sólo BSO se obtiene un 100% de sobrevida de los ratones infectados con la cepa Tulahuén de T. cruzi y además, disminuye las parasitemias a niveles indectables más rápidamente de lo que ocurre en el grupo control. Actualmente no se han desarrollado drogas más efectivas para el tratamiento de la enfermedad de Chagas. Este estudio sugiere que el uso de BSO en combinación con nifurtimox o benznidazol podría disminuir las dosis clínicas de ambas drogas para obtener resultados similares, o bien acortar la duración del tratamiento, incidiendo posiblemente en una menor tasa de aparición de RAM producidas por estos fármacos / Financiamiento: Proyecto FONDECYT 1020095

Submitted by PRISCILA PRÉVE PEREIRA null (priscilappvet@gmail.com) on 2018-02-02T14:49:46Z No. of bitstreams: 1 Tese_Priscila_Préve_Pereira.pdf: 1577250 bytes, checksum: e5f112ee7fd7447339bf1f47c9ac7336 (MD5) / Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2018-02-02T16:28:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pereira_pp_dr_jabo.pdf: 1523250 bytes, checksum: 40ab285b508552579da34b465717c635 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-02T16:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pereira_pp_dr_jabo.pdf: 1523250 bytes, checksum: 40ab285b508552579da34b465717c635 (MD5) Previous issue date: 2017-11-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Trypanosoma evansi acomete diversas espécies de animais em todo o mundo. A infecção se caracteriza por intensa parasitemia associada a anemia, que evolui para lesões teciduais atribuídas à resposta autoimune do hospedeiro. O objetivo desse estudo foi avaliar a evolução da infecção experimental pelo Trypanosoma evansi até as fases mais tardias da infecção, a partir das lesões patológicas, estresse oxidativo tecidual, parasitemia e parâmetros hematológicos. Para tal, os ratos infectados com T. evansi foram eutanasiados aos 7, 14, 21, 28 e 35 dias após a inoculação (DAI), os animais foram anestesiados, e posteriormente colhidos 5 ml de sangue intracardíaco com anticoagulante etileno diamino tetra acetato de sódio (EDTA). Os achados histopatológicos foram avaliados de acordo com o tipo de lesão e a incidência de T. evansi, sendo descrita a localização da lesão e determinada a intensidade por escores. O estresse oxidativo foi avaliado a partir da resposta imune celular por imunomarcações da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) de imunohistoquímica. A carga parasitária foi detectada pela imunomarcação do parasita pela mesma técnica. Foi notada uma acentuada anemia no DAI 21. No baço, a hiperplasia linfoide em todos os momentos, evidenciando-se no DAI 35. No coração, presença de parasitas no interior de vasos e câmaras ventriculares, no DAI 21 e infiltrado inflamatório polimorfonuclear em todos os momentos, porém, extremamente acentuado no DAI 28. Nos rins notou-se a presença do parasita a partir do DAI 14 associado a uma nefrose tóxica. Nos pulmões poucos parasitas, espessamento de septos alveolares, hemorragia em todo período da infecção e infiltrado inflamatório polimorfonuclear. Nos linfonodos poplíteos com parasitas a partir do DAI 28 e intensa presença de mastócitos (MCs) em DAI 21. No encéfalo, foi observado a descontinuidade da barreira hematoencefálica, em DAI 21. Os resultados foram importantes para elucidar a infeção por tripanossomíases, e o hospedeiro nos diferentes momentos diante desse cenário. Em todos os órgãos foram detectados a presença de parasita por imuno-histoquimica, apresentando maior intensidade em DAI21, e nos próximos momentos reduzindo significamente. Assim como a intensidade de células imunomarcadas para o óxido nítrico foi alta entre DAI14 e DAI 21 e após esse momento reduziram. Os dados mostram que o óxido nítrico pode lesionar os tecidos do hospedeiro como o parasita, e assim reduzindo a carga parasitária. / Trypanosoma evansi affects several species of animals worldwide. The infection is characterized by intense parasitemia associated with anemia, which evolves to tissue lesions attributed to the host's autoimmune response. The objective of this study was to evaluate the evolution of the experimental infection by Trypanosoma evansi until the later stages of the infection, from the pathological lesions, tissue oxidative stress, parasitemia and hematological parameters. To that end, mice infected with T. evansi were euthanized at 7, 14, 21, 28 and 35 days after inoculation (DAI), animals were anesthetized, and 5 ml of intracardiac blood was then collected with anticoagulant ethylene diamine tetraacetate sodium (EDTA). The histopathological findings were evaluated according to the type of lesion and the incidence of T. evansi. The location of the lesion was described and the intensity determined by scores. Oxidative stress was evaluated from the cellular immune response by immunostaining of the enzyme inducible nitric oxide synthase (iNOS) immunohistochemistry. The parasite load was detected by immunolabeling the parasite by the same technique. It was noted a marked anemia in DAI 21. In the spleen, lymphoid hyperplasia at all times, evidenced in DAI 35. In the heart, presence of parasites inside vessels and ventricular chambers, in DAI 21 and polymorphonuclear inflammatory infiltrate in all However, the presence of the parasite from the DAI 14 associated with a toxic nephrosis was observed in the kidneys. In the lungs few parasites, thickening of alveolar septa, hemorrhage throughout the infection period and polymorphonuclear inflammatory infiltrate. In popliteal lymph nodes with parasites from DAI 28 and intense presence of mast cells (MCs) in DAI 21. In the brain, the discontinuity of the blood-brain barrier was observed in DAI 21. The results were important to elucidate the infection by trypanosomiasis, and the different moments in front of this scenario. In all organs the presence of parasite was detected by immunohistochemistry, showing a greater intensity in DAI21, and in the next moments reducing significantly. As well as the intensity of cells immunolabelled for nitric oxide was high between DAI14 and DAI 21 and after that time reduced. The data show that nitric oxide can injure host tissues like the parasite, and thus reduce parasitic burden.

Orientador: Sergio de Albuquerque / Tese (doutorado) - Universidade de Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:42:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GoncalvesNeto_JanainaFernanda_D.pdf: 2661740 bytes, checksum: bc0d1d7738531b1803d33f5dc69032d4 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Dados da literatura relataram a importância da suplementação ou da ausência de determinados micronutrientes no comportamento de uma infecção. Assim como, durante a gestação, a concentração de Zinco (Zn) no plasma materno diminui devido a diversas alterações fisiológicas, aumento da absorção e transferência fetal. Entretanto, a avaliação da suplementação de micronutrientes durante a infecção chagásica pouco tem sido discutida. Diante dos benefícios proporcionados por meio da suplementação de Zn sobre algumas doenças infecciosas e durante a gestação, foram objetivos do presente trabalho: determinar as concentrações plasmáticas e teciduais de Zn, avaliar os efeitos da suplementação desse micronutriente durante a gestação de camundongos infectados por Trypanosoma cruzi e os efeitos in vitro em cultura de células. Foram utilizados camundongos Swiss prenhas e não prenhas, infectadas com duas cepas distintas de T. cruzi. Esses animais foram suplementados com 20mg/Kg de sulfato de zinco durante 7 dias (cepa Y) e 14 dias (cepa Bolívia). Após a suplementação diversos parâmetros foram avaliados: parasitemia, peso materno, peso e tamanho dos fetos, desenvolvimento dos filhotes após o nascimento, as concentrações plasmáticas e teciduais de Zn, taxa de mortalidade, aspectos histopatológicos e os efeitos in vitro em cultura de células. De acordo com os resultados obtidos, foi observado que as fêmeas infectadas que receberam suplementação de Zn apresentaram redução da parasitemia; não alterou o peso das fêmeas, da prole, das placentas; não alterou o comprimento dos fetos e dos neonatos, o peso dos neonatos e a taxa de mortalidade. Histologicamente, a suplementação diminuiu a quantidade de ninhos nos tecidos avaliados de fêmeas infectadas com a cepa Bolívia e diminuiu a quantidade de infiltrados inflamatórios. A dosagem de zinco plasmático e tecidual demonstrou que a suplementação aumentou a concentração de zinco no plasma e nos tecidos dos animais infectados. Em relação à avaliação in vitro do Sulfato de Zinco, foi verificado que as concentrações utilizadas foram citotóxicas, porém apresentaram potencial tripanocida sobre as formas intracelulares de T. cruzi. Sendo assim, a suplementação de zinco durante a prenhez em camundongos infectados com T. cruzi, proporcionou resultados benéficos na concentração plasmática, desta forma, melhorando o desenvolvimento fetal e auxiliando no controle da carga parasitária / Abstract: A bulk of information concerning the relevance of supplementation and absence of certain nutrients in the modulation of the infection is available in the literature. Several physiological alterations can severely compromise plasmatic zinc levels during gestation, which is characterized by low zinc levels due to enhanced absorption of micronutrients and fetal transference. The benefits of zinc supplementation during the course of infectious diseases and during pregnancy are well known facts. Few data can be found concerning the effects of zinc supplementation during chagasic infection. The objectives of this work were to evaluate the plasmatic and tecidual concentration of zinc, the possible beneficial effects of zinc supplementation in pregnant and infected Mus musculus not only regarding to control maternal parasite levels but also to reduce fetal damage, and to evaluate the in vitro effects in cell culture. Pregnant and non pregnant Swiss mice were i.p. infected with two different T. cruzi strains (Bolivia and Y strains). Animals were daily supplied with 20mg/Kg of zinc sulphate during 7 days for Y strain and 14 days for Bolívia. Several parameters were evaluated: parasitemia, maternal weight, fetal size and weight, development of the litter after birth, plasmatic and tecidual concentration of Zn, mortality rate, hystopathology, and the effects of Zn supplementation on cell culture. Pregnant and infected females supplemented with Zn displayed reduced parasitemia, did not enhance body weight, bigger litters and placental size and weight. The presence of this micronutrient did not alter the length of fetuses and neonates, as well its weight and mortality rate. The hystopathological observation for Bolivia strain, showed reduced number of amastigote burdens in all evaluated organs and low inflammatory infiltrate. Plasmatic and tecidual zinc concentration were elevated in all animals supplemented with zinc. The in vitro observations of T. cruzi amastigote forms in the presence of zinc sulphate revealed a potential tripanocidal effect but also a citotoxic effect on cell culture. We concluded that zinc supplementation during pregnancy of infected mice in some way triggered a stimulatory immune modulation, leading to a better fetal development, reduced mortality rate and control of blood and tecidual parasite burdens / Doutorado / Protozoologia / Doutor em Parasitologia

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T11:28:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Liliane da Rocha Siriano - 2007.pdf: 877827 bytes, checksum: 8765f8f6633957232e187ede114c38fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T12:13:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Liliane da Rocha Siriano - 2007.pdf: 877827 bytes, checksum: 8765f8f6633957232e187ede114c38fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:13:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Liliane da Rocha Siriano - 2007.pdf: 877827 bytes, checksum: 8765f8f6633957232e187ede114c38fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2007-12-03 / The sensitivity of the technique of hemoculture was studied in 152 women infected by Trypanosoma cruzi in the chronic phase of Chagas disease, 101 pregnant and 51 non pregnant (control group). Serologic tests were positive for two or three serologic tests of different principles in all women. According to gestational age, 25 patients were under 21 weeks of gestation, 55 between 21 and 30 weeks of gestation and 21 were over 30. The pregnant women had average age of 29.2 years (from 17 to 44 years) and the control group the mean age was 34.1 years (from 18 to 49 years). Higher positivity was observed in the group of pregnant, 60.4% (61/101) compared with the control group: 29.4% (15/51). Been made seven tubes for each hemoculture held for a total of 1.064 tubes that were examined monthly, until the 150th day, a total of 5.320 tests conducted microscopic. It examined the profile of parasitemia by the number of tubes positive, in the pregnant group, the parasitemia was low in 39,6% of the tubes, average at 22,8%, and high in 37,6%. In the control group, the parasitemia was low at 70.6 %, average at 15.7 % and 13.7 % high.For naturalness most (87) were from the state of Bahia, 50 women of Goiás and 15 of other states. These results show that the technique of hemoculture identified significant differences (p <0.001) in parasitemia in pregnant in relation to the control group. This increase due to pregnancy could well encourage an increased risk of congenital transmission. Also, it could be an indication of specific treatment after pregnancy. / A sensibilidade da técnica de hemocultura foi estudada em 152 mulheres infectadas pelo Trypanosoma cruzi na fase crônica da doença de Chagas, sendo 101 gestantes e 51 não gestantes (grupo controle). Os testes sorológicos foram positivos por dois ou três testes sorológicos de princípios diferentes em todas as mulheres. Segundo a idade gestacional, 25 pacientes estavam com menos de 21 semanas de gestação, 55 entre a 21ª e 30ª semanas de gestação e 21, estavam com mais de 30. As gestantes tinham idade média de 29,3 anos (de 17 a 44 anos) e no grupo controle a média de idade foi de 34,1 anos (de 18 a 49 anos). Maior positividade foi observada no grupo das gestantes, 60.4% (61/101) em relação com o grupo controle: 29.4% (15/51). Foram realizados sete tubos para cada hemocultura realizada perfazendo um total de 1.064 tubos que foram examinados mensalmente, até no 150o dia, num total de 5.320 exames microscópicos realizados. Foi analisado o perfil de parasitemia pelo número de tubos positivos: no grupo das grávidas, a parasitemia foi baixa em 39,6 % dos tubos, média em 22,8%, e alta em 37,6%. No grupo controle, a parasitemia foi baixa em 70,6%, média em 15,7% e em 13,7% alta. Em relação à naturalidade a maioria (87) era proveniente do estado da Bahia, 50 eram de Goiás e 15 de outros estados. Estes resultados demonstram que a técnica de hemocultura permitiu detectar diferenças significativas (p< 0,001) quanto a parasitemia, em gestantes em relação ao grupo controle. Este aumento devido à gestação poderia favorecer assim um maior risco de transmissão congênita. Outrossim, poderia ser uma indicação de tratamento específico após a gravidez.

La existencia de una interacción o no a distintos niveles de una infección concomitante entre el Trypanosoma cruzi y del Plasmodium sp en un mismo hospedero humano, no fue aeún bien definida. Krettli et al. (1977) citado por Cox F. (2001) en un estudio experimental efectuado en ratones, observó la exacerbación de la parasitemia para T. cruzi durante una infección palúdica simultánea. En otro estudio realizado en la ciudad de Bermejo en Bolivia durante la gestión 2003, se presentaron resultados preliminares que indicaron una tasa de prevalencia de enfermedad de Chagas congénita en niños nacidos de madres con infección palúdica periférica al momento del parto, superior a la presentada en neonatos de madres que no cursaron infección palúdica durante su gestación. Esta diferencia no alcanzó la significación estadística suficiente. Por lo tanto la malaria de la madre durante el embarazo puede influir sobre la enfermedad de Chagas en el binomio madre-niño. Este estudio se realizó en la ciudad de Yacuiba al sur de Bolivia. Este fue un estudio observacional, tipo cohorte, prospectivo; en el cual la unidad de observación fue el binomio madre-niño durante el periodo gestacional y luego del parto el recién nacido hasta el primer mes de vida. Las variables de exposición fueron: malaria en la gestante y seropositividad para la enfermedad de Chagas en la madre, y las variables resultado: la presencia de parasitemia detectable para T. cruzi en sangre periférica en la madre y la enfermedad de Chagas congénita. El periodo de estudio abarcó 18 meses, en los cuales 357 gestantes ingresaron al estudio. Como resultados se estableció en la mujer embarazada que la prevalencia de infecciones palúdicas durante la gestación fue de 11.5% (41/357), 9% en los controles prenatales; la tasa de seroprevalencia para la enfermedad de Chagas fue de 41.5% (148/357) y la tasa de parasitemia detectable en sangre periférica para T. cruzi de 12% (43/357). En el neonato se observó una incidencia de la enfermedad de Chagas congénito del 2% (7/359) y una tasa de transmisión congénita del 4.7% (7/148). Las coinfecciones dadas por P. vivax y T. cruzi en las madres fueron del 7.6% y del 2.8% (la primera seropositividad para la enfermedad de Chagas e infección palúdica y la segunda parasitemia detectable para T. cruzi en sangre periférica e infección palúdica durante la gestación respectivamente). Los predictores más potentes para la presencia de parasitemia para 7'. cruzi en sangre periférica en las gestantes seroreactivas para la enfermedad de Chagas fueron: habitar una vivienda precaria y la presencia de infecciones palúdicas en el segundo trimestre de gestación y ser primigesta. Concluyéndose que existe un riesgo aumentado de presentar parasitemia para T. cruzi en la madre y el niño debido a la malaria durante el embarazo

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Jaqueline Oliveira (jaqueoliveiram@gmail.com) on 2008-12-08T16:15:21Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoeMCBocanegra.pdf: 5727987 bytes, checksum: 4b05bdb2998997c42d7f1f238641702d (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-16T15:34:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoeMCBocanegra.pdf: 5727987 bytes, checksum: 4b05bdb2998997c42d7f1f238641702d (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-16T15:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_2008_JoeMCBocanegra.pdf: 5727987 bytes, checksum: 4b05bdb2998997c42d7f1f238641702d (MD5) / Esse trabalho teve como objetivo estudar a parasitemia e sua possível associação com a evolução da doença de Chagas crônica. Foram incluídos no trabalho 124 pacientes com infecção chagásica crônica do projeto Mambaí que tinham seis sorologias positivas feitos em 1975/76. Esses pacientes realizaram exame clínico, eletrocardiográfico e xenodiagnóstico artificial em 2007. Foram utilizados também nesse trabalho o exame clinico, eletrocardiográfico, esofagograma, xenodiagnóstico e enema opaco feitos em períodos anteriores. O estudo da parasitemia em 2007 baseou-se em um único xenodiagnóstico artificial, utilizando 40 ninfas de D. maximus de primeiro estágio. Cada cinco insetos dissecados constitui um “pool”. De acordo com o percentual de “pools” positivos, os indivíduos foram classificados com parasitemia ausente, parasitemia baixa (0,1-19,9%), parasitemia media (20 a 50%) e parasitemia alta (50,1-100%). Deste modo houve 105 (84,7) com parasitemia ausente, seis (4,8%) indivíduos classificados com parasitemia baixa, 12 (9,7%) com média e um (0,8%) com alta. Também foi caracterizada a tendência da parasitemia que foi definida como decrescente, quando a parasitemia diminuiu, constante quando não houve mudança e crescente quando houve aumento no nível de parasitemia, em relação aos exames feitos em 1976/78. Nesses 124 pacientes o nível de xenopositividade caiu de 70,1% (87/124) em 1976/78 para 15,3% (19/124) em 2007. Dos 19 pacientes xenopositivos, sete permaneceram no mesmo nível, nove elevaram e três baixaram o nível de parasitemia. Sessenta e sete (54%) pacientes apresentaram eletrocardiogramas normais. As alterações eletrocardiográficas mais freqüentes foram: alterações de repolarização ventricular (29,8%), extrassístoles ventriculares (17,7%), bloqueio completo de ramo direito (16,9%), hemibloqueio anterior esquerdo (9,7%) e bloqueio AV de 1º grau (5,6%). Dos 124 pacientes com infecção chagásica, houve 57 (45,9%) com a forma cardíaca. Destes, 45 tiveram evolução progressiva, sendo que 38 desenvolveram cardiopatia e sete agravaram a cardiopatia preexistente em 1975/76. A evolução para cardiopatia aumentou ao longo dos anos e 78,9% desenvolveram o estádio C-I e C-II de cardiopatia, isto é, uma doença leve a moderada. Uma vez instalada a cardiopatia progride lentamente. O estudo evolutivo da forma digestiva foi feita pelos esofagogramas realizados em 1975/76, e 1988 e pelo enema opaco feito em 2002. Também levou-se em conta o sintoma obstipação e considerou-se como tendo colopatia os indivíduos com seis ou mais dias de obstipação. Foram considerados 30 (24,2%) pacientes com a forma digestiva e 28 tiveram evolução progressiva. O estudo mostrou que os 19 pacientes xenopositivos em 2007, tiveram percentual de evolução clinica semelhante aos 105 indivíduos xenonegativos. Mostrouse ainda que pacientes com parasitemia ausente, média e baixa tenderam a evolução progressiva similar. Houve tendência de evolução progressiva maior naqueles com perfil de parasitemia decrescente. Neste estudo o xenodiagnóstico, bem como o nível de parasitemia e o perfil de parasitemia não influenciaram na evolução da doença de Chagas. / The purpose of this research was to identify potencial relationships between the parasitaemia and the evolution of Chagas’s chronic disease. Patients with chronic Chagas infection were included from Mambaí Project Research. They had been detected with six positive Chagas serologic test at 1975/76. One hundred and twenty-four patients had clinical, electrocardiographic and artificial xenodiagnosis evaluations at 2007; and also, they used esophagogram and doble contrast enema of colon performed in previous periods. In 2007, the study of parasitaemia was based on a single artificial xenodiagnosis using 40 nymphs at first stage of D. Maximus. A group of five intestinal contents of insects were considered a “pool”. According to the percentage of positive "pools", patients were classified with absent, low (0.1-19.9%), medium (20 to 50%) and high (50.1-100%) parasitaemia. One hundred and five (84.7%), six (4.8%), 12 (9.7%) and one (0.8%) patients had absent, low, medium and high parasitaemia, respectively. Also the parasitaemia’s trend was characterized. It was defined as: decreased when parasitaemia declined, constant when not change occurred and increased when the parasitaemia’s level ascended, all in relation with 1976/78 parasitaemia testing. In those 124 patients, xenodiagnosis’s positive level fell from 70.1% (87/124) in 1976/78 to 15.3% (19/124) at 2007. Among the 19 patients with positive xenodiagnosis, seven remained at the same level, nine increased and three dropped their parasitaemia’s level. Sixty-seven (54%) patients had normal electrocardiograms. The most frequent electrocardiographic abnormalities were: alterations in ventricular repolarization (29.8%), ventricular premature beats (17.7%), complete right bundle branch block (16.9%), left anterior fascicular block (9.7%) and first degree atrio-ventricular block (5.6%). Meanwhile, from the 124 patients with Chagas infection, there were 57 (45.9%) with cardiopathy form. Forty five had progressive evolution, 38 developed heart disease and seven worsen their 1975/76 pre-existing heart disease. Trend for heart disease increased throughout the years and those who developed heart disease, 78.9% did so to CI and C-II stages, considered mild to moderate disease. Once installed heart disease, it progress slowly. Evolution of the digestive form was evaluated through esophagograms made in 1975/76, 1988, and the double contrast enema of colon in 2002. Colon disease was considered if the patient related constipation’s symptom for six or more days. Digestive form was considered in 30 (24.2%) patients, 28 of them had progressive evolution. The research showed that the 19 patients with positive xenodiagnosis, in 2007, had similar clinical evolution percentage than the 105 patients with negative result. It also showed that patients with absent, medium and low parasitaemia tended to evolutes in similar way. There was a trend of higher evolution in those with parasitaemia’s decreased profile. In this research, xenodiagnosis, parasitaemia’s level and parasitaemia’s profile did not influence in the evolution of chronic Chagas’s disease. / Este trabajo tuvo como objetivo estudiar la parasitemia y su posible asociación con la evolución de la enfermedad de Chagas crónica. Fueron incluidos en este trabajo 124 pacientes con infección chagásica crónica del proyecto Mambaí que tenían seis sorologias positivas hechos en 1975/76. Estos pacientes realizaron examen clínico, electrocardiográfico y xenodiagnóstico artificial en 2007. Fueron utilizados también el examen clínico, electrocardiográfico, esofagograma, xenodiagnóstico y enema opaco realizados en periodos anteriores. El estudio de la parasitemia en 2007 se baso en un único xenodiagnóstico artificial, utilizando para ello 40 ninfas de D. maximus de primer estadio. Cada cinco insectos disecados constituyó un “pool”. De acuerdo con el porcentual de “pools” positivos, os individuos fueron clasificados con parasitemia ausente, parasitemia baja (0,1-19,9%), parasitemia media (20 a 50%) y parasitemia alta (50,1-100%). De este modo hubo 105 (84,7) pacientes con parasitemia ausente, seis (4,8%) con baja, 12 (9,7%) con media y uno (0,8%) con alta parasitemia. También fue caracterizada la tendencia de la parasitemia, que fue definida como decreciente, cuando la parasitemia diminuyó, constante cuando no hubo mudanza y creciente cuando hubo aumento en el nivel de parasitemia en relación a los exámenes realizados en 1976/78. En estos 124 pacientes el nivel de xenopositividad cayo de 70,1% (87/124) en 1976/78 para 15,3% (19/124) en 2007. De los 19 pacientes xenopositivos, siete permanecieron en el mismo nivel, nueve elevaron y tres bajaron su nivel de parasitemia. Sesenta y siete (54%) pacientes presentaron electrocardiogramas normales. Las alteraciones electrocardiográficas mas frecuentes fueron: alteraciones de repolarización ventricular (29,8%), extrasístoles ventriculares (17,7%), bloqueo completo de ramo derecho (16,9%), hemibloqueo anterior izquierdo (9,7%) y bloqueo AV de 1º grado (5,6%). De los 124 pacientes con infección chagásica, hubo 57 (45,9%) con la forma cardiaca. De estos, 45 tuvieron evolución progresiva, siendo que 38 desenvolvieron cardiopatía y siete agravaron la cardiopatía preexistente en 1975/76. La evolución para cardiopatía aumentó a lo largo de los años y de los que desenvolvieron cardiopatía el 78,9% lo hicieron para los estadios C- I y C-II, considerada una enfermedad leve a moderada. Una vez instalada la cardiopatía progresa lentamente. La evolución de la forma digestiva fue evaluada por los esofagogramas realizados en 1975/76, 1988, y por el enema opaco en el 2002. También se tomó en consideración el síntoma estreñimiento. Compromiso colónico fue considerado si el paciente refería seis o mas días de estreñimiento. Fueron considerados 30 (24,2%) pacientes con la forma digestiva, de los cuales 28 tuvieron evolución progresiva. El estudio mostró que los 19 pacientes xenopositivos en el 2007, tuvieron un porcentaje de evolución clínica semejante a los 105 individuos xenonegativos. Se mostró también que pacientes con parasitemia ausente, media y baja tendieron a la evolución progresiva similar. Hubo tendencia de evolución progresiva mayor en aquellos con perfil de parasitemia decreciente. En este estudio, el xenodiagnóstico, bien como el nivel de parasitemia y el perfil de parasitemia no influyeron en la evolución de la enfermedad de Chagas.

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Introdução: A reativação da doença de Chagas crônica, descrita em aproximadamente 20% dos pacientes co-infectados por HIV/Trypanosoma cruzi (T. cruzi), apresenta-se geralmente como doença grave, com meningoencefalite e miocardite. O diagnóstico baseia-se em métodos diretos, no sangue ou outro material biológico, podendo ser estabelecido em exame histopatológico, sendo associado à elevada parasitemia ou a multiplicação de T. cruzi nos tecidos comprometidos. A letalidade é elevada principalmente nos pacientes que não receberam pelo menos 30 dias de terapêutica. Dessa forma métodos mais sensíveis e mais rápidos são necessários visando a detecção precoce do parasito. A proposta deste estudo é avaliar o papel da PCR em tempo real na determinação do nível de parasitemia em pacientes infectados por HIV com e sem reativação da doença de Chagas. Métodos: Noventa e uma amostras coletadas de pacientes com doença de Chagas 57 com doença de Chagas crônica (CR), 34 com co-infecção HIV-T cruzi, destes, 29 sem reativação (CO) e 5 com reativação da doença de Chagas foram analisadas por provas qualitativas: PCR para seqüência de DNA do cientoplasto (kDNA), hemocultura e xenodiagnóstico, e provas quantitativas: PCR em tempo real (qPCRTR), PCR competitiva (PCR-C), hemocultura considerando % de tubos positivos e xenodiagnóstico com % de ninfas positivas. As variáveis quantitativas moleculares e parasitológicas foram avaliadas pelo coeficiente de correlação de Spearman, bem como as variáveis moleculares, número de T. cruzi/mL e carga viral HIV, número de T. cruzi/mL e nível de células CD4 +/mm3, CD8 +/mm3 e razão CD4 +/CD8 +. Resultados: Foram observadas diferenças significantes entre pacientes co-infectados com e sem reativação. A maior parasitemia, detectada por qRT-PCR, foi em pacientes com reativação da doença de Chagas crônica (média 102235,3; mediana 51333,3 e número de T. cruzi/mL de sangue entre 939 e 352000), seguido pelos pacientes com co-infecção (média 255; mediana 54,3 e parasitemia entre 0 e 2405 T. cruzi/mL de sangue) e finalmente pelo grupo de pacientes com doença crônica (média 14,3; mediana 1; e parasitemia entre 0 e 146 T. cruzi/mL de sangue). O coeficiente de correlação de Spearman mostrou correlação entre xenodiagnostico x hemocultura, e entre xenodiagnostico x PCR competitiva ou PCR em tempo real. Houve maior correlação entre PCR competitiva x PCR em tempo real, e número de parasitos e as variáveis: carga viral do HIV, número de células T CD4 + ou razão CD4 +/CD8 +. Conclusões: RT-PCR foi capaz de distinguir entre pacientes co-infectados HIV/T. cruzi com e sem reativação sendo proposta sua utilização como marcador para terapia preemptiva na reativação da doença de Chagas em pacientes com HIV/T. cruzi. Adicionalmente, o nível de parasitemia foi correlacionado positivamente com carga viral e negativamente com nível de células T CD4+/mm3 de sangue e razão CD4+/CD8+ / Background. The reactivation of chronic Chagas disease, described in approximately 20% of HIV/Trypanosoma cruzi infected patients, is commonly expressed by severe and lethal meningoencephalitis and myocarditis. The gold standard for the reactivation diagnosis is based on direct methods, the parasite is observed by direct microscopic examination of fresh buffy coat or through the Quantitative Buffy Coat, wich can be applied to samples of cerebrospinal fluid or blood. The diagnosis of reactivation can be achieved by histological study, showing large numbers of parasites in tissue and acute inflamatory infiltrate. However diagnosis of reactivation is often difficult, it has been established in patients with high parasitemia, usually with severe clinical symptoms, this patients death before or during therapy. The purpose of this study was to evaluate the role of real time PCR for evaluation of the level of parasitemia on patients with HIV and T.cruzi infection with and without reactivation of Chagas disease. Methods. Ninety-one samples from patients with Chagas disease, 57 with chronic Chagas\' disease (CR), 34 with infection HIV/T. cruzi, 29 without reactivation (CO) and 5 with reactivation of Chagas\' disease, were analyzed by qualitative methods: Polymerase chain reaction with kDNA S35/S36 sequence, xenodiagnosis and blood culture, and quantitative methods: Real-time PCR, competitive PCR, blood culture considering % of positive tubes, xenodiagnosis with % of positive nymphs. Results: There were significant differences between groups, the highest parasitemia was observed in patients with reactivation of chronic Chagas\' disease (mean 102,235.3; median 51,333.3 and number of T. cruzi/ml of blood between 939 and 352,000), followed by patients with co-infection (mean 255, median 54.3 and parasitemia 0 to 2405 T. cruzi/mL of blood) and finally by the group of patients with chronic disease (mean 14.3, median 1 and parasitemia 0 to 146 T. cruzi/ml of blood). Spearman correlation coefficient showed correlation between xenodiagnosis x blood culture and between xenodiagnosis x competitive PCR or real time PCR. Stronger Spearman correlation index was found between cPCR x RTPCR, number of parasites and the variables: HIV viral load or CD4 + number or CD4 +/CD8 + ratio Conclusions. RT-PCR is able to distinguish between HIV/T. cruzi infected patients with or without reactivation and is proposed as a marker for preemptive therapy in Chagas disease reactivation. Additionally, the level of parasitemia was correlated positively with viral HIV load and negatively with CD4+/mm3 of the blood and CD4+/CD8+ ratio