Alteração da fosfolipase A2 tem sido descrita em diversas doenças neuropsiquiátricas. Esta enzima é responsável pelo metabolismo dos fosfolípides de membrana e parece estar envolvida na fisiopatologia do transtorno bipolar. Neste estudo, foram analisados os três principais subtipos da PLA2 (sPLA2, cPLA2 e iPLA2) em plaquetas de pacientes e indivíduos controles. A atividade de subtipos de PLA2 foi determinada em 20 pacientes TB sem tratamento com estabilizadores de humor e após seis semanas de tratamento com lítio; 72 pacientes medicados e 65 controles (16 pareados com os pacientes sem tratamento e 49 com os pacientes previamente medicados), pelo método radioenzimático. Os pacientes foram diagnosticados e classificados de acordo com os critérios estabelecidos no DSM-IV-TR. Foi verificado que Os pacientes no estágio inicial da doença apresentaram menor atividade de iPLA2, sPLA2 e cPLA2 quando comparadas ao grupo controle. Seis semanas de tratamento com o lítio não foram suficientes para observar alterações nos resultados obtidos. No entanto, o lítio diminuiu a sintomatologia maníaca e a depressiva, avaliadas pelas escalas de Hamilton e Young, respectivamente (p < 0,01 para as duas comparações). Os pacientes medicados não diferiram do grupo controle para os três subtipos de PLA2 avaliados. Estes resultados sugerem que no estágio inicial do TB há uma diminuição da atividade das PLA2, e que a ação de um ou mais medicamentos que são incluídos na terapêutica para este transtorno podem reverter essa diminuição. Sugere-se ainda que a diminuição da atividade da iPLA2 no estágio inicial do transtorno bipolar, além de alterar o remodelamento da membrana, possa ser um fator de risco para o desenvolvimento de demência nestes pacientes. / Changes in phospholipase A2 have been reported in several psychiatric disorders. This enzyme is responsible for the metabolism of membrane phospholipids and has been suggested to play a role in bipolar disorder physiopathology. In this study, the activity of the three main subtypes of phospholipase A2 (PLA2) were analyzed (sPLA2, cPLA2 and iPLA2) in platelets of BD patients and health subjects. Subjects enrolled were: 20 drug-naïve and drug free BD patients, who were treated with lithium for six weeks; 72 BD long-term treatment patients and 65 controls (16 for the drug-naïve and drug free and 49 for the long term group). PLA2 subtype activities were determined by the radio enzymatic method. Patients\' diagnostic and classification were made according to DSM-IV-TR criteria. Patients at the early stage of the disease presented lower iPLA2, sPLA2 and cPLA2 activity than the control group. Six weeks treatment with lithium did not change these activities. However, lithium reduced the maniac and depressive symptoms, evaluated with Hamilton and Young scales, respectively (p < 0.01, for both comparisons). Long-term treated patients presented similar PLA2 activities to control group. The results suggest that at the early stage of BD iPLA2 activity is decreased and that the adequate treatment of BD could reverse this reduction. We suggest that a reduction of iPLA2 activity at the early stage of BD can modify the membrane metabolism, and could be a risk for the development of dementia in BD patients.

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto, Fernando Ferreira Costa / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T19:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garrido_VanessaTonin_D.pdf: 6610754 bytes, checksum: 9b799d90821835bae6ac5d806b1d2f1c (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A anemia falciforme (AF) é uma hemoglobinopatia hereditária resultante de uma mutação no gene que codifica a subunidade ?-globina, levando à produção da hemoglobina S (HbS) nos eritrócitos. Com a polimerização da HbS, durante a desoxigenação, ocorre a deformação e fragilização das células vermelhas, resultando em anemia hemolítica e eventos vaso-oclusivos. As crises vaso-oclusivas são a principal causa de morbidade nos pacientes com anemia falciforme e as plaquetas parecem ter um papel importante nesse processo, pois uma vez ativadas elas secretam e expressam mediadores que induzem uma resposta inflamatória tanto em leucócitos como em células endoteliais. A proposta deste trabalho foi investigar a produção e expressão dos mediadores inflamatórios derivados de plaquetas, LIGHT e CD40L, em controles (indivíduos saudáveis; CON), pacientes com anemia falciforme (AF) e pacientes com anemia falciforme em terapia com hidroxiureia (AFHU). Também avaliamos o envolvimento das plaquetas e seus mediadores na ativação de leucócitos e células endoteliais. Os níveis plasmáticos de ambas citocinas foram significativamente maiores em indivíduos AF e AFHU do que nos indivíduos controle e, curiosamente, apesar da hidroxiureia ser capaz de diminuir a concentração plasmática de algumas citocinas inflamatórias, a terapia com essa droga não foi associada com qualquer alteração nos níveis de LIGHT ou CD40L. Foi observada uma correlação expressiva da concentração de LIGHT com níveis plasmáticos de CD40L, IL-8, ICAM-1, Trombospondina-1 e TNF-?, enquanto que a concentração plasmática de CD40L correlacionou-se com os níveis de TNF-? e principalmente com Trombospondina-1, indicando que tanto LIGHT como CD40L podem estar participando ou então refletindo a inflamação crônica presente na anemia falciforme. A expressão proteica de LIGHT foi significativamente maior na superfície de plaquetas de indivíduos AF e AFHU em comparação com plaquetas CON e apresentou uma correlação com marcadores de ativação plaquetária. A secreção de LIGHT pelas plaquetas foi determinada por ELISA e concentrações significativas dessa citocina puderam ser detectadas no sobrenadante de plaquetas CON e AF, sugerindo que essas células podem ser uma fonte importante de LIGHT na circulação. Apesar da expressão de CD40L não ter sido detectada na superfície das plaquetas de pacientes e controles, as plaquetas de pacientes AF secretaram uma quantidade maior de CD40L em comparação aos controles e foi observada uma correlação significativa entre a liberação de LIGHT e CD40L em plaquetas de pacientes AF, indicando que pode existir uma associação na secreção dessas duas citocinas. A expressão dos receptores de LIGHT (HVEM e LT?R) e de CD40L (CD40) foi avaliada por citometria de fluxo em plaquetas, neutrófilos, linfócitos e monócitos. Foi observado que o receptor HVEM estava mais expresso em plaquetas e linfócitos de pacientes com anemia falciforme, enquanto que a expressão do receptor CD40 estava elevada nas plaquetas, nos neutrófilos, nos linfócitos e nos monócitos de pacientes, comparando com o grupo controle. Esses dados mostram que a via de sinalização de LIGHT e CD40L pode estar alterada na anemia falciforme, contribuindo com a ativação dos leucócitos. Quando avaliamos a participação das plaquetas na ativação dos leucócitos, observamos que as plaquetas de indivíduos com anemia falciforme foram eficientes em aumentar a expressão do marcador de ativação, CD69, nos linfócitos e também em induzir o fenótipo pró-inflamatório nos monócitos. Enquanto que a co-cultura de HUVECs com plaquetas demonstrou que as plaquetas de pacientes com anemia falciforme possuem uma capacidade maior de induzir a expressão de ICAM-1 em células endoteliais do que as plaquetas de indivíduos controle. Na presença de anticorpos anti-CD40L observamos uma redução drástica no aumento da expressão de ICAM-1 pelas plaquetas e apesar dessa expressão também ter sido reduzida na presença de anticorpos anti-LIGHT, esses resultados não foram estatísticamente significativos. Interessantemente, altas concentrações plasmáticas de LIGHT estavam associadas com a elevada velocidade de regurgitação tricúspide, um indicativo de hipertensão pulmonar na anemia falciforme e uma associação significativa também foi encontrada entre níveis elevados de CD40L e pacientes com histórico de Síndrome Torácica Aguda. Essas evidências sugerem que LIGHT e CD40L parecem estar contribuindo com a ativação dos leucócitos e do endotélio, exercendo um papel importante na fisiopatogenia da anemia falciforme e aparentemente nas manifestações clínicas desta doença. Os resultados encontrados neste estudo evidenciam a importância que as plaquetas e seus mediadores inflamatórios, LIGHT e CD40L, podem ter na propagação da inflamação vascular presente na anemia falciforme, se tornando possíveis alvos para novas abordagens terapêuticas / Abstract: Sickle cell disease results from a single amino acid substitution in the gene encoding the ?-globin subunit, leading to hemoglobin S production in red blood cells. Polymerization of deoxygenated sickle hemoglobin leads to decreased deformability of red blood cells, resulting in hemolytic anemia and vaso-occlusive events. Platelets appear to play an important role in the vaso-occlusive process, as following their activation they express and secrete mediators that induce an inflammatory response in endothelial cells and leukocytes. The purpose of this study was to investigate the production and expression of LIGHT and CD40L on platelets, the presence of this protein in the plasma of controls (healthy subjects; CON), sickle cell anemia patients (AF) and sickle cell anemia patients on hydroxyurea therapy (AFHU). In addition, this study evaluated the involvement of platelets and their mediators, LIGHT and CD40L, in the activation of leukocytes and endothelial cells. Plasma levels of both cytokines were significantly higher in AF and AFHU individuals than in control individuals and interestingly, HU therapy was not associated with a reduction in these levels. A significant correlation was observed between levels of LIGHT with plasma levels of CD40L, IL-8, ICAM-1, Thrombospondin-1 and TNF-?, whereas the plasma concentration of CD40L correlated with levels of TNF-? and especially with plasma Thrombospondin-1. LIGHT expression was significantly higher on the surface of platelets from AF and AFHU subjects, compared with CON individuals and this expression demonstrated a correlation with markers of platelet activation. LIGHT secretion was determined by ELISA and significant concentrations of this cytokine could be detected in the supernatant of platelets from CON and AF individuals, indicating that platelets may be an important source of LIGHT. Although CD40L expression was not detected on the platelet surface in patients or controls, sickle platelets secreted an increased amount of CD40L, compared to controls. A significant correlation was observed between CD40L and LIGHT release in sickle cell patients, indicating that the production of these two proteins may be tightly coupled. The expression of LIGHT (HVEM and LT?R) and CD40L (CD40) receptors was evaluated by flow cytometry on the surface of platelets, neutrophils, lymphocytes and monocytes. An increased HVEM receptor expression was observed on the platelets and lymphocytes of sickle cell patients, whereas the expression of the CD40 receptor was elevated on platelets, neutrophils, lymphocytes and monocytes from sickle cell patients, compared to control subjects. Evaluating the contribution of platelets to leukocyte activation, we observed that platelets from sickle cell anemia individuals increased the expression of the activation marker, CD69, on lymphocytes and also induced a pro-inflammatory phenotype on monocytes. Co-culture of HUVEC with platelets demonstrated that sickle cell platelets have an increased ability to induce ICAM-1 expression on endothelial cells than platelets from control subjects. Furthermore, in the presence of anti-CD40L antibodies, a drastic reduction was observed in this increase. Although the expression of endothelial ICAM -1 was also reduced in the presence of anti-LIGHT antibodies, these results were not statistically significant. Interestingly, high plasma concentrations of LIGHT were associated with elevated tricuspid regurgitant velocity, indicative of pulmonary hypertension in sickle cell anemia. A significant association was also found between high levels of CD40L and patients with a lifetime history of acute chest syndrome. LIGHT and CD40L appear to contribute to leukocyte and endothelial activation, playing an important role in the pathophysiology of sickle cell anemia and apparently in the clinical manifestations of this disease. These results highlight the important role that platelets and their inflammatory mediators may play in the vascular inflammation that is known to occur in sickle cell anemia / Doutorado / Fisiopatologia Médica / Doutora em Ciências

Orientador: Sisi Marcondes Paschoal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T16:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tangerino_DeboraJulianadosAnjos_M.pdf: 666295 bytes, checksum: d40f37f273e761c768f098ca04d15d89 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A sepse caracteriza-se por uma reação inflamatória sistêmica e um quadro de estresse oxidativo em decorrência da grande formação de espécies reativas de oxigênio (EROs). Há trabalhos que mostram que as plaquetas são importantes neste quadro inflamatório, mas seu verdadeiro papel na sepse ainda não está bem elucidado. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito temporal do uso do antioxidante N-acetilcisteína (NAC) na resposta inflamatória e na atividade plaquetária em modelo de sepse induzido por lipopolissacarídeo (LPS). Para tanto, ratos controle foram injetados com salina (300 ?l, i.p.) ou NAC (150 mg/kg, i.p.), enquanto os tratados foram injetados com LPS de E. coli (1 mg/kg, i.p.) ou com NAC 30 min ou 6h após a injeção de LPS. Após 48h da injeção de LPS o sangue foi coletado. O número de leucócitos totais e plaquetas foi determinado no sangue periférico. A concentração plasmática de TNF-? foi determinada utilizando kit comercial de ELISA. A agregação plaquetária foi avaliada em agregômetro de dois canais. A determinação de EROs em plaquetas foi feita por citometria de fluxo e a de GMPc por imunoensaio. A determinação da atividade da superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa redutase (GR) foi feita através de kits comerciais. O LPS aumentou o número de leucócitos totais e reduziu o de plaquetas no sangue periférico. A NAC, 30 min ou 6h após a injeção de LPS, levou a contagem destas células para números semelhantes ao do grupo injetado com salina ou somente com NAC. A concentração plasmática aumentada de TNF-? nos ratos injetados com LPS foi reduzida por NAC para valores próximos aos encontrados no grupo salina. A agregação plaquetária induzida por ADP (10 ?) não foi afetada por NAC, mas foi 50% menor em ratos tratados com LPS. A inibição da agregação plaquetária foi revertida pela injeção de NAC 30 min ou 6h após a injeção de LPS. O LPS aumentou 2,2 vezes os níveis de GMPc em plaquetas estimuladas com ADP quando comparado com o grupo injetado com salina, o qual foi prevenido por NAC, quer em 30 min ou 6h após a injeção de LPS. Os níveis de GMPc em plaquetas de ratos injetados com NAC foram 45% menores do que os do grupo salina. A produção aumentada de EROs em plaquetas ativadas de ratos injetados com LPS foi reduzida por NAC para níveis semelhantes aos dos controle. A NAC reduziu significativamente a formação de EROs em plaquetas em comparação com o grupo salina. A atividade enzimática da SOD em plaquetas ativadas foi reduzida em 35% por NAC em comparação com o grupo salina. O LPS aumentou, discretamente, a atividade da SOD em plaquetas, sendo este prevenido pelo tratamento com NAC. Diferente do observado com SOD, as atividades enzimáticas da GPx e da GR em plaquetas ativadas foram significativamente aumentadas pelo LPS. A NAC não modificou a atividade da GPx e da GR em comparação com o grupo salina, mas reduziu cerca de 41% e 61% a atividade da GPx e GR, respectivamente, em plaquetas do grupo injetado com LPS. Nossos resultados mostraram que a NAC previne e reverte os efeitos do tratamento de ratos com LPS na atividade plaquetária. O restabelecimento da agregação plaquetária, dos níveis de GMPc e EROs intraplaquetário podem ter sido resultado de uma ação direta de NAC nas plaquetas e/ou em decorrência da melhora do quadro inflamatório do animal / Abstract: Sepsis is an oxidative stress condition characterized by a systemic inflammatory reaction. It has been demonstrated that platelets are important in this inflammatory condition, but their real role in sepsis has not been well elucidated yet. Therefore, the aim of this study was to evaluate the temporal effect of the use of the antioxidant Nacetylcysteine (NAC) in the inflammatory response and platelet activity in a model of sepsis induced by lipopolysaccharide (LPS). Control rats were injected with saline (300 ?l, i.p.) or NAC (150 mg/kg, i.p.), while those treated were injected with LPS from E. coli (1 mg/kg, i.p.) or with NAC 30 min or 6 h after LPS injection. Blood was collected 48 h after LPS injection. Total leukocytes and platelets number was determined in peripheral blood. The plasma concentration of TNF-? was determined using commercial ELISA kit. Platelet aggregation was measured in two-channel aggregometer. Determination of reactive oxygen species (ROS) in platelets was performed by flow cytometry and cGMP by immunoassay. Enzymatic activity of superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx) and glutathione reductase (GR) was determinated using commercial kits. LPS increased the total leukocytes number and reduced platelets in peripheral blood. NAC, 30 min or 6 h after LPS injection, brought the cell counts to the similar values of rats injected with saline or with NAC. The increased plasma concentrations of TNF-? in rats injected with LPS was reduced by NAC to values close to those found in the saline group. ADP (10 ?M)-induced platelet aggregation was unaffected by NAC but was 50% lower in rats treated with LPS. Inhibition of platelet aggregation was reversed by the injection of NAC 30 min or 6 h after LPS injection. LPS increased intraplatelet cGMP levels by 2.2-fold compared to the group injected with saline, which was prevented by NAC either 30 min or 6 hours after LPS injection. cGMP levels in activated platelets of rat injected with NAC were 45% lower than those of the saline group. The increased production of ROS in activated platelets from rat injected with LPS was reduced by NAC to levels similar to the control. NAC significantly reduced the formation of ROS in platelets compared to the saline group. SOD activity in stimulated platelets was reduced 35% by NAC compared to the saline group. LPS slightly increased SOD activity in platelets, which is prevented by treatment with NAC. Different from that observed with SOD, the enzyme activities of GPx and GR in activated platelets were significantly increased by LPS. The NAC did not modify the activity of GPx and GR compared with the saline group, but decreased by 41% and 61% the GPx and GR activities, respectively, in platelets of LPS-injected group. Our results showed that NAC prevents and reverses the effects of in vivo LPS on platelet activity. Restoration of platelet aggregation and of intraplatelet cGMP and ROS levels of LPS-injected rats may be caused by a direct action of NAC in platelets or by the improvement of inflammatory condition in the animal / Mestrado / Farmacologia / Mestra em Farmacologia

Hemostasis is a complex process that involves equilibrium between the coagulation and fibrinolytic systems. Furthermore, the spatial and temporal expression of NTPDases in the vasculature appears to control platelet activation, thrombus size and stability, by regulating phosphohydrolytic activity and consequent P2 receptor signaling. Here we show the activity of ectonucleotidases on the platelet surface of normal pregnant women and pregnant women with complications. The activities of the enzymes, NTPDase and 5 - nucleotidase, were analyzed in the platelets of four patient groups composed of women divided into the following way: nonpregnant (NP), pregnant without complications (P), pregnant with hypertension (HP) (preeclampsia) and pregnant with gestational diabetes mellitus (GDP). Increased NTPDase and 5 -nucleotidase activities were observed in the groups of P, HP and GDP when compared to control (p<0.01). Ectonucleotidase activity in platelets from group P, HP and GDP were enhanced, showing that pregnancy with and without complications enhanced ATP, ADP and AMP hydrolysis. This fact is very important to corroborate with the thromboregulatory role of this enzyme in physiological and pathological conditions. / Hemostasia é um processo complexo que envolve o equilíbrio entre a coagulação e o sistema fibrinolítico. Além disso, a expressão espacial e temporal da NTPDase na vasculatura parece controlar a ativação plaquetária, tamanho do trombo e estabilidade, por regular a atividade fosfohidrolítica e a conseqüente sinalização através de receptores P2. Este trabalho teve por objetivo estudar a atividade das ectonucleotidases na superfície plaquetária de mulheres grávidas normais e mulheres grávidas com complicações (alto risco). A atividade das enzimas NTPDase e 5 -nucleotidase foi analisada em plaquetas de quatro grupos de pacientes compostos de mulheres distribuidas da seguinte maneira: não grávidas (NP), grávidas sem complicações (P), grávidas com hipertensão (HP) (preeclampsia) e grávidas com diabete mellitus gestacional (GDP). A atividade da NTPDase e 5 -nucleotidase encontrou-se aumentada nos grupos P, HP e GDP quando comparados com o grupo controle (NP) com um valor de p<0.01. A atividade das ectonucleotidases em plaquetas dos grupos P, HP e GDP encontraram-se aumentadas, mostrando que a gravidez sem e com complicações aumenta a hidrólise de ATP, ADP e AMP. Este fato é muito importante, pois reforça o papel tromboregulatório destas enzimas em condições fisiológicas e patológicas.

Submitted by ISABELE SILVEIRA ROSA null (isabelesrv@gmail.com) on 2016-08-08T14:40:35Z No. of bitstreams: 1 IsabeleSilveiraRosaVanniMestrado - ok pdf.pdf: 3226160 bytes, checksum: 4bfd14d4c9a8ade0e472c57642b58870 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-08-10T12:14:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vanni_isr_me_bot.pdf: 3226160 bytes, checksum: 4bfd14d4c9a8ade0e472c57642b58870 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-10T12:14:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vanni_isr_me_bot.pdf: 3226160 bytes, checksum: 4bfd14d4c9a8ade0e472c57642b58870 (MD5) Previous issue date: 2016-07-18 / Não recebi financiamento / Muitas especialidades médicas têm utilizado o Plasma Rico em Plaquetas (PRP) em diferentes modalidades terapêuticas, como está ocorrendo com a Ortopedia e em Cirurgia Plástica. No entanto, a denominação utilizada para o PRP é muitas vezes equivocada. Diante do crescente número de especialidades médicas usando PRP ou Hormônios Derivados de Plaquetas (HDP) este trabalho foi delineado. Objetivo: compreende três etapas: 1) Levantamento bibliográfico em base de dados com a palavra-chave: platelet rich plasma com intuito de avaliar criticamente os artigos publicados na literatura em revistas com Fator de Impacto (FI)≥1; 2) Obter PRP, Concentrado de Plaquetas (CP) e HDP de indivíduos saudáveis, pela técnica de lisado plaquetário, após a utilização de agonista e congelamento / descongelamento (N=10) e 3) Avaliar o desempenho destes preparados como substituto do Soro Fetal Bovino na cultura de Células Tronco Mesenquimais humanas (CTMh). Casuística e Métodos: Os indicadores monitorados foram: idade, sexo, tipagem ABO/RhD, fenotipagem eritrocitária Rh, Kell e determinação de fatores de crescimento pelo sistema Multiplex-Milliplex®: PDGF- AA, RANTES/CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1/FGF-ácido, FGF-2/FGF-básico, EGF, Angiopoietina-2, Fibrinogênio e Fator von Willebrand, estes dosados nas 3 preparações: PRP, CP e HDP. Todos os indicadores monitorados foram realizados análise estatística. Resultados: Foram analisados 50 artigos entre 2012-2016, destes, 29 com a palavra-chave platelet-rich plasma, 14 platelet lysate (PL) e 7 platelet growth factor (PGF). Os artigos publicados com a palavra-chave PL são de periódicos com maior FI e maior coerência com a metodologia, seguida do PGF e PRP. Contata-se que a maioria dos trabalhos com a terminologia PRP foi empregada de forma equivocada. Estes indicadores registram que não existe correlação entre a contagem plaquetária e a dosagem de hormônios. A idade dos indivíduos está inversamente relacionada com a concentração de fator, à exceção do FGF. Não há correlação da quantidade de fatores de crescimento e sexo. Indivíduos do grupo sanguíneo A, e fenótipo ee são melhores secretores de hormônios de crescimento. Quando se comparam os 3 métodos analisados, o CP e o HDP são estatisticamente superiores ao PRP quanto à dosagem de fatores de crescimento. A análise desempenho dos preparados, na concentração de 20% quando comparado com o Soro Fetal Bovino na mesma concentração, identifica que o melhor desempenho quantitativamente foi CP>PRP>HDP=CTLE. No entanto a análise histológica evidencia um grande número de células aderidas ao scaffold de fibrina, com desempenho nitidamente superior para o HDP. Conclusão: A maioria dos trabalhos publicados usa a terminologia PRP incorretamente. Levando-se em consideração a quantificação dos hormônios plaquetários dosados e o desempenho em cultura celular as melhores técnicas são CP e HDP, ficando o PRP em desvantagem. / Diversity medical specialties have been using Platelet Rich Plasma (PRP) therapy form as is happening with the Orthopedics and Plastic Surgery. However, the name used for the PRP is often used wrongly. This work was outlined considering the growing number of medical specialties using PRP or platelet-derived hormones (PDH). Objective: The work consisted of three steps: 1) Bibliographic search with the key word PRP in order to evaluate the articles published in journals with Impact Factor (IF) ≥1; 2) obtaining of PRP, platelet concentrate (PC) and PDH from healthy individuals using the platelet lysate technique after use agonist and freeze / thaw (N = 10); 3) evaluate the performance of these preparations as substitute for fetal bovine serum in culture of human mesenchymal stem cells. Methods: The indicators monitored were: age, sex, ABO / RhD, erythrocyte phenotyping Rh, Kell and determination of growth factors by Multiplex-Milliplex® system(PDGF-AA, RANTES / CCL5, PAI-1 (total), VEGF-A, FGF-1 / FGF-acid, FGF-2 / FGF-basic, EGF, Angiopoietin-2, fibrinogen and Factor von Wilebrand. The monitored indicators were performed statistical analysis. Results: These parameters were measured in three preparations: PRP, PC and PDH. It was analyzed 50 articles between 2012-2016, of these, 29 with the platelet-rich plasma password, 14 platelet lysate (PL) 7 and platelet growth factor (PGF). Articles published with the keyword PL are journals with higher IF and greater consistency with the methodology followed by PGF and last PRP. It was observed that most of the work with the PRP terminology was used wrongly. These indicators showed that there is no correlation between the platelet count and the dosage of hormones. The age of individuals is inversely related with the concentration of factors, excepting FGF. There is no correlation between the amount of growth factors and gender. Individuals belonging to blood group A and no phenotype E are better secreting of growth hormones. When comparing the three methods analyzed, PC and PDH are statistically higher than PRP on the dosage of growth factors. Compared with 20% of Fetal Bovine Serum, the performance was quantitatively better to PC> PRP> CTL=PDH on the viability of suspension cell. However, the histological analysis showed a large number of cells attached to the fibrin scaffold with higher performance to the PDH. Conclusion: The majority of published studies using PRP terminology are incorrectly. Considering the quantitation of platelet hormones and the performance in cell culture, the best techniques are PC and PDH.

INTRODUÇÃO: Entre os tratamentos existentes para o transtorno obsessivocompulsivo (TOC) os mais eficazes são o farmacológico, com inibidores de recaptura de serotonina (IRS; inibidores seletivos de recaptura de serotonina [ISRS] e clomipramina), e o comportamental, baseado na técnica de exposição com prevenção de resposta (EPR). Ambas apresentam eficácia semelhante para os sintomas obsessivo-compulsivos e estudos demonstram que a EPR produz modificações neurobiológicas semelhantes às provocadas pelo tratamento com ISRS. Essas evidências sugerem que a resposta clínica à EPR está diretamente relacionada a um aumento da biodisponibilidade de 5HT no cérebro. A concentração de 5HT no sangue periférico é uma medida representativa do sistema serotonérgico central, e é utilizada como um marcador biológico indireto. O objetivo deste estudo foi comparar a concentração serotonérgica (basal e variação em 8 semanas) e a resposta à terapia comportamental baseada em EPR. MÉTODOS: Foram incluídos nesse estudo 30 pacientes com diagnóstico operacional de TOC. Destes, 29 iniciaram o tratamento, 27 chegaram até a quarta semana e 24 completaram o protocolo padronizado com 16 sessões (8 semanas) de terapia. As dosagens de 5-HT foram feitas nas semanas 0 e 8 e as avaliações clínicas pelas escalas Y-BOCS e CGI, bem como medidas de sintomas secundários (depressão, ansiedade e incapacidade) nas semanas 0, 4 e 8. RESULTADOS: Encontrou-se correlação positiva entre a concentração basal de 5HT e a resposta clínica em quatro semanas de EPR (p<0,05).Observouse maior concentração basal e maior redução em 8 semanas nos níveis de 5HT em pacientes respondedores comparados aos não respondedores. Entretanto não houve significância estatística. CONCLUSÃO: Na amostra estudada os dados sugerem que a alta concentração basal de 5-HT é um marcador biológico preditor de boa resposta clínica a quatro semanas de EPR. Amostras maiores talvez mostrassem a concentração de 5-HT no plasma rico em plaquetas como um preditor de resposta a 8 semanas de EPR. Protocolos com amostras maiores e com grupos controle são necessários para confirmar esses achados / INTRODUCTION: Both gold standard treatments for obsessive-compulsive disorder (pharmacotherapy with serotonin reuptake inhibitors, and behavioral with exposure and response prevention [ERP]) are equally effective. Studies have demonstrated similar neurobiological changes elicited by these different treatments in OCD patients. These findings are suggestive that the clinical response to ERP is directly related to an increase of the 5-HT concentration in the brain. The platelet 5-HT concentration have been shown as a representative measure of central serotonergic system and used as a biological marker of the synaptic transmition. OBJECTIVE: To compare the platelet 5-HT concentration (basal and variation in 8 weeks) and the clinical response to ERP treatment. METHODS: 30 OCD patients were included and 29 started the treatment. 27 patients compleated at list 4 weeks and 24 completed all 8 weeks (16 sesions) ERP protocol. Patients had the basal and final (after 8 weeks) platelet 5-HT concentrations dosed and the clinical response measured by Y-BOCS, CGI and measures of secondary symptoms as well (depression, anxiety and disability). RESULTS: Data shows a positive correlation between the basal concentration of 5-HT and the 4 week ERP response (p<0,05). There were higher basal concentration and reduction in 8 weeks of platelet 5-HT concentration in the responders group compared with non-responders. Nevertheless, this differences was not significant (p>0,05). CONCLUSION: In the studied sample data suggest that high basal 5-HT platelet concentration is a biologic predictor of fast onset (4 weeks) of clinical response to ERP. Probably larger samples would show the basal 5-HT platelet concentration as a predictor of 8 weeks ERP outcome. Controlled trials are needed to confirm these findings

O tratamento tópico de feridas visa favorecer um processo de cicatrização eficaz, rápido e seguro. Como uma das opções, o Plasma Rico em Plaquetas – PRP - um concentrado de plaquetas obtido por meio de centrifugação sanguínea ou aférese, vem sendo também utilizado no tratamento de feridas por conter os fatores de crescimento plaquetários. Visto que se trata de uma terapia inovadora, este estudo objetivou buscar as evidências sobre o seu uso na terapia tópica de feridas crônicas de perna. Para tanto, realizou-se revisão sistemática de literatura, seguindo-se as etapas preconizadas pela Colaboração Cochrane. Os estudos foram levantados até 2006, por meio dos descritores platelet rich plasma, platelet derived growth factor, platelet gel, platelet releasate, platelet lysate, CT-102 activated supernatant, wound healing, chronic wound, foot ulcer, diabetic foot, e varicose ulcer, utilizando diferentes combinações, conforme a base de dados consultada (Cochrane, PubMed, Lilacs, Embase e Cinahal). Para a análise da validade interna dos estudos, empregaram-se: a Escala de Jadad, Escala de Avaliação do Grau de Recomendação e Evidência e Escala de Avaliação do Controle das Variáveis. De 56 estudos pré-selecionados, chegou-se à amostra de 18 ensaios clínicos, indexados, principalmente, no PubMed/ Medline (17 / 94,5%), originários dos EUA (12 / 66,6%) e publicados em língua inglesa. Desses, sete (39%) eram ensaios clínicos randomizados, que obtiveram forte recomendação (A) e nível de evidência alto. A partir das metanálises desses ensaios randomizados, em diferentes combinações, os resultados mostraram que o PRP favorece o processo de cicatrização (IC95% 1,84 - 7,41), principalmente em úlceras diabéticas (IC95% 2,94 - 20,31), e quando utilizado como CT-102 (IC95% 2,70-41,40). Concluindo, esta revisão sistemática e metanálise mostram que há evidências científicas sobre os resultados favoráveis do uso do PRP em feridas crônicas de perna, principalmente as de etiologia diabética / The wound topical treatment stimulates an effective, fast and safe wound healing. The platelet rich plasma (PRP) – a concentrated of platelets obtained from centrifugation or single apheresis, has been used as the treatment of wounds because it contains platelet derived growth factor. Being a new therapy, the aim of this study is to show some evidence about the effectiveness of PRP on the healing of chronic wound leg. To this test, a systematic review was conducted, as the recommendation of the Cochrane Library. The studies were screened until 2006 using some key words: platelet rich plasma, platelet derived growth factor, platelet gel, platelet releasate, platelet lysate, CT-102 activated supernatant, wound healing, chronic wound, foot ulcer, diabetic foot, and varicose ulcer; with different combinations, according to data base (Cochrane, PubMed, Lilacs, Embase e Cinahal). From 56 studies, 18 were clinical trials, specially found in PubMed (17 / 94,5%), originated in USA (12 / 66,6%) and published in English. Seven (39%) were clinical trials randomized , classified as a strong recommendation (A) with high evidence level. The meta-analysis of these randomized trials, shows the PRP promotion in wound healing (CI 95% 1,84-7,41), mainly in diabetic ulcer (CI 95% 2,70-41,40). To sum up, this study provides a scientific evidence on repair of chronic wound leg, mainly diabetic ulcer, using PRP

O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado na medicina equina para o tratamento de lesões ósseas, articulares, tendíneas e ligamentares. No entanto o PRP deve ser preparado no momento de cada aplicação, pois seu tempo máximo de utilização após o preparo é de apenas oito horas. O objetivo deste estudo foi avaliar o resfriamento e criopreservação como métodos de armazenamento do PRP equino utilizando dois crioprotetores: dimetil sulfóxido (DMSO) e trealose, na tentativa de manter a viabilidade plaquetária após o armazenamento a baixas temperaturas. Duas amostras de PRP foram preparadas a partir da centrifugação do sangue de seis pôneis saudáveis e foram destinadas à criopreservação a -196º C ou ao resfriamento a 4º C. Cada amostra de PRP preparada foi dividida em quatro alíquotas: fresca, com DMSO, com trealose ou sem crioprotetor. As amostras frescas foram avaliadas quanto à contagem plaquetária, determinação do volume plaquetário médio (VPM), concentração plaquetária em relação ao sangue total e quantificação do fator de crescimento de transformação beta 1 (TGF-β1). As amostras criopreservadas e resfriadas ficaram armazenadas por 14 dias e foram então submetidas às mesmas análises laboratoriais. O número de plaquetas e concentração plaquetária foram similares entre as amostras frescas e resfriadas com ou sem crioprotetor, mas foram superiores nas amostras frescas em relação às amostras criopreservadas. Observou-se aumento do VPM em todas as amostras armazenadas, indicando que as plaquetas sofreram lesões durante o armazenamento. A liberação de TGF-β1 foi superior no PRP fresco em relação ao PRP resfriado ou criopreservado, não havendo diferença entre as amostras que continham ou não crioprotetores. A adição dos crioprotetores DMSO e trealose não impediu as lesões plaquetárias de armazenamento. Por outro lado, tanto as amostras resfriadas quanto as criopreservadas liberaram quantidades significativas de TGF-β1. / Platelet rich plasma (PRP) is used in equine medicine for treatment of bone, joint, tendon and ligament injuries. However the PRP must be prepared at the time of each application, since its maximum time of use after the preparation is only eight hours. The objective of this study was to evaluate cooling and cryopreservation of equine PRP as storage methods using two cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (DMSO) and trehalose, in an attempt to maintain platelet viability after storage at low temperatures. Two PRP samples were prepared from the blood centrifugation of six healthy ponies and were intended for cryopreservation at -196 ° C or cooling at 4 ° C. Each prepared PRP sample was divided into four aliquots: fresh, DMSO, trehalose or without cryoprotectant. The fresh samples were evaluated for platelet count, determination of mean platelet volume (MVP), platelet concentration in relation to whole blood and quantification of transforming growth factor beta 1 (TGF-β1). The cryopreserved and cooled samples were stored for 14 days and then submitted to the same laboratory tests. The number of platelets and platelet concentrations were similar between fresh and cooled samples with or without cryoprotectant, but were higher in fresh samples than in cryopreserved samples. An increase in MPV was observed in all stored samples, indicating that platelets suffered lesions during storage. The release of TGF-β1 was higher in fresh PRP than in cold or cryopreserved PRP, with no difference between samples containing or not cryoprotectants. The addition of DMSO and trehalose cryoprotectants did not prevent platelet storage lesions. On the other hand, both the cooled and cryopreserved samples released significant amounts of TGF-β1.

INTRODUÇÃO: Entre os tratamentos existentes para o transtorno obsessivocompulsivo (TOC) os mais eficazes são o farmacológico, com inibidores de recaptura de serotonina (IRS; inibidores seletivos de recaptura de serotonina [ISRS] e clomipramina), e o comportamental, baseado na técnica de exposição com prevenção de resposta (EPR). Ambas apresentam eficácia semelhante para os sintomas obsessivo-compulsivos e estudos demonstram que a EPR produz modificações neurobiológicas semelhantes às provocadas pelo tratamento com ISRS. Essas evidências sugerem que a resposta clínica à EPR está diretamente relacionada a um aumento da biodisponibilidade de 5HT no cérebro. A concentração de 5HT no sangue periférico é uma medida representativa do sistema serotonérgico central, e é utilizada como um marcador biológico indireto. O objetivo deste estudo foi comparar a concentração serotonérgica (basal e variação em 8 semanas) e a resposta à terapia comportamental baseada em EPR. MÉTODOS: Foram incluídos nesse estudo 30 pacientes com diagnóstico operacional de TOC. Destes, 29 iniciaram o tratamento, 27 chegaram até a quarta semana e 24 completaram o protocolo padronizado com 16 sessões (8 semanas) de terapia. As dosagens de 5-HT foram feitas nas semanas 0 e 8 e as avaliações clínicas pelas escalas Y-BOCS e CGI, bem como medidas de sintomas secundários (depressão, ansiedade e incapacidade) nas semanas 0, 4 e 8. RESULTADOS: Encontrou-se correlação positiva entre a concentração basal de 5HT e a resposta clínica em quatro semanas de EPR (p<0,05).Observouse maior concentração basal e maior redução em 8 semanas nos níveis de 5HT em pacientes respondedores comparados aos não respondedores. Entretanto não houve significância estatística. CONCLUSÃO: Na amostra estudada os dados sugerem que a alta concentração basal de 5-HT é um marcador biológico preditor de boa resposta clínica a quatro semanas de EPR. Amostras maiores talvez mostrassem a concentração de 5-HT no plasma rico em plaquetas como um preditor de resposta a 8 semanas de EPR. Protocolos com amostras maiores e com grupos controle são necessários para confirmar esses achados / INTRODUCTION: Both gold standard treatments for obsessive-compulsive disorder (pharmacotherapy with serotonin reuptake inhibitors, and behavioral with exposure and response prevention [ERP]) are equally effective. Studies have demonstrated similar neurobiological changes elicited by these different treatments in OCD patients. These findings are suggestive that the clinical response to ERP is directly related to an increase of the 5-HT concentration in the brain. The platelet 5-HT concentration have been shown as a representative measure of central serotonergic system and used as a biological marker of the synaptic transmition. OBJECTIVE: To compare the platelet 5-HT concentration (basal and variation in 8 weeks) and the clinical response to ERP treatment. METHODS: 30 OCD patients were included and 29 started the treatment. 27 patients compleated at list 4 weeks and 24 completed all 8 weeks (16 sesions) ERP protocol. Patients had the basal and final (after 8 weeks) platelet 5-HT concentrations dosed and the clinical response measured by Y-BOCS, CGI and measures of secondary symptoms as well (depression, anxiety and disability). RESULTS: Data shows a positive correlation between the basal concentration of 5-HT and the 4 week ERP response (p<0,05). There were higher basal concentration and reduction in 8 weeks of platelet 5-HT concentration in the responders group compared with non-responders. Nevertheless, this differences was not significant (p>0,05). CONCLUSION: In the studied sample data suggest that high basal 5-HT platelet concentration is a biologic predictor of fast onset (4 weeks) of clinical response to ERP. Probably larger samples would show the basal 5-HT platelet concentration as a predictor of 8 weeks ERP outcome. Controlled trials are needed to confirm these findings

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-25 / INTRODUÇÃO: O plasma rico em plaquetas (PRP) é a concentração autóloga de plaquetas em pequeno volume de plasma, obtido por centrifugação do sangue total com anticoagulante, sendo considerada importante fonte de fatores de crescimento (FC). A sua utilização enfatiza a regeneração tecidual. OBJETIVO: Obter o plasma rico em plaquetas (PRP) por meio de centrífuga de bancada. MÉTODOS: Foram coletos 40ml de sangue total de oito voluntários, para 72 testes, divididos em três grupos (grupos controle, de uma centrifugação, e de duas centrifugações), com variação da força de centrifugação em 200, 400 e 800g. RESULTADOS: Verificou-se que a concentração, no Grupo Duas Centrifugações, apresentou média inferior ao mensurado no Grupo Controle. O Grupo Uma Centrifugação, com a força centrifuga relativa de 200g, apresentou os maiores valores de contagem (417.750/μl), bem como as maiores concentrações de plaquetas (99,03%), que equivaleu a 1,99 vezes o aumento no número das plaquetas do GCt, enquanto que forças de centrifugação superiores foram insuficientes para o enriquecimento. CONCLUSÃO: Obteve-se o plasma rico em plaquetas (PRP), a partir de centrifuga de bancada, com maior concentração na força de 200g. / BACKGROUND: Platelet-rich plasma is an autologous concentration of autologous platelets in a small volume of plasma, obtained by centrifugation of the whole blood, and have been considered to be a rich source of growth factors. OBJECTIVE: Establish a method to prepare a platelet-rich plasma by centrifugation. METHODS: In this study 40 ml from the whole blood was obtained from eight volunteers, and seventy-two tests were performed in three groups (control, one spin, and two spins), changing the intensity performing from 200, 400 and 800g, to establish the method that achieves the optimal platelet enrichment and concentration. RESULTS: The optimal platelet concentration enrichment obtained with the group of two spins was inferior than values was obtained with the group of one spin. In those groups of one spin the enrichment of 99.03% of the platelet concentration was obtained with the relative centrifuge force of 200g. CONCLUSION: Platelet-rich plasma with high platelets counts can be prepared using the method of centrifugation, with highest concentration with the force of 200g. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações