Nos últimos anos, o plantio mecanizado da cana-de-açúcar vem sendo cada vez mais utilizado no Brasil. Tal sistema possui menor custo sobre o convencional e viabiliza o plantio durante o ano todo. Entretanto, a maior quantidade de ferimentos nas mudas colhidas mecanicamente e a realização de plantios em períodos frios e com umidade do solo inadequada têm aumentado a incidência da podridão abacaxi, doença causada pelo fungo Thielaviopsis paradoxa. Áreas onde esta doença é problemática apresentam muitas falhas, exigindo, em alguns casos, replantio. Thielaviopsis paradoxa penetra nas mudas através de ferimentos, o que é importante em cana-de-açúcar, uma vez que os colmos são seccionados durante o plantio. Medidas que estimulem a brotação rápida ou que protejam os ferimentos das mudas produzem excelentes resultados no controle da doença. Com o objetivo de avaliar o controle da podridão abacaxi da cana-de-açúcar por meio da pulverização de fungicidas em mudas no sulco de plantio, foram instalados quatro experimentos, sendo dois em casa de vegetação e dois no campo. Para os ensaios em casa de vegetação, utilizou-se um substrato esterilizado, composto por uma mistura de solo, areia e esterco de gado. Uma suspensão de T. paradoxa na concentração de 103 esporos/g de substrato foi incorporada dois dias antes do plantio. As avaliações foram realizadas em um período de 45 dias, determinando-se o número de plantas, a velocidade de brotação, a biomassa da parte aérea e de raízes, e a severidade da doença. No campo, um dos experimentos foi realizado sem a inoculação do patógeno, com a colheita das mudas e plantio mecanizados. No outro experimento, uma suspensão do fungo foi inoculada com pulverizador costal manual na concentração de 9 x 104 esporos/m2, e o plantio foi realizado manualmente. As avaliações foram realizadas em um período de 13 meses, determinando-se o número de plantas, a velocidade de brotação, a biomassa da parte aérea, o teor de açúcares totais recuperáveis e o rendimento. Nos quatro experimentos, os fungicidas foram pulverizados sobre as mudas imediatamente após o plantio, com pulverizador costal pressurizado com CO2. Os dados das avaliações foram submetidos à análise de variância e à análise de contrastes ortogonais. Além disso, os tratamentos foram comparados com a testemunha através do Teste de Dunnett a 5% de significância. Os resultados mostraram que a pulverização de fungicidas nas mudas controlou a podridão abacaxi da cana-de-açúcar, sendo que os efeitos dessa prática foram mais positivos em condições mais favoráveis à manifestação da doença. Os fungicidas Azoxistrobina + Ciproconazol; Azoxistrobina + Fluodioxonil + Metalaxil- M; Propiconazol; Piraclostrobina e Piraclostrobina + Epoxiconazol foram eficientes no controle da podridão abacaxi da cana-de-açúcar. Por outro lado, Carboxina + Tiram, comercialmente utilizado com essa finalidade, não foi efetivo em controlar a doença, tanto em casa de vegetação como no campo. / In the last few years, mechanized planting of sugarcane has been frequently used in Brazil. This system has a lower cost than the conventional system and enables planting throughout the year. However, the higher quantity of injuries in seedpieces harvested mechanically and the planting at low temperatures and with inadequate soil humidity have increased the incidence of pineapple disease, caused by the fungus Thielaviopsis paradoxa. Areas where this disease is problematic present stand reduction, requiring, in some cases, replanting. Thielaviopsis paradoxa penetrates the seedpieces through wounds caused due to stalk sectioning during planting. Measures which increase shoot emergence or which protect seedpieces wounds produce excellent results in the disease control. In order to assess control of pineapple disease of sugarcane through in-furrow fungicide spray application on seedpieces, four experiments were installed, two in greenhouse and two under field conditions. For the experiments in the greenhouse, substrate consisting of a mixture of soil, sand and cattle manure was used. Suspension of T. paradoxa at the concentration of 103 spores/g of substrate was incorporated two days before planting. Evaluations were done in a period of 45 days assessing number of shoots, germination speed, biomass of shoots and roots, and disease severity. In the field, one of the experiments was performed with no inoculation of the pathogen, and the seedpieces harvesting and planting were mechanized. For the other experiment, a suspension of T. paradoxa spores at the concentration of 9 x 104 spores/m2 was sprayed in the plots and the planting was performed manually. Evaluations were done in a period of 13 months assessing number of shoots, germination speed, biomass of shoots, total recoverable sugar content and yield. In the four experiments, fungicides were sprayed on seedpieces immediately after the planting with a CO2 pressurized sprayer. Data were submitted to analysis of variance and to analysis of orthogonal contrasts. Moreover, treatments were compared to control by Dunnett´s Test at 5% of significance. Results showed that in-furrow spray application on seedpieces controlled pineapple disease of sugarcane, and the effects of this practice were more positive under more favorable conditions for the disease manifestation. The fungicides Azoxystrobin + Cyproconazole; Azoxystrobin + Fluodioxonil + Metalaxyl-M; Propiconazole; Pyraclostrobin and Pyraclostrobin + Epoxiconazole were efficient for controlling pineapple disease of sugarcane. On the other hand, Carboxin + Thiram, commercially used for this purpose, was neither effective in the greenhouse nor in the field to control the disease.

A Podridão Mole, causada por espécies do gênero Rhizopus, sendo a espécie R. stolonifer a mais comum, é uma das principais doenças pós-colheita de pêssegos. O desenvolvimento do patógeno prejudica a comercialização de pêssegos em mercados atacadistas e varejistas, consistindo em uma das principais causas de rejeição de frutos e da redução do preço de venda da caixa de pêssego. O fungo pode causar podridões em outros frutos e vegetais com níveis similares de perdas. Essa doença está intimamente relacionada à presença de danos físicos ou mecânicos, exemplificados pela presença de injúrias na superfície do fruto, já que Rhizopus é conhecido por penetrar seus hospedeiros via ferimentos. Poucos trabalhos investigaram os mecanismos de penetração do patógeno em pêssegos. Alguns concluíram que o fungo não produz enzimas que auxiliem na penetração direta de frutos. No entanto, observações da ocorrência da doença em pêssegos aparentemente não injuriados sugerem que a penetração direta pode ocorrer. A principal medida de controle da doença consiste no manejo cuidadoso dos frutos justamente para evitar ferimentos. O objetivo desse trabalho consistiu em avaliar os mecanismos de penetração de R. stolonifer em pêssegos, injuriados ou intactos, e caracterizar o progresso espaço-temporal da Podridão Mole nesses frutos. A atividade de enzimas esterases produzidas pelo fungo foi avaliada qualitativamente, a partir da reação de discos de micélio e suspensões de esporos do patógeno em água ou solução nutritiva em diferentes períodos de incubação (0, 4 e 8 horas) com substrato indoxil acetato, para observação da produção de cristais de coloração azul índigo. Os tratamentos que continham discos de micélio e suspensão de esporos em solução nutritiva, após 8 horas de incubação, adquiriram tonalidades mais escuras de azul, devido à formação de cristais oriundos da reação entre enzimas esterases e substrato. Avaliações ao espectrofotômetro foram conduzidas para determinar a quantidade de enzimas produzidas por R. stolonifer quando cultivado em meios com glicose ou cutina, como únicas fontes de carbono. O patógeno foi capaz de crescer em ambos os meios e observou-se maior atividade de enzimas esterases quando o patógeno foi cultivado em meio com cutina. Solução de diisopropil fluorofosfato, inibidor de enzimas cutinases, foi depositada sobre frutos e impediu a manifestação da Podridão Mole em pêssegos inoculados com suspensão de esporos do fungo em solução nutritiva. Pêssegos feridos ou não foram inoculados com suspensão de esporos de R. stolonifer em água e solução nutritiva para estudo do progresso espaço-temporal da Podridão Mole. Frutos sadios colocados próximos a frutos inoculados artificialmente apresentaram sintomas da doença, a qual se disseminou com mesma taxa de progresso em todos os tratamentos. O processo infeccioso de R. stolonifer em pêssegos e nectarinas também foi observado em microscopia óptica e eletrônica de varredura e verificou-se a penetração direta de tecidos intactos pelo fungo. Os resultados obtidos nesse trabalho demonstraram que R. stolonifer é capaz de penetrar diretamente frutos intactos através de esporos germinados em aporte nutritivo externo ao fruto e estolões miceliais. Essas estruturas produzem enzimas esterases, principalmente cutinases, que auxiliam no processo infeccioso. / Soft Rot, caused by Rhizopus stolonifer, is one of the main postharvest diseases on peaches. The pathogen development is prejudicial to the stone fruit commercialization in wholesale and retail markets and the disease can cause reduction in the price of peaches, being one of the main causes of fruit rejection. The pathogen has been responsible for causing rots in other types of fruit and vegetables, with similar level of losses. The disease is related to the occurrence of mechanical and physical damages and the presence of injuries on the fruit surface contributes to the infection by Rhizopus, which is known as a strictly wound parasite. Few studies have investigated the mechanisms of the pathogen penetration in peaches. Some have concluded that the fungus does not produce enzymes that assist in the direct penetration of fruit. However, observations of disease occurrence on apparently uninjured peaches suggest that direct penetration can occur. Careful management to avoid injuries on the fruit is the most important disease control measure. The objective of this research was to evaluate the penetration mechanisms of R. stolonifer on injured or uninjured peaches and characterize the spatio-temporal progress of Soft Rot on these fruit. To determine the esterase enzymes activity, produced by the pathogen, micelial discs and spore suspensions of R. stolonifer on water or nutrient solution in different incubation periods (0, 4 and 8 hours) were added to indoxyl acetate solution, to observe the presence of crystals of indigo blue color. The treatments with micelial discs or spore suspensions on nutrient solution, after 8 hours of incubation, showed darker shade of blue, because of the production of crystals from the reaction between the esterase enzymes and the indoxyl acetate. Spectrophotometer evaluations were carried out to determine the amount of enzymes produced by R. stolonifer when it was grown on culture media with glucose or cutin, as sole carbon sources. The pathogen was able to grow on both media and higher esterase activity was observed when the fungus was grown on cutin media. Diisopropyl fluorophosphate solution, a cutinase inhibitor, was placed over the fruit and prevented Soft Rot development on peaches inoculated with the fungus spore suspension on nutrient solution. Injured or uninjured peaches were inoculated with R. stolonifer spore suspensions on water or nutrient solution to study the spatiotemporal progress of Soft Rot. Healthy fruit placed next to artificially inoculated peaches showed symptoms of the disease, which has spread with the same rate of progress in all treatments. The infectious process of R. stolonifer on peaches and nectarines was also studied on optic and scanning electron microscopy and direct penetration of intact tissues by the fungus was observed. The results of this work showed that R. stolonifer is capable of direct penetration on uninjured peaches by spores germinated on external nutrient support and by micelial stolons. These structures produce esterase enzymes, especially cutinase, that help in the infectious process.

A Podridão Floral dos Citros (PFC), causada por Colletotrichum acutatum, foi observada em 1956/57 em Belize e relatada posteriormente em 1979. Neste mesmo ano a PFC também foi relatada no Brasil e, desde então, tem causado prejuízos todas às vezes nas quais o período de florescimento coincide com a ocorrência de chuvas. O controle da PFC é realizado principalmente por meio de pulverizações preventivas com fungicidas. O uso indiscriminado de fungicidas com o mesmo modo de ação pode selecionar indivíduos resistentes. O conhecimento da epidemiologia da PFC pode gerar informações precisas a serem utilizadas na elaboração de estratégias de manejo no campo, bem como melhorar a eficiência do controle químico da doença. Assim, foi proposto este trabalho com os objetivos de: i) caracterizar as dinâmicas temporal e espacial da PFC em pomares jovens de laranja doce; ii) avaliar in vitro a sensibilidade de isolados de C. acutatum a fungicidas e; iii) avaliar o efeito de diferentes fungicidas, intervalos de aplicação e programas de pulverização no controle da PFC no campo. A dinâmica temporal e espacial da PFC foi caracterizada em três talhões de 2 a 4 anos de idade com 500 plantas cada. Crescimento explosivo da PFC foi observado com altas taxas diárias de progresso (r) descritas pelo modelo logístico de 0,55 após chuvas e período de molhamento foliar prolongado. A PFC apresentou padrão espacial variável, inicialmente aleatório e posteriormente moderadamente agregado, indicando existir contribuição de outras fontes para a disseminação do patógeno além das chuvas com ventos. Não houve correlação entre incidência de sintomas em flores e de cálices persistentes. Os cálices persistentes não são importantes fontes de inóculo. In vitro, ensaios de sensibilidade a fungicidas demonstraram que isolados de C. acutatum coletados no Estado de São Paulo em 2008 não apresentaram resistência aos fungicidas difenoconazole e carbendazim. Em casa-de-vegetação, os fungicidas carbendazim e a mistura (trifloxistrobina + tebuconazole) apresentaram efeito significativo quando aplicados em pré-inoculação e 24 h pós-inoculação de C. acutatum, mas somente a mistura foi efetiva 48 h após a inoculação. Nos experimentos de controle químico no campo, esta mistura fungicida foi mais eficiente que os demais produtos para o controle da PFC em áreas com alta incidência da doença. Quando a proporção de flores sintomáticas atinge 100%, a redução na produção será em torno de 70% em pomares adultos de laranja Pera. Pulverizações frequentes podem ser requeridas durante todo o período de florescimento para o controle da doença, embora sejam mais importantes quando ocorrem chuvas em dois ou mais dias consecutivos com prolongamento do molhamento foliar, principalmente durante a expansão das pétalas e abertura das flores. / Postbloom fruit drop (PFD), caused by Colletotrichum acutatum, was firstly observed in Belize during 1956-1957 and subsequently reported in 1979. In the same year the disease was also reported in Brazil. PFD causes severe damage when bloom period coincides with rains. The disease is controlled primarily by preventive fungicide sprays. The repeated use of fungicides with the same mode of action can select resistant individuals. The knowledge of PFD epidemiology can generate precise information to develop efficient control strategies and improve the efficacy of chemical control. Thus, this study aimed to: i) characterize the temporal and spatial dynamics of PFD in young sweet orange orchards, ii) evaluate in vitro the baseline sensitivity of C. acutatum to fungicides and, iii) evaluate the efficacy of different fungicides, spray intervals and fungicide application schedule for PFD control. The temporal and spatial PFD-dynamics was characterized in three 2-to-4-year-old orchards with 500 trees each. High daily disease progress rates (r) described by the logistic model of 0.55 were observed after rainfall and prolonged leaf wetness. The spatial pattern of diseased trees varied considerably, initially at random and latter moderately aggregated, suggesting the contribution by other pathogen spread mechanisms, beside rain with wind. There was no correlation between the incidence of diseased flowers and the incidence of persistent calyxes. These calyxes are not important sources of inoculum. In vitro, assays demonstrated that the isolates of C. acutatum from São Paulo State were not resistant to fungicides difenoconazol and carbendazim. In the greenhouse, carbendazim and the trifloxystrobin + tebuconazol mixture showed significant effects when applied prior to inoculation or 24 h after inoculation, however only the mixture was effective 48 h after inoculation. In the field, the fungicide mixture was more effective for PFD control in orchards with high disease incidence. When the proportion of symptomatic flowers reaches 100%, yield reduction can be as high as 70% in Pera sweet orange trees. Frequent sprays may be required during bloom period to control the disease, although sprays were more important when two or more rainy days with prolonged leaf wetness occurs, especially during petals expansion and flowers opening.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The sudden death syndrome (SDS), caused by species of Fusarium, is a disease difficult to control and there are no management techniques and resistant cultivars that give long-term positive results. This study aimed to assess populations of Fusarium spp. and Trichoderma spp. associated to eight soybean genotypes, cultivated under no tillage; to determine if the control of Fusarium varies among isolates of Trichoderma; to identify isolates of Fusarium spp. obtained from different genotypes, and to determine their toxicity and pathogenicity to two genotypes of soybean. Soil and roots were collected from experimental plots located at the Fundação Centro de Experimentação e Pesquisa (FUNDACEP), obtaining isolates of Fusarium spp. and Trichoderma spp. There were no differences in the population of Fusarium spp. in plants with symptoms of SDS among the different genotypes. For Trichoderma spp. there was a significant difference among genotypes from plants with and without symptoms of SDS and the genotype CEPS 06006 RR had the biggest population of the antagonist. In the direct confrontation test, eight isolates of Trichoderma spp. obtained the highest score (1) in relation to the control of Fusarium spp. and isolates of Trichoderma spp. from soil of areas with the SDS symptom were more aggressive. Nine species of Fusarium: F. avenaceum, F. solani, F. equiseti, F. Acuminatum, F. kyushuense, F. graminum, F. subglutinans, F. verticillioides and F. lateritium were identified. All isolates promoted internerval chlorosis, necrosis and death of seedlings in the toxicity test. In the pathogenicity test in plants inoculated with the pathogen there was an increase in leaves and roots dry weight and in the number of pods, indicating that there may be species specificity of the species studied in relation to genotype. / A Podridão Vermelha da Raiz da soja (PVR), causada por espécies de Fusarium, é uma doença de difícil controle, não existindo técnicas de manejo e cultivares resistentes que tenham resultados positivos a longo prazo. Assim, este trabalho objetivou quantificar populações de Fusarium spp. e Trichoderma spp. associadas à oito genótipos de soja, cultivados em sistema plantio direto, observar se o biocontrole de Fusarium spp. difere entre isolados de Trichoderma spp., identificar isolados de Fusarium spp. obtidos de diferentes genótipos e verificar sua toxicidade e patogenicidade a dois genótipos de soja. Amostras de solo e raízes foram coletadas em parcelas experimentais na Fundação Centro de Experimentação e Pesquisa (FUNDACEP), obtendo-se isolados de Fusarium spp. e Trichoderma spp. Não houve diferença na população de Fusarium spp. em plantas com sintomas de PVR entre os diferentes genótipos. Para Trichoderma spp., houve diferença entre as populações nos genótipos de plantas com e sem sintomas de PVR, tendo o genótipo CEPS 06006 RR apresentado maior população do antagonista. No teste de confronto direto, oito isolados de Trichoderma spp. obtiveram a melhor nota (um), em relação a Fusarium spp. e isolados de Trichoderma spp. oriundos de solo em áreas com o sintoma de PVR foram mais eficientes. Foram identificadas nove espécies de Fusarium: F. avenaceum, F. solani, F. equiseti, F. acuminatum, F. kyushuense, F. graminum, F. subglutinans, F. verticillioides e F. lateritium. Todos os isolados de Fusarium spp. provocaram clorose internerval, necrose e morte de plântulas no teste de toxicidade. No teste de patogenicidade, em plantas inoculadas com o patógeno houve aumento na massa seca de parte aérea e de raízes, no número de vagens, indicando que pode haver especificidade das espécies estudadas em relação ao genótipo.

A migração da citricultura paulista das regiões norte e central para a região sudoeste, tem submetido a cultura à clima mais chuvoso e, consequentemente, à maior ocorrência da podridão floral dos citros (PFC). A PFC, cujo agente causal é C. acutatum, induz a abscisão de frutos jovens e pode causar perdas de 100%. Alguns componentes do monociclo dessa doença ainda encontram-se indefinidos. Os processos de sobrevivência e colonização têm sido sustentados por evidências oriundas de experimentos não conclusivos. Até o momento, os métodos de detecção não têm sido eficazes para detectar o patógeno em folhas assintomáticas de citros, além de não serem capazes de quantificá-lo. Diante dessas lacunas, esse trabalho buscou avaliar o período de sobrevivência do patógeno na superfície de folhas assintomáticas entre as floradas; verificar se o patógeno coloniza os tecidos das folhas de citros; estabelecer um método sensível para detecção e quantificação de C. acutatum e C. gloeosporioides na superfície foliar e; monitorar quantitativamente os patógenos em campos de produção de citros no Estado de São Paulo. A sobrevivência do patógeno foi avaliada em condições controladas, casa de vegetação e condições ambientais. Foi notado que o patógeno sobreviveu até sete meses em condições controladas, até dez meses em casa de vegetação e até seis meses sob condições ambientais. Chuvas regulares associadas ao molhamento foliar prolongado, auxiliaram na manutenção e sobrevivência do inóculo na superfície foliar. O processo de colonização do patógeno foi investigado por microscopia de luz, transmissão e confocal. Não foi observada colonização do patógeno em tecidos foliares. O peg de penetração proveniente dos apressórios penetrou a cutícula e ficou restrito numa camada péctica, acima da parede periclinal da epiderme. Diferentes métodos foram avaliados para a detecção e quantificação de C. acutatum e C. gloeosporioides em folhas de citros. Foi desenvolvida uma PCR em tempo real (qPCR) e uma PCR multiplex em tempo real (qPCR multiplex), ambas específicas e altamente sensíveis à detecção dos patógenos. O DNA da planta não influenciou na amplificação da qPCR. As qPCR foram muito mais sensíveis que a PCR convencional e Nested-PCR. Distintos métodos para processamento das amostras e para obtenção do DNA foram avaliados. O método do congelamento e a maceração do tecido foliar, foram os mais eficazes para o processamento da amostras e, a extração do DNA (CTAB ou Qiagen) foi melhor método de obtenção do DNA para quantificação dos patógenos. O spot e extração do DNA foram validados para a detecção dos patógenos tanto para a qPCR quanto para a qPCR multiplex. O monitoramento dos patógenos foi realizado em áreas localizadas em duas distintas regiões do Estado de São Paulo. Foi notado considerável aumento na quantidade de inóculo quando ocorreram chuvas regulares, com muitos dias com chuvas. O inóculo se concentrou no interior da copa em épocas com baixo volume de chuvas. A quantidade de inóculo de C. acutatum na área localizada em Santa Cruz do Rio Pardo foi consideravelmente maior que na área de Barretos e ambas apresentaram quantidades similares de C. gloeosporioides. / The migration of the citrus culture in São Paulo State from the northern and central regions to the south-western region submitted the culture to a wetter climate and, consequently, a higher incidence of postbloom fruit drop (PFD). PFD, whose causal agents are C. acutatum and C. gloeosporioides, induces the abscission of young fruits and can causes loss of 100% of the culture. Some monocycle components of this disease are still undetermined. The survival and colonization processes are supported by evidences from inconclusive experiments. To date, the detection methods have not been effective in detecting and quantifying the pathogen in asymptomatic citrus leaves. This study aimed to assess the survival period of C. acutatum on the surface of asymptomatic leaves between the flowering seasons, to verify whether the pathogen colonizes the tissues of citrus leaves of citrus, to establish a sensitive method for detection and quantification of C. acutatum and C. gloeosporioides on leaves surface and to monitor quantitatively the pathogens in citrus orchards in the State of São Paulo in Brazil. The survival of the pathogen was evaluated under controlled conditions, in a greenhouse and in environmental conditions. The pathogen survived for seven months under controlled conditions, ten months in a greenhouse and six months under environmental conditions. Regular rainfall associated with the prolonged leaf wetness favored the maintenance and survival of the inoculum on the leaf surface. The colonization process of the pathogen was investigated by light, confocal and transmission microscopy. Pathogen colonization was not observed on leaf tissues. The penetration peg from appressoria penetrated the cuticle and was restricted in a pectic layer on the periclinal epidermal wall. Different methods were evaluated for the detection and quantification of C. acutatum and C. gloeosporioides on leaves of citrus plants. It was developed a realtime PCR (qPCR) and a real-time multiplex PCR (qPCR multiplex), both specific and highly sensitive in the detection of pathogens. The plant DNA did not influence the qPCR amplification. The qPCRs were much more sensitive than the conventional PCR and Nested-PCR. Different methods for sample processing and for DNA extraction were evaluated. The freezing and maceration methods of foliar tissue were the most effective for sample processing and the DNA extraction (CTAB or Qiagen) was best method for extracting the DNA for pathogen quantification. The Spot and DNA extraction were validated for the detection of pathogens for both qPCR and multiplex qPCR. The monitoring of pathogens was carried out in two separate regions of the State of São Paulo in Brazil. It was observed a considerable increase in the number of inoculum when regular rainfall occurred, with many rainy days. The inoculum was concentrated within the tree canopy in seasons with low volume of rainfall. The number of inoculum of C. acutatum the at region of Santa Cruz do Rio Pardo was considerably higher than in the region of Barretos and both showed similar amounts of C. gloeosporioides.

Em cana-de-açúcar, a colonização do caule por fungos oportunistas, como Fusarium verticillioides e Colletotrichum falcatum, geralmente ocorre após o ataque da lagarta de Diatraea saccharalis. As plantas respondem ao ataque de insetos pela indução e acúmulo de um grande conjunto de proteínas de defesa. Dois homólogos de uma proteína da cevada induzida por ferimento (BARWIN) são conhecidos em cana-de-açúcar, SUGARWIN1 e SUGARWIN2 (sugarcane wound-inducible proteins). Embora a função da proteína BARWIN não tenha sido totalmente estabelecida, propriedades antifúngicas foram descritas para uma série de homólogos. As SUGARWINs estão localizadas no retículo endoplasmático e no espaço extracelular. A indução de seus transcritos ocorre em resposta ao ferimento mecânico, ataque de D. saccharalis e tratamento com metil jasmonato, mas não pela infecção de patógenos. Os transcritos de SUGARWIN são induzidos tardiamente em cana-de-açúcar e são restritos aos locais onde ocorrem os danos. Apesar de transcritos de SUGARWIN1 e 2 serem altamente induzidos pelo ataque de D. saccharalis a proteína em si não possui efeito sobre o desenvolvimento do inseto. Neste trabalho demonstra-se que SUGARWIN2 recombinante causa alterações na morfologia de F. verticillioides e C. falcatum, produzindo aumento da vacuolização, vários pontos de fratura, liberação de material intracelular e formando calos na região dos séptos, culminando na morte destes fungos por apoptose. A SUGARWIN2 recombinante não apesenta efeito em outros fungos, como Saccharomyces cerevisiae e Aspergillus nidulans. Os resultados sugerem que, no curso da evolução genes de SUGARWIN foram recrutados pela cana-de-açúcar para se proteger de fungos oportunistas que, geralmente, penetram na cana após o dano causado pelo inseto. / In sugarcane fields, colonization of the stalk by opportunistic fungi, like Fusarium verticillioides and Colletotrichum falcatum, usually occurs after the attack of Diatraea saccharalis caterpillars. Plants respond to insect attack by inducing and accumulating a large set of defense proteins. Two homologues of a barley wound-inducible protein (BARWIN) are known in sugarcane, SUGARWIN1 and SUGARWIN2 (sugarcane wound-inducible proteins). Although BARWIN protein function has not been fully established, antifungal properties have been described for a number of homologues. The SUGARWINs are located in the endoplasmic reticulum and in the extracellular space of sugarcane plants. The induction of SUGARWIN transcripts occurs in response to mechanical wounding, D. saccharalis damage, and methyl jasmonate treatment but not to pathogen infection. SUGARWIN transcripts are late induced and are restricted to the wound site. Although SUGARWIN transcripts increased after insect attack, the protein itself did not show any effect on insect development. This work shows that recombinant SUGARWIN2 altered F. verticillioides and C. falcatum morphology increasing vacuolization, points of fractures, leaking of intracellular material, leading to the apoptosis of the germlings. Recombinant SUGARWIN2 do not show any effect in other fungus like Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus nidulans. The results suggest that, in the course of evolution, SUGARWIN genes were recruited by sugarcane to protect the plant from fungi that typically penetrate the plant stalk after insect damage.

Nas últimas décadas, a podridão vermelha das raízes da soja (PVR), causada pelo Fusarium solani f.sp. glycines (FSG), tornou-se uma doença séria nas regiões brasileiras onde já foi constatada, sendo a utilização de cultivares resistentes um componente fundamental de um sistema integrado de controle. Este trabalho teve por objetivo pesquisar estratégias de seleção de genótipos resistentes a PVR. Várias metodologias foram implementadas: avanço de progênies até a geração F7:2 e seleção em campo infestado, de progênies selecionadas em F2. Avaliou-se o cruzamento IAC 4 x Conquista em casa de vegetação (geração F3:2) e em campo infestado (gerações F3:2, F4:2 e F5:2), através de estudo de estabilidade e adaptabilidade das progênies. As metodologias de infecção em vasos de barro e bandejas de isopor em casa de vegetação foram comparadas para melhorar a eficiência de seleção; também foi feita análise de repetibilidade dos sintomas foliares da PVR, para otimização do número de avaliações necessárias para classificar o genótipo de soja quanto à reação ao FSG. Cultivares brasileiras de soja foram avaliadas em campo infestado. Em campo, as plantas foram avaliadas no estádio R5-6, com notas variando de 1 (ausência de sintomas) a 5 (100% da raiz principal com sintomas). Em casa de vegetação, as plantas foram avaliadas aos 35 dias pós-semeadura para sintomas radiculares e da parte aérea. Houve eficiência da seleção para resistência a PVR tanto em F2 (sintomas foliares em casa de vegetação) quanto em F7:2 (sintomas radiculares em campo naturalmente infestado). A seleção praticada nas gerações intermediárias também foi eficiente para aumentar a produtividade de grãos das progênies. Para o cruzamento IAC 4 x Conquista nas gerações F3:2, F4:2 e F5:2 em campo naturalmente infestado e na F3:2 em casa de vegetação, a metodologia de Annicchiarico possibilitou a seleção de genótipos com maior estabilidade e adaptabilidade para os diferentes ambientes; com o estudo genético destas gerações, demonstrou que há efeitos gênicos aditivos e dominantes no controle genético da PVR. Além disso, constatou-se que os genes responsáveis pela resistência estão dispersos nos genitores, provavelmente agrupados em blocos gênicos. A presença de dominância indica que a seleção deve ser postergada para gerações com maior homozigose (linhagem pura); esta idéia foi reforçada pela baixa herdabilidade ao nível de plantas. O uso de bandejas de isopor foi significativamente mais eficiente do que vasos de barro para inoculação de FSG em casa de vegetação. Pela análise de repetibilidade, detectou-se que quatro avaliações foram suficientes para discriminar se o genótipo era realmente suscetível ao FSG. A correlação da geração F3:2 (IAC 4 x Conquista) entre campo infestado e casa de vegetação foi praticamente nula; no entanto, 54% das progênies selecionadas em campo também foram selecionadas em casa de vegetação. A seleção de genótipos superiores para resistência ao FSG não é tarefa fácil, mas pode ser aprimorada pelo uso conjugado de metodologias suplementares que aumentem a eficiência de seleção. / During the last decades, soybean sudden death syndrome (SDS), caused by Fusarium solani f.sp. glycines (FSG), has become a serious disease in the regions where it was encountered. The use of resistant soybean cultivars has been an important component of an integrated management system. The aim of this work was to research selection strategies of SDS-resistant genotypes. A number of methodologies were used: self pollination up to generation F7:2 and progeny selection in infested field of selected F2. The crossing IAC 4 x Conquista was studied in greenhouse (generation F3:2) and in a naturally infested field (generations F3:2, F4:2 and F5:2), where the progeny stability and adaptability study was carried out. The methodologies of infection in clay pots and polystyrene trays in greenhouse were compared to improve selection efficiency. An analysis of the repeatability of foliar SDS symptoms was also performed in order to optimize the number of evaluations needed to classify a soybean genotypes reaction to FSG. Brazilian soybean cultivars were evaluated in a naturally infested field, where plants were evaluated at stage R5-6 with scores varying from 1 (absence of symptoms) to 5 (main root 100% symptoms). In the greenhouse, the plants were evaluated 35 days after sowing for root symptoms, while the leaf symptoms was only evaluated after the appearance of symptoms. The selection done in F2 (leaf symptoms in greenhouse) as well as F7:2 (root symptoms in infested field) for FSG were efficient. The selections performed in intermediary generations were efficient in increasing the grain yield of the progeny. Studies of the F3:2, F4:2 and F5:2 generations of the IAC 4 x Conquista cross in an infested field and F3:2 in greenhouse, enabled through Annicchiaricos methodology, the selection of genotypes with greater stability and adaptability to different environments. The genetic study of these generations demonstrated there are additive and dominant genetic effects on the genetic control of SDS. Moreover, it was noted that the genes responsible for resistance are dispersed on the genitors, probably grouped into genic blocks. The presence of dominance indicates that the selection should be passed onto generations with greater homozygosity. There is also a clear indication that breeders should work with progeny lines in order to assist selection due to the low inheritability at the individual plant level. For the experiments with different FSG inoculation methodologies (clay pots and polystyrene trays) in greenhouse the use of trays was significantly more efficient; by studying the repeatability analysis, it was found that four evaluations is enough to discriminate if the genotype is really susceptible to FSG. The correlation of the F3:2 generation (IAC 4 x Conquista) between infested field and greenhouse was practically null; however, 54% of the progeny selected in the field were selected in greenhouse. As observed, the selection of superior genotypes for FSG resistance is not an easy task, but may be improved by means of new methodologies and the conjugated use of methodologies which improve selection efficiency.

Agricultores e técnicos envolvidos na citricultura orgânica procuram desenvolver sistemas de produção com maior atividade microbiana no solo. Dessa maneira, esperam obter benefícios dos processos que ocorrem no solo, entre eles, o controle natural de pragas e doenças. Porém, são poucos os estudos sobre a influência desse tipo de manejo sobre a microbiota do solo, em especial sobre os fungos micorrízicos arbusculares (FMAs) e o patógeno Phytophthora parasitica. Os objetivos dessa tese foram: avaliar a colonização micorrízica e conhecer a diversidade de FMAs nos sistemas de produção convencional e orgânico de citros; avaliar a aplicação de benomyl e da radiação γ na obtenção de testemunhas não micorrizadas para estudo de interação de comunidade de FMAs nativos e P. parasitica; verificar a capacidade indutora de resistência local e sistêmica dos FMAs nativos a P. parasitica; estudar atividade da quitinase no sistema radicular de limão 'Cravo' colonizado por fungos micorrízicos nativos. Foram realizadas amostragens em dois sistemas de produção de citros em São Paulo, um convencional e um orgânico. A riqueza e a diversidade de espécies de FMAs foram maiores no manejo orgânico. No entanto, a porcentagem de colonização micorrízica nas plantas no campo não variou com o tipo de manejo. Em casa de vegetação, experimentos com plantas de limão 'Cravo' (Citrus limonia) mostraram que a radiação γ foi mais adequada que a aplicação de benomyl na obtenção de testemunhas não micorrizadas para estudo de interação P. parasitica- FMAs nativos de agroecossistemas de produção de laranja. Também em casa de vegetação, foi realizado um experimento com raiz dividida de plantas de limão 'Cravo'. Não foi possível avaliar a capacidade indutora de resistência dos fungos micorrízicos arbusculares nativos porque não houve desenvolvimento da podridão de raízes nas plantas de limão 'Cravo' após a infestação com P. parasitica. Discute-se a interação de patógenos de raiz do solo natural e os FMAs nativos porque o solo natural dos sistemas de produção convencional e orgânico promoveram diferentes respostas de crescimento local e sistêmico das raízes das plantas micorrizadas. A atividade de quitinase foi igual nas raízes de plantas micorrizadas e não micorrrizadas cultivadas em solos dos sistemas de produção convencional e orgânico. Porém, a associação micorrízica aumentou localmente a proteína total nas raízes das plantas. / Farmers and technicians involved with organic citriculture try to develop systems with high microbial activity in soil. In this way, they expect to obtain benefits from processes that occur in soil, as natural control of pests and diseases. However, there are few studies about the influence of this type of management on soil microbiota, specially on the arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and the pathogen Phytophthora parasitica. The objectives of this thesis were: to evaluate mycorrhizal colonization and diversity of AMF in citrus conventional and organic farming; to evaluate benomyl application and γ radiation to obtain non-mycorrhizal controls for study of interaction between indigenous AMF and P. parasitica; to verify local and systemic capacity of indigenous AMF to induce resistance against P. parasitica; to study chitinase activity in roots of 'Rangpur' lime colonized by indigenous AMF. Samplings were carried out in two citrus systems in São Paulo, one conventional and one organic farming. The richness and the diversity of AMF species were higher in the organic farming. In greenhouse, experiments with 'Rangpur' lime (Citrus limonia) showed that γ radiation was better than benomyl to obtain non-mycorrhizal control for studies of interaction between P. parasitica-indigenous AMF from orange agroecosystems. In greenhouse also, a split root experiment with 'Rangpur' lime was carried out. It was not possible to evaluate the indigenous AMF capacity to induce resistance because no root rot developed in 'Rangpur' lime plants after inoculation with P. parasitica. We discuss the interaction between root pathogens in natural soil and indigenous AMF because natural soil from conventional e organic farming promoted different local and systemic root growth responses in mycorrhizal plants. Chitinase activity was similar in roots of mycorrhizal and non-mycorrhizal plants grown in conventional and organic farming soils. However, mycorhizal association increased local protein content in roots.

A partir da década de 1990, em função da valorização da fruta no mercado interno e do aumento das exportações da fruta in natura, observou-se aumento da importância da lima ácida Tahiti (Citrus latifolia (Yu. Tanaka) Tanaka) sob os aspectos econômico e social no agronegócio brasileiro. A diversidade genética da espécie é pequena e os cultivos comerciais são baseados, predominantemente, nos clones IAC 5 e Quebra-galho. Atualmente, existem novos clones para a diversificação de copas. Entretanto, a baixa disponibilidade de informações sobre os mesmos dificulta a diversificação dos pomares. Além da baixa diversificação de copas, grande parte dos pomares utilizam o limão Cravo (Citrus limonia Osbeck) como porta-enxerto, por induzir maior produtividade e tolerância à deficiência hídrica. Por outro lado, a combinação dos clones IAC 5 e Quebra-galho com o limoeiro Cravo tem levado à produção de plantas de porte elevado e baixa longevidade devido às elevadas taxas de mortalidade causadas por gomose de Phytophthora (Phytophthora spp.) e à presença de estirpes severas do vírus da tristeza dos citros e do viróide da exocorte. Dessa forma, este trabalho avaliou o desempenho horticultural de clones de limeira ácida Tahiti enxertados em citrumelo Swingle [Citrus paradisi Macfad. cv. Duncan x Poncirus trifoliata (L.) Raf.] em Bebedouro, SP. Tendo em vista as restrições do uso comercial do citrumelo Swingle em ambientes que apresentam deficiência hídrica prolongada, os clones foram avaliados em duas áreas distintas, diferenciadas pelo uso da irrigação. Foram avaliados os clones IAC 5, IAC 5-1, CNPMF/EECB, CNPMF 2000 e CNPMF 2001. O experimento foi instalado em março de 2005 e as avaliações foram realizadas entre 2007 e 2011. Foram avaliados o crescimento vegetativo, produção, eficiência produtiva, qualidade dos frutos, fotossíntese e potencial da água na folha em ambas as áreas. Adicionalmente, na área não irrigada, a tolerância à deficiência hídrica, condutância estomática e transpiração foram avaliados visando à seleção de clones mais adequados para cultivos não irrigados. A análise de variância dos dados obtidos na área irrigada e não irrigada foi realizada conjuntamente e as médias foram comparadas pelo teste de Duncan (P<0,05). O clone CNPMF/EECB apresentou maior produção acumulada de frutos e maior eficiência produtiva, independentemente da condição de cultivo. Sob cultivo irrigado, o clone CNPMF/EECB apresentou maior produção de frutos na entressafra. Os clones IAC 5-1, CNPMF/EECB, CNPMF 2000 e CNPMF 2001 apresentaram maior crescimento vegetativo em relação ao clone IAC 5, independentemente da condição de cultivo. O clone IAC 5-1 induziu maior porcentagem de frutos adequados à exportação, maior tolerância à deficiência hídrica e maior suscetibilidade à podridão floral dos citros. A irrigação induziu maior crescimento vegetativo, maior precocidade de produção, maior produção de frutos na safra e entressafra, maior eficiência produtiva, maior rendimento de suco, maior acidez e maior porcentagem de frutos exportáveis. / Since the 90s, Tahiti lime (Citrus latifolia (Yu. Tanaka) Tanaka) has increased its importance in the Brazilian agribusiness with economic and social impacts, due to higher fruit value recorded both on domestic and international markets. Genetic diversity of this species is restricted, and in Brazil, most of the commercial orchards are predominantly based on IAC 5 and Quebra-galho selections. Currently, new selections are available for scion diversification. Nonetheless, technical information about these materials is very limited, thus restricting the studies on scion diversification. Besides the low diversification of scions, most of the orchards are established onto the Rangpur lime (Citrus limonia Osbeck), because of higher yield and tolerance to water deficit induced by this rootstock. IAC 5 and Quebra-galho selections grafted onto the Rangpur lime result in large-sized plants of low longevity, because of their high susceptibility to Phytophthora gummosis (Phytophthora spp.), and the endemic presence of severe Citrus Tristeza Virus strains and the Exocortis Citrus Viroid. Restricted scion and rootstocks diversification increase the risks associated with outbreaks of new and more severe diseases and pests that threaten the whole Tahiti lime production chain. This study evaluated the horticultural performance of five Tahiti\' lime selections grafted on Swingle citrumelo [Citrus paradisi Macfad. cv. Duncan x Poncirus trifoliata (L.) Raf.], in Bebedouro, São Paulo State, Brazil. Due to constraints for the commercial use of Swingle citrumelo as rootstock in environments under prolonged water deficit conditions, two trials were conducted for evaluation of Tahiti lime selections under irrigated and non irrigated conditions. The following Tahiti lime selections were studied: IAC 5, IAC 5-1, CNPMF/EECB, CNPMF 2000 and CNPMF 2001. The experiment was installed in March 2005 and the evaluations were performed between 2007 and 2011, involving the following variables: plant growth, yield, yield efficiency, fruit quality, photosynthesis rate and leaf water potential in both irrigated and non-irrigated trials. In addition, plant water deficit tolerance, stomatal conductance, transpiration rate and water use efficiency were evaluated in the non-irrigated trial for selecting suitable selections for non-irrigated plantings. Data obtained in the irrigated and non-irrigated trials were submitted to individual and joint analyses of variance, and the comparisons among means were performed by Duncan test (P<0.05). The CNPMF/EECB selection had larger cumulative fruit yield and yield efficiency both in the irrigated and non-irrigated plantings. In the irrigated trial, the CNPMF/EECB selection presented larger offseason fruit yield. The IAC 5-1, CNPMF/EECB, CNPMF 2000 and CNPMF 2001 selections had larger tree size than the IAC 5 selection, both in the irrigated and non-irrigated plantings. The IAC 5-1 selection induced larger percentage of fresh fruit for export under irrigated and non-irrigated plantings, conferring higher water deficit tolerance and lower tolerance to postbloom fruit drop. Irrigation increased plant growth, early bearing, main-season and off-season fruit production, yield efficiency, juice percentage, juice acidity and the percentage of fresh fruit classified for export.

A alface é a principal hortaliça folhosa do Brasil. A podridão negra das raízes causada pelo fungo Thielaviopsis basicola vem limitando o cultivo da alface americana ´Lucy Brown`. Os objetivos desta pesquisa foram: determinar a reação das cultivares comerciais de alface à T. basicola; elucidar a herança da resistência de alface ao patógeno e selecionar alface americana resistente ao patógeno a partir de variantes da ‘Lucy Brown`. Inocularam-se 37 cultivares de alface usando o isolado patogênico L1 de T. basicola, na fase juvenil. Para todos os ensaios a avaliação foi feita na fase juvenil através de uma escala de notas de acordo com a severidade da doença de 1 (ausência de sintomas) a 5 (mais de 90% das raízes severamente afetadas). A seleção de progênies resistentes ao patógeno foi feita a partir de variantes da ´Lucy Brown` pelo método genealógico usando um critério qualitativo para uniformidade, qualidade da cabeça e adaptação para o cultivo nas condições de verão. As cultivares do tipo crespa e batávia foram resistentes ao patógeno. As do tipo lisa e americana apresentaram variação inter-varietal quanto à reação a T. basicola. A herança da reação de alface a T. basicola foi devido a um gene dominante, designado de Tb. As progênies elites S4 derivadas da alface ´Lucy Brown` foram resistentes ao patógeno, uniformes e estáveis para o mérito hortícola no cultivo de verão. / Lettuce is the major leafy crop in Brazil. Lettuce black root rot (LBRR) caused by Thielaviopsis basicola is one the most limiting disease for the crisphead lettuce cv. Lucy Brown. Research focuses were: cultivars reaction to the pathogen; resistance inheritance elucidation and selections of LBRR resistant variants from cv. Lucy Brown. About 37 cultivars were screened using L1 pathogenic strain of T. basicola at juvenile stage. The reaction reading was made for all trials at juvenile stage using a severity disease scale from 1 (absence of symptoms) to 5 (with more than 90% of root rots). Selection of LBRR variants derived from Lucy Brown was made by pedigree selection and using selective criteria of line uniformity, heading qualities and adaptation for summer season slotting planting. Leaf lettuce Grand Rapids and Batavia types were resistant. There was inter-varietal occurrence of crisphead and butterhead resistance and other susceptible to LBRR. The inheritance to LBRR resistance in lettuce was due to a dominant gene designated as Tb. Elite LBRR resistant S4 lines derived from the crisphead cv. Lucy Brown were identified by their uniformity and stability for summer crop adaptation.