Nos últimos anos a incidência da clorose letal, causada pelo Zucchini lethal chlorosis virus (ZLCV) vem aumentando em plantios de cucurbitáceas e preocupando produtores pelos danos causados na produção. Devido às poucas informações sobre esta virose em cucurbitáceas, somente algumas medidas profiláticas de controle têm sido recomendadas para minimizar a incidência da doença. A resistência genética, seja da forma tradicional ou por meio da transgenia, é considerada a melhor e mais eficiente forma de controle de viroses em geral. Sendo assim essa proposta de pesquisa visou caracterizar a resistência da moranga Exposição ao ZLCV, para gerar informações que auxiliem programas de melhoramento vegetal e também estudar a possível interferência do Papaya ringspot virus type W (PRSV-W) e do Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) na resistência das plantas ao ZLCV. A infecção pelo ZLCV e sua movimentação na planta foram avaliadas por PTA-ELISA, RT-PCR, impressão de tecido (Tissue printing) e teste de recuperação biológica. Os resultados mostraram que o vírus pôde ser detectado no local da infecção, mas não foi detectado além do ponto de inoculação. Estes resultados sugerem que a moranga Exposição apresenta uma resistência à invasão sistêmica de longa distância ao ZLCV. Para verificar a possível interferência dos potyvirus na resistência da moranga Exposição ao ZLCV foram conduzidos experimentos em casa de vegetação, onde os vírus foram inoculados em mistura nas plantas teste e experimentos em campo onde os potyvirus foram pré-inoculados e a infecção pelo ZLCV ocorreu naturalmente pelo vetor. Em nenhum dos casos foi verificada interferência dos potyvirus na resistência das plantas de moranga ao ZLCV. / The occurrence of lethal chlorosis in the past years, caused by Zucchini lethal chlorosis virus (ZLCV), has become common in cucurbit crops, which concerns producers in terms of yield losses. Due to the lack of information about this virus disease, only few prophylactic precautions have been recommended in order to minimize the occurrence of the disease. The genetic resistance, either via conventional means or via transgenesis, is considered the most efficient way so far to control virus diseases. With that in mind, the present work aimed to characterize the genetic resistance of winter squash Exposição against ZLCV in order to generate important information for cucurbit breeding programs, as well as to investigate the potential effect of Papaya ringspot virus type W (PRSV-W) and Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) in winter squash Exposição resistance against ZLCV. The ZLCV infection and its systemic mobility inside the plant were evaluated by PTA-ELISA, RT-PCR, tissue printing and biological recovery test. The results have shown that ZLCV can be detected at the infection spot, but was not detected beyond the inoculation point. These results suggest that winter squah Exposição is resistant to long-distance systemic invasion of ZLCV. In order to verify the potential interference of the potyviruses on the winter squash Exposição resistance against ZLCV, experiments were carried out into greenhouse, where the viruses were inoculated together into testing plants, and also in field trials, where the potyviruses were pre-inoculated and the infection by ZLCV naturally occurred by the vector. Interference of potyviruses on the winter squash resistance was not observed via the investigation methods presented.

A Doença de Newcastle (DN) é uma enfermidade de etiologia viral e de rápido poder de disseminação. Um grande número de espécies aviárias é susceptível ao Vírus da Doença de Newcastle (VDN). Entre estas aves, o pombo doméstico (Columba livia), tem sido incriminado como hospedeiro e disseminador da DN. Este estudo foi realizado para avaliar o comportamento de pombos frente ao VDN. Foram avaliadas a patogenia da doença e a cinética da RIH de pombos submetidos à vacinação com estirpes vivas (LaSota) e a infecção experimental com estirpe patogênica (São João do Meriti) para galinhas (Gallus gallus), para avaliar os papéis desempenhados por estas como possíveis reservatórios do VDN. A resposta sorológica foi mensurada com a técnica de HI e a eliminação do genoma viral avaliada com a técnica de RT-PCR. Foi observado que as estirpes vacinas produziram títulos elevados de anticorpos, tanto nas aves vacinadas como nas sentinelas. Na infecção experimental, demonstramos que a estirpe patogênica não produziu a doença clínica em pombos, porém promoveu a formação de anticorpos, bem como a eliminação do genoma viral. Também foi comprovada a alta infectividade do agente, tendo em vista que aves sentinelas apresentaram níveis de anticorpos elevados, nos mesmos patamares das aves infectadas. / Newcastle Disease (ND), is a highly contagious disease of viral etiology and several bird species are susceptible this disease. The domestic pigeon (Columba livia), has been regarded as a host and disseminating agent of ND. Therefore, a study was carried out in order to evaluate the responses of pigeons naturally or experimentally infected with this pathogen and the possible role of these birds as potential reservoirs of NDV. The disease pathogenesis and the kinetics of the host humoral immune response were studied in pigeons subjected to vaccination with live NDV strains (LaSota) and to experimental infection with a NDV strain (São João do Meriti) that affects domestic chickens (Gallus gallus). The serological response was measured by HI and the elimination of the viral genome was evaluated by RT-PCR. Vaccine strains induced high antibody levels, both in vaccinated and in sentinel birds. Clinical signs of the disease were not induced by the pathogenic strain in experimentally infected pigeons, although there was antibody production, as well as elimination of the viral genome. The high infectivity of the agent was also confirmed, since the sentinels birds presented high antibody levels, which were similar to the levels produced by infected birds.

O objetivo deste estudo foi verificar a eficácia da Terapia Fotodinâmica (PDT) no tratamento de bolsas residuais de pacientes portadores de periodontite crônica em manutenção periodontal, através da avaliação de parâmetros clínicos e microbiológicos. Um ensaio clínico aleatório controlado duplo-cego paralelo foi conduzido para avaliar 34 pacientes com periodontite crônica, que foram submetidos ao tratamento periodontal convencional e apresentaram pelo menos quatro sítios com bolsas residuais na reavaliação. Os pacientes foram alocados em grupo teste (PDT) e grupo controle (sham) aleatoriamente. A terapia fotodinâmica foi realizada através da irrigação subgengival com azul de metileno (0,01%), e a irradiação com laser de diodo a 660nm, 90J/cm2 por 90s A intervenção foi feita no início do estudo, aos 3, 6 e 9 meses. Os parâmetros clínicos foram avaliados no início, 3, 6 e 12 meses após o tratamento. A coleta de placa subgengival foi feita antes da intervenção, uma semana após, 3, 6 e 12 meses depois. A avaliação microbiológica foi feita a partir da detecção e quantificação de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola e Aggregatibacter actinomycetemcomitans, pela reação de polimerase em cadeia em tempo real. Todos os parâmetros clínicos avaliados apresentaram melhora significativa durante o estudo, porém não houve diferença significativa entre os grupos. Em relação à análise microbiológica, não houve diferença entre os grupos em nenhum momento do estudo. Porém, houve redução significativa de T. forsythia no grupo teste aos 6 meses, e aumento significativo de P. gingivalis no mesmo grupo aos 12 meses. Dentro dos parâmetros do laser e fotossensibilizador utilizados neste estudo, a PDT não demonstrou ter efeito benéfico adicional no tratamento de bolsas periodontais residuais. / The aim of this study was to investigate the effectiveness of Photodynamic Therapy (PDT) in the treatment of residual pockets of chronic periodontitis patients in periodontal maintenance, by assessing clinical and microbiological parameters. A randomized clinical controlled double-blind parallel trial was performed to assess 34 periodontal patients, who received conventional periodontal treatment and presented residual pockets at revaluation. The patients were allocated to test (PDT) and control (sham) group randomly. The photodynamic therapy was performed by subgingival irrigation with methylene blue (0.01%), and diode laser irradiation (660nm, 90j/cm2) during 90s. The intervention was performed at baseline, 3, 6 and 9 months. The clinical parameters were evaluated at baseline, 3, 6 and 12 months. The subgingival plaque sampling was collected before intervention, a week after, 3, 6 and 12 months later. The detection and quantification of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola and Aggregatibacter actinomycetemcomitans was achieved by means of the real time polymerase chain reaction. All clinical parameters showed significant improvement during the study, but there was no significant difference between groups. The microbiological analyses showed no differences between groups in any time of study. There was a significant reduction of T. forsythia in test group at 6 months, and a significant increase of P. gingivalis in test group at 12 months. Considering the laser and photosensitizer used in this trial, PDT failed to demonstrate additional benefits in residual pockets treatment.

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-10-05T13:38:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosa_VanessaPiresda_M.pdf: 1497051 bytes, checksum: 8d777468991ab3f12abd697553a092b5 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os estabelecimentos de abate de bovinos no Brasil que realizam comércio internacional ainda encontram dificuldades quanto controle microbiológico da carne. Dentre elas, destaca-se o estufamento da embalagem da carne embalada a vácuo refrigerada, devido à contaminação por clostridios psicotróficos e psicrofílicos deteriorantes como o Clostridium estertheticum e Clostridium gasigenes. Além dos prejuízos econômicos, a contaminação causa forte impacto negativo às marcas comerciais dos produtos. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a presença de C. estertheticum e C. gasigenes em amostras ambientais e de carnes embaladas a vácuo, resfriadas, provenientes diretamente de empresas produtoras, e em carnes bovinas resfriadas embaladas a vácuo comerciais, bem como avaliar o controle destes microrganismos pela utilização de agentes sanitizantes. A relevância desta pesquisa fundamenta-se na carência de trabalhos sobre o tema, associada à particularidade dos microrganismos anaeróbios estritos que exigem para a sua detecção, isolamento e caracterização metodologias de difícil execução. A análise dos resultados globais relacionados às diferentes técnicas utilizadas para detecção e isolamento dos microrganismos revelou que, embora a técnica de detecção direta por PCR apresente uma taxa bem maior de amostras positivas (20-26 amostras) em relação às técnicas de isolamento (6-11 amostras), a utilização de ambas pode representar uma importante ferramenta para o diagnóstico da contaminação microbiana ao longo do processamento destes produtos. A presença de C. estertheticum e C. gasigenes foi observada em amostras diversas como superfícies de equipamentos, carcaças e outras, além do próprio produto final, evidenciando um elevado nível de contaminação cruzada ao longo do processamento. Em particular, destaca-se a presença dos microrganismos em equipamentos que apresentam configuração física propícia ao acúmulo de sujidades e conseqüente dificuldade de higienização, como serra elétrica, rolete para retirada de couro e evaporador de câmara fria. A utilização da técnica PCR-RFLP permitiu verificar a existência de diferentes genótipos de isolados de C. estertheticum como também a constatação do elevado nível de contaminação cruzada da carne exposta ao longo das etapas de processamento por fontes como equipamentos, carcaças e ambientes diversos. O efetivo controle dos esporos de C .estertheticum e C. gasigenes por agentes químicos pôde ser observado in vitro e os sanitizantes a base de ácido perácetico a 500 mg/L e peróxido de hidrogênio a 200 mg/L apresentaram melhor ação esporicida para C .estertheticum e C. gasigenes quando comparado ao hipoclorito de sódio a 100 mg/L por 15 minutos. Os resultados do presente trabalho colocam em evidência a variedade de fontes de contaminação cruzada às quais a carne é submetida ao longo da cadeia produtiva, e a conseqüente necessidade de programas de higienização mais rigorosos e efetivos para o controle de C. estertheticum e C. gasigenes nos matadouros-frigoríficos / Abstract: The Brazilian bovine slaughterhouses involved in international commerce are still having difficulties with the microbiological control of their meat. Amongst these difficulties, the swelling of refrigerated vacuum packed beef due to contamination with deteriorative psychrotrophic and psychrophilic clostridia, such as Clostridium estertheticum and Clostridium gasigenes, stands out. Apart from the economic damage, such contamination causes a strongly negative impact on the commercial brands of these products. The objectives of this study were to evaluate the presence of C. estertheticum and C. gasigenes in beef samples maintained at room temperature and in chilled vacuum packed beef coming directly from the manufacturing companies, as well as in commercially produced chilled vacuum packed beef, and also evaluate the control of these microorganisms using sanitizing agents. The relevance of this research is based on the lack of studies about this subject, associated with the particularity of strict anaerobic microorganisms that require isolation and characterization for detection, since such methodology is very difficult to carry out. An analysis of the overall results related to the different techniques used in the detection and isolation of these microorganisms, showed that although the PCR direct detection technique presented a much higher rate of positive samples (20-26 samples) in relation to the isolation techniques (6-11 samples), the use of both techniques could represent an important tool in the diagnosis of microbial contamination throughout the processing of this product. The presence of C. estertheticum and C. gasigeneswas observed in various samples, such as equipment surfaces, carcasses and others, apart from in the final products themselves, providing evidence of a high level of cross contamination throughout processing. In particular, the presence of these microorganisms on equipment with a physical configuration facilitating accumulation of dirt with a consequent difficulty for sanitation, such as electric saws, leather removal drums and the cold chamber evaporator, stood out. The use of the PCR-RFLP technique allowed one to verify the existence of different genotypes of the C. estertheticum isolates, as also to show a high level of cross contamination by C. estertheticum and C. gasigenes of the beef exposed to various sources of contamination, such as equipment, carcasses and various other ambiences, during processing. The effective control of the C. estertheticum and C. gasigenes spores by chemical agents could be observed in vitro using 100 mg/L sodium hypochlorite for 15 minutes, and 500 mg/L peracetic acid or 200 mg/L hydrogen peroxide for 5 minutes. The results of the present work make the variety of sources of cross contamination to which the meat is submitted throughout processing, evident, and the consequent need for more rigorous and effective hygienization programs to control C. estertheticum and C. gasigenes in slaughterhouses-refrigerated packing houses / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

A interface do implante com o componente protético geralmente apresenta lacunas que servem de nichos para a colonização bacteriana. A proposta deste estudo é verificar a eficácia do dimetacrilato na vedação desta interface. Foram utilizados 20 implantes ósseos Bone Level® Straumann, indicados para reabilitação protética unitária cimentada. Os pilares protéticos foram instalados nos grupos controle e experimental, adicionando-se o dimetacrilato à interface da conexão protética. Foram realizadas uma coleta inicial e uma coleta ao final do período de 90 dias no interior de cada implante, e através da técnica de PCR quantitativo foi analisada a infiltração e a detecção das espécies bacterianas Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Tannerella forsythia. No Grupo Controle, todas as amostras apresentaram quantificação de microrganismos, confirmando infiltração bacteriana. No Grupo Experimental, apenas 30% das amostras apresentou quantificação após o período estudado. Assim, a ausência de bactérias no Grupo Experimental foi associada ao tratamento com o dimetacrilato para o período. Quando considerada a presença de pelo menos uma das bactérias específicas estudadas nas amostras, a diferença também foi estatisticamente significante. Entretanto, mais estudos devem ser desenvolvidos a fim de verificar se a vedação será eficiente por períodos mais longos. / The implant/prosthetic component interface often has gaps that serve as niches for bacterial colonization. The purpose of this study is to verify the effectiveness sealing this interface with dimethacrylate. Twenty two Straumann ® Bone Level implants was installed in areas with indication for single cemented prosthetic rehabilitation. The prosthetic components were installed in the control and experimental groups following the fabricant instructions, and adding the dimethacrylate in the interface of the experimental group. An initial collection and a second collection at the end of 90 days within each implant were performed, and after that, the technique of quantitative PCR was developed to analyze whether there was infiltration and detection of four bacterial species: Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Tannerella forsythia. In the control group, all samples showed quantification of microorganisms, confirming bacterial percolation. In the control group, only 30% of the samples submitted quantification after the study period. Thus, the absence of bacteria in the experimental group was associated with the treatment for the period dimethacrylate. Considering the presence of at least one specific bacteria in the samples studied, the difference was also statistically significant. However, more studies should be conducted to verify that the seal will be effective for longer periods.

Os micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas) são organismos pleomórficos, epicelulares, gram negativos que infectam a superfície dos eritrócitos de diversas espécies. Devido ao fato de ser incultivável em meios de cultura tradicionais, o diagnóstico é baseado em técnicas moleculares. Em cães, a infecção pelos hemoplasmas pode causar anemia hemolítica na fase aguda, enquanto na doença crônica os sinais são inaparentes, sendo que a imunodepressão e a esplenectomia podem desencadear a doença aguda. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a prevalência dos hemoplasmas em cães submetidos a atendimento clínico e cirúrgico no Hospital Veterinário da Universidade de Passo Fundo (HV-UPF), identificar os fatores de risco para infecçao pelos hemoplasmas e as condições clínicas na infecção natural. Para isso, foram selecionadas amostras de sangue com EDTA submetidas com propósito diagnóstico ao Laboratório de Análises Clínicas do HV-UPF. Após a verificação do controle da extração (PCR para o gene GAPDH), as amostras foram encaminhadas ao Department of Comparative Pathobiology, Purdue University (IN, USA) para as análises moleculares. Foi realizada reação em cadeia da polimerase (PCR) para os hemoplasmas felinos (‘Candidatus Mycoplasma turicencis’, ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’) e caninos (Mycoplasma haemocanis e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’). Ao total, foram analisadas 347 amostras, sendo que 16 foram negativas para o controle GAPDH e excluídas do estudo. A prevalência para hemoplasma foi de 6,4% (21/331) sendo 5,1% (17/331) para Mycoplasma haemocanis e 1,8% (6/331) para um organismo geneticamente semelhante ao hemoplasma felino ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’. Não foram encontradas amostras positivas para ‘Candidatus Mycoplasma turicencis’ e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’. Os cães positivos para hemoplasmas tinham como fatores de risco a presença de ectoparasitas (carrapatos e/ou pulgas), idade avançada e habitavam em casa. Embora tenha sido identificada a presença de correlação entre as neoplasias e feridas causadas por brigas com outros cães e a infecção pelos hemoplasmas, tais resultados foram atribuídos a uma influência da idade e a presença de ectoparasitas. Não houve variações hematológicas e bioquímicas em decorrência da infecção pelo Mycoplasma haemocanis. Refere-se, no presente estudo, o primeiro estudo relacionando a freqüência da infecção pelos hemoplasmas em cães no Brasil. / The hemotropic mycoplasmas (haemoplasmas) are pleomorphic epicellular and gramnegative organisms that do not grow in conventional culture media. The organisms infect the red blood cell surface of several species and nowadays the diagnosis is based on molecular techniques. In dogs, the acute infection causes severe hemolytic anemia, while in the chronic disease the clinical signs are unapparent. In addition splenectomy or immunosuppression may result in the acute disease. The aims of the present study were to evaluate the prevalence of haemoplasmas in dogs that were submitted to clinical or chirurgical procedures at the Veterinary Teaching Hospital of the University of Passo Fundo (UPF-HV), to identify the risk factors for infection and the clinical conditions of haemoplasma natural infection. EDTA blood samples that were submitted for diagnosis purpose at the Laboratório de Análises Clínicas of the HV-UPF were randomly selected and clinical data were obtained from the hospital database. After DNA extraction and the internal control, the samples were sent to the Department of Comparative Pathobiology at the Purdue University (IN, USA), School of Veterinary Medicine, for molecular analysis. A polymerase chain reaction (PCR) for feline haemoplasmas ('Candidatus Mycoplasma turicencis' and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum') and canine haemoplasmas (Mycoplasma haemocanis and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum') was performed. A total of 347 samples were analyzed, while 16 were negative for the control GAPDH and excluded from the study. The total prevalence was 6.4% (21/331), 5.1% (17/331) for Mycoplasma Haemocanis and 1.8% (6/331) for an organism genetically similar to feline 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' and no samples were found positive to 'Candidatus Mycoplasma turicencis' and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum'. The haemoplasma positive dogs lived at private homes, are old and were in contact with ectoparasites (ticks and/or fleas). Although it was identified a positive correlation between neoplasic disease, wounds caused by dog fights and the haemoplasma infection, these results were attributed to the influence of age and the vector. Hematological and biochemical variations were not identified at Mycoplasma haemocanis positive samples. This is the first study frequency of haemoplasma infection in dogs in Brazil.

Os micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas) são organismos pleomórficos, epicelulares, gram negativos que infectam a superfície dos eritrócitos de diversas espécies. Devido ao fato de ser incultivável em meios de cultura tradicionais, o diagnóstico é baseado em técnicas moleculares. Em cães, a infecção pelos hemoplasmas pode causar anemia hemolítica na fase aguda, enquanto na doença crônica os sinais são inaparentes, sendo que a imunodepressão e a esplenectomia podem desencadear a doença aguda. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a prevalência dos hemoplasmas em cães submetidos a atendimento clínico e cirúrgico no Hospital Veterinário da Universidade de Passo Fundo (HV-UPF), identificar os fatores de risco para infecçao pelos hemoplasmas e as condições clínicas na infecção natural. Para isso, foram selecionadas amostras de sangue com EDTA submetidas com propósito diagnóstico ao Laboratório de Análises Clínicas do HV-UPF. Após a verificação do controle da extração (PCR para o gene GAPDH), as amostras foram encaminhadas ao Department of Comparative Pathobiology, Purdue University (IN, USA) para as análises moleculares. Foi realizada reação em cadeia da polimerase (PCR) para os hemoplasmas felinos (‘Candidatus Mycoplasma turicencis’, ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’) e caninos (Mycoplasma haemocanis e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’). Ao total, foram analisadas 347 amostras, sendo que 16 foram negativas para o controle GAPDH e excluídas do estudo. A prevalência para hemoplasma foi de 6,4% (21/331) sendo 5,1% (17/331) para Mycoplasma haemocanis e 1,8% (6/331) para um organismo geneticamente semelhante ao hemoplasma felino ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’. Não foram encontradas amostras positivas para ‘Candidatus Mycoplasma turicencis’ e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’. Os cães positivos para hemoplasmas tinham como fatores de risco a presença de ectoparasitas (carrapatos e/ou pulgas), idade avançada e habitavam em casa. Embora tenha sido identificada a presença de correlação entre as neoplasias e feridas causadas por brigas com outros cães e a infecção pelos hemoplasmas, tais resultados foram atribuídos a uma influência da idade e a presença de ectoparasitas. Não houve variações hematológicas e bioquímicas em decorrência da infecção pelo Mycoplasma haemocanis. Refere-se, no presente estudo, o primeiro estudo relacionando a freqüência da infecção pelos hemoplasmas em cães no Brasil. / The hemotropic mycoplasmas (haemoplasmas) are pleomorphic epicellular and gramnegative organisms that do not grow in conventional culture media. The organisms infect the red blood cell surface of several species and nowadays the diagnosis is based on molecular techniques. In dogs, the acute infection causes severe hemolytic anemia, while in the chronic disease the clinical signs are unapparent. In addition splenectomy or immunosuppression may result in the acute disease. The aims of the present study were to evaluate the prevalence of haemoplasmas in dogs that were submitted to clinical or chirurgical procedures at the Veterinary Teaching Hospital of the University of Passo Fundo (UPF-HV), to identify the risk factors for infection and the clinical conditions of haemoplasma natural infection. EDTA blood samples that were submitted for diagnosis purpose at the Laboratório de Análises Clínicas of the HV-UPF were randomly selected and clinical data were obtained from the hospital database. After DNA extraction and the internal control, the samples were sent to the Department of Comparative Pathobiology at the Purdue University (IN, USA), School of Veterinary Medicine, for molecular analysis. A polymerase chain reaction (PCR) for feline haemoplasmas ('Candidatus Mycoplasma turicencis' and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum') and canine haemoplasmas (Mycoplasma haemocanis and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum') was performed. A total of 347 samples were analyzed, while 16 were negative for the control GAPDH and excluded from the study. The total prevalence was 6.4% (21/331), 5.1% (17/331) for Mycoplasma Haemocanis and 1.8% (6/331) for an organism genetically similar to feline 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' and no samples were found positive to 'Candidatus Mycoplasma turicencis' and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum'. The haemoplasma positive dogs lived at private homes, are old and were in contact with ectoparasites (ticks and/or fleas). Although it was identified a positive correlation between neoplasic disease, wounds caused by dog fights and the haemoplasma infection, these results were attributed to the influence of age and the vector. Hematological and biochemical variations were not identified at Mycoplasma haemocanis positive samples. This is the first study frequency of haemoplasma infection in dogs in Brazil.

Os micoplasmas hemotróficos (hemoplasmas) são organismos pleomórficos, epicelulares, gram negativos que infectam a superfície dos eritrócitos de diversas espécies. Devido ao fato de ser incultivável em meios de cultura tradicionais, o diagnóstico é baseado em técnicas moleculares. Em cães, a infecção pelos hemoplasmas pode causar anemia hemolítica na fase aguda, enquanto na doença crônica os sinais são inaparentes, sendo que a imunodepressão e a esplenectomia podem desencadear a doença aguda. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a prevalência dos hemoplasmas em cães submetidos a atendimento clínico e cirúrgico no Hospital Veterinário da Universidade de Passo Fundo (HV-UPF), identificar os fatores de risco para infecçao pelos hemoplasmas e as condições clínicas na infecção natural. Para isso, foram selecionadas amostras de sangue com EDTA submetidas com propósito diagnóstico ao Laboratório de Análises Clínicas do HV-UPF. Após a verificação do controle da extração (PCR para o gene GAPDH), as amostras foram encaminhadas ao Department of Comparative Pathobiology, Purdue University (IN, USA) para as análises moleculares. Foi realizada reação em cadeia da polimerase (PCR) para os hemoplasmas felinos (‘Candidatus Mycoplasma turicencis’, ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’) e caninos (Mycoplasma haemocanis e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’). Ao total, foram analisadas 347 amostras, sendo que 16 foram negativas para o controle GAPDH e excluídas do estudo. A prevalência para hemoplasma foi de 6,4% (21/331) sendo 5,1% (17/331) para Mycoplasma haemocanis e 1,8% (6/331) para um organismo geneticamente semelhante ao hemoplasma felino ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum’. Não foram encontradas amostras positivas para ‘Candidatus Mycoplasma turicencis’ e ‘Candidatus Mycoplasma haematoparvum’. Os cães positivos para hemoplasmas tinham como fatores de risco a presença de ectoparasitas (carrapatos e/ou pulgas), idade avançada e habitavam em casa. Embora tenha sido identificada a presença de correlação entre as neoplasias e feridas causadas por brigas com outros cães e a infecção pelos hemoplasmas, tais resultados foram atribuídos a uma influência da idade e a presença de ectoparasitas. Não houve variações hematológicas e bioquímicas em decorrência da infecção pelo Mycoplasma haemocanis. Refere-se, no presente estudo, o primeiro estudo relacionando a freqüência da infecção pelos hemoplasmas em cães no Brasil. / The hemotropic mycoplasmas (haemoplasmas) are pleomorphic epicellular and gramnegative organisms that do not grow in conventional culture media. The organisms infect the red blood cell surface of several species and nowadays the diagnosis is based on molecular techniques. In dogs, the acute infection causes severe hemolytic anemia, while in the chronic disease the clinical signs are unapparent. In addition splenectomy or immunosuppression may result in the acute disease. The aims of the present study were to evaluate the prevalence of haemoplasmas in dogs that were submitted to clinical or chirurgical procedures at the Veterinary Teaching Hospital of the University of Passo Fundo (UPF-HV), to identify the risk factors for infection and the clinical conditions of haemoplasma natural infection. EDTA blood samples that were submitted for diagnosis purpose at the Laboratório de Análises Clínicas of the HV-UPF were randomly selected and clinical data were obtained from the hospital database. After DNA extraction and the internal control, the samples were sent to the Department of Comparative Pathobiology at the Purdue University (IN, USA), School of Veterinary Medicine, for molecular analysis. A polymerase chain reaction (PCR) for feline haemoplasmas ('Candidatus Mycoplasma turicencis' and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum') and canine haemoplasmas (Mycoplasma haemocanis and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum') was performed. A total of 347 samples were analyzed, while 16 were negative for the control GAPDH and excluded from the study. The total prevalence was 6.4% (21/331), 5.1% (17/331) for Mycoplasma Haemocanis and 1.8% (6/331) for an organism genetically similar to feline 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' and no samples were found positive to 'Candidatus Mycoplasma turicencis' and 'Candidatus Mycoplasma haematoparvum'. The haemoplasma positive dogs lived at private homes, are old and were in contact with ectoparasites (ticks and/or fleas). Although it was identified a positive correlation between neoplasic disease, wounds caused by dog fights and the haemoplasma infection, these results were attributed to the influence of age and the vector. Hematological and biochemical variations were not identified at Mycoplasma haemocanis positive samples. This is the first study frequency of haemoplasma infection in dogs in Brazil.

Orientador: Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:46:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_MariaSileudaMoreirade_D.pdf: 898114 bytes, checksum: f78729283b9082f15ea5bb30829a113b (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O diagnóstico da candidemia é importante para a imediata iniciação da terapia antifúngica. Duzentos e vinte e cinco pacientes com pelo menos 15 dias de internação em unidades de alto risco do Hospital de Clínicas da UNICAMP foram acompanhados prospectivamente durante o período de novembro de 2000 a dezembro de 2002. Hemoculturas positivas para Candida foram consideradas como padrão ouro no diagnóstico da candidemia. Foi realizado o teste da Reação de Polimerização em Cadeia ¿ PCR, utilizando-se o sangue total dos pacientes e os resultados obtidos com o teste de PCR foram comparados com os resultados do teste de hemocultura, realizada rotineiramente na detecção da candidemia através do sistema automatizado BactAlert®. O DNA foi extraído e amplificado com o uso do par de iniciadores ITS4 e ITS5 e os produtos de PCR foram seqüenciados para a identificação das espécies de Candida. As variáveis associadas com o desenvolvimento da candidemia diagnosticada por hemocultura também foram avaliadas nos pacientes. A taxa de mortalidade geral do estudo foi de 26,2% e a mortalidade entre os pacientes com candidemia e sem candidemia foi de 41,9% e 22,5% respectivamente (p=0,009). A sensibilidade e a especificidade do teste de PCR foi de 72,1% e 91,2% respectivamente. Os valores preditivos positivos e negativos foram de 65,9% e 93,2% respectivamente. A regressão logística da análise multivariada mostrou que o uso de nutrição parenteral (p<0,0001), sonda vesical de demora (p=0,0177), quimioterapia (p=0,0246) e corticóides (p=0,0283) foram as variá veis significativas associadas com o desenvolvimento da candidemia. A técnica de PCR seguida do sequenciamento do DNA foi uma ferramenta útil no diagnóstico da candidemia / Abstract: The diagnosis of candidemia is important for prompt initiation of antifungal therapy. Two hundred and twenty-five patients with high risk for candidemia who had blood cultures drawn and were hospitalized more than 15 days were prospectively followed-up in a two-year period. Whole-blood cultures by automated BactAlert® system and PCR were used to detect candidemia in all patients hospitalized for more than 15 days in high-risk areas. DNA was extracted and amplified using ITS5 and ITS4 base pair primers and the PCR products were sequenced for identification of Candida spp. Positive blood culture for Candida was considered the gold standard for candidemia diagnosis. Variables associated with the development of candidemia diagnosed by positive blood culture were also evaluated in the patients. The overall mortality of the patients was 26.1% and the mortality rate in candidemic and non-candidemic patients was 41.9% and 22.5%, respectively (p=0.009). PCR sensitivity and specificity were 72.1% and 91.2%, respectively. Positive and negative predictive values were 65.9% and 93.2%, respectively. The logistic regression of the multivariate analysis showed that parenteral nutrition (p<.0001); urinary underlying catheter (p=0.0177), chemotherapy (p=0.0246) and steroids (p=0.0283) were significant variables associated with the development of candidemia. The PCR technique followed by DNA sequencing was a helpful tool, in candidemia diagnosis / Doutorado / Microbiologia / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

A interface do implante com o componente protético geralmente apresenta lacunas que servem de nichos para a colonização bacteriana. A proposta deste estudo é verificar a eficácia do dimetacrilato na vedação desta interface. Foram utilizados 20 implantes ósseos Bone Level® Straumann, indicados para reabilitação protética unitária cimentada. Os pilares protéticos foram instalados nos grupos controle e experimental, adicionando-se o dimetacrilato à interface da conexão protética. Foram realizadas uma coleta inicial e uma coleta ao final do período de 90 dias no interior de cada implante, e através da técnica de PCR quantitativo foi analisada a infiltração e a detecção das espécies bacterianas Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Tannerella forsythia. No Grupo Controle, todas as amostras apresentaram quantificação de microrganismos, confirmando infiltração bacteriana. No Grupo Experimental, apenas 30% das amostras apresentou quantificação após o período estudado. Assim, a ausência de bactérias no Grupo Experimental foi associada ao tratamento com o dimetacrilato para o período. Quando considerada a presença de pelo menos uma das bactérias específicas estudadas nas amostras, a diferença também foi estatisticamente significante. Entretanto, mais estudos devem ser desenvolvidos a fim de verificar se a vedação será eficiente por períodos mais longos. / The implant/prosthetic component interface often has gaps that serve as niches for bacterial colonization. The purpose of this study is to verify the effectiveness sealing this interface with dimethacrylate. Twenty two Straumann ® Bone Level implants was installed in areas with indication for single cemented prosthetic rehabilitation. The prosthetic components were installed in the control and experimental groups following the fabricant instructions, and adding the dimethacrylate in the interface of the experimental group. An initial collection and a second collection at the end of 90 days within each implant were performed, and after that, the technique of quantitative PCR was developed to analyze whether there was infiltration and detection of four bacterial species: Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Tannerella forsythia. In the control group, all samples showed quantification of microorganisms, confirming bacterial percolation. In the control group, only 30% of the samples submitted quantification after the study period. Thus, the absence of bacteria in the experimental group was associated with the treatment for the period dimethacrylate. Considering the presence of at least one specific bacteria in the samples studied, the difference was also statistically significant. However, more studies should be conducted to verify that the seal will be effective for longer periods.