A espennatogênese é andrógeno-dependente, porém muitos homens com problemas na espermatogênese têm níveis hormonais androgênicos normais. O mau funcionamento do receptor de andrógenos (Androgen Receptor- AR) é a possível causa deste problema. O AR é membro da família dos receptores nucleares e é codificado pelo Gene do Receptor de Andrógenos, que é de cópia única, localizado no cromossomo X e possui oito éxons. O éxon 1 contém um segmento com repetições CAG, que codifica poliglutamina. O trato glutamínico é polimórfico e varia de 1 O a 35 repetições na população normal. Alterações no segmento CAG estão envolvidas na etiologia de doenças neurodegenerativas (repetições CAG > 40) e câncer de próstata (< a 16 repetições). Mutações no Gene do AR estão correlacionadas com a síndrome de insensibilidade aos andrógenos, que varia desde a completa feminilização até homens inférteis com fenótipo normal. O objetivo do presente estudo constituiu em investigar a correlação entre o polimorfismo CAG e a prevalência de mutações nos éxons 5 e 7 e a alteração dos parâmetros seminais na população da Serra Gaúcha. O segmento CAG e a região codificadora dos éxons 5 e 7 foram amplificadas pela técnica de reação da polimerase em cadeia (PCR) e analisadas pela técnica de seqüenciamento automatizado. A média das repetições CAG do grupo de pacientes (n = 45) foi de 20,04±3,94 e a média do grupo controle (n = 45) foi 20,64±3,71. Não há significânc:ia estatística entre elas (p = O, 459). Verificamos correlação entre as repetições CAG e a morfologia seminal (Organização Mundial da Saúde) (p = O, 032; r = O, 349). Porém não se verificou associação com os demais parâmetros seminais: concentração (p =O, 134; r= O, 227), motilidade (p = 0,184; r= 0,202), morfologia (Kruger) (p = 0,213; r= 0,210). Não foram detectadas mutações nos éxons 5 e 7 nos dois grupos de estudo. Nosso estudo sugere que polimorfismo CAG e a presença de mutações nos éxons 5 e 7 não estão correlacionados com alterações seminais no grupo de estudo. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-09-22T16:54:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Rafaele Frassini.pdf: 13123487 bytes, checksum: e567348e30bcf48846f22a5b5f684ada (MD5) / Made available in DSpace on 2015-09-22T16:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Rafaele Frassini.pdf: 13123487 bytes, checksum: e567348e30bcf48846f22a5b5f684ada (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Spermatogenesis is androgen-dependent, but most men with impaired spermatogenisis have normal serum androgens leveis. Malfunction of androgen receptor (AR) may be a possible cause of this problem. AR is a member of the nuclear receptor family. It encodes a single copy gene in the X chromosome. The AR Gene is composed by eigth exons. The exon 1 contains a segment of CAG repeats, translated to polyglutamine. This glutamine repeat tract is polymorphic and its size varies from 10 to 35 in normal population. These changes have clinicai implications for human diseases: neurodegenerative disorders (CAG repeat > 40) and prostate cancer (CAG repeat < 16). Mutations in AR Gene cause a variety of defects related to androgen insensitivity, ranging from complete feminization to phenotypic males with infertilty. The aim of this study was to investigate the relationship between CAG repeat length and the prevalence of mutations in the exon:s 5 and 7 and impaired spermatogenesis in a Serra Gaucha population. The CAG repeat leng1th and the coding region of exons 5 and 7 was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by direct DNA sequencing. The mean CAG repeat length in the experimental group (n = 45) was 20.04±3.94 and in the control group (n = 45) was 20.64±3.71. No difference was found between patientes and controls in the mean values (p = 0.459). 1We found relationship between CAG repeat and morphology (World Health Organization) (p = 0.032; r = 0.349). However, the correlation was not found between CAG repeat and others seminais parameters: concentration (p = 0.134; r= 0.227), morphology (Kruger) (p = 0.213;. r= 0.210) and motility (p = 0.184; r= 0.202). No mutations were detected in the coding regions of exons 5 and 7 in both groups. Our study suggests that CAG polymorphism and mutations in the exons 5 and 7 are not likely to cause of spermatogenesis abnnormalities in our population.

Orientador: Eliana Aguiar Petri Nahas / Coorientador: Steven Witkins / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Cesar E. Fernandes / Banca: Aarão Mendes Pinto / Banca: Renata D. Jouiliano / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Vítor Fernandes Oliveira de Miranda / Banca: Eduardo Custódio Gasparino / Banca: Davi Rodrigo Rossato / Banca: Welington Luiz Araújo / Banca: Maurício Bacci Júnior / Resumo: Utricularia L. é um gênero cosmopolita, ausente apenas nos desertos e regiões polares, rico em espécies e altamente polimórfico em hábitos, morfologia polínica, seminal e das armadilhas. Muitas espécies do gênero possuem genomas miniaturizados, resultado de uma drástica redução de regiões não-codificadoras, dentre outras características moleculares peculiares. Utricularia amethystina é descrita como uma das mais polimórficas espécies do gênero, possui um histórico taxonômico complexo (mais de 30 sinonímias) e distribuição ampla entre as Américas. Seu polimorfismo se reflete no tamanho da planta, tamanho e forma da corola, e também na pigmentação floral - U. amethystina pode apresentar flores púrpuras (em diferentes tonalidades), amarelas e brancas - dentre outras características. O polimorfismo da pigmentação floral pode afetar a interação com o polinizador e o fluxo gênico entre os morfotipos, sendo por este motivo alvo de nosso interesse. Exploramos se o polimorfismo em caracteres seminais estaria relacionado aos morfotipos florais e buscamos características úteis para a taxonomia U. amethystina e espécies próximas. Também descrevemos as estratégias reprodutivas de Utricularia, com ênfase nos polinizadores e estratégia de polinização de U. amethystina. Além disso, investigamos o fluxo gênico entre os morfotipos florais utilizando diferentes regiões do DNA cloroplastidial previamente reportados como ―barcodes‖. E exploramos a evolução das transições de cor de flores na família Lentibulariaceae e dos genes relacionados à via de síntese das antocianinas, a principal classe de pigmentos presentes em flores e frutos. Identificamos caracteres seminais úteis para a taxonomia de Utricularia e observamos alto polimorfismo intraespecífico em U. amethystina. Utricularia amethystina, é na verdade um complexo de espécies, dentre as quais é possível encontrar fluxo gênico entre morfotipos ... / Abstract: Utricularia L. is a cosmopolitan genus from Lentibulariaceae and the richest genus in species among the carnivorous plants. Its species are highly polymorphic in many traits such as habit, pollen, seed and trap morphology. Many species has a compact genome resulted from the deletion of non-coding regions, and other peculiar molecular features. Utricularia amethystina is described as one of the most polymorphic species in the genus, it has a complex taxonomic history and is found across the American continents. Its polymorphism is reflected on plant height, corolla's size and shape, and floral pigmentation - U. amethystina might show many shades of purple, yellow and white flowers. However, the most remarkable trait is the polymorphism on pigmentation of flowers, because it might undermine the pollinator attraction, and by this way interrupt the gene flow among its morphotypes. With this in mind, we have surveyed the seed traits, looking for characters useful for taxonomic purposes for U. amethystina and related species. The reproductive strategies found on the genus are also described, focusing on U. amethystina and describing its pollinator. We also have investigated the gene flow among the U. amethystina morphotypes based on barcodes regions from cpDNA. Besides this, were evaluated the evolution of genes related with the transitions on pigmentation of flowers of the Lentibulariaceae. We identified useful seed characters for the genus' taxonomy. U. amethystina is a complex with distinct lineages related one each other with high support from molecular survey with cpDNA, from which only two populations from different floral phenotypes (purple and white) were clustered in all analyses. Some lineages also showed evidences for positive selection on matK gene. The pigmentation evolution showed the expected pattern with purple flowers as the ancestral state from which the transitions occurred. We also observed that the transitions are ... / Doutor

Orientador: Raquel Mantuaneli Scarel-Caminaga / Banca: Andrea Marcia Marcaccini / Banca: Ricardo Della Coletta / Banca: Carlos Rossa Junior / Banca: Joni Augusto Cirelli / Resumo: A Doença Periodontal (DP) tem caráter multifatorial, com influência de fatores como a presença de microrganismos periodontopatogênicos, reação do sistema imune, suscetibilidade genética do hospedeiro, hábito de fumar, stress e presença de doenças sistêmicas. O tecido periodontal inflamado produz várias citocinas, dentre elas a interleucina 4 (IL-4). Estudos realizados por este grupo identificaram que indivíduos carregando os polimorfismos -590(T/C), +33(T/C) e VNTR(I/D) no gene IL4 formando o haplótipo TCI/CCI são 5 vezes mais suscetíveis à DP (Odds Ratio ajustado= 5,3; 95% Intervalo Confiança = 2,2 -12,9), enquanto o haplótipo TTD/CTI conferiu proteção contra o desenvolvimento da DP, Odds Ratio ajustado= 0,18 (95% Intervalo Confiança = 0,04 - 0,88). Assim, para verificar a funcionalidade dos haplótipos no gene IL4, o objetivo deste estudo foi investigar possíveis diferenças na resposta imune frente a estímulos inflamatórios e de bactérias periodontopatogênicas em células coletadas do sangue de pacientes que carregam tais diferentes haplótipos. A funcionalidade dos referidos haplótipos no gene IL4 foi também investigada por meio da regulação da expressão do gene repórter presente em plasmídeos recombinantes construídos artificialmente (constructos). Foram coletados sangue periférico de 5 pacientes de cada haplótipo e estimulados com mediadores inflamatórios e bactérias periodontopatogênicas para se avaliar a expressão gênica (mRNA, RT-qPCR), proteínas secretadas (Multiplex) e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontal disease (PD) is multifactorial, with the influence of factors such as the presence of periodontopathogenic micro-reaction of the immune system, genetic susceptibility of the host, smoking, stress and presence of systemic diseases. The inflamed periodontal tissue produces various cytokines, among which interleukin 4 (IL- 4). Studies by this group found that subjects carrying the -590 polymorphism (T/C) +33 (T/C) and VNTR (I/D) in the IL4 gene haplotype forming the TCI/CCI are 5 times more susceptible to PD (ORadjusted= 5.3; 95% CI = 2.2 - 12.9), while the TTD/CTI haplotype conferred protection against the development of PD (ORadjusted= 0.18; 95% CI = 0.04- 0.88). So, to check the functionality of the haplotypes in the IL4 gene, the aim of this study is to investigate possible differences in the immune response against inflammatory and periodontal bacteria stimuli in collected blood cells from patients with different haplotypes. The functionality of these haplotypes in the IL4 gene will also be investigated by means of regulation of expression of the reporter gene present in the recombinant plasmids constructed artificially (constructs). Peripheral blood was collected from 5 patients of each haplotype and stimulated with inflammatory mediators and periodontal bacteria to assess the gene expression (mRNA RT-qPCR), secreted proteins (Multiplex) and intracellular proteins featuring cellular phenotypic profile (flow cytometry). Constructs containing each haplotype were ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço é uma neoplasia cujo principal fator de risco é o consumo de tabaco e/ou álcool. As infecções pelo HPV têm sido observadas nesse grupo de tumores. Os HPVs de alto risco podem induzir alterações calulares pela interação de suas proteínas E6 e E7 com as proteínas p53 e a pRb, respectivamente. As oncoproteínas são insuficientes para o desenvolvimento do fenótipo maligno, sugerindo a presença de outros cofatores, como a susceptibilidade genética. O gene TP53 possui um polimorfismo que resulta na presença de uma prolina ou de uma arginina na posição correspondente ao códon 72, no exon 4. O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel da infecção pelo HPV e do polimorfismo de TP53 na carcinogênese de cabeça e pescoço. Foram analisadas 142 amostras de indivíduos controle e 50 amostras de pacientes. Os resultados mostraram a presença do HPV em 10,6% dos controles e em 16% dos tumores. A análise da freqüência de distribuição dos genótipos relativos revelou 50% Arg/Arg, 43% Arg/Pro e 7% Pro/Pro no grupo controle e 52% Arg/Arg, 32% Arg/Pro e 16% Pro/Pro no grupo dos tumores. A análise estatística desses dados não mostrou diferença significativa na distribuição dos genótipos e dos alelos entre os dois grupos, independentemente da presença do HPV, à exceção dos indivíduos Pro/Pro, que estão associados à ausência do HPV. O alelo arginina e o genótipo Arg/Pro têm efeito protetor ao desenvolvimento dos tumores. O HPV não representa risco aos carcinomas espinocelulares de cabeça e pescoço. / Abstract: Head and neck squamous cell carcinoma is a disease associated with tobacco and/or alcohol abuse. There are evidences that oncogenic HPV may also be a risk for upper aerodigestive tract cancers. High-risk HPVs encode two early proteins, E6 and E7, that can bind to p53 and pRb, respectively, and induce its degradation or inactivation. The TP53 gene has a single polymorphism at codon 72 of exon 4 that encodes either arginine (Arg) or proline (Pro). The purpose of this study was to evaluate the role of HPV infection and p53 polymorphism in head and neck cancer. We analyzed 50 tumors as well swabs of oral mucosa from 142 control individuals by PCR technique. The prevalence of HPV in controls was 10.6% and in cancer specimens was 16%. The frequency of distribution of genotypes in controls was 50% Arg/Arg, 43% Arg/Pro and 7% Pro/Pro and in tumors was e 52% Arg/Arg, 32% Arg/Pro e 16% Pro/Pro. Contrarely to the results of some studies on cervical cancer, no association between any TP53 genotype or allele and the development of head and neck cancer was observed, regardless of HPV status, except for Pro/Pro genotype which is associated with the absence of HPV. Arginine allele and Arg/Pro genotype appear to protect against head and neck cancers. Also, the data showed that HPV infection results in no increasing risk of developing head and neck tumors.. / Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Eloiza Helena Tajara da Silva / Banca: João Manuel Grisi Candeias / Banca: Claudia Regina Bonini Domingos / Mestre

Orientador: Luis Artur Loyola Chardulo / Banca: Saulo da luz e Silva / Banca; Henrique Nunes de Oliveira / Banca: Simone Cristina Méo Niciura / Banca: Rogério Abdallah Curi / Resumo: Com o intuito de estudar o potencial de aplicação de genes candidatos na seleção animal para o melhoramento genético da qualidade de carne de bovinos Nelore (Bos indicus), o presente trabalho teve como objetivos principais: (1) Avaliar em bovinos Nelore e cruzamentos Nelore x Bos taurus a ocorrência de associações entre o SNP g.98535683A>G:BTAU7 do gene CAST e as características da carne produzida e (2) quantificar a expressão gênica e proteica da cadeia pesada da miosina em bovinos Nelore com características fenotípicas contrastantes de crescimento e maciez da carne. Para o desenvolvimento do primeiro objetivo, 500 animais foram genotipados para o SNP g.98535683A>G:BTAU7 e fenotipados para força de cisalhamento (FC), índice de fragmentação miofibrilar (MFI), área de olho de lombo (AOL), espessura de gordura subcutânea (EGS) e lipídeos totais (LIP). Associação significativa entre o SNP e a maciez da carne foi observada. O genótipo AA apresentou os melhores valores em relação a esta característica. As diferenças encontradas entre os genótipos AA e AG (AA - AG) foram de - 0,19 kg e 5,31 para FC e MFI, respectivamente. O SNP não mostrou associação significativa com AOL, EGS e LIP. Para a execução do segundo objetivo, 90 bovinos Nelore terminados em confinamento foram utilizados. Levando em consideração o peso final ao abate (PF) e a FC dos 90 animais, 24 indivíduos com características contrastantes de peso e maciez da carne foram selecionados e divididos em quatro grupos experim... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In order to study the potential of application of candidate genes in animal selection for breeding meat of Nellore cattle, this work had as main objectives: (1) Assess in Nellore cattle (Bos indicus) and crosses Nellore x Bos taurus the occurrence of associations between the g.98535683A>G:BTAU7 SNP in the CAST gene and traits of the meat produced and (2) quantify the gene and protein expression of myosin heavy chain in Nellore cattle with contrasting phenotypic traits of growth and meat tenderness. For the development of first objective, 500 animals were genotyped for the g.98535683A>G:BTAU7 SNP and phenotyped for shear force (SF), myofibrillar fragmentation index (MFI), ribeye area (RA), backfat thickness (BT) and total lipids (TL). Significant association between the SNP and meat tenderness was observed. The AA genotype showed the best values in relation to this trait. The differences found between genotypes AA and AG (AA - AG) were - 0.19 kg and 5.31 for SF and MFI, respectively. The SNP did not show significant association with RA, BT and TL. For the execution of the second aim, 90 feedlot Nellore cattle were used. Considering the final slaughter weight (FW) and the SF of the 90 animals, 24 individuals with contrasting characteristics of weight and tenderness of meat were selected and divided into four experimental groups (6 animals / group). The groups corresponded to lightweight animals with tender meat (FW = 493.50 kg and SF = 3.76 kg), lightweight animals with tough m... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Coorientador: Adriana Camargo Ferrasi / Banca: Sílvia Helena Barem Rabenhorst / Banca: Marcelo Lima Ribeiro / Resumo: Os meningiomas são os tumores mais frequentes do Sistema Nervoso Central e sua classificação é dada quanto ao tipo celular envolvido e grau de malignidade. Os intérferons (IFNs) foram inicialmente associados à resposta antiviral, contudo, estudos posteriores evidenciaram o envolvimento dessas citocinas na regulação do crescimento celular e no efeito imunomodulatório. A Interleucina 28B (IL28B), membro da família dos IFNs do tipo III, parece estar envolvida na resposta imune antiviral e antitumoral. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a frequência de variações genéticas em IL28B e IL28R1 em pacientes acometidos por Meningiomas. Sessenta paciente tratados pelo serviço de Neurocirurgia da UNESP de Botucatu/SP foram incluídos neste estudo. A análise do polimorfismo rs12979860 C/T teve significância estatística quando comparou-se a frequência genotípica da população brasileira em relação a presente casuística. Foi descrito a detecção de novas variações genéticas (missense e silent) nos genes IL28B e IL28R1 ao comparar com as respectivas sequencias referencias disponíveis em banco de dados (NCBI). Estes dados sugerem uma importante relação destas variações genéticas em relação a estrutura e função das proteínas envolvidas, entretanto um estudo mais aprofundado das consequências dessas alterações na gênese e/ou progressão dos meningiomas devem ser considerado / Abstract: Meningiomas are the most common tumors of the central nervous system, despite being benign and grow slowly, can recur in case of incomplete surgical resection. They are classified according to the cells involved and their rate of malignancy. The role of the immune system in preventing the emergence and progression of tumors has been the subject of many studies in the field of tumor immunology. Interferon (IFNs) were originally associated with antiviral response, however, subsequent studies revealed the involvement of these cytokines in the regulation of cell growth and their immunomodulatory effect.Thus, the aim of this study was to analyze the genetic variation frequency of IL28B and IL28R1 in patients with meningioma. Sixty patients treated by UNESP Neurosurgery service of Botucatu/SP were included in this study. Polymorphism rs12979860 C/T analysis showed statistical significance when compared with healthy Brazilian's genotypic frequency. New genetic variation (missense and silent) were detected in IL28B and IL28R1 through reference sequences analysis (NCBI). These data support an important relation of these genetic variations related to protein functions, however other studies of the consequences of these changes in the development and progression of meningiomas should be considered / Mestre

Orientador: Lúcia Regina Ribeiro / Coorientador: Daisy Maria Favero Salvadori / Banca: Marcos Ferreira Minicucci / Banca: Maria Rita Marques de Oliveira / Banca: Mário Sérgio Mantovani / Banca: Raquel Alves dos Santos / Resumo: A vitamina A tem importância na nutrição humana, uma vez que a sua deficiência é considerada um sério problema de saúde pública e de morbimortalidade infantil. Carotenóides pró-vitamina A, particularmente o β-caroteno proveniente de determinados alimentos de origem vegetal, são importantes fontes de vitamina A para muitas populações. Durante o processo de bioconversão os carotenóides são clivados pela enzima citossólica β-caroteno 15,15'-monooxigenase 1 (BCMO1). Dois polimorfismos (Single Nucleotide Polymorphisms - SNPs) no gene BCMO1, R267S: rs12934922 e A379V: rs7501331, foram identificados em populações de etnias Caucasiana, Japonesa e Chinesa, podendo causar redução da atividade enzimática da BCMO1 e justificar a ampla diferença inter-individual na bioconversão do β-caroteno em vitamina A. Os objetivos deste estudo foram identificar a frequência das variantes polimórficas A379V e R267S/A379V do gene BCMO1 em três grupos populacionais brasileiros (brancos, negros e japoneses) e avaliar a relação entre os SNPs com as concentrações séricas de β-caroteno e retinol entre os três diferentes grupos étnicos. Cada grupo foi composto de 100 indivíduos voluntários, com ancestralidades Europeia, Africana e Japonesa, sendo 50% do gênero feminino e 50% do gênero masculino. Foram avaliadas as concentrações séricas de β-caroteno, retinol, zinco eritrocitário, linfócitos, proteína C-reativa, α-1-glicoproteína ácida e a ingestão alimentar de Vitamina A. Amostras de saliva e esfoliado de células da mucosa oral foram coletadas para a extração de DNA com posterior genotipagem dos SNPs A379V: rs7501331 e R267S: rs12934922 por RT-PCR. As frequências das variantes alélicas R267S e A379V com, pelo menos, um alelo T para os indivíduos com ancestralidade Europeia foram 63,0% e 44,0%, respectivamente, com ancestralidade Africana, 48,0% e 18,0%, respectivamente, e com ancestralidade Japonesa, 21,0% e 27,0%,... / Abstract: Vitamin A is important in human nutrition, since deficiency is considered a serious public health and child mortality. Provitamin A carotenoids, particularly β-carotene from certain plant foods are important sources of vitamin A for many populations. During the bioconversion process carotenoids are cleaved by cytosolic enzyme β-carotene 15,15'-monooxygenase 1 (BCMO1). Two polymorphisms (Single Nucleotide Polymorphisms - SNPs) in BCMO1 gene, R267S: rs12934922 and A379V: rs7501331, were identified in ethnic populations of Caucasian, Japanese and Chinese, and it may cause reduced enzyme activity BCMO1 and justify the wide inter-individual differences in bioconversion of β-carotene into vitamin A. The aims of this study were to identify the frequency of polymorphic variants A379V and R267S/A379V of BCMO1 gene in three population groups (whites, blacks and Japanese) and evaluate the relationship between SNPs with serum β-carotene and retinol among three different ethnic groups. Each group was composed of 100 volunteers, with European, African and Japanese ancestry, and 50% were female and 50% male. Were evaluated plasmatic concentrations of β-carotene, retinol, zinc erythrocyte, lymphocytes, C-reactive protein, α-1-acid glycoprotein and dietary intake of Vitamin A. Samples of saliva and oral mucosa exfoliated cells were collected for DNA extraction with subsequent genotyping of SNPs R267S: rs12934922 and A379V: rs7501331 by RT-PCR. The frequencies of allelic variants R267S and A379V at least one T allele for individuals with European ancestry were 63.0% and 44.0%, respectively, African ancestry, 48.0% and 18.0%, respectively, and Japanese ancestry, 21.0 % and 27.0%, respectively. The results show, so unique, that the frequencies of polymorphic variants of the polymorphic variants A379V and R267S BCMO1 gene in Brazilian population groups evaluated depend on ethnicity for both SNPs. The polymorphic variants observed do not seem to ... / Doutor

Orientador: Rejane Maria T. Grotto / Coorientador: Maria Inês M. C. Pardini / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Andre Martins / Resumo: A infecção pelo vírus da hepatite B (VHB) constitui um grave problema de saúde pública mundial, sendo responsável por doenças hepáticas agudas, crônicas, cirrose e hepatocarcinoma. Com o intuito de diminuir a replicação viral e a progressão da infecção pelo VHB, foram aprovadas sete drogas para o tratamento da hepatite B crônica nos últimos 20 anos, sendo que no Brasil, o protocolo de tratamento baseia-se no uso dos fármacos: Interferon-alfa, Inteferon-alfa peguilado, Lamivudina, Tenofovir, Entecavir e Adefovir. No entanto, um obstáculo à utilização das drogas que atuam inibindo enzimas virais é a emergência de variantes resistentes. Desta maneira, sabendo-se que o estudo da variabilidade genética das regiões genômicas do VHB é importante não somente para analisar o perfil de resistência do vírus aos antivirais, mas também para avaliar as variantes virais circulantes no Brasil, a finalidade deste trabalho foi determinar o perfil de mutações de resistência e polimorfismos genéticos em variantes do Vírus da Hepatite B circulantes na região de Botucatu. A região genômica pol do VHB foi amplificada e sequenciada a partir de metodologia in-house, para avaliar o perfil de mutações de resistência e de polimorfismos genéticos. Dados clínicos e laboratoriais foram coletados do prontuário médico dos pacientes. Os resultados obtidos demonstraram a presença das mutações de resistência rtM204V, rtM204I e rtL180M, que conferem resistência cruzada à Lamivudina e Telbivudina e, podem ocasionar resistência cruzada ao Entecavir quando na presença de mutação adicional. Em relação aos polimorfismos, 37 substituições foram encontradas, das quais várias já foram associadas à resistência primária ou secundária ao tratamento antiviral pelo VHB, sendo que 4 ainda não foram relatadas pela literatura, sendo elas Q262E, Q139H, W79C e W257H, o que demonstra que estas subststituições ... / Abstract: Hepatitis B virus (HBV) infection is a serious global public health problem, being responsible for acute and chronic liver diseases, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. In order to reduce viral replication and progression of HBV infection, seven drugs for the treatment of chronic hepatitis B have been approved in the past 20 years, and in Brazil, the treatment protocol is based on the use of the drugs: Interferon-alpha, pegylated Interferon-alfa, Lamivudine, Tenofovir, Entecavir and Adefovir. However, an obstacle to the use of drugs that act by inhibiting viral enzymes is the emergence of resistant variants. Therefore, the study of the variability of HBV genome is important not only to assess the resistance profile of the virus to antivirals, but also to evaluate the circulating viral variants in Brazil. Thus, the purpose of this study was to evaluate the profile of resistance mutations and genetic polymorphisms in Hepatitis B virus variants circulating in Botucatu. HBV pol genomic region was amplified and sequenced by in-house methodology, to evaluate the profile of resistance mutations and genetic polymorphisms. Additional clinical and laboratory parameters were collected from the medical records of patients. The results showed the presence of rtM204V, rtM204I and rtL180M resistance mutations, which confer cross-resistance to Lamivudine and Telbivudine and, may cause cross-resistance to Entecavir in the presence of additional mutation. Regarding polymorphisms, 37 substitutions were found, including those associated to primary and secondary resistance to HBV treatment, and of these four substitutions have not been reported in the literature, which were Q262E, Q139H, W79C and W257H, demonstrating that these substitutions may be characteristic of HBV viral variants found in our region / Mestre

Orientador: Giovanni Faria Silva / Banca: Oswaldo Melo da Rocha / Banca: Ana de Lourdes Candolo Martinelli / Resumo: A Hepatite C tem sido associada a várias manifestações extra-hepáticas como comprometimento articular. Em 90 pacientes VHC positivos, foram encontradas manifestações reumatológicas em 31%. A artralgia é mais comum, porém a artrite aparece em 4% dos casos. Clinicamente, a artrite relacionada ao VHC, pode ser indistinguível da artrite tradicional e a maioria dos doentes cumprem com os critérios diagnósticos para a doença preconizados pelo Colégio Americano de Reumatologia (ACR), tornando-se um desafio diagnóstico. O fator reumatóide e as crioglobulinas são os autoanticorpos mais presentes em cerca de 40% a 70% dos pacientes com VHC, portanto não auxiliam no diagnóstico diferencial . Anticorpos antipeptídeo citrulinado cíclico (anti-ccp), são considerados anticorpos com grande especificidade e sensibilidade para AR, assim, são capazes de distiguir atrite relacionada ao vírus e AR. Fatores genéticos do hospedeiro também foram associados à infecção pelo VHC, como os polimorfismos dos antígenos plaquetários humanos (HPAs). A avaliação de polimorfismos genéticos pode ser útil na identificação de maior suscetibilidade dos indivíduos infectados ao desenvolvimento de manifestações reumatológicas e/ou de alguns desses serem indicativos de um curso mais grave da doença. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar possíveis associações de indicadores de autoimunidade e polimorfismos do HPA com manifestações reumatológicas em pacientes com Hepatite C. Realizamos avaliação clínica mediante consulta com o doente e levantamento em prontuário, coletas e armazenagem de amostras sanguíneas para genotipagem dos HPAs -1 e -3 pela técnica de PCR-SSP (Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primers), HPA -5 pela técnica de PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction and Restriction Fragment Length Polymorphism), obtenção de valores de fator reumatóide por aglutinação do látex e anti-ccp pelo teste ELISA ... / Abstract: Hepatitis C has been associated with various extrahepatic manifestations such as joint involvement. In 90 HCV positive patients, rheumatological manifestations were found in 31%. Arthralgia is the most common, however the arthritis appears in 4% of the cases. Clinically, HCV related to arthritis may be indistinguishable from RA, since the majority of patients fulfilling the criteria of the American College of Rheumatology for the diagnosis of RA, making it diagnostic challenge. The rheumatoid factor and crioglobulines may be present in about 40 to 70% of patients with chronic HCV, which does not help in the differential diagnosis. The cyclic citrullinated peptide antibodies (anti-CCP) are considered good markers for RA, due to their high specificity and sensitivity, they can be useful in distinguishing between HCV arthritis and RA. The genetic factors of the host were also related to virus C infection like polymorphisms of human platelet antigens (HPAs). The evaluation of these genetic polymorphisms may reflect greater susceptibility to rheumatological manifestations and/or one of them be indicative of a more severe disease. So the goal of this study was evaluate possible associations of autoimmunity indicators and HPA polymorphisms with rheumatological manifestations in patients with Hepatitis C. We performed clinical evaluation by appointment and survey in medical chart, collection and storage of blood samples for genotyping of HPA- 1 and -3 by PCR-SSP (Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primers), HPA-5 by PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction and Restriction Fragment Length Polymorphism), obtaining values of rheumatoid factor by latex agglutination and anti-ccp by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). The sample size of 160 subjects was determined by Fisher and Belle formula, using a confidence interval of 95%, accuracy of 7% and a ratio of 31% infected with hepatitis C who have rheumatological manifestations. Categorical ... / Mestre