Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-03-26Bitstream added on 2014-06-13T20:45:02Z : No. of bitstreams: 1 vergani_sa_dr_arafo.pdf: 639289 bytes, checksum: 6483b0519cf455414c9e0881668e277f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do presente estudo foi o de avaliar os efeitos do controle de placa supragengival, em pacientes com doença periodontal crônica generalizada, por meio dos parâmetros clínicos microbiológicos e imunológicos. Foram selecionados 30 pacientes, com idade entre 32 e 59 anos, apresentando 4 bolsas entre 3 e 5mm e 4 bolsas entre 6 e 10mm e sem envolvimento sistêmico. Após o exame inicial, os pacientes foram submetidos a raspagem supragengival e receberam instruções de higiene oral, sendo acompanhados semanalmente por um período de 30 dias. Os parâmetros clínicos avaliados foram profundidade de sondagem, recessão gengival, índice de placa, índice gengival e sangramento à sondagem. Amostras de fluido crevicular das bolsas foram coletadas para análise da concentração dos mediadores de inflamação interleucina-1b e prostaglandina E2 e identificação pela reação de polimerase em cadeia dos microrganismos Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacteroides forsythus, Prevotella intermedia e Prevotella nigrescens. Os resultados demonstraram a ocorrência de melhoras evidenciadas pelos parâmetros clínicos avaliados. Observou-se ainda uma redução significante no número de Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus, Prevotella intermedia e Prevotella nigrescens. O microrganismo A. actinomycetemcomitans não apresentou diferença significante. Para o exame imunológico não foram encontradas diferenças nos níveis de interleucina-1b, sendo constatado ainda um aumento nas concentrações de prostaglandina E2 nas bolsas de 6 a 10mm que apresentavam sangramento no final do tratamento. Concluiu-se que decisão da necessidade de tratamento periodontal em sítios profundos, após a realização do controle de placa supragengival, baseada somente na ausência de sangramento à sondagem pode subestimar... . / The aim of the present study was to evaluate the effect of supragingival plaque control, in patients with generalized chronic periodontal disease using clinical, microbiological and immunological parameters. 30 patients were selected, aged 32 to 59 years, presenting 4 periodontal pockets between 3 and 5mm and 4 pockets between 6 and 10mm. After initial exam patients received supragingival scaling and oral hygiene instructions, which were reinforced once a week for 30 days. Clinical parameters were probing depth, gingival resection, plaque index, gingival index and bleeding upon probing. Samples of crevicular fluid were taken for analyses of interleukin-1b and prostaglandin E2 and for identification by polymerase chain reaction of Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacteroides forsythus, Prevotella intermedia and Prevotella nigrescens. The results demonstrated an improvement of the clinical parameters. The microbiological findings indicate reduction of Porphyromonas gingivalis, Bacteroides forsythus, Prevotella intermedia, and Prevotella nigrescens. A. actinomycetemcomitans did not show significant difference. In regard to the immunological exam, no differences were observed in interleukin-1b concentration. Prostaglandin E2 concentrations were elevated in pockets between 6 and 10mm with persistent bleeding upon probing after treatment. In conclusion the decision for treatment needs after supragingival plaque control only based on the absence of bleeding upon probing might underestimate the periodontal disease activity.

Endometriosis and breast cancer are sex hormone dependent diseases characterised by the local production of high levels of 17β-oestradiol. The relationship between prostaglandins and sex steroid hormones is one of the focal questions in endometriosis, breast cancer and other sex steroid hormone related disorders. Therefore, the main hypothesis was that the aldo-keto reductase (AKR) 1C isoenzymes are responsible for controlling the availability of 17β-oestradiol, progesterone and prostaglandins in the microenvironment of the endometrium, and surrounding adipose tissues of endometriotic lesions and breast tumours. This was investigated using quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR) for measuring the gene expression of AKR1C1-3 enzymes, and prostaglandin E (1-4) and F receptors in the endometrium, and surrounding adipose tissues of endometriotic lesions and breast tumours. This was then followed by investigating the role of one of the AKR1C enzymes - AKR1C3 - by inhibiting its catalysis using bimatoprost, followed by using PGE2 as one of the main candidates acting as a transcription factor for upregulating the expression of AKR1C3 which in turn upregulates the production of the local 17β-oestradiol. The gene expression of AKR1C1 was significantly higher in endometriotic lesions compared to eutopic endometrium of endometriosis patients. However, there was no significant difference in the gene expression of AKR1C (1-3) enzymes in the surrounding adipose tissues of endometriotic lesions between patients with or without endometriosis. Also, there was no significant difference in the gene expression of AKR1C (1-3) enzymes in the breast adipose tissues of patients with breast tumours, regardless of the oestrogen or progesterone receptor status. The gene expression of prostaglandin E (EP) receptor subtype 3 was significantly higher in the endometriotic lesions compared to eutopic endometrium of endometriosis patients. In the omental adipose tissue, there was no significant difference in the gene expression of EP1-4 and FP receptors between endometriosis and non-endometriosis patients. In the breast adipose tissue, there was also no significant difference in the gene expression of EP1-4 and FP receptors in patients with breast cancer regardless of the oestrogen or progesterone receptor status. The inhibitory constant (Ki) of bimatoprost was determined using oestrone as a substrate: Ki = 2.9µM and αKi = 0.7µM. Bimatoprost also significantly inhibited the production of 17β-oestradiol and inhibited the production of 9α,11β PGF2 in a dose dependent manner in the human endometrial cells. The effect of PGE2 on the expression of AKR1C1 and AKR1C3 was assessed in the human endometrial cells. The EP4 receptor agonist, L-902688, increased the gene expression of AKR1C1 and AKR1C3. Despite gene expression elevation, L-902688 did not increase the production of 17β-oestradiol. In conclusion, the results were contradictory and highlighted the need for further investigation into the relationship between prostaglandins and sex steroid hormones in the microenvironment of the endometrium, and surrounding adipose tissues of endometriotic lesions and breast tumours.

Submitted by Bruna Rodrigues (bruna92rodrigues@yahoo.com.br) on 2017-10-16T11:12:41Z No. of bitstreams: 1 DissTAR.pdf: 2339389 bytes, checksum: 14cd8ea79b64ebc1dc594832f05cef33 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (producaointelectual.bco@ufscar.br) on 2017-10-31T18:33:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissTAR.pdf: 2339389 bytes, checksum: 14cd8ea79b64ebc1dc594832f05cef33 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (producaointelectual.bco@ufscar.br) on 2017-10-31T18:33:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissTAR.pdf: 2339389 bytes, checksum: 14cd8ea79b64ebc1dc594832f05cef33 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-29T16:58:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissTAR.pdf: 2339389 bytes, checksum: 14cd8ea79b64ebc1dc594832f05cef33 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Imbalances in the production of prostaglandins (PGs) secreted during menstrual cycles, especially F2α and E2, have been associated with the occurrence of dysmenorrhea and excessive uterine bleeding. Depending on the magnitude of these dysfunctions, the use of non-hormonal anti-inflammatories continues to be indicated to block the synthesis of PGs and to control the clinical outcome. However, since this type of therapeutic option produces side effects that may restrict its use for long periods, the use of herbal products has been proposed as an alternative treatment. Studies and reports have shown that Tahitian lemon (Citrus latifolia) acts controlling the menorrhagia and dysmenorrhea. Although the forms of action are not known, the inhibition of the cascade of arachidonic acid production is one of the possibilities that deserve to be investigated. Thus, to contribute to the elucidation of the mechanisms of action, we propose to study the effect of Tahitian lemon juice on the production of PGs and cytokines involved in the synthesis pathways of PGs in healthy women during menstruation. To that aim, normal volunteers during the menacing period were randomly divided into three groups and treated for two consecutive days from the beginning of menstruation, with Lemon (G1, n = 15), Meloxicam (G2, n = 14) and compared with a Control group (G3, n = 13) formed by volunteers who did not undergo any type of intervention. On the second day of menstruation, menstrual and peripheral blood samples were collected for the determination of PGE2, PGF2α, IL-1β, TNFα and IL-6 in order to analyze the uterine and systemic effects of cytotherapy. In addition, cells from whole blood were cultured, whether or not stimulated with LPS, to evaluate the effects of Tahitian lemon on the production of PGs (PGF2α and PGE2), and the in vitro inflammatory response (IL-1β, IL- 6, TNF-α). The results showed a higher concentration of PGF2α in the menstrual blood of the Tahitian lemon group and a lower concentration of PGE2 and PGF2α in the Meloxicam group. Regarding the inflammatory cytokines, it was observed that only the concentration of TNFα in menstrual blood was lower in the Lemon group. However, in the supernatant of the cell culture, the Tahitian lemon was able to induce the higher production of TNFα by the cells supplemented by the patient's own serum and treated with LPS for 24 hours. Conclusion: Tahitian lemon appears to act in the cascade of production of the PGF2α from uterus, that may favor events associated with vascular contraction, in a distinct way in relation to Meloxicam activity. / Desequilíbrios na produção de prostaglandinas (PGs) secretadas durante os ciclos menstruais, principalmente as do tipo F2α e E2, têm sido associados à ocorrência de dismenorreia e sangramento uterino excessivo. Dependendo da magnitude dessas disfunções, o uso de anti-inflamatórios não hormonais continua sendo indicado para bloquear a síntese de PGs e controlar o quadro clínico. Entretanto, como esse tipo de opção terapêutica apresenta resultados variáveis e pode produzir efeitos colaterais que restringem sua utilização, o emprego da fitoterapia vem sendo proposto como alternativa terapêutica. Trabalhos e relatos têm mostrado que o limão Taiti (Citrus latifolia) atua de forma eficaz no controle da menorragia não estrutural e da dismenorreia. Embora as formas de atuação não sejam conhecidas, a inibição da cascata de produção dos ácidos araquidônicos é uma das possibilidades que merece ser investigada. Deste modo, para contribuir com a elucidação dos mecanismos de ação, propomos estudar o efeito do suco do limão Taiti na produção de PGs e de citocinas envolvidas nas vias de síntese das PGs em mulheres saudáveis durante a menstruação. Para isso, voluntárias na fase do menacme foram divididas de forma aleatória em três grupos e tratadas a partir do início da menstruação por dois dias consecutivos com Limão (G1, n=15) ou Meloxicam (G2, n=14) e comparadas com grupo Controle (G3, n=13) formado por participantes que não sofreram qualquer tipo de intervenção. Para isso, amostras de fluído menstrual e sangue periférico foram coletadas no segundo dia da menstruação para dosagem de PGE2, PGF2α, IL-1β, TNF-α e IL-6 com o propósito de avaliar o efeito uterino e sistêmico da citroterapia. Além disso, foram realizadas cultura de células a partir de sangue total, estimuladas (24h) ou não com LPS, para medir os efeitos do limão Taiti na resposta inflamatória in vitro (IL-1β, IL-6, TNF-α). Os resultados mostraram uma maior concentração de PGF2α no fluído menstrual do grupo que consumiu o suco do limão Taiti e uma concentração menor de PGE2 e PGF2α no grupo tratado com Meloxicam. Em relação às citocinas inflamatórias, observou-se que somente a concentração de TNF-α no sangue menstrual foi menor no grupo Limão. Em relação à concentração de TNF-α no sangue periférico, não houve diferenças significativas entre os grupos, entretanto no sobrenadante da cultura celular, o limão Taiti foi capaz de induzir maior produção de TNF-α pelas células suplementadas pelo soro da própria paciente e estimuladas com LPS. Em conclusão: o limão Taiti possivelmente atua na cascata de produção de PGF2α do útero, podendo favorecer os eventos associados com a contração uterina, de uma forma distinta em relação aos mecanismos de atividade associados ao Meloxicam.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-27Bitstream added on 2014-06-13T20:48:19Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_ap_me_jab.pdf: 821460 bytes, checksum: 9540c58da44188e3ae8a41593d305a9c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudou-se a eficácia do meloxicam e do carprofeno, aplicados por diferentes vias, em uveítes experimentais em cães. Realizou paracentese de câmara anterior em dois momentos (M0 e M1), com intervalo de cinco horas entre si. Em M0 e M1, colheram-se 0,2 ml de humor aquoso e determinou-se a concentração de proteína total e de prostaglandina E2 (PGE2). Em um primeiro período, constituíram-se quatro grupos (n = 5), que receberam meloxicam ao final de M0 pelas vias subcutânea (GIm), subconjuntival (GIIm) e tópica (GIIIm). Um quarto grupo não recebeu tratamento (Controle). Decorridos sete dias, os animais foram submetidos aos mesmos procedimentos adotados previamente e receberam carprofeno. Avaliação clínica foi também realizada, assim como histopatologia da conjuntiva dos animais dos grupos GIIm e GIIc. Os resultados foram avaliados estatisticamente (p LÜ 0,05). Em todos os grupos, encontrou-se aumento significativo dos níveis protéicos e de PGE2 em M1 (p < 0,001). Não se observou diferença significativa entre os grupos para os valores de proteína total e de PGE2 em M1 (p > 0,05). Observou-se correlação positiva entre proteína total e PGE2 (p < 0,05) apenas no GIm, GIc, GIIIm, GIIIc e GIIm. Exsudado inflamatório de caráter agudo e hemorragia discreta foram vistos à histopatologia após a aplicação de ambos os fármacos (p > 0,05). O meloxicam e o carprofeno foram ineficazes em inibir a síntese de PGE2 e o influxo de proteínas para a câmara anterior, por qualquer uma das vias testadas. A redução nos níveis de 44% proteínas, quando o carprofeno foi utilizado pela via tópica, sugere que por esta via, ele pode ser utilizado como adjuvante no controle da uveíte em cães. / Efficacy of meloxican and carprofen, administered by different routes, in experimental uveitis in dogs were studied. Anterior chamber paracenteses was accomplished at two different moments (M0 and M1), with a five hour interval among them. At M0 and M1, 0,2 ml of aqueous humor were collected and total protein and prostaglandin E2 (PGE2) concentration was determined. Four groups were formed in a first period (n = 5), which received meloxican at the end of M0, by the following routes: subcutaneous (GIm), subconjunctival (GIIm), and topical (GIIIm). A fourth group that received no treatment was instituted (Control). Seven days after, animals underwent the same procedures described previously and received carprofen. Clinical evaluation was also performed, as well as conjunctival histopathology of the conjunctiva of the animals of GIIm and GIIc. Results were evaluated statistically (p LÜ 0,05). In all groups, protein and PGE2 values enhanced significantly in M1 (p < 0,001). Protein and PGE2 values, did not change significantly between groups at M1 (p > 0,05). Positive correlation among total protein and PGE2 (p < 0,05) was only noted in GIm, GIc, GIIIm, GIIIc and GIIm. Inflammatory exudate of acute character and mild hemorrhage were seen at histopathology, after both agents were administered. Meloxican and carpofen were unable to inhibit PGE2 synthesis and the protein influx to the anterior chamber by any of the tested routes. The lowering of 44% in protein levels, when carprofen was used by the topical route, suggests that by this route, it can be used as an adjuvant to control uveitis in dogs.

Submitted by RAFAEL TOMODA SATO null (rt.sato@yahoo.com.br) on 2018-03-27T20:29:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL Rafael Sato.pdf: 597893 bytes, checksum: 8e3c7ee0dff2d6c1ba511a0fb8eba69e (MD5) / Rejected by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br), reason: Solicitamos que realize correções na submissão seguindo as orientações abaixo: No arquivo pdf submetido ao repositório não consta o certificado de aprovação (documento obrigatório). Peço que insira o mesmo no arquivo pdf e depois faça uma nova submissão. Agradecemos a compreensão on 2018-03-28T13:03:19Z (GMT) / Submitted by RAFAEL TOMODA SATO null (rt.sato@yahoo.com.br) on 2018-03-28T13:35:29Z No. of bitstreams: 1 Dissertação FINAL Rafael Sato.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-03-28T16:48:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sato_rt_me_jabo.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-28T16:48:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sato_rt_me_jabo.pdf: 711685 bytes, checksum: 2baeec3c6f8697936d52cc1949c35ac2 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pró-Reitoria de Pesquisa (PROPe UNESP) / O principal objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações plasmáticas de 17α,20β-dihidroxi-4-pregnen-3-one (DHP), Estradiol 17β (E2), Testosterona (T) e Prostaglandina F2α (PGF2α) e a distribuição percentual dos diferentes tipos de ovócitos presentes nos ovários ao longo do processo de hipofisação de pacu (Piaractus mesopotamicus) com ou sem uso de PGF exógena. Para isto, 23 fêmeas foram distribuídas em cinco tratamentos, com indução dividida em duas doses com intervalo de 24 horas: (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina) (T1); (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 ml PGF2α) (T2); (0,6 mg.kg-1 EBHC (extrato bruto de hipófise de carpa)) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 mL PGF2α) (T3); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC) (T4); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC e 2 mL PGF2α) (T5). Foram coletadas amostras de sangue e ovócitos para análise dos níveis plasmáticos de PGF2α, DHP, E2 e T e avaliação dos tipos de ovócitos em quatro períodos após a segunda dose. O uso de PGF2α exógena provocou um pico plasmático de PGF2α uma hora após a segunda dose hormonal. A hipofisação, com ou sem o uso de PGF2α exógena, provocou pico plasmático de PGF2α no momento da desova. O uso de PGF2α exógena juntamente hipofisação (T5) eleva a taxa de ovulação de pacu em relação a fêmeas apenas hipofisadas (T4), provavelmente em função de níveis de GVBD e de PGF2α superiores de T5, quatro horas após a segunda dose hormonal. / The main objective of this study was to determine the plasma concentrations of 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP), 17β-Estradiol (E2), Testosterone (T) and Prostaglandin F2α (PGF2α) and the different types of oocytes present in the ovaries throughout the pacu (Piaractus mesopotamicus) hypophysation process with or without the use of exogenous PGF2α. To that, 23 females were distributed in five treatments, with induction divided into two doses with a 24-hour interval: (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline) (T1); (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T2); (0.6 mg.kg-1 CPE (crude pituitary extract)) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T3); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE) (T4); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE and 2 ml PGF2α) (T5). Blood and oocyte samples were collected for analysis of plasma levels of PGF2α, DHP, E2 and T in four periods after the second dose. The use of exogenous PGF2α caused a plasma peak of PGF2α one hour after the second hormonal dose. Hypophysation, with or without the use of exogenous PGF2α, caused a plasma peak of PGF2α at the time of spawning. The use of exogenous PGF2α together with hypophysation (T5) increased the pacu ovulation rate in relation to hypophysation only (T4), probably as a result of higher GVBD and PGF2α levels of T5, four hours after the second hormonal dose. / FAPESP: 16/20741-3

Resumo: Paracoccidioides brasiliensis (Pb), agente etiológico da paracoccidioidomicose, é um fungo dimórfico que sobrevive no interior de monócitos/macrófagos humanos não ativados. Estudos anteriores em nosso laboratório têm demonstrado que os monócitos humanos não ativados são incapazes de realizar atividade fungicida, e esse processo está associado com a capacidade do fungo induzir a produção de prostaglandinas (PGs), uma vez que, essas células são capazes de realizar atividade fungicida significativa após o tratamento com indometacina (INDO), um inibidor da produção de ciclooxigenase. No entanto, o processo de pré-ativação com IFN-γ, resulta em um parcial efeito compensatório sobre os efeitos inibidores das PGs, principalmente quando essas células são desafiadas com a cepa de baixa virulência do fungo. Assim, a proposta deste presente estudo foi avaliar se a ativação de monócitos humanos com outras citocinas como TNF-α e GM-CSF resulta em um efeito similar ao observado com IFN-γ. Uma outra questão a ser respondida é se esse processo poderia estar associado com alterações nos níveis de H2O2 e NO, que são moléculas efetoras envolvidas na atividade fungicida contra o P. brasiliensis, bem como nos níveis das citocinas TNF-α, IL-10 e IL-6. Culturas de monócitos do sangue periférico, obtidos de 20 indivíduos normais foram tratadas somente com INDO ou ativados com IFN-γ, TNF-α ou GM-CSF na presença ou ausência de INDO por 18h, e posteriormente desafiados com cepas de alta (Pb18) ou baixa (Pb265) virulência do P. brasiliensis por 4h. Após esse período, as culturas foram avaliadas quanto à atividade fungicida, produção de H2O2 e NO e expressão de mRNA para enzima óxido nítrico sintase (iNOS) por RT-PCR em tempo real. As concentrações de TNF-α, IL-6 e IL-10 nos sobrenadantes das coculturas foram avaliadas por ELISA. Nossos resultados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis (Pb), the etiological agent of paracoccidioidomycosis, is a dimorphic fungus that survives within nonactivated human monocytes/macrophages. Previous studies have demonstrated that the lack of fungicidal activity by nonactivated human monocytes is associated to fungus capacity to inducing prostaglandins release, since a significative fungicidal activity was detected after monocytes treatment with indomethacin (INDO), a cyclooxigenase inhibitor. However, cells activation with IFN-γ seems to partially compensating this inhibitory effect, mainly when cells were challenged with low virulent strain of the fungus. Here, we extended our studies, addressing whether monocytes activation with other cytokines such as TNF-α and GM-CSF results in a similar effect to that observed with IFN-γ. Moreover, we asked if this process could be associated with alterations on H2O2 and NO levels, the molecules involved in Pb killing, as well as in the levels of the cytokines TNF-α, IL-10 and IL-6. Peripheral blood monocytes obtained from 18 healthy donors were treated only with INDO or activated with IFN-γ, TNF-α or GM-CSF in presence or absence of INDO for 18h, and further challenged with high (Pb18) or low (Pb265) virulent strain of Pb for 4h. After, cultures were evaluated for fungicidal activity, H2O2 and NO release and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA by real-time RT-PCR. The concentrations of TNF-α, IL-6 and IL-10 on supernatants of cocultures were evaluated by ELISA. Our results provided evidence that human monocytes challenged with both strains of P. brasiliensis release prostaglandins that via induction of IL-10 and IL-6 inhibits TNF-α production. This process results in defective cell activation with consequent release of low H2O2 levels and lack of fungicidal activity by cells. However the inhibitory effect of PGs may be... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Luciene Alarcão Dias Melicio / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: João pessoa Araújo Junior / Banca: Heloisa Blotta / Banca: Gil Bernard / Doutor

histoplasmose é uma doença granulomatosa crônica, cujo agente etiológico é o fungo dimórfico Histoplasma capsulatum. A infecção ocorre pela inalação de conídios ou pequenos fragmentos de micélio que alcançam os alvéolos, onde se transformam em leveduras que é responsável pela patogenia da doença. A imunidade celular do hospedeiro determina o grau das manifestações clínicas na histoplasmose, sendo a interação entre células T e macrófagos, fundamental para o controle da infecção e erradicação do H. capsulatum. Recentemente, nosso grupo de pesquisa demonstrou a participação de leucotrienos nos mecanismos de defesa do hospedeiro durante a histoplasmose. Neste trabalho descrevemos o papel das prostaglandinas, demonstramos que este mediador lipídico contribui para a patogênese da doença, pois sua inibição, com celecoxibe, resultou na sobrevivência de até 80% dos animais infectados com o inóculo letal de H. capsulatum, em contraste com 100% de mortalidade dos animais somente infectados. Além disso, a inibição das prostaglandinas resultou na diminuição (i) da síntese de citocinas pró-inflamatórias e da resposta imune celular e (ii) do recrutamento de neutrófilos e macrófagos para o espaço bronco-alveolar. Por outro lado, resultou no aumento (iii) de células TCD4+ no pulmão, (iv) na síntese de óxido nítrico por células do parênquima pulmonar, (v) na fagocitose de leveduras de H. capsulatum por macrófagos alveolares e (vi) da síntese de LTB4. Nossos resultados sugerem que prostaglandinas têm papel importante na patogênese na infecção por H. capsulatum, modulando a resposta imune do hospedeiro. / The Histoplasmosis is a chronic granulomatosas disease whose etiologic agent is pathogenic dimorphic fungus Histoplasma capsulatum. Infection occurs mainly by fungal inhalation that reaches the alveoli, where if transforms into leavenings that are responsible for pathogenic diseases. The cellular immunity of the host determines the degree of the clinical manifestations in histoplasmosis, being the interaction between cells T and macrophages, basic for the control of the infection and eradication of the H. capsulatum. Recently, our group of research demonstrated the participation of leukotrienes in the mechanisms of defense of the host during the Histoplasmosis. Beyond this important lipid mediator who participates in the immune reply against H. capsulatum. In this work, we describe another involved mediator, the prostaglandin. In the present work, we demonstrate that the prostaglandins contribute for pathogenic of the disease, being that during its inhibition with celecoxib it resulted in the survival of up to 80% of the infection-mice with inoculum lethal of H. capsulatum, in contrast with 100% of mortality infection-mice. Moreover, the inhibition of prostaglandins resulted in the reduction (i) of the synthesis of pro-inflammatory cytokines and the cellular immune response and (ii) in the migration of neutrophils and macrophages. For other hand, increased (iii) of cells TCD4+ in the lung, (iv) of the nitric oxide synthesis, (v) of phagocytosis of yeast of H. capsulatum for alveolar macrophages and (vi) of the synthesis of LTB4. Our results suggest that prostaglandins have important role in pathogenic in the infection for H. capsulatum, modulating the host immune response.

A modulação das respostas imunológicas em modelos experimentais infectados por Trypanosoma cruzi tem contribuído de maneira importante nas investigações de novas terapias contra a doença de Chagas. Neste estudo, avaliamos a produção de citocinas Th1 e Th2 relevantes na fase aguda da doença, assim como, níveis de prostaglandina E2, nitrito, parasitemia sanguínea e parasitemia tecidual cardíaca em ratos Wistar machos infectados pela cepa Y de T. cruzi. Foram investigados nos 7°, 14° e 21° dias de infecção, as citocinas padrão Th1: IL-2, IFN-, TNF- e padrão Th2: IL-4, IL-10. Os parâmetros foram dosados e interpretados após a administração, ou não, de meloxicam, melatonina ou ambos. A administração de melatonina contribuiu na proteção do hospedeiro submetido à infecção experimental por T. cruzi devido às ações imunomodulatórias previamente atribuídas a esta substância. O bloqueio da síntese de PGE2 atribuído à administração de meloxicam e/ou melatonina durante a fase aguda da infecção foi seguido por uma modulação de citocinas pertencentes aos padrões Th-1 e Th-2. Houve um aumento da síntese de citocinas importantes na proteção do hospedeiro durante a fase aguda da infecção, tais como IFN-, IL-2 e NO. Estes efeitos demonstrados no estudo foram benéficos, sendo evidenciados pela diminuição da carga parasitária dos animais experimentais. Os resultados poderão auxiliar a estabelecer mecanismos alternativos de tratamento na infecção chagásica aguda através de um melhor entendimento das respostas imunológicas anti-T cruzi. / The modulation of the immune responses in experimental models infected with Trypanosoma cruzi has effectively contributed for the investigations of new therapies used to treat Chagas disease. In this study, it was evaluated the production of Th1 and Th2 cytokines, which play a role during the acute phase of the disease, as well as prostaglandin E2 and nitrite, number of blood parasites and cardiac tissue parasitism in male Wistar rats infected with the Y strain of T. cruzi. Experiments were performed on 7, 14 and 21 days after infection in which Th1 cytokines such IL-2, IFN-, TNF- were done and Th2 cytokines as IL-4 and IL-10. The parameters were evaluated with/without the administration of meloxicam, melatonin or both. Melatonin contributed for the hosts protection in animals experimentally infected with T. cruzi through its immunomodulator actions. The blockage of PGE2 synthesis was attributed to the administration of meloxicam and/or melatonin during the acute phase of infection, followed by a modulation of the Th1 and Th2 cytokines. In this work enhanced levels of IFN-, IL-2 and NO were observed. The analysis of these data was beneficial for the hosts protection through a reduced number of amastigote nests in heart tissue. These results permit to establish alternative mechanisms to treat the acute chagasic infection through a better understanding of the immune responses against T cruzi.

Em estudo anterior, observamos que o Met-RANTES, antagonista de receptores CCR1 e CCR5 para quimiocinas, injetado pela via endovenosa (i.v.) reduziu a resposta febril induzida pelo lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli, demonstrando o envolvimento da quimiocina RANTES (Regulada sob ativação, expressa e secretada por células T normais) nesta resposta. Além disso, a injeção intrahipotalâmica (i.h.) da RANTES dose-dependentemente aumentou a temperatura corporal de ratos, o qual foi caracterizado como febre, pois foi acompanhada de redução da temperatura da cauda, uma resposta termorregulatória para retenção de calor. Observamos também, que a RANTES aumenta a concentração de prostaglandinas no fluido cerebroespinhal (CSF) e que a febre por ela induzida é sensível aos inibidores não-seletivos para as ciclooxigenases e seletivo para COX-2 (Machado et al., 2007). No presente estudo, aprofundamos a investigação sobre os mediadores, incluindo as prostaglandinas, envolvidos na resposta febril induzida pela RANTES. Verificamos que o paracetamol reduziu, enquanto o diclofenaco de sódio aboliu a resposta febril induzida pela RANTES. Ainda, a injeção i.h. da RANTES promoveu significativa expressão do RNAm para COX-2 no hipotálamo, confirmando ser a COX-2 a enzima responsável pela síntese de prostaglandinas envolvidas no efeito pirogênico desta quimiocina. Através da administração de corante in situ e de cortes histológicos, pode-se averiguar o trajeto da cânula bem como a profundidade alcançada pela agulha durante a injeção na área pré-óptica hipotalâmica anterior (AH/POA). Padronizamos a dose do Met-RANTES (i.h.) que não seria capaz de alterar a temperatura retal dos animais. Posteriormente, avaliou-se o efeito de diferentes doses do Met-RANTES, administrado via intrahipotalâmica, na resposta febril induzida pelo LPS ou pela RANTES. Entretanto, nas doses administradas o pré-tratamento com o antagonista não foi capaz de reduzir a febre induzida por ambos os estímulos. Contudo, o Met-RANTES (i.v.) reduziu a febre induzida pelo TNF-alfa (i.h.), reproduzindo resultados anteriores. O pré-tratamento com Met-RANTES (i.v.) não modificou a febre induzida pela injeção central de interleucina (IL)-6, fator liberador de corticotropina (CRF) e bradicinina (BK). Adicionalmente, a injeção de LPS (i.v.) ou TNF-alfa (i.h.) elevou a concentração da RANTES no tecido hipotalâmico. Antalarmina (antagonista de receptores CRF1) e alfa-helical CRF9-41 (antagonista de receptores CRF1 e CRF2) que reduziram a febre induzida pelo CRF, não alteraram a febre induzida pela administração i.h. da RANTES. O antagonista de receptores B1 (DALBK) que reduziu a segunda fase da resposta febril induzida pela BK, não foi capaz de modificar a febre induzida pela RANTES. Da mesma forma, o antagonista de receptores B2 (Hoe-140) que reduziu a resposta febril induzida pela BK durante todo o período de experimentação, não modificou a febre promovida pela RANTES. Por outro lado, verificamos que o anticorpo anti-IL-6 administrado i.h. reduziu a febre induzida pela IL-6 e pela RANTES. Ainda, a injeção de LPS (i.v.) ou RANTES (i.h.) elevou a concentração de IL-6 no CSF, mas não de IL-1 e TNF-. A RANTES promoveu ativação do fator nuclear-kB (NF-kB) e aumentou a expressão do RNAm para as citocinas IL-1beta, TNF-alfa e IL-6 no hipotálamo dos animais. O pré-tratamento com Met-RANTES reduziu, na 2,5 e 6 h, a neutrofilia induzida pelo LPS. Em síntese, nossos resultados demonstram que durante a resposta febril induzida pelo LPS, este induz a síntese de TNF-alfa o qual promove a síntese da quimiocina RANTES que, ativando os receptores CCR1 e CCR5 promove a transmigração do NF-kB do citoplasma para o núcleo e a subseqüente síntese de IL-6 e de COX-2, esta última, a responsável pela síntese de prostaglandina E2 (PGE2), um dos mediadores finais da resposta febril induzida pelo LPS. Além disso, a RANTES parece ser um mediador da resposta de fase aguda, uma vez que, promove dois sinais importantes desta resposta, febre e neutrofilia. / We showed before that Met-RANTES, CCR1 and CCR5 receptor antagonist, intravenously injected (i.v.) reduced fever induced by lipopolysaccharide (LPS, E. coli), demonstrating the involvement of RANTES (Regulated on activation, normal T cells expressed and secreted) in this response. Also, intrahypothalamic (i.h.) injection of RANTES dose-dependently increased body temperature of rats, this increase was characterized as fever, because it was accompanied of a reduction in the tail skin temperature, a thermoregulatory response for heat retention. We also verified that RANTES increased the concentration of prostaglandin (PG)E2 in the cerebrospinal fluid (CSF), which was sensible to non-selective and selective blockers to cyclooxygenase (COX)-2 (Machado et al., 2007). In the present study, it was investigated which others mediators, including prostaglandins, are involved in the RANTES-induced fever. The effect of paracetamol and sodium diclofenac on fever induced by RANTES was also investigated. Paracetamol reduced, while sodium diclofenac abolished the RANTES-induced fever. The intrahypothalamic (i.h.) RANTES injection promoted a significant COX-2 mRNA expression in the hypothalamus, confirming the role of the COX-2 enzyme in the synthesis of prostaglandin involved in the pyrogenic effect of this chemokine. Through administration of dye in situ and histological analyses, we confirmed that the injection in the preoptic area of the anterior hypothalamus (AH/POA) was correct. Subsequently, we evaluated the effect of different doses of Met-RANTES (i.h.) in the fever induced by both LPS and RANTES. Centrally injected, Met-RANTES did not modify the fever induced by LPS or RANTES. On the other hand, Met-RANTES (i.v.) reduced TNF-alpha-induced fever, but did not modify the fever induced by interleukin (IL)-6, corticotrophin releasing factor (CRF) and bradykinin (BK). Additionally, the injection of LPS (i.v.) or TNF-alpha (i.h.) increased RANTES concentration in the hypothalamus. Antalarmin (a CRF receptor 1 antagonist) and alpha-helical CRF9-41 (CRF 1 and 2 receptor antagonist) that reduced CRF-induced fever did not modify the fever induced by RANTES (i.h.). DALBK (bradykinin B1 receptor antagonist) that reduced the second phase of BK-induced fever did not modify RANTES-induced fever. In the same way, Hoe-140 (bradykinin B2 receptor antagonist) that reduced the fever induced by BK during the whole period of observation, did not modify RANTES-induced fever. On the other hand, we verified that anti-rat IL-6 antibody (i.h.) reduced the fever induced by both IL-6 and RANTES. In addition, the administration of LPS (i.v.) or RANTES (i.h.) increased the CSF IL-6 concentration, but not of IL-1 and TNF-. RANTES promoted nuclear factor-kB (NF-kB) activation and increased IL-1beta, TNF-alpha and IL-6 mRNA expression in the hypothalamus. Pretreatment of the animals with Met-RANTES reduced the LPS-induced neutrophilia. In synthesis, our results suggest that in the fever induced by LPS, RANTES induces TNF- synthesis, which promotes the synthesis of RANTES that, activating CCR1/CCR5 receptors, promotes NF-kB transmigration of cytoplasm to the nucleus and subsequent synthesis of IL-6 and COX-2. The latter, in turn, is responsible by (PGE2) synthesis, one of the final mediators of the febrile response induced by LPS. Moreover, RANTES seem to be a mediator of the acute phase response since it promoted two important signs of this response, fever and neutrophilia.

Os mecanismos que conferem resistência do Mycobacterium tuberculosis (Mtb) à destruição pelo hospedeiro, além da sua capacidade em permanecer e/ou multiplicar-se no interior das células fagocitárias são ainda pouco compreendidos. Nosso grupo de pesquisa tem contribuído para o entendimento do papel dos mediadores lipídicos, que incluem prostaglandinas (PGs) e leucotrienos (LTs) na tuberculose. PGs inibem a resposta imune celular TH1, a produção de citocinas e a fagocitose, e assim facilita a infecção. LTs estão envolvidos no recrutamento de leucócitos, e na modulação da síntese de citocinas, no aumento da fagocitose e dos mecanismos microbicidas, e assim contribui para a eliminação da micobactéria. Neste projeto, avaliamos in vivo e in vitro a produção dos mediadores lipídicos induzidos por cepas de Mtb isolados de pacientes com tuberculose ativa. Demonstramos neste trabalho que macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV009 levam a maior produção de TNF- e nitrito, do que aqueles infectados com a cepa SV068. Em contraste, macrófagos alveolares infectados com os bacilos da cepa SV068 induzem a produção de muito mais LTB4, quando comparado aos bacilos da cepa SV009. Obtivemos maior recuperação de unidades formadoras de colônia (UFC) de macrófagos alveolares tratados com MK886 e infectados com bacilos da cepa SV068; enquanto que mais UFCs foram recuperadas após o tratamento com ácido caféico e infecção com a cepa SV009. Com relação a formação de corpúsculos lipídicos (CLs), observamos um maior número destes quando macrófagos alveolares foram infectados com bacilos da cepa SV068. Ainda, observamos diminuição de CLs quando tratados com MK886 ou ácido caféico. Os bacilos da cepa SV068 foram mais fagocitados, mas os macrófagos não foram muito eficazes na atividade microbicida dos mesmos. Nos experimentos in vivo vimos que camundongos balb/c infectados com a cepa SV068 morrem mais e o tratamento com MK886 parcialmente os protege e a mortalidade não está relacionada com a maior carga bacilar no pulmão ou baço. Houve aumento no recrutamento de neutrófilos induzido pela infecção especialmente após infecção com os bacilos da cepa SV068, sendo que o tratamento com MK886 inibe significativamente o recrutamento quando comparado à infecção com os bacilos da cepa SV009. Células mononucleares também foram recrutadas e permaneceram aumentadas até o final do período observado, sem muitas diferenças significativas quando comparamos a infecção com os isolados SV009 e SV068. A produção de nitrito também encontrou-se elevada em animais infectados com bacilos da cepa SV068. A análise histopatológica dos pulmões dos animais infectados mostrou intensa reação inflamatória com maior comprometimento do parênquima pulmonar dos camundongos infectados bacilos da cepa SV068, com intensa deposição de colágeno e multiplicação bacilar. Encontramos diferenças significativas em relação à producão de citocinas IL-6, IL-10, IL-1, IFN-, TNF- and IL-12 após infecção de 30 e 60 dias com as cepas SV009 e SV068. Também mostramos que há diferenças na produção de LTB4 e PGE2 após 30 e 60 dias de infecção com as cepas SV009 e SV068 em células do camundongos balb/c. Experimentos com animais 129 e 5LO-/- infectados com as duas cepas também foram realizados, e vimos que os animais 5LO-/- são mais suscetíveis à infecção especialmente quando infectados com a cepa SV068. Sugerimos que as cepas são diferentes, mas dependentes de um conjunto de fatores, e nossos dados sugerem que dentre estes mecanismos a produção de TNF- e também de mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2) estão envolvidos. / The mechanisms that confer resistance to Mycobacterium tuberculosis (Mtb) for destruction by the host, in addition to its ability to retain and/or multiply within phagocytic cells are still poorly understood. Our research group has contributed to the understanding of the role of lipid mediators, including prostaglandins (PGs) and leukotrienes (LTs) in tuberculosis. PGs inhibit Th1 cell immune response, cytokine production and phagocytosis, thus facilitating the infection. LTs are involved in the leukocytes recruitment, and modulation of cytokine synthesis, phagocytosis and microbicidal mechanisms enhancement, and contribute to the elimination of the mycobacteria. In this project, we evaluated in vivo and in vitro the lipid mediators production induced by Mtb strains isolated from patients with active tuberculosis. We demonstrated in this study that alveolar macrophages infected with bacilli from SV009 strain lead to an increase of TNF- production and nitrite, than those infected with the strain SV068. In contrast, alveolar macrophages infected with bacilli from SV068 strain induced more LTB4 production when compared to SV009 infection. We obtained higher recovery colony forming units (CFU) of alveolar macrophages treated with MK886 and infected with bacilli from SV068 strain; while more CFUs were recovered after treatment with caffeic acid and infection with bacilli from SV009 strain. Regarding the lipid bodies (LBs) formation, we observed a greater number of these structures, when alveolar macrophages were infected with bacilli from SV068 strain. Still, we observed a decrease of LBs when the macrophages were treated with MK886 and caffeic acid. Bacilli from SV068 strain were more phagocytosed, but macrophages were not very effective in the microbicidal activity. In the in vivo experiments we found that mice infected with SV068 strain die more than the other and MK886 treatment partially protects the mice, besides, the mortality is not related to the higher bacterial load in the lung or spleen. There was an increase in neutrophil recruitment induced after infection, especially after infection with SV068 strain, and treatment with MK886 significantly inhibits recruitment when compared to infection with SV009 strain. Mononuclear cells were also recruited and remained increased until the end of the observed period, without many significant differences when comparing infection with SV009 and SV068 strains. The nitrite production was also found greater in animals infected with bacilli from SV068 strain. Histopathological analysis of the infected mice lungs showed an intense inflammatory reaction with greater impairment of the mice lungs when infected with bacilli from SV068 strain with an intense collagen deposition and multiplication of bacilli. We suggest that the SV068 strain is more virulent and participates of the immune response by lipid mediators dependent mechanisms.