Orientador : Maria do Carmo Alberto-Rincon / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vidsiunas_AlexKors_M.pdf: 4579118 bytes, checksum: 9afb82105a9c090fb9520d36d766a70a (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

The progesterone (P4) produced by the corpus luteum (CL) is essential for maintenance of pregnancy. On the other hand, the interferon tau (IFNT) produced by the embryo during elongation process, besides being the primary signal for recognition, also is responsible for maintenance of the CL during early pregnancy. The presence of oxytocin receptors (OXTR) in endometrium during expected time of luteolysis is determinant for trigger the uterine release of prostaglandin F2∝ (PGF), which is in charge of CL regression. The IFNT avoid the luteolysis by suppressing the OXTR appearance. However, during second month, accessory CLs are able to regress, indicating that the PGF release occurs with the advancing of the pregnancy and the mechanisms that initiated luteolysis are recovered. Therefore, failures in maintenance of the CL can cause luteolysis and pregnancy loss during this period of 30 to 60 days, which is one of the most important problems in reproductive efficiency in cattle, specially when in vitro produced (IVP) embryos are transferred. Two experiments were designed to study this factors, focused on point when uterus recover its PGF release during pregnancy and to identify possible differences between those mechanisms on pregnancies from IVP or artificial insemination (AI) embryos. The first study evaluated circulating PGF metabolite (PGFM) after an oxytocin challenge throughout first two months of pregnancy in lactating Holstein cows. Treatment with oxytocin did not affected PGFM concentration in d11 pregnant (P) and non-pregnant (NP), on d18 had a little increase in P cows, while increased 2-fold in NP cows. Oxytocin-induced PGFM in P cows on day 25 was greater than d18 P, however was lower than P cows on d53 and d60. Days 32, 39 and 46 of pregnancy had intermediate response. The second study evaluated the oxytocin-induced PGFM in Nelore cows pregnant from AI or IVP embryos on days 17 and 31, and its association with factors that can impact in success of the pregnancy, such as P4 levels, conceptus length on d18 and size of the embryo on d32. Also, OXTR and interferon-stimulated gene 15 (ISG15) gene expression were evaluated and located in uterine endometrium. Embryo size on d32 and P4 on d31, were higher in AI than IVP. Cows from IVP on d17 presented lower oxytocin-induced PGFM than AI in the same day, however, d31 for both groups had higher PGF release after oxytocin. On d31 there was similar PGFM increase in synchronized non-inseminated group (NI). The OXTR are highly suppressed on pregnant cows on d18, especially in IVP group, but were high expressed in NI cows and on d32 for both groups, AI being higher than IVP at this day. The ISG15 had irrelevant expression on NI and d32 groups, while had extremely high expression in d18 pregnant cows for both groups. Concluding, the CL in early pregnancy is maintained by PGF release suppression, while during second month there is oxytocin-induced PGF release, suggesting that other mechanisms are responsible for maintaining CL after d25. In addition, these results demonstrate there are signaling differences between IVP and AI pregnancies, impacting the molecular and endocrine environment that influences PGF release during these time points. / A progesterona (P4) produzida pelo corpo lúteo (CL) é essencial para a manutenção da gestação. Por sua vez, o interferon tau (IFNT) produzido pelo embrião durante o processo de alongamento, além de ser o sinal primário para reconhecimento e manutenção da gestação também é responsável pela manutenção do CL durante a gestação inicial. A presença de receptores de ocitocina (OXTR) no endométrio no momento esperado da luteólise é determinante para liberação uterina de prostaglandina F2∝ (PGF), a qual é responsável pela regressão do CL. O IFNT evita a ocorrência da luteólise por meio da supressão da expressão de OXTR no endométrio. Entretanto, durante o segundo mês de gestação, CLs acessórios, principalmente contralaterais são capazes de regredir, indicando que ocorre liberação de PGF pelo útero conforme a gestação avança, e os mecanismos que iniciam a luteólise são restabelecidos. Portanto, falhas na manutenção do CL podem causar luteólise e perdas gestacionais de 30 para 60 dias, um dos importantes problemas de eficiência reprodutiva em bovinos, principalmente quando embriões produzidos in vitro (PIV) são transferidos. Dois estudos foram delineados para estudar estes fatores, com foco em determinar o momento em que o útero gravídico retoma a liberação de PGF, e identificar prováveis diferenças entre estes mecanismos em gestações de embriões PIV ou de inseminação artificial (IA). O primeiro estudo avaliou a concentração circulante do metabólito de PGF (PGFM) após desafio com ocitocina durante os primeiros dois meses de gestação em vacas Holandesas lactantes. O tratamento com ocitocina não afetou a concentração de PGFM em vacas de d11 prenhes (P) e não-prenhes (NP), no d18 apresentou um ligeiro aumento em vacas P, enquanto aumentou cerca de duas vezes em relação ao nível basal em vacas NP. O aumento de PGFM induzido por ocitocina em vacas P no dia 25 foi maior que P em d18, entretanto foi menor que vacas P nos dias 53 e 60. Os dias 32, 39 e 46 da gestação tiveram resposta intermediária. O segundo estudo avaliou a PGFM circulante em resposta a ocitocina em vacas Nelore prenhes de embriões PIV ou IA, nos dias 17 e 31 de gestação, e sua associação com fatores que podem impactar no sucesso da prenhes, como P4 circulante, tamanho de concepto no d18, e o tamanho de embrião no d32. Além disso, foi avaliada e localizada a expressão de OXTR e do gene estimulado por interferon 15 (ISG15) no endométrio uterino. O tamanho de embrião no dia 32 e a P4 circulante no dia 31 foram maiores no grupo IA. Vacas do grupo PIV d17 apresentaram menor resposta a ocitocina na concentração de PGFM do que as de IA no mesmo dia, contudo no dia 31 ambos os grupos tiveram maior resposta do que PIV d17. As vacas do d31 dos dois grupos tiveram aumento na PGFM similar às vacas não-inseminadas (NI). Os OXTR foram altamente suprimidosnas vacas prenhes do d18, especialmente no grupo PIV, mas com alta expressão em vacas NI e no dia 32 para os dois grupos, sendo a IA com maior expressão que a PIV neste dia. O gene ISG15 apresentou expressão irrelevante em NI e d32 para IA e PIV, mas apresentou expressão extremamente alta no d18 nos dois grupos prenhes. Conclui- se que o CL na gestação inicial é mantido pela supressão da liberação de PGF, enquanto que no segundo mês, ocitocina induz liberação de PGF, sugerindo que outros mecanismos regem a manutenção do CL a partir do dia 25. Além disso, nossos resultados demonstram que há diferenças entre a sinalização de gestações provenientes de embriões PIV e IA, que impactam no ambiente molecular e endócrino, influenciando a liberação de PGF nestes momentos.

Os AINEs constituem uma importante classe de fármacos com aplicações terapêuticas que já têm sido utilizadas por mais de um século. A evolução do tratamento de doenças inflamatórias crônicas, tais como artrite reumatóide e a osteoartrite tem seu marco a partir da indometacina, um dos representantes dos AINEs tradicionais, para posterior ascensão e mais recentemente o desuso de inibidores com grande seletividade para PGHS-2. O esforço para a descoberta de um fármaco mais seguro e eficaz continua a ser um desafio e a busca por novos agentes antiinflamatórios e analgésicos tem levado ao planejamento e a obtenção de inúmeras acil e arilidrazonas ativas de diversos padrões estruturais. Existem vários ligantes ativos capazes de atuar sobre a cascata do ácido araquidônico cujos resultados identificaram as subunidades acil e arilidrazônicos como grupo farmacofórico importante para inibição do processo inflamatório. Apesar da racionalização dos resultados obtidos e de estudos da relação estrutura-atividade no perfil biológico das subunidades acil e arilidrazonas, não foi possível até o momento identificar de fato o mecanismo de ação de tais grupamentos. O safrol, que é um alilbenzeno de distribuição ampla no reino vegetal, possui propriedades físico-químicas interessantes para ser utilizado como um produto de partida para a síntese das novas moléculas planejadas, sendo amplamente empregado em projetos de pesquisas no Laboratório de Fitoquímica e Química Medicinal (LFQM) na Universidade Federal de Alfenas (Unifal- MG). Este trabalho descreve o planejamento e síntese de novos derivados indanohidrazônicos candidatos a protótipos de fármacos anti-inflamatórios. A rota sintética foi planejada em três etapas, utilizando reagentes de baixo custo e metodologias relativamente simples. Os compostos planejados e obtidos foram avaliados com o intuito de se observar o efeito anti-inflamatório a partir de ensaios preliminares (número de contorções abdominais induzidas por ácido acético) realizadas no Instituto Biomédico da Universidade Federal Fluminense – UFF. Foi possível identificar que todos os congêneres apresentaram inibição sendo que os mais ativos da série das moléculas sintetizadas foram os derivados (1c) e (1e) com 51,0% e 48,6% de inibição das contorções abdominais induzidas por ácido acético, respectivamente. / NSAIDs are an important class of drugs with therapeutic applications that have already been used by more than a century. The evolution of treatment of chronic inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis and osteoarthritis has its mark from indomethacin, one of the representatives of traditional NSAIDS for later rise and more recently the disuse of inhibitors with high selectivity for PGHS-2. The effort to discover safer and more effective drug remains a challenge and the search for new anti-inflammatory agents and analgesics have led to the planning and the discovery of numerous active acyl and aryl-hydrazones. And there are several active ligands able to act on the arachidonic acid cascade results identified subunits acyl and aryl-hydrazones as important pharmacophore for inhibition of the inflammatory process. Despite the rationalization of the results and studies of structure-activity relationship in the biological profile of the subunits acyl and aryl-hydrazones, we could not yet identify because of the mechanism of action of such groups. Safrole, which is a allylbenzene wide distribution in the plant kingdom, has interesting physical and chemical properties for use as a starting product for the synthesis of new molecules designed and is widely used in research projects at the Laboratory of Phytochemistry and Medicinal Chemistry . This paper describes the design and synthesis of new indane-hydrazone candidates prototype antiinflammatory drugs. The synthetic route was planned in three stages, using reagents of low cost and relatively simple methods. The compounds obtained were planned and evaluated in order to observe the anti-inflammatory effect from preliminary tests (number of writhing induced by acetic acid) held in the Biomedical Institute of Universidade Federal Fluminense - UFF. It was possible to identify all congeners showed that inhibition was the most active of the series of synthesized molecules was derived (1c) and (1e) with 51.0% and 48.6% inhibition of writhing induced by acetic acid. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O processo de morte por apoptose pode ser dividido em duas vias: intrínseca e extrínseca. A sinalização via FAS (extrínseca) pode ocorrer independente (células Tipo I) ou dependente da mitocôndria (células Tipo II). É importante considerar que: 1) Resultados prévios mostraram que doses subletais de CHX foram capazes de sensibilizar células Tipo I e Tipo II à apoptose e de converter células Tipo II em Tipo I; 2) Um dos mecanismos envolvidos pode ser o recrutamento de FAS para as \"balsas lipídicas\"; 3) A PGE2 ativa PKA pelo aumento de cAMP via EP2 e EP4, que fosforila ezrina, envolvida nesse processo; 4) A PGE2 pode induzir apoptose em linhagens celulares e sensibilizá-las a esse processo. Assim, formulamos a hipótese de que a PGE2 poderia, assim como a CHX, sensibilizar certas células à apoptose e converter células Tipo II em Tipo I. Esse efeito não foi observado em células DO11.10 nas quais a apoptose foi induzida por CD95L solúvel e em células Tipo I e Tipo II, nas quais a apoptose foi induzida pelo anticorpo agonista anti-FAS. / The death process by apoptosis can be divided into two pathways: intrinsic and extrinsic. The signaling by FAS (extrinsic) may occur in a mitochondrial independent (Type I cells) or dependent (Type II cells) manner. It is important to consider that: 1) Previous results demonstrated that sub-lethal doses of CHX were able to sensitize type I and type II cells to apoptosis and to convert type II cells into type I; 2) One of the mechanisms involved can be FAS recruitment to \"lipid rafts\"; 3) PGE2 activates PKA by increasing cAMP via EP2 and EP4, which phosphorylates of Ezrin, involved in this process; 4) PGE2 can induces apoptosis in cell lines and can to sensitize them to this process. So, we hypothesized that PGE2 could, similarly to CHX, sensitize certain cells to apoptosis and convert type II cells into type I. This effect was not observed in DO11.10 cells in which apoptosis was induced by soluble CD95L and in type I and type II cells, in which apoptosis was induced by agonist anti-FAS antibody.

Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Banca: Flávia Simone Munin / Banca: Fábio Ermínio Mingatto / Resumo: Em fêmeas bovinas, a liberação de prostaglandina F2a (PGF2a) pode ser induzida in vivo pelo estradiol (E2), entretanto, o papel do E2 na síntese de PGF2a ainda não foi esclarecido. Considerando que as concentrações plasmáticas de PGF2a aumentam 3,5 horas após a aplicação de E2 in vivo, acredita-se que o E2 ative não somente enzimas, mas também estimule a síntese de proteínas essenciais para a produção de PGF2a, como a PKC e PLA2. O presente estudo objetivou avaliar o efeito do E2 no incremento da concentração das proteínas totais no endométrio e na modificação da composição protéica de explantes endometriais de fêmeas bovinas tratadas com E2 no 17º dia do ciclo estral. A hipótese é que a administração de E2 em fêmeas bovinas no 17º dia do ciclo estral incrementa a concentração de proteínas no endométrio e modifica a composição protéica nos explantes endometriais. Para tanto, fêmeas bovinas mestiças (Bos taurus taurus vs Bos taurus indicus) foram tratadas no 17° dia do ciclo estral, via intravenosa, com 0mg (Grupo Controle; n=6) ou 3mg de E2 (Grupo E2; n=6) e abatidas duas horas após o tratamento. Explantes endometriais foram isolados e submetidos à extração de proteínas totais. As amostras de proteínas, referentes aos explantes de cada animal, foram avaliadas por eletroforese unidimensional em gel de poliacrilamida 10% SDS-PAGE e coradas com Coomasie Blue ou Nitrato de Prata. A concentração de proteínas totais não diferiu entre os grupos (p=0,1158) e foi de 6296,10 + 439,90μg/mL para o Grupo Controle e de 8426,56 + 1156,00μg/mL para o Grupo E2. Nos géis corados com Coomasie Blue foram identificadas 18 bandas protéicas e não foi observada diferença significativa (p>0,05) no perfil protéico dos explantes endometriais. Na coloração com Nitrato de Prata, foram identificadas 12 bandas protéicas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In cows the release of prostaglandin F2a (PGF2a) can be induced in vivo by estradiol (E2), however, the role of E2 in the synthesis of PGF2a has not yet been clarified. Considering that plasma concentrations of PGF2a increased 3.5 hours after application of E2 in vivo, it is believed that E2 not only active enzymes, but also stimulates the synthesis of essential proteins for the production of PGF2a, as PKC and PLA2 . This study aimed to evaluate the effect of E2 in increasing the concentration of total protein in the endometrium and changes in protein composition of endometrial explants from cows treated with E2 at the 17th day of estrous cycle. The hypothesis is that the administration of E2 in cows on the 17th day of the estrous cycle increases the concentration of protein in the endometrium and changes the composition of protein in endometrial explants. Therefore, days of the estrous cycle, crossbred cows were treated at 17th day of estrous cycle intravenously with 0 mg (Control Group; n = 6) or 3 mg of E2 (E2 Group; n = 6) and killed two hours after treatment. Endometrial explants were isolated and subjected to extraction of total protein. Samples of proteins related to the explants from each animal were analyzed by one-dimensional electrophoresis on polyacrylamide gel 10% SDSPAGE and stained with Coomasie Blue or silver nitrate. The concentration of total protein did not differ between groups (p = 0.1158) and was 6296.10 + 439.90μg/mL for the Control Group and of 8426.56 + 1156.00μg/mL for E2 Group. In gels stained with Coomasie Blue were identified 18 protein bands and there was no significant difference (p>0.05) in the protein profile of endometrial explants. Staining with Silver Nitrate, was identified 12 protein bands and was found in E2 Group greater relative percentage of the bands for the molecular weight of... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sergio Ricardo Batlouni / Coorientador: Rafael Yutaka Kuradomi / Banca: Fábio Rosa Sussel / Banca: Laura satiko Okada Nakaghi / Resumo: O principal objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações plasmáticas de 17α,20β-dihidroxi-4-pregnen-3-one (DHP), Estradiol 17β (E2), Testosterona (T) e Prostaglandina F2α (PGF2α) e a distribuição percentual dos diferentes tipos de ovócitos presentes nos ovários ao longo do processo de hipofisação de pacu (Piaractus mesopotamicus) com ou sem uso de PGF exógena. Para isto, 23 fêmeas foram distribuídas em cinco tratamentos, com indução dividida em duas doses com intervalo de 24 horas: (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina) (T1); (0,2 mL.kg-1 solução salina) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 ml PGF2α) (T2); (0,6 mg.kg-1 EBHC (extrato bruto de hipófise de carpa)) + (0,2 mL.kg-1 solução salina e 2 mL PGF2α) (T3); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC) (T4); (0,6 mg.kg-1 EBHC) + (5,4 mg.kg-1 EBHC e 2 mL PGF2α) (T5). Foram coletadas amostras de sangue e ovócitos para análise dos níveis plasmáticos de PGF2α, DHP, E2 e T e avaliação dos tipos de ovócitos em quatro períodos após a segunda dose. O uso de PGF2α exógena provocou um pico plasmático de PGF2α uma hora após a segunda dose hormonal. A hipofisação, com ou sem o uso de PGF2α exógena, provocou pico plasmático de PGF2α no momento da desova. O uso de PGF2α exógena juntamente hipofisação (T5) eleva a taxa de ovulação de pacu em relação a fêmeas apenas hipofisadas (T4), provavelmente em função de níveis de GVBD e de PGF2α superiores de T5, quatro horas após a segunda dose hormonal. / Abstract: The main objective of this study was to determine the plasma concentrations of 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP), 17β-Estradiol (E2), Testosterone (T) and Prostaglandin F2α (PGF2α) and the different types of oocytes present in the ovaries throughout the pacu (Piaractus mesopotamicus) hypophysation process with or without the use of exogenous PGF2α. To that, 23 females were distributed in five treatments, with induction divided into two doses with a 24-hour interval: (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline) (T1); (0.2 mL.kg-1 saline) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T2); (0.6 mg.kg-1 CPE (crude pituitary extract)) + (0.2 mL.kg-1 saline and 2 mL PGF2α) (T3); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE) (T4); (0.6 mg.kg-1 CPE) + (5.4 mg.kg-1 CPE and 2 ml PGF2α) (T5). Blood and oocyte samples were collected for analysis of plasma levels of PGF2α, DHP, E2 and T in four periods after the second dose. The use of exogenous PGF2α caused a plasma peak of PGF2α one hour after the second hormonal dose. Hypophysation, with or without the use of exogenous PGF2α, caused a plasma peak of PGF2α at the time of spawning. The use of exogenous PGF2α together with hypophysation (T5) increased the pacu ovulation rate in relation to hypophysation only (T4), probably as a result of higher GVBD and PGF2α levels of T5, four hours after the second hormonal dose. / Mestre

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Ian Martin / Resumo: O objetivo do trabalho foi estudar os principais genes associados à produção, manutenção e regressão do corpo lúteo (CL) e correlacionar os achados com a produção de progesterona em vacas holandesas não lactantes. As vacas foram sincronizadas com o protocolo CIDR-SYNCH e distribuídas aleatoriamente em dois ambientes: termoneutro (n = 12) com temperatura 24°C e umidade 50%, estresse calórico (n = 12) com temperatura 38°C e umidade 70%. O dia zero (D0) foi definido como o dia da segunda aplicação de GnRH, em cada ambiente foram conformados tres tratamentos diferentes ao D7, para cada tratamento foram empregadas 4 vacas,: tratamento 1: 2 mL solução salina; tratamento 2: (25 mg) de Lutalyse® ; e tratamento 3: (12,5 mg) de Lutalyse®. O grau de estresse calórico foi determinado pelo índice de temperatura umidade. Concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram determinadas por quimioluminiscencia imediatamente antes e a cada 6 horas após do tratamento com PGF2α até 24 horas. Posteriormente, a coleta realizou-se a cada 12 horas até às 48 horas. A frequência respiratória, cardíaca e temperatura retal foram mensuradas a cada 12 horas durante 7 dias; a temperatura vaginal foi determinada durante 7 dias com leituras a cada 10 minutos. A frequência respiratória, temperatura retal e vaginal foram superiores no ambiente de estresse calórico em relação ao termoneutro (P < 0.05); a frequência cardíaca não diferiu entre os dois ambientes (P > 0.05). As concentrações de P4 não diferiram (P > 0,05) entre os ambientes e seus respetivos tratamentos. Porém, na avaliação individual dos ambientes observou-se que, as vacas que receberam tratamento com ½XPGF2α independente do ambiente apresentaram uma diminuição inicial de P4 até às 18 horas com recuperação em momentos subsequentes, evidenciando uma luteólise parcial. Correlação positiva (r=0,5) foi evidenciada entre o tamanho do corpo lúteo e produção de... / Abstract: The objective was to study the main genes associated with the production, maintenance and regression of the corpus luteum (CL) and correlate the findings with the production of progesterone in non-lactating Holstein cows, besides clarifying physiological mechanisms involved in the response to heat stress. The cows were synchronized with CIDR-SYNCH protocol and randomly distributed in two environments: thermoneutral (n = 12), temperature 24 ° C, humidity 50%; heat stress (n = 12), temperature 38 ° C, humidity 70%. The D0 was defined as the day of the second application of GnRH. In each environment three different treatments were performed and in D7, for each treatment 4 cows were used. Treatment 1: 2 ml saline; Treatment 2: 25 mg Lutalyse®; and Treatment 3: 12.5 mg Lutalyse®. The degree of heat stress was determined by the temperature and humidity index. Blood samples were obtained for determining plasma concentrations of progesterone (P4) by chemiluminescence immediately before and every 6 hours after treatment with PGF2α, until 24 hours. Subsequently, the collection was performed every 12 hours up to 48 hours. The respiratory rate, heart rate and rectal temperature were measured every 12 hours for 7 days; vaginal temperature was determined over 7 days with readings every 10 minutes. The respiratory rate, rectal and vaginal temperature were higher in heat stress environment when compared to thermoneutral (P <0.05). Heart rate did not differ between the two environments (P> 0.05). There was no difference (P> 0.05) in the concentration of P4 when the environments and their respective treatments were compared. However, when evaluating individually the environments, it was observed that the cows who received the treatment with ½XPGF2α in heat stress and thermoneutral environment showed an initial P4 decrease up to 18 hours with subsequent recovery, showing a partial luteolysis. This fact demonstrates that heat stress caused no ... / Mestre

Ciclooxigenase (COX) é a enzima marca-passo na rota metabólica onde o ácido araquidônico é convertido em prostaglandinas. COX-2 é a isoforma que é induzida em sítios de lesão/inflamação e expressa constituivamente em alguns poucos tecidos, como o sistema nervoso central. Tem sido sugerido que a COX-2 tem um papel importante em várias doenças neurodegenerativas, incluindo epilepsia. Neste estudo nós testamos se o celecoxib, um inibidor seletivo da COX-2 (0,2; 2 ou 20 mg/kg, p.o.) protege contra as convulsões, carbonilação de proteínas e inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por pentilenotetrazol (PTZ), um agente convulsivante clássico que tem sido largamente usado para estudo da epilepsia e na busca de novos compostos com atividade anticonvulsivante. A administração de celecoxib (2 mg/kg) atenuou as convulsões comportamentais e eletrográficas e a inibição da atividade da Na+,K+- ATPase induzidas por PTZ no hipocampo e córtex cerebral de ratos, sugerindo um papel facilitatório para COX-2 nos efeitos do PTZ. Já que existem evidências que a PGE2 é um mediador chave na via de sinalização da COX-2, nós decidimos investigar o efeito da administração intracerebroventricular de anticorpos anti-PGE2 (4 μg/2 μl, i.c.v.) sobre os episódios convulsivos e inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por PTZ. A administração de anticorpos anti- PGE2 atenuou as convulsões comportamentais e eletrográficas e a inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por PTZ no hipocampo e córtex cerebral de ratos. Em outro experimento, nós mostramos que a administração intracerebroventricular de PGE2 (100 ng/2 μl, i.c.v.) não causou convulsões per se, mas induziu o aparecimento de convulsões eletrográficas em combinação com uma dose subconvulsivante de PTZ (20 mg/kg, i.p.), reforçando um importante papel para PGE2 nas convulsões induzidas por PTZ. Em conjunto estes dados suportam um papel facilitatório para a via COX-2/PGE2 nas convulsões e inibição da atividade da Na+,K+-ATPase induzidas por PTZ. / Cyclooxygenase (COX) is the rate-limiting enzyme in the metabolic pathway where arachidonic acid is converted to prostaglandins. COX-2 is the isoform of cyclooxygenase which is inducible at injury/inflammation sites and expressed constitutively in a few tissues, such as the central nervous system. It has been suggested that COX-2 plays a role in several disorders, including convulsive behavior. In this study we tested whether celecoxib, a selective COX-2 inhibitor (0.2, 2 or 20 mg/kg, p.o.) protects against the convulsions, protein carbonylation and inhibition of Na+,K+- ATPase activity induced by pentylenetetrazol (PTZ; 60 mg/kg, i.p.), a classical convulsant agent that has been fairly used for the study of epilepsy and screening of new compounds with antiepileptic activity. The systemic administration of celecoxib (2 mg/kg) attenuated PTZ-induced behavioral and electroencephalographic seizures and Na+,K+-ATPase activity inhibition in the hippocampus and cerebral cortex of rats, suggesting a facilitatory role for COX-2 on the PTZ-induced effects. Since there is a bulk of evidence showing that PGE2 is a key mediator in COX-2 signaling, we decided to investigate the effect of the intracerebroventricular administration of anti-PGE2 antibodies (4 μg/2 μl, i.c.v.) on the convulsive episodes and inhibition of Na+,K+- ATPase activity induced by PTZ. Administration of anti-PGE2 antibodies attenuated PTZ-induced behavioral and electroencephalographic seizures and Na+,K+-ATPase activity inhibition in the hippocampus and cerebral cortex of rats. In a reverse approach, we showed that intracerebroventricular administration of PGE2 (100 ng/2 μl, i.c.v.) did not cause electrographic alterations per se, but elicits electroencephalographic convulsions if given in combination with a subconvulsant dose of PTZ (20 mg/kg, i.p.), further suggesting an important role for this prostaglandin in the convulsant effects of PTZ. Collectively, these data support a facilitatory role for the COX-2/PGE2 pathway in PTZ-induced convulsions and Na+,K+-ATPase activity inhibition.

Orientador: Alexandra Ivo de Medeiros / Coorientador: Naiara Naiana Dejani / Banca: Alexandra Ivo de Medeiros / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Fabiani Gai Frantz / Resumo: A resolução de reações inflamatórias é caracterizada pela fagocitose de células mortas, processo denominado eferocitose. Como consequência deste processo, há a produção dos mediadores anti-inflamatórios, fator de transformação de crescimento (TGF-β), prostaglandina E2 (PGE2) e a interleucina-10 (IL-10). No entanto, atualmente sabe-se que a fagocitose de células apoptóticas infectadas direciona a produção de mediadores inflamatórios interleucina-6 (IL-6), interleucina-23 (IL-23) e TGF-β, Resultados obtidos recentemente por nosso grupo demonstram que a fagocitose de células apoptóticas infectadas (iAC) com Escherichia coli por células dendríticas promove, além da produção de TGF-β, interleucina-1β (IL-1β) e IL-6, a síntese de altos níveis de PGE2. Além disso, observamos que a PGE2, via receptor de prostaglandina E2 4 (EP4), inibe a diferenciação de linfócitos Th17 por meio da modulação da expressão do receptor de IL-1 (IL-1R) em linfócitos Th. Desta forma, o objetivo deste trabalho é elucidar o mecanismo pelo qual PGE2, oriunda da eferocitose de células apoptóticas infectadas, inibe a expressão de IL-1R e a diferenciação de linfócitos Th17. Os resultados obtidos demonstram que PGE2, via receptor EP4, induz a ativação de adenilato ciclase/PKA/EPAC, e que esta via de sinalização promove além da inibição de IL-1R, a inibição de um importante fator de transcrição envolvido na diferenciação de linfócitos Th17, STAT3. Sabe-se que a PGE2 pode exercer suas funções supressoras na difere... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The expression of inflammatory reactions is characterized by phagocytosis of dead cells, a process called eferocytosis. As a consequence of this process, there is the production of anti-inflammatory mediators, transforming growth factor (TGF-ȕ), prostaglandin E2 (PGE2) and an interleukin-10 (IL-10). However, it is now known that phagocytosis of infected apoptotic cells is one of the responsible for the production of interleukin-6 (IL-6), interleukin-23 (IL-23) and TGF-ȕ lung mediators. The results obtained by our group demonstrate that the phagocytosis of infected apoptotic cells (iCA) with Escherichia coli by dendritic cells promotes, in addition to the production of TGFȕ, interleukin-1ȕ (IL-1ȕ) and IL-6, high levels of PGE2. In addition, PGE2, via the prostaglandin E2 receptor (EP4), inhibits differentiation of Th17 lymphocytes by modulating IL-1 receptor (IL-1R) expression in Th lymphocytes. Thus, the objective of this work is to elucidate the mechanism by which PGE2, derived from the ectocytosis of infected apoptotic cells, inhibits the expression of IL-1R and differentiation of Th17 lymphocytes. The results obtained demonstrate that PGE2, via the EP4 receptor, induces the activation of adenylate cyclase / PKA / EPAC, and that this signaling pathway promotes in addition to the inhibition of IL-1R, the inhibition of an important transcription factor involved in the differentiation of Th17 lymphocytes, the STAT3. PGE2 is known to exert its suppressor functions in the differentiation of Th17 cells by the activation of SOCS, as well as to promote the activation of PI3K. However, despite the presence of PGE2 enhancing socs1 expression, inhibition of STAT3... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:47:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213750.pdf: 1651506 bytes, checksum: 51f72f26f26443575eadcdbf94c02d1f (MD5) / Coletivamente, os resultados do presente estudo fornecem uma visão compreensiva a respeito dos possíveis mecanismos através dos quais a BK induz contração ou relaxamento na TC, com ênfase no papel do epitélio e dos prostanóides presentes no mesmo. A sinalização intracelular envolvida nas respostas contracturantes e relaxantes para a BK foram também objeto de investigação no presente estudo, e os resultados obtidos demonstram a participação de um complexo mecanismo de sinalização intracelular, inclui entre outros, a participação da COX-2 presente constitutivamente, tanto no efeito contrátil como no relaxante, com liberação de elevados níveis de PGE2 que, por sua vez, ativaria receptores EP3. Acopladas às ações da BK na TC, estariam também as enzimas eNOS e nNOS responsáveis pela liberação de NO, tanto do epitélio, como dos terminais nervosos e/ou músculo liso, onde exercem um importante efeito relaxante sobre este tecido. Do ponto de vista das vias intracelulares, os resultados do presente estudo indicam que vias de sinalização importantes e comumente associadas com as ações da BK. Um resultado importante, foi a observação de que a ativação da tirosina quinase ligada ao fator de crescimento epidermal (EGFR-Trk) poderia estar presente na via de sinalização do relaxamento da BK na TC. Soma-se a isso o possível envolvimento da bomba Na+-K+-ATPase com a própria EGFR-Trk. Finalmente, na ativação dos receptores B2 é comum a dessensibilização e os resultados do presente estudo mostram que na TC, apenas a resposta contrátil à BK é dessensibilizante, um efeito que pode ser completamente prevenido por inibidores da COX-2. Assim, com base nos presentes resultados, pode-se afirmar que a BK, em conjunto com os prostanóides e o NO exerce um papel modulador contrátil e relaxante importante nas vias aéreas de cobaias.