The aim of this thesis was to assess the presence of fusion gene TMPRSS2:ERG and expressions of PCA3, miR23b, miR26 and miR221 in PCa. PSA was measured in peripheral blood and tumor tissue (FFPE samples). The presence of fusion gene TMPRSS2:ERG and expression of PCA3 gene and miRNA in FFPE tumor tissue was analysed by RT real-time PCR. This determination would help to identify patients with high-risk tumors.

Insulin-like growth factor-I (IGF-I) is the only known potentially modifiable risk factor for prostate cancer. Intake of dietary protein, especially from dairy products, might also be associated with risk and with circulating IGF-I, but it is not clear if amino acids play a role in these relationships. Moreover, investigations of circulating concentrations of metabolites might reveal novel risk factors for prostate cancer. This thesis investigates plasma concentrations of amino acids and other metabolites in relation to protein intake, IGF-I, and prostate cancer risk using data from the European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition (EPIC). To characterise plasma metabolite profile in men consuming markedly different amounts and types of animal products (meat-eaters, fish-eaters, vegetarians and vegans), cross-sectional analyses of 392 men in the EPIC-Oxford sub-cohort were conducted. Of 21 amino acids, six varied significantly by diet group, and the metabolite profile of vegans was different from those of other diet groups owing to lower concentrations of several glycerophospholipids and sphingolipids. In a case-control study nested within EPIC, with a mean follow-up time of seven years, the relationship of plasma metabolites with risk of prostate cancer overall, by time to diagnosis, by tumour characteristics, and with risk of prostate cancer death, was investigated. Data from 1,077 matched sets suggested that seven metabolites, from various classes, were associated with risk of prostate cancer overall (p < 0.05). After correction for multiple testing, 12 glycerophospholipids were inversely associated with risk of advanced prostate cancer (the strongest OR_1SD = 0.54; 95%CI: 0.40-0.72). In multivariate analyses, including data from 1,593 matched sets, principal component analysis (PCA) and treelet transform (TT) were used to identify patterns in metabolite profile, five of which were associated with risk of more aggressive tumour sub-types (high grade, advanced and aggressive disease) and/or prostate cancer death. There was a ≈ 50% lower risk of advanced and high grade prostate cancer in men with metabolite profiles characterised by high glycerophospholipids and sphingolipids (for advanced OR_{TT, top vs bottom third} = 0:48; 95%CI: 0:31-0:74), with similar results for high grade and PCA). To investigate if associations between protein intake and circulating IGF-I may be mediated by plasma amino acid concentrations, cross-sectional analyses of amino acid concentrations with protein intake and IGF-I concentrations were carried out in 1,697 and 1,142 control participants, respectively, from the nested case-control study. Dairy protein intake was positively associated with concentrations of branched-chain amino acids and several other essential amino acids, while plant protein intake was strongly associated only with histidine. Serum IGF-I was positively associated with arginine and inversely with ornithine and certain amino acid ratios. In conclusion, men with different dietary habits with respect to the consumption of protein types have different amino acid and metabolite profiles, and metabolite concentrations may be associated with risk of more high-risk prostate cancer sub-types (high grade, advanced and aggressive disease) and prostate cancer death. Further large-scale studies are needed to determine if metabolites play a role in aetiology or are markers of sub-clinical prostate cancer.

La voie de signalisation du récepteur des androgènes (RA) reste une cible thérapeutique privilégiée dans les cancers de la prostate (CaP). Ce travail de thèse a abordé trois thématiques : 1) l’identification et l’étude fonctionnelle des mutations du RA, 2) l’étude du lien existant entre les RA tronqués, résultant de mutations non-sens, et l’angiogenèse tumorale et 3) l’étude exploratoire de l’hétérogénéité tumorale dans les CaP. Au cours de la 1e partie, nous avons identifié 90 mutations du RA à l’aide d’un test fonctionnel chez la levure et émis des hypothèses concernant leur implication dans de potentiels mécanismes de résistance à l’hormonothérapie (HT). La 2e partie nous a permis de montrer un lien entre les variants tronqués et l’expression du VEGF-A, médiateur principal de l’angiogenèse. Enfin dans la dernière partie nous avons étudié, par approche de séquençage à haut-débit, l’hétérogénéité tumorale en fonction du temps et du stade de la maladie. L’ensemble du travail a permis une meilleure connaissance des altérations de la voie de signalisation du RA, leur rôle dans les étapes clés de la progression tumorale et l’évolution des anomalies génomiques. / The androgen receptor signaling pathway (AR) remains a prime therapeutic target in prostate cancer (PCa). This work focused on three topics: 1) the identification of AR mutations and their functional impact, 2) the assessment of a link between the truncated AR, resulting from nonsense mutations and tumor angiogenesis and 3) an exploratory study of tumor heterogeneity in PCa. In the first part, we identified 90 AR mutations using a yeast-based functional assay and speculated about their involvement in potential mechanisms to hormone therapy (HT) resistance. In the second part we assessed a link between the truncated AR and the overexpression of VEGF-A, the main proangiogenic factor. In the last part we investigated the tumor heterogeneity within the primary tumor and metastasis using a whole exome sequencing approach. This work leads to a better knowledge of the AR signaling pathway alterations, their role in the key steps of tumor progression and the evolution of genomic abnormalities.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Pampa Biome has a great biodiversity of plants, among them the Family Malvaceae. Despite the medicinal use of many of these plants, studies on the biological activity of these are still very scarce. This is the case of the plant known as "erva de ovelha", which is traditionally used in therapy against prostate cancer, used as tea and prepared from two species of the genus Pavonia, highlighting the Pavonia xanthogloea. Therefore, this study aimed to identify bioactive compounds in the extract and five fractions of P. xanthogloea, evaluating their antioxidant and antitumor action in the lineage of prostate cancer DU145. Additionally, the potential cytotoxic effect via pharmacogenetic studies on human red blood cells (RBCs) bearers of different genotypes of the polymorphism found in the gene of the enzyme superoxide dismutase manganese dependent (Ala16Val-SOD2). These RBCs afterwards were exposed to extract and fractions of P. xanthogloea. The results were arranged and shown as three scientific papers. Manuscript 1: The chemical composition of the extract and fractions (ethyl acetate, hexane, n-butanol, aqueous and dichloromethane) was determined by liquid chromatography of high efficiency. The antioxidant activity was determined by DPPH assay. The antioxidant activity and the cytotoxicity evaluated by exposure of human lymphocytes exposed to different concentrations of extract/fractions with and without sodium nitroprusside and H2O2. Tiliroside was found in all extracts. The aqueous and ethyl acetate fractions showed high antioxidant capacity. The crude extract (ethanol) and hexane, n-butanol and aqueous fractions reverts the ROS levels generated by H2O2. The crude extract and hexane, ethyl acetate and n-butanol fractions do not cause cytotoxicity. The aqueous fraction was cytotoxic at concentration of 300 μg/mL. The reversal of the cytotoxicity caused by SNP was dependent on the concentration and extract/fraction. The dichloromethane fraction was cytotoxic at all concentrations. The results suggest potential medicinal use of this species. Manuscript 2: The study evaluated in vitro the hemolytic effect of chelerythrine (CHE), alkaloid extracted from Zanthoxylum rhoifolium, and the possible pharmacogenetic influence of SOD2-Ala16Val in RBCs. The CHE inhibits protein kinase C activity decreasing the RBCs deformation and causing oxidative stress. Blood was collected from healthy subjects previously genotyped for the polymorphism Ala16Val-SOD2. The CHE was incubated with RBCs (1 × 109 cell/mL) at concentrations 0.1 μM, 2 μM and 8 μM. Pharmacogenetic effect was evaluated through spectrophotometric analysis of indicators of oxidative stress, lipid peroxidation, catalase, advanced oxidation protein products (AOPP) and nitrate/nitrite (NOx), and hemolysis. The RBCs were maintained under controlled conditions. The response to treatment with CHE was genotype dependent and AA RBCs were more sensitive than VV. The SOD2 plays an important role in erythropoiesis and causes an impact on the quality of RBC. Therefore, the results presented here suggest toxicogenetic influence of SOD2 in hemolytic assay using human cells. Manuscript 3: To evaluate the antitumor effect viability assays of (24 hour exposure) and cell proliferation (72 hour exposure) were performed by MTT assay and spectrophotometric analisys. The pharmacogenetic effect through the hemolysis assay by spectrophotometry. Blood was collected from healthy subjects previously genotyped for the polymorphism Ala16Val-SOD2. Both erythrocytes and tumor cells were grown under controlled conditions. Study the pattern of hemolysis associated with different genotypes of the polymorphism Ala16Val-SOD2 suggests pharmacogenetic effect. When hemolysis assay was performed for different concentrations of extract and fractions of P. xanthogloea the anti-hemolytic protective effect observed was independent of the gene SOD2. Cytotoxic and antiproliferative activity was observed in the cell lineage of prostate cancer DU145 was dependent on the type of extract/fraction and concentration, highlighting n-butanol fraction that showed strong antiproliferative activity. These results showed great similarity to antitumor activity of doxorubicin chemotherapeutic and also seem to be associated with tiliroside isolated from P. xanthogloea. The overall results match with the popular use of P. xanthogloea regarding the prostate cancer therapy. However, further investigations should be performed to evaluate the antitumor action mechanisms of P. xanthogloea. / O Bioma Pampa possui uma grande biodiversidade de plantas, entre as quais as da Família Malvaceae. Apesar do uso medicinal de muitas destas plantas, estudos sobre a atividade biológica das mesmas ainda são muito escassos. Este é o caso da planta conhecida como erva de ovelha , que é tradicionalmente utilizada na terapia contra o câncer de próstata, na forma de chá e preparado a partir de duas espécies do gênero Pavonia, com destaque a Pavonia xanthogloea. Portanto, o presente estudo teve como objetivo principal identificar compostos bioativos do extrato e cinco frações de P. xanthogloea, avaliando a sua ação antioxidante e antitumoral na linhagem de câncer de próstata DU145. Adicionalmente, o potencial efeito citotóxico via estudos farmacogenéticos em células sanguíneas vermelhas (RBCs) humanas, portadoras de diferentes genótipos do polimorfismo encontrado no gene da enzima superóxido dismutase dependente de manganês (Ala16Val-SOD2). Estas RBCs posteriormente foram expostas ao extrato e frações da P. xanthogloea. Os resultados obtidos foram organizados e apresentados sob a forma de três artigos científicos. Manuscrito 1: A composição química do extrato e frações (acetato de etila, n-butanol, hexano, aquosa e diclorometano) foi determinada por cromatografia de líquida de alta eficiência. A capacidade antioxidante foi determinada pelo ensaio do DPPH. A atividade antioxidante e a citotoxicidade avaliada através da exposição de linfócitos humanos expostos a diferentes concentrações de extrato/frações com e sem nitroprussiato sódico e H2O2. O tilirosídeo foi encontrado em todos os extratos. As frações aquosa e acetato de etila mostraram alta capacidade antioxidaente. O extrato bruto (etanólico) e frações hexano, aquosa e n-butanol revertem os níveis de ROS gerados pelo H2O2. O extrato bruto e frações hexano, acetato de etila e n-butanol não causam citotoxidade. A fração aquosa foi citotóxica na concentração de 300 μg/mL. A reversão da citotoxicidade causada pelo SNP foi dependente do extrato/fração e da concentração. A fração diclorometano foi citotóxica em todas as concentrações. O resultado sugere potencial uso medicinal desta espécie. Manuscrito 2: O estudo avaliou in vitro o efeito hemolítico da Queleritrina (CHE), alcaloide extraído da Zanthoxylum rhoifolium, e da possível influência farmacogenética da SOD2-Ala16Val em RBCs. A CHE inibe a atividade da proteina quinase C diminuindo a deformação das RBCs e causando estresse oxidativo. O sangue foi coletado de sujeitos saudáveis, previamente genotipados para o polimorfismo Ala16Val-SOD2. A CHE foi incubada com RBCs (1 × 109 cell/mL) nas concentrações 0.1 μM, 2 μM and 8 μM. O efeito farmacogenético foi avaliado através de análises espectrofotométricas de indicadores do estresse oxidativo, lipoperoxidação, catalase, produtos avançados da oxidação de proteínas (AOPP) e nitrato/nitrito (NOx), e hemólise. As RBCs foram mantidas em condições controladas. A resposta ao tratamento com CHE foi genótipo dependente e, RBCs AA foram mais sensíveis que as VV. A SOD2 tem um importante papel na eritropoiese e causa impacto na qualidade das RBC. Portanto, os resultados aqui apresentados sugerem influência toxicogenética de SOD2 em ensaio hemolítico utilizando células humanas. Manuscrito 3: Para avaliar o efeito antitumoral foram feitos ensaios de viabilidade (24 horas de exposição) e proliferação celular (72 horas de exposição) e análise espectrofotométrica pelo ensaio MTT. O efeito farmacogenético através do ensaio de hemólise, por espectrofotometria. O sangue foi coletado de sujeitos saudáveis, previamente genotipados para o polimorfismo Ala16Val-SOD2. Tanto os eritrócitos quanto as células tumorais foram cultivadas em condições controladas. O estudo do padrão de hemólise associado aos diferentes genótipos do polimorfismo Ala16Val-SOD2 sugere efeito farmacogenético. Quando foi realizado ensaio de hemólise para diferentes concentrações do extrato e frações de P. xanthogloea o efeito anti-hemolítico protetor observado foi independente do gene da SOD2. Atividade citotóxica e antiproliferativa observada na linhagem celular de câncer de próstata DU145 foi dependente do tipo de extrato/fração e concentração, com destaque a fração butanol que apresentou intensa atividade antiproliferativa. Estes resultados apresentaram grande similaridade a atividade antitumoral do quimioterápico doxirrubicina e também parecem estar associados ao tilirosídeo, isolado da P. xanthogloea. O conjunto dos resultados condizem com o uso popular da P. xanthogloea em relação a terapia do câncer de próstata. Entretanto, investigações complementares devem ser feitas para avaliar os mecanismos de ação antitumorais da P. xanthogloea.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:48:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6434.pdf: 658741 bytes, checksum: f84a8719966c44b2f043024741f1472e (MD5) Previous issue date: 2014-09-02 / Prostate cancer is the second most common cancer between men, and, despite the high incidence rate, has a good prognosis if diagnosed and treated early. Radical prostatectomy is considered the gold standard treatment, but it can cause complications, such as urinary incontinence, erectile dysfunction, urethral stenosis and injury of the rectum. It might also lead to psychological effects, due to the prostate cancer diagnosis itself and also surgical complications, which can cause symptoms of anxiety and depression, as well as loss of self-esteem. Therefore, this study aimed to evaluate self-esteem, anxiety and depression among men who went through radical prostatectomy. This was a cross sectional study with a quantitative approach. The sample consisted of 40 men who had been submitted to radical prostatectomy from 3 months to 5 years prior to this analysis, and which were treated in two different outpatient services. Two instruments were used for data collection, an instrument of socio-demographic, clinical and economic analysis, the Rosenberg self-esteem scale, in order to evaluate self-esteem, and the Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS), to evaluate anxiety and depression. The average age of the men who volunteered to this study was 65.42 years (±6.66), with average post-prostatectomy time of 21.85 months (±12.91). They presented high self-esteem rate (24.37 ± 3.92) and low anxiety (4.96 ± 3.14) and depression (3.70 ± 3.03) scores. The group with men who were between 50 and 59 years old showed lower self-esteem rates (20.86, p = 0,014). The individuals who had been diagnosed with depression had higher average age (74.00, p = 0.037) and lower self-esteem (13.00, p = 0.005). It was also observed negative correlation, of moderate magnitude, and with statistical significance, between self-esteem and the following factors: time after prostatectomy (r = -0.326), anxiety (r = -0.385) and depression. There was also a positive correlation, of moderate magnitude, between anxiety and depression (r = 0.529), with statistically significant. It is possible to conclude that these men achieved good self-esteem, anxiety and depression, and also that these variables are correlated. Only self-esteem, however, presented correlation with the post prostatectomy time. / Prostate cancer is the second most common cancer between men, and, despite the high incidence rate, has a good prognosis if diagnosed and treated early. Radical prostatectomy is considered the gold standard treatment, but it can cause complications, such as urinary incontinence, erectile dysfunction, urethral stenosis and injury of the rectum. It might also lead to psychological effects, due to the prostate cancer diagnosis itself and also surgical complications, which can cause symptoms of anxiety and depression, as well as loss of self-esteem. Therefore, this study aimed to evaluate self-esteem, anxiety and depression among men who went through radical prostatectomy. This was a cross sectional study with a quantitative approach. The sample consisted of 40 men who had been submitted to radical prostatectomy from 3 months to 5 years prior to this analysis, and which were treated in two different outpatient services. Two instruments were used for data collection, an instrument of socio-demographic, clinical and economic analysis, the Rosenberg self-esteem scale, in order to evaluate self-esteem, and the Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS), to evaluate anxiety and depression. The average age of the men who volunteered to this study was 65.42 years (±6.66), with average post-prostatectomy time of 21.85 months (±12.91). They presented high self-esteem rate (24.37 ± 3.92) and low anxiety (4.96 ± 3.14) and depression (3.70 ± 3.03) scores. The group with men who were between 50 and 59 years old showed lower self-esteem rates (20.86, p = 0,014). The individuals who had been diagnosed with depression had higher average age (74.00, p = 0.037) and lower self-esteem (13.00, p = 0.005). It was also observed negative correlation, of moderate magnitude, and with statistical significance, between self-esteem and the following factors: time after prostatectomy (r = -0.326), anxiety (r = -0.385) and depression. There was also a positive correlation, of moderate magnitude, between anxiety and depression (r = 0.529), with statistically significant. It is possible to conclude that these men achieved good self-esteem, anxiety and depression, and also that these variables are correlated. Only self-esteem, however, presented correlation with the post prostatectomy time. / Prostate cancer is the second most common cancer between men, and, despite the high incidence rate, has a good prognosis if diagnosed and treated early. Radical prostatectomy is considered the gold standard treatment, but it can cause complications, such as urinary incontinence, erectile dysfunction, urethral stenosis and injury of the rectum. It might also lead to psychological effects, due to the prostate cancer diagnosis itself and also surgical complications, which can cause symptoms of anxiety and depression, as well as loss of self-esteem. Therefore, this study aimed to evaluate self-esteem, anxiety and depression among men who went through radical prostatectomy. This was a cross sectional study with a quantitative approach. The sample consisted of 40 men who had been submitted to radical prostatectomy from 3 months to 5 years prior to this analysis, and which were treated in two different outpatient services. Two instruments were used for data collection, an instrument of socio-demographic, clinical and economic analysis, the Rosenberg self-esteem scale, in order to evaluate self-esteem, and the Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS), to evaluate anxiety and depression. The average age of the men who volunteered to this study was 65.42 years (±6.66), with average post-prostatectomy time of 21.85 months (±12.91). They presented high self-esteem rate (24.37 ± 3.92) and low anxiety (4.96 ± 3.14) and depression (3.70 ± 3.03) scores. The group with men who were between 50 and 59 years old showed lower self-esteem rates (20.86, p = 0,014). The individuals who had been diagnosed with depression had higher average age (74.00, p = 0.037) and lower self-esteem (13.00, p = 0.005). It was also observed negative correlation, of moderate magnitude, and with statistical significance, between self-esteem and the following factors: time after prostatectomy (r = -0.326), anxiety (r = -0.385) and depression. There was also a positive correlation, of moderate magnitude, between anxiety and depression (r = 0.529), with statistically significant. It is possible to conclude that these men achieved good self-esteem, anxiety and depression, and also that these variables are correlated. Only self-esteem, however, presented correlation with the post prostatectomy time. / O câncer de próstata é o segundo tipo de câncer mais comum entre os homens, e apesar da alta incidência, possui bom prognóstico se diagnosticado e tratado precocemente. A prostatectomia radical é considerada o tratamento padrão ouro, porém pode acarretar complicações como incontinência urinária, disfunção erétil, estenose de uretra e lesão de reto. Pode haver também acometimento psicológico decorrente do diagnóstico do câncer de próstata e das complicações cirúrgicas, possibilitando o aparecimento de sintomas de ansiedade e depressão além do comprometimento da autoestima. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a autoestima, ansiedade e depressão em homens submetidos à prostatectomia radical. Tratou-se de um estudo transversal com abordagem quantitativa. A amostra foi composta de 40 homens entre 3 e 50 meses após prostatectomia radical, que se encontravam em acompanhamento em dois serviços ambulatoriais. Para a coleta dos dados, foi utilizado um instrumento de caracterização sociodemográfica, econômica e clínica, a Escala de autoestima de Rosenberg para avaliação da autoestima, e a Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) para avaliação da ansiedade e da depressão. Os homens possuíam média de idade de 65,42 anos (±6,66) com média de tempo pós prostatectomia de 21,85 meses (±12,91). Apresentaram altos níveis de autoestima (24,37 ± 3,92) e baixos escores de ansiedade (4,96 ± 3,14) e depressão (3,70 ± 3,03). A faixa etária entre 50 e 59 anos apresentou menor autoestima (20,86; p=0,014). Os homens categorizados como casos para depressão apresentaram maior média de idade (74,00; p=0,037) e menor autoestima (13,00; p=0,005). Observou-se correlação negativa, de moderada magnitude, com significância estatística, entre a autoestima e o tempo pós prostatectomia (r= -0,326), a ansiedade (r= -0,385) e a depressão (r= -0,532). Houve também correlação positiva, de moderada magnitude, entre a ansiedade e a depressão (r=0,529) com significância estatística. Conclui-se que os homens apresentaram bons escores relacionados à autoestima, ansiedade e depressão e que estas variáveis possuem correlação entre si. Apenas a autoestima obteve correlação com o tempo pós prostatectomia. / O câncer de próstata é o segundo tipo de câncer mais comum entre os homens, e apesar da alta incidência, possui bom prognóstico se diagnosticado e tratado precocemente. A prostatectomia radical é considerada o tratamento padrão ouro, porém pode acarretar complicações como incontinência urinária, disfunção erétil, estenose de uretra e lesão de reto. Pode haver também acometimento psicológico decorrente do diagnóstico do câncer de próstata e das complicações cirúrgicas, possibilitando o aparecimento de sintomas de ansiedade e depressão além do comprometimento da autoestima. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a autoestima, ansiedade e depressão em homens submetidos à prostatectomia radical. Tratou-se de um estudo transversal com abordagem quantitativa. A amostra foi composta de 40 homens entre 3 e 50 meses após prostatectomia radical, que se encontravam em acompanhamento em dois serviços ambulatoriais. Para a coleta dos dados, foi utilizado um instrumento de caracterização sociodemográfica, econômica e clínica, a Escala de autoestima de Rosenberg para avaliação da autoestima, e a Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) para avaliação da ansiedade e da depressão. Os homens possuíam média de idade de 65,42 anos (±6,66) com média de tempo pós prostatectomia de 21,85 meses (±12,91). Apresentaram altos níveis de autoestima (24,37 ± 3,92) e baixos escores de ansiedade (4,96 ± 3,14) e depressão (3,70 ± 3,03). A faixa etária entre 50 e 59 anos apresentou menor autoestima (20,86; p=0,014). Os homens categorizados como casos para depressão apresentaram maior média de idade (74,00; p=0,037) e menor autoestima (13,00; p=0,005). Observou-se correlação negativa, de moderada magnitude, com significância estatística, entre a autoestima e o tempo pós prostatectomia (r= -0,326), a ansiedade (r= -0,385) e a depressão (r= -0,532). Houve também correlação positiva, de moderada magnitude, entre a ansiedade e a depressão (r=0,529) com significância estatística. Conclui-se que os homens apresentaram bons escores relacionados à autoestima, ansiedade e depressão e que estas variáveis possuem correlação entre si. Apenas a autoestima obteve correlação com o tempo pós prostatectomia. / O câncer de próstata é o segundo tipo de câncer mais comum entre os homens, e apesar da alta incidência, possui bom prognóstico se diagnosticado e tratado precocemente. A prostatectomia radical é considerada o tratamento padrão ouro, porém pode acarretar complicações como incontinência urinária, disfunção erétil, estenose de uretra e lesão de reto. Pode haver também acometimento psicológico decorrente do diagnóstico do câncer de próstata e das complicações cirúrgicas, possibilitando o aparecimento de sintomas de ansiedade e depressão além do comprometimento da autoestima. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar a autoestima, ansiedade e depressão em homens submetidos à prostatectomia radical. Tratou-se de um estudo transversal com abordagem quantitativa. A amostra foi composta de 40 homens entre 3 e 50 meses após prostatectomia radical, que se encontravam em acompanhamento em dois serviços ambulatoriais. Para a coleta dos dados, foi utilizado um instrumento de caracterização sociodemográfica, econômica e clínica, a Escala de autoestima de Rosenberg para avaliação da autoestima, e a Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) para avaliação da ansiedade e da depressão. Os homens possuíam média de idade de 65,42 anos (±6,66) com média de tempo pós prostatectomia de 21,85 meses (±12,91). Apresentaram altos níveis de autoestima (24,37 ± 3,92) e baixos escores de ansiedade (4,96 ± 3,14) e depressão (3,70 ± 3,03). A faixa etária entre 50 e 59 anos apresentou menor autoestima (20,86; p=0,014). Os homens categorizados como casos para depressão apresentaram maior média de idade (74,00; p=0,037) e menor autoestima (13,00; p=0,005). Observou-se correlação negativa, de moderada magnitude, com significância estatística, entre a autoestima e o tempo pós prostatectomia (r= -0,326), a ansiedade (r= -0,385) e a depressão (r= -0,532). Houve também correlação positiva, de moderada magnitude, entre a ansiedade e a depressão (r=0,529) com significância estatística. Conclui-se que os homens apresentaram bons escores relacionados à autoestima, ansiedade e depressão e que estas variáveis possuem correlação entre si. Apenas a autoestima obteve correlação com o tempo pós prostatectomia.

Submitted by ISABELLA PAZIAM FERNANDES NUNES null (ipaziam@me.com) on 2018-03-14T12:47:35Z No. of bitstreams: 1 dissertacao - nunes ipf.pdf: 3167962 bytes, checksum: bd9df494a7b84197900f4be8d90cd090 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-03-19T11:47:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 nunes_ipf_me_bot.pdf: 3167962 bytes, checksum: bd9df494a7b84197900f4be8d90cd090 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-19T11:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 nunes_ipf_me_bot.pdf: 3167962 bytes, checksum: bd9df494a7b84197900f4be8d90cd090 (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / O presente estudo consiste na análise da viabilidade econômica e financeira da implantação da radioterapia de intensidade modulada (IMRT) no tratamento do câncer de próstata e comparar seus benefícios clínicos frente aos procedimentos similares custeados pelos sistemas de saúde públicos e privados. Para tanto, foram analisadas as distribuições de dose de radiação preconizadas nos planejamentos radioterápicos com as técnicas de radioterapia conformacional tridimensional (3D-CRT) e de intensidade modulada (IMRT), prescrita para 20 pacientes com câncer de próstata tratados em um serviço de radioterapia privado. Para verificação da qualidade da distribuição de dose de radiação no volume de tratamento, foram analisados os índices de homogeneidade (IH) e de conformidade (IC) de cada um dos planos radioterápicos estudados. Em comparação com a técnica 3D-CRT, a técnica de IMRT permitiu uma melhor cobertura e conformação da dose prescrita no volume alvo de planejamento (PTV), porém distribuída de forma mais heterogênea. Além disso, avaliou-se os custos financeiros para aquisição dos equipamentos de irradiação e manutenção dos tratamentos, bem como os valores de repasses feitos pelos sistemas de saúde para os procedimentos de radioterapia em próstata. / The present study consists in analyzing the economic and financial viability to establish the intensity modulated radiotherapy (IMRT) in the treatment for prostate cancer and compare its clinical benefits to similar procedures funded by public and private health systems. In order to do so, the radiation absorbed-dose distributions recommended in the radiotherapy plans with three-dimensional conformal radiotherapy (3D-CRT) and intensity-modulated radiotherapy (IMRT) techniques, prescribed for 20 patients with prostate cancer treated in a private radiotherapy clinic, were evaluated. To verify the quality of the radiation dose distribution in the treatment volume, the homogeneity index (HI) and the conformity index (CI) of each radiotherapy plans studied were analyzed. In contrast to the 3D-CRT technique, the IMRT technique allowed a better coverage and conformation of the radiation dose prescribed in the planning target volume (PTV), but distributed in a more heterogeneous way. It was also evaluated the financial costs for the acquisition of the irradiation equipment and for the maintenance of the treatments, as well as the values of the on-lending made by the health systems for the radiotherapy procedures for the prostate.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Tem sido descrito que o acúmulo de mutações em proto-oncogenes e genes supressores de tumor contribui para o direcionamento da célula à carcinogênese. Na maioria dos casos de câncer, as células apresentam proliferação descontrolada devido a alterações na expressão e/ou mutações de ciclinas, quinases dependentes de ciclinas e/ou inibidores do ciclo celular. Os tumores sólidos figuram entre o tipo de câncer mais incidente no mundo, sendo a quimioterapia e/ou hormônio-terapia, radioterapia e cirurgia os tratamentos mais indicados para estes tipos de tumores. Entretanto, o tratamento quimioterápico apresenta diversos efeitos colaterais e muitas vezes é ineficaz. Portanto, a busca por novas moléculas capazes de conter a proliferação destas células e com baixa toxicidade para o organismo se faz necessário. Este trabalho teve por objetivo avaliar a ação antitumoral in vitro de um novo composto sintético, a pterocarpanoquinona LQB118, sobre algumas linhagens tumorais humanas de alta prevalência e estudar alguns dos seus mecanismos de ação. As linhagens tumorais estudadas neste trabalho foram os adenocarcinomas de mama (MCF7) e próstata (PC-3), e carcinoma de pulmão (A549). A citotoxicidade foi avaliada pelo ensaio do MTT e a proliferação celular pela contagem de células vivas (exclusão do corante azul de tripan) e análise do ciclo celular (citometria de fluxo). A expressão gênica foi avaliada por RT-PCR e a apoptose foi avaliada por condensação da cromatina (microscopia de fluorescência-DAPI), fragmentação de DNA (eletroforese) e marcação com anexina V (citometria de fluxo). Das linhagens tumorais testadas, a de próstata (PC3) foi a que se mostrou mais sensível ao LQB 118, e em função deste resultado, os demais experimentos foram realizados com esta linhagem tumoral. O efeito citotóxico do LQB 118 se mostrou tempo e concentração dependente. Esta substância inibiu a proliferação celular e prejudicou a progressão do ciclo celular, acumulando células nas fases S e G2/M. Buscando esclarecer os mecanismos desta ação antitumoral, demonstrou-se que o LQB 118 inibe a expressão do mRNA do fator de transcrição c-Myc e das ciclinas D1 e B1, e induz a apoptose de tais células tumorais. Em suma, o LQB 118 é capaz de inibir a proliferação das células tumorais de próstata, alterando a expressão do mRNA de alguns genes reguladores do ciclo celular, resultando em interrupção do ciclo celular e indução de apoptose, indicando este composto como um potencial candidato a futuro medicamento no tratamento do câncer de próstata. / It has been reported that accumulation of mutation on proto-oncogenes and tumor suppressor genes directs cells to carcinogenesis. In most described cancer, cells display uncontrolled proliferation due to altered expression or mutations of cyclins, cyclin-dependent kinases and cell cycle inhibitors. The solid tumors are the most common cancer type in world. Chemotherapy and/or hormone-therapy, radiotherapy and surgery are the suitable treatment for this disease. However, chemotherapy has been shown several side effects and often ineffective. Therefore, the search for new molecules with antitumoral activity low cytotoxicity is needed. The aim of this work was to evaluate the in vitro antitumoral effects of a new synthetic compound, the pterocarpanquinone LQB 118, on tumor cell lines of high prevalence in the world and to study some mechanisms of action. Tumor cell lines of breast (MCF7), lung (A549) and prostate (PC3) were cultivated at RPMI medium with 10% of serum fetal bovine. The cytotoxicity was evaluated by MTT assay and the cell proliferation by cell counting (trypan blue exclusion) and cell cycle analysis (flow cytometry). Apoptosis was evaluated by chromatin condensation (fluorescence microscopy with DAPI), DNA fragmentation (electrophoresis) and annexin-V and iodide propidium staining. Gene expression was studied by RT-PCR. As LQB 118 (5 g/ml) induced cytotoxic effect mainly on prostate tumor cells, further experiments were then performed only with this tumor cell line. The LQB 118 cytotoxic effects were time and concentration-dependent. Furthermore, this substance inhibited cell proliferation and promoted cell cycle arrest, increasing cell number in S and G2/M phases. Studying the mechanisms of the LQB 118 antitumoral action, it was demonstrated that this substance inhibited the mRNA expression of the transcription factor c-Myc, cyclin D1 and cyclin B1 and also induced apoptosis of PC3. Concluding, LQB 118 impairs prostate tumor cells proliferation due to altered mRNA expression of some cell cycle regulator genes, resulting in cell cycle arrest and apoptosis induction, suggesting this compound as a good candidate for a future drug in prostate cancer treatment.

Introduction: Together with the introduction of new therapeutic options in castration- resistant prostate cancer (CRPC), an advance in individual disease characterization is required. Since common biopsy methods are not suitable for the majority of CRPC patients, one possible solution is the liquid biopsy that is, the analysis of circulating tumor cells (CTCs) isolated from the cancer patients' blood. Methods: A method based on the immunomagnetic enrichment of CTCs and subsequent PCR detection of tumor-associated genes (AdnaTest, Qiagen) was characterized and used for the detection of CTCs in 41 CRPC patients. Each patient was screened at the time of CRPC diagnosis and after the 3rd cycle of docetaxel therapy. A panel of genes associated with therapeutic decision-making was established and validated. Quantitative PCR (qPCR) method on a BioMark platform (Fluidigm, USA) was used to determine the expression of the gene panel in the CTC-enriched and primary tumor samples and the results were analyzed. Results: CTCs were found in 85% and 45% of CRPC patients before and during the therapy, respectively. The presence of CTCs, as well as EGFR and AR PCR fragments, was associated with a decreased sPSA response and lower survival. The gene expression of the CTC- enriched and primary tumor samples differed...

O câncer de próstata é a segunda causa de morte entre homens no Brasil. É tipo um câncer de crescimento lento, podendo levar anos para o tumor atingir 1 cm3, porém, em alguns casos ele pode se espalhar pelo corpo, sendo o osso o principal sítio de metástase. No estágio de desenvolvimento do câncer conhecido como metástase, o principal tratamento consiste em terapia de restrição andrógena, levando as células prostáticas a pararem de proliferar, uma vez que elas crescem em resposta a presença de hormônios andrógenos, como a diidrotestosterona e testosterona. Porém, em alguns casos, as células proliferam mesmo na ausência de andrógenos e isto se deve a diversos fatores que, em geral, estão associados a mutações no receptor andrógeno e/ou alterações no metabolismo andrógeno. Quando isto acontece, os tratamentos disponíveis são menos efetivos e costumam falhar. Porém, estudos sugerem que o γ-orizanol, um fitoesterol extraído do óleo do farelo do arroz; e extratos amplamente utilizados na medicina popular, como o extrato hidroalcólico de Thuya occidentalis, poderiam atuar inibindo o desenvolvimento e progressão do câncer de próstata. Neste estudo, com o uso de abordagens bioquímicas e de biologia molecular, foi demonstrado que o tratamento com γ-orizanol diminui a viabilidade e biomassa celular em cultura, associado ao aumento da morte celular por apoptose e/ou necrose, em linhagens celulares responsivas (LNCaP) e não-responsivas a andrógenos (PC3 e DU145), além de aumentar a pERK1/2 em células LNCaP e DU145. O γ-orizanol também foi capaz de bloquear o ciclo celular em G2/M nas células PC3 e LNCaP e em G0/G1 nas células DU145. Estes efeitos foram ainda acompanhados por uma redução da expressão do gene e proteína caveolina-1- uma importante molécula envolvida no aumento da agressividade do câncer de próstata, e também, na progressão da doença para o fenótipo andrógeno resistente - nas células não-responsivas a andrógenos, e do gene PCGEM1 - gene específico da próstata regulado por andrógeno - nas células LNCaP e DU145. Ainda, γ-orizanol também mostrou capacidade de regular vários miRNAs - pequenas moléculas de RNA não codificantes de proteínas - envolvidos no controle de funções associadas ao desenvolvimento, progressão e invasão no câncer de próstata, como o miR16-1, miR19b-2, miR24b-1, miR24b-2, miR99a, miR133a-5p, miR182-5p, miR198 e miR222. O extrato hidroalcólico de Thuya occidentalis reduziu a viabilidade e biomassa celular nas linhagens responsiva (LNCaP) e não-responsivas (DU145 e PC3) a andrógenos, além de induzir parada do ciclo celular na fase G0/G1 nas células DU145 e aumentar a morte celular por apoptose e/ou necrose em todas as linhagens. Da mesma forma que o γ-orizanol, este extrato reduziu a expressão da caveolina-1 nas linhagens não-responsivas a andrógenos. Trabalhos anteriores mostram que o monoterpeno α-tujona é o principal composto ativo do extrato de Thuya occidentalis. Por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas foi mostrada a existência de 0,0016 μg de α-tujona na dose de extrato usada neste estudo. No entanto, o tratamento com 0,0016μg de α-tujona foi efetivo somente sobre linhagem LNCaP, não tendo efeito sobre as outras linhagens estudadas, reforçando a hipótese da diferença de sensibilidade entre as linhagens responsivas e não responsivas a andrógeno e mostrando a contribuição de outros componentes do extrato nos efeitos observados neste estudo. Concluindo, estes resultados demonstram que tanto γ-orizanol como o extrato de Thuya occidentalis podem vir a ser agentes terapêuticos promissores no tratamento de câncer de próstata, não só por inibirem o crescimento celular, mas também e principalmente pela possibilidade de induzirem a recuperação da sensibilidade a andrógenos, aumentando as possibilidades de tratamento da doença. / Prostate cancer is the second cause of death among men in Brazil. It is a slowgrowing cancer and it may take years for tumor to reach 1 cm3, but in some cases it can spread throughout the body and the bone is the main site of metastasis. At this cancer stage known as metastasis, the principal treatment involves antiandrogen therapy, leading to prostate cells stop proliferating, because they grow in response to presence of androgens such as testosterone and dihydrotestosterone. However, in some cases, the cells can proliferate even in the absence of androgens and this fact occurs due to many factors and they are generally associated with mutations in the androgen receptor and/or alterations in androgen metabolism. In this stage, the treatments available are less effective and usually fail. However, studies suggest that γ-oryzanol, a phytosterol extracted of rice bran oil; and extracts widely used in folk medicine, as Thuya occidentalis hidroalcolic extract, could act inhibiting the development and progression of prostate cancer. In this study, using molecular biology and biochemical approaches we showed that γ- oryzanol treatment was able to decrease cell viability and biomass in culture, and this fact was linked to increased cell death by apoptosis and/or necrosis in androgen responsive (LNCaP) and unresponsive (DU145 and PC3) prostate cancer cell lines, besides increasing pERK1/2 in LNCaP and DU145 cells. γ- oryzanol was also able to cause cell cycle arrest at G2/M phase in LNCaP and PC3 cells and at G0/G1 phase in DU145 cells. These effects were also accompanied by a reduction in caveolin-1 gene and protein expression - an important molecule related to high aggressiveness in prostate cancer and also in the progression of the disease to androgen resistant phenotype - in androgen unresponsive cells, and also PCGEM1 gene - a prostate specific gene regulated by androgens - in LNCaP and DU145 cells. γ-oryzanol also showed ability to regulate several miRNAs - small non-coding RNA molecules - involved in the control of many functions associated with the development, progression and invasion of prostate cancer, such as miR16-1, miR19b-2, miR24b-1, miR24b-2, miR99a, miR133a-5p, miR182-5p, miR198 and miR222. Thuya occidentalis hidroalcolic extract also reduce cell viability and biomass in androgen responsive (LNCaP) and unresponsive (DU145 and PC3) cells, in addition to inducing cell cycle arrest at G0/G1 phase in DU145 cells and to increase apoptosis and/or necrosis cell death in all cell lines. The same way that γ-oryzanol, this extract reduced the caveolin-1 expression in androgen unresponsive prostate cancer cells. Prior studies showed that the monoterpene α-thujone is the main active compound in the T. occidentalis extract. By gas chromatography coupled to mass detector it was showed the existence of 0.0016 μg of α-thujone in extract dose used in this study. However, the treatment with 0.0016 μg of α-thujone was effective only on LNCaP cell line, having no effect on the other studied lines, supporting the hypothesis of difference in sensitivity between responsive and unresponsive cell lines and showing the contribution of other components in the effects caused by the extract, observed it this study. In conclusion, these results demonstrate that both γ-oryzanol as T. occidentalis extract may become promising therapeutic agents in treatment of prostate cancer, not only inhibit cell growth but also and manly by the possibility of inducing the recovery of androgen sensitivity, increasing the treatment chances of treatment this disease.

Orientador: Laura Sterian Ward / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T20:05:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LimaJunior_MarioMacielde_M.pdf: 2114915 bytes, checksum: 56c9d6904dd7e0a16ab5565b0d280b7c (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O câncer de próstata (CaP) é atualmente a neoplasia maligna mais prevalente no mundo, após os tumores de pele. A incidência dessa enfermidade tem crescido nas últimas décadas devido, principalmente; ao aumento da longevidade da população. Atualmente o CaP tem sido detectado em estágios menos avançados do que no passado. As melhorias dos métodos de diagnóstico contribuem para a detecção precoce dessa neoplasia. Os polimorfismos de genes que codificam enzimas envolvidas na metabolização de drogas e de xenobióticos, como as do sistema Glutationa S-transferase (GST) e Citocromo P450 (CYP), podem estar implicados no risco e prognóstico para neoplasias. Foram avaliados os genótipos de GSTT1, GSTM1, GSTP1, GSTO1 e CYP1A1 em 125 pacientes portadores de câncer de próstata e em 100 indivíduos com hiperplasia prostática benigna. Tempo e atividade ocupacional, tabagismo e outros dados relevantes da história natural da doença foram obtidas por meio de entrevistas. Não foram encontrados quaisquer associações entre os genótipos estudados e o risco de câncer de próstata, tanto avaliando os diferentes genótipos em separado como em combinações, através de análise de regressão logística uni ou multivariada. Não houve associação entre os genótipos estudados e fatores clínicos de risco para câncer de próstata ou quaisquer parâmetros de agressividade do tumor ao diagnóstico ou durante o seguimento. Nossos dados permitem concluir que os genótipos de GST e CYP1A1 não estão associados à susceptibilidade ao câncer de próstata ou à sua evolução na população brasileira estudada / Abstract: Prostate cancer is currently the most common malignancy worldwide, second only to skin tumors. The incidence of prostate cancer has risen dramatically over the last decade, more than can be explained just by the increase in longevity. It is also apparent that prostate cancer is now being detected at less advanced stages than in the past. Increased awareness of the disease and improved detection methods are thought to contribute to this earlier detection. The polymorphic inheritance of human drug-metabolizing enzymes, such as those encoded by the Glutathione-S-Transferase (GST) and the Cytochrome P450 (CYP) systems, may be implicated in both cancer risk and prognostic. We compared GSTT1, GSTM1, GSTO1, GSTP1 e CYP1A1 genotypes of 125 prostate cancer and 100 benign prostatic hyperplasia patients. Lifetime occupational history, cigarette-smoking, and other anamnestic data were obtained through interviews. None of the studied polymorphisms was found associated to prostate cancer risk either considered in separate or in combination, in uni ou multivariate regression logistic analysis. Also, there was no association between genotypes and possible clinical factors of risk, or any parameter of tumor agressiveness at diagnosis or during follow-up. Our data suggest that GST and CYP1A1 genotypes are not associated to the susceptibility to prostate cancer or its outcome in the Brazilian population / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Clinica Medica