In 1931, Mungomery stated "whitegrubs have been for years past, and still are, the worst insect problem confronting the sugar industry". This statement remains true to this day, with canegrubs costing the Australian sugar industry A$7.22 million in lost production and in use of insecticides. The development of a sugarcane cultivar with resistance to canegrub attack would be a valuable addition to the recently implemented canegrub management program. This thesis examined the possibility that natural inhibitors derived from canegrubs could be incorporated in sugarcane to reduce or prevent its destruction by canegrubs. The research described here demonstrated that canegrub haemolymph contains inhibitors with activity against commercially purified enzymes and serine proteases found in crude midgut extracts. A cDNA encoding a potential canegrub protease inhibitor (DA10 12) belonging to the Ascaris family was cloned, but it did not have activity against the major canegrub midgut proteases. This protein does, however, still have potential for modification into a serine protease inhibitor suitable for use as a novel insect resistance transgene. The possibility of using haemolymph derived inhibitors as novel antimetabolites in a canegrub management strategy based on transgenic plants was also explored. The findings suggest that proteins with properties similar to those of DA10 12 will require the presence of a signal peptide and/or codon optimisation for successful expression in sugarcane. The research outlined in this thesis is the first investigation of protease inhibitors in the haemolymph of scarab larvae, and is the first report of an Ascaris family inhibitor that does not inhibit a serine protease.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv. / Härtill 4 uppsatser.

El texto completo de este trabajo no está disponible en el Repositorio Académico UPC por restricciones de la casa editorial donde ha sido publicado. / This systematic review and meta-analysis tries to determine whether there is an association between the use of protease inhibitors (PIs) and the incidence of diabetes mellitus (DM) and/or metabolic syndrome (MS) in HIV-infected patients. A systematic literature search was performed using MEDLINE/PubMed, CENTRAL, LILACS, and EMBASE. Included articles were observational studies published on or prior to November 2015 that met specific inclusion criteria. Pooled relative risks (RRs) and hazard ratios (HRs) were calculated. Nine articles met the inclusion criteria, describing 13,742 HIV patients. Use of PIs was associated with the development of MS (RR: 2.11; 95% CI 1.28–3.48; p-value 0.003). No association between the use of PIs and development of DM was found: the HR for the incidence of DM among patients using PIs was 1.23 (95% CI 0.66–2.30; p-value: 0.51) and the RR was 1.25 (95% CI 0.99–1.58; p-value 0.06). Use of PIs in HIV-infected patients is associated with an increased risk of MS. No evidence of an increased risk of DM was found. However, because MS is a precursor to DM, it is possible that studies with a longer follow-up duration are needed in order to detect an association between PI use and onset of DM. / First, we would like to thank our families for all their support. Second, we would like to thank the Universidad Peruana de Ciencias Aplicadas, the Health Sciences Department, and the School of Medicine for their support and for all the tools they have provided throughout this process. Finally, we want to thanks to Dr Gwenyth O. Lee and Dr Daniela E. Kirwan for their comments. / Revisión por pares

La mucoviscidose est une maladie génétique caractérisée par une obstruction des voies respiratoires, des infections et une inflammation pulmonaire résultant du recrutement massif de neutrophiles qui sécrètent des protéases : l’élastase, la protéase 3 et la cathepsine G. Ces protéases peuvent être sécrétées selon deux voies, la dégranulation ou la sécrétion de NETs (Neutrophil Extracellular Traps), qui sont des fibres de chromatine auxquelles elles sont associées et décrites comme des structures antimicrobiennes. Dans le milieu extracellulaire, la dérégulation du contrôle de l’activité des protéases par leurs inhibiteurs conduit à la dégradation progressive du tissu pulmonaire. Nous avons montré que cette dérégulation était modulée par l’interaction des protéases avec l’ADN présent dans les sécrétions bronchiques des patients et que le ciblage de ces protéases par des inhibiteurs exogènes pouvait être amélioré in vitro par de la DNase ou de la polylysine qui compacte l’ADN. Ce polypeptide est également bactéricide vis-à-vis des pathogènes majeurs de la mucoviscidose, S. aureus et P. aeruginosa. Nos travaux montrent également que les NETs sont sécrétés dans les poumons des patients où ils constituent un réservoir de protéases actives potentiellement délétère et n’ont pas d’effet bactéricide vis-à-vis de S. aureus et P. aeruginosa. Nos travaux montrent que les voies de signalisation conduisant à la sécrétion des NETs varient selon le stimulus, générant des structures aux propriétés différentes. / Cystic fibrosis (CF) is a hereditary disease characterized by the obstruction of the airways, infections and a chronic lung inflammation due to a massive recruitment of neutrophils that secrete proteases: the elastase, the proteinase 3 and the cathepsin G. These proteases can be secreted by two mechanisms, namely degranulation and the secretion of NETs (Neutrophil Extracellular Traps), which are chromatin fibers to which they are bound and that have been described as antimicrobial structures. In the extracellular environment, the dysregulation of these proteases control by their inhibitors leads to progressive lung tissue degradation. We have shown that this dysregulation was influenced by the interaction of the proteases with the DNA found in the lung secretions of CF patients and that targeting these proteases with exogenous inhibitors could be improved in vitro by DNase or polylysine, which compacts DNA. This polypeptide also presents a bactericidal effect towards the major CF-associated pathogens, S. aureus and P. aeruginosa. Our work also shows that NETs are secreted in the lungs of CF patients, where they are a potentially deleterious reservoir of active proteases, and that they do not display any bactericidal effect towards S. aureus and P. aeruginosa. Our work shows that the signalization pathways leading to NETs secretion vary depending on the stimulus, generating structures that present different properties.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:45:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A funcao do sono ainda nao foi completamente elucidada, porem se sabe que este tem papel homeostatico, e na sua privacao, ocorrem diversas alteracoes fisiologicas e patologicas, como no sistema imunologico e na reacao inflamatoria. A trombina e considerada como um agente pro-inflamatorio por ser capaz de estimular as celulas a liberar mediadores pro-inflamatorios. A familia dos Receptores Ativados por Proteases (PARs) e composta por quatro receptores acoplados a proteina G (GPCRs): PAR1, PAR2, PAR3 e PAR4, que sao ativados unicamente por proteases. O principal papel da ativacao dos PARs durante a progressao de doencas foi relatado em modelos animais de diferentes patologias gastrointestinais, neuroinflamatorias e processos neurodegenerativos. Os PARs estao diretamente envolvidos no funcionamento e desenvolvimento do cerebro. Suas expressoes sao diretamente moduladas por condicoes anormais, como doenca de Parkinson e Alzheimer, esclerose multipla e demencia associada ao HIV. Apesar do reconhecimento da privacao de sono como um importante problema de Saúde na sociedade moderna, nao existem estudos sobre o efeito da privacao de sono sob os receptores PARs. Objetivos: Analisar e quantificar a expressao genica dos PARs e a traducao proteica em regioes selecionadas do sistema nervoso central, em diferentes protocolos de privacao de sono. Metodos: Os animais foram separados em 6 grupos: 1) animais privados de sono paradoxal (PS) por 72h, usando o metodo das plataformas multiplas; 2) PS por 72h e rebote de sono por 24h; 3) animais restritos de sono paradoxal (RS) por 15 dias, permitindo sono de 3h por dia, tambem usando o metodo das plataformas multiplas; 4) RS de sono por 15 dias e rebote de sono por 24h; 5) animais privados de sono total pelo metodo de gentle handling (GH) por 8h; 6) grupo controle. Apos a privacao de sono, os animais tiveram o cortex, hipotalamo, hipocampo e estriado removidos e foram feitas as quantificacoes genicas e proteicas do PAR1, PAR2 e PAR4. Resultados: Foram encontradas alteracoes nas expressoes genicas dos receptores PARs nos tecidos estudados. No cortex, houve alteracao na expressao genica (+ ou- significa aumento ou reducao) no PAR1 (RS-, RRS-, PS-, RPS-) e PAR2 (RS-, RRS-, PS-, RPS-, GH+) mas nao em PAR4. No hipotalamo, foram encontradas alteracoes no PAR1 (RS+, PS+, RPS+) e PAR2 (GH-), nao sendo encontrada nenhuma alteracao no PAR4. Analisando o hipocampo, foram encontradas alteracoes no PAR1 (RS+, GH+), PAR2 (RS-, PS+, RPS+) e PAR4 (RS-, GH-). No estriado, houve alteracoes no PAR1 (RS-, RRS-), PAR2 (RPS+) e PAR4 (RRS+, PS+, RPS+). A quantificacao proteica mostrou alteracoes no PAR2 (PS-) e PAR4 (PS-, RPS) do estriado. No hipocampo, PAR2 (RRS+) e PAR4 (RRS+) mostraram alteracoes significantes. Encontramos alteracoes significantes no PAR1 (RS-, RRS-) no hipotalamo. Conclusao: Diferentes protocolos de privacao de sono podem alterar, de diferentes maneiras, a expressao genica e a traducao proteica dos PARs no sistema nervoso central. Um novo campo de pesquisa em Ciências do sono esta aberto e mais estudos sao necessarios para estabelecer a correlacao entre as alteracoes na expressao dos PARs e inflamacao, reacoes imunes e alteracoes neurais observadas em modelos de privacao de sono / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-02-26T13:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 leandro_neto_ioc_mest_2013.pdf: 1062337 bytes, checksum: 9883a46c5550a2fd2408f865ac3622e1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Tripanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, constitui um grave problema de saúde pública que afeta 18 milhões de pessoas na América latina. Para produzir a infecção formas tripomastigotas metacíclica de T. cruzi , liberadas durante a picada do inseto vetor, precisam evadir o sistema imune inato do hospedeiro vertebrado para infectar as células. O sistema complemento, devido à sua capacidade para rapidamente reconhecer e eliminar microrganismos constitui a principal linha de defesa do sistema imune inato. O sistema do complemento é composto por várias proteínas, ativadas em cascata por serino proteases, que culmina com a formação do complexo de ataque a membrana e lise do patógeno. Todavia, muitos organismos patogênicos desenvolveram formas de escapar do ataque do sistema do complemento por meio de diversos mecanismos. Visando à melhor caracterização dos fatores de virulência do T. cruzi, o grupo foi verificar se os sobrenadantes de formas metacíclicas apresentam atividade inibitória de complemento. Devido às vias do complemento serem ativadas por serino proteases, foi realizada uma busca no banco genômico de T. cruzi atrás de motivos de SERPINAS (inibidores de serino protease) que o parasito poderia estar liberando no primeiro contato parasito-hospedeiro. Foram realizados experimentos de lise mediada pelo complemento com sobrenadantes das formas metacíclicas de T. cruzi. Observou-se, ainda, que os sobrenadantes das formas metacíclicas do T. cruzi são capazes de inibir a lise mediada pelo complemento de formas epimastigotas / The Try panosoma cruzi, etiologic agent of Chagas disease, is a serious public health concernthat affects 18 million people in Latin America. To produce the infection, metacyclic trypomastigotes de T cruzi released during the bite of the insect vector must evade the innate immune system of the vertebrate host to infect cells. The complement system, due to its ability to rapidly recognize and eliminate microorganisms is the major line of innate immune system defense. The complement system is composed of various proteins, activated by serine proteases cascade that culminates in the formation of the membrane attack complex and lysis of the pathogen. However, many pathogens have developed ways to evade the attack of the complement system through several mechanisms. Aiming to better characterize the virulence factors of T. cruzi, the team was to verify whether the supernatants of metacyclic forms exhibit inhibitory activity of complement. Due to the complement pathways are activated by serine proteases, we seek in genomic library of T. cruzi motifs related t o serpin (serine protease inhibitors) , a protein that the parasite could be releasing at the first parasite - host contact . Experiments were carried out to complement - mediated lysis with supernatants of metacyclic forms of T. cruzi . F urthermore , i t was ob served, that the supernatants of metacyclic forms of T. cruzi are capable of inhibiting the complement mediated lysis of epimastigotes

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 karina_rebello_ioc_mest_2008.pdf: 6872283 bytes, checksum: a0cb112c96e6862c0ff341afeb28dbf5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / No presente trabalho foram detectadas cisteína-proteinases (CPs) em promastigotas infectivas de Leishmania (Viannia). braziliensis. A estratégia de purificação consistiu na associação do método de extração por Triton X-114 com cromatografia em coluna de Concanavalina A-Sepharose, seguida por outra de DEAE-Sephacel. No ensaio das cromatografias, observamos um pico majoritário de atividade enzimática na presença do substrato pEFLpNan (165 x 10³² \03BCM de pNan/minuto) para cerca de 10¹0 parasitas, coincidentes com o pico majoritário da proteína eluído da coluna de troca iônica. A análise por SDS-PAGE do material eluído da coluna de troca iônica mostrou quatro principais bandas de proteínas com massas moleculares relativas de 63, 43, 30 e 27 kDa. Os ensaios da atividade enzimática após eletroforese mostraram que as bandas de 63 kDa e 43 kDa, hidrolisam substratos como gelatina em pH 7,0 e são sensíveis à presença de E-64. Além disso, as duas enzimas são capazes de hidrolisar o substrato pEFLpNan: 63 kDa (2,2 ± 0,3 \03BCM de pNan/minuto) e 43 kDa (0,05 ± 0,2 \03BCM de pNan/minuto), e são inibidas por 10\03BCM E-64 (47 % e 36 % respectivamente). Os ensaios de reconhecimento imunológico utilizando um anti-soro policlonal específico contra cisteína-proteinase B [anti-CPB de L. (L.) mexicana] revelaram que as enzimas de 63 kDa são reconhecidas por este anti-soro. Os experimentos de aglutinação, citometria de fluxo e imunocitoquímica utilizando esse mesmo antisoro revelaram que homólogos de CPBs estão localizados na superfície da membrana de promastigotas. Além disso, a incubação dos promastigotas com fosfolipase C (PLC) reduziu o número de células positivas pra os homólogos de CPB. Os anti-soros anti-CRD (cross reactive determinat) e anti-CPB reconhecem bandas de 63kDa e 43 kDa do sobrenadante das células tratadas com PLC em ensaios de immunoblotting sugerindo que isoformas destas proteínas são ancoradas por glicosilfostatidilinositol (GP (GPI) à membrana plasmática. Também observamos que os homólogos de CPBs são presos a membrana por âncora GPI e se concentram em plataformas lipídicas. Nós observamos que as proteínas homólogas a CPB não permanecem estáveis na superfície da membrana quando os parasitas são mantidos em culturas sucessivas, assim como a atividade enzimática total sobre o substrato pEFLpNan é alterada. Mostramos ainda através da técnica RT-PCR em tempo real um aumento da transcrição de cpb de L. (V.) braziliensis quando os parasitas foram submetidos a culturas sucessivas. De uma forma geral os dados apresentados suportam a hipótese de que o parasita estudado apresentam CPs de membrana ativas, além de homólogos de CPB intracelulares. / It was detected cysteine-pro teinases (CPs) in infective Leishmania (Viannia) braziliensis promastigotes . The purification strategy c onsisted of an association of Triton X-114 extraction method with chromatography in Concanavalin A-Sepharose column, followed by chromatography in DEAE-Sephacell column. In the assay pf chromatographic fractions, we observed a peak of enzymatic activity against the pEFLpNan substrate (165 x 10 -32 μM of pNan/minute) in over 10 10 parasites, coincident with the ma jor protein peak eluted from the column. SDS-PAGE analysis of the material eluted from the ionic exchange column showed four main protein bands with relative molecular mass of 63 , 43, 30 and 27 kDa. Gelatin-SDS-PAGE assays indicated that the 43kDa and the 63kDa bands can hydrolyze gelatin at neutral pH and are sensitive to E-64. Also, both enzymes can hydrolyze pEFLpNan substrate: 63 kDa (2,2 ± 0,3 μM of pNan/minute) and 43 kDa (0,05 ± 0,2 μM of pNan/minute) bei ng both inhibited by E-64 (47 % and 36 % inhibition, respectively) . Immunological recognition assays , with a specific polyclonal antibody against CPB from L. (L.) mexicana , showed that bands of 63 kDa and 43 kDa are recognized in the fractions of the ionic exchange column. Aggl utination, flow cytometry and immunocytochemistry assays performed with an ti-CPB antiserum revealed that homologous of CPB are located on the promastigote membrane surface. Moreover, the incubation of promastigotes with phospholipase C reduced th e number of CPBs homologues-positive cells. Both anti-cross-reacting determinant (CRD) a nd anti-CPB antisera recognized 63kDa and 43kDa bands in the supernatant of phospholipase C-treat ed cells, suggesting that isoforms of these proteins are attached to the plasma membra ne by glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchors. Also, our data suggest that GPI-anchored CPBs are present in the detergent - resistant lipid rafts. We observed that the CPB homologues do not remain stable on the membrane surface when the parasites are maintained under successive cultur es; also, the total enzymatic activity over the substrate pEFLpNan is altered. We add itionally showed by real-time RT-PCR that L. (V). braziliensis cpb genes are active and their relative expression is increased throughout the successive cultures. Thus, the presented data support the hypothesis of that studied parasite presents CPs of membrane active, beyond homologous of intracellular CPB.

Orientador: Prof. Dr. Guilherme Cunha Ribeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Evolução e Diversidade, 2017. / O gênero Aphrophila (Diptera, Limoniidae) incluía 19 espécies descritas, 11 das quais estão distribuídas ao da Sul da América do Sul (Argentina e Chile) e 8 na Nova Zelândia (parte do atual continente da Zelândia). Entretanto, o conhecimento sobre a taxonomia e aspectos da biologia evolutiva e biogeografia do grupo é muito limitado. Nesse contexto, foi realizada uma revisão taxonômica e um estudo filogenético do gênero. Foram redescritas e ilustradas todas as espécies previamente descritas além de 15 novas espécies. Uma nova espécie foi descrita para a Ilha Campbell (NZ), 3 para a Argentina e 11 para o Chile. Com base no resultado da análise filogenética, uma classificação foi proposta para o gênero incluindo 5 subgêneros. Visando encontrar o padrão biogeográfico informado pela análise filogenética, foi feita uma análise de sub-árvores livres de paralogia que resultou no seguinte areagrama: ((Ilha Campbell + América do Sul) + Nova Zelândia). Além do estudo do gênero Aphrophila, esta dissertação inclui um estudo no qual uma nova técnica é proposta visando a integração de dados morfológicos e moleculares em Arthropoda. A técnica baseia-se na dissolução de estruturas proteicas em uma solução de proteinase k, que, ao mesmo tempo em que permite a extração de DNA, resulta no clareamento (diafanização). Do ponto de vista do estudo morfológico, o resultado da diafanização é superior ao que é alcançado através da utilização de KOH (método tradicionalmente utilizado na diafanização de insetos). / The genus Aphrophila (Diptera: Limoniidae) included 19 described species, 11 of which are distributed in the Southern South America (Argentina and Chile) and 8 in New Zealand (part of new continent Zealand). However, the knowledge about taxonomy, biology and biogeography of the group is very limited. In this context, a taxonomic revision and a phylogenetic study of the genus were fulfilled. All previously described species, as well as 15 new species, were redescribed and illustrated. For Campbell Island (NZ) are described one new species, for Argentina 3 new species and for Chile 11 new species. Based on the result of phylogenetic analysis, a classification was proposed for the genus including 5 subgenera. Aiming to find the biogeographic pattern informed by phylogenetic analysis, an analysis of paralogy-free subtrees was made that resulted in the following areagram: ((Campbell Is. + South America) + New Zealand). In addition to the study of the genus Aphrophila, this dissertation includes a study in which a new technique is proposed aiming the integration of morphological and molecular data in Arthropoda. The technique relies on the dissolution of protein structures in a solution of proteinase k, which results in clarification (diaphanization) while allowing DNA extraction. From the morphological point of view, the result of the diaphanization is superior to what is achieved through the use of KOH (method traditionally used in the diaphanization of insects).

Orientador: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Banca: Márcia Maria Costa Nunes Soares / Banca: Lúcia Buchalla Bagarelli / Resumo: A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma inflamação da mucosa genital decorrente de infecção por leveduras. Os principais sintomas são disúria, hiperemia, ardência, corrimento, prurido, dispareunia, fissuras. Aproximadamente 75% das mulheres sofrem ao menos um episódio de candidíase vulvovaginal, 40% apresentam mais de um episódio e menos de 5% tornam-se recorrentes (CVVR). A CVV tem como principal etiologia, Candida albicans, no entanto, episódios devido às espécies "não albicans" estão aumentando. O manejo das vaginites vem sendo realizado de modo empírico, levando a problemas quanto à terapêutica. Assim, este projeto teve como objetivos caracterizar fenotipicamente leveduras isoladas do conteúdo vaginal de 223 mulheres adultas, sintomáticas (S) e assintomáticas (A), atendidas pelo Serviço de Ginecologia do Hospital de Base de São José do Rio Preto e determinar os indicadores clínicos. Para tal, foi realizada análise micológica dos 223 isolados clínicos, sendo que, 87 amostras apresentaram cultura positiva. C. albicans foi a espécie mais prevalente nos dois grupos (A/S), seguida de Candida glabrata. A maior parte das mulheres era casada com média de idade de 30 a 40 anos, referiu uso de anticoncepcionais e ciclo menstrual regular. Em relação a práticas sexuais houve, para parte das pacientes, concomitância entre os hábitos, anal, oral e vaginal. Quando avaliado o tratamento prévio, não houve evidência de associação com sintomas particulares. A suscetibilidade a antifúngicos, realizada pelos dois métodos de referência disco-difusão e microdiluição, mostrou concordância, estatisticamente comprovada, apenas para o itraconazol. Em relação à produção de fator de virulência, apenas C. albicans produziu fosfolipase. Diferentemente, proteinase foi detectada em C. albicans, C. glabrata e Candida parapsilosis. Esse último fator de virulência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vulvovaginal candidiasis (CVV) is an inflammation of genital mucosa caused by infection by yeasts. The main symptoms are dysuria, hyperemia, burning, corrimento, pruritus, dyspareunia, cracks. Approximately 75% of women suffer at least one episode of vulvovaginal candidiasis, 40% have more than one episode and less than 5% become recurrent (CVVR). The main cause is to candidiasis is Candida albicans, however, episodes due to the species non albicans are increasing. The management of vaginitis has been done so empirically, leading to problems with therapy. Thus, this project aimed to phenotypically characterize yeasts isolated from vaginal content of 223 adult women, symptomatic (S) and asymptomatic (A), attended by the Service of Gynecology, Hospital de Base de São José do Rio Preto and determine the clinical indicators. This has mycological analysis of 223 clinical isolates, of which 87 samples showed positive culture. C. albicans was the species most prevalent in both groups (A / S), followed by Candida glabrata. Most women were married with an average age of 30 to 40 years, said use of contraceptives and menstrual cycle regularly. In relation to sexual practices was for the part of patients, concomitance between habits, anal, oral and vaginal. When assessing the previous treatment, there was no evidence of association with particular symptoms. The susceptibility to antifungal held by the two methods of reference disc-diffusion and microdilution, showed agreement, statistically proven, only to itraconazole. For the production of virulence factor, only C. albicans produced phospholipase. Conversely, proteinase was detected in C. albicans, C. glabrata and Candida parapsilosis. The latter factor was associated with virulence, mainly in isolates from symptomatic patients. Data from this study helped reveal association between virulence factors with clinical signs... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre