CAVALCANTE, Galyléia Menezes. Estudo da imunoexpressão dos sistemas CXCR4-CXC112/SDF-1, CCR7-CCl21 e KI-67 no carcinoma de células escamosas oral e sua associação com indicadores clínicopatológicos, metástase linfonodal e sobrevida. 2013. 57 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-07-14T13:15:32Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-07-14T13:16:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-14T13:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) Previous issue date: 2013 / Chemokines are responsible for the directed migration of leukocyte chemotactic cytokines, coordinating cell movement during inflammation and the transport of hematopoietic cells. In addition to leukocytes, chemokine receptors are also found in neoplastic cells and tumors associated with stromal cells. Among chemokines, and the CXCR4/CXCL12 CCR7/CCL21 systems have been shown the involvement of lymph node metastases or distant metastases in different cancers. Thus, aim of this study was to evaluate the expression of CXCR4, CXCL12, CCR7, CCL21 and Ki-67 in oral squamous cell carcinoma (SCC) and to correlate these markers with clinicopathological indicators, lymph node metastasis and survival. We conducted a survey of reports and paraffin blocks of excisional biopsies of patients with SCC treated at the Hospital Haroldo Juaçaba (2001-2009). Data on anatomic location of the lesion, sex, age, patient survival, degree of histological differentiation of the tumor, tumor stage and presence or absence of lymph node metastasis, lymphovascular and perineural invasion, nuclear grade and depth of invasion were collected. For immunohistochemical analysis, followed by the technique of streptavidin-biotin-peroxidase using the anti-CXCR4, anti-CXCL12, anti-CCR7, anti-CCL21 and Ki-67 antibody. Histological sections were photomicrographed in 10 fields chosen randomly and measured for the number of labeled tumor cells and determined the percentage of each labeling antibody. The marking of CXCR4 was detected in the cytoplasm and nucleus, CXCL12, CCR7 and CCL21 were only cytoplasmic, their expression was observed in 18 (60%) 8 (22.66%) 16 (53.3%) and 3 (12%) cases, respectively. We found a significant positive association between lymphovascular invasion and immunostaining of CXCR4 (p = 0.007) and CCR7 (P = 0.01) and among these cases metastasis was present in 62.5% and 37.5%, respectively. When in combination with Ki67, we found a significant positive correlation between CXCR4 (p = 0.0086), CXCL12 (p = 0.036) and CCR7 (p = 0:04). Among patients CXCR4 + over 111 months, only 38.4% were alive (p = 0.845), whereas both patients CCR7 + (p = 0.398) as well as CXCR4 +, and CCR7 + (p = 0.441) after 62 months, everyone had already died. We conclude that these chemokines are associated with lymphovascular invasion and cell proliferation, perhaps favoring the development of metastasis and poor prognosis. / As quimiocinas são citocinas quimiotáticas responsáveis pela migração direcionada de leucócitos, coordenando o movimento celular durante a inflamação e o transporte de células hematopoiéticas. Além dos leucócitos, os receptores de quimiocinas também são encontrados em células neoplásicas e em tumores associados com células estromais. Dentre as quimiocinas, os sistemas CXCR4/CXCL12 e CCR7/CCL21 têm sido demonstrado no envolvimento de metástases linfonodais ou à distância em diferentes tipos de câncer. Dessa forma, foi objetivo desse trabalho avaliar a expressão de CXCR4, CXCL12, CCR7, CCL21 e Ki-67 em carcinoma de células escamosas orais (CEC) e correlacionar estes marcadores com indicadores clínicopatológicos, metástase linfonodal e sobrevida. Realizou-se um levantamento de laudos e blocos parafinados de biopsias excisionais de pacientes portadores de CEC tratados no Hospital Haroldo Juaçaba (2001 a 2009). Foram coletados dados sobre localização anatômica da lesão, sexo, idade, sobrevida do paciente, grau de diferenciação histopatológica do tumor, estadiamento tumoral e presença ou ausência de metástase linfonodal, invasão linfovascular e perineural, grau nuclear e profundidade de invasão. Para reação de imunohistoquímica, seguiu-se a técnica da estreptavidina-biotina-peroxidase, utilizando os anticorpos anti-CXCR4, anti-CXCL12, anti-CCR7, anti-CCL21 e Ki-67. As secções histológicas foram fotomicrografadas em 10 campos escolhidos aleatoriamente e quantificadas quanto ao número de células tumorais marcadas e determinado o percentual de marcação de cada anticorpo. A marcação de CXCR4 foi detectada em citoplasma e núcleo, CXCL12, CCR7 e CCL21 tiveram marcação apenas citoplasmática, sendo observada suas expressões em 18 (60%), 8 (22,66%), 16 (53,3%) e 3 (12%) casos, respectivamente. Encontrou-se uma associação significativa positiva entre a invasão linfovascular e a imunomarcação do CXCR4 (p=0.007) e CCR7 (p=0.01) e dentre esses casos a metástase esteve presente em 62,5% e 37,5%, respectivamente. Quando em associação com o Ki67, encontrou-se uma correlação positiva significante entre o CXCR4 (p=0.0086), CXCL12 (p=0.036) e CCR7 (p=0.04). Dentre os pacientes CXCR4+, ao longo de 111 meses, apenas 38,4% estavam vivos (p=0.845), ao passo que tanto para pacientes CCR7+ (p = 0.398), quanto CXCR4+ e CCR7+ (p = 0.441), após 62 meses, todos haviam ido a óbito. Conclui-se que essas quimiocinas estão associadas com a invasão linfovascular e proliferação celular, talvez favorecendo o desenvolvimento de metástases e um pior prognóstico.

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 victor_solorzano_ioc_mest_2014.pdf: 3199066 bytes, checksum: 5a50f9918959a0ee0f9a1c603688f5d5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue se tornou a arbovirose mais difundida no mundo, atingindo mais de 100 países. O sorotipo DENV-4 foi reintroduzido no Brasil em 2010, se espalhou para as diferentes regiões brasileiras sendo responsável por uma das maiores epidemias de dengue relatadas no país em 2013. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil clínico-laboratorial, citocinas/quimiocinas inflamatórias e mediadores da coagulação em pacientes infectados pelo DENV durante esta epidemia. Para isto, foram avaliados 265 casos confirmados de dengue atendidos nos centros de saúde dos estados do RJ e MS no ano de 2013. Os pacientes foram classificados de acordo com a nova classificação da OMS, 2009 nos grupos: 158 (70,2%) dengue sem sinais de alarme (DSSA), 65 (28,9%) dengue com sinais de alarme (DCSA) e 2 (0,9%) dengue grave. Os sinais de alarme mais frequentes foram dor abdominal persistente (61,5%) e sangramento de mucosas (32,3%). O DENV-4 foi o sorotipo de maior incidência e 85,2% dos pacientes apresentaram infecção secundária. Pacientes DCSA/DG apresentaram baixa contagem de leucócitos totais, de plaquetas e altos níveis séricos de AST/TGO e ALT/TGP quando comparados aos pacientes DSSA e aqueles ODF (outras doenças febris). A quantificação dos mediadores inflamatórios por ensaios imunoenzimáticos indicou: (i) níveis aumentados de citocinas (TNF-\03B1, IL- 6 e IL-10) e quimiocinas (IL-8/CXCL8, IP-10/CXCL10 e MCP-1/CCL2) nos pacientes DSSA e DCSA/DG quando comparados com o grupo controle; (ii) níveis aumentados de IL-10 e IL-6 nos pacientes DCSA/DG enquanto que IL-8/CXCL8 foi maior nos pacientes DSSA Em relação aos parâmetros de coagulação: (iii) Os pacientes DSSA e DCSA/DG apresentaram menores níveis do fator tecidual (TF) e maiores níveis do inibidor fisiológico da via do TF (TFPI) quando comparados com o grupo controle; (iv) Baixos níveis de fibrinogênio foram encontrados nos pacientes DCSA/DG e níveis elevados de trombomodulina foram encontrados nos pacientes entre 4-7 dias de doença. As análises de correlação demonstraram correlação inversa entre os níveis circulantes de IP-10/CXCL10 e IL-10 com a contagem de plaquetas e leucócitos totais e correlação positiva com níveis séricos de AST/TGO. Além disso, IL-10 foi associada diretamente com relação albumina/globulina. As análises de correlação demonstraram que os níveis de TF estavam diretamente correlacionados com os níveis do TFPI, que por sua vez foi associado inversamente com a contagem de plaquetas. Estes resultados sugerem mecanismos de regulação da cascata da coagulação durante a infecção pelo DENV. Apesar dos altos níveis circulantes de IL-10 encontrados nos pacientes DCSA/DG, a análise da curva sob a área ROC não encontrou bom valor preditivo na discriminação entre DSSA e DCSA/DG e, portanto a IL-10 não se mostrou adequada para o uso como um biomarcador nesta população / Dengue has become the most widespread arbovirus in the world, reaching more th an 100 countries. The DENV - 4 serotype was reintroduced in Brazil in 2010, and spread to the different Brazilian regions being responsible for one of the largest epidemics of dengue reported in the country in 2013 . The objective of this study was to evaluat e the clinical and laboratory profile, and inflammatory cytokines /chemokines and coagulation mediators in patients infected with DENV during this epidemic. For this, were evaluated 265 confirmed cases of dengue attended at health centers in the states of R J and MS in the year 2013. P atients were classified according to the new WHO classification, 2009 in groups: 158 (70.2%) de ngue without warning signs (DwoWS ), 65 (28.9%) dengu e with warning signs (DwWS ) and 2 (0.9%) severe dengue (SD) . The most frequent w a rning signals were persistent abdominal pain (61.5%) and mucosa l bleeding (32.3%). The DENV - 4 was the most prevalent serotype and 85,2% of dengue patients showed secondary infection . DwWS/SD patients showed low er white blood cell and platele t count s , and h igher AST and ALT serum levels compared to DwoWS and other febrile illnesses patients. Quantification of inflammatory mediators by immunoassays indicated : (i) i ncreased levels of cytokines ( TNF - α , IL - 6 and IL - 10 ) and chemokines ( IL - 8/CXCL8, IP - 10/CXCL10 an d MCP - 1/CCL2 ) in DwoWS and DwWS patients compared with healthy individuals ; ( ii) increased levels of IL - 10 and IL - 6 in DwWS/SD patients while IL - 8/CXCL8 was increased in DSSA patients; In respect to coagulation parameters: (iii ) DwoWS and DwWS/SD patients showed lower levels of sTF and higher of TFPI compared with the control group; ( i v) Low er levels of fibrinogen were found in DwWS/SD patients and high er levels of thrombomodulin in patie nts between 4 - 7 days of illness; Correlation analysis showed an invers e correlation between circulating levels of IP - 10/CXCL10 and IL - 10 with the total amount of platelets and leukocytes and positive correlat ion with serum levels of AST . Furthermore, IL - 10 was directly a ssociated with albumin/ globulin ratio. Corre lation anal ysis showed that TF levels were directly correlated with TFPI l evels, which in turn was inversely related with platelets counts . These results suggest mechanisms involving regulation of the coagulation cascade during DENV infection. Despite high er circulat ing levels of IL - 10 found in DwWS/SD patients, analysis of the area under the ROC curve, did not showed a good predictive value in discriminating those who were likely to develop DwWS/SD and therefore IL - 10 was not suitable for use as a biomarker in this p opulation.

Orientador: Maria Heloisa Souza Lima Blotta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:34:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mamoni_RoneiLuciano_D.pdf: 2710116 bytes, checksum: 0509d4df3007265d7ee581ed17507d5e (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM) pode ser classificada em três grupos principais: PCM-infecção (PI); forma adulta (FA) e forma juvenil (FJ). O presente trabalho teve como objetivo comparar a resposta imunológica nesses diferentes grupos, por meio da análise da cinética da expressão do RNA mensageiro (RNAm) de citocinas e quimiocinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-g, TGF-b, TNF-a, CXCL8, CXCL9, CXCL10) por RT-PCR, e caracterizar fenotipicamente as células produtoras dessas citocinas por citometria de fluxo. Como resultado obtivemos que indivíduos do grupo PI expressam precocemente maior quantidade de RNAm para IFN-g, TNF-a, CXCL9 e CXCL10, quando comparados aos pacientes com a FJ da PCM, e níveis similares de CXCL10 e IFN-g e aumentados de CXCL9 e TNF-a quando comparados aos pacientes com a FA. A expressão do RNAm para citocinas Th2 (IL-4, IL-10, IL-5 e TGF-b), de maneira geral, foi maior e mais precoce em indivíduos com a FA ou FJ, quando comparados aos indivíduos do grupo PI. Em relação a expressão proteica, observamos que indivíduos do grupo PI apresentam um número maior de células produtoras de IFN-g, TNF-a, IL-2, CXCL9 e CXCL10 quando comparados aos dois grupos de pacientes. A produção de IFN-g foi observada principalmente em células CD3+CD8+, enquanto que IL-2 e TNF-a foram detectados principalmente em células CD3+CD4+. Em relação à expressão de moléculas de superfície, observamos que monócitos de indivíduos do grupo PI apresentam maior expressão de CD80 e menor expressão de CD86 e CD54, quando comparados aos indivíduos com a FA ou FJ, e maior expressão de HLA-DR e CD11a quando comparados aos indivíduos com a FJ da PCM. Nossos resultados indicam que a cinética diferencial de produção de RNAm para citocinas do tipo Th1 ou Th2 pelos grupos estudados pode direcionar a resposta imunológica após a infecção, originando as diferenças clínicas observadas / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM) presents three major forms: PCM-infection (PI); adult form (AF) and juvenile form (JF). The aim of this study was to compare the immunological response in these groups through the analysis of the kinectics of mRNA expression of some cytokines and chemokines (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-lO, IFN-y, TGF p, TNF-a, CXCLS, CXCL9 and CXCLlO) by RT-PCR, as well as, to characterize the phenotype of the cytokines producing cells by flow cytometry. The results showed that PI individuaIs express earlier and higher levels of mRNA for IFN-y, TNF-a, CXCL9 and CXCLIO when compared to JF patients and similar levels of CXCLlO and IFN-y and higher levels of CXCL9 and TNF -a when compared to AF ones. On the other hand, the mRNA expression ofTh2 cytokines (IL-4, IL-IO, IL-5 and TGF-P) was higher and earlier in JF and AF groups when compared to PI individuaIs. In relation to protein expression, we observed that PI group presents a higher percentage of cells producing IFN-y, TNF-a, IL-2, CXCL9 and CXCLIO when compared to both groups ofpatients. The production ofIFN-y was predominantIy done by CD3+CDS+ T cells, whereas IL-2 and TNF-a production was higher in CD3+CD4+ cells. Monocytes ofPI individuaIs also presented higher expression of CDSO and lower expression of CDS6 and CD54 when compared to JF and AF patients, and higher expression of HLA-DR and CDIIa only when compared to JF patients. These results indicate that the differential kinetic of mRNA expression of ThI or Th2 cytokines observed in the different forms of PCM may modulate the immunological response resulting in the different outcomes observed in this disease / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:45:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 338130.pdf: 3346579 bytes, checksum: 5c2821cb48b674a2f31ee7b10d6dd8e2 (MD5) Previous issue date: 2015 / A dor crônica é um problema de saúde grave, que afeta milhões de pessoas por todo o mundo. No entanto, não há terapia farmacológica disponível para o tratamento adequado de pacientes com dor crônica. Estudos recentes fornecem evidências convincentes de que a neuroinflamação desempenha um papel fundamental na patogênese dador crônica. O objetivo deste estudo foi avaliar o possível envolvimento da quimioquina CXCL1 na patogênese da dor neuropática, utilizando para isso diferentes modelos experimentais. A injeção intraneural (i.n.)de CXCL1 em camundongos causou hiperalgesia mecânica e térmica (ao calor) de longa duração, associada com migração de neutrófilos para o local da injeção no nervo ciático. A depleção destas células, após o tratamento dos animais com vimblastina, reduziu a hiperalgesia mecânica induzida pela quimiocina. A administração da CXCL1 no nervo ciático de camundongos aumentou os níveis teciduais da interleucina 1?? (IL-1??), interleucina 6 (IL-6) e da quimiocina CCL2, mas não do fator de necrose tumoral ?? (TNF-??). A participação da CXCL1 no modelo de ligação parcial do nervo ciático (LPNC) também foi evidenciada, uma vez que após a lesão os níveis teciduais e a expressão do RNAm para a CXCL1 encontraram-se aumentados tantono nervo ciático quanto na medula espinhal de camundongos. Otratamento com anticorpo anti-CXCL1 no momento, ou 4 dias após aLPNC reduziu de maneira significante tanto a hiperalgesia mecânica como a térmica (ao calor). Além disso, a administração intratecal (i.t.)do anticorpo anti-CXCL1 foi eficaz em inibir a hiperalgesia mecânica induzida pela LPNC, sugerindo a participação central desta quimiocinano desenvolvimento da dor neuropática. Estendendo os resultados anteriores, foi demonstrado que a participação da CXCL1 nos mecanimos envolvidos na LPNC depende da migração de neutrófilos, bem como da liberação de mediadores inflamatórios, especialmente daIL-1?? e IL-6. Finalmente, avaliou-se o possível envolvimento da quimiocina CXCL1 em um modelo de dor neuropática não relacionadoa lesão direta de nervos, a neuropatia periférica induzida pelo paclitaxel (PTX), um quimioterápico de amplo uso clínico. A administração repetida de PTX induziu o aumento significativo da expressão do RNAm para CXCL1 tanto no GRD como na medula espinhal, bem como aumentou os níveis teciduais desta quimiocina na medula espinal. O tratamento sistêmico com o anticorpo anti-CXCL1, mas não o com antagonista do receptor CXCR2, reduziu a hiperalgesia mecânica instalada induzida pelo PTX. De modo relevante, o tratamento preventivo destas drogas quando administrados pela via intratecal inibiram de maneira significativa a hiperalgesia mecânica induzida pelo PTX. Estes resultados sugerem a participação da quimiocina CXCL1 e do seu receptor expressos na medula espinhal no desenvolvimento da neuropatia induzida pelo PTX. Ainda os mecanismos centrais envolvidos na hiperalgesia mecânica induzida pelo PTX parecem depender da ativação da via de sinalização PI3K/AKT, e não das enzimas PLC e PKC. Os resultados do presente estudo demonstraram que a quimiocina participa dos mecanismos envolvidos no estabelecimento e manutenção da dor crônica em modelos experimentais. Desta maneira, estratégias que contribuam para inibir a ação e/ou a liberação desta quimiocina poderiam constituir ferramentas terapêuticas importantes para o tratamento da dor neuropática em seres humanos.<br> / Abstract : Chronic pain is a rising health problem that is predicted to affect millions of people worldwide. However, there are so far no available pharmacotherapies providing satisfactory pain relief for patients with persistent pain. Recent studies provide compelling evidence that neuroinflammation plays a key role in the pathogenesis of chronic pain. In this study we sought to evaluate the involvement of chemokine CXCL1 in the pathogenesis of neuropathic pain in different experimental models. Intraneural injection (i.n.) of CXCL1 induced thermal and mechanical hyperalgesia in mice and caused neutrophil migration into the mouse sciatic nerve. Depletion of these cells in animals pre-treated with vinblastine significantly reduced the mechanical hyperalgesia induced by the chemokine. Administration of CXCL1 in the sciatic nerve of mice increased tissue levels of interleukin1à (IL-1à ), interleukin 6 (IL-6) and chemokine CCL2, but not the tumor necrosis factor a (TNF-a). CXCL1 role in the partial ligation of the sciatic nerve (PLSN) model was also demonstrated since after surgery their tissue levels and CXCL1 mRNA expression increased in the sciatic nerve and spinal cord tissues. Treatment with anti-CXCL1 antibody at the moment or 4 days after surgery reduced mechanical and thermal hyperalgesia induced by PLSN. Furthermore, the intratecal (i.t.) injection of anti-CXCL1 antibody also inhibited mechanical hyperalgesia induced by PLSN, suggesting the central involvement of this chemokine in the development of neuropathic pain. The participation of the CXCL1 in the PLSN model also depends on neutrophils migration and release of inflammatory mediators such as IL-1à and IL-6. Finally we evaluated the involvement of CXCL1 chemokine in a neuropathic pain model that was not dependent on direct nerve injuries, the neuropathic pain model induced by the chemotherapy paclitaxel (PTX). Repeated administration of PTX induced a significant increase in expression of CXCL1 mRNA in spinal cord and DRG, as well as increased the tissue levels of this chemokine in the spinal cord. Systemic treatment with anti-CXCL1 antibody, but not the CXCR2 receptor antagonist, reduced the installed mechanical hyperalgesia induced by PTX. Preventive treatment of these drugs when administered by intratecal route significantly inhibited the mechanical hyperalgesia induced by PTX. These results suggest the involvement of CXCL1 chemokine and its receptor expressed in the spinal cord in the development of neuropathy induced by PTX. Furthermore, central mechanisms involved in the mechanical hyperalgesia induced PTX appear to depend on activation of the PI3K/AKT signaling pathway, and independent of PLC and PKC enzymes activation. The results of this study demonstrated the role of CXCL1 in the establishment and maintenance of chronic pain in experimental models. Thus, strategies to inhibit the action and/or the release of this chemokine might be an important therapeutic tool for the treatment of neuropathic pain inhumans.

A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo sendo constituída por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório. Assim sendo, este trabalho teve como proposição: 1. avaliar a capacidade de fibroblastos de polpa dental humana em cultura em produzirem as quimiocinas MIP-l\'alfa\' /CCL3 e SDF-1/CXCL12; 2. avaliar a produção destas quimiocinas pelos fibroblastos quando estimulados por Enterococcus faecalis morto por calor com relação à quantidade de bactérias por célula e 3. avaliar a liberação destas quimiocinas com relação ao tempo de estímulo. Para o estabelecimento das culturas, foi coletada a polpa de terceiro molar hígido de um paciente saudável. O tecido foi extraído, armazenado e picotado em meio de cultura para fibroblastos (DMEM), os quais foram utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo Enterococcus .faecalis morto por calor numa concentração correspondente a 1, 10 e 100 bactérias por fibroblasto foi adicionado aos poços. Após 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante das células foi coletado para a análise por ELISA. A análise estatística foi realizada aplicando-se o teste Kruskal-Wallis com nível de significância de 5%. A produção de MIP-l\'alfa\' /CCL3 e SDF-l/CXCL12 pelas células pôde ser detectada por ELISA. Os fibroblastos pulpares se mostraram capazes de produzir SDF-1 constitutivamente sendo que o estímulo bacteriano levou a uma diminuição estatisticamente significativa desta produção. A produção de MIP-l\'alfa\' também foi detectada tanto de maneira constitutiva como em resposta ao desafio microbiano. Enquanto a concentração intermediária de bactéria por fibroblasto (10:1) mostrou uma produção semelhante ao grupo controle, as concentrações de 1 e 100 bactérias por fibroblasto induziram aumento maior na primeira hora de estímulo. Essas diferenças, entretanto, não foram estatisticamente significativas. A capacidade dos fibroblastos secretarem quimiocinas, como MIP-l\'alfa\' e SDF-1, reforça a importância dessas células dentro do contexto de imunidade e inflamação pulpar, principalmente por serem as células mais numerosas deste microambiente. / Dental pulp is a connective tissue structure constituted by many different cell types. Among them, the fibroblasts are the most frequent ones. When challenged by different aggressive agents, these cells are able to release some substances like cytokines and chemokines, which are essential to trigger the inflammatory process. The aims of this study were: 1. to evaluate the ability of fibroblasts to produce the chemokines MIP-l\'alfa\'/CCL3) and SDF-1/CXCL12; 2. to evaluate the expression of these chemokines by fibroblasts when challenged by heat killed Enterococcus. faecalis in gradual concentrations and 3. to evaluate the production of these chemokines in a time course manner. The dental pulp from non-carious third molar was collected from a healthy patient. Explants were made and stocked in culture medium (DMEM) for fibroblasts growth. The cells were used since passage four. In a 24-well plate and after reaching confluence, culture medium alone or containing heat killed E. faecalis at proportion 1:1, 10:1 and 100:1 bacteria:fibroblast, were added to the fibroblasts. After 1, 6 and 24 hours, the supernatants were collected for analysis. The protein detection of MIP-l\'alfa\'/CCL3 and SDF-1/CXCL12 was performed by ELISA. For statistical analysis, data were assessed by Kruskal-Wallis followed by Miller post-test. Significance levels of 5% were adopted. Production of both chemokines was detected by ELISA. Pulp fibroblasts were able to produce SDF-1 constitutively. This production decreased with the increase in the number of heat killed E. faecalis increased (p < 0.05). Production of MIP-l\'alfa\' was detected in unchallenged and challenged cells. The median bacterial concentration (10:1) presented a profile production similar to that of unstimulated cells. Bacterial concentrations of 1 and 100 microrganisms/cell showed a highly enhanced production of MIP-l\'alfa\' at the first hour of stimulum; however, these data were not statistically significant (p > 0.05). Fibroblasts ability to produce chemokines, like MIP-l\'alfa\' and SDF-1, confirms their importance at immune and inflammatory events in dental pulp, specially being fibroblasts the most abundant cells at this microenvironment .

Fatores genéticos e imunológicos influenciam as diferentes respostas observadas entre indivíduos, desde a exposição ao HIV até o desenvolvimento da aids. As quimiocinas e seus receptores atuam na comunicação entre o sistema imune inato e adaptativo após o estabelecimento da infecção. A variabilidade genética dessas moléculas pode ser essencial para a resposta imune, principalmente se essas moléculas agem na fase inicial da infecção, fase esta que definirá o transcurso da doença. Além disso, a investigação da expressão de quimiocinas nos diferentes estágios clínicos da infecção e sua modulação após iniciado o tratamento com ARVs (antirretrovirais) é importante na busca de biomarcadores. Neste estudo, exploramos o papel de quinze polimorfismos candidatos em genes de receptores de quimiocinas e seus ligantes na susceptibilidade e na progressão à aids. Além disso, foram quantificados os níveis plasmáticos de seis quimiocinas em progressores extremos nos diferentes estágios clínicos da infecção e avaliamos o impacto da terapia como moduladora da resposta imune. Os resultados nos mostram que os polimorfismos rs56061981 no CXCL10 (CT/TT, OR: 1,819, IC 95% 1,074-3,081, P=0,026) e rs3091250 no CCR3 (TT, OR: 2,147, IC 95% 1,076-4,287, P=0,030) influenciam na susceptibilidade à infecção pelo HIV. Nas análises de interação gene-gene realizadas por redução multifatorial de dimensionalidade (MDR), observou-se que o rs56061981 no CXCL10 e rs4359426 no CCL22, juntos predizem 57% da susceptibilidade à infecção pelo HIV (P=0,008). Ademais, observou-se que os polimorfismos rs13034664 no CCL20 (CC, OR: 0,214, IC 95% 0,063-0,730, P=0,014) e rs4359426 no CCL22 (CA/AA, OR: 2,685, IC 95% 1,128-6,392, P=0,026) foram associados com a progressão rápida à aids. Com relação aos níveis plasmáticos, o CXCL10 estava significativamente aumentado nos progressores rápidos (Pcorrigido(c)=0,003) e lentos (Pc≤0,0001) pré-aids quando comparado com os controles saudáveis. Neste contexto, sugere-se o CXCL10 como biomarcador em indivíduos crônicos HIV+. Quando avaliadas as subpopulações celulares T auxiliares em HIV+ sob ARV, se observou uma frequência aumentada de linfócitos TCD4+ ativados nos progressores rápidos (1,3% vs. 13,6%, Pc=0,008) e nos progressores lentos (1,3% vs. 5,4%, Pc=0,044) quando comparados com os controles saudáveis. Já a frequência de linfócitos T CD8+ ativados foi mais alta nos progressores rápidos quando comparados com os controles saudáveis (0,32% vs. 8,7%; Pc=0,001). A frequência de células Th2 estava diminuída nos progressores rápidos (Pc=0,027) e, nos progressores lentos, as células Th1 estavam com frequência diminuída, enquanto que a frequência das Th17 estava aumentada quando comparados com os controles saudáveis (Pc=0,007 e Pc=0,042, respectivamente), se observando um desequilíbrio de subconjuntos celulares T CD4+ nos progressores extremos sob ARV. / From HIV exposition to AIDS disease different responses against HIV infection are influenced by immunological and genetic host factors. Chemokines and their receptors link the innate and adaptive system after the establishment of HIV infection. Genetic diversity of these molecules is crucial to the immune response, since they have a pivotal role in the early infection, clinical stage which predicts the disease progression. Furthermore, to investigate the expression of chemokines in different clinical stages of HIV infection and their modulation before and after initiated ART (antiretroviral therapy) is important to identify biomarkers of progression. In this study, we explored the role of 15 candidate polymorphisms in chemokine receptor and chemokine genes on susceptibility to HIV infection and progression to AIDS. Also, plasma levels of six chemokines were quantified in extreme progressors in different clinical stages of infection and the impact of ART, as a modulator of the immune response, was evaluated. The CXCL10 rs56061981 (CT/TT, OR: 1.819, CI 95% 1.074-3.081, P=0.026) and CCR3 rs3091250 (TT, OR: 2.147, CI 95% 1.076-4.287, P=0.030) variants were associated with susceptibility to HIV infection. Also, in the MDR (Multifactor Dimensionality Reduction) analyses, the best model to predict the susceptibility to HIV infection was composed by CXCL10 rs56061981 and CCL22 rs4359426 with 57% of accuracy (P=0.008). In analysis of disease progression, CCL20 rs13034664 (CC, OR: 0.214, CI 95% 0.063-0.730, P=0.014) and CCL22 rs4359426 (CA/AA, OR: 2.685, CI 95% 1.128-6.392, P=0.026) variants were associated with rapid progression to AIDS. Regarding plasma levels, CXCL10 levels were higher in rapid progressors (RPs) (Pcorrected(c)=0.003) and slow progressors (SPs) (Pc≤0.0001) in pre-AIDS when compared to healthy controls and this molecule was suggested as a potential biomarker of disease progression. Furthermore, frequencies of activated CD4+ T-cell were higher in SPs (1.3% vs. 5.4%, Pc=0.044) and RPs (1.3% vs. 13.6%, Pc=0.008) under ART when compared with healthy controls. On the other hand, frequencies of activated CD8+ T cell were elevated in RPs (0.32% vs. 8.7%, Pc=0.001) under ART when compared with controls. Th2 cell frequency was lower in RPs under ART (Pc=0.027) when compared with controls, and Th1 cell frequency was lower (Pc=0.007) and Th17 cells were higher (Pc=0.042) in SPs under ART when compared with healthy controls.

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A Artrite Idiopática Juvenil (AIJ) abrange um grupo de doenças caracterizadas pela inflamação crônica sinovial com densa infiltração de linfócitos T. É uma das mais prevalentes entre as doenças reumáticas crônicas da infância, podendo acarretar incapacidade motora permanente. Não é conhecido fator causal até o momento. Há evidências da ação imunológica pela confirmação da elevação dos níveis séricos e no líquido sinovial de interleucinas e receptores de interleucinas tais como IL-6 e TNFα. Um receptor que está sendo associado ao estabelecimento do processo inflamatório nas doenças auto-imunes é o receptor de quimiocinas CCR5. As quimiocinas são moléculas pró-inflamatórias que funcionam através da ativação e atração química dos leucócitos. Elas exercem atividade quimiotática sobre neutrófilos, linfócitos e monócitos, tendo papel importante em todas as fases da inflamação. A variante polimórfica CCR5delta32 está descrita como protetora contra infecções por HIV-1 e doenças como Artrite Reumatóide (AR), mas há poucos estudos na AIJ. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação da variante polimórfica delta32 do receptor de quimiocinas CCR5 com a Artrite Idiopática Juvenil e com seus subtipos oligoarticular, poliarticular e sistêmico. Trata-se de um estudo caso-controle com 101 pacientes que completaram critérios de AIJ oligoarticular, poliarticular e sistêmico, e 104 indivíduos saudáveis, caucasóides, acima de 16 anos, pareados por sexo. O DNA foi extraído e genotipado para a presença do alelo CCR5delta32 por reação em cadeia da polimerase. O teste de Qui-quadrado foi usado para comparar as diferenças entre as freqüências das variantes alélicas. Entre os 101 pacientes, 80 eram do sexo feminino (79,2%); a média de idade do início da doença foi 4,8 anos + 3,1; a média de tempo de doença foi 5 anos +2,6. A presença do alelo CCR5delta32 foi mais elevada nos pacientes com AIJ (9,4%; P=0,049) e no subtipo sistêmico (25%; P=0,004) em comparação com o grupo controle (4%), enquanto não houve diferença nos subtipos oligoarticular (4%; P=0,757) e poliarticular (10%; P=0,071). Este estudo permitiu concluir que a freqüência do alelo CCR5delta32 foi maior em pacientes com AIJ e em pacientes com o subtipo sistêmico, e semelhante aos controles nos pacientes com os subtipos oligoarticular e poliarticular. Os resultados também sugerem a existência de diferença na susceptibilidade genética e imunopatológica entre os subtipos de AIJ. / The Juvenile Idiopathic Arthritis (JIA) includes a group of diseases characterized by chronic synovial inflammation with dense T lymphocyte infiltration. It is one of the most prevalent among the rheumatic chronic diseases of the childhood, and could lead to permanent motive inability. There is not causal factor identified until the moment. There are evidences of the immunological action through the elevation of cytokine blood serum levels and interleukins receptor such as IL-6 and TNF. A receptor that is being associated to the establishment of the inflammatory process in auto-immune diseases is the chemokine receptor CCR5. Chemokines are pro-inflammatory molecules that act through the activation and chemoattraction of the leucocytes. They exercise chemotatic activity on neutrophyls, lymphocytes and monocytes and develop important functions in all phases of the inflammation. The polymorphic variant CCR5delta32 was described as protective against infections for HIV-1 and diseases as Rheumatoid Arthritis (RA), but there are few studies in JIA. The objective of this study was to evaluate the association of the polymorphic variant delta32 of the chemokine receptor CCR5 and Juvenile Idiopathic Arthritis subtypes: polyarticular, oligoarticular and systemic. It is a case-control study with 101 patients that fulfilled the criteria of oligoarticular, polyarticular and systemic JIA, and 104 healthy, caucasian individuals, above 16 years old, matched by gender. The DNA was extracted and genotyped for the presence of the CCR5delta32 allele by polimerase chain reaction. The Chi-square test was used to compare the differences among the frequencies of the allelic variants. Among the 101 patients, 80 were female (79,2%); the average of age on the beginning of the disease was 4,8 years + 3,1; the average of time of disease was 5 years + 2,6. The largest frequency of the CCR5delta32 allele was statistically significant in the patients with JIA (9,4%; P=0,049) and the subtype systemic arthritis (25%; P=0.004) as compared to the controls, while there was not difference between the oligoarticular (5%; P=0,757) and polyarticular subtypes (10%; P=0.071) and controls (4%). This study allowed concluding that the frequency of the CCR5delta32 allele was higher in patients with JIA and subtype systemic, and similar to the controls in the patients with oligoarticular and polyarticular subtypes. The result also suggests the existence of difference in the genetic immunopathologic susceptibility among the JIA subtypes.

A Artrite Idiopática Juvenil (AIJ) abrange um grupo de doenças caracterizadas pela inflamação crônica sinovial com densa infiltração de linfócitos T. É uma das mais prevalentes entre as doenças reumáticas crônicas da infância, podendo acarretar incapacidade motora permanente. Não é conhecido fator causal até o momento. Há evidências da ação imunológica pela confirmação da elevação dos níveis séricos e no líquido sinovial de interleucinas e receptores de interleucinas tais como IL-6 e TNFα. Um receptor que está sendo associado ao estabelecimento do processo inflamatório nas doenças auto-imunes é o receptor de quimiocinas CCR5. As quimiocinas são moléculas pró-inflamatórias que funcionam através da ativação e atração química dos leucócitos. Elas exercem atividade quimiotática sobre neutrófilos, linfócitos e monócitos, tendo papel importante em todas as fases da inflamação. A variante polimórfica CCR5delta32 está descrita como protetora contra infecções por HIV-1 e doenças como Artrite Reumatóide (AR), mas há poucos estudos na AIJ. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação da variante polimórfica delta32 do receptor de quimiocinas CCR5 com a Artrite Idiopática Juvenil e com seus subtipos oligoarticular, poliarticular e sistêmico. Trata-se de um estudo caso-controle com 101 pacientes que completaram critérios de AIJ oligoarticular, poliarticular e sistêmico, e 104 indivíduos saudáveis, caucasóides, acima de 16 anos, pareados por sexo. O DNA foi extraído e genotipado para a presença do alelo CCR5delta32 por reação em cadeia da polimerase. O teste de Qui-quadrado foi usado para comparar as diferenças entre as freqüências das variantes alélicas. Entre os 101 pacientes, 80 eram do sexo feminino (79,2%); a média de idade do início da doença foi 4,8 anos + 3,1; a média de tempo de doença foi 5 anos +2,6. A presença do alelo CCR5delta32 foi mais elevada nos pacientes com AIJ (9,4%; P=0,049) e no subtipo sistêmico (25%; P=0,004) em comparação com o grupo controle (4%), enquanto não houve diferença nos subtipos oligoarticular (4%; P=0,757) e poliarticular (10%; P=0,071). Este estudo permitiu concluir que a freqüência do alelo CCR5delta32 foi maior em pacientes com AIJ e em pacientes com o subtipo sistêmico, e semelhante aos controles nos pacientes com os subtipos oligoarticular e poliarticular. Os resultados também sugerem a existência de diferença na susceptibilidade genética e imunopatológica entre os subtipos de AIJ. / The Juvenile Idiopathic Arthritis (JIA) includes a group of diseases characterized by chronic synovial inflammation with dense T lymphocyte infiltration. It is one of the most prevalent among the rheumatic chronic diseases of the childhood, and could lead to permanent motive inability. There is not causal factor identified until the moment. There are evidences of the immunological action through the elevation of cytokine blood serum levels and interleukins receptor such as IL-6 and TNF. A receptor that is being associated to the establishment of the inflammatory process in auto-immune diseases is the chemokine receptor CCR5. Chemokines are pro-inflammatory molecules that act through the activation and chemoattraction of the leucocytes. They exercise chemotatic activity on neutrophyls, lymphocytes and monocytes and develop important functions in all phases of the inflammation. The polymorphic variant CCR5delta32 was described as protective against infections for HIV-1 and diseases as Rheumatoid Arthritis (RA), but there are few studies in JIA. The objective of this study was to evaluate the association of the polymorphic variant delta32 of the chemokine receptor CCR5 and Juvenile Idiopathic Arthritis subtypes: polyarticular, oligoarticular and systemic. It is a case-control study with 101 patients that fulfilled the criteria of oligoarticular, polyarticular and systemic JIA, and 104 healthy, caucasian individuals, above 16 years old, matched by gender. The DNA was extracted and genotyped for the presence of the CCR5delta32 allele by polimerase chain reaction. The Chi-square test was used to compare the differences among the frequencies of the allelic variants. Among the 101 patients, 80 were female (79,2%); the average of age on the beginning of the disease was 4,8 years + 3,1; the average of time of disease was 5 years + 2,6. The largest frequency of the CCR5delta32 allele was statistically significant in the patients with JIA (9,4%; P=0,049) and the subtype systemic arthritis (25%; P=0.004) as compared to the controls, while there was not difference between the oligoarticular (5%; P=0,757) and polyarticular subtypes (10%; P=0.071) and controls (4%). This study allowed concluding that the frequency of the CCR5delta32 allele was higher in patients with JIA and subtype systemic, and similar to the controls in the patients with oligoarticular and polyarticular subtypes. The result also suggests the existence of difference in the genetic immunopathologic susceptibility among the JIA subtypes.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-04-24T19:50:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) / CNPq, CAPES, PROCAD – 0018/01-5, FAPESB / Dois artigos científicos resumem o presente estudo. No primeiro, é mostrado que duas cepas de L. braziliensis, isoladas de pacientes de diferentes Estados (Ceará e Bahia), são geneticamente diferentes e apresentam processos patológicos distintos em camundongos BALB/c. No segundo trabalho é demonstrada uma correlação entre padrões de expressão de quimiocinas, induzidas por estas duas cepas de L braziliensis, com a formação de lesão e a atração de leucócitos para o sítio inflamatório. O terceiro trabalho é uma revisão sobre o papel das quimiocinas e receptores de quimiocinas nas interações parasito-hospedeiro em leishmaniose. Em particular, a revisão focaliza os estudos que contribuíram para a compreensão sobre quimiocinas na infecção por leishmania. Os principais achados desses estudos são: 1. A L. braziliensis H3227 do Ceará apresentou genótipo diferente da L. braziliensis BA788 da Bahia, demonstrado por RAPD. 2. A cepa H3227 levou ao desenvolvimento de lesões pequenas que se resolveram, enquanto BA788 não causou lesões em camundongos BALB/c. 3. Em ambos os grupos de camundongos, a carga parasitária não diferiu significativamente no sítio de infecção e começou a reduzir com 30 dias de infecção. Nos linfonodos drenantes, entretanto, o número de parasitos aumentou durante o decorrer do estudo. 4. Após a inoculação do parasito, a cepa BA788 pareceu ativar mais precocemente uma reposta mais intensa tipo Th1. Camundongos infectados com BA788 produziram níveis mais altos de IFN-γ, o que se correlacionou com um maior número de células NK nas lesões destes animais. 5. Numa fase mais tardia, camundongos infectados com H3227 produziram mais IL-12p70 e IL-10 no sobrenadante de células recuperadas dos linfonodos. Esta regulação da produção de IL-10 coincidiu com o pico máximo do desenvolvimento da lesão e da carga parasitária nestes animais. 6. As maiores lesões causadas por H3227, em camundongos BALB/c, foi diretamente correlacionada com o aumento progressivo da reação inflamatória, mas não com a carga parasitária. 7. A expressão mais precoce e intensa das quimiocinas CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1α, CXCL1/KC, CCL11/eotaxina, XCL1/linfotactina e dos seus respectivos receptores correlacionou-se com o maior influxo de leucócitos para as lesões induzidas por H3227 e com o aumento do processo inflamatório observado nos camundongos infectados com esta cepa, após 15 dias de infecção. 8. As diferenças observadas no processo inflamatório estavam correlacionadas com a virulência do parasito, uma vez que a cepa mais patogênica H3227 mostrou-se um recrutador mais potente de todas as células observadas no sistema do bolsão inflamatório, do que a menos patogênica BA788. Em conclusão, os achados apresentados aqui indicam que duas cepas de L. braziliensis geneticamente diferentes, embora apresentem carga parasitária semelhante no sítio de inoculação, podem estabelecer processos patológicos distintos e induzir expressão de quimiocinas em diferentes tempos e/ou intensidades, levando ao recrutamento diverso de células e respostas inflamatórias diferenciadas que poderiam finalmente estar envolvidas em diferentes apresentações da doença. / Salvador