Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-24Bitstream added on 2014-06-13T19:21:42Z : No. of bitstreams: 1 batistini_ap_dr_jabo.pdf: 647626 bytes, checksum: 4539039c5222292b6b064ca5d3f95e8a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Unaerp / Anemopaegma arvense é uma planta medicinal endêmica do cerrado com princípios ativos contra o câncer, a malária e a AIDS. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade morfológica, genética e química de sete populações naturais coletadas no cerrado remanescente do estado de São Paulo nos municípios de Itatinga, Bauru, Brotas, Iaras, Pedregulho, Estação Experimental de Paraguaçú Paulista e Reserva Biológica de Moji-Guaçú. As metodologias realizadas foram: a identificação taxonômica com uma chave de identificação; análise genética, com a técnica de Polimorfismo de DNA Amplificado ao Acaso (RAPD) e análise química com os marcadores triterpenos betulina, ácido betulínico, ácido oleanólico e ácido ursólico. Na identificação taxonômica foram registradas as quatro variedades: arvense, pubera, latifolia e petiolata, sendo que as variedades pubera e arvense predominaram nos locais de coleta à leste do estado, a variedade latifolia predominou no oeste, e no centro do estado há uma ocorrência de todas as variedades indistintamente. Na análise genética, a maior parte da variação foi encontrada dentro de populações, e a alta estruturação populacional encontrada segue o modelo de ilhas. Os indivíduos coletados apresentaram quimiotipos distintos que foram separados em 4 grupos. Trinta e sete dos 106 indivíduos coletados (cerca de 1/3 do total) foram selecionados para serem conservados em banco de germoplasma in vitro. Assim, a conservação da diversidade genética de A. arvense pode ser garantida e disponibilizada como matéria-prima na indústria farmacêutica brasileira. / Anemopaegma arvense is an endemic species native to Brazilian cerrado regions with bioactive agents effective on the treatment of cancer, malaria and HIV. The objective of this work was to evaluate to morphologic, genetic and chemical diversity of seven natural populations of A. arvense collected in remaining areas of cerrado in the state of São Paulo more specifically in the localities of Itatinga, Bauru, Brotas, Iaras, Pedregulho, Experimental Station of Paraguaçú Paulista and Biological Reserve of Moji-Guaçú. Taxonomic identification was developed using an identification key; RAPD genetic analysis and chemical analysis using the triterpenoid markers betulin, betulinic acid, oleanolic acid and ursolic acid. Based on the taxonomic identification four varieties were recorded: arvense, pubera, latifolia and petiolata. The varieties pubera and arvense occur mainly in the East of the state, the variety latifolia happens in the West and the four varieties were found indistinctly in the interior of the state. Genetic analysis demonstrated great variability inside populations and that the populational structure found follows the model of islands. The accessions collected, presented different chemotypes and were divided in 4 groups. Among the 106 individuals collected, 37 were selected (about 1/3 of the total) and were introduced in the in vitro germplasm bank to assure the genetic diversity preservation of A. arvense and permit supplying pharmaceutical industry with crude material.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:20:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TesePDF.pdf: 1629095 bytes, checksum: d2f6e49bba963a811f78083dc8e6bd63 (MD5) Previous issue date: 2003-08-29 / Universidade Federal de Sao Carlos / The identification of genetic marks can provide information about the distribution of genetic variability in relation to populational size and parental generation, besides the discrimination of lines and/or individuals. Researches carried out in different shrimp species reared at captivity have demonstrated that a regular monitoring of the genetic variability levels of stocks, through identification of molecular markers, is essential to an adequate management orientation. In the present work, RAPD markers were used to evaluate the genetic diversity and to determine the divergence and identity relationships among different broodstocks of the marine shrimp Litopenaeus vannamei reared at Brazil. The DNA extraction was performed according to Sambrook et al. (1989) and PCR reactions were accomplished by using the kit Ready-To-Go RAPD Analysis Beads (Amersham Pharmacia Biotech). The percentage of polymorphic loci, allele frequencies, diversity indexes, and Nei´s genetic distance and identity were determined; and dendrograms of genetic similarity were built, by using the software POPGENE, version 1.31 (Yeh et al., 1999). The Jaccard´s genetic similarity coefficient, which ignores the absence of band as an indicator of similarity, was calculated by using the software NTSYS, version 2.0 (Rohlf, 1993). A total of 332 individuals from 19 broodstocks were analyzed, five of them belonging to a same inbred line. Sixty-four fragments were identified when a set of six primers was adopted to perform RAPD-PCR. The genetic diversity and similarity indexes demonstrated a reduced variability in stocks at initial domestication process. The analysis of genetic distance and identity evidenced that the reared stocks are closely related, lacking significant divergences. The values obtained in the inbreeding line revealed a progressive decreasing of genetic variation throughout the generations. The dendrogram demonstrated that as long as the generation increases, the genetic structure changes and becomes more and more distant from that observed in the first populations. According to analysis by non-linear regression, if this tendency is maintained, the levels of genetic variation can get close to zero before the stock reaches the 19th generation. The molecular data obtained in the present work reinforce the suggestion that the management nowadays carried out by Brazilian larviculture laboratories to compose and maintain broodstocks of L. vannamei, leads to a reduction of the levels of genetic diversity of captive populations. The development of genetically divergent lines and crossbreeding programs might contribute to the establishment of more adequate strategies. / A identificação de marcas genéticas pode fornecer informações a respeito da distribuição da variabilidade genética em relação ao tamanho da população e à geração parental, além de discriminar linhagens e/ou indivíduos. Pesquisas realizadas em diferentes espécies de camarões cultivados estão demonstrando que o monitoramento regular do nível da variabilidade genética dos estoques, através da identificação de marcadores moleculares, é essencial para orientação adequada do manejo. No presente trabalho, marcadores baseados na análise de RAPD foram utilizados para avaliar a diversidade genética e determinar relações de divergência e identidade entre diferentes estoques reprodutores de camarões Litopenaeus vannamei cultivados no Brasil. A extração do DNA foi realizada de acordo com Sambrook et al. (1989) e as reações de PCR utilizando-se o Kit Ready-To-Go RAPD Analysis Beads (Amersham Pharmacia Biotech). Foram determinadas as percentagens de locos polimórficos, as freqüências alélicas, os índices de diversidade, distância e identidade genética de Nei e construídos dendogramas de similaridade genética, através da utilização do programa POPGENE, versão 1.31 (Yeh et al., 1999). O coeficiente de similaridade genética de Jaccard, o qual não considera a ausência de bandas como indicativo de similaridade, foi calculado utilizandose o programa NTSYS, versão 2.0 (Rohlf, 1993). Foi analisado um total de 332 exemplares provenientes de 19 estoques reprodutores, sendo cinco destes pertencentes a uma única linhagem de endocruzamento. Sessenta e quatro fragmentos foram identificados quando um conjunto de seis primers foi utilizado em reações de RAPD-PCR. Os índices de similaridade e diversidade genética demonstraram uma reduzida variabilidade para plantéis em fase inicial de domesticação. A análise de distância e identidade genética evidenciou grande proximidade genética entre os estoques cultivados, não sendo observadas divergências significativas. Os valores obtidos para a linhagem de endocruzamento revelaram uma progressiva diminuição nos níveis de variação genética ao longo das gerações. O dendrograma obtido demonstrou que à medida que a geração avança, esta vai modificando sua estrutura genética e se distanciando cada vez mais das populações iniciais. Segundo a análise de regressão não-linear, caso esta tendência seja mantida, os níveis de variação genética poderão assumir valores próximos a zero antes mesmo deste plantel atingir a 19a geração. Os dados moleculares obtidos no presente trabalho reforçam a suposição de que o tipo de manejo atualmente realizado pelos laboratórios de larvicultura do Brasil, para abertura e manutenção dos estoques reprodutores de L. vannamei, propicia a diminuição nos níveis de diversidade genética das populações cativas. O desenvolvimento de linhagens geneticamente divergentes e de programas de cruzamentos dirigidos poderá contribuir para o estabelecimento de estratégias de manejo mais apropriadas.

Dentro do gênero Adesmia, as técnicas moleculares ainda não foram empregadas na caracterização de germoplasma e na análise da diversidade genética das espécies brasileiras que compôem o gênero. Portanto os objetivos deste trabalho foram: caracterizar, com a utilização de marcador molecular do tipo RAPD, as espécies brasileiras do gênero Adesmia DC; com base nestas informações estabelecer relações de diversidade genética entre as espécies e os acessos analisados; relacionar dados de diversidade com dados morfológicos e de reprodução.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseAJM.pdf: 1132829 bytes, checksum: d7a4ea748d124c0e0dddf18933cbad53 (MD5) Previous issue date: 2003-04-29 / Universidade Estadual de Maringá / Genetic and chemical variability of Maytenus ilicifolia Maytenus ilicifolia is a native plant of Southern Brazil commonly used as a popular medicine for indigestion, gastritis and ulcers. The large use of this plant has increased the degradation of the species, and thus it is presently included in FAO´s list for priority species for studying and conservation in South America. In this context, this work aimed to contribute with studies that help the conservation of this species. Initially, a survey in herbaria and in the field was performed to identify the incidence and distribution of the genus Maytenus in the State of Rio Grande do Sul. Three new species (M. glaucenscens Reiss, M. gonoclada Mart. and M. robusta Reiss) were found in this State. The genetic variability study of three populations showed that the intrapopulational variation (variance from 0.102 to 0.140) is higher than the interpopulational (variance between 0.076 and 0.099%). The three populations analyzed grouped themselves with low significance level and 7.6% of the present alleles are rare. The genetic variability study involving 18 native populations of Maytenus ilicifolia, Maytenus aquifolia and Maytenus evonymoidis demonstrated that the species may be separated with 100% of confidence, and that M. ilicifolia and M. aquifolia are genetically more similar. The populations of Maytenus ilicifolia analyzed formed three groups with low confidence levels. Group I included the populations of Ponta Porã, group II the populations of Santana do Livramento, Vale Verde, Canguçu and Unistalda, and group III was formed by the other 13 populations. A similarity in the genetic and environmental grouping of such species was observed. The chemical characterization was performed by gas chromatography of the extracts obtained with high pressure CO2. An increase in the yield of extract was obtained when the temperature of extraction as well as the solvent density were increased. The compounds that presented higher yield in the first fractions were dodecanoic acid, geranyl acetone, phytol, squalene, vitamin E and stigmast-5-enol. The compounds friedelan-3-ol and friedelin were extracted in higher yields in the following fractions. The chemical variability study of the volatile and semi-volatile compounds of populations of M. ilicifolia showed a yield of extract (0,488 a 0,976 %) significantly different between the populations. In addition no relation between the chemical and environmental or between the chemical and genetic grouping could be established. / Maytenus ilicifolia (espinheira-santa) é uma planta nativa da região sul do Brasil empregada na medicina popular para tratamentos de indigestão, úlceras e gastrites. A ampla utilização de Maytenus ilicifolia na medicina popular, tem levado à perda de populações da espécie, encontrando-se atualmente na lista da FAO como uma das espécies prioritárias para estudo e conservação na América do Sul. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo realizar estudos que subsidiem protejos de conservação desta espécie. Inicialmente foi realizado um levantamento em herbários e a campo, verificando a ocorrência e distribuição do gênero Maytenus no estado do Rio Grande do Sul, sendo encontradas três novas espécies: M. glaucescens Reiss, M. gonoclada Mart. e M. robusta Reiss. No estudo da variabilidade genética em três populações, a variação intrapopulacional (0,102 a 0,140) é superior à interpopulacional (0,076 a 0,099). As três populações analisadas se agruparam com baixos valores de significância e 7,6% dos alelos presentes são raros. No estudo da variabilidade genética envolvendo 18 populações nativas de Maytenus ilicifolia e plantas de Maytenus aquifolia e Maytenus evonymoidis, pode-se separar as espécies com 100% de confiança e M. ilicifolia e M. aquifolia estão mais próximas geneticamente em relação a M. evonymoidis. As populações de Maytenus ilicifolia analisadas formaram 3 grupos com valores baixos de índice de confiança baixos, sendo o grupo I a população de Ponta Porá, o grupo II as populações de Santana do Livramento, Vale Verde, Canguçu e Unistalda e o grupo III formados pelas 13 populações restantes. Observou-se semelhança no agrupamento genético e ambiental destas populações. No estudo da caracterização química, via cromatografia gasosa dos extratos obtidos por CO2 a alta pressão, observou-se um acréscimo na eficiência de extração com aumento de temperatura e densidade do solvente. Os compostos ácido dodecanóico, geranil acetona, fitol, Esqualeno, Vitamina E e Stigmast-5-enol foram extraídos em maior concentração nas primeiras frações, independente das condições de extração, enquanto que os compostos Friedelan-3-ol e Friedelin, foram extraídos em maior quantidade nas frações seguintes. Na análise da variabilidade química dos compostos voláteis e semi-voláteis das populações de Maytenus ilicifolia ). Verificou-se no rendimento de extrato (0,488 a 0,976 %) e concentração dos compostos analisados diferenças significativas entre as populações analisadas e não houve relação entre o agrupamento químico das populações com os agrupamentos ambientais e genéticos.

The adoption of conservation practices can affect the physical, chemical and biological properties of the soil, resulting changes in the composition and activity of the microbial community. The aims of this research was to obtain information about the soil quality, diversity and biological activity, submitted to two types of soil management (scarified (PDE) and no-scarified tillage (PDNE)) and three types of cover management (Succession: soybean-wheat, Rotation I: Soybean-turnip+wheat/soybean-oats+vetch and Rotation II: soybean-oats+vetch+turnip/corn-crotalaria junceawheat/ soybeans).Analyzes of carbon and nitrogen from microbial biomass, soil enzymatic activity (urease, acid phosphatase and FDA), basal respiration rate and genetic diversity analysis were performed using the RAPD technique. Carbon and nitrogen from soil microbial biomass were higher in all treatments under no-scarified no-tillage in both collection periods. The same pattern can be observed for urease enzyme activity, which presented higher values in no-scarified no-tillage soil. All enzymes showed an increase in their activity in the summer period, which shows that they are influenced by temperature and soil moisture. For the basal respiration rate, in the winter period higher values were obtained when compared to the summer period. In addition, in the winter, the highest rate of accumulated CO2 release was observed in noscarified no-tillage, and the opposite was observed for the summer period, where the highest rate was obtained in scarified tillage. The RAPD technique was efficient in detecting the genetic variability among the treatments, grouping them into four groups and generated a profile of genetic markers that can be used in later works to evaluate the genetic diversity in agricultural soils. Based on these results, we concluded that noscarified no-tillage associated with good soil conservation practices, such as permanent coverage through plant residues, contribute to an increase in the values of microbial biomass, respiration rate and enzymatic activity of the soil. RAPD technique associated with other bioindicators become important tools for the monitoring and evaluation of soil quality, activity and biological diversity. / A adoção de práticas conservacionistas pode afetar as propriedades físicas, químicas e biológicas do solo, resultando em alteração na composição e a atividade da comunidade microbiana.O objetivo deste trabalho foi obter informações sobre a qualidade, diversidade e atividade biológica do solo, quando submetido aos sistemas de plantio direto escarificado e plantio direto não escarificado, com sucessão e rotação de culturas. O experimento é conduzido na Fundação Estadual de Pesquisa Agropecuária, Centro de Pesquisa de Sementes, em Júlio de Castilhos, RS, em um Nitossolo Vermelho. Os tratamentos foram constituídos de dois tipos de manejo do solo: (1) plantio direto com compactação natural e (2) plantio direto escarificado, e de uma sucessão de culturas (soja/trigo) e duas rotações, rotação I (soja-nabo + trigo/soja-aveia + ervilhaca/soja) e rotação II (soja-aveia + ervilhaca + nabo/milho-crotaláriajuncea-trigo/soja). Foram realizadas análises referentes ao carbono e nitrogênio da biomassa microbiana, atividade enzimática do solo (urease, fosfatase ácida e Hidrólise do Diacetato de Fluoresceína), taxa de respiração basal e na análise da diversidade genética por meio da técnica de RAPD. O carbono e o nitrogênio da biomassa microbiana do solo foram superiores em todos os tratamentos sob plantio direto com compactação natural em ambos os períodos de coleta. O mesmo padrão pode ser observado para a atividade da enzima urease, que apresentou valores superiores em solo com compactação natural. Todas as enzimas apresentaram um incremento na sua atividade no período do verão, o que demonstra que são influenciadas pela temperatura e umidade do solo. Para a taxa de respiração basal, no período do inverno foram obtidos valores superiores quando comparado ao período do verão. Além disso, no inverno a maior taxa de liberação de CO2 acumulada, foi observada no plantio direto com compactação natural, sendo que o contrário foi observado para o período do verão, onde a maior taxa foi obtida em solo escarificado. A técnica de RAPD mostrou-se eficiente na detecção da variabilidade genética entre os tratamentos, agrupando-os em quatro grupos e ainda, gerou um perfil de marcadores genéticos que podem ser utilizados em posteriores trabalhos para avaliar a diversidade genética em solos agrícolas. Com base nesses resultados pode-se concluir que o plantio direto não escarificadoassociado às boas práticas de conservação do solo, como a permanente cobertura por meio de resíduos vegetais, contribui para um aumento nos valores de biomassa microbiana, taxa de respiração e atividade enzimática do solo. Além dissoa técnica de RAPD associada a outros bioindicadores tornam-se importantes ferramentas para o monitoramento e avaliação da qualidade, atividade e diversidade biológica do solo.

Dentro do gênero Adesmia, as técnicas moleculares ainda não foram empregadas na caracterização de germoplasma e na análise da diversidade genética das espécies brasileiras que compôem o gênero. Portanto os objetivos deste trabalho foram: caracterizar, com a utilização de marcador molecular do tipo RAPD, as espécies brasileiras do gênero Adesmia DC; com base nestas informações estabelecer relações de diversidade genética entre as espécies e os acessos analisados; relacionar dados de diversidade com dados morfológicos e de reprodução.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Lectinas são proteínas que se ligam a carboidratos e glicoconjugados. Rizomas de Microgramma vaccinifolia têm ampla utilização na medicina popular no tratamento de hemoptises e hematúria. Os objetivos deste trabalho foram isolar, caracterizar, avaliar as atividades tóxica, antibacteriana e antifúngica da lectina de rizoma de M. vaccinifolia (MvRL) e identificar as raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici por biologia molecular. As proteínas do extrato de rizoma (ER) foram fracionadas com sulfato de amônio fornecendo a fração 0-60% (F0-60%). Atividade hemaglutinante (AH) e concentração de proteína foram determinadas em ER e F0-60%. MvRL foi isolada por cromatografia da F0-60% em Sephadex G-25. A AH de MvRL foi avaliada em presença de carboidratos, glicoproteínas, preparações contendo carboidrato das raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici, em diferentes temperaturas, valores de pH e na presença de íons. Eletroforese em gel de poliacrilamida de MvRL foi realizada em condições nativas (PAGE) e desnaturadas (SDS-PAGE). O efeito de MvRL sobre Artemia salina, bactérias e fungos foi também avaliado. O DNA das raças 1, 2 e 3 de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici foi isolado utilizando marcadores moleculares ISSR e RAPD. MvRL aglutinou eritrócitos humanos e sua AH foi inibida por manose, soro fetal bovino e preparações de F. oxysporum f.sp. lycopersici. A AH de MvRL foi termoestável, ativa em pH 5,0 e dependente de íons. PAGE revelou MvRL como uma proteína ácida e SDS-PAGE revelou banda polipeptídica glicosilada de massa molecular 17 kDa. Cromatografia de gel filtração definiu a massa molecular nativa de MvRL como 100 kDa indicando a lectina como um agregado molecular. MvRL foi tóxica sobre A. salina (CL50 de 154,16 μg/mL), não exibiu atividade antibacteriana e apresentou atividade antifúngica. MvRL foi mais ativa em inibir o crescimento da raça 3 de F. oxysporum f.sp. lycopersici. Os marcadores moleculares foram adequados para avaliar a variabilidade genética das raças. Em conclusão MvRL é uma lectina com atividade antifúngica e o efeito sobre F. oxysporum f.sp. lycopersici foi diferente para as três raças

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:03:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4555_1.pdf: 1910369 bytes, checksum: 5a0109c9538c737e8440a1c2af5b2757 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Foram analisadas 15 linhagens de Metarhizium isoladas de diferentes regiões e hospedeiros quanto às características genéticas e 7 linhagens quanto a patogenicidade sobre Diatraea saccharalis. Os marcadores moleculares ITS (Internal Transcrided Spacer) do rDNA, Intron splice site primer, RAPD e Microssatélites (SSR-Simple Sequence Repeats) foram utilizados para avaliar a diversidade genética entre as linhagens. A análise de agrupamento usando o método UPGMA baseada nas distâncias genéticas dos quatro marcadores moleculares confirmou a diversidade genética reconhecida no gênero Metarhizium. As enzimas de restrição, HaeIII e MspI, evidenciaram a diversidade genética entre as linhagens ao digerirem os produtos de amplificação do locus ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA com os iniciadores ITS4 e ITS5, a enzima DraI não apresentou sítios de restrição. Os introns do grupo mRNA nuclear discriminaram as linhagens de Metarhizium apenas com a utilização do iniciador EI1. As técnicas de RAPD e regiões de Microssatélite foram eficientes em demonstrar a diversidade entre as linhagens. Porém o microssatélite (GACA)4 foi mais sensível em detectar a variabilidade intra e interespecífica entre as diferentes linhagens de Metarhizium. Não houve correlação entre grupos e regiões geográficas. As linhagens 4415, 4400 e 4897 causaram maior percentual de mortalidade das larvas de Diatraea saccharalis. Também não houve correlação entre os agrupamentos gerados pelas técnicas moleculares e percentual de mortalidade de larvas de D. saccharalis

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4458_1.pdf: 786506 bytes, checksum: 30ccb6ed2c83e0fa52dedbb745159fb1 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Foram analisadas 20 linhagens de C. gloeosporioides quanto às características genéticas e citomorfológicas. Os marcadores moleculares, RAPD, microssatélites, Intron Spice Site Primer e região ITS do DNA ribossomal, foram utilizados para avaliar a diversidade genética entre as linhagens. A análise de agrupamento através do método UPGMA confirmou a diversidade genética intraespecífica reconhecida em C. gloeosporioides. Com a técnica de RAPD foi detectada uma maior similaridade genética entre as linhagens. As regiões de microssatélites investigadas, demonstraram alto polimorfismo genético e os introns discriminaram todos as linhagens apenas com o primer (EI-1), e revelaram maior diversidade genética em relação aos outros marcadores moleculares utilizados. As três enzimas de restrição testadas, HaeIII, DraI e MspI evidenciaram a diversidade genética entre as linhagens nos produtos de amplificação dos loci ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA com os primers ITS1 e ITS4. Todos os marcadores empregados, foram eficientes em demonstrar o alto grau de polimorfismo genético, constatado pela formação de grupos altamente diversificados, sem apresentar correlação entre os hospedeiros. Os aspectos macroscópicos exibiram uma variação na coloração, textura e segregação de setores nas colônias, e as observações microscópicas demonstraram a formação de estruturas vegetativas e reprodutivas peculiares da espécie. A condição nuclear investigada através da técnica de HCl-Giemsa, evidenciou conídios 100% uninucleados

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4510_1.pdf: 1312401 bytes, checksum: 103b70bf03d8851fef2766e8bd0290f9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico e agente etiológico da paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica de evolução aguda ou crônica que se não diagnosticada e tratada a tempo pode ser fatal. Um método molecular para caracterização e detecção de P. brasiliensis foi desenvolvido a partir da clonagem e do sequenciamento de um fragmento de DNA de ~750 pb, obtido por RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA), presente em isolados virulentos e ausente em isolados avirulentos deste fungo. Uma região interna do fragmento de DNA seqüenciado foi usada para desenhar primers que posteriormente foram utilizados em uma reação de hemi-nested PCR em tubo único. A reação de PCR específica foi capaz de amplificar DNA de três isolados de P. brasiliensis reconhecidamente virulentos e três isolados recentemente obtidos de pacientes com paracoccidioidomicose. A especificidade desta PCR foi confirmada pela ausência de produtos amplificados com DNA genômico de isolados de Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, Sporothrix schenckii, Cryptococcus neoformans, Candida albicans, Aspergillus fumigatus, Mycobacterium tuberculosis, Leishmania braziliensis, Trypanosoma cruzi, Schistosoma mansoni, DNA genômico humano (leucócitos) e de isolados de P. brasiliensis reconhecidamente avirulentas. A amplificação de cDNA de um isolado virulento sugere tratar-se de um gene expresso. A detecção específica de isolados virulentos de P. brasiliensis sugere ser este um candidato a marcador de virulência para este fungo. O potencial diagnóstico da PCR específica foi verificado com DNA extraído de aspirado de linfonodo de um paciente com paracoccidioidomicose