Orientador: Willian Fernando Zambuzzi / Resumo: Embora algum progresso tenha sido alcançado nos últimos anos, ainda são necessários estudos capazes de desvendar os mecanismos moleculares envolvidos com o fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR) em células tumorais. Com esta finalidade, estabelecemos o perfil quinômico (através do microarranjo de peptídeos, PepChip) das linhagens MCF7 e MCF7Res, fenótipo parental e resistente respectivamente, de células de câncer de mama. Os resultados obtidos pelo microarranjo de peptídeos e posteriormente, validados por western blotting, apontaram o envolvimento da via de sinalização Jak-Stat e isoformas de PKC no processo de resistência das células de câncer de mama. Além disso, mostramos envolvimento de p42/44-mapk, Ras e um aumento na expressão de MMP-9. Estes resultados mostram o potencial agressivo destas células resistentes, visto que estas vias estão envolvidas em mecanismos responsáveis pela proliferação e invasão celular. Como as proteínas Jak1 e Jak2 mostraram-se envolvidas, decidimos avaliar níveis de fosforilação de Stats 1, 2, 3, 5 e 6 e mostramos que todas estavam up-fosforiladas nas células resistentes. Baseado nestes resultados, decidimos avaliar através de um ensaio funcional, o papel de Jak2 no fenótipo resistente e, desta forma, avaliamos a viabilidade das células MCF7Res em pré-tratamento com 2 concentrações subtóxicas do inibidor de Jak2 (5µM e 10µM) e nossos resultados claramente mostraram que, inibindo Jak2, as células MCF7Res ficam mais sensíveis a daunorru... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although some progress has been achieved in recent years, it is still necessary studies to unravel the molecular mechanisms involved in multidrug resistance (MDR) phenotype in tumor cells. For this purpose, we established kinomic profile (by peptides microarray, PepChip) of MCF7 and MCF7Res lineages, parental and resistant phenotype, respectively, of breast cancer cells. The results obtained by microarray of peptides and subsequently validated by western blotting indicated the involvement of the Jak-Stat pathway signaling and PKC isoforms in the process of resistance of breast cancer cells. Furthermore, we show involvement of p42/44-MAPK, Ras and an increase in MMP-9 expression. These results show the potential of these aggressive resistant cells, since these pathways are involved in the mechanisms responsible for cell proliferation and invasion. As Jak1 and Jak2 protein shown to be involved, we decided to assess phosphorylation levels of Stats 1, 2, 3, 5 and 6, and show that all were up-phosphorylated in resistant cells. Based on these results, we decided to evaluate by a functional assay, Jak2 role in the resistant phenotype, and thus, evaluate the viability of MCF7Res cells pre-treated with 2 subtoxic concentrations of Jak2 inhibitor (5μM and 10μM) and our results have clearly shown that inhibiting Jak2, the MCF7Res cells become more sensitive to daunorubicin, increasing the rate of cell death forward the response to chemotherapy. Based on the results obtained by fosfoproteoma we conclude that the MDR phenotype involves specific metabolism in breast tumor cells, where PKCs isoforms and Jak-Stat signaling exercise prominent role. Thus, these data indicate the potential use of Jak2 inhibitors as a strategy for treatment of patients unresponsive to conventional therapies. / Mestre

OBJETIVOS: conhecer os perfis epidemiológico, clínico e laboratorial dos pacientes com infecção por Salmonella spp. e o perfil de sensibilidade antimicrobiana destas cepas de Salmonella spp., no Instituto de Infectologia Emílio Ribas, São Paulo (SP), no período de 1992 a 2002.MÉTODOS: revisão dos prontuários médicos dos pacientes e avaliação do perfil de sensibilidade das cepas de Salmonella ssp. pelo método de disco difusão das cepas aos antimicrobianos ciprofloxacina, ceftriaxone, cloranfenicol, ácido nalidíxico, ampicilina, sulfametoxazol-trimetropim (SMX-TMP), tetraciclina e estreptomicina. RESULTADOS: um total de 146 cepas de Salmonella spp. foram isoladas a partir de pacientes diferentes durante o período avaliado. Cento e onze (76,0%) pacientes eram do sexo masculino e 35 (24,0%), do feminino. A média de idade dos pacientes foi de 29,33 ± 12,76 anos (mínima de um ano e máxima de 70 anos). Cento e seis (72,6%) pacientes residiam na cidade de São Paulo. Em 128 (87,7%) casos, a fonte provável de contaminação por Salmonella spp. era desconhecida. A febre, diarréia, náuseas e/ou vômitos e sintomatologia respiratória estiveram presentes em, respectivamente, 111(76%), 92 (63%), 67 (45,9%) e 63 (43,2%) pacientes na admissão hospitalar. Em indivíduos HIV-positivos, os sintomas respiratórios foram mais os comuns. A maior parte das cepas foi obtida de sangue e fezes, respectivamente, 109 (74,4%) e 22 (15,1%) cepas. Trinta e cinco (24,0%) cepas eram do sorotipo Salmonella Typhi e 111 (76%), sorotipos não-Typhi, sendo os sorotipos mais comuns Enteritidis com 42 (37,8%) cepas; Typhimurium, 23 (20,7%); I,4,[5],12:i:-, 16 (14,4%) e Dublin, 16 (14,4%). Noventa e sete (66,4%) pacientes tinham sorologia para HIV positiva e seis (4,1%), negativa. Quarenta e três (29,5%) pacientes tinham sorologia anti-HIV desconhecida. Entre os 97 pacientes HIV-positivo, em 14 (14,4%), o episódio atual de salmonelose, com ou sem patologias oportunistas, foi a responsável pela descoberta da infecção pelo HIV ou desenvolvimento para a sida em indivíduos já sabidamente HIV-positivo. Os seguintes percentuais de sensibilidade foram encontrados nos antimicrobianos estudados: ciprofloxacina, 100% de sensibilidade; ceftriaxone, 99,3%; cloranfenicol, 96,6%; ácido nalidíxico, 95,2%; ampicilina, 92,5%; sulfametoxazoltrimetoprim, 91,8%; tetraciclina, 86,3% e estreptomicina, 65,8%. Trinta e oito (26,0%) pacientes evoluíram para o óbito, sendo todos HIV-positivo/AIDS (p< 0,0001) e em todos isoladas cepas de Salmonella não-Typhi (p = 0,0001). CONCLUSÕES: a ocorrência dos sorotipos Typhi e não-Typhi e a sintomatologia diferem segundo a condição sorológica para o HIV. A cultura do sangue e de fezes deve fazer parte da rotina do diagnóstico. Ciprofloxacina, ceftriaxone,cloranfenicol e ampicilina constituem opções terapêuticas adequadas para a infecção por Salmonella spp.. Foram fatores de risco para o óbito, sorologia anti-HIV positiva e o isolamento de Salmonella não-Typhi. / OBJECTIVES: knwon the epidemiological, clinical and laboratorial characteristics of the patients with infection due to Salmonella spp. and the pattern of susceptibility to antimicrobials of such isolates of Salmonella spp., from \"Instituto de Infectologia Emílio Ribas, São Paulo\" (SP), in the period of January 1992 to December 2002. METHODS: review of the patients charts and evaluation of the pattern of susceptibility from the isolates of Salmonella spp. performing the disk diffusion method to the antimicrobials ciprofloxacin, ceftriaxone, chloramphenicol, nalidixic acid, ampicillin, trimethoprim/sulfamethoxazole, tetracycline and streptomycin. RESULTS: a total of 146 isolates were obtained from different patients in the period evalueted. One-hundred and eleven (76.0%) patients were male and 35 (24.0%), female. The median age was 29.33 ± 12.76 years (range one year 70 years). One-hundred and six (72.6%) patients lived in the city of São Paulo. In 128 (87.7%) cases, the probable source of contamination with Salmonella spp. was unknwon. Fever, diarrhoea, nausea and/or vomiting and respiratory sintomatology were present, respectively, in 111(76%), 92 (63%), 67 (45.9%) and 63 (43.2%) patients at presentation. In HIV-seropositive patients, respiratory sintomatology was the most common. Most of the isolates were obtained from blood and stool, respectively, 109 (74.4%) and 22 (15.1%) isolates. Thirty-five (24.0%) isolates belonged to serotype Salmonella Typhi and 111 (76%) to non-Typhi serotypes, being the most common Enteritidis with 42 (37.8%) isolates; Typhimurium, 23 (20.7%); I,4,[5],12:i:-, 16 (14.4%) and Dublin, 16 (14.4%). Ninety-seven (66.4%) patients had HIVserology positive and six (4.1%) patients, negative. In 43(29.5%) patients, the HIV serology was unknown. Considering the 97 HIV-seropositive patients, in 14 (14,4%), the actual episode of salmonellosis, with or without oportunistic infections, was the responsible for the discovery of the HIV infection or to development to Acquired Immunodeficiency Syndrome in already known HIV-seropositive patients. The following percentages of susceptibility were found in the antimicrobials analysed: ciprofloxacin, susceptibility of 100%; ceftriaxone, 99.3%; chloramphenicol, 96.6%; nalidixic acid, 95.2%; ampicillin, 92.5%; trimethoprim/sulfamethoxazole, 91.8%; tetracycline, 86.3% and streptomycin, 65.8%. Thirtyeight (26.0%) evoluted to death, being all HIV-positive patients (p < 0.0001) with infection to non-typhoidal Salmonellae (p = 0.0001). CONCLUSIONS: the occurrence of serotypes Typhi and non-Typhi and the patients sintomatology depends on the HIV-serology. Culture of blood and stool should be part of the diagnosis. Ciprofloxacin, ceftriaxone, chloramphenicol and ampicillin are good therapeutic options for Salmonella spp. infection. HIV-serology positive and the isolation of non-Typhi Salmonella were risk factors to death.

OBJETIVOS: conhecer os perfis epidemiológico, clínico e laboratorial dos pacientes com infecção por Salmonella spp. e o perfil de sensibilidade antimicrobiana destas cepas de Salmonella spp., no Instituto de Infectologia Emílio Ribas, São Paulo (SP), no período de 1992 a 2002.MÉTODOS: revisão dos prontuários médicos dos pacientes e avaliação do perfil de sensibilidade das cepas de Salmonella ssp. pelo método de disco difusão das cepas aos antimicrobianos ciprofloxacina, ceftriaxone, cloranfenicol, ácido nalidíxico, ampicilina, sulfametoxazol-trimetropim (SMX-TMP), tetraciclina e estreptomicina. RESULTADOS: um total de 146 cepas de Salmonella spp. foram isoladas a partir de pacientes diferentes durante o período avaliado. Cento e onze (76,0%) pacientes eram do sexo masculino e 35 (24,0%), do feminino. A média de idade dos pacientes foi de 29,33 ± 12,76 anos (mínima de um ano e máxima de 70 anos). Cento e seis (72,6%) pacientes residiam na cidade de São Paulo. Em 128 (87,7%) casos, a fonte provável de contaminação por Salmonella spp. era desconhecida. A febre, diarréia, náuseas e/ou vômitos e sintomatologia respiratória estiveram presentes em, respectivamente, 111(76%), 92 (63%), 67 (45,9%) e 63 (43,2%) pacientes na admissão hospitalar. Em indivíduos HIV-positivos, os sintomas respiratórios foram mais os comuns. A maior parte das cepas foi obtida de sangue e fezes, respectivamente, 109 (74,4%) e 22 (15,1%) cepas. Trinta e cinco (24,0%) cepas eram do sorotipo Salmonella Typhi e 111 (76%), sorotipos não-Typhi, sendo os sorotipos mais comuns Enteritidis com 42 (37,8%) cepas; Typhimurium, 23 (20,7%); I,4,[5],12:i:-, 16 (14,4%) e Dublin, 16 (14,4%). Noventa e sete (66,4%) pacientes tinham sorologia para HIV positiva e seis (4,1%), negativa. Quarenta e três (29,5%) pacientes tinham sorologia anti-HIV desconhecida. Entre os 97 pacientes HIV-positivo, em 14 (14,4%), o episódio atual de salmonelose, com ou sem patologias oportunistas, foi a responsável pela descoberta da infecção pelo HIV ou desenvolvimento para a sida em indivíduos já sabidamente HIV-positivo. Os seguintes percentuais de sensibilidade foram encontrados nos antimicrobianos estudados: ciprofloxacina, 100% de sensibilidade; ceftriaxone, 99,3%; cloranfenicol, 96,6%; ácido nalidíxico, 95,2%; ampicilina, 92,5%; sulfametoxazoltrimetoprim, 91,8%; tetraciclina, 86,3% e estreptomicina, 65,8%. Trinta e oito (26,0%) pacientes evoluíram para o óbito, sendo todos HIV-positivo/AIDS (p< 0,0001) e em todos isoladas cepas de Salmonella não-Typhi (p = 0,0001). CONCLUSÕES: a ocorrência dos sorotipos Typhi e não-Typhi e a sintomatologia diferem segundo a condição sorológica para o HIV. A cultura do sangue e de fezes deve fazer parte da rotina do diagnóstico. Ciprofloxacina, ceftriaxone,cloranfenicol e ampicilina constituem opções terapêuticas adequadas para a infecção por Salmonella spp.. Foram fatores de risco para o óbito, sorologia anti-HIV positiva e o isolamento de Salmonella não-Typhi. / OBJECTIVES: knwon the epidemiological, clinical and laboratorial characteristics of the patients with infection due to Salmonella spp. and the pattern of susceptibility to antimicrobials of such isolates of Salmonella spp., from \"Instituto de Infectologia Emílio Ribas, São Paulo\" (SP), in the period of January 1992 to December 2002. METHODS: review of the patients charts and evaluation of the pattern of susceptibility from the isolates of Salmonella spp. performing the disk diffusion method to the antimicrobials ciprofloxacin, ceftriaxone, chloramphenicol, nalidixic acid, ampicillin, trimethoprim/sulfamethoxazole, tetracycline and streptomycin. RESULTS: a total of 146 isolates were obtained from different patients in the period evalueted. One-hundred and eleven (76.0%) patients were male and 35 (24.0%), female. The median age was 29.33 ± 12.76 years (range one year 70 years). One-hundred and six (72.6%) patients lived in the city of São Paulo. In 128 (87.7%) cases, the probable source of contamination with Salmonella spp. was unknwon. Fever, diarrhoea, nausea and/or vomiting and respiratory sintomatology were present, respectively, in 111(76%), 92 (63%), 67 (45.9%) and 63 (43.2%) patients at presentation. In HIV-seropositive patients, respiratory sintomatology was the most common. Most of the isolates were obtained from blood and stool, respectively, 109 (74.4%) and 22 (15.1%) isolates. Thirty-five (24.0%) isolates belonged to serotype Salmonella Typhi and 111 (76%) to non-Typhi serotypes, being the most common Enteritidis with 42 (37.8%) isolates; Typhimurium, 23 (20.7%); I,4,[5],12:i:-, 16 (14.4%) and Dublin, 16 (14.4%). Ninety-seven (66.4%) patients had HIVserology positive and six (4.1%) patients, negative. In 43(29.5%) patients, the HIV serology was unknown. Considering the 97 HIV-seropositive patients, in 14 (14,4%), the actual episode of salmonellosis, with or without oportunistic infections, was the responsible for the discovery of the HIV infection or to development to Acquired Immunodeficiency Syndrome in already known HIV-seropositive patients. The following percentages of susceptibility were found in the antimicrobials analysed: ciprofloxacin, susceptibility of 100%; ceftriaxone, 99.3%; chloramphenicol, 96.6%; nalidixic acid, 95.2%; ampicillin, 92.5%; trimethoprim/sulfamethoxazole, 91.8%; tetracycline, 86.3% and streptomycin, 65.8%. Thirtyeight (26.0%) evoluted to death, being all HIV-positive patients (p < 0.0001) with infection to non-typhoidal Salmonellae (p = 0.0001). CONCLUSIONS: the occurrence of serotypes Typhi and non-Typhi and the patients sintomatology depends on the HIV-serology. Culture of blood and stool should be part of the diagnosis. Ciprofloxacin, ceftriaxone, chloramphenicol and ampicillin are good therapeutic options for Salmonella spp. infection. HIV-serology positive and the isolation of non-Typhi Salmonella were risk factors to death.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T03:26:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 279884.pdf: 7471394 bytes, checksum: 49ecffa5cacc5208c3b1840fdef5866c (MD5) / A resistência a múltiplas drogas é uma das maiores causas para a falha do tratamento das leucemias agudas (LA). A resistência adquirida ou intrínseca a múltiplas drogas (MDR) depende de muitas variáveis biológicas e é principalmente caracterizada pela resistência cruzada a uma ampla variedade de fármacos não relacionados estrutural e funcionalmente. Vários mecanismos podem estar envolvidos no fenômeno MDR, como o mecanismo de efluxo de drogas através da membrana plasmática e as alterações nos mecanismos que regulam a morte celular por apoptose. Assim, o objetivo desse trabalho foi analisar o perfil de expressão das proteínas relacionadas à resistência a múltiplas drogas (ABCB1, ABCC1 e LRP) e à apoptose (Bcl-2) em células blásticas de pacientes com leucemia aguda (LA), ao diagnóstico, atendidos pelo Serviço de Hematologia do Hospital Universitário da Universidade Federal de Santa Catarina (HU-UFSC) e pelo Serviço de Oncologia do Hospital Infantil Joana de Gusmão (HI-Florianópolis) no período de Janeiro de 2008 a Dezembro de 2009. Para tanto, as células blásticas dos adultos e crianças com LA foram separadas por gradiente de densidade com Ficoll-Hypaque e a expressão dos genes e das proteínas de resistência foram avaliadas por RT-PCR semiquantitativo e citometria de fluxo, respectivamente. A média da expressão relativa de todas as amostras foi utilizada como ponto de corte para superexpressão. Tanto os pacientes adultos quanto as crianças apresentam uma ampla variedade de expressão para as proteínas estudadas. Os pacientes adultos com LA apresentaram correlação significativa entre a expressão dos genes abcb1 e lrp e a expressão das proteínas ABCB1 e ABCC1, ABCB1 e Bcl-2, e ABCC1 e Bcl-2 e nos pacientes pediátricos com LA não houve correlação significativa entre os níveis de expressão de dos genes e proteínas estudados. Nos pacientes adultos com LA, houve correlação positiva entre a expressão do gene abcb1 e a idade dos pacientes, e a concentração de LDH, enquanto nos pacientes pediátricos com LA, houve correlação positiva entre a expressão do gene abcc1 e a expressão de CD34, entre a expressão da proteína LRP e a idade, e entre a expressão da proteína ABCB1 e a leucometria ao diagnóstico. Esses resultados sugerem que a análise da expressão gênica de abcb1 está mais relacionada com um pior prognóstico nos pacientes adultos com LA, enquanto que nos pacientes com LA infantil, é a expressão conjunta das proteínas ABCB1, ABCC1 e LRP que parece estar relacionada com um pior prognóstico. Além disso, os resultados também indicam que a determinação do perfil de expressão da ABCB1, ABCC1 e LRP pelo método do RT-PCR semiquantitativo é mais significativa nos casos de LA em adultos e a determinação do perfil de expressão dessas proteínas por citometria de fluxo é mais significativa nas LAs em crianças

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-10T13:45:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 764542 bytes, checksum: 44a702a2ddb3596339acf378154c7d70 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T13:45:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 764542 bytes, checksum: 44a702a2ddb3596339acf378154c7d70 (MD5) Previous issue date: 2017-11-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A cadeia produtiva de carne suína está susceptível a diferentes fontes de contaminação microbiológica em diferentes etapas, desde a produção primária até o processamento de produtos finais. Considerando o contexto atual de comércio internacional de produtos, o controle de eventuais perigos microbiológicos deve ser efetivo, visando a inocuidade dos produtos finais e segurança do consumidor. Em relação a carne suína, Staphylococcus coagulase positiva (SCP) possui grande importância por serem importantes indicadores das condições de manipulação, e também por indicarem a presença de S. aureus, que na cadeia produtiva de suínos possui relevância pela possibilidade de carrear genes de resistência a diferentes antimicrobianos nos produtos finais e consumidores. O objetivo desse estudo foi rastrear a contaminação por SCP e S. aureus resistentes a antimicrobianos na cadeia produtiva de carne suína. Duas granjas de criação de suínos (ciclo completo) e um frigorífico foram selecionados para coleta de 603 amostras ao longo da cadeia produtiva de carne suína (1 - Granjas: baia de terminação, n = 18; 2 - Abate: carcaça após sangria, n = 90; carcaça após chamuscamento, n = 90; carcaça após evisceração, n = 90; carcaça após lavagem, n = 90; 3 - Processamento: faca limpa, n = 27; faca durante processamento, n = 27; mãos limpas, n = 27; mãos durante processamento, n = 27; mesa limpa, n = 27; mesa durante processamento, n = 27; 4 - Produtos finais: costela, n = 18; paleta, n = 18; pernil, n = 18; linguiça, n = 9), que foram submetidas a enumeração de SCP, e posterior isolamento e identificação de S. aureus. A contaminação por SCP foi inferior a 2 log UFC/cm2 ou g em 512 (84,9%) amostras, entre 2 e 3 logs UFC/cm2 ou g em 52 (8,6%) amostras, entre 3 e 4 logs UFC/cm2 ou g em 6 (1,0%) amostras, e superior a 4 log UFC/cm2 ou g em 33 (5,5%) amostras. Contagens superiores a 4 log UFC/cm2 ou g foram observadas em baias de terminação, carcaças após evisceração, carcaças após lavagem, facas limpas, mesas limpas, costela e linguiças. A enumeração de SCP foi possível em 197 (32,7%) amostras, e as contagens médias variaram entre 1,0 log UFC/cm2 (mesa durante processamento) e 5,2 logs UFC/cm2 (baia de terminação). Considerando as diferentes etapas de processamento, não foram observadas diferenças significativas entre as amostras obtidas no ambiente de processamento e nos produtos finais (p > 0,05). Durante o abate, as contagens médias de SCP obtidas nas carcaças após sangria foram superiores quando comparadas as etapas posteriores (p > 0,05). Um total de 315 colônias de SCP foi selecionado e caracterizado quanto ao perfil bioquímico e presença do gene femA para identificação de S. aureus. Assim, 246 isolados de S. aureus foram identificados e submetidos a caracterização de seus perfis de resistência em relação a 11 antimicrobianos, por testes de susceptibilidade e pela pesquisa de genes relacionados a resistência. Considerando os resultados fenotípicos, 90,7% dos isolados de S. aureus apresentaram resistência a sulfamethoxazole (SUL), 87,0% a ciprofloxacina (CIP), 67,9% a penicilina (PEN), 49,6% a eritromicina (ERI), 40,2% a oxacilina (OXA), 40,2% a clindamicina (CLI), 29,3% a rifampicina (RIF), 28,5% a cloranfenicol (CLO), 21,1% a tetraciclina (TET), 16,3% a vancomicina (VAN) e 6,5% a gentamicina (GEN). Apenas 15 isolados foram susceptíveis a todos os antimicrobianos testados (isolados obtidos de baias de terminação, carcaças, pernil e linguiça), 7 a apenas um antimicrobiano (CIP, SUL ou TET), e os demais resistentes simultaneamente a 2 a 10 diferentes antimicrobianos; o perfil de resistência a PEN-ERI-CIP-SUL foi o que apresentou maior frequência entre os isolados de S. aureus (n = 37). Em relação aos genes relacionados a resistência a diferentes antimicrobianos, 74,0% dos isolados de S. aureus apresentaram resultados positivos para blaZ (PEN), 8,1% para femB (OXA), e 3,7% para tetK (TET); não foram observados resultados positivos para vanA (VAN), mecA e mecC (OXA). Entre os isolados de S. aureus, 60 não apresentaram nenhum dos genes pesquisados, 164 apresentaram apenas um dos genes isolados (blaZ, femB e tetK), 15 apresentaram simultaneamente os genes femB-blaZ, 4 os genes blaZ-tetK, e 3 os genes femB-blaZ-tetK. Apenas em relação a TET foi verificado que o teste de susceptibilidade foi equivalente a presença de blaZ (p = 0,147), e ausência de equivalência de resultados para OXA (femA, femB), VAN (vanA) e TET (tetK) (p < 0,05). Os resultados obtidos demonstram a relevância de SCP como indicadores de manipulação e higiene na cadeia produtiva de carne suína, assim como a presença de S. aureus com resistência a diferentes antimicrobianos, alertando para a necessidade de monitoramento por metodologias fenotípicas e moleculares. / The pork production chain is susceptible to different sources of microbiological contamination at different stages, from primary production to the processing of final product. Regarding the current context of international trade in products, the control of possible microbiological hazards must be effective, aiming at the safety of final products and consumer. In relation to pork, Staphylococcus coagulase positive (SCP) is relevant because they are important indicators of the manipulation condition and also because they indicate the presence of S. aureus, which in the production chain of pigs has relevance due to the possibility of carrying resistance genes to different antimicrobials in the final products and consumers. The objective of this study was to track the contamination by SCP and S. aureus resistant to antimicrobial in the pork production chain. Two pig farms (complete cycle) and a refrigerator were selected to collect 603 samples through the pork production chain (1 - Farms: termination bay, n = 18; 2 - Slaughter: carcass after bleeding, n = 90; carcass after scorching, n = 90; carcass after evisceration, n = 90; carcass after washing, n = 90; 3 - Processing: clean knife, n = 27; knife during processing, n = 27; clean hands, n = 27; hands during processing, n = 27; clean table, n = 27; table during processing, n = 27; 4 - Final products: rib, n = 18; palette, n = 18; leg, n = 18; sausage, n = 9) which were submitted to SCP enumeration, subsequent isolation and identification of S. aureus. The SCP contamination was less than 2 log CFU / cm2 or g in 512 (84.9%) samples, between 2 and 3 log CFU / cm2 or g in 52 (8.6%) samples, between 3 and 4 CFU logs / cm2 or g in 6 (1.0%) samples, and greater than 4 log CFU / cm2 or g in 33 (5.5%) samples. Counts greater than 4 log CFU / cm2 or g were observed in termination bins, carcasses after evisceration, carcasses after washing, clean knives, clean tables, rib and sausages. SCP enumeration was possible in 197 (32.7%) samples, and the mean counts varied between 1.0 log CFU / cm2 (table during processing) and 5.2 log CFU / cm2 (termination bay). Considering the different steps of the process, no significant differences were observed between the obtained samples in the processing environment and in the final products (p> 0.05). During slaughter, the SCP mean counts obtained on carcasses after bleeding were higher when compared to the later stages (p> 0.05). A total of 315 SCP colonies were selected and characterized in relation to the biochemical profile and the presence of the femA gene for identification of S. aureus. Thus, 246 isolates of S. aureus were identified and submitted to characterization of their resistance profiles in relation to 11 antimicrobials, by susceptibility tests and by the search of genes related to resistance. Taking into account the phenotypic results, 90.7% of S. aureus isolates showed resistance to sulfamethoxazole (SUL), 87.0% to ciprofloxacin (CIP), 67.9% to penicillin (PEN), 49.6% to erythromycin (IRI), 40.2% to oxacillin (OXA), 40.2% to clindamycin (CLI), 29.3% to rifampicin (RIF), 28.5% to chloramphenicol (CLO), 21.1% to tetracycline (TET), 16.3% vancomycin (VAN) and 6.5% gentamycin (GEN). Only 15 isolates were susceptible to all antimicrobials tested (isolates obtained from finishing bays, carcasses, shanks and sausage), 7 to only one antimicrobial (CIP, SUL or TET), and the other resistent simultaneously to 2 to 10 different antimicrobials; the resistance profile to PEN-ERI-CIP-SUL was the most frequent among S. aureus isolates (n = 37). Regarding the genes related to resistance to different antimicrobials, 74.0% of S. aureus isolates presented positive results for blaZ (PEN), 8.1% for femB (OXA), and 3.7% for tetK (TET); no positive results were observed for vanA (VAN), mecA and mecC (OXA). Among the S. aureus isolates, 60 did not present any of the studied genes, 164 had only one of the isolated genes (blaZ, femB and tetK), 15 simultaneously presented the femB- blaZ genes, 4 the blaZ-tetK genes, and 3 femB-blaZ-tetK genes. Only in relation to TET, the susceptibility test was equivalent to the presence of blaZ (p = 0.147), and no equivalence of results for OXA (femA, femB), VAN (vanA) and TET (tetK) (p < 0.05). The results obtained demonstrate the relevance of SCP as indicators of handling and hygiene in the pork production chain, as well as the presence of S. aureus with resistance to different antimicrobials, highlighting the need for monitoring by phenotypic and molecular methodologies.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-10-18T18:56:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2358314 bytes, checksum: 14b51d82cc2850cdd438d1d3175cf858 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-18T18:56:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2358314 bytes, checksum: 14b51d82cc2850cdd438d1d3175cf858 (MD5) Previous issue date: 2018-06-25 / Os antimicrobianos são fármacos frequentemente prescritos em atendimentos ambulatoriais e podem ter origem natural ou sintética. A resistência bacteriana pode ser intrínseca ou adquirida, dentro desta última pode-se considerar que ela aconteça através de mutação, por resistência transferível (transformação, transdução e conjugação) ou resistência induzida, entre as quais tem-se a inativação enzimática, alteração da permeabilidade das drogas, alteração de sistemas de transporte na célula, retirada ativa da droga do meio intracelular, alteração do receptor da droga e modificação do sistema metabólico ativo para a droga e síntese de vias metabólicas alternativas. Considerando que os antimicrobianos são os medicamentos mais prescritos na Atenção Primária, a utilização destes tem merecido destaque nas políticas de racionalização do uso de medicamentos, por serem mais consumidos e por se tratar de fármacos que são mais empregados de forma errônea e abusiva, podendo iniciar um processo ou aumentar o risco de resistência bacteriana. A Organização Mundial de Saúde revela que 50% das prescrições de antimicrobianos são inapropriadas, provocando a resistência adquirida que é aquela induzida pelo medicamento e se caracteriza pelo surgimento de novas cepas de bactérias que não mais sofrem a ação de antimicrobianos até então efetivos contra a população dessa bactéria.O objetivo geral da investigação foi descrever a prescrição de antimicrobianos na Atenção Primária à Saúde em Ponte Nova/MG. Como fundamentação teórica, foi realizada uma busca em outros materiais sobre o uso de antimicrobianos na Atenção Primária à Saúde. O estudo foi realizado nas Unidades Básicas de Saúde de Ponte Nova/MG, onde atuam as Estratégias da Saúde da Família e na Farmácia de Minas. Trata-se de uma pesquisa de campo descritiva, observacional, baseada em um estudo transversal de base populacional. Foi realizada a aplicação de um questionário para coleta de informações sociodemográficas, clínicas e conduta clínica. Foi estruturado um banco de dados com todas as informações coletadas através do questionário no Epiinfo 7.2.1.0. Foram realizadas 314 entrevistas nas 13 Unidades Básicas de Saúde e na Farmácia de Minas. A amoxicilina foi o antimicrobiano que mais apareceu nas prescrições, seguida da cefalexina, ciprofloxacino e azitromicina. Entre as infecções mais identificadas estão as do trato urinário, trato respiratório superior e dermatológicas, entre outras. Concluindo, deve-se levar em consideração a atual conjuntura da crise econômica e financeira que vive o país, sendo os gastos com antimicrobianos representando um elevado custo para a saúde pública visto que com o aumento das taxas de resistência bacteriana, cada vez mais tem que se usar antimicrobianos de maior custo, pois são esses que conseguirão destruir as bactérias resistentes que surgem a cada dia por causa do mau uso desses. A partir deste cenário, propõe-se a criação de uma Ficha de Notificação para uso de Antimicrobianos na Atenção Primária, com o objetivo de qualificar e quantificar o uso desses no tratamento das diversas infecções bacterianas e criar uma rotina de forma que se consiga controlar o uso abusivo, a fim de se reduzir os fatores associados ao aumento da resistência bacteriana na comunidade. / Antimicrobials are drugs frequently prescribed in outpatient care and may be from natural or synthetic origin. The bacterial resistance may be intrinsic or acquired, which can occur through mutation, transferable resistance (transformation, transduction and conjugation) or induced resistance, among which are the enzymatic inactivation, change in permeability alteration of transport systems in the cell, active withdrawal of the drug from the intracellular environment, alteration of the drug receptor and modification of the active metabolic system for the drug and synthesis of alternative metabolic pathways. Considering that antimicrobials are the most prescribed drugs in Primary Care, their use has been highlighted in policies for drug use rationalization, not only because they are very consumed, but also due to the fact they are highly mismanaged and abusive able to initiate a process or increase the risk of bacterial resistance. The World Health Organization reveals that 50% of the antimicrobial prescriptions are inappropriate, provoking the acquired resistance induced by the drug. It is also characterized by the appearance of new strains of bacteria that no longer undergo the action of antimicrobial agents against the population of this bacterium. The general objective of this research was to describe the prescription of antimicrobials in Primary Health Care in Ponte Nova / MG. Theoretically, a search from other materials on the use of antimicrobials in Primary Health Care was carried out. The study was conducted at the Basic Health Units of Ponte Nova / MG, where the Family Health Strategies acts, as well at Minas Pharmacy. It is a descriptive, observational field research based on a cross-sectional population-based study. A questionnaire was used to collect sociodemographic and clinical information. A database was structured with all the information collected through the questionnaire in Epiinfo 7.2.1.0. A total of 314 interviews were performed in the 13 Basic Health Units and in the Minas Pharmacy. Amoxicillin was the most frequently prescribed antimicrobial, followed by cephalexin, ciprofloxacin and azithromycin. The most identified infections found were: urinary tract, upper respiratory tract and dermatological, among others. In conclusion, it is important to take into account the current economic and financial crisis in the country facing the high cost for public health represented by antimicrobials. Since with the increasing rates of bacterial resistance, higher cost antimicrobials are necessary because they would be able to destroy the resistant bacteria, consequence of their misuse. From this scenario, it is proposed the creation of a Notification Form for the use of Antimicrobials in Primary Care, with the objective of qualifying and quantifying their use in the treatment of various bacterial infections, as well as creating a routine in order to control the abusive use aiming at reducing the factors associated with increased bacterial resistance in the community.

Pouco se sabe sobre o mecanismo de ação da pentamidina, um composto utilizado no tratamento das leishmanioses. Para uma melhor compreensão do mecanismo de ação assim como o mecanismo de resistência à pentamidina, foi isolado um gene que codifica um membro da família de transportadores ABC, chamado PRP1 capaz de conferir resistência à pentamidina em formas promastigotas e amastigotas de Leishmania spp. O tratamento dos transfectantes que superexpressam a PRP1 com pentamidina em presença de concentrações não tóxicas de verapamil, um inibidor de transportadores ABC, foi capaz de reverter a resistência mediada por esse transportador. Foram ainda isolados nesse estudo duas linhagens de L. amazonensis resistentes à pentamidina. A análise molecular dos parasitos indicou que esses mutantes não apresentaram nenhuma amplificação de DNA, inclusive do gene PRP1 que também não se mostrou superexpresso em ambas as linhagens. As duas linhagens resistentes à pentamidina tiveram sua resistência revertida quando tratadas com verapamil, indicando que o mecanismo de resistência nesses mutantes pode estar associado a um transportador ABC. Os resultados obtidos nesse estudo fornecem dados para uma melhor compreensão do mecanismo de resistência à pentamidina e sugerem um provável potencial da associação pentamidina e verapamil no tratamento da doença. / Little it is known about the mechanism of action of pentamidine, an compound used for leishmaniases chemotherapy. To understand the mechanism of action and resistance of pentamidine, it was isolated a gene that codifies a member of ABC transporter family, named as PRP1 able to confer pentamidine resistance in promastigotes and amastigotes of Leishmania spp. Treatment of transfectants overexpressing PRP1 with pentamidine in presence of non toxic concentration of verapamil, an inhibitor of ABC transporters, was able to reverse the drug resistance mediated by this transporter. Two lines of L. amazonensis resistant to pentamidine were selected. Molecular analysis of parasites indicated that these mutants do not contain amplified DNA, including the PRP1 gene either not associated with overexpression in both lines. The two lines resistant to pentamidine had their resistance reversed when treated with verapamil, indicating that the mechanism of resistance may be associated to an ABC transporter. The results of this work lead to new insights for a better understanding of the mechanism of of resistance suggesting a probably potencial of pentamidine and verapamil association in the chemotherapy.

Ensaios clínicos indicam haver diferenças regionais na eficácia do tratamento da doença de Chagas com (BZ) e Nifurtimox (NFX). Transportadores ABC desempenham um papel importante na resistência a drogas. Evidências indicam que o transportador TcABCG1 é superexpresso em cepas resistentes a BZ. O objetivo geral foi obter evidências para o envolvimento de TcABCG1 no fenótipo de resistência a BZ. Determinamos a classificação de seis cepas em suscetíveis e resistentes a BZ, e o efeito de três inibidores de transportadores ABC de eucariotos. Transfectamos em CL Brener os genes TcABCG1 de cepas resistentes. Nas culturas transfectadas com os genes de Silvio e YuYu verificamos aumento da resistência a BZ e a NFX, e aumento da abundância relativa de transcritos de TcABCG1. Genes ABC ortólogos aos de T. cruzi foram identificados em tripanossomas africanos e Leishmania spp. Dados referentes à análise filogenética e classificação dos transportadores ABC de T. cruzi nas oito subfamílias das proteínas ABC de eucariotos são apresentados. / Clinical trials indicate regional differences in the efficacy of Chagas disease treatment with (BZ) and nifurtimox (NFX). ABC transporters play an important role in drug resistance. Evidences indicate that TcABCG1 is overexpressed in BZ-resistant strains. The overall aim was to obtain evidence for the involvement of TcABCG1 in the BZ resistance phenotype. We determined the classification of six BZ susceptible and resistant strains and the effect of three eukaryotic ABC transporters inhibitors. We transfected TcABCG1 genes from resistant strains in CL Brener. In cultures transfected with Silvio and YuYu genes we observed an increased resistance to BZ and NFX, and increased relative abundance for TcABCG1 transcripts. ABC orthologue genes to those of T. cruzi were identified in African trypanosomes and Leishmania spp. Data relating to classification and phylogenetic analysis of T. cruzi ABC transporters in eight eukaryotic ABC proteins subfamilies are presented.

O gênero Acinetobacter tem sido implicado em grande variedade de infecções hospitalares, principalmente em Unidades de Terapia Intensiva. O tratamento de infecções por Acinetobacter spp. é geralmente realizado com imipenem embora não haja ensaios clínicos randomizados que embasem esta recomendação. No caso de resistência a esta classe, situação cada vez mais freqüente, as opções mais estudadas são as polimixinas e ampicilinasulbactam. Diante da escassez de dados sobre o assunto, estudos que avaliem o tratamento de infecções por Acinetobacter spp resistente a carbapenem são necessários. Realizou-se um estudo de coorte retrospectivo de pacientes com infecção causada por Acinetobacter spp. resistente a carbapenem, internados no Instituto Central do Hospital das Clínicas (HC-FMUSP) e no Hospital do Servidor Público Estadual (HSPE) no período de 1996 a 2004. Foram considerados como casos os pacientes com diagnóstico de infecção hospitalar baseado em critérios estabelecido pelo Centers for Disease Control and Prevention (CDC) somado ao isolamento de Acinetobacter spp. resistente a carbapenem obtidos de materiais estéreis ou lavado bronco-alveolar.Não foram incluídos casos de infecção do trato urinário. Foi realizada a análise dos prontuários dos pacientes e foram coletadas informações clínico-demográficas, tratamento utilizado, sinais, sintomas e exames auxiliares no diagnóstico da infecção e no decorrer do tratamento. Foram avaliados três desfechos: mortalidade até o final do tratamento, mortalidade até o final da internação e evolução clínica. Oitenta e dois pacientes (30%) receberam polimixina B ou E, oitenta e cinco (31%) foram tratados com ampicilina-sulbactam, 99 (36%) não receberam tratamento específico. As características clínico-demográficas dos grupos foram semelhantes. A mortalidade durante a internação foi de 78% e boa resposta clínica foi observada em 50% dos pacientes tratados. Na análise multivariada de fatores associados à má evolução clínica, início do tratamento após 72 horas do isolamento e piora da função renal durante o tratamento foram estatisticamente significativos. Pontuação de Apache II >= 15, início do tratamento após 72 horas do isolamento; piora da função renal durante o tratamento; presença de choque séptico e uso de polimixina foram variáveis associadas com óbito até o final do tratamento. As variáveis independentemente associadas com óbito durante a internação foram: idade >= 58 anos, presença de choque séptico no dia do início do tratamento e pontuação de Apache II >=15. Concluiu-se que para o tratamento de infecções causadas por Acinetobacter spp. resistente a carbapenem, ampicilinasulbactam foi superior a polimixinas considerando mortalidade durante o tratamento. / Acinetobacter spp. is a cause of a number of infections, mainly in the ICU setting. Antimicrobials drugs frequently reported as active against Acinetobacter spp include carbapenems, colistin, ampicillin/sulbactam, amikacin, rifampin and tetracyclines and currently carbapenens are considered the main antimicrobial treatment. Unfortunately, over the past years there has been a worldwide increase in infections caused by carbapenem-resistant Acinetobacter. This poses a therapeutic challenge as few treatment options are avaible. We performed a retrospective review of the case records of patients from 1996 to 2004 who had nosocomial infections caused by carbapenem-resistant Acinetobacter spp. from 2 large teaching hospitals. Diagnosis of infection was based on CDC criteria plus the isolation of Acinetobacter from a usually sterile site or from broncoalvelolar lavage. Urinary tract infections were not included. We collected data on demographic and clinical features, treatment, signs and symptoms from medical records. We evaluate 3 outcomes: mortality until the end of treatment, in-hospital mortality and clinical outcome. Eighty two patients received polymyxins (30%), 85 were treated with ampicilin-sulbactam (31%) and 99 (36%) did not receive any of these antibiotics. The demographic and clinical characteristics of the groups were similar. Multivariate analysis showed that treatment with polymyxins, Apache II score >= 15; septic shock; treatment delay and renal failure were independent predictors of mortality. On multivariate analysis, age >= 58 years, presence of septic shock and Apache II score >=15 were prognosis factors for mortality during hospitalization. Multiple logistic regression analysis revealed that Apache II >=15 and renal failure during treatment were associated with treatment failure. In conclusion, ampicillin-sulbactam was superior to polymyxin considering mortality during treatment.

Ensaios clínicos indicam haver diferenças regionais na eficácia do tratamento da doença de Chagas com (BZ) e Nifurtimox (NFX). Transportadores ABC desempenham um papel importante na resistência a drogas. Evidências indicam que o transportador TcABCG1 é superexpresso em cepas resistentes a BZ. O objetivo geral foi obter evidências para o envolvimento de TcABCG1 no fenótipo de resistência a BZ. Determinamos a classificação de seis cepas em suscetíveis e resistentes a BZ, e o efeito de três inibidores de transportadores ABC de eucariotos. Transfectamos em CL Brener os genes TcABCG1 de cepas resistentes. Nas culturas transfectadas com os genes de Silvio e YuYu verificamos aumento da resistência a BZ e a NFX, e aumento da abundância relativa de transcritos de TcABCG1. Genes ABC ortólogos aos de T. cruzi foram identificados em tripanossomas africanos e Leishmania spp. Dados referentes à análise filogenética e classificação dos transportadores ABC de T. cruzi nas oito subfamílias das proteínas ABC de eucariotos são apresentados. / Clinical trials indicate regional differences in the efficacy of Chagas disease treatment with (BZ) and nifurtimox (NFX). ABC transporters play an important role in drug resistance. Evidences indicate that TcABCG1 is overexpressed in BZ-resistant strains. The overall aim was to obtain evidence for the involvement of TcABCG1 in the BZ resistance phenotype. We determined the classification of six BZ susceptible and resistant strains and the effect of three eukaryotic ABC transporters inhibitors. We transfected TcABCG1 genes from resistant strains in CL Brener. In cultures transfected with Silvio and YuYu genes we observed an increased resistance to BZ and NFX, and increased relative abundance for TcABCG1 transcripts. ABC orthologue genes to those of T. cruzi were identified in African trypanosomes and Leishmania spp. Data relating to classification and phylogenetic analysis of T. cruzi ABC transporters in eight eukaryotic ABC proteins subfamilies are presented.